A nefropatia diabética (ND) é uma complicação freqüente do diabete melito (DM) e acarreta grande morbi-mortalidade. A prevenção desta complicação será mais efetiva se os indivíduos de maior risco, que se beneficiariam de tratamento intensivo dos fatores risco modificáveis, fossem precocemente identificados. A microalbuminúria, definida por valores de excreção urinária de albumina (EUA) de 20-199 g/min, ainda é o melhor marcador da instalação e progressão da ND, além de ser um fator de risco para o desenvolvimento de doenças macrovasculares. Estas associações podem ser explicadas pela teoria de que a microalbuminúria representa, na verdade, dano endotelial generalizado. A albuminúria nos limites superiores da normalidade também está associada ao desenvolvimento futuro de micro- e macroalbuminúria. Além disso, existe uma associação entre albuminúria normal-alta, doença cardiovascular e mortalidade geral em indivíduos com e sem DM. A EUA tem correlação direta e contínua com o desenvolvimento de doença renal e cardiovascular, sem um ponto determinado a partir do qual ocorreria um aumento mais importante do risco. No entanto, na prática clínica se faz necessário o estabelecimento de um valor crítico para guiar o tratamento dos pacientes. Algumas evidências apontam para valores de EUA em torno de 10 g/min como um novo ponto de corte para o diagnóstico de microalbuminúria.Concluindo, a associação entre a EUA e os desfechos renais e cardiovasculares parece ser contínua e já está presente até mesmo com níveis de EUA considerados normais. A adoção do valor de 10 g/min como de risco poderá identificar os pacientes que deveriam receber tratamento mais precoce e agressivo dos fatores de risco modificáveis.

O diabetes melito é considerado uma doença crônica caracterizada pela hiperglicemia e por complicações macro e microangiopáticas. Entre as complicações microangiopáticas, a nefropatia diabética vem adquirindo cada vez mais importância por ser considerada uma causa de insuficiência renal que pode ocorrer a qualquer momento e afeta cerca de 40% dos pacientes diabéticos. A compreensão das mudanças moleculares e ultra-estruturais da proteinúria foi muito notada nos últimos anos e vários mecanismos foram propostos para explicar o dano renal. O que tem visto em comum entre todos é que os níveis de excreção urinária de albumina estão relacionados com a perda da capacidade de filtração seletiva da membrana basal glomerular do sistema renal. Isto acarreta o desenvolvimento de três estágios conhecidos na nefropatia diabética: a normoalbuminúria, microalbuminúria ou nefropatia incipiente e a macroalbuminúria ou nefropatia clínica.Portanto os métodos para a dosagem da albumina urinária em pequenas quantidades, mas excessivas em pacientes com diabetes melito tornaram-se fundamentalmente importante para evitar o desenvolvimento de transtornos angiopáticos. Além do mais, o tipo da coleta de amostra a ser utilizado para o procedimento destas dosagens tem sido relatado como um fator relacionado ao custo, praticidade e variações de resultados. Os métodos atualmente utilizados para screening, diagnóstico e monitoramento da nefropatia diabética possuem poucos resultados falso-negativos, baixo custo, reprodutibilidade e, portanto, são considerados adequados, entre eles a imunoturbidimetria tem sido o método de escolha. / Diabetes mellitus is considered a chronic disease characterized by the hyperglycemia and for macro and microangiopathic complications. Among the microangiopathic complications, the diabetic nephropathy is acquiring more importance along the years for being considered a cause of renal insufficiency that can occur at any time and affects about 40% of the diabetic patients. The comprehension of the molecular and ultra-structural changes of the proteinúria was very noticed in the past years and many mechanisms were considered to explain the renal damage. What all have in common is that the levels of albumin in urinary excretion is related with the loss of ability of selective filtration by the membrane basal glomerular of the renal system. This brings the development of three known stages in the diabetic nephropathy: the normoalbuminuria, microalbuminuria or incipient nephropathy and the macroalbuminuria or clinical nephropathy. Therefore the methods for the measurement of small amounts of urinary albumin, but extreme in diabetic patients, became essencial to avoid the development of angiopathic disturb. Besides that, the kind of sample used for these measurements procedures have been related as being a factor to the cost, practicability and variations in the results. The methods currently used for screening, diagnosis and monitoring diabetic nefropathy posses few false-negative results, low cost, reproducibility and therefore, are considered proper, among them; the immunoturbidimetry has been the choice method.

Resumo não disponível

O diabetes mellitus (DM) é definido como um conjunto de doenças metabólicas caracterizadas por hiperglicemia e está associada a complicações, disfunções e insuficiência de múltiplos órgãos, especialmente, rins, coração, cérebro, vasos sanguíneos e olhos. A doença renal do diabetes (DRD) é uma das mais relevantes complicações. Nas últimas décadas, a nefropatia diabética se tornou a principal causa da fase final da doença renal no mundo ocidental. Para auxiliar no monitoramento e controle glicêmico dos pacientes com DM existem técnicas laboratoriais que medem as proteínas glicadas, entre elas a hemoglobina glicada (A1c). Um aumento do nível de A1c tem sido relatado em pacientes sem DM com insuficiência renal, independente da glicemia, e apesar do menor tempo de vida dos eritrócitos nestes pacientes. Várias hipóteses foram formuladas para explicar esse fato e de acordo com alguns investigadores, o aumento na A1c em pacientes sem DM com doença renal foi atribuído principalmente à carbamilação de hemoglobina. O estado urêmico pode afetar a acurácia da determinação de A1c, através da modificação da hemoglobina, formando um composto carbamilado que eleva os resultados de A1c nos métodos com base em separação iônica ou HPLC. No entanto existem controvérsias na literatura sobre o efeito da uremia nos níveis de A1c determinados pelos diferentes métodos disponíveis. Apesar disso, A1c é utilizada para o monitoramento da glicemia em pacientes com DRD. Contudo, há necessidade de uma definição se a uremia interfere ou não nos diferentes métodos para dosagem de A1c, visando garantir a qualidade final e interpretação correta dos resultados de A1c em pacientes uremicos, sendo eles diabéticos ou não diabéticos. Neste trabalho avaliamos quatro métodos diferentes de determinação de A1c: equipamento Variant II Turbo – HPLC por troca iônica, Tosoh A1c 2.2 – HPLC por troca iônica, Advia 1800 – Imunoturbidimetria e Capillarys 2 Flex Piercing - Eletroforese capilar. Nossos resultados mostraram que em amostras de pacientes sem DM não há interferência da uremia ou hemoglobina carbamilada, porem em amostras de pacientes com DM, a uremia interfere nos resultados de A1c principalmente em amostras com níveis de A1c mais elevados. Portanto a utilização do teste de A1c no monitoramento da glicose nos pacientes com DM e com uremia deve ser realizada com cautela, pois os métodos avaliados podem superestimar os valores de A1c nesses pacientes.

Orientador: Antonio Wilson Sallum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-20T20:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fleury_HeloisaMachado_M.pdf: 1871443 bytes, checksum: 98cec1752647231eb13fb24304ebf47f (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Foram utilizados 40 ratos Wistar albinos, adultos jovens, distribuídos em quatro grupos experimentais: GRUPO I não-diabéticos com irritante gengival; GRUPO 11 - diabéticos aloxânicos com irritante gengival; GRUPO III - não diabéticos com irritante gengival retirado no décimo dia; GRUPO IV - diabéticos com irritante gengival retirado no décimo dia. O diabetes foi induzido pela administração de aloxana monohidratada diluída em salina isotônica, em dose (lnica (150mg por kg de peso corporal), por via intraperitoneal. Colocou-se ao nível da região dento gengival dos primeiros molares inferiores esquerdos uma ligadura com fio de algodão para atuar como fator retentor de placa bacteriana induzindo a lesão periodontal inflamatória. Os animais sacrificados após 5, 10 e 20 dias e suas mandíbulas removidas, foram divididas na sinfisementoniana e fixadas em formol a 10% para posterior exame radiográfico. Os pnmeIros molares das hemi-mandíbulas direitas foram usados como controles contralaterais dos dentes que receberam o irritante gengiva!. Após a tomada radiográfica, procedeu-se a quantificação da perda óssea das amostras, e os percentuais de área radiolúcida em relação à área total interradicular foram tratados estatísticamente. Conforme observado pelo teste de Tukey, para todos os períodos experimentais 5, 10 e 20' dias, bem como para aquelas condições experimentais que envolviam a retirada do irritante gengival no décimo dia sendo os animais sacrificados no vigésimo dia, ocorreram perdas ósseas estatisticamente significantes maiores para os animais diabéticos em comparação aos não diabéticos. Quando se compararam às diferenças entre as médias amostrais dos animais não-diabéticos sacrificados no décimo dia e não-diabéticos sacrificados no vigésimo dia que foram submetidos à retirada do irritante no décimo dia, não ocorreu diferença estatísticamente significante. Determinaram-se retas de regressão entre a extensão da lesão periodontal e o tempo do experimento, separadamente para os diabéticos e não-diabéticos, e verificou-se que a velocidade da progressão da lesão foi maior para os ratos diabéticos. Essa diferença encontrada entre os coeficientes de regressão revelou-se também estatisticamente significante. Em relação ao molares contralaterais que não foram submetidos à colocação do irritante, observou-se, pelo teste de Tukey, um aumento significante na. espessura do espaço do ligamento periodontal para os grupos diabéticos e não-diabéticos sacrificados no vigésimo dia, em comparação ao diabéticos e não-diabéticos sacrificados no quinto dia do experimento. Os resultados sugerem que o diabetes, por si só, não provoca a doença periodontal associada à placa bacteriana no período experimental estudado. Porém, os animais diabéticos são mais susceptíveis à ação do irritante periodontal, quando comparados ao não-diabéticos, fato este indicativo de que a condição diabética atua como agente modificador do curso da lesão periodontal, desenvolvendo-se esta de forma mais acelerada que as lesões periodontais em evolução nos ratos não-diabéticos / Abstract: Forty young adult Wistar albino rats were used in four experimental groups. GROUP I - non-diabetlcs with gingival irritating agent; GROUP II - alloxan diabetics with gingival irritating agent; GROUP III - non-diabetic with gingival irritating agent having been removed on the 10th day; GROUP IV - diabetics with gingival irritating agent having been removed on the 10th day. Diabetes was induced by the administration of "monohidrated alloxan" diluted in isotonic saline, in a single dose (I50mg/kg of body weight), through intraperitoneal injection. A ligadure of cotton thread tie was placed around the dento-gingival region of the first bottom left molars in order to act as a bacterial plaque retentor, therefore inducing a periodontal condition. The animaIs were sacrificed after 5, 10 and 20 days and their mandibles removed. These were divided at the mentonian sinfisis and kept in formalin 10% for posterior radiographic examination. The first molars on the right hemi-mandibles were used as contra lateral controls to the teeth that received the gingival irritating agent. After radiographic examinations, bone loss of the samples was quantified and the percentage of the radiolucid areas in relation to the interradicular total area were examined statisticalIy. As can be observed through Tukey test, for alI experimental periods of 5, 10 and 20 days (as welI as for those experimental conditions which involved the removal of the gingival irritating agent on the 10th day, having the animaIs sacrificed on the 20th day) statisticalIy significant higher bone losses occurred in diabetic animaIs as compared to non-diabetics. When we compare the differences between the samples average of non-diabetic animaIs sacrificed on the 10th day and non-diabetic animaIs sacrificed on the 20th day whose irritating agent had been removed on the 10th day, there has been no statisticalIy significant difference. Regression lines between the extension of periodontal lesion and the duration of the experiment were determined separately both for diabetics and non-diabetics and it was noted that the lesion's progression rate was higher for diabetic rats. The difference found between the regression coefficients has also been shown statisticalIy significant. As regards to contra lateral molars which haven't been submitted to the irritating agent, it was observed through Tukey test a significant increase in the thickness of the periodontal attachment space for the diabetics group and for the non-diabetics sacrificed on the 20th day as compared to diabetics and non-diabetics sacrificed on the 5th day of the experiment. Results suggest that diabetes alone does not provoke periodontal condition associated with bacterial plaque during the experimental period studied. Nevertheless, diabetic animaIs are more susceptible to the periodontal irritating agent when compared to non-diabetics, which fact indicates that the diabetic condition acts as a modifying agent of the course of the periodontal lesion, the latter developing in a more accelerated way than the periodontal conditions in evolution in non-diabetic rats / Mestrado / Fisiologia e Biofisica do Sistema Estomatognatico / Mestre em Odontologia

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T02:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_OlgaMariaFernandesde_D.pdf: 5088489 bytes, checksum: c39b531b63bc9ea9453d24625b77b369 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A insulina, ao se ligar à subunidade a. de seu receptor heterotetramérico, dá inicio à uma série de ações imediatas e tardias, metabólicas e promotoras de crescimento. Tais eventos ocorrem através da estimulação da subunidade J3 transmembrana do receptor, que se autofosforila e ativa a fosforilação de substratos endógenos intracelulares, dos quais o mais estudado é o IRS-1. Esta proteína de peso molecular 185 kDa pode ser bem caracterizada como um substrato direto do receptor de insulina e quando fosforilada se associa à enzima fosfatidilinositol 3-quinase, ativando-a. Utilizando-se técnicas de immunoblotting com anticorpos anti-receptor de insulina, anti-IRS-1, antifosfotirosina e anti-PI 3-quinase é possível analisar o grau de fosforilação do receptor de insulina, da pp 185, do IRS-l, a concentração destas proteínas e a associação do IRS-1 com a PI 3-quinase, ou seja, as ações iniciais da insulina. Neste estudo investigamos estas três etapas da atividade insulínica no tecido adiposo em quatro modelos animais de resistência à insulina: o jejum prolongado, o envelhecimento, o uso agudo de adrenalina e o uso crônico de dexametasona. Foram utilizadas as técnicas de immunoblotting de extratos totais e de imunoprecipitação com anticorpos específicos. Os resultados demonstram que em todas as situações estudadas foram observadas reduções no grau de fosforilação do receptor de insulina, da pp185, do IRS-1 e na associação IRS-1/PI 3-K. É interessante ressaltar que nos animais idosos, além da redução no grau de fosforilação destas proteínas, houve uma diminuição marcante nos níveis protéicos do receptor de insulina e do IRS-1. Com exceção do jejum prolongado, os resultados obtidos são sinú1ares aos encontrados em tecidos hepático, muscular e renal. Tais achados sugerem que a regulação das ações insulínicas seja específica não somente em cada situação avaliada mas também em cada tecido. Outro dado importante deste estudo foi o encontro de uma proteína de peso molecular de 60 kDa, que se encontra fosforilada após o estímulo com insulina, de maneira semelhante ao receptor e à pp185 e que até o momento só tem sido evidenciada no tecido adiposo / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of it' s receptor resulting in the phosphorylation of it' s cytosolic substrate, insulin receptor substrate 1 (IRS-l), which in tum associates with and activates PI 3-kinase. Using antipeptide antibodies to insulin receptor, to pp 185, to IRS-l, to PI 3-kinase and antiphosphotyrosine antibodies it is possible to study insulin-stimulated receptor autophosphorylation, pp 185 or IRS-l phosphorylation and the associationlactivation IRS-l/PI 3-kinase. It's also possible to quantify the leveI ofinsulin receptor and IRS-l. In the present study we have exa.min,ed this three early steps of insulin action in adipose tissue in four animal models of insulin resistance: 72 hours fasting (hipoinsWinemia), aging and effect of chronic treatment with dexametasone (hiperinsulinemia) and the effect of acute epinephrine treatment (normoinsulinemia). We use immunoblotting technics of total extracts and immunoprecipitates with specific antibodies. Fasting showed a deqrease in insulin receptor, IRS-l, pp 185 and pp 60 phosphorylation to 64 +/- 8% (p<0,05), 45 +/- 90,/0 (p<0,001), 40+/- 6% (p<0,001) and 17+/- 8% (p< 0,05), respectively. The IRS-l/ PI 3-K association was also decreased to 61'+/-13% (p<0,05). In old rats (20 months) we observed a decrease in IR and IRS-l protein levels to 8 +/- 3% (p<0,05) and 11 +/- 4% (p<0,05). There was a simultaneous decrease in IR, pp 185, IRS-l and pp 60 phosphorylation, after insulin stimulation, to 73 +/- 6% (p<0,05), 38+/-5% ~p<O,OOI), 20% and 64 +/- 10% (p<0,05), respectively. In the group of rats treated acutely with epinephrine our results demontrated also a decrease in the early events ef insulin action, mostly in protein phosphorylation , showing reductions to 60 :t 9% (p<0,05) in IR autophosphorylation, to 38 :t 9% (p<0,05) in pp 185 phosphorylation, to 50% in pp 60 phosphorylation and to 37 :t 3% (p<0,05) in IRS-l phosphorylation. IRS-l/PI 3-K interaction was reduced to 55% in this group. Finnaly, chronic (6 days) dexametasone treatment promoted a decrease in IR, pp 185, pp 60 and IRS-l phosphorylation levels to 61 :t 10% (p<0,001), 51 :t 8% (p<0,05), 50 :t 6% (p<0,05). These findings differs from other studies in hepatic, renal and muscular tissues, where in fasting there is an increase in this phase of insulin action, suggesting that the regulation of this early steps should be specific for each situation and tissue. Another important finding of this work is the evidence of a 60 kDa protein, phosphorylated after insulin stimulation, in a similar way to the receptor and it' s substrate. This protein is observed only in adipose tissue until the moment, was recently cloned and is now called IRS-3 / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Medicina

Orientador: Maria Alice Rostom de Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T05:56:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prada_FranciscoJoseAndriotti_M.pdf: 5275405 bytes, checksum: 6f7afeaab8f89a3df921843a387031ab (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A desnutrição infantil pode predispor ao diabetes em adultos, pois afeta a secreção de insulina e o metabolismo de carboidratos. Por outro lado estudos com ratos mostram que a desnutrição protéica pode atenuar a manifestação do diabetes aloxânico. O presente estudo tem como objetivo ampliar o conhecimento sobre os efeitos da ingestão crônica precoce da dieta hipoprotéica sobre a ação diabetogênica da aloxana, em modelo experimental. Foram utilizados ratos Wistar (21 dias), separados em 2 grupos, de acordo com a dieta recebida: controle (C)- dieta normo (17%) e desnutridos (D)- dieta hipo (6%) protéica, por 60 dias. Ao final, parte dos animais recebeu injeção de aloxana (40mg/kg,i.v.) para indução do diabetes. Foram avaliados in vivo: ganho de peso corporal, glicemia basal, insulinemia basal, ingestão hídrica, ingestão alimentar, incidência de diabetes (glicemia > 13,75 mM), área sob a curva de glicose (AG) e insulina (AI), taxa de remoção da glicose (KITT), insulina do soro e do pâncreas. Em ilhotas isoladas tratadas in vitro com aloxana verificamos: secreção de insulina estimulada por glicose e por arginina e oxidação de glicose. O ganho de peso foi maior nos animais O (1,49 :!: 0,42) do que nos C (-0,57 :t 0,72 g). A glicemia basal foi menor nos D (106,6 :!: 5,86) que nos C (351,6 :!: 49,7 mg/dl) e a insulinemia semelhante nos 2 grupos (C= 0,80 :!: 0,10; 0= 1,05 :!: 0,12 ng/ml). A ingestão hídrica foi maior no grupo C (116,6 :!: 44,7) do que no O (81,9 :!: 14,7 ml/kg), assim como a ingestão alimentar neste grupo (C= 95,4 :!: 44,1; 0= 47,2 :!: 16,9 g/kg). A incidência de diabetes foi maior no C(84,6%) do que no 0(25%). A insulina do pâncreas foi maior no grupo O (36,52 :!: 11,88) do que no grupo C (12,05 :!: 4,65 ng/mL). A AG após administração de aloxana foi maior no grupo C(41889,9 :!: 9264) do que no grupo 0(17858,2 :!: 2974,5 mmol/U120 min.), não havendo diferença significativa entre os AI de ambos os grupos (C = 83,3:!: 13,6 e D = 78,4:!: 19,1 mmol/U120 min.). O tratamento com aloxana in vitro reduziu: (1) a liberação de insulina pelas ilhotas C (78%) e O (47%), estimuladas por glicose 22.0 mM; (2) a oxidação de glicose pelas ilhotas C (53%) e D (33%) na presença de glicose 16.7 mM e (3) a liberação de insulina pelas ilhotas C (53%) e D (33%) estimuladas por arginina (20.0 mM).Este resultados sugerem que a restrição protéica precoce atenuou a severidade do diabetes manifestado pelos animais em conseqüência de adaptações tanto no processo secretório de insulina pelas ilhotas pancreáticas quanto na ação periférica do hormônio / Abstract: In the present study we examined the effect of protein dietary levei on pancreatic function evaluated by measurements, of serum glucose levels in the fed state, serum glucose and insulin levels during an oral glucose tolerance test, and serum glucose levels during a subcutaneous insulin tolerance test performed after administration of a single endovenous, dose or alloxan to rats fed a low (6%) or a normo (17%) protein. In a separate set of experiments, we examined insulin release in response to glucose and arginine and glucose oxidation rates in pancreatic islets treated "in vitro" with alloxan, isolated from rats fed the low and the normo protein diets. After alloxan administration the incidence of mild hyperglycemia in the fed state (diabetes) was higher among rats fed normo protein diet than among those fed low protein diet. After glucose load the area under serum glucose cUlve (AG) was lower in low protein rats than in normal proteins rats, while then were no differences between the two groups in the area under serum insulin curve (AI). In addition, after an insulin load, the serum glucose disappearance rate (KITT) was higher in lower protein than in normal protein rats. Alloxan induced significant decrease in glucose oxidation and in glucose induced and arginine induced insulin release by islets isolated from normal and low protein rats. The decrease in both insulin release and glucose oxidation was greater in normo than in low protein rat islets. In summary, alloxan was less effective in producing hyperglycemia (diabetes) in rats fed low protein diet than normo protein diet. This protection was associated to an increased peripheral sensibility to insulin action and a better préservation of glucose oxidation and glucose induced insulin release by pancreatic islets exposed to alloxan in protein restricted than in normal protein rats / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T12:53:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilella_ConceicaoAparecida_M.pdf: 6029111 bytes, checksum: fbb25fa141e862ecffbfee0f99810d92 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O diabetes mellitus tipo 1 auto-imune (DM-l) é uma doença resultante da disfunção e destruição das células _ pancreáticas. Este processo, conhecido como insulite, é dependente da presença de infiltrados mononucleares nas ilhotas de Langerhans. O camundongo NOD (non obese diabetic) é modelo experimental do Diabetes Mellitus auto-imune espontâneo, que se desenvolve entre o 4° e o 6° mês de vida, semelhante à doença no humano. O propósito do presente estudo foi a verificação dos efeitos do tratamento com gangliosídeos na incidência do Diabetes Mellitus espontâneo e acelerado pela Ciclofosfamida (CI-DM). no camundongo NOD. Os animais foram tratados diariamente com a mistura de gangliosídeos GMl(21 %),GDla (40%), GDlb(16%),GTlb(19%) (150 mg/kg) entre 43, 173 ou 253 semanas de vida e o desenvolvimento do DM foi monitorizado através de glicosúria e glicemia. Após o sacrifício foram realizadas análises morfológicas, incluindo quantificação e qualificação dos graus de insulite. Os resultados mostram que a prevalência do DM foi menor nos animais tratados com gangliosídeos, mesmo naqueles submetidos à Ciclofosfamida (CI-DM). Estes achados estão compatíveis com a análise morfológica que demonstrou menor grau de insulite nos animais tratados, tanto no modelo espontâneo como no modelo CI-DM, estes resultados podem ser observados ainda 8 semanas após a interrupção do tratamento. Reforçando a hipótese da ação imunomodulatória dos gangliosídeos, provavelmente relacionada à inibição da proliferação de linfócitos T ou sinalização celular. Em conclusão, o tratamento do camundongo NOD com gangliosídeos pode diminuir o grau de insulite e a incidência do DM neste modelo experimental. Contudo, novos estudos, direcionados para análise dos mecanismos moleculares envolvidos neste processo são necessários para elucidação dos mecanismos específicos da ação imunomodulatória dos gangliosídeos / Abstract: Diabetes mellitus type l(DM-l) is an autoimmune disease that results ITom destruction and dysfunction of pancreatic _-cells. This process, known as insulitis, is dependent on the presence of a mononuc1ear cells infiltrate in islets of Langerhans. Non obese diabetic (NOD) mouse is an experimental model of DM-l that develops spontaneous diabetes between the 4th and 6th month of life, similar to human disease. The aim of the present study was to verify the effects of the treatment with gangliosides on the incidence of spontaneous and cyc1ophosphamide accelerated diabetes model (CY-DM) in NOD mice. The animaIs were treated daily with a mixture of gangliosides GMl(21 %),GDla (40%), GDlb(16%),GTlb(19%) (150 mg/kg) between 4th and 17th or 24th week oflife and monitorized for the development of DM-l with urinary and blood glucose concentration. After sacrifice, morphologic analysis, inc1uding quantification and c1assification of insulitis degree was performed. The results show that the prevalence of diabetes was lower in gangliosides treated animaIs, even in those submitted to cyc1ophosphamide (CY-DM-l). These findings are in accordance with morphologic analysis that demonstrates that treated animaIs present lower degrees ofinsulitis in both spontaneous and CY-DM-l, results that could be also observed 8 weeks after the interruption of treatment. These findings reinforce the hypothesis of the immunomodulatory action of gangliosides, probably related to the inhibition of T cells proliferation or cellular signaling. In conc1usion, treatment of NOD mice with gangliosides could decrease insulitis degree and the prevalence of DM in this experimental model. However, new studies, directed to analyze the molecular mechanisms involved in these processes are needed in order to elucidate the specific mechanisms of immunomodulatory action of gangliosides / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores : Armando Mancio de Camargo, Valeria Helena Alves Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:01:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CesarAlexandreFabrega_M.pdf: 15132474 bytes, checksum: 0c9ce12d3fcf1a6581ab9a08a274b324 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DanielleVenturade_M.pdf: 26410248 bytes, checksum: 3438fd3666c623d712c3840ceb6c21e5 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: o diabetes mellitus do tipo I resulta da destruição autoimune das células ~ da ilhota pancreática. O camundongo NOD desenvolve o diabetes tipo I espontaneamente sendo utilizado como modelo para a expressão auto-imune dessa doença em humanos. O processo inflamatório das ilhotas pancreáticas (insulite), que precede a destruição das células ~, tem início por volta da 4a semana de vida tanto em machos quanto em fêmeas. Nestes animais a incidência do diabetes é predominante em fêmeas (com início ao redor da lSa semana) variando entre 60-90% e 10-20% em machos até 30 semanas de vida. A infiltração das ilhotas pancreáticas por células do sistema imune, seguida pela perda das célul~s ~produtoras de insulina é o aspecto histológico característico do diabetes tipo 1. Este pode envolver o contato entre células efetoras (linfócitos T CD4+ e CD8+) e célulasalvo (ilhota) resultando na liberação de mediadores solúveis. Citocinas produzidas pelas células ativadas no infiltrado inflamatório são os prováveis agentes da perda de função e destruição das células da ilhota e do diabetes. Linfócitos Thl produzem citocinas próinflamatórias como IL-2, IFN-y TNF-a contribuindo para patogênese do diabetes tipo I. Além disso, a apoptose das células ~tem sido associada com a manifestação do diabetes tanto em modelos experimentais como em humanos. Vários estudos implicam Fas, Fas-L, perforinas e TNF-a como efetores da morte por apoptose das ilhotas. No presente trabalho analisamos a expressão gênica de citocinas e componentes apoptóticos em ilhotasisoladas,pâncreas, sangueperiféricoe baço de camundongosNODnão diabéticos com idades entre 2-28 semanas de vida e diabéticos. Camundongos da linhagem CBA/j foram usados como controle. A detecção de apoptose in situ foi realizada pelas técnicas de Feu1gene TUNEL, morfometria para análise dos graus de insulite e imunoistoquímica para identificação do infiltrado inflamatório. Os resultados confirmam a presença de citocinas pró-inflamatórias em ilhotas isoladas por todo período de vida do animal. Estes dados foram correlacionados com a presença de apoptose (detectada pelas técnicas de Feulgen e TUNEL), análise da extensão da insulite e fenotipagem do infiltrado com o avanço do processo inflamatório e envelhecimento do animal. Além disso, o aumento da expressão de Fas, Fas-L e Bc1-wnos animais com intenso processo inflamatório sugere a apoptose como ocorrência de mecanismos efetores que, associada à expressão de citocinas pró-inflamatórias, correlacionam-se com o avanço dos estágios do processo inflamatório na ilhota pancreática no camundongoNOD / Abstract: Type 1 diabetes results from specific autoimmune destruction of beta cells in pancreatic islets. Non obese diabetic (NOD) mice develop type 1 diabetes spontaneously and is used as animal model for human insulin dependent diabetes mellitus. Inflammation of pancreatic islet (insulitis) that precedes beta cell destruction begins at about 4 weeks of age in both female and male NOD mice. However, there is a remarkable gender disparity in the cumulative incidence ofdiabetes: 60-90% offemales and only 10-20% ofmales by 30 weeks of age. Diabetes-prone female NOD mice develop diabetes from as early 15 weeks of age. Infiltration of pancreatic islet by immune/inflammatory cells (insulitis), followed by loss of the insulin producing beta cells is the histological feature of type 1 diabetes. This may involve direct contacts between infiltrating monocytic/lymphocytic cells (effectors), inc1udingCD4+ and CD8+ T cells and islet beta cells (targets) and/or may result from the release of soluble mediators from effector cells. Cytokines produced by infiltrating activated cells are candidate mediators of impaired function and destruction of islet beta cells. Thl cells produce interleukin 2 (IL-2), interferon y (IFN-y) and tumor necrosis factor a (TNF-a) contributing to the pathogenesis of type 1 diabetes. Moreover, p-cell apoptosis has been associated with diabetes onset in both animaIs models and recently diagnosed diabetic patients. Several apoptotic pathways have been implicated in islet destruction, inc1uding Fas, perforins, and TNF-a. Many studies have altematively considered Fas-ligand (Fas-L), perforins, or TNF- a as effectors of apoptotic islet cell death. Therefore, we anaIyzed by reverse transcriptase reaction (RT-PCR) whether the gene expression of these cytokines and apoptotic components is detectable in pancreatic islets of NOD mice aging 2 to 28 weeks (prediabetic), using isolated islet of CBA/j as a non related animal controI. Our results confirm the presence of TNF-a and IFN-y message in NOD islets at the very early stage of inflammation correIating the enhancement of their expression with destructive insulitis. Furthermore, Fas, Fas-L and Bc1-wgenes in islets ofNOD mice were detectable at 2 weeks of age and enhance oftheir gene expression was associated with increase of islet infiItrating cells. On the other hand, these apoptotic components were expressed at low levels in islet of CBA/j. These results suggest that expression of mRNA for Fas, Fas-L and Bc1-wcorrelates with the stages of the islet inflammation in NOD mice / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica