Orientador: José Buratini Junior / Banca: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: Marcelo Nogueira / Banca: Cláudia Lima Verde Leal / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Fatores de crescimento fibroblástico (FGFs) regulam o desenvolvimento folicular e a maturação oocitária através de ligação aos seus receptores (FGFRs). Os RNAm que codificam o FGFR2c e o FGFR3c foram detectados em folículos antrais bovinos. Com o objetivo de identificar FGFs que poderiam regular a foliculogênese por meios desses, investigou-se os padrões de expressão do FGF16 e FGF20 em folículos antrais bovinos, bem como os níveis de RNAm desses FGFs e seus receptores (FGFR2c e FGFR3c) durante a maturação in vitro de complexos cumulus-oócito (COCs). Além disso, dados preliminares do nosso laboratório indicativos de que a expressão do FGF17 em oócitos é regulada ao longo da maturação oocitária motivaram a investigação da função dessa proteína na maturação de COCs in vitro. Sendo assim, avaliou-se o efeito do FGF17 na expansão do cumulus e no controle da transcrição de fatores EGF-like [ampiregulina (AREG), epiregulina (EREG) e betacelulina (BTC)] e outros genes reguladores da expansão [cicloxigenase 2 (COX2), hialurona sintase 2 (HAS 2), pentraxina 3 (PTX3), proteína indutora do fator de necrose tumoral 6 (TSG6)]. Os RNAm dos FGF16 e FGF20 e as respectivas proteínas foram detectados no ovário bovino. A abundância de RNAm de FGF16 e FGF20 foi maior em células da granulosa e da teca de folículos atrésicos comparados a folículos saudáveis ou transicionais. O tratamento com FSH diminuiu a abundância de RNAm para FGF16 e FGF20 e o IGF1 inibiu FGF16 em células da granulosa cultivadas in vitro. Ao longo da maturação a expressão do FGF16 e do FGF20 foi estável no oócito, enquanto que a expressão dos receptores FGFR2c e FGFR3c foi estimulada nas células do cumulus pelo FSH. A proteína FGF16 foi localizada no oócito, células do cumulus e da teca e o FGF20 em oócitos, células do cumulus, da granulosa e da teca. O FGF17 aumentou a proporção... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fibroblast growth factors (FGFs) regulate follicular development and oocyte maturation. Messenger RNA encoding receptors FGFR3c and FGFR2c have been detected in bovine antral follicles. Aiming to identify FGFs that can potentially regulate folliculogenesis through these receptors, the expression patterns of FGF16 and FGF20 were assessed in bovine antral follicles. Messenger RNA expression of these FGFs and their receptors (FGFR2c and FGFR3c) was also assessed in oocytes and cumulus cells, respectively, during in vitro maturation. In addition, previous data suggesting that FGF17 mRNA expression is regulated in the oocyte led us to investigate the effects of FGF17 on cumulus expansion and on the expression of EGF-like factors [amphiregulin (AREG), epiregulin (EREG) and betacelullin (BTC)] and other genes that regulate expansion [cyclooxygenase 2 (COX2), hyaluronan synthase 2 (HAS 2), pentraxin 3 (PTX3), protein-inducing tumor necrosis factor 6 (TSG6)]. FGF16 and FGF20 mRNA and proteins were detected in the bovine ovary. Messenger RNA abundance of FGF16 and FGF20 was higher in granulosa and theca cells from atretic follicles compared with healthy or transitional follicles. Treatment with FSH decreased mRNA expression of FGF16 and FGF20 and IGF1 inhibited FGF16 mRNA abundance in cultured granulosa cells. During maturation, mRNA expression of FGF16 and FGF20 was stable in the oocyte, while FGFR2c and FGFR3c were stimulated in cumulus cells by FSH. FGF16 protein was localized to the oocyte, cumulus and theca cells, and FGF20 was detected in the oocyte, cumulus, granulosa and theca cells. Supplementation of maturation medium with FGF17 increased the proportion of fully expanded COCs, but did not alter mRNA expression of COX2, HAS2, PTX3, TSG6, AREG, EREG and BTC in cumulus cells during in vitro maturation. In conclusion, FGF17 enhances bovine cumulus expansion... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mario Tanomaro Filho / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Banca: Loise Pedrosa Salles / Resumo: Cimentos de silicato decálciosão estudados como materiais reparadores. O estudo foi divido em 4 capítulos: No primeiro, citotoxicidade (MTT e Apoptose), genotoxicidade (teste Cometa) foram avaliadas em Saos-2 para os materiais: Cimentos de silicato de cálcio puro (CSC); Modificado (CSCM); Resinoso (CSCR1, CSCR2 e CSCR3). Na viabilidade, CSC e CSCR3 (50mg/mL) foram citotóxicos. CSCR1, CSCR2 e CSCR3 mostraram maior apoptose. Somente CSC e CSCR2 não foram genotóxicos em 10mg/mL (P<0.05). No cap.2, CSCM e CSCR2, foram associados a radiopacificadores: óxido de zircônio e óxido de nióbio (micro e nano), óxido de bismuto, tungstato de cálcio. MTA foi o controle para citotoxicidade e bioatividade. Todos foram viáveis e apresentaram apoptose semelhantes (1:8). A necrose foi superior (P<0.05). Ambos CSCs induziram fosfatase alcalina (ALP) e ARS. No cap.3, Biodentine (Septodont), MTA Plus (Avalon), CSCRs Nb2O5 e ZrO2 foram analisados quanto à cito e genotoxicidade. No MTT (1, 3 e 7d), todos foram similares. No qPCR, houve expressão de BAX (3d.) para CSCRs, MTAP e CSCR ZrO2 (5d). Para BCL2, (3 e 5d) somente MTAP e CSCR Nb2O5 (5d.). Na genotoxicidade, todos (1:2 e 1:8) permaneceram similares (P<0.05). Cap. 4, os mesmos foram avaliados na bioatividade: MTT, proliferação celular, ALP (1, 3 e 7d), qPCR (alp e ocn), e ARS. Todos os grupos foram viáveis e induziram ALP, ARS e expressão gênica, destacando os materiais CSCR Nb2O5 e Biodentine. Desta forma, os materiais apresentam potencial biológico para ser usado na endodontia. Estudos adicionais devem ser realizados, especialmente para os materiais experimentais. / Abstract: Calcium silicate-based cements are studied as reparative materials. This study was divided into 4 chapters: In the first, cytotoxicity (MTT and apoptosis) and genotoxicity (Comet assay) were evaluated in Saos-2 for: Pure calcium silicatebased (CSC); Modified (CSCM); resin-based (CSCR1, CSCR2, CSCR3). In the Viability assay, CSC and CSCR3 (50mg/mL) showed lower cell viability. CSCR1, CSCR2, CSCR3 showed more apoptosis. Only CSC and CSCR2 were not genotoxity in 10mg/mL (P<0.05). Chapter 2, CSCM and CSCR2 were associated with radiopacifiers: zirconium oxide and niobium oxide (micro and nano), bismuth oxide and calcium tungstate. MTA was used for the control of cytotoxicity and bioactivity tests. All were viable and showed similar apoptosis (1:8). Necrosis was superior (P<0.05). CSCM and CSCR induced alkaline phosphatase (ALP) and ARS. Chapter 3, was compared Biodentine (Septodont), MTA Plus (Avalon), CSCRs ZrO2 and Nb2O5, on cytotoxicity and genotoxicity. In MTT (1, 3 and 7 days) all were similar. In the qPCR, BAX was expressed by CSCRs (3d). MTAP and CSCR ZrO2 expressed in 5 days. For BCL2 gene (3 and 5d) only MTAP and CSCR Nb2O5 (5d). In genotoxixity assay, all (1:2 and 1:8) were similar (P<0.05). Chapter 4, we evaluated the same materials in Saos2 bioactivity: MTT, cell proliferation, ALP (1, 3 and 7d), qPCR (alp and ocn) and ARS. All groups were viable and induced ALP, ARS and gene expression, particularly CSCR Nb2O5 and Biodentine. Therefore, the biological materials has the potential to be used in endodontics. Additional studies should be conducted, especially for experimental cements. Additional studies should be conducted, especially for experimental cements. / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by claudia teixeira (claudiadtx@gmail.com) on 2011-06-22T00:06:57Z No. of bitstreams: 1 2010_DanielaFerreiraAraújo.pdf: 426000 bytes, checksum: 71813e9376cc8c000b705365aa96ba71 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-06-29T14:09:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_DanielaFerreiraAraújo.pdf: 426000 bytes, checksum: 71813e9376cc8c000b705365aa96ba71 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-29T14:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_DanielaFerreiraAraújo.pdf: 426000 bytes, checksum: 71813e9376cc8c000b705365aa96ba71 (MD5) / A polpa dentária, por ser fonte de células-tronco multipotentes, tem merecido inúmeras pesquisas para se conhecer melhor suas características. Este estudo teve como objetivo sistematizar os conhecimentos, avanços científicos, limitações e perspectivas relacionados à aplicação de células-tronco de tecido pulpar (Artigo 1: "Células-tronco da polpa dental- Atualidades e perspectivas"); e avaliar se os dentes extraídos e mantidos em temperatura e pressão ambientes por diferentes períodos de tempo ainda apresentavam suas células viáveis (Artigo 2: Cultura de células de polpa dental humana após diferentes períodos pós-exodontia). O Artigo 1 foi resultado de uma revisão da literatura que incluiu artigos que abordavam os tópicos relacionados ao desenvolvimento das possibilidades de utilização da polpa dentária para cultivo e viabilidade de células-tronco. No Artigo 2, foi realizado trabalho experimental com utilização de 21 dentes permanentes hígidos, divididos em 5 grupos de acordo com o tempo aguardado para colocação da polpa em meio de cultura após a exodontia. Os tempos testados foram: imediatamente; 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 5 horas. Realizou-se análise morfológica, ensaio de MTT e contagem celular para efeito de comparação da viabilidade celular. O comportamento de todos os grupos foi semelhante. Concluiu-se que as possibilidades de uso e o potencial regenerativo das células do tecido pulpar são vastos, e por isso, é importante a atualização dos conhecimentos, avanços científicos, limitações e perspectivas relativos à sua aplicação (Artigo 1). Além disso, as conclusões sobre a viabilidade das células pulpares após a exodontia são que aguardar até 5 horas para remover o tecido pulpar e estabelecer a cultura não impede a proliferação celular (Artigo 2). _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Dental pulp, as a source of multipotent stem cells, has motivated numerous researches to better understand its characteristics. The study aimed to systematize knowledge, scientific advances, limitations and perspectives related to the application of stem cells from pulp tissue (Article 1: "Dental pulp stem cells- Update and perspectives”); and to evaluate whether the extracted teeth that were maintained in ambient temperature and pressure for different periods of time would still present their cells viable (Article 2: Culture of human dental pulp cells after different times post-extraction). Article 1 was the result of a review. In Article 2, the experimental research was performed with 21 permanent healthy teeth, which was divided into five groups according to the time projected for placing the pulp into the culture medium after the extraction. The experimental times were: immediately, 30 minutes, 1 hour, 2 hours and 5 hours. Morphological analysis, MTT assay and cell counting were evaluated. The behavior of all groups was similar. It was concluded that the possibilities of use and regenerative potential of dental pulp cells are vast, and therefore the update of knowledge, scientific advances, limitations and prospects for its implementation is important (Article 1). Moreover, conclusions about the viability of pulp cells after extraction is that to wait until 5 hours to remove the pulp tissue and establish a culture does not impair their proliferation (Article 2).

Orientador: Alexandre Augusto Zaia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T13:58:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_EmanuelJoaoNogueiraLealda_M.pdf: 1275118 bytes, checksum: 8ef8a33ae74c9038dfc4736d6a1c2cd6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Os cimentos endodônticos podem entrar em contato com os tecidos periapicais no momento da obturação, gerando uma inflamação transitória. Esta inflamação pode estar associada a uma degradação das proteínas da matriz extracelular pelas metaloproteinases da matriz (MMPs). Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de exposição de cimentos endodônticos sobre a atividade gelatinolítica das MMP-2 e -9, produzidas por fibroblastos humanos. Fibroblastos da linhagem MRC5 (3x105 células/poço) foram incubados diretamente ou indiretamente com os cimentos AH Plus, Endomethasone N, Pulp Canal Sealer EWT e Sealapex nos períodos de 1/2h, 1h, 4h e 24h. A citotoxicidade dos cimentos foi determinada pela contagem de células viáveis, utilizando para isso o teste do azul de tripan. Sobrenadantes da cultura de células incubadas com os cimentos endodônticos, nas duas formas testadas, foram coletadas após cada período de exposição, com o objetivo de determinar os níveis de atividade gelatinolítica de MMP-2 e -9, pela técnica da zimografia. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e avaliados estatisticamente através do teste t (p<0,05). Os resultados mostraram haver uma maior atividade gelatinolítica de MMP-2 após os períodos de 4 e 24 horas, sem haver diferença entre os cimentos testados. Uma maior atividade gelatinolítica pode ser observada nas células que foram expostas ao cimento de forma direta, quando comparadas com aquelas que de receberam o contato indireto com o cimento (p<0,05). Nos períodos de tempo testados nenhuma atividade gelatinolítica pode ser observada no grupo controle, que não recebeu contato com os cimentos. Os resultados de citotoxicidade mostraram que os cimentos testados foram citotóxicos em ambas as formas de contato sendo que o Sealapex apresentou menor citotoxicidade e que o AH Plus foi o cimento mais citotóxico. Pode-se concluir que todos os cimentos endodônticos podem induzir a expressão de MMP-2 em fibroblastos MRC5 e que apesar de o AH Plus possuir a maior citotoxicidade, todos os cimentos testados apresentaram efeitos citotóxicos. / Abstract: Root canal sealers might be into contact with periapical tissues during root canal filling. This inflammation can be associated with extracellular matrix proteins degradation by matrix metalloproteinases (MMPs). The aim of this study was to investigate the effects of root canal sealers on the gelatinolytic acitivity of MMP-2 and -9 produced by human fibroblast cells. Human fibroblast cells MRC5 (3x105 cells/well) were incubated directly or indirectly with AH Plus, Endomethasone N, Pulp Canal Sealer EWT or Sealapex for 1/2h, 1h, 4h or 24h (timepoints). The cytotoxicity of all root canal sealers was determined by counting viable cells using the trypan blue assay. Supernatants of cell cultures incubated with root sealers, directly or indirectly, were collected after each time point to determine the levels of MMP-2 and MMP-9 gelatinolytic activity by gelatin zymography. Data were analyzed using ANOVA and t tests (p<0.05). The results showed that the cells secreted MMP-2 after the periods of 4 and 24 hours. However, there were no statistical differences between the sealers. Secretion of gelatinases was found to be elevated by the sealers in direct contact with the cell monolayer, when compared to the indirect contact (p<0.05). In the timepoints tested no MMP activity could be detected in the control group without the sealers. The cytotoxicity results showed that all the sealers were cytotoxic in both contact forms. These results indicated that Sealapex had a lower cytotoxicity while AH Plus was the most citotoxic endodontic sealer. In conclusion all root canal sealers can induce the expression of MMP-2 in MRC5 fibroblast cells. AH Plus presented the highest cytotoxicity among the tested sealers, but all tested sealers presents citotoxic effects. / Mestrado / Endodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Jose Alfredo Usberti Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T00:41:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Casale_ChristianeMariaOmetto_M.pdf: 5729096 bytes, checksum: 9e6ad1ed69ca8c0db55069663857de24 (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientação: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T01:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fonseca_PriscilaMeirelles_M.pdf: 16438409 bytes, checksum: 1276810b9fc2617332f439ef171bc3ce (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: As células natural killer uterinas (NKu) estão presentes no útero de roedores durante a gestação, período em que surgem e se diferenciam, desaparecendo por completo ao final deste. Os fatores envolvidos nos mecanismos de diferenciação e ativação destas células, bem como as funções por estas desempenhadas são pouco conhecidas. A dificuldade na compreensão plena das funções das NK do ambiente uterino é atribuída à complexidade e dinamismo do ambiente uterino durante a gestação. Os estudos realizados in vitro são igualmente inconclusivos devido à falta do estabelecimento de uma condição padrão nos ensaios realizados. O presente trabalho teve o intuito de padronizar uma condição de obtenção e manutenção de células NKu viáveis para ensaios in vitro, a partir do cultivo primário da glândula metrial. Foram utilizados fragmentos (explantes) da glândula metrial obtidos de camundongos prenhes no 8° dia de gestação (ddg). Estes explantes foram cultivados por 24 e 48 horas, em meios de cultivo MEM e RPMI, com ou sem a adição de MCE (meio condicionado esplênico). Os explantes em O hora (controle) e após 24 ou 48 horas de cultivo, assim como as células derivadas destes explantes (aderidas e em suspensão) no cultivo, foram processados para as análises histoquímicas de PAS e lectina DBA (Dolichos biflorus aglutinin) e para análises ultra-estruturais em MET. Os resultados demonstraram que tanto as formas aderidas quanto em suspensão apresentaram positividade à reação histoquímica de PAS e lectina DBA, sendo identificadas como sendo células NKu. O explante residual mostrou sinais de degeneração acentuada após 24 horas, independentemente das condições de cultivo empregadas. Pela MET, o maior índice de células NKu com boa preservação ultra-estrutural foi observada nas células NKu aderidas obtidas após 24 horas de cultivo em meio RPMI padrão, sem suplementação do meio condicionado esplênico (MCE). Estas condições de cultivo foram estabeleci das como padrão para a obtenção de células NKu morfologicamente bem preservadas, sendo utilizadas nos ensaios ín vítro, para avaliar a viabilidade destas células. Sob o efeito da lectina DBA, as células NKu demonstraram variações nos padrões morfológicos e de marcação pela lectina DBA, dependentes da concentração e tempo de ação, constatadas pelas microscopias de tluorescência e eletrônica de varredura (M EV). Pelos resultados obtidos, estabeleceram-se as condições de cultivo para obtenção de células NKu preservadas a partir do cultivo de explantes da glândula metrial, sendo estas células passíveis de serem utilizadas em ensaios in vítro. Pelo padrão de resposta das células NKu em conseqüência da ação da lectina DBA utilizada para avaliar a viabilidade destas células ín vítro, sugere-se que o substrato presente na superfície das células NKu poderia ser um potencial receptor de membrana envolvido no mecanismo de resposta celular / Abstract: During the pregnancy, uterine natural killer (uNK) cells appear in the rodent uterus, differentiate and disappear at the end of this period. H oweve r, which factors are involved in the differentiation[activation mechanisms of uNK cells, as well as in their functions, remain to be solved. The advancing on knowledge about these cells has been due to the complexity and dynamism of the uterine environment during pregnancy. Even the in vitro studies are inconclusive since no standard condition has been established. The present work proposed to establish a standard condition of culture to obtain and maintain uNK cells and further evaluate their viability for in vitro assays. Metrial gland fragments (explants) were obtained from the uterus of mice on 8th days of pregnancy and used as explants of culture The explants were cultured during 24 and 48 hours, in MEM and RPMI media, added or not with spleen-conditioned medi um (SCM). The O hour explants and after 24 or 48 hours of incubation, as well as explants derived cells (adherents and notadherents), were processed for PAS and DBA (Dolichos biflorus agglutinin) histochemistry analyses and for ultrastructural analyses in TEM. The results showed positive reaction to PAS and DBA histochemistries both for adherent and not-adherent cell forms in the culture. The residual explant showed degenerative signals after 24 hours, in despite of the culture conditions. The highest index of well-preserved uNK cells evaluated at ultrastructural levei was found to adherent uNK form, after 24 hours in standard RPMI, without the supplementation with SCM. This procedure was established as standard culture conditions to obtain morphologically well preserved uNK cell that was used to in vitro assays for evaluation of cellular viability. Under the effect of DBA lectin, uNK cells showed changes in morphology and labelling patterns, upon dependence of concentration and time lapsed effect, as noticed by fluorescence and scanning electron microscopes (SEM). Altogether, our findings allowed to establish the conditions to obtain wel / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Selma Candelaria Genari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T13:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_PatriciadaLuz_M.pdf: 3271080 bytes, checksum: d643afabc75067c1fb09b793ca29e709 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Eliana Aparecida de Rezende Duek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbantini_SamuelHilsdorf_M.pdf: 6943017 bytes, checksum: 2a40914a0c808cd4402a491e9b061ac5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A utilização de polímeros bioreabsorvíveis como suporte para cultura de células tem se destacado como alternativa para tratamento de lesões e perda de tecidos. O objetivo deste trabalho foi obter, caracterizar e avaliar a degradação in vitro de estruturas densas e porosas de poli(L-ácido lático) (PLLA) e poli(D,L-ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA)(50:50), preparadas pelo método da evaporação do solvente. Posteriormente os materiais foram utilizados como suporte para cultura de osteoblastos. Pelos resultados obtidos, as amostras de PLGA apresentaram degradação mais acentuada em relação às de PLLA. A comparação entre as estruturas densas e porosas confIrmam o efeito autocatalítico dos poli(a-hidróxi ácidos), no qual a degradação é mais acentuada nas estruturas densas devido à concentração dos produtos ácidos no interior do material. A morfologia das amostras de PLLA mostraram-se sem alterações em função do tempo de 8 semanas de degradação, sugerindo que podem ser utilizadas como suporte estrutural durante o período estudado. As amostras de PLGA alteraram signifIcativamente sua morfologia interna e de superfície, sendo as estruturas densas e porosas, morfologicamente semelhantes após 8 semanas de degradação in vitro. Os dados da cultura de células osteoblásticas mostrou baixa adesão celular para as amostras de PLLA e alta para as amostras de PLGA. O estudo da morfologia celular sobre a superfície dos materiais mostrou densidade e morfologia superior em membranas densas de PLLA. A seleção dos materiais para a Engenharia de Tecidos é dependente da aplicação, assim, como as estruturas de PLGA degradam rapidamente e permitem a adesão celular, podem ser indicadas para aplicações onde as lesões de tecido ósseo são pequenas, enquanto as estruturas de PLLA poderiam ser indicadas nos casos em que a lesão exigisse um material que degrade em um tempo longo, e servindo como suporte físico para as células e mecânico para o tecido / Abstract: The use of bioresorbable polymers as a support for the culture of cells in polymers has received special attention as an alternative for the treatment of lesions and the loss of tissue. The aim of this work was to obtain, to characterize and to evaluate the degradation in vitro of dense and porous structures of lactic poli(L-acid) (PLLA) and poli(D,L-acid lactic-co-acid glicólico) (PLGA)(50:50), prepared by casting process, for the later use as a support for the osteoblasts culture. The results showed that samples of PLGA presented a more accentuated degradation in relation to the one of PLLA. Comparing dense and porous structures, it was verified the auto catalytic effects of poly(a-hydroxy acids), in which the degradation is more accentuated in the dense structures due to the concentration of the acid products inside the material. The morphology of the samples of PLLA did not show any changes in function of the degradation time of 8 weeks, suggesting that the structures can be used as structural support during the studied period. On the other hand, samples of PLGA changed significantly its internal and surface morphology, being morphologically similar afier 8 weeks of in vitro degradation. Data of osteoblasts culture showed low cellular adhesion for the samples of PLLA and high for the samples of PLGA. The study of the morphology on the surface of the materiaIs showed high density and morphology in PLLA dense membranes. The selection of the materiaIs for the Tissue Engineering is dependent of the application. Due to a faster degradation of the PLGA structures as compared to PLLA, allowing the cellular adhesion, it can be indicated for applications where the lesions of bone tissue is small. While the structures of PLLA could be suitable in the cases where the lesion demanded a material to degrade in a long time serving as physical support for the cells and mechanical support for the tissue / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Basso_FernandaGoncalves_D.pdf: 8499661 bytes, checksum: 9dfc3430a1139624dd55e0ba12f9fe40 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estudos recentes têm demonstrado que a etiopatogenia da osteonecrose induzida por bisfosfonatos parece estar associada, pelo menos em parte, à citotoxicidade destes medicamentos às células ósseas e dos tecidos adjacentes. O tratamento da osteonecrose com antibióticos sistêmicos e tópicos, bem como com o tratamento cirúrgico, têm sido os mais indicados, sendo que alguns trabalhos clínicos apresentaram a laserterapia de baixa intensidade (LBI) como tratamento coadjuvante para esta alteração. Porém, os efeitos da LBI sobre as células envolvidas na etiopatogenia da osteonecrose ainda não foram demonstrados. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito in vitro de um bisfosfonato nitrogenado de alta potência - Ácido Zoledrônico (AZ) - sobre células dos tecidos ósseo, conjuntivo e epitelial, e avaliar o efeito da LBI sobre estas células pré-expostas ao AZ. Foram utilizadas três linhagens celulares humanas: células epiteliais (HaCaT), fibroblastos de gengiva (HGF) e osteoblastos (SaOs-2). As células foram cultivadas em meio de cultura (DMEM) contendo 10% de soro fetal bovino (SFB), por 48 horas. A seguir, este DMEM foi substituído por meio sem SFB por 24 horas, seguido da aplicação de AZ, na concentração de 5 ?M, por 48 horas. Após este período, o DMEM contendo AZ foi aspirado e um novo meio de cultura completo (10% SFB) foi adicionado. As células foram então submetidas à irradiação com LBI, utilizando o protótipo LaserTABLE (InGaAsP - 780 nm +-3 nm, 25 mW), nas doses de 0,5; 1,5; 3; 5 e 7 J/cm2. Foram realizadas 3 irradiações a cada 24 horas. Decorrido 24 horas da última irradiação, procedeu-se a avaliação da viabilidade celular, produção de proteína total, atividade de fosfatase alcalina, formação de nódulos de mineralização, expressão gênica de colágeno tipo I (Col-I), fator de crescimento fibroblástico tipo 2 (FGF2), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e fosfatase alcalina (ALP), além da análise da morfologia celular em MEV. Os dados foram submetidos à avaliação de normalidade, e analisados estatisticamente, utilizando os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando o nível de significância de 5%. O AZ causou redução significativa da viabilidade celular, produção de proteína total e expressão de Col-I e VEGF para todas as linhagens celulares avaliadas (p<0,05), assim como alterações morfológicas significativas. A expressão e atividade de ALP e a formação de nódulos de mineralização pelos osteoblastos também foi negativamente afetada (p<0,05). A LBI produziu efeitos diversos, de acordo com cada linhagem celular. Considerando as linhagens celulares isoladamente, as melhores doses foram de 5 e 7 J/cm2; 3 J/cm2, e 0,5 J/cm2, para as células epiteliais, fibroblastos e osteoblastos, respectivamente. Associada ao AZ, para as células epiteliais, a dose de 5 J/cm2 promoveu os melhores efeitos, enquanto para os fibroblastos de gengiva e osteoblastos, as melhores doses foram de 3 J/cm2 e 0,5 J/cm2, respectivamente. Estes resultados demonstram que a LBI pode promover estimulação das células da mucosa oral e tecido ósseo tratadas com AZ, assim como das células presentes em áreas adjacentes, o que poderia promover um aumento da capacidade de reparo destes tecidos / Abstract: Recent studies have demonstrated that the etiopathogenesis of bisphosphonates-induced osteonecrosis may be related, at least in part, to the cytotoxicity of these drugs on bone and oral mucosa cells. Systemic and topic antibiotic administration as well as surgical procedures have been used to treat osteonecrosis. Additionally, many clinical studies have proposed low-level laser therapy (LLLT) as an adjuvante treatment for this pathological condition. However, the effects of LLLT on bisphosphonate-treated cells have not been elucidated. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of a potent nitrogen-containing bisphosphonate - Zoledronic Acid (ZA) - on cultured bone, fibroblast and epithelial cells, as well as to assess the effects of LLLT applied on these cells previously exposed to ZA. Three human cell lines were used: epitelial cells (HaCaT), gingival fibroblastos (HGF) and osteoblasts (SaOs-2). Cells were seeded in culture medium (DMEM) containing 10% of fetal bovine sérum (FBS) for 48 hours. After that, the culture medium was replaced by FBS-free DMEM, followed by addition of ZA at 5 ?M, for additional 48 hours. After this period, a new DMEM was added (10% FBS). The cells were subjected to LLLT using a laser diode prototype LaserTABLE (InGaAsP - 780 nm +-3 nm, 25 mW), at 0.5; 1.5; 3; 5 and 7 J/cm2. Cells were irradiated for 3 times, every 24 hours. Twentyfour hours after the last irradiation, cell viability, total protein production, alcaline phophatase activity, mineral nodule formation, gene expression of collagen type I (Col-I), fibroblastic growth factor type 2 (FGF2), vascular endotelial growth factor (VEGF) and alcaline phosphatase (ALP), and also cell morphology (SEM) were evaluated. Data were subjected to normality evaluation and statisticaly analyzed using Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests at 5% of significance level. ZA caused a significant decrease on cell viability, total protein production, gene expression of Col-I and VEGF for all cell lines (p<0.05), as well as intense cell morphological changes. Gene expression and activity and mineral nodule formation by osteoblasts were also negatively affected by ZA (p<0.05). LLLT promoted diverse effects, according to cell type. Considering cell lines in an isolated way, 5 and 7 J/cm2; 3 J/cm2; and 0.5 J/cm2 promoted the best results for epitelial cells, gingival fibroblastos and osteoblasts, respectively. Regarding the LLLT applied to epitelial cells pre-treated with ZA, 5 J/cm2 promoted the most significant effects. For gingival fibroblasts and osteoblasts, the most relevant results were obtained at 3 J/cm2 and 0.5 J/cm2, respectively. These data show that LLLT can promote biostimulation on bone ZA-treated cells as well as on fibroblasts and epithelial adjacent cells, what could improve local tissue repair / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientadores: Angela Maria Moraes, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-02T21:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galesi_AdrianaLagesLima_M.pdf: 3002198 bytes, checksum: 43f36f277091d77b215ac58948a451ef (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As interleucinas são moléculas da família das citocinas que apresentam atividade modificadora da resposta biológica. Dentre os diferentes tipos de interleucinas já caracterizadas está a interleucina-2 (IL-2), que tem um papel importante na restauração da função imunológica, sendo utilizada no tratamento de alguns tipos de câncer e de doenças infecciosas. Neste trabalho, realizou-se um estudo da composição de um meio de cultura que conduzisse a um aumento da produção de IL-2 por linfoblastos murinos linhagem EL-4. Para isso, foram avaliados os efeitos das concentrações de glutamina e dos indutores de formação de IL-2 forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) e concanavalina A (Com A), dos percentuais de Pluronic F68 e soro fetal bovino (SFB) e da concentração de inóculo celular sobre a produção de IL-2 e o crescimento das células EL-4. Para a avaliação dos efeitos destas variáveis utilizou-se a metodologia de planejamento experimental. Os ensaios foram realizados primeiramente de maneira estática, em placas de cultura, e, após a obtenção da formulação do meio de cultura mais adequada, realizaram-se ensaios cinéticos, em maior escala, em frascos do tipo spinner. Nos estudos realizados utilizando-se a metodologia do planejamento experimental, verificou-se que a concentração de IL-2 mostrou uma tendência de aumento com a elevação da concentração de PMA, enquanto a viabilidade celular diminuiu com a presença de soro fetal bovino... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Interleukins are molecules from the group of the cytokines that are capable of changing the biological response. Interleukin-2 is among the different types of already characterized interleukins and has an important role in immunological function restoration, being used in the treatment of some types of cancer and infectious diseases. In this work, a study of the composition of a culture medium was performed, aiming at increasing the productivity of IL-2 by suspended EL-4 cells. For that, the effects of glutamine concentration (carbon and nitrogen source),phorbol-12-myristate-13-acetate and concanavalin A concentrations (IL-2 production stimulants), Pluronic F68 percentage (a cell-protecting additive against shear damage), fetal calf serum percentage, and cell concentration on IL-2 production and cell growth were evaluated, using the experimental design strategy. The experiments were initially performed statically, in cell culture plates, and, after the most adequate culture medium composition was determined, kinetic experiments were carried out in larger scale, in spinner flasks. In the studies employing the experimental design strategy, IL-2 concentration increased with an increment in PMA concentration, and cell viability decreased increasing fetal calf serum percentage. In the experiments in which the effect of concanavalin A in association with PMA over IL-2 production was studied, it was observed that these stimulants did not have synergetic effect and that the induction capacity of Con A was less than that of PMA... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química