Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:21Z : No. of bitstreams: 1 000848444.pdf: 1048998 bytes, checksum: b28bb1d076d5877b7947ca3acc33cbf2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As enteroparasitoses ainda persistem como problema de saúde pública, sobretudo nos países em desenvolvimento, onde o protozoário Giardia duodenalis (sin. Giardia intestinalis, Giardia lamblia) destaca-se como uma das causas mais frequentes de diarreia em crianças. Assim, no presente estudo investigou-se a prevalência de das infecções causadas por Giardia e outros parasitas intestinais e funcionários da Creche e Escola Municipal de Educlação Infantil (CEMEI) do distrito de Vitoriana, Botucatu-SP, incluindo-se também os familiares e cães das crianças cujos exames de fezes foram positivos para Giardia. Paralelamente, por meio de análise multilocular empregando os genes-alvo beta-giardina (bg), triose fosfato isomerase (tpi) e glutamato desiderogenase (gdh), caracterizou-se geneticamente os isolados de G. duodenalis detectados nessa população. Para isso, foram analisadas três amostras de fezes de 123 crianças (0 a 6 anos), 14 funcionários, 44 familiares e 20 cães. As amostras foram processadas por centrífugo-sedimentação e centrífugo-flutuação e examinadas em microscópio óptico. Parasitas intestinais foram identificados em 50 das 123 amostras de fezes de crianças (41,6%), e parasitismo por Giardia foi detectado em 21,9% das crianças (27/123). Das 27 famílias que tinham crianças parasitadas por Giardia, apenas 16 (44 indivíduos) forneceram amostras de fezes. Nestas, cistos de Giardia não foram detectados em nenhuma das amostras dos funcionários e dos cães examinadas. Com respeito ao parasitismo por Giardia nas crianças que frequentam a creche, as análises revelaram que as crianças mais jovens estão em maior risco de contrair a infecção por Giardia (OR = 0,69; IC95% = 00.49-0.97; p = 0,03). Além disso, verificou-se que o risco de infecção aumenta quanto maior for o número de indivíduos no domicílio (OR = 1,8; IC95% = 1,07-3,07; p = 0,03). Para a caracterização molecular dos isolados de Giardia, o DNA... / The intestinal parasites persist as a public health problem, especially in developing countries, where the protozoan Giardia duodenalis (syn. Giardia intestinalis, Giardia lamblia) stands out as one of the most common causes of diarrhea in children. The present study was conducted to investigate the prevalence of Giardia and other intestinal parasites in children and workers of a daycare center of Vitoriana, a district of Botucatu municipality, São Paulo State, including also the household members and dogs of the children tested positive for Giardia. In addition, we proposed to investigate the genetic diversity of G. duodenalis infection in these population using three gene loci beta-giardin (bg), triose phosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh). For this, three samples were analyzed from 123 children feces (0-6 years), 14 workers, 44 families members and 20 dogs. Samples were processed by centrifugal sedimentation and flotation and examined under a light microscope. Intestinal parasites were identified in 50 of 123 fecal samples from children (41.6%), and Giardia was the most frequent parasite detecte (21.9%). Out of the 27 families of children tested positive for Giardia, only 16 (44 individuals) provided stool samples. In these samples, cysts were detected in two samples. Focusing on Giardia infection among children attending day care, the analysis showed that younger children are at higher risk of acquiring Giardia infection (OR = 0.69; 95% CI = 00.49-0.97; p = 0.03). In addition, children living in families with a higher household density were more likely to be infected (OR = 1.8; 95% IC = 1.07-3.07; p = 0.03). DNA extracted from 186 stool samples (35 negative and 151 positive samples for microscopic examination) were amplified and the products sequenced generating 59 sequences as follow: 15 for bg, 25 for tpi and 19 for gdh. Out of the 29 isolates assessed, the sequencing analysis ... / FAPESP: 2011/52100-3

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-11-12T13:47:22Z No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-20T13:20:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-20T13:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / A leucemia é um grupo heterogêneo de neoplasias hematológicas resultante de várias alterações genéticas. A análise das alterações cromossômicas em pacientes com leucemia tem uma aplicação direta no diagnóstico, prognóstico e tratamento. Além disso, o estudo da expressão gênica oferece uma importante fonte para compreender as consequências moleculares das alterações genéticas em leucemia. Os objetivos desse trabalho foram: (a) identificar a presença de alterações cromossômicas em pacientes ao diagnóstico com hipótese de LLA B, LMA e LMC atendidos no Hospital de Base do Distrito Federal, possibilitando a incorporação do protocolo de diagnóstico molecular; (b) analisar o perfil da expressão do gene SIDT1 em amostras clínicas leucêmicas ao diagnóstico, linhagens de células leucêmicas e em indivíduos não leucêmicos. Deste modo, a detecção das alterações cromossômicas foi realizada em 48 amostras com suspeita de leucemia. As alterações cromossômicas recorrentes detectadas foram: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) e BCR-ABL1, p210 (9). A análise quantitativa da expressão do gene SIDT1 foi realizada em 80 amostras a partir de três grupos de pacientes leucêmicos (LLA, LMA e LMC) antes de iniciar o tratamento, sete linhagens de células leucêmicas (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, REH, HL-60 e K562) e amostras de indivíduos não leucêmicos, as quais foram utilizadas como controle. Os resultados da análise demonstraram que o gene SIDT1 foi regulado negativamente nas sete linhagens de células leucêmicas humanas analisadas, principalmente para as linhagens de células 697, REH e HL-60 quando comparado com as amostras não leucêmicas. A linhagem celular K562 não apresentou qualquer expressão do gene SIDT1. Nas amostras clínicas analisadas também foi observado que o gene SIDT1 foi regulado negativamente principalmente na LMA. O estudo das alterações cromossômicas possibilitou incorporar a metodologia de diagnóstico molecular no Hospital de Base do Distrito Federal, como exame de rotina dos pacientes com suspeita de leucemia para auxiliar na avaliação dos pacientes. Estudos futuros são necessários para compreender a desregulação do gene SIDT1 ocasionada por diferentes tipos de alterações cromossômicas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leukemia is a heterogeneous group of hematologic malignancies resulting from multiple genetic alterations. The analysis of chromosomal abnormalities in leukemia patients has a direct application in the diagnosis, prognosis and treatment. Furthermore, the study of gene expression provides an important source for understanding the molecular consequences of genetic alterations in leukemia. The aims of this study were: (a) to identify the presence of chromosomal abnormalities in patients with a presumptive diagnosis of B ALL, AML and CML treated at Hospital de Base do Distrito Federal, enabling the incorporation of molecular diagnostic protocol; (b) to analyze the expression profile of SIDT1 gene in clinical samples of leukemia patients at diagnosis, leukemic cell lines and in non-leukemic. Therefore, the detection of chromosomal abnormalities was performed on 48 samples of suspected leukemia. The recurrent chromosomal alterations were detected: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) and BCR-ABL1, p210 (9). Quantitative analysis of SIDT1 gene expression was performed in 80 samples from three groups of leukemia patients (ALL, AML and CML) before starting treatment, seven lines of leukemic cells (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, HEK, HL-60 and K562) and non-leukemic samples from individuals, which were used as controls.. The analysis results showed that the SIDT1 gene is negatively regulated in the seven human leukemia cell lines examined, especially for cell lines 697, HL-60 and REH when compared to the non-leukemic samples. The K562 cell line showed no expression of the SIDT1 gene. SIDT1 gene has also been observed to be negatively regulated in the samples, especially in AML. The study of chromosomal abnormalities allowed to incorporate the molecular diagnostics methodology in the Hospital de Base do Distrito Federal, as a routine examination for patients with suspected leukemia to assist in the evaluation of patients. Future studies are needed to understand the dysregulation of SIDT1 gene caused by different types of chromosomal alterations.

Orientador: Virgínia Bodelão Richini-Pereira / Resumo: O Zika virus (ZIKV) é um flavivírus transmitido por mosquito que causa Febre Zika e está associado às Malformações Congênitas e Síndrome de Guillain-Barré integrando a lista de agentes etiológicos que são um problema de saúde pública internacional. Apresentamos uma investigação sorológica e molecular do ZIKV em amostras humanas na região de Bauru do estado de São Paulo, Brasil a fim de contribuir na determinação dos primeiros casos de infecção de ZIKV nos locais do estudo. Foi realizada a investigação sorológica por técnica de imunocromatografia em 2000 amostras Dengue virus negativas referentes aos anos de 2014-2016, sendo 159 (7,9%) positivas para ZIKV, evidenciando que a circularização do ZIKV na região de estudo teve início em 2014. Foi investigado pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa por transcrição reversa a presença de ácido ribonucleico (RNA) do ZIKV nas 159 amostras positivas a nível sorológico. Porém o RNA viral não foi detectável. Esse resultado negativo quanto a molecular a partir de soro reforça a possibilidade de aderência do ZIKV em eritrócitos. Esses achados levantam o questionamento se outros membros do gênero Flavivirus possuem o mesmo potencial. Para complementar os dados realizamos uma análise filogenética da espécie ZIKV. Com o propósito de geração de hipóteses referentes a sua dinâmica de distribuição no Brasil. Para tal utilizamos os bancos de dados, algoritmos e parâmetros presentes nos softwares Virus Pathogen Resource e MEGA7. ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne flavivirus that causes Zika Fever and is associated with Congenital Malformations and Guillain-Barré Syndrome, which has been declared an international public health problem by the World Health Organization. We conduct a serological and molecular investigation of ZIKV in human samples in the Bauru region of the state of São Paulo, Brazil, in order to contribute to the determination of the first cases of ZIKV infection in the study sites. Serological investigation was made by immunochromatography technique performed in 2000 Dengue virus negative samples referring to the years 2014-2016, 159 (7.9%) was positive for ZIKV, evidencing that the circularization of ZIKV in the region of study began in 2014. The presence of ZIKV ribonucleic acid (RNA) in the 159 serologically positive samples was investigated by the Quantitative Reverse Polymerase Chain Reaction technique. All did not show detectable RNA. This molecular negative result from serum enhances the possibility of ZIKV adhesion in erythrocytes. These findings raise the question of whether other flaviviruses have the same potential. We also performed a phylogenetic analysis of the ZIKV species. With the purpose of generating hypotheses referring to its distribution dynamics. For this we use the databases, algorithms and parameters present in the software Virus Pathogen Resource and MEGA7. Our evidence allows us to infer that the ZIKV presents a possible adaptation in the Northeast Region ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Piscicultura de água doce consiste na maior produção da aquicultura mundial e o cultivo de peixes tem crescido, devido a investimento, desenvolvimento de tecnologias e à contínua expansão de espécies cultivadas. Esse aumento gerou novas possibilidades de transmissão de vírus aquáticos, fatores limitantes à produção da aquicultura. Dentre as centenas de vírus conhecidos de peixes, um dos principais, que atualmente é de preocupação internacional, é o vírus da Viremia Primaveril da Carpa (SVCV), devido a sua importância socioeconômica considerando os países afetados e o comércio internacional de animais aquáticos e seus derivados, com base na saúde e medidas preventivas. SVC é uma doença aguda causada por um rhabdovírus do gênero Vesiculovirus, que é um vírus de ácido ribonucleico (RNA) fita simples linear de aproximadamente 11 quilobases (kb) com polaridade negativa e envelopado. Diversos ensaios diagnósticos podem ser utilizados para detectar SVCV, porém, consomem tempo e não são adaptados para diagnóstico a campo. A prevenção da disseminação do vírus é crucial; portanto, maior entendimento do vírus e de sua transmissão é necessário. No presente estudo, a padronização de uma RT-nestedPCR foi realizada, cujo limite de detecção foi de 8,62 × 10-2 cópias/reação, observado após o spiking de tecidos de peixes com diluições seriadas de um controle positivo sintético. O ensaio foi aplicado a 150 amostras teciduais provenientes de 146 peixes distintos. As amostras consistiam de fragmentos de fígado, rim e baço e foram submetidas à transcrição reversa (RT), seguida pela reação em cadeia de polimerase (PCR), em configuração nested. Duas (2) amostras foram positivas para o gene G de SVCV pela RT-nestedPCR e a identidade dos produtos obtidos foi confirmada por sequenciamento direto utilizando-se o método de Sanger. Na reconstrução filogenética, as sequências obtidas formaram clado único, separado dos demais genogrupos e mesmo de sequências derivadas de outros vesiculovírus encontrados no Brasil. Esses resultados determinam a primeira detecção e caracterização moleculares de SVCV no Brasil por RT-nestedPCR e sequenciamento nucleotídico, indicando a necessidade de adoção de medidas de biosseguridade mais restritivas na produção pesqueira nacional. / Fresh-water fish farming forms the largest portion of the world aquaculture production, and the harvest of these warm-water fish is increasing, due to investment, improvement of technologies and continued expansion of cultivated species. This increase has rendered new possibilities for the transmission of aquatic viruses, which remain limiting factors for aquaculture production. Among the hundreds of known viruses of fish, one of the main viruses that are currently of international concern is the Spring Viremia of Carp virus (SVCV) due to its socio-economic importance regarding affected countries and international trade of aquatic animals and their products, on the basis of health control and preventive measures. SVC is an acute disease, caused by a rhabdovirus, belonging to the Vesiculovirus genus, and is an enveloped virus, with a linear single-strained negative-sense ribonucleic acid (RNA) of approximately 11 kilobases (kb). Several diagnostic assays are available for the detection of SVCV, but they are time-consuming and not well adapted for field diagnosis. Prevention of spreading of the virus is crucial; therefore, more understanding of the virus and its transmission is required. In this study, standardization of a RT-nestedPCR was performed, and its detection limit was of 8.62 × 10-2 copies/reaction, observed after spiking fish tissue with serial dilutions of a synthetic positive control. The assay was applied to 150 tissue samples from 146 different fish. Samples consisted of liver, kidney and spleen fragments, and underwent reverse transcription (RT) followed by the polymerase chain reaction (PCR) of a nested configuration. Two (2) tissue samples were found positive for the G gene of SVCV by RT-nestedPCR and the identity of products was confirmed by direct sequencing using the Sanger method. By phylogenetic reconstruction, the obtained sequences formed a unique clade, separating them from the other known genogroups, and even from sequences derived from other vesiculoviruses found in Brazil. These results represent the first molecular detection and characterization of SVCV in Brazil by RT-nestedPCR and nucleotide sequencing, indicating the need to adopt more stringent biosecurity measures in national fish farming production.

A atrofia muscular espinal (AME) é uma das doenças de herança autossômica recessiva mais frequentes, com uma incidência estimada de 1 em cada 10.000 nascidos vivos. A AME se caracteriza por degeneração de neurônios motores na medula espinal, causando fraqueza progressiva de membros e tronco, seguida de atrofia muscular. Os pacientes são classificados em AME tipo I, AME tipo II e AME tipo III, baseado na idade de início dos sintomas e na evolução clínica. As três formas clínicas são causadas por alterações no gene de sobrevivência do neurônio motor (SMN1), que apresenta uma cópia homóloga (SMN2). Em torno de 95% dos pacientes com AME são homozigotos para ausência do exon 7 do gene SMN1, devido a uma deleção desse gene ou à uma conversão para SMN2. A ausência de SMN2 não tem consequências clínicas e é encontrada em aproximadamente 5% dos indivíduos normais, mas o número de cópias de SMN2 modula o fenótipo de pacientes com AME. Devido a este espectro uniforme de mutação, a análise molecular realizada mais frequentemente é a detecção de deleções e conversões dos éxons 7 e/ou 8 dos genes SMN1 e SMN2 nos pacientes com suspeita clínica de AME. Neste trabalho, um protocolo baseado no sistema TaqMan® foi desenvolvido e comparado com a metodologia de PCR-RFLP (restriction fragment length polymorfism) utilizada no laboratório, avaliando o potencial de aplicação no diagnóstico molecular de pacientes com AME. Amostras de DNA de 100 indivíduos com suspeita clínica de AME foram analisadas pelos dois métodos. Amostras suspeitas de apresentar conversão foram analisadas por sequenciamento direto de DNA. Homozigotos para a ausência do exon 7 do gene SMN1 foram identificados em 58 casos (58%), sendo a maioria devido à deleção desse gene. Destes pacientes, 56 foram classificados, de acordo com os critérios diagnósticos revisados para AME, e distribuídos da seguinte forma: 26 (46,4%) do tipo I, 16 (28,6%) tipo II e 14 (25,0%) tipo III. Oito casos de conversão do gene SMN1 para SMN2 foram encontradas entre os pacientes e a distribuição desses casos entre as três formas clínicas foi a seguinte: 4 pacientes do tipo III, 3 do tipo II e 1 do tipo I. Cinco casos de homozigotos para ausência do gene SMN2 foram identificados entre os demais indivíduos. A comparação do método PCR-RFLP com o método baseado no sistema TaqMan® descrito neste estudo mostrou que ambos foram específicos e precisos para essas análises. No entanto, o ensaio TaqMan® foi mais sensível e mais rápido e parece ser um método adequado para o diagnóstico de AME. / Spinal muscular atrophy (SMA) is one of the most frequent autosomal recessive disorder with an estimated incidence of 1 case in each 10,000 live-births. SMA is characterized by degeneration of motor neurons in the spinal cord, causing progressive weakness of the limbs and trunk, followed by muscle atrophy. Patients have been classified in type I–III SMA based on age at onset and clinical course. All three types of SMA are caused by alterations in the survival motor neuron gene (SMN1) that also have a homologous copy named SMN2. About 95% of SMA patients show homozygous absence of SMN1 exon 7 due a deletion of this gene or a conversion into SMN2. The absence of SMN2 is found in about 5% of individuals with no clinical phenotype, but number of SMN2 copies modulates the phenotype of SMA patients. Considering this uniform mutation spectrum, direct molecular genetic testing consists basically of detecting deletions and conversions of exons 7 and 8 of these genes in SMA patients. In this work, we develop a real time PCR TaqMan® method and compared with the most commonly used PCR restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) assay, evaluating the potential application of molecular diagnosis of SMA patients. DNA samples from 100 individuals with clinical features of SMA were analyzed by both methods. Besides, patients DNA samples carrying a conversion event were analysed by direct DNA sequencing. Homozygous for SMN1 exon 7 absence were identified in 58 cases (58%) being the majority due to gene deletion and eight cases of gene conversion. From those, 56 were classified, according to the revised diagnostic criteria, and distributed as follows: 26 (46.4%) SMA type I, 16 (28.6%) SMA type II and 14 (25.0%) SMA type III. In addition, gene conversion was observed in 4 SMA type I patients, 3 SMA type II and 1 SMA type III patient. Among the remaining individuals five samples were found to be homozygous for absence of SMN2 gene. Comparing PCR-RFLP method and the method based on the TaqMan® system describe in this study, we verify that both were precise and specific for these analyses. However, the TaqMan® assay was faster and more sensitive than PCR-RFLP and was shown to be a suitable method for the diagnosis of SMA.

A doença de Gaucher (DG) é uma doença lisossômica de depósito, de herança autossômica recessiva, causada pela deficiência da enzima glicocerebrosidase (GC). Essa deficiência é causada por mutações no gene (GBA) que codifica esta enzima. Até o momento, mais de 250 mutações já foram identificadas nesse gene. O objetivo deste estudo foi identificar mutações na região codificante do gene GBA de pacientes brasileiros com DG através de PCR longo, seguido de nested PCR e sequenciamento direto. As análises foram realizadas em 54 pacientes não-aparentados com DG, confirmados por apresentar baixa atividade enzimática e com pelo menos um alelo mutante não-identificado após a triagem para 4 mutações comuns (p.N370S, p.L444P, 84insG e IVS2+1G>A). O protocolo introduzido permitiu a identificação de 7 variações de sequência novas (p.S125N, p.F213L, p.P245T, p.W378C, p.D399H, 982-983insTGC e IVS10+1G>T) no gene GBA de pacientes com DG. Todas essas novas variações de sequência são provavelmente alterações responsáveis pela doença, pois alteram resíduos conservados da proteína, inserem um aminoácido ou prejudicam o splicing normal do RNA mensageiro. Consequentemente, estas mutações causam mudanças na estrutura e/ou na função da GC. Além dessas, 24 mutações raras que já foram descritas previamente, também, foram identificadas nesse trabalho, contribuindo na definição do genótipo dos pacientes. A identificação dos alelos mutantes é importante para o conhecimento do espectro de mutações no nosso país e para aumentar o conhecimento das bases moleculares da doença. Além disso, essas informações podem também contribuir para a melhor compreensão de correlações genótipo-fenótipo, assim como, para o aconselhamento genético e/ou para a oferta de análises moleculares individualizadas para famílias em risco. / Gaucher disease (GD) is an autosomal recessive lysosomal storage disorder caused by deficiency of the glucocerebrosidase (GC). This deficiency is caused by mutations in the gene (GBA) coding for this enzyme. To date, more than 250 mutations have been identified associated with GD. The aim of this study was to identify mutations in the coding region of the GBA gene in Brazilian patients with GD through long-range PCR, followed by nested PCR and direct sequencing. Analyses were carried out in 54 unrelated GD patients who presented low enzymatic activity and had at least one unidentified disease-associated allele after screening for 4 common mutations (p.N370S, p.L444P, 84insG, and IVS2+1G>A). Protocol described here allowed the identification of 7 novel sequence variations (p.S125N, p.F213L, p.P245T, p.W378C, p.D399H, 982-983insTGC, and IVS10+1G>T) in the GBA gene of patients with GD. As these new sequence variations change conserved protein residues, insert an amino acid or affect mRNA normal processing, they are likely to be disease causing mutations. Consequently, these mutations cause changes in the GC structure and/or function. Besides, 24 rare mutations that were previously described were also identified in this work leading to the definition of patients´ genotype. The identification of mutant alleles is crucial for improving the knowledge of GBA mutation spectrum in our country and to the better understanding of molecular basis of the disease. Furthermore, such information may also contribute to the establishment of genotype-phenotype correlations as well as for more specific genetic counseling and/or to offer a customized molecular analysis for families at risk.

Dispepsia funcional e hipolactasia primária do tipo adulto (HPTA) são duas condições altamente prevalentes na prática clínica. Ambas podem coexistir ou até mesmo serem confundidas devido à sobreposição de alguns dos seus sintomas, principalmente a sensação de distensão abdominal. No entanto, a literatura é escassa em relação a estudos que tenham avaliado a associação entre a dispepsia funcional e a HPTA. O presente trabalho tem o objetivo investigar a associação entre a HPTA e a dispepsia funcional, através da análise molecular da HPTA em pacientes dispépticos funcionais e controles assintomáticos. Pacientes dispépticos funcionais (conforme os critérios de Roma III) e voluntários assintomáticos foram convidados para participar do estudo. Indivíduos com genótipo CC do polimorfismo de nucleotídeo único -13910C/T eram considerados portadores de HPTA. Os sintomas dispépticos (dor em abdômen superior, náuseas, vômitos, sensação de distensão abdominal e saciedade precoce) foram avaliados através de um questionário validado (Porto Alegre Dyspeptic Symptoms Questionnaire). Foram incluídos 408 indivíduos no estudo (197 dispépticos funcionais e 211 controles). HPTA foi identificada em 88 (44,7%) dispépticos funcionais e 107 controles (50,7%) (P=0,468). No grupo dos dispépticos funcionais, os escores dos sintomas dispépticos foram comparados entre os pacientes classificados como portadores de HPTA e aqueles classificados como “não portadores de HPTA”. Foi observado maior escore da sensação de distensão abdominal em dispépticos funcionais com HPTA do que em dispépticos sem HPTA (P=0,014). Não foram observadas diferenças entre os grupos em relação aos escores dos demais sintomas. Em conclusão, a ausência de diferença na frequência de HPTA entre todos os dispépticos funcionais e o grupo de indivíduos assintomáticos indica que não há uma associação entre a HPTA e a dispepsia funcional como um todo. No entanto, o maior escore da sensação de distensão abdominal entre os dispépticos funcionais com HPTA sugere um papel da HPTA em uma parcela dos pacientes com dispepsia funcional. / Functional dyspepsia and Adult Type Hypolactasia (ATH) are frequent conditions that may coexist or even be confounded. There may be some overlap between their symptoms, especially abdominal bloating. Studies on this association are scarce. The aim of the study is to investigate the association between functional dyspepsia and ATH, through molecular analysis of ATH in functional dyspeptics and asymptomatic individuals. Patients with functional dyspepsia according to Rome III criteria and volunteers for blood donation were invited to participate in the study. A CC genotype por -13910C/T SNP was diagnostic of ATH. Five symptoms of functional dyspepsia (upper abdominal pain, nausea, vomiting, abdominal bloating and early satiety) were evaluated using a validated questionnaire (Porto Alegre Dyspeptic Symptoms Questionnaire). A total of 408 subjects were included in the study (197 functional dyspeptics and 211 controls). Eighty-eight dyspeptic patients (44.7%) had ATH, compared to 107 individuals (50.7%) in the control group (P=0.468). In the group of dyspeptic patients, mean scores of symptoms were compared between those classified as ATH and non-ATH. Dyspeptic patients with ATH had higher scores for abdominal bloating, compared to non-ATH patients (P=0.014). The scores of the other dyspeptic symptoms were not statistically different between those two groups. In conclusion, the similar frequency of ATH in patients with functional dyspepsia and asymptomatic individuals indicate an absence of association between functional dyspepsia and ATH. However, our data of higher bloating scores among functional dyspeptics with ATH suggest a possible role of ATH in a subset of patients with functional dyspepsia.

Orientador: Marcos Rogério André / Banca: Heitor Miraglia Herrera / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Lucia Helena O'dwyer de Oliveira / Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Resumo: As enfermidades transmitidas por artrópodes vêm sendo recentemente estudadas em animais selvagens brasileiros, os quais podem atuar como hospedeiros tanto para os vetores quanto para os patógenos, muitos dos quais apresentam potencial zoonótico. O presente estudo tem como objetivo investigar a ocorrência de agentes transmitidos por artrópodes (agentes Anaplasmataceae, Bartonella spp., mycoplasmas hemotróficos, Rickettsia spp., Hepatozoon spp. e piroplasmideos) em animais selvagens, cães domésticos e seus respectivos ectoparasitos, amostrados na região do Pantanal sul matogrossense, por meio de métodos sorológicos e moleculares. Para tal, 31 Nasua nasua, 78 Cerdocyon thous, sete L. pardalis, 42 cães, 110 roedores e 30 marsupiais foram capturados. Os carrapatos recolhidos (1582) dos animais pertenciam às espécies Amblyomma sculptum, Amblyomma parvum, Amblyomma ovale, Amblyomma tigrinum, Rhipicephalus microplus, Rhipicephalus sanguineus sensu lato e Amblyomma auricularium. Adicionalmente, 80 pulgas Polygenis (Polygenis) bohlsi bohlsi foram recolhidas. Quatorze (17,9%) C. thous, sete (16,6%) cães e um (3,2%) N. nasua mostraram-se soropositivos (títulos≥80) para Ehrlichia canis, com títulos de anticorpos variando de 80 a 1280. Nenhum animal mostrou-se soropositivo Anaplasma phagocytophilum. Nove cães, dois C. thous, um N. nasua, oito roedores, cinco marsupiais e um pool de pulgas P. (P.) b. bohlsi mostram-se positivos para Ehrlichia spp. Todos os cães e o pool de pulgas P. (P.) b.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The diseases transmitted by arthropods have been recently studied in Brazilian wildlife, which can act as hosts for vectors and pathogens, many of which have zoonotic potential. The present work aimed to investigate the occurrence of tick-borne agents (Anaplasmataceae agents, Bartonella spp., hemotropic mycoplasmas, Rickettsia spp., Hepatozoon spp. and piroplasms) in wild animals, domestic dogs and their respective ectoparasites, in southern Pantanal region, central-western Brazil, by serological and molecular assays. For this reason, 31 Nasua nasua, 78 Cerdocyon thous, seven L. pardalis, 42 dogs, 110 rodents and 30 marsupials were captured. The ticks collected (1582) from animals belonged to the species Amblyomma sculptum, Amblyomma parvum, Amblyomma ovale, Amblyomma tigrinum, Rhipicephalus microplus, Rhipicephalus sanguineus sensu lato and Amblyomma auricularium. Additionally, 80 Polygenis (Polygenis) bohlsi bohlsi fleas were collected. Overall, 14 (17.9%) C. thous, seven (16.6%) dogs and one (3.2%) N. nasua were seroreactive (titer≥80) to Ehrlichia canis, with titers ranging from 80 to 1280. No animal showed to be seroreactive for A. phagocytophilum antigen. Nine dogs, two C. thous, one N. nasua, eight rodents, five marsupials and one P. (P.) b. bohlsi pool were positive for Ehrlichia spp. All positive dogs and the only P. (P.) b. bohlsi pool positive for Ehrlichia spp. were also positive in specific E. canis-qPCR based on dsb gene. Seven N. nasua, two dogs, one C. thous, ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Resumo: O leite e seus derivados são bons meios para o desenvolvimento de microorganismos patogênicos e deteriorantes, exigindo cuidados rigorosos com a ordenha, processamento e armazenamento. Entre os vários grupos de bactérias que podem ser desenvolvidas em leite refrigerado cru, Yersinia enterocolitica, um enteropatógeno invasivo para humanos, é uma delas. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante a apendicite. Para avaliar a prevalência de Yersinia enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, pelas análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Yersinia enterocolitica pelas provas microbiológicas. A análise de PCR revelou seis (6) amostras positivas para Yersinia enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, presente em cepas virulentas e avirulentas. Portanto, ainda que o patógeno estudado não represente um risco potencial nas amostras de leite analisadas neste estudo, foram observados diversos fatores de risco nas fazendas visitadas e uma grande contaminação da microbiota presente no leite, podendo-se afirmar que a qualidade do leite cru em tanques de expansão das fazendas avaliadas é de risco para a saúde públi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000432438-Texto+Completo-0.pdf: 2038170 bytes, checksum: 505895940d1e38c8e3925441d22f197d (MD5) Previous issue date: 2011 / Nematode worms in the genus Angiostrongylus are intra-arterial parasites of rodents. A. costaricensis lives in mesenteric system while A. cantonensis inhabits the pulmonary arteries. Man is an accidental host and the worm may cause eosinophilic gastroenteritis or meningitis due to migration of A. cantonensis’ young adult worms through central nervous system tissues. Molecular methods for diagnosis of human disease are important since parasitological diagnosis is prevented by lack of larval elimination in feces. Immunodiagnostic methods based on crude antigens lack both specificity and sensibility. Efforts where directed towards analysis of fractions for detection of antigens with better performance in immunodiagnosis for the improvement of molecular diagnosis of angiostrongyliasis. The possibility of heterologous antigens was also tested, A. cantonensis’ proteins being standardized in ELISA for the detection of anti-A. costaricensis’ antibodies. Analysis of fractions was initiated with the study of proteins extracted from the reproductive tract (RT) from female worms of A. cantonensis, several fraccionation protocols were tested and protein recognition by sera from infected humans was probed by Western blot (WB). Protein A immunoaffinity columns were loaded with sera from infected patients but recovery of antigens was unsuccessful. The RT extract was fractionated at sub-cellular level and the cellular membrane fraction (F2) was subsequently separated according to isoeletric point intervals. Proteins at several pH intervals were recognized by positive sera in WB. These antigens may be useful as antibody targets for the immunodiagnosis of angiostrongyliasis. Molecular cloning of relevant antigens is a desirable aim for future studies, leading to permanent sources of well-defined antigens and the reduction of the labor intensive in vivo production of these reagents. / Vermes do gênero Angiostrongylus são parasitos intra-arteriais em roedores. A. costaricensis vive no sistema mesentérico, enquanto A. cantonensis habita as artérias pulmonares de ratos. No homem, hospedeiro acidental destas parasitoses, elas causam a gastroenterite eosinofílica e meningite devido à migração de adultos jovens de A. cantonensis nos tecidos do sistema nervoso central. O exame parasitológico de fezes não pode ser utilizado para diagnóstico humano das angiostrongilíases porque não são encontradas larvas nas fezes, o que torna importante o desenvolvimento de técnicas moleculares. Os métodos de imunodiagnóstico empregando antígenos brutos apresentam reatividade cruzada com outras parasitoses e também resultados falso-negativos. Com o objetivo de aprimorar o diagnóstico molecular das angiostrongilíases, direcionamos os esforços na tentativa de reduzir a complexidade dos extratos de antígenos a fim de encontrar proteínas mais específicas e sensíveis para o diagnóstico. Primeiramente foi testado o uso de antígenos de A. cantonensis para o diagnóstico de A. costaricensis pela técnica de ELISA.A partir disso, antígenos de tubo reprodutor (TR) de fêmeas de A. cantonensis foram fracionados por diversas técnicas e sua reatividade a soros controle foi testada por Western blot (WB). Colunas de proteína A foram incubadas com soro de pacientes infectados, porém este fracionamento não teve sucesso. Foi realizado o fracionamento subcelular dos extratos TR e com a fração de antígenos de membrana celular (F2) foi realizado o fracionamento por ponto isoelétrico. As frações de pH apresentaram reatividade específica aos soros controle positivos quando submetidas ao WB, sugerindo que as proteínas encontradas possam ser importantes alvos para o diagnóstico das angiostrongilíases. A possibilidade de clonar as proteínas de interesse para produção em grande escala, poderá constituir fonte permanente de antígenos com redução do volume de trabalho e do emprego de animais no laboratório.