Introdução: O reconhecimento de problemas relacionados ao estado nutricional de pacientes com câncer de pulmão é escasso; estima-se, todavia, que em torno de 46,0% desses pacientes encontram-se desnutridos. Nos que são candidatos à cirurgia, é importante de se ter uma avaliação nutricional, pois além de definir o grau do problema, identifica potenciais riscos de complicações, possibilitando mais precocemente a instituição da terapia especializada. Objetivo: Avaliar o estado nutricional de pacientes submetidos à ressecção pulmonar por carcinoma não de pequenas células, relacionando-o com a ocorrência de complicações e/ou mortalidade pós-operatória, e verificar a concordância entre os métodos de avaliação utilizados. Métodos: Estudo retrospectivo de 180 pacientes adultos (27-87 anos), de ambos os sexos, que foram submetidos à ressecção pulmonar por carcinoma não de pequenas células no período de 2006 a 2014. Resultados: Havia 122 casos (67,8%) de adenocarcinomas, 38 (21,1%) de carcinomas escamosos, e 20 (11,1%) de formas indiferenciadas ou outras – 85,5% em estádios IA-IIB, e IIIA nos restantes 14,5%. DPOC foi à comorbidade mais vezes associada (em 26,1% dos casos). Os pacientes apresentaram-se com peso de 71,0±13,9 Kg, peso habitual de 71,3±13,9 Kg e altura de 1,64±0,08 m. Em 166 pacientes, o Índice de Massa Corporal (IMC) encontrado foi de 26,3 ± 4,4 Kg/m2 – 79 (47,6%) deles classificados como eutróficos, 74 (44,6%) com excesso de peso, pré-obesidade ou obesidade, e13 (7,8%) com magreza. Em 157 pacientes, a Avaliação Subjetiva Global (ASG) classificou 153 (97,5%) como bem nutridos (ASG: A), 4 (2,5%) como moderadamente desnutridos ou com suspeita de serem desnutridos (ASG: B), e nenhum deles como gravemente desnutrido (ASG: C). Mostrou-se baixa a concordância entre os métodos de avaliação IMC e ASG. Ocorreram 64 casos (35,5%) de complicações no pós-operatório de 30 dias, especialmente infecção respiratória, pneumotórax e fibrilação atrial, e 4 pacientes (2,2%) foram ao óbito, 2 com obesidade. O tempo de internação foi de 7 (5,5-12,5) dias, e foi significativamente maior nos pacientes com história de perda de peso (p=0,042). O índice de Charlson foi de 5,0 ±1,5%, com a estimativa de óbito em 10 anos de 27,6% (1,2-56,4), maior para os obesos. Conclusões: Os pacientes apresentaram-se em adequado estado nutricional, tanto pelo IMC quanto pela ASG, mas a concordância entre os métodos IMC e ASG foi baixa. Não houve significância entre a associação do estado nutricional pelo IMC e ASG com complicações ou óbito após cirurgia. Os pacientes com história de perda de peso tiveram tempo de internação significativamente mais elevado, e os obesos uma maior estimativa de óbito em 10 anos. / Introduction: Recognition of problems related to nutritional status of patients with lung cancer is scarce, and it is estimated that 46.0% of these patients are malnourished. In the preoperative period, the nutritional assessment is important, as it defines the degree of malnutrition, may identify individuals able to develop risk of complications, and provides early the specialized nutritional therapy. Objective: To relate the nutritional status of patients undergoing pulmonary resection for non-small cell carcinoma with occurrence of complications and/or postoperative mortality, assess the nutritional status of patients undergoing pulmonary resection for non-small cell carcinoma and evaluate the concordance between nutritional assessment methods BMI and SGA. Methods: Retrospective study, by reviewing medical records of 180 adult patients of both sexes who underwent pulmonary resection for non-small cell lung carcinoma from 2006 to 2014. Results: 122 (67.8%) were cases of adenocarcinoma, 38 (21.1%) of squamous cell carcinoma, 20 (11.1%) of undifferentiated or other – 85.5% in IA-IIB staging, and 14.5% another. COPD was the morbidity more times registered (26.1%). The patients had weight 71.0±13.9 Kg, usual weight 71.3±13.9 Kg, and height 1.64±0.08 m. The BMI value of 166 patients was 26.3±4.4 Kg/m2, with a predominance of eutrophic individuals (79 – 47.6%), followed by either, preobesity, overweight or obesity (74 – 44.6%), and thinness (13 – 7.8%). By SGA of 157 patients, (97.5%) were classified as well-nourished (SGA: A), 4 (2.5%) moderately or suspected of being malnourished (SGA: B), and no patient was classified as severely malnourished (SGA: C). No significant association was observed between nutritional status evaluated by Mass Index (BMI) and Subjective Global Assessment (SGA) with clinical outcomes. Immediate postoperative complications occurred in 64 cases (35,5%), mainly respiratory infection, pneumothorax and atrial fibrillation, and 4 patients (2.2%) dead, two with obesity. The hospitalization time was 7 (5.5-12.5) days, longer for those with weight loss history (p=0.042). The Charlson Index was 5.0 ± 1.5%, with the estimation of death in 10 years of 27.6% (12-56.4), largest for obese ones. Conclusions: Patients undergoing pulmonary resection had adequate nutritional status, verified either by BMI or SGA. There was a poor correlation between anthropometric methods of evaluation, BMI and SGA. Patients with weight loss history had significantly higher hospitalization time, and the obese a greater estimate of death in 10 years.

Uma deficiência nutricional no início da vida resulta em alterações morfológicas, bioquímicas e comportamentais. As conseqüências da desnutrição para o comportamento podem ser alteradas pelas condições ambientais. O objetivo do experimento 1 foi analisar os efeitos da desnutrição em procedimentos de discriminações simples e do experimento 2 os efeitos da desnutrição e da estimulação (handling e auditiva) em discriminações simples e complexas. Em ambos os experimentos, as dietas de 16 % (Controles ? C) ou 6% de proteína (Desnutridos ? D) foram oferecidas aos ratos do nascimento até 35 dias de idade. Dos 35 dias de idade até o final dos experimentos foram oferecidas dietas comerciais. Antes dos 85 dias de idade, os pesos corporais dos ratos foram reduzidos em 15% da média dos pesos com dieta e água à vontade. No experimento 1, ratos controles e desnutridos foram aleatoriamente designados para os estímulos discriminativos (SDS) luz ou som. As pressões à barra foram reforçadas com água durante a apresentação dos estímulos luz ou som e não reforçadas na ausência destes estímulos (SD). Após a média do índice de discriminação (ID) das 6 últimas sessões da discriminação de cada sujeito atingir 80 % foi iniciada a reversão da discriminação. Na reversão, as respostas passaram a ser reforçadas na ausência de luz ou som. Houve efeito do ID no fator sessão, tanto na discriminação quanto na reversão para controles e desnutridos. Não houve efeito de dieta ou de estímulo. Nas primeiras sessões da reversão, todos os grupos mostraram diferenças nas taxas de respostas, tanto em SD como em SD quando comparadas com as 6 últimas sessões da discriminação. No experimento 2, alguns filhotes foram estimulados do nascimento até 35 dias de idade. Foi utilizado o mesmo critério de redução de peso do experimento 1. No experimento 2, foram utilizadas 2 caixas com uma barra na parede frontal e com 3 túneis para a apresentação dos estímulos: sons (constantes ou interrompidos) e figuras (triângulos e linhas). Foi realizada a modelagem da resposta de colocação do focinho nos túneis (nose poken) e da pressão à barra. As tentativas durante o treino da discriminação foram iniciadas pelas respostas de pressão à barra que produziram a apresentação dos estímulos linha e triângulo em qualquer um dos 3 túneis, sendo que um dos túneis ficava sem estímulo. As respostas de nose poken no túnel com o SD linha foram reforçadas com água e as respostas no túnel com o triângulo ou sem estímulo (SD) não foram reforçadas. O treino foi prolongado até que o desempenho atingisse 80% de acertos quando foi iniciada a reversão da discriminação. Na reversão, as respostas de nose poken foram reforçadas no túnel com o triângulo e não foram reforçadas nos túneis com linha e sem estímulo. Após a obtenção do mesmo critério de acertos da discriminação foi iniciado o treino da discriminação condicional. Na condicional, após a resposta de pressão à barra, os estímulos Som Constante ou Interrompido foram apresentados no túnel central e os estímulos linha e triângulo foram apresentados acima de qualquer um dos túneis, sendo que um dos túneis ficava sem estímulo. Durante a apresentação do estímulo condicional Som Constante, as respostas de nose poken foram reforçadas no túnel com a linha e as demais respostas não foram reforçadas. Durante a apresentação do estímulo condicional Som Interrompido as respostas de nose poken foram reforçadas no túnel com o triângulo e as demais respostas não foram reforçadas. Houve efeito de dieta na discriminação, sendo necessárias mais sessões para os desnutridos atingirem o critério em comparação com os controles. Na reversão da discriminação, os desnutridos não estimulados apresentaram um pior desempenho em comparação com os demais grupos. Não houve aquisição na discriminação condicional, mostrando que são necessários outros procedimentos para avaliar processos mais complexos de aprendizagem. / Nutritional deficiency in early life results in morphologic, biochemical and behavioral alterations. The behavioral consequences of malnutrition can be partially recovered by environmental conditions. The objective of Experiment 1 was the analysis the effects of malnutrition in simple discrimination procedures. Experiment 2 was addressed to study the effects of malnutrition and environmental stimulation (handling and environment) effects on simple and complex discriminations. In both experiments, 16% (Controls ? C) or 6% (Malnourished ? D) protein diets were offered to rats from birth to age day 35. From that age up to the end of the experiments, commercial diets were available to the rats. Before age day 85, the ad libitum weights of the rats were reduced to 85% of the medium weight with water deprivation. In Experiment 1, control and malnourished rats were randomly assigned to the sound and light discriminative stimuli (SDS). Bar presses were reinforced with water during the light or sound stimulus presentation and not reinforced in the absence of these stimuli (SD). After each animal obtained the discrimination index of 80% in 6 consecutive sessions, the reversion of the discrimination initiated. In the reversion, bar presses were reinforced in the period of light or sound off. There was an effect sessions in the discrimination index (DI) in the discrimination as well as in the reversion phase for controls and malnourished. There was no diet effect or type of stimulus effect. In the first session of reversion phase, all groups showed differences in the rate of bar presses, in the SD as well in the SD when compared with the 6 last sessions of the discrimination phase. In the Experiment 2, half of the pups were stimulated from birth up to 35 days of age. The sessions were initiated after the animals reached the same weight reduction (85%) as in the Experiment 1. In Experiment 2, two boxes with a bar in the frontal wall and 3 tunnels in the opposite wall were used. The stimulus sounds (constant or interrupted) and figures of triangles and lines were presented above the tunnels. Bar presses and nose pokes in the tunnels were shaped in each animal. In each trial, bar presses were followed by the presentations of the line and triangle stimuli in two tunnels, and in the third tunnel no stimulus was presented. Nose pokes in the tunnel with the SD line were reinforced with water and the responses in the tunnel with the triangle or without stimulus (SD) were not reinforced. After each animal reached the criterion of 80% of correct responses, the reversion of the discrimination was initiated. During the reversion phase, nose poke responses were reinforced in the tunnel with the triangle and not reinforced in the tunnels with line or without stimulus. After the same hit criterion of the discrimination phase was reached by each animal, the training of the conditional discrimination initiated. In the conditional phase, after the bar presses a continuous or discontinuous sound stimuli were presented in the central tunnel, and the line or triangle stimuli were introduced above any of the tunnels, and one of the tunnels remained with no stimulus. During the presentation of the conditional stimulus continuous sound, nose pokes in the tunnel with the line were reinforced and responses in the other tunnels were not reinforced. During the presentation of the conditional stimulus discontinuous sound, nose pokes in the tunnel with the triangle were reinforced and the others responses in the tunnels were not reinforced. There was a diet effect in the discrimination phase and more sessions were required for the malnourished animals to reach the criterion, compared to the controls. In the reversion phase, the malnourished not stimulated early in life showed lesser performance in comparison with the others groups. None of the groups showed improvement of the performance in the conditional discrimination phase. The results shows that other procedures will be necessary to improve the acquisition of more complex discriminations

A desnutrição pode induzir lesão celular, comprometendo os mecanismos envolvidos de proliferação, diferenciação e morte celular. Estudos de nosso laboratório tem demonstrado, em modelo murino de desnutrição protéica e protéico-energética, hipoplasia medular com evidências histológicas de alteração da matriz extra celular. Nosso objetivo foi avaliar a eventual participação dos processos de apoptose, necrose e autofagia no desenvolvimento da hipoplasia medular observada nesse modelo. Para isso foram utilizados dois grupos de camundongos C57BL/6J machos, adultos, mantidos em gaioleiros metabólicos. O grupo controle (C) recebeu ração normoproteíca contendo 12% de proteína e o grupo desnutrido (D), alimentado com ração hipoprotéica contendo 2% de proteína. A fonte protéica utilizada foi a caseína. O período de indução da desnutrição foi cerca de cinco semanas, definido pela perda de 20 a 25 % de peso corpóreo por parte dos animais do grupo desnutrido. Após esse período, os animais de ambos os grupos foram anestesiados e realizada a coleta das amostras biológicas para avaliação nutricional e hematológica e coletadas células da medula óssea para avaliação da apoptose, necrose e autofagia. Para avaliação da apoptose e necrose as células foram duplamente marcadas com Annexina V, PI e caspase 3 que foram analisadas por citometria de fluxo . A expressão da protéina BCL-2 foi quantificada pela técnica de Western Blotting. A análise não demonstrou diferença estatística entre os grupos para esses parâmetros. Para avaliação da autofagia extraiu-se proteínas das células da medula óssea e avaliou-se a expressão das proteínas Akt e mTOR total e fosforilado , os complexos de mTor (Raptor, Rictor e Gβl) , Beclin-1 e LC3II. Os resultados demonstraram aumento significativo de mTOR total ,Raptor , Beclin-1 e LC3II e diminuição na fosforilação de mTOR nas células oriundas de animais desnutridos em relação ao grupo controle. A desnutrição não modificou a expressão de Akt total, porém houve diminuição da fosforilação de Akt e diminuição na expressão das proteínas Rictor e Gβl nas células analisadas. Como os processos apoptóticos e autofágicos podem ser de difícil detecção in vivo, também refizemos os experimentos in vitro, estimulando as células com compostos pró-apoptóticos (campotecina) e pró-autofágicos (tamoxifeno). Nesses experimentos observamos que, apenas quando estimulamos as células de animais desnutridos com camptotecina, as mesmas, no período de 12 horas apresentaram maior percentagem de apoptose inicial em relação a 0 horas , sugerindo que há um período em que as células desnutridas são sinalizadas para via apoptótica sendo mais susceptível ao estimulo. As células de animal desnutrido estimulado apresentaram após 12 horas aumento significativo da apoptose tardia em relação ao controle estimulado , indicando que nesse período há um aumento da apoptose tanto em processo inicial , tanto em processo tardio. Avaliamos a autofagia em uma cinética de 0, 2, 6, 18 e 24 horas in vitro e observamos aumento significativo da autofagia em células da medula óssea de animais desnutridos em 0 horas e após 18 horas de estímulo com tamoxifeno (20 µM) em relação ao respectivo controle, demonstrando que nesse período a autofagia começa a ser induzida através do estimulo mais facilmente do que o controle. Autofagia é um dos principais contribuintes para o metabolismo celular, fornecendo nutrientes quando os mesmos estão indisponíveis, e, portanto, no nosso modelo de desnutrição protéica a hipoplasia medular estaria em processo autofágico como mecanismo de reparo e sobrevivência. / Malnutrition can induce cell damage, compromising the mechanisms involved in proliferation, differentiation and cell death. Studies from our laboratory have demonstrated, in a murine model of protein malnutrition and protein-energy, marrow hypoplasia with histologic evidence of alteration of the extracellular matrix. Our objective was to evaluate the possible involvement of the processes of apoptosis, necrosis and autophagy in the development of bone marrow hypoplasia observed in this model. For this we used two groups of C57BL/6J adult male kept in metabolic gaioleiro. The control group (C) received normal protein diet containing 12% protein and undernourished group (D), fed low protein diet containing 2% protein. The protein source used was casein. The induction period of undernutrition was approximately five weeks, as defined by loss of 20 to 25% of body weight per part of group malnourished. After this period, the animals of both groups were anesthetized and held the collection of biological samples for nutritional assessment and hematology and bone marrow cells collected for evaluation of apoptosis, necrosis and autophagy. For assessment of apoptosis and necrosis of the cells were double labeled with Annexina V and PI caspase 3 were analyzed by flow cytometry. The expression of Bcl-2 was quantified by Western Blotting technique. The analysis revealed no statistical difference between the groups for these parameters. For evaluation of autophagy proteins extracted from bone marrow cells and evaluated the expression of proteins Akt and phosphorylated and total mTOR, complexes of mTOR (Raptor, and Rictor Gβl), Beclin-1 and LC3II. The results showed significant increase in overall mTOR, Raptor, and LC3II Beclin-1 and decreased phosphorylation of mTOR in cells derived from malnourished animals compared to the control group. Malnutrition did not modify the expression of Akt total, but decreased phosphorylation of Akt and decreased expression of the protein Rictor and Gβl cells analyzed. As apoptotic and autophagic processes can be difficult to detect in vivo, also redid the experiments in vitro, stimulating the cells with pro-apoptotic compounds (campotecina) and pro-autophagic (tamoxifen). In these experiments we observed that, when only stimulate cells with camptothecin malnourished, the same at 12 hours had a higher percentage of initial apoptosis compared to 0 hours, suggesting that there is a period in which cells are signaled to via malnourished being more susceptible to apoptotic stimuli. The animals starved cells stimulated after 12 h showed significant increase in apoptosis compared to control late stimulated, indicating that at that time there is an increase in apoptosis both in the initial process, both late process. Autophagy evaluated in kinetics of 0, 2, 6, 18 and 24 hours in vitro and observed a significant increase in autophagy in bone marrow cells of malnourished at 0 hours and after 18 hours stimulation with tamoxifen (20 microM) than the respective control, demonstrating that this period autophagy begins to be induced by stimulating more easily than the control. Autophagy is a major contributor to cellular metabolism, providing nutrients when they are unavailable, and therefore in our model of protein malnutrition in the marrow hypoplasia would autophagic process as a mechanism for survival and repair.

A má nutrição precoce gera efeitos deletérios graves no crescimento, no comportamento e nas capacidades cognitivas de ratos e crianças, sendo que a desnutrição proteica é a principal insuficiência nutricional que pode ser examinada individualmente em estudos experimentais. O objetivo deste estudo foi estabelecer discriminações condicionais em ratos, comparando-se animais controles com animais desnutridos e que passaram por recuperação nutricional, bem como testar três modificações no procedimento de Feliciano (2007). Como modificações foram empregadas um maior número de reversões da discriminação simples, antes do treino de discriminação condicional e os procedimentos de fading e correção de tentativas. No Experimento 1, foram testados o procedimento de fading e as reversões da discriminação. No Experimento 2, as reversões foram testadas junto com o procedimento de correção, mas não foram empregados animais previamente desnutridos. Por fim, no Experimento 3 os animais só passaram pela discriminação condicional e pela correção. Ao final das reversões os animais controles e desnutridos apresentaram a mesma velocidade de aprendizagem. Ao término da vigência do procedimento de fading não houve manutenção do desempenho característico da aprendizagem sem erros, indicando que o procedimento de fading utilizado não foi eficiente. A correção de tentativas facilitou a aprendizagem da discriminação simples e melhorou o desempenho dos animais. Não ocorreu curva de aprendizagem para a discriminação condicional nos três experimentos. Ainda assim, ao final do treino os animais submetidos ao procedimento de correção de tentativas apresentaram melhor desempenho do que os animais submetidos apenas ao fading, ou do que o dos animais não submetidos a qualquer dos procedimentos. Entre os fatores apontados como responsáveis pela não aprendizagem da discriminação condicional, destacam-se a programação da contingência, a disposição espacial aleatória dos estímulos de escolha e a existência de mais de duas alternativas para a resposta de escolha. / Early malnutrition leads to serious deleterious effects on growth, behavior and cognitive abilities of rats and children. Protein malnutrition is the main nutritional failure that can be examined individually in experimental studies. The aim of this study was to establish conditional discriminations in rats by comparing control animals with early malnourished animals which have received nutritional recovery and to test three changes in the procedure used by Feliciano (2007). As changes were employed a greater number of simple discrimination reversals, before the conditional discrimination training and the the procedures of fading correction. In experiment 1, we tested the procedure of fading and the discrimination reversals. In the experiment 2, the discrimination reversals were tested along with the correction procedure, but preveiously malnourished animals were not used. Finally, in experiment 3 the animals were tested only in the conditional discrimination with or without the correction procedure. At the end of reversals control and malnourished rats showed the same learning speed. At the end of the duration of the fading procedure the performance characteristics of learning without errors was not maintained, indicating that the fading procedure was not used efficiently. Correction facilitated the learning of simple discrimination and improved animal performance. There was no learning curve for the conditional discrimination in all experiments, yet at the end of training the performance of the animals subjected to correction procedure was better than the performance of rats subjected only to fading, or that of animals not submitted to any procedures. Among the factors that have prevented the learning of the conditional discrimination by the rats, we highlight the programmed contingency, the random spatial arrangement of the choice stimuli and the existence of more than two alternatives for the responses.

Dados da literatura e do nosso grupo evidenciam que a desnutrição protéica compromete órgãos linfo-hematopoéticos e modifica a resposta imune. Sabendo que animais desnutridos apresentam hipoplasia severa de órgãos hematopoéticos e que o microambiente medular apresenta distintos moduladores que atuam sinergicamente para influenciar a sobrevivência, proliferação e o desenvolvimento das células hematopoéticas em todos os seus níveis de diferenciação, avaliamos em um modelo de desnutrição, alguns aspectos da complexa regulação do microambiente medular avaliando a expressão de fatores de transcrição envolvidos no processo de diferenciação da Célula Tronco Mesenquimal (CTM) e capacidade de produção de citocinas importantes para o controle da hematopoese. Camundongos Balb/C machos, adultos, adaptados em gaioleiros metabólicos foram separados nos grupos controles e desnutridos recebendo, respectivamente, ração normoprotéica (12% de proteínas) e hipoprotéicas (2% de proteínas). Após o grupo desnutrido perder cerca de 20% do peso inicial, os animais foram sacrificados para a avaliação nutricional e hematológica caracterizando a desnutrição. As células mesenquimais foram isoladas da medula óssea (MO) e caracterizadas imunofenotipicamente por citometria de fluxo mostrando populações de células em ambos os grupos com marcação positiva para CD90, CD271, Sca1, CD49e, CD13, baixa marcação para CD34 e negativa para CD14, CD45. Na quantificação de fatores de transcrição por Western Blot verificou-se que células mesenquimais medulares de animais desnutridos apresentaram maior expressão de PPARγ e RUNX2, fato este que pode ser explicado, em parte, pelo remodelamento microambiental observado nesses animais. Sobrenadantes de células mesenquimais de animais desnutridos quantificados por Elisa apresentaram uma maior concentração de SCF e uma redução na concentração de G-CSF e GM-CSF. As alterações encontradas nos permitem concluir que a desnutrição compromete as células mesenquimais tanto no aspecto regulatório de fatores de transcrição, bem como na capacidade de produção de citocinas, contribuindo para o comprometimento do microambiente hematopoético e induzindo a falência medular comumente observada em situações de desnutrição protéica. / Data from literature and our group showed that protein malnutrition compromises lympho-hematopoietic organs and modifies the immune response. Knowing that malnourished animals show severe hypoplasia of hematopoietic organs and the bone marrow microenvironment has distinct modulators that act synergistically to influence survival, proliferation and development of hematopoietic cells in all levels of differentiation, we evaluated in a model of protein malnutrition, some aspects of the complex regulation of bone marrow microenvironment evaluating the expression of transcription factors involved in the differentiation of Mesenchymal Stem Cells, and the production capacity of cytokines which are important in the regulation of the hematopoiesis. BALB/c mice, males, adults adapted in metabolic cages were separated in two groups: control and malnourished groups receiving, respectively, normal protein diet (12% protein) and low protein (2% protein). After the malnourished group lost about 20% of initial weight, the animals were sacrificed and evaluated the nutrition status, as well as hematological parameters. Mesenchymal Stem Cells were isolated from bone marrow and immunophenotypically characterized by flow cytometry showing cells populations in both groups stained positive for CD90, CD271, Sca1, CD49e, CD13, low marking for CD34 and negative for CD14, CD45. In the measurement of transcription factors by Western Blot found that Mesenchymal Cells of bone marrow malnourished animals showed higher expression of RUNX2 and PPARγ. This fact can be explained, in part, by microenvironmental remodeling observed in these animals. Mesenchymal stem cells supernatants of malnourished mice quantified by Elisa presented a higher concentration of SCF and a reduced concentration of G-CSF and GM-CSF. The alterations found in malnourished animals allow us to conclude that malnutrition commits Mesenchymal Stem Cells on the expression of transcription factors involved in the regulatory aspects of the differentiation process, as well as at the capacity of cytokine production, contributing to an impaired hematopoietic microenvironment and inducing the bone marrow failure commonly observed in protein malnutrition states.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-15T14:05:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_AndersonFelipe_Versão Final.pdf: 4770513 bytes, checksum: bd8c869ddc087cfbf7bc953f303cf9e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T14:05:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_AndersonFelipe_Versão Final.pdf: 4770513 bytes, checksum: bd8c869ddc087cfbf7bc953f303cf9e5 (MD5) Previous issue date: 2015-08-21 / A desnutrição durante o período perinatal tem sido associada a aumento da compulsão alimentar, preferência por alimentos palatáveis e risco de desenvolvimento de obesidade na vida adulta. O apetite é controlado por vários sistemas fisiológicos, dentre os quais o sistema neural de recompensa. A dopamina é um conhecido neurotransmissor deste sistema, estando envolvida nas relações de prazer proporcionado por alimentos e drogas, agindo através da ligação em receptores neuronais, de duas classes: D1-like e D2-like. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos receptores dopaminérgicos D1 no Núcleo Accumbens e estriado, áreas relacionadas ao comportamento alimentar, em ratas desnutridas. Dois grupos experimentais foram formados: grupo-controle (CF - fêmeas gestadas por mães normonutridas durante a gestação e lactação) e grupo-desnutrido (DF - fêmeas gestadas por mães que receberam dieta hipoprotéíca no período perinatal). Os animais passaram a receber dieta-padrão de laboratório após o desmame e tiveram o peso avaliado em diferentes momentos da vida. No 120º dia, foram sacrificadas e submetidas à perfusão, para retirada dos encéfalos. Após os cortes dos cérebros em micrótomo de congelamento, procedeu-se a Imunohistoquímica para contagem de neurônios marcados para DRD1. As imagens foram obtidas através de câmera acoplada ao microscópio óptico e a morfometria realizada no software livre ImageJ. Os dados estatísticos foram expressos em média±desvio-padrão, sendo analisados no software livre GraphPad Prism 5. Os animais desnutridos apresentaram menor peso em relação aos normonutridos desde o nascimento até o sacrifício. Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos na expressão de DRD1 nas áreas cerebrais analisadas (Estriado: CF: 230,0 ± 86,40, n=4; DF: 225,50 ± 89,90, n=4; Núcleo Accumbens: CF: 109,80 ± 41,40, n=4; DF: 128,0 ± 49,50, n=5; test t de Student, p<0,05). Estes dados sugerem que a expressão dos receptores D1 está diretamente relacionada à quantidade de dopamina liberada na fenda sináptica, quantidade essa que é maior na apresentação de alimentos novos e palatáveis. / Malnutrition during the perinatal period has been linked to increased binge eating, preference for palatable foods and risk of obesity developing in adulthood. Appetite is controlled by several physiological systems, including the neural reward system. Dopamine is a neurotransmitter in this system and it is involved in relations of pleasure provided by foods and drugs, acting through its binding to neuronal receptors of two classes: D1-like and D2-like. The goal of this study was to evaluate the expression of dopamine D1 receptors in the striatum and Nucleus Accumbens, areas related to feeding behavior, in malnourished rats. Two experimental groups were formed: the control group (CF - rats coming from normonutridas mothers during pregnancy and lactation) and group-malnourished (DF - coming rats of mothers who received low protein diet during the perinatal period). The animals began to receive standard laboratory diet after weaning and had the weight assessed at different times of life. In 120 days, they were sacrificed and submitted to perfusion, to remove the brains. After the cuts of the brains in freezing microtome, it proceeded to Immunohistochemistry for counting neurons marked for DRD1. The images were obtained through camera coupled to an optical microscope and morphometry performed on the Free Software ImageJ. Statistical data were expressed as mean ± standard deviation and analyzed the free software GraphPad Prism 5. Malnourished animals showed lower weight compared to well-nourished from birth to the sacrifice. There was no significant difference between groups in the expression of DRD1 the analyzed brain areas (Striatum: CF: 230.0 ± 86.40, n = 4; DF: 225.50 ± 89.90, n = 4; Nucleus Accumbens: CF: 109.80 ± 41.40, n = 4; DF: 128.0 ± 49.50, n = 5; Student's t test, p <0.05). These data suggest that the expression of D1 receptors is directly related to the amount of dopamine released in the synaptic cleft, which amount is higher in presenting new and palatable food.

O principal objetivo deste trabalho foi verificar o efeito do trauma sub-aquático e da estimulação tátil, a longo prazo, no comportamento exploratório de animais submetidos à desnutrição protéica precoce, no teste do labirinto em cruz elevado (LCE). Sabe-se que a desnutrição protéica precoce, além de provocar redução no peso corporal e cerebral, produz alterações estruturais, neuroquímicas e funcionais no Sistema Nervoso Central, levando a alterações no comportamento. Utilizou-se ratos machos provenientes de ninhadas controle (16% de proteína) ou desnutridas (6% de proteína), após o desmame. Os animais receberam ou não estimulação tátil – do nascimento aos 70 dias de idade. No 71º dia, os animais de cada grupo foi submetida ao trauma sub-aquático por 60 segundos, e testada por 5 minutos no LCE. A desnutrição protéica reduziu o peso corporal tanto das ratas-mães quanto dos filhotes. Quando testados no LCE, os animais desnutridos apresentaram-se menos ansiosos e/ou mais impulsivos. A estimulação tátil recuperou parte do peso dos filhotes desnutridos, porém apresentou caráter ansiogênico. O trauma sub-aquático diminuiu a exploração dos braços abertos nos grupos desnutridos. Os dados sugerem que os efeitos da dieta dependem da interação com outros fatores ambientais como a estimulação tátil e o trauma sub-aquático. / Early protein malnutrition, besides reducing body and brain weights, causes structural, neurochemical and functional changes in Central Nervous System, leading to behavioral alterations. The principal aim of the present study was to evaluate the interaction of sub-aquatic trauma and chronic tactile stimulation on the exploratory behavior of malnourished rats, in the elevated plus-maze test (EPM). For this purpose, we used male rats fed by lactating female rats, receiving either 6% (malnourished) or 16% (well-nourished) protein diets. After weaning (21 days), the animals continued to receive the same diets as in the lactating period until 49 days of age, when they all started to receive a regular lab chow diet – period of nutritional recovery for the malnourished rats. Control and malnourished animals were divided in two groups: the first one received tactile stimulation from birth to 70 days of age, while the other group was not stimulated. On day 71st, half of the animals of each group was submitted to the sub-aquatic trauma for 60 seconds and tested for 5 minutes in the EPM, while the others were kept in their cages before the test. Protein malnutrition reduced the body weight of the dams as well as of the pups. When tested in EPM, malnourished animals showed less anxiety and/or more impulsiveness. Tactile stimulation recovered part of the weight of the malnourished animals, although it presented an anxiogenic profile. Sub-aquatic trauma decreased the open arms exploration. These data suggest that the effects of the diet are dependent on the interaction between tactile stimulation and sub-aquatic trauma.

A desnutrição acomete 925 milhões de pessoas em todo o mundo, independentemente da idade e classe social, os mais acometidos são indivíduos hospitalizados, crianças e idosos. A desnutrição causa alterações fisiológicas em diversos tecidos. O tecido hematopoiético é afetado na desnutrição protéica, por ser um tecido de elevada e constante necessidade de proteínas, levando a alterações hematológicas como anemia e leucopenia. Estudos do nosso laboratório têm demonstrado in vivo, alterações do microambiente hematopoiético, em camundongos submetidos à desnutrição protéica, bem como hipoplasia medular, mudanças quantitativas da matriz extracelular (MEC) como o aumento do deposito de fibronectina na região subendosteal (local da fixação das células tronco/ progenitoras hematopoiéticas), alterações do ciclo celular das células tronco/ progenitoras hematopoiéticas e alteração na expressão de VLA5; principal integrina na interação das células a fibronectina. Sendo assim propõe-se neste projeto avaliar possíveis isoformas da molécula de fibronectina, para melhor compreender o seu papel biológico no ciclo celular as células tronco/ progenitoras hematopoiéticas em um modelo de desnutrição protéica. Para isso foram utilizados camundongos C57BLI/6J machos, adultos, mantidos em gaioleiros metabólicos, separados em dois grupos. O grupo controle recebeu uma ração normoproteíca com 12% de proteína e o grupo desnutrido, uma ração hipoprotéica com 2% de proteína, num período de 5 semanas. Após este período os animais foram sacrificados para avaliação hematológica, celularidade da medula óssea, quantificação e pesquisa de isoformas da fibronectina, análise do perfil protéico no estroma medular em culturas de longa duração bem como a análise do estabelecimento do estroma medular em culturas de longa duração. Os animais desnutridos apresentaram uma menor celularidade e uma diminuição significativa de células jovens na medula óssea. O estroma medular estabelecido em culturas de longa duração dos animais do grupo desnutrido apresentaram uma menor confluência em relação ao grupo controle. Também foi observado nas culturas de longa duração um aumento significativo da fibronectina no 28° dia de cultura, mas com uma diminuição da fibronectina no 35° dia, porém com uma menor quantidade de região EDA nos dois períodos analisados (sítio de ligação das integrinas a fibronectina) quando comparados aos animais do grupo controle. A pesquisa de isoformas de fibronectina no estroma medular, por meio de RT-PCR, revelou que tanto os animais do grupo controle quanto os animais do grupo desnutrido apresentaram diferentes isoformas de fibronectina, porém não foi possível fazer uma análise quantitativa das regiões de splicing alternativo. O perfil protéico das culturas de longa duração analisado por meio de eletroforese bidimensional demonstrou que os animais do grupo desnutrido possuem um perfil protéico diferente dos animais do grupo controle, também foi observado uma diferença do perfil protéico entre os 28° e 35° dias de cultura. Portanto a alteração quantitativa da molécula de fibronectina e da região EDA, bem como a presença de diferentes isoformas de fibronectina, juntamente com as alterações do perfil protéico podem ser devido a um aumento e ou degradação das proteínas de matriz extracelular. E estas alterações podem ser responsáveis pela hipoplasia medular e alteração do ciclo celular das células tronco/ progenitoras hematopoiéticas e estromais, talvez pela menor interação com as integrinas, sendo esta interação fundamental para a modulação de diversas funções celulares tais como proliferação e diferenciação e para a regulação do remodelamento da matriz extracelular. Mas ainda se faz necessário a quantificação das regiões de splicing alternativo, seqüênciamento das proteínas da matriz extracelular e a identificação das possíveis metalaproteinases presentes no estroma medular para melhor elucidar as funções da fibronectina e outras proteínas da matriz extracelular na manutenção da hemopoese. / Malnutrition affects 925 million people worldwide, regardless of age and social class, the most affected individuals are hospitalized, children and elderly.Malnutrition causes physiological changes in various tissues.The hematopoietic tissue is affected in protein malnutrition, because it is a tissue of high and constant need of proteins, leading to hematological abnormalities such as anemia and leucopenia. Studies from our laboratory have demonstrated in vivo changes in the hematopoietic microenvironment in mice submitted to protein malnutrition, and bone marrow hypoplasia, quantitative changes of the extracellular matrix (ECM) as the increase in deposit fibronectin in the region subendosteal (site of attachment of the cells stem / progenitor), changes in cell cycle of stem cells / progenitor and changes in the expression of VLA5; main integrin interaction of cells to fibronectin. Therefore this project proposes to evaluate possible isoforms of fibronectin molecule, to better understand its biological role in cell cycle stem cells / progenitor in a model of protein malnutrition. Mice were used for this C57BLI/6J male adults were kept in metabolic gaioleiros, separated into two groups. The control group received a ration normoproteíca with 12% protein and the malnourished group, a low protein diet with 2% protein over a period of 5 weeks. After this period the animals were sacrificed for hematological evaluation, bone marrow cellularity, and quantification of fibronectin isoforms research, analysis of protein profiles in marrow stroma in long-term cultures and analysis of the establishment of bone marrow stroma in long-term cultures. The malnourished animals showed a lower cellularity and a significant decrease of young cells in the bone marrow.The bone marrow stromal cultures established in long-term animal malnourished group had a lower convergence in the control group. It was also observed in cultures long term a significant increase in fibronectin on the 28th day of culture, but with a decrease in fibronectin 35 th day, but with a smaller amount of EDA region in both periods analyzed (binding site of integrins to fibronectin) compared to the control group.The survey of isoforms of fibronectin in bone marrow stroma, by RT-PCR revealed that both control animals and animals in the malnourished group presented different isoforms of fibronectin, but it was not possible to make a quantitative analysis of the regions of alternative splicing.The protein profile of long-term cultures analyzed using two-dimensional electrophoresis showed that animals of the malnourished group have a protein profile different from the control group was also observed a difference in protein profile between 28° and 35° day of culture. Therefore, the quantitative change of the molecule fibronectin and the region of EDA, as well as the presence of different isoforms of fibronectin, together with changes in protein profile may be due to an increase, or degradation of extracellular matrix proteins. And these changes may be responsible for bone marrow hypoplasia and alteration of the cell cycle of stem cells / progenitor and stromal cells; perhaps because of less interaction with integrins, this interaction is essential for the modulation of various cellular functions such as proliferation and differentiation and to regulation of extracellular matrix remodeling. But it is still necessary to quantify the areas of alternative splicing, sequencing of the extracellular matrix proteins and identification of possible metalaproteinases present in bone marrow stroma to better elucidate the roles of fibronectin and other extracellular matrix proteins in maintaining hemopoese.

O estudo avaliou a influência de diversas formas de fototerapia na cicatrização de úlceras cutâneas de ratos nutridos e desnutridos (desnutrição induzida). No 1º experimento, de 60 ratos Wistar sob controle dietético, 30 foram selecionados aleatoriamente, recebendo metade da dieta diária para indução de desnutrição (marasmo), confirmada pela perda de massa corporal, sinais clínicos e dosagem de albumina sérica. Os animais nutridos (N) e desnutridos (D) foram distribuídos em grupos (n=10) conforme tratamento fototerápico, a saber: aparelhos desligados (LED e laser - sham) e ligados (4 LED\'s 660 nm e 32 LED\'s 890 nm, 500 mW; e laser HeNe 632,8 nm, 3 mW), sendo designados GNS, GNL, GNH, GDS, GDL e GDH, respectivamente. Duas úlceras cutâneas foram realizadas com punch 8 mm e irradiadas 3 vezes por semana durante 14 dias. Os programas LAS e Photoshop foram utilizados para análise histológica (HE) da espessura da pele após o período de desnutrição, e o ImageJ para análise das imagens e cálculo do índice de cicatrização das úlceras no 7º e 14º dias, além da análise histológica (tricrômio de Gomori) para avaliação da colagênese após a desnutrição e no 14º pós-operatório. No 2º experimento 30 ratos receberam dieta controle e 30 receberam dieta normoprotéica associada à proteína de baixa qualidade (gelatina) para induzir desnutrição. A distribuição dos animais em grupos foi semelhante ao experimento 1, porém utilizando o aparelho de laser de diodo (L1 660 nm e L2 808 nm, 100 mW), sendo designados GNS, GNL1, GNL2, GDS, GDL1 e GDL2, respectivamente. A confirmação da desnutrição, o procedimento cirúrgico, protocolo de tratamento e as análises de imagens e histológicas seguiram a mesma metodologia do experimento 1. Os resultados do experimento 1 mostraram que após o período de desnutrição, a espessura da derme dos animais desnutridos apresentou-se menor (p<0,0001) em relação aos nutridos, assim como o percentual da ) colagênese (p<0,0005). No 7º dia pós-operatório as úlceras do GDS apresentaram menores ICU\'s em relação aos GNS (p<0,01), GDL (p<0,001) e GDH (p<0,05). No 14º dia, as úlceras do GNS apresentaram maiores ICU\'s em relação ao GNH e GDS (p<0,05) e GDH (p<0,01), assim como as do GDL em relação ao GDH (p<0,05). Histologicamente, o GDS apresentou menor percentual de colágeno em relação ao GNS (p<0,05), GNH, GDL e GDH (p<0,01). Os resultados do experimento 2 mostraram que após a desnutrição, a espessura da derme dos animais desnutridos apresentou-se menor (p<0,0001) em relação aos nutridos, assim como o percentual da colagênese (p<0,03). No 7º dia, as úlceras do GDS apresentaram menores ICU\'s em relação aos demais grupos (p<0,001). No 14º dia não houve diferença entre os grupos (p<0,05). Histologicamente, o GDS apresentou menor percentual de colágeno que os demais grupos (p<0,001), e os grupos desnutridos tratados com laser apresentaram maior percentual de colágeno que os demais grupos (p<0,001). Os resultados evidenciaram a influência negativa da desnutrição na cicatrização, e que as diversas formas de fototerapia apresentaram efeito bioestimulador na cicatrização e colagênese nas úlceras cutâneas de ratos desnutridos em comparação à cicatrização natural e fotoestimulada nos grupos nutridos. / The study evaluated the influence of various forms of phototherapy in the healing of cutaneous wounds in nourished and undernourished rats (induced malnutrition). In the 1st experiment, from 60 rats under control diet, 30 were randomly selected to receive half of the daily diet for induction of malnutrition (marasmus), confirmed by loss of body weight, clinical signs and serum albumin. Nourished (N) and undernourished (U) animals have been distributed into groups (n=10) according phototherapic treatment, viz: off devices (LED and laser - sham) and on devices (4 LEDs 660 nm, 32 LEDs 890 nm, 500 mW, and HeNe laser 632.8 nm, 3 mW) and they were designed GNS, GNL, GNH, GUS, GUL and GUH, respectively. Two 8mm dorsal cutaneous wounds were punched and irradiated 3 times per week for 14 days. LAS and Photoshop softwares were used for histological analysis (HE) of the skin thickness after malnutrition time, and ImageJ for analysis of images to calculate the wound healing rate in 7th and 14th days, besides the histological analysis (Gomori trichrome) to calculate the colagenesis after the malnutrition time and in 14th post operative day. In the 2nd experiment 30 rats have received control diet and 30 received normal protein diet associated of low quality protein (gelatin) to induce malnutrition. The distribution of animals in groups was similar to experiment 1, but using a diode laser device (L1 660 nm and L2 808nm, 100 mW) and they were designed GNS, GNL1, GNL2, GDS, GDL1 and GDL2 respectively. The malnutrition status, the surgical proceeding, the protocol for treatment and analysis of histological images followed the same methods used in experiment 1. The results of experiment 1 showed that after malnutrition time, the thickness of the dermis in the undernourished animals was lower (p<0.0001) than nourished even as the percentage of coallagenesis (p<0.0005). In the 7th post operative day the wound healing rates were lower in the GUS than GNS (p<0.01), GUL (p<0.001) and GUH (p<0.05). In the 14th day, the WHRs were higher in the GNS than GNH, GUS (p<0.05) and GUH (p<0.05). Histologically, the GUS showed lower percentage of collagen than GNS (p<0.05), GNH, GUL and GUH (p<0.01). In experiment 2, the results showed that after malnutrition time, the thickness of the dermis of the undernourished animals was lower (p<0.0001) than nourished, as well as the percentage of collagenesis (p<0.03). In the 7th day, the WHRs were lower in the GUS than other groups (p<0.001). In 14th day there was no difference between groups (p<0.05). Histologically, the GUS presented lower percentage of collagen than the other groups (p<0.001), and the undernourished group treated with laser presented higher percentage of collagen than other groups (p<0.001). The results showed the negative influence of the malnutrition in the wound healing and that the various kinds of phototherapy presented biostimulator effect in the cutaneous wound healing and collagenesis in undernourished rats as compared to natural and photostimulated healing in the nourished groups.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-02Bitstream added on 2014-06-13T21:01:29Z : No. of bitstreams: 1 voltarelli_fa_dr_rcla.pdf: 9882732 bytes, checksum: 67c1cebc0d3bdc482da98a6519bf793b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A desnutrição protéica é, ainda, hoje, grave problema médico-social nos países em desenvolvimento. Assim, é de grande interesse o desenvolvimento de procedimentos mais efetivos no seu tratamento. Isso inclui o emprego do exercício físico bem como de novas fontes de proteína na alimentação. O presente estudo visou avaliar os efeitos da spirulina como fonte protéica, associada ou não ao exercício físico, sobre o crescimento e o metabolismo protéico muscular de ratos em recuperação da desnutrição protéica. Foram utilizados ratos Wistar, jovens (30 dias), separados nos seguintes grupos, de acordo com a fonte e a quantidade de proteína na dieta: I- Caseína 17% dos 30 aos 150 dias de idade; II- Spirulina 17% dos 30 aos 150 dias de idade; III- Caseína 6% dos 30 aos 150 dias de idade; IV- Caseína 6% dos 30 aos 90 dias e Spirulina 17% dos 91 aos 150 dias de idade; V- Caseína 6% dos 30 aos 90 dias e Caseína 17% dos 91 aos 150 dias de idade. Aos 91 dias, metade dos animais de cada grupo foi submetida ao treinamento físico de natação, 1 hora/dia, 5 dias/semana, durante 8 semanas, com sobrecarga equivalente à transição metabólica aeróbio/anaeróbio determinada pelo teste do lactato mínimo. No músculo sóleo foram determinados peso e teores de proteína total e de DNA para inferir sobre o crescimento. Como índices do metabolismo protéico muscular, foram avaliadas as taxas de síntese (incorporação de 14C fenilalanina) e degradação (liberação de tirosina) de proteínas bem como a expressão da proteína miosina (western blotting). A spirulina provou ser uma fonte protéica adequada para animais submetidos ou não à desnutrição... / As we enter the 21st century and the new millennium, malnutrition remains the single most important factor impairing health and productivity of large human populations, mainly in the developing countries. For this reason, the exploration of alternative alimentary protein sources became a matter of generalized interest and may be, or not, associated to physical exercise. The present study verified the effects of the blue green alga spirulina as the dietary source of protein, associated or not to physical exercise, on growing and protein metabolism in skeletal muscle of young rats recovering from malnutrition. Young male wistar rats were separated into groups, according to diet protocol: Casein 6% from 30 to 150 days old; Spirulina 17% from 30 to 150 days; Casein 17% from 30 to 150 days; Casein 6% from 30 to 90 days and Spirulina 17% from 91 to 150 days and Casein 6% from 30 to 90 days and Casein 17% from 91 to 150 days. At 91 days, 50% of the animals of each group was submitted to swimming physical training, 1 hour/day, 5 days/week, during 8 weeks, supporting overload equivalent to aerobic/anaerobic metabolic transition determined by lactate minimum test. Spirulina proved to be an adequate protein source for animals submitted or not to protein malnutrition. This quality could be demonstrated by the maintenance of body length and weight of young animals fed the balanced diet containing spirulina. Considering the analysis of the muscle protein metabolism, the rates of protein synthesis and the expression... (Complete abstract click electronic access below)