Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo426_1.pdf: 2041749 bytes, checksum: e24f47f81ac4d2b40190c39c2764c701 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Secretaria de Ciência, Tecnologia e Meio Ambiente / Essa tese trata de propor uma interpretação do programa político das ações coletivas com mídias livres. Tais ações têm como sujeitos pessoas com formações muito variadas, em geral advindas da classe média, e com uma interação em rede em todo o país. Os objetivos passam, por um lado, pela crítica aos canais hegemônicos de comunicação comercial, mas também às ordens hieraquicamente construídas, identificadas no poder estatal, no capitalismo tardio e nas restrições que as instituições políticas e policiais deste impõem ao acesso a bens imateriais cultura, informacão, conhecimentos. Por outro lado, os artífices das ações coletivas com mídias livres detém-se na construção de ambientes e plataformas comunicacionais baseadas em variadas tecnologias digitais e telemáticas, mas também analógicas. Tais ferramentas servem como instrumentos aos processos de afirmação de identidade, visibilidade de expressões culturais não tematizadas pelos canais comerciais, produção coletiva de conhecimentos. O entendimento do caráter político dessas duas frentes permite compreender a emergência de um fazer político cujo o núcleo e o rasgo central é formado pela criação e difusão dos conhecimentos e habilidades necessárias à construção de ferramentas físicas, lógicas e normativas que permitam subverter o modelo hegemônico de trocas simbólicas na sociedade contemporânea. Esse fazer político é ele próprio embasado por uma abordagem do objeto técnico que se coloca para além tanto da perspectiva tecnofóbica, que aponta para uma sociedade anulada pela técnica; quanto da abordagem tecno-fílica, que pensa uma sociedade em que as máquinas possibilitam a vida feliz: o relacionamento com os aparatos técnicos colocados em prática pelas ações coletivas com mídias livres colocam em suspensão a técnica como algo natural (positivo) ou artificial (negativo). E tomam-na como algo sobre o qual é ainda possível atuar

Made available in DSpace on 2016-04-26T18:11:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luisa Marques Barreto.pdf: 548292 bytes, checksum: 2ff3b9f6414739ca61212e17d9bb8876 (MD5) Previous issue date: 2012-05-04 / This research is about the impact caused by the proximity between producers and receivers in the context of cyberspace cultural production. This phenomenon has directly affected author status and the way it is constructed in society. The digitalization of cultural products and the network sharing have destabilized three fundamental categories that holds the copyright: the author, the property and the labor. The purpose of this research is to introduce some changes regarding the epistemological notion of intellectual property as a remuneration copyright source. These changes affect significantly the ways in which the works communicate with public. This is a relevant thing why among other related factors, the control over the intangible works reproduction becomes increasingly more complex and inefficient. The problem of this research resides in the fact that both, the author-function as the user's role, has been radically altered impacting the way the discourses and the cultural production circulates. The theme will be studied from two angles of analysis: from the standpoint of the legal system and power structures related of cultural industry, and from culture. We will introduce debates regarding intellectual property (Virno 2003, Hardt & Negri 2005, Gorz 2005), free culture (Lessig 2004, 2009, 2005; and Lemos, 2005, 2010, 2011); author-function (Foucault, 1969) and the concept of immunization paradigm developed by Roberto Esposito (2005, 2010). The studies published during the period of open public consultation by the Culture Ministry in 2007 by the academic groups linked to the FGV, USP and UFSC still formed the basis for understanding in the legal field which are the proposed changes to the copyright Brazilian reform law, 9.610/98. The research result was an update of discussions that are not always correlated and when are systematically analyzed can show significant changes in the ways of thinking the new relationship between author, work and public in the cognitive networks of cyberspace / Esta pesquisa trata do impacto causado pela aproximação entre produtores e receptores na produção cultural no ciberespaço, que afetou diretamente o status do autor e o modo como ele se constrói na sociedade. A digitalização dos produtos culturais e o compartilhamento em rede desestabilizaram três categorias fundamentais que sustentam os direitos autorais: o autor, a propriedade e o trabalho. O objetivo desta pesquisa é apresentar algumas mudanças epistemológicas em relação a noção de propriedade intelectual enquanto fonte de remuneração autoral. Tais mudanças afetam de maneira significativa os modos como as obras se comunicam com o público. Isso porque, dentre outros fatores relacionados, o controle sobre a reprodução das obras imateriais torna-se cada vez mais complexo e ineficiente. O problema desta pesquisa reside no fato de que tanto a função-autor como o papel do usuário foram radicalmente alterados, impactando o modo como circulam os discursos e a produção cultural. O tema será estudado sob dois ângulos de análise: do ponto de vista do sistema jurídico e das estruturas de poder relacionadas a indústria cultural; e da cultura. Apresentamos debates sobre propriedade intelectual (Virno 2003, Hardt & Negri 2005 e Gorz 2005), cultura livre (Lessig 2004, 2009; e Lemos 2005, 2010, 2011); a função-autor (Foucault, 1969) e o conceito de paradigma da imunização desenvolvido por Roberto Esposito (2005, 2010). Os estudos divulgados durante o período da consulta pública aberta pelo Ministério da Cultura em 2007 pelos grupos acadêmicos ligados a FGV, USP e UFSC, constituíram ainda a base para compreendermos, no âmbito jurídico, quais são as alterações propostas para reforma da lei de direitos autorais brasileira, 9.610/98. O resultado da pesquisa foi uma atualização de discussões nem sempre correlacionadas e que, analisadas sistemicamente, apontam para mudanças significativas nos modos de se pensar as novas relações entre autoria, obra e público nas redes cognitivas do ciberespaço

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-05-04T13:02:08Z No. of bitstreams: 1 RAYANA PEREIRA SOTÃO ARRAES.pdf: 929825 bytes, checksum: c0ff57576facb193781ec406cebfd96c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T13:02:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RAYANA PEREIRA SOTÃO ARRAES.pdf: 929825 bytes, checksum: c0ff57576facb193781ec406cebfd96c (MD5) Previous issue date: 2016-01-29 / The Constitution of 1988 expressly guaranteed the State's commitment to promote education, culture, sport and recreation to citizens. Similarly, in order to achieve the goal of promoting the Republic development, it disciplined economic order in particular session and expressly tutored private property and free enterprise. Although the operation of educational and cultural activities has been authorized to the private sector with significant autonomy, leaving the state the role of monitoring the compliance of the exercise of such activity to the values of society - such as the exercise of the social function of property - State interference upon free initiative of the entertainment business sector has been gigantic, on the grounds of democratization of education and culture, as with federal laws 9870/99 and 12.933 / 2013. This paper analyzes such laws, seeking to identify the incompatibility thereof with the Constitution, as well as demonstrating the negative consequences to democracy, the economic environment and access to education and culture, in that it interferes with administrative and financial autonomy of private enterprises of the branches pointed out, to ensure the rights to education and culture, transfering this burden to the private sector. / O texto constitucional de 1988 trouxe expressamente o compromisso do Estado em promover a educação, cultura, esporte e lazer aos cidadãos. Da mesma forma, com o intuito de concretizar o objetivo da República de promoção do desenvolvimento, disciplinou a ordem econômica em sessão específica e tutelou expressamente a propriedade privada e a livre iniciativa. Embora a exploração de atividades educacionais e culturais tenha sido autorizada à iniciativa privada com significativa autonomia, restando ao Estado o papel de fiscalização da conformidade do exercício de tal atividade aos valores da sociedade – tais como o exercício da função social da propriedade – a interferência do Estado na livre iniciativa do setor empresarial de entretenimento tem sido agigantada, sob a justificativa de democratização da educação e da cultura, como acontece com as leis federais 9.870/99 e 12.933/2013. O presente trabalho analisa as referidas leis, buscando apontar a incompatibilidade das mesmas com o texto constitucional, bem como demonstrando os reflexos negativos à democracia, ao cenário econômico e ao acesso à educação e à cultura, na medida em que interfere na autonomia administrativo-financeira das empresas privadas dos ramos apontados, sob a justificativa de garantia dos direitos à educação e à cultura, por via reversa de transferência deste ônus à iniciativa privada.

Submitted by VANESSA PEREIRA DO NASCIMENTO (vanessapn@gmail.com) on 2018-08-22T23:52:32Z No. of bitstreams: 1 Mestrado_Vanessa Pereira.pdf: 2147127 bytes, checksum: e7ec86dca571dc9afdc02e5f37b46e7c (MD5) / Approved for entry into archive by Laura Mariane de Andrade null (laura.andrade@ia.unesp.br) on 2018-08-23T00:17:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nascimento_vp_me_ia.pdf: 2147127 bytes, checksum: e7ec86dca571dc9afdc02e5f37b46e7c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:17:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nascimento_vp_me_ia.pdf: 2147127 bytes, checksum: e7ec86dca571dc9afdc02e5f37b46e7c (MD5) Previous issue date: 2018-06-26 / Nesta pesquisa são apresentadas relações entre arte/educação e tecnologias contemporâneas no contexto da educação não formal. A partir das ações culturais realizadas pelo projeto de cultura digital Laboratórios Interativos Nômades para Criatividade e Experimentação (LINCE), sobretudo na zona leste da cidade de São Paulo, o desenvolvimento de um posicionamento crítico frente as tecnologias contemporâneas é relacionado a sua desmistificação e a experiência estética. A necessidade de políticas públicas de inclusão que desenvolvam a postura crítica do indivíduo, não se limitando apenas a oferta de acesso à internet é relacionada a exclusão digital e a exclusão cultural. A desmistificação dos dispositivos tecnológicos e a aprendizagem dos meios de produção são relacionadas ao empoderamento digital, processo que inclui o desenvolvimento de uma relação sensível com as tecnologias contemporâneas por meio da experiência estética. / In this research, the relation between art education and contemporary technologies is presented in a non-formal education context. Based on the cultural actions carried out by the Nomadic Interactive Laboratories for Creativity and Experimentation (LINCE) digital culture project, especially in the eastern part of the city of São Paulo, the encouragement of critical thinking when exposed to contemporary technologies is related to its demystification and aesthetic experiences. The need for public inclusion policies that develop the individual's critical stance, not limited to the provision of Internet access, is related to digital exclusion and cultural exclusion. The demystification of technological devices and learning about the means of production are related to the digital empowerment, a process that includes the development of a sensitive relationship with contemporary technologies through aesthetic experience.

Made available in DSpace on 2015-05-07T14:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4250706 bytes, checksum: 1fdc1d82de1ffceb50f6fd7fd0eca157 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This dissertation investigates the collaborative creation in cyberspace, exploring how new social practices and technological changes impact the production and consumption of documentaries. To understand these emerging creative processes, the study adopted a strategy of literature review; empirical observation and evaluation of case studies. Increasingly, the concept of crowdsourcing (Howe, 2008) is applied to cultural projects. The term characterizes the meeting of several individuals through public invitation to achieve a common goal. The Internet has become an aggregator space for filmmakers, audience, the corporate world, among others. The integration of multiple knowledge and resources is perceived in various stages of the creation cycle, encompassing financing, development of content and circulation. However, these relationships are not free of conflict because different agents may have different goals and interests. The inventive freedom usually follows guidelines that do not meet existing rules of copyright. This multiplicity of voices is employed in accomplishments that adopt the traditional audiovisual language, obeys the premise of linear narrative, conduces to the emergence of multimedia projects in a way that storytelling becomes as innovative as its production flow. These are initiatives of collective authorship, works constantly renewed through the ongoing contribution of social actors. / A presente dissertação investiga a criação colaborativa no ciberespaço, explorando como novas práticas sociais e transformações tecnológicas impactam a produção e consumo de documentários. Para compreender esses processos criativos emergentes, o trabalho adotou como estratégia a pesquisa bibliográfica; observação empírica e avaliação de estudos de caso. Cada vez mais, o conceito de crowdsourcing (HOWE, 2008) é aplicado em projetos culturais. O termo caracteriza a reunião de diversos indivíduos, por meio de convite público, para efetivar um objetivo comum. O ciberespaço se transformou em um ambiente agregador para cineastas, audiência, o mundo corporativo, dentre outros. A integração de múltiplos conhecimentos e recursos é percebida nas diversas etapas do ciclo de criação fílmico, englobando financiamento, elaboração de conteúdo e circulação. Entretanto, as relações não estão livres de conflito, pois os diversos agentes podem possuir metas e interesses distintos. A liberdade inventiva usualmente segue orientações que não atendem regras vigentes de direito autoral. Essa multiplicidade de vozes é empregada em realizações que adotam a linguagem audiovisual tradicional, obedecendo a premissa da progressão linear da narrativa, ou propicia o surgimento de projetos multimídia em que a maneira de contar histórias é tão inovadora quanto seu fluxo de produção. São iniciativas de autoria coletiva, obras renovadas constantemente através da contribuição contínua dos atores sociais.

O objetivo deste trabalho é discutir a questão da cultura livre a partir dos aspectos relativos ao domínio público. O método utilizado se baseia na observação, na análise e na síntese de dados relacionados aos temas propostos, viabilizando uma discussão baseada no estudo bibliográfico exploratório e explicativo das várias questões abordadas na pesquisa que culminam na problemática desta cultura livre e da noção e dos espaços de domínio público.Por sua vez, recorre-se ao estudo e análise de objetos que compõema pesquisa como, por exemplo, o papel da internet, da \"pirataria\", do direito autoral, da evolução dos meios de comunicação e disseminação do conhecimento, das atividades de cooperação e produção independente pelos usuários da grande rede e das políticas culturais no ambiente digital. Desse modo, são descritas e discutidas experiências de bibliotecas (Digital Public Library of America - DPLA), arquivos históricos (Europeana 1914-1918), música (Jamendo), quadrinhos e games.A partir da análise e estudo do conceito e das práticas de cultura livre estabelecidas principalmente sob o domínio público e da pirataria social, chega-se a conclusão que tais questões são fundamentais no incremento de atividades e relações estabelecidas no ambiente cooperativo da internet, que identificam os usuários como produtores e disseminadores de um ciclo cultural vivo entrelaçado pelas vias da grande rede. Com isso, reforça-se o potencial de políticas culturais a partir do ambiente digital que fortaleçam o ideal de cultura livre a partir de questões tais como a revisão das leis de direito autoral, do incentivo ao domínio público e até mesmo sobre novos entendimentos acerca do universo social-cooperativo da pirataria social em rede. / The mains objective of this paper is to discuss the issue of free culture relating it to the public domain questions. The method used is based on observation, analysis and synthesis of data related to the proposed themes, enabling a discussion based on exploratory and explanatory bibliographical study of the various issues addressed in the research culminating in the issue of this free culture and the notion of public domain.In turn, it is through the study and analysis of objects that make up the research as, for example, the role of the internet, \"piracy\", copyright law, the evolution of media and dissemination of knowledge, cooperative and independent cultural activitiesmade by the users and the large network of cultural policies in the digital environment. Some interesting activities in many cultural fields are discussed and described such as in libraries (Digital Public Library of America - DPLA), historic archives (Europeana 1914-1918), music devices and communities (Jamendo), comics and video gamesFrom the analysis and study of the concept and practice of free culture established primarily in the public domain and social piracy, we conclude that such questions are fundamental in development of activities and relationships established in the collaborative environment of the internet, which identify users as producers and disseminators of a living cultural cycle paths intertwined by the large network.Thus, it reinforces the potential of cultural policies from the digital environment that strengthen the ideal of free culture from issues such as the revision of copyright law, encouraging the public domain and even on new understandings of cooperative and social universe of social piracy.

Submitted by LUCAS FARINELLA PRETTI (lucaspretti@gmail.com) on 2017-08-21T12:34:05Z No. of bitstreams: 1 PRETTI-Lucas_Poeticas-do-comum_dissertacao_2017.pdf: 113580276 bytes, checksum: 24deea22c23370d4dbbc6c002a47181f (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-23T14:35:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pretti_lf_me_ia.pdf: 113580276 bytes, checksum: 24deea22c23370d4dbbc6c002a47181f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-23T14:35:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pretti_lf_me_ia.pdf: 113580276 bytes, checksum: 24deea22c23370d4dbbc6c002a47181f (MD5) Previous issue date: 2017-06-29 / Este trabalho analisa o conceito de commons digital, originado no campo da cibercultura, no contexto de ações artísticas produzidas nos últimos anos na cidade de São Paulo. Valendome principalmente das teorias de Antonio Negri, Nicolas Bourriaud, Guy Debord e Gilles Lipovetsky, parto da retomada do “comum” como valor intrínseco à sociedade informacional, sigo com sua análise nos campos da arte pública e artemídia para, enfim, classificar cinco aspectos das poéticas do comum (p. 118), a partir de três modelos de casos: BaixoCentro (2012), Pimp My Carroça (2012) e Piscina no Minhocão (2014). Por fim, apresento os primeiros resultados da ação Terrenos Apaixonantemente Objetivos, que aplica a ideia do comum à deriva situacionista, e detalho a concepção e desenvolvimento do Derivoscópio, obra integrante da ação, um aparato vestível construído com hardware e software livres. / This work analyzes the concept of digital commons, originated in the field of cyberculture, in the context of artistic actions produced in the last years in the city of Sao Paulo, Brazil. Based primarily on the theories by Antonio Negri, Nicolas Bourriaud, Guy Debord and Gilles Lipovetsky, I start from the resumption of the “common” as an intrinsic value to the Information Society to proceed with its analysis in the fields of Public Art and New Media Art. Then, I classify five aspects of the poetics of the common (p. 118), based on three case models: BaixoCentro (2012), Pimp My Carroça (2012) and Piscina no Minhocão (2014). Lastly, I present the first results of the artwork Objective Passional Terrains, which applies the concept of the common to the situationist drift, detailing the design and development of the Driftscope, a wearable apparatus built with free hardware and software, as part of that artwork.

O objetivo deste trabalho é discutir a questão da cultura livre a partir dos aspectos relativos ao domínio público. O método utilizado se baseia na observação, na análise e na síntese de dados relacionados aos temas propostos, viabilizando uma discussão baseada no estudo bibliográfico exploratório e explicativo das várias questões abordadas na pesquisa que culminam na problemática desta cultura livre e da noção e dos espaços de domínio público.Por sua vez, recorre-se ao estudo e análise de objetos que compõema pesquisa como, por exemplo, o papel da internet, da \"pirataria\", do direito autoral, da evolução dos meios de comunicação e disseminação do conhecimento, das atividades de cooperação e produção independente pelos usuários da grande rede e das políticas culturais no ambiente digital. Desse modo, são descritas e discutidas experiências de bibliotecas (Digital Public Library of America - DPLA), arquivos históricos (Europeana 1914-1918), música (Jamendo), quadrinhos e games.A partir da análise e estudo do conceito e das práticas de cultura livre estabelecidas principalmente sob o domínio público e da pirataria social, chega-se a conclusão que tais questões são fundamentais no incremento de atividades e relações estabelecidas no ambiente cooperativo da internet, que identificam os usuários como produtores e disseminadores de um ciclo cultural vivo entrelaçado pelas vias da grande rede. Com isso, reforça-se o potencial de políticas culturais a partir do ambiente digital que fortaleçam o ideal de cultura livre a partir de questões tais como a revisão das leis de direito autoral, do incentivo ao domínio público e até mesmo sobre novos entendimentos acerca do universo social-cooperativo da pirataria social em rede. / The mains objective of this paper is to discuss the issue of free culture relating it to the public domain questions. The method used is based on observation, analysis and synthesis of data related to the proposed themes, enabling a discussion based on exploratory and explanatory bibliographical study of the various issues addressed in the research culminating in the issue of this free culture and the notion of public domain.In turn, it is through the study and analysis of objects that make up the research as, for example, the role of the internet, \"piracy\", copyright law, the evolution of media and dissemination of knowledge, cooperative and independent cultural activitiesmade by the users and the large network of cultural policies in the digital environment. Some interesting activities in many cultural fields are discussed and described such as in libraries (Digital Public Library of America - DPLA), historic archives (Europeana 1914-1918), music devices and communities (Jamendo), comics and video gamesFrom the analysis and study of the concept and practice of free culture established primarily in the public domain and social piracy, we conclude that such questions are fundamental in development of activities and relationships established in the collaborative environment of the internet, which identify users as producers and disseminators of a living cultural cycle paths intertwined by the large network.Thus, it reinforces the potential of cultural policies from the digital environment that strengthen the ideal of free culture from issues such as the revision of copyright law, encouraging the public domain and even on new understandings of cooperative and social universe of social piracy.

A hemofilia A é uma doença ligada ao cromossomo X causada pela deficiência do fator VIII da coagulação sanguínea (FVIII). O tratamento disponível consiste na terapia de reposição da proteína do fator VIII derivada do plasma (FVIIIdp) ou recombinante (FVIIIr). Atualmente, dos 7 produtos recombinantes disponíveis no mercado, 6 são produzidos em linhagens celulares de roedores. A expressão dessa proteína em sistemas celulares não-humanos pode gerar uma molécula com perfil de modificações diferente do endógeno, podendo levar a reações imunogênicas e geração de inibidores anti-FVIIIr. Em função disso, novas estratégias de produção têm sido avaliadas, como a utilização de células hospedeiras mais eficientes no que diz respeito ao potencial de expressão da proteína de interesse. Dentre as linhagens de interesse, a linhagem hepática SK-HEP-1 tem se destacado por apresentar altos níveis de expressão do FVIIIr e potencial para o cultivo em suspensão em meios livres de soro fetal bovino (SFB). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de FVIIIr na linhagem celular humana SK-Hep-1 comparando duas estratégias para o estabelecimento de processos de produção em condições livres de soro e em suspensão: Estratégia 1 - adaptação para tais condições da linhagem já modificada geneticamente e Estratégia 2 - modificação gênica para a expressão da proteína já em células previamente adaptadas à tais condições. Para a estratégia 1, foram geradas duas linhagens recombinantes produtoras de FVIIIr, SK-HEP-F8/Neo-E1 e SK-HEP-F8/GFP-E1 aderentes e em cultivos suplementados com SFB. Na caracterização da cinética e produção do FVIIIr as linhagens apresentaram taxas específicas máxima de crescimento (?max) de 0,064 e 0,0031h-1 produzindo 1,0 e 0,78UI/mL de FVIIIr, respectivamente. Diversos protocolos de adaptação foram empregados, entretanto, não foi possível obter sucesso na adaptação das linhagens recombinantes para condições livres de soro e em suspensão. Para a estratégia 2, as células SK-HEP-1 selvagens adaptadas ao meio de cultura livre de SFB SFMII apresentaram um valor de ?max de 0,0186h-1 e Xmax de 1,9x106cels/mL. Para as etapas de modificação gênica da linhagem selvagem foram utilizados os mesmos vetores lentivirais empregados para a geração das células recombinantes aderentes, pLVmpsvFVIII?B-Neo e pLVCMVFVIII?B-GFP. Para o primeiro, não foi possível gerar uma linhagem produtora do FVIIIr. Para o segundo, foi possível obter duas linhagens produtoras do FVIIIr com 0.14 e 0.12IU/mL de atividade pelo ensaio cromogênico. O presente trabalho mostrou que a linhagem humana Sk-Hep-1 é apropriada para a produção de altos níveis de FVIIIr. No entanto, maiores esforços devem ser voltados ao desenvolvimento de meios de cultura livres de soro específicos para a linhagem para possibilitar a produção eficiente do FVIIIr em suspensão em meios livre de soro. / Hemophilia A is a genetic X-linked disorder caused by the coagulation factor VIII (FVIII) deficiency. The current treatment is the replacement therapy with plasma derived FVIII (pdFVIII) or recombinant FVIII (rFVIII) products. Nowadays, of the seven products available in the market, six are produced in rodent expression systems, which can result in a rFVIII molecule with different post-translational modifications and may lead to immune responses to non-human epitopes. Therefore, new production strategies have been evaluated, as the use of more efficient hosts in terms of protein expression potential. Among potential cell lines, the hepatic SK-HEP-1 cell line features high levels of rFVIII production and potential for serum-free suspension culture. In face of the exposed above, the goal of this study was to evaluate rFVIII production in the SK-HEP-1 human cell line comparing two strategies for the establishment of production process in a suspension serum-free condition: strategy 1 - adaptation to these conditions of a genetic modified cell line; strategy 2 - genetic modification of an already adapted cell line to rFVIII protein expression. For strategy 1, two adherent rFVIII producer cell lines were established in serum containing medium, SK-HEP-F8/Neo-E1 e SK-HEP-F8/GFP-E1. Characterization of cell growth and rFVIII production showed a maximum specific growth rate (?max) of 0.064 and 0.00311h-1 with rFVIII production of 1.0 and 0.78UI/mL, respectively. Different adaptation protocols were used; however, it was not possible to adapt the recombinant cell lines to growth in suspension serum-free conditions. For strategy 2, the wildtype SK-HEP-1 cell line adapted growth in SFMII BSF medium, showed a ?max of 0.0186h-1 and a maximum cell concentration (Xmax) of 1.9x106cells/mL. For the genetic modification, it were employed the same lentiviral vectors used for the recombinant adherent cells generation, pLVmpsvFVIII?B-Neo and pLVCMVFVIII?B-GFP. For the first, no attempts were successful. For the second, it was possible to generate two rFVIII producer populations with 0.14 and 0.12IU/mL activity, measured by chromogenic assay. These results demonstrate that the SK-HEP-1 cell line is appropriate for the production of high levels of rFVIII. Nevertheless, efforts should be made in developing specific medium to support efficient rFVIII production in suspension and suspension serum-free conditions.

A hemofilia A é uma doença ligada ao cromossomo X causada pela deficiência do fator VIII da coagulação sanguínea (FVIII). O tratamento disponível consiste na terapia de reposição da proteína do fator VIII derivada do plasma (FVIIIdp) ou recombinante (FVIIIr). Atualmente, dos 7 produtos recombinantes disponíveis no mercado, 6 são produzidos em linhagens celulares de roedores. A expressão dessa proteína em sistemas celulares não-humanos pode gerar uma molécula com perfil de modificações diferente do endógeno, podendo levar a reações imunogênicas e geração de inibidores anti-FVIIIr. Em função disso, novas estratégias de produção têm sido avaliadas, como a utilização de células hospedeiras mais eficientes no que diz respeito ao potencial de expressão da proteína de interesse. Dentre as linhagens de interesse, a linhagem hepática SK-HEP-1 tem se destacado por apresentar altos níveis de expressão do FVIIIr e potencial para o cultivo em suspensão em meios livres de soro fetal bovino (SFB). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de FVIIIr na linhagem celular humana SK-Hep-1 comparando duas estratégias para o estabelecimento de processos de produção em condições livres de soro e em suspensão: Estratégia 1 - adaptação para tais condições da linhagem já modificada geneticamente e Estratégia 2 - modificação gênica para a expressão da proteína já em células previamente adaptadas à tais condições. Para a estratégia 1, foram geradas duas linhagens recombinantes produtoras de FVIIIr, SK-HEP-F8/Neo-E1 e SK-HEP-F8/GFP-E1 aderentes e em cultivos suplementados com SFB. Na caracterização da cinética e produção do FVIIIr as linhagens apresentaram taxas específicas máxima de crescimento (?max) de 0,064 e 0,0031h-1 produzindo 1,0 e 0,78UI/mL de FVIIIr, respectivamente. Diversos protocolos de adaptação foram empregados, entretanto, não foi possível obter sucesso na adaptação das linhagens recombinantes para condições livres de soro e em suspensão. Para a estratégia 2, as células SK-HEP-1 selvagens adaptadas ao meio de cultura livre de SFB SFMII apresentaram um valor de ?max de 0,0186h-1 e Xmax de 1,9x106cels/mL. Para as etapas de modificação gênica da linhagem selvagem foram utilizados os mesmos vetores lentivirais empregados para a geração das células recombinantes aderentes, pLVmpsvFVIII?B-Neo e pLVCMVFVIII?B-GFP. Para o primeiro, não foi possível gerar uma linhagem produtora do FVIIIr. Para o segundo, foi possível obter duas linhagens produtoras do FVIIIr com 0.14 e 0.12IU/mL de atividade pelo ensaio cromogênico. O presente trabalho mostrou que a linhagem humana Sk-Hep-1 é apropriada para a produção de altos níveis de FVIIIr. No entanto, maiores esforços devem ser voltados ao desenvolvimento de meios de cultura livres de soro específicos para a linhagem para possibilitar a produção eficiente do FVIIIr em suspensão em meios livre de soro. / Hemophilia A is a genetic X-linked disorder caused by the coagulation factor VIII (FVIII) deficiency. The current treatment is the replacement therapy with plasma derived FVIII (pdFVIII) or recombinant FVIII (rFVIII) products. Nowadays, of the seven products available in the market, six are produced in rodent expression systems, which can result in a rFVIII molecule with different post-translational modifications and may lead to immune responses to non-human epitopes. Therefore, new production strategies have been evaluated, as the use of more efficient hosts in terms of protein expression potential. Among potential cell lines, the hepatic SK-HEP-1 cell line features high levels of rFVIII production and potential for serum-free suspension culture. In face of the exposed above, the goal of this study was to evaluate rFVIII production in the SK-HEP-1 human cell line comparing two strategies for the establishment of production process in a suspension serum-free condition: strategy 1 - adaptation to these conditions of a genetic modified cell line; strategy 2 - genetic modification of an already adapted cell line to rFVIII protein expression. For strategy 1, two adherent rFVIII producer cell lines were established in serum containing medium, SK-HEP-F8/Neo-E1 e SK-HEP-F8/GFP-E1. Characterization of cell growth and rFVIII production showed a maximum specific growth rate (?max) of 0.064 and 0.00311h-1 with rFVIII production of 1.0 and 0.78UI/mL, respectively. Different adaptation protocols were used; however, it was not possible to adapt the recombinant cell lines to growth in suspension serum-free conditions. For strategy 2, the wildtype SK-HEP-1 cell line adapted growth in SFMII BSF medium, showed a ?max of 0.0186h-1 and a maximum cell concentration (Xmax) of 1.9x106cells/mL. For the genetic modification, it were employed the same lentiviral vectors used for the recombinant adherent cells generation, pLVmpsvFVIII?B-Neo and pLVCMVFVIII?B-GFP. For the first, no attempts were successful. For the second, it was possible to generate two rFVIII producer populations with 0.14 and 0.12IU/mL activity, measured by chromogenic assay. These results demonstrate that the SK-HEP-1 cell line is appropriate for the production of high levels of rFVIII. Nevertheless, efforts should be made in developing specific medium to support efficient rFVIII production in suspension and suspension serum-free conditions.