MSc (Microbiology) / Department of Microbiology / See the attached abstract below

Doctor of Philosophy / Department of Diagnostic Medicine/Pathobiology / Daniel U. Thomson / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) has emerged as one of the most important infectious diseases in cattle. One particular important manifestation, after successfully establishing an in utero infection of the fetus during the first trimester, is the development of a persistently-infected BVDV (PI-BVDV) calf. Persistently infected BVDV animals are a continuous source of virus and can shed the virus in virtually all secretions and excretions, including nasal discharges, saliva, semen, urine, tears, milk, and, to a lesser extent, feces. The objectives of this research were to determine: 1) the effects of short term exposure (13 – 18 days on feed (DOF)) to PI-BVDV feeder cattle; 2) the outcome of testing and removing PI-BVDV feeder calves at time of feedlot arrival on health, performance, and carcass characteristics; 3) the survival of BVDV on materials associated with livestock production; and 4) characterization of testing and longitudinal prevalences for PI-BVDV beef cattle. Testing and removing PI-BVDV calves at 13 to 18 DOF was too late to remove a morbidity effect due to PI-BVDV exposure. However, mortality, performance, and carcass characteristics were not different in cattle exposed to PI-BVDV cattle. Additionally, there were no harmful outcomes when newly arrived feeder cattle were exposed to a PI-BVDV animal for one to two days following feedlot entry. A non-cytopathic, Type 1b, BVDV was capable of surviving after application to various materials used in livestock production. BVDV tended to survive longer on non-porous materials than porous materials. When in the presence of mucus, BVDV was protected from degradation for longer periods of time than when not in the presence of mucus. There was no difference in overall PI-BVDV prevalence within cattle sampled in 2006 and 2007. Cattle that weighed less than 300 lbs. had a greater likelihood of being PI-positive than cattle with increased weights. Several months of the year had a greater likelihood of having PI-positive animals. Based on operation, cow-calf and stocker operations had a greater likelihood of having PI-positive animals than did feedlot operations.

Objective To describe the use of Lactobacillus by hospitalized patients and to examine its relationship with various Clostridium difficile infection (CDI) related outcomes. Methods The characteristics of Lactobacillus users and non-users and the initiation of Lactobacillus with respect to initiation of antibiotic therapy and CDI treatment were described using national hospital discharge database. The relationships between Lactobacillus use and post-CDI length of stay, mortality, switch of CDI therapy, and readmission were analyzed. Results Lactobacillus users and non-users were different in most characteristics. Metronidazole and fluoroquinolones were the most frequently used antibiotics by Lactobacillus users. They were mainly CDI cases, used multiple antibiotics, extremely ill, and started Lactobacillus five or more days after initiation of antibiotics or CDI treatment. Lactobacillus use was associated with increased length of stay and switching of CDI therapy. Conclusions The true association between Lactobacillus use and CDI remains unclear. This study provides foundation for future research.

O baixo crescimento após o desmame ainda é um grande desafio na suinocultura. A queda no consumo de ração e o aparecimento de diarreias nos leitões desmamados são uma constante no manejo suinícola e estão diretamente relacionados com desempenho dos animais nesta fase. Estratégias como a utilização do cobre em níveis acima das exigências nutricionais dos leitões já são amplamente utilizadas nas dietas a fim de controlar a diarreia e melhorar o desempenho dos animais nessa fase. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes fontes de cobre (sulfato e cloreto de cobre tri-básico) e níveis deste mineral (125 e 200 mg/kg) no controle de diarreia, seus efeitos como melhorador desempenho e na morfologia intestinal de leitões no período de creche. Para a realização do experimento foram utilizados 96 leitões de linhagem comercial, desmamados com idade média de 21 dias e peso médio de 6,14 ± 0,269 kg. Os leitões foram divididos em 24 baias, sendo que cada unidade experimental foi composta por 4 animais, o delineamento experimental foi o de blocos casualizados em esquema fatorial 2x2, os dados foram submetidos à análise de variância através do teste F a 5% de significância. Foram investigados o desempenho dos animais, a incidência de diarreia, e a morfometria intestinal. Pode-se concluir que o cloreto de cobre é uma fonte efetiva de cobre quando incluída na dieta de leitões desmamados a níveis farmacológicos, sendo tão eficaz quanto o sulfato de cobre como promotor de crescimento e no controle da diarreia. Além disso, pode-se inferir que a utilização do cloreto de cobre tem como vantagem uma maior concentração deste micro mineral. / Low growth after weaning still a big challenge in the swine production. The low feed intake and diarrhea in weaned pigs are a constant in swine management and are directly related to the performance of the animals at this stage. Strategies such as the use of copper at levels above the nutritional requirements of the piglets are already widely used in the diets to control diarrhea and improve animal performance. In this context, the aim of this study was to evaluate different sources of copper (copper sulfate and tri-basic copper chloride) and levels of this mineral (125 and 200 mg/kg) in the diarrhea control, their effects as growth promotor and the intestinal morphology of nursery piglets. For the trial, 96 commercial line piglets were used, they were weaned at 21 days of age in average with mean body weight of 6,14 ± 0,269 kg. The piglets were divided in 24 pens and each experimental unit was composed of 4 animals, the experimental design was a randomized complete block in factorial scheme 2x2, the data were submitted to analysis of variance through the F test at 5% of significance. The performance of the animals, incidence of diarrhea and intestinal morphometry were investigated. It was concluded that copper chloride is an effective source of copper when it is included in the diet of weaned pigs at pharmacological levels, this source seems to be nearly as efficacious as copper sulfate as growth promotor and in the diarrhea control. In addition, it can be inferred that the use of copper chloride has the advantage of a higher copper concentrarion is indicated since it brings a higher concentration of this trace mineral.

INTRODUÇÃO: A doença diarreica aguda é a segunda causa de morte em crianças abaixo de 5 anos de idade. No Brasil, entre 2003 e 2009, a diarreia aguda foi responsável por cerca de 100.000 internações por ano, e por 4% das mortes em crianças abaixo de 5 anos de idade. O rotavírus é a principal etiologia de diarreia aguda grave no mundo todo, sendo responsável por 40% das internações por diarreia aguda, e 29% de todas as mortes por diarreia aguda. A vacina monovalente (RV1) contra o rotavírus foi introduzida no Programa Nacional de Imunizações em 2006. OBJETIVOS: Verificar o impacto da vacina monovalente contra rotavírus nas consultas de pronto-socorro e internações por doença diarreica aguda em crianças menores de 5 anos de idade, verificar a positividade do exame \"pesquisa de rotavírus nas fezes\", e verificar a presença ao ausência de imunidade de rebanho. METODOLOGIA: Foi realizado um estudo ecológico retrospectivo no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo. O período foi dividido em pré-vacina (2003 a 2005) e pós-vacina (2007 a 2009). Foram incluídas todas as crianças abaixo de 5 anos que passaram em consulta no pronto-socorro e verificado o diagnóstico do atendimento e internação através de registro eletrônico. Foram obtidas as taxas de consultas no pronto-socorro e internações por doença diarreica aguda, foram selecionadas as crianças não vacinadas para cálculo da imunidade de rebanho, e verificado se houve coleta do exame pesquisa de rotavírus nas fezes. A redução nas taxas foi obtida através da fórmula: redução (%) = (1 - odds ratio) x 100. RESULTADOS: No período pré-vacina a taxa de consultas por diarreia aguda foi de 85,8 consultas por 1.000 consultas gerais, no período pós vacina a taxa de consultas por diarreia aguda foi 80,9 por 1.000, e a redução foi 6% (IC 95%, 4% a 9%, p < 0,001), chegando a 40% (IC 95%, 36% a 44%, p<0,001) nos meses de maio e junho. A taxa de internação por diarreia aguda era 40,8 internações por 1.000 e caiu para 24,9 por 1.000, redução de 40% (IC 95%, 22% a 54%, p < 0,001), chegando a 82% (IC 95%, 62% a 92%, p < 0,001) nos meses de maio e junho. Nas crianças não vacinadas não houve redução na taxa de consultas de pronto-socorro (IC 95%, -4% a 5%, p=0,903), e não se pode afirmar se houve redução ou aumento das internações por diarreia aguda (IC 95%, -212% a 35%, p=0,381). Houve queda da positividade do exame pesquisa de rotavírus em 2009 (redução de 70%, IC 95%, 26% a 88%, p=0,007). CONCLUSÕES: Após a introdução da vacina contra rotavírus (RV1) houve uma redução de 6% nas consultas por diarreia aguda no pronto-socorro, de 40% nas internações por diarreia aguda e de 70% na positividade do exame pesquisa de rotavírus nas fezes. Não foi detectada imunidade de rebanho / INTRODUCTION: Acute diarrheal disease is the second cause of death in children under five years. In Brazil, from 2003 to 2009, acute diarrhea was responsible for nearly 100,000 deaths per year and 4% of the deaths in children under five years. Rotavirus is the leading cause of severe acute diarrhea worldwide, accounting for 40% of hospital admissions and 29% of all the acute diarrhea-related deaths. In 2006, the rotavirus monovalent vaccine (RV1) was added to the Brazilian National Immunization Program. OBJECTIVES: To analyze the impact of the RV1 on Emergency Department (ED) visits and hospital admissions for acute diarrhea, the rates of positivity of the stool rotavirus tests and the presence or absence of herd immunity. METHODS: A retrospective ecologic study at the University Hospital, University of Sao Paulo. The study analyzed two periods: the pre-vaccine (2003-2005) and the post-vaccine (2007-2009) periods. We screened the main diagnosis of all ED attendances and hospital admissions of children under five years in an electronic registry system database and calculated the rates of ED visits, hospital admissions and positivity of the stool rotavirus test in patients with acute diarrhea. Herd immunization was evaluated in non-vaccinated children. The reduction rate was analyzed according to the formula: reduction (%) = (1- odds ratio) x 100. RESULTS: The rates of ED visits for acute diarrhea was 85.8 and and 80.9 per 1,000 total ED visits in the pre and post vaccination periods, respectively, resulting in 6% reduction (95% CI, 4% to 9%, p< 0.001) in the overall period and reaching 40% reduction on May and June. The rates of hospital admissions for acute diarrhea was 40.8 per 1,000 in the pre-vaccine period and dropped to 24.9 per 1,000 hospitalizations, resulting in 40% reduction (95% CI, 22% to 54%, p < 0.001) in the overall period and 82% (95% CI, 62% to 92%, p < 0.001) on May and June. Among non-vaccinated children, no reduction on ED visits was observed (95% CI, -4% to 5%, p=0.903), while an increase or reduction in the hospitalization rates could not be determined (95% CI, -212% to 35%, p=0.381). There was a decrease in the positivity of the stool rotavirus tests in 2009 (70% reduction, 95% CI, 26% to 88%, p=0.007). CONCLUSIONS: The introduction of the RV1 vaccine resulted in 6% reduction in the ED visits and 40% reduction in hospital admissions for acute diarrhea, and 70% reduction in the rates of positive stool rotavirus tests. No herd immunity was observed

Inicialmente o presente estudo objetivou avaliar os efeitos de diferentes fontes de cobre e zinco na dieta de leitões desmamados. Porém, houve a necessidade de utilizar as mesmas fontes e alterar apenas os níveis de inclusão desses minerais, o que justifica o título (que não pôde ser substituído posteriormente). Os leitões recém-desmamados apresentam reduzida digestibilidade de nutrientes pela falta de maturidade do sistema digestório frente à dieta sólida, levando à redução na absorção dos mesmos, e consequentemente diarreia e queda no desempenho. Uma das alternativas utilizadas após o desmame, principalmente com a proibição do uso de antibióticos como promotores de crescimento, tem sido os microminerais, principalmente o zinco (Zn) e o cobre (Cu). Dentre as fontes, o óxido de zinco (ZnO) e o sulfato de cobre (CuSO4) são as comumente utilizadas em níveis farmacológicos, 3000 mg/kg e 250 mg/kg, respectivamente devido ao baixo custo e por melhorar o desempenho, a consistência fecal e a manutenção da integridade intestinal. É possível que leitões suplementados com a associação de CuSO4 e níveis reduzidos de ZnO na dieta apresentem desempenho, frequência de dias com diarreia e morfometria intestinal semelhantes aos leitões suplementados com maiores níveis, e que não ocorra interferência na absorção hepática de Cu e na concentração de Zn na tíbia. Assim, o presente estudo avaliou a associação entre o CuSO4 e o ZnO, em níveis reduzidos, sobre o desempenho, a morfometria intestinal, a frequência de dias com diarreia e a concentração desses minerais no fígado e na tíbia de leitões na fase de creche. Utilizaram-se 80 leitões desmamados aos 21 dias de idade distribuídos em 2 tratamentos, de acordo com as fases: Pré-inicial (21 aos 35 dias): T1, 3000 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; Inicial 1 (35 aos 49 dias): T1, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, CuSO4; e na Inicial 2 (49 aos 63 dias): T1 e T2, 100 mg/kg ZnO + CuSO4, sendo a inclusão de 180 mg/kg CuSO4 em todas as fases. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, sendo a sala e o peso considerados como bloco. A frequência de dias com diarreia foi transformada pela função arco-seno e as características foram submetidas à análise de variância, empregando-se o software SAS (v. 9.3), o nível de significância considerado foi de 5%. Os leitões que receberam menor nível de ZnO apresentaram maior frequência de diarreia dos 35 aos 49 dias de idade (P < 0,05), contudo o desempenho, a morfometria intestinal e a concentração de cobre no fígado foram semelhantes entre os tratamentos. Infere-se que esse resultado foi obtido pela atuação do Zn, Cu e aos cuidados paliativos como o fornecimento de soro via oral e antibioticoterapia terapêutica nos animais com fezes líquidas. Conclui-se que os leitões que receberam reduzida inclusão ZnO, níveis inferiores a 3000 mg/kg, associado a 180 mg/kg de CuSO4 apresentaram maior frequência de dias com diarreia dos 35 aos 49 dias, sem prejuízos no desempenho e na morfometria intestinal, sendo possível a redução de custos e na poluição ambiental. / Initially the present study aimed to evaluate the effects of different sources of copper and zinc in the diet of weaned piglets. However, it was necessary to use the same sources and only change the inclusion levels of these minerals, which justifies the title (which couldnt be replaced later). Newly weaned piglets show reduced nutrients digestibility, due to the lack of maturity of the digestive system to the solid diet, leading to a reduction in nutrient absorption and consequently, diarrhea and performance reduction. One of the alternatives used after weaning, especially with the reduction of the use of antibiotics as growth promoters, is the use of microminerals, mainly zinc (Zn) and copper (Cu). Among the sources, zinc oxide (ZnO) and copper sulfate (CuSO4) are commonly used at pharmacological levels, 3000 mg/kg and 250 mg/kg, respectively, due to low cost and to improve performance, fecal consistency and maintenance of intestinal integrity. It is possible that piglets supplemented with the association of CuSO4 and ZnO at reduced levels in the diet show performance, diarrhea frequency and intestinal morphology similar to piglets supplemented with higher levels and that there is no interference on Cu hepatic absorption and Zn concentration in tibia. Thus, the present study evaluated the association between CuSO4 and ZnO at reduced levels on performance, intestinal morphology, frequency of days with diarrhea and concentration on the liver and tibia in piglets during the nursery phase. A total of 80 piglets were weaned at 21 days of age divided into 2 treatments according to the following phases: Pre-starter (21 to 35 days): T1, 3000 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; Starter 1 (35 to 49 days): T1, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, CuSO4; and in the Starter 2 (49 to 63 days): T1 and T2, 100 mg/kg ZnO + CuSO4, with inclusion of 180 mg/kg of CuSO4 in all phases. The experimental design was in randomized blocks, with room and weight considered as blocks. The diarrhea frequency was transformed by the sine function and the characteristics were submitted to analysis of variance using SAS software (v. 9.3). The level of significance was 5%. Piglets receiving lower levels of ZnO had greater diarrhea frequency from 35 to 49 days of age (P < 0.05), however performance, intestinal morphology and Cu concentration in the liver were similar between treatments. Infers that this result was obtained by Zn, Cu and palliative care, such as oral serum supply and therapeutic antibiotic therapy in animals with liquid feces. It is conclude that the piglets that received reduced ZnO inclusion, levels below 3000 mg/kg, associated with 180 mg/kg of CuSO4 showed higher frequency of days with diarrhea from 35 to 49 days, with no impairment in performance and intestinal morphology, enabling possible the reduction of costs and environmental pollution.

O presente estudo avaliou a dinâmica da onfalite, diarreia e Doença Respiratória Bovina (DRB), além do comportamento da haptoglobina (Hp) em bezerras Holandesas nos primeiros 41 dias de vida. Ainda, foi possível determinar os parâmetros de performance da Hp frente à detecção de doenças. Para tanto, foram avaliadas 216 bezerras nos momentos D2-6; D7-13; D14-20; D21-27 e D31-41. A haptoglobina (Hp) foi mensurada por técnica espectrofotométrica, enquanto a sanidade das bezerras foi avaliada segundo o Calf Health Scoring Criteria, da University of Wisconsin Madison. A diarreia foi monitorada pela avaliação da consistência das fezes, sendo adotada a seguinte classificação: escore 0 fezes com consistência normal; escore 1- fezes pastosas e semi-formada; escore 2- fezes pastosas com maior quantidade de água e conteúdo fecal aderido ao períneo e cauda; escore 3- fezes líquidas com conteúdo fecal aderido no períneo e cauda. Escores 2 e 3 foram considerados positivos para diarreia. A matéria seca das fezes também foi determinada para avaliação da saúde intestinal, sendo os animais com valores &le;15% classificados como positivos para diarreia. A DRB foi determinada adotando-se os seguintes parâmetros: tosse, secreção nasal, secreção ocular, posicionamento de orelhas e temperatura corpórea, sendo pontuados de 0 a 3 de acordo com a intensidade da sintomatologia. Soma das pontuações escore &ge;5 foi adotada para classificar os animais positivos para DRB. As onfalites foram determinadas pela inspeção e palpação das estruturas umbilicais externas. O período de maior prevalência da onfalite foi no D7-13 (8,8%; 19/216), seguida pelas diarreias no D14-20 (42,9%; 76/177) e DRB no D31-41 (26,4%; 55/208). A média da concentração de Hp durante o experimento foi de 0,03±0,05 g/L, com valores mínimo e máximo de 0,00 e 0,52 g/L, respectivamente. Os picos de haptoglobina foram detectados nos momentos D7-13 (0,04&#177;0,07) e D14-20 (0,04&#177;0,05 g/L). Em relação às diarreias (escore fecal 2 e 3), a Hp apresentou sensibilidade de 56,9% e especificidade 74,07%, sendo o ponto de corte estabelecido equivalente a 0,02 g/L. Resultados semelhantes foram observados para diarreias determinadas pelo teor de matéria seca: sensibilidade 58,1; especificidade 76,2; e ponto de corte 0,02 g/L. Em relação a DRB, a sensibilidade e especificidade foi de 72,7 e 81,2%, respectivamente, quando utilizado a soma do escore respiratório&ge; 5 associado à temperatura retal &gt;39,5ºC, com ponto de corte de 0,02 g/L. O ciclo de doenças foi caracterizado cronologicamente pelas onfalites, diarreias e DRB nos primeiros 41 dias de vida. A haptoglobina pode ser usada como biomarcador para a detecção da DRB. Por outro lado, a proteína apresentou baixa sensibilidade para detecção de diarreia usando dois padrões-ouro. / This research evaluated the dynamic of navel inflammation, diarrhea and Bovine Respiratory Disease (BRD), besides the haptoglobin (Hp) profile in Holstein heifers in the first 41 days of life. Moreover, it was possible to determine the development of haptoglobin to detect diseases. For this, it was evaluated 216 Holstein heifers in the following moments D2-6; D7-13; D14-20; D21-27 e D31-41. Haptoglobin was measured using spectrophotometric, and the health status of calves were assessed in accordance with the Calf Health Scoring Criteria from The University of Wisconsin (Madison). Diarrhea was monitored according to fecal consistency, using the following classification: score 0- normal consistency, score 1- pasty, semi-formed, score 2- pasty with largest amount of water, score 3- liquid with fecal content adhered in the perineum and tail. Calves were assessed having diarrhea when the score were 2 or 3. Fecal dry matter also was determined to evaluate the gut health, so animals with values &le;15% were classified such as positive for diarrhea. BRD was assessed using the following parameters: rectal temperature, nasal secretion, ocular secretion, cough and ear/head position with score of 0-3 based on severity of each. Calves were assessed having BRD when the sum of these scores was &ge;5. Omphalitis was evaluated by inspection and palpation of navel external structures. The highest prevalence of omphalitis was observed on D7-D13 (8.8%; 19/216), followed diarrhea on D14-D20 (42.9%, 76/177) and BRD on D31-D41 (26.4%; 55/208). The mean of Hp along this research was 0.03&#177;0.05 g/L, with minimum and maximum values of 0.00 e 0.52 g/L, respectively. The peak of haptoglobin was detected on D7-13 (0.04&#177;0.07) e D14-20 (0.04&#177;0.05 g/L). In relation to diarrhea (fecal score 2 and 3), the haptoglobin had sensibility of 56.9% and specificity of 74.07%, and the cut-off established was 0.02 g/L. Similar results was observed for diarrhea determined using fecal dry matter: sensibility of 58.1; specificity of 76.2; and cut-off of 0.02 g/L. In relation to BRD, sensibility and specificity detected was 72.7 and 81.2%, respectively, when the sum of score was &ge;5 associated with rectal temperature &gt;39.5ºC, with cut-off equal 0.02 g/L. The cycle of diseases was characterized by omphalitis, diarrhea and BRD in the first 41 days of life. Haptoglobin can be used as a biomarker to detect BRD. On the other hand, this protein had low sensibility to detect diarrhea using two gold standard.

Inicialmente o presente estudo objetivou avaliar os efeitos de diferentes fontes de cobre e zinco na dieta de leitões desmamados. Porém, houve a necessidade de utilizar as mesmas fontes e alterar apenas os níveis de inclusão desses minerais, o que justifica o título (que não pôde ser substituído posteriormente). Os leitões recém-desmamados apresentam reduzida digestibilidade de nutrientes pela falta de maturidade do sistema digestório frente à dieta sólida, levando à redução na absorção dos mesmos, e consequentemente diarreia e queda no desempenho. Uma das alternativas utilizadas após o desmame, principalmente com a proibição do uso de antibióticos como promotores de crescimento, tem sido os microminerais, principalmente o zinco (Zn) e o cobre (Cu). Dentre as fontes, o óxido de zinco (ZnO) e o sulfato de cobre (CuSO4) são as comumente utilizadas em níveis farmacológicos, 3000 mg/kg e 250 mg/kg, respectivamente devido ao baixo custo e por melhorar o desempenho, a consistência fecal e a manutenção da integridade intestinal. É possível que leitões suplementados com a associação de CuSO4 e níveis reduzidos de ZnO na dieta apresentem desempenho, frequência de dias com diarreia e morfometria intestinal semelhantes aos leitões suplementados com maiores níveis, e que não ocorra interferência na absorção hepática de Cu e na concentração de Zn na tíbia. Assim, o presente estudo avaliou a associação entre o CuSO4 e o ZnO, em níveis reduzidos, sobre o desempenho, a morfometria intestinal, a frequência de dias com diarreia e a concentração desses minerais no fígado e na tíbia de leitões na fase de creche. Utilizaram-se 80 leitões desmamados aos 21 dias de idade distribuídos em 2 tratamentos, de acordo com as fases: Pré-inicial (21 aos 35 dias): T1, 3000 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; Inicial 1 (35 aos 49 dias): T1, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, CuSO4; e na Inicial 2 (49 aos 63 dias): T1 e T2, 100 mg/kg ZnO + CuSO4, sendo a inclusão de 180 mg/kg CuSO4 em todas as fases. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, sendo a sala e o peso considerados como bloco. A frequência de dias com diarreia foi transformada pela função arco-seno e as características foram submetidas à análise de variância, empregando-se o software SAS (v. 9.3), o nível de significância considerado foi de 5%. Os leitões que receberam menor nível de ZnO apresentaram maior frequência de diarreia dos 35 aos 49 dias de idade (P < 0,05), contudo o desempenho, a morfometria intestinal e a concentração de cobre no fígado foram semelhantes entre os tratamentos. Infere-se que esse resultado foi obtido pela atuação do Zn, Cu e aos cuidados paliativos como o fornecimento de soro via oral e antibioticoterapia terapêutica nos animais com fezes líquidas. Conclui-se que os leitões que receberam reduzida inclusão ZnO, níveis inferiores a 3000 mg/kg, associado a 180 mg/kg de CuSO4 apresentaram maior frequência de dias com diarreia dos 35 aos 49 dias, sem prejuízos no desempenho e na morfometria intestinal, sendo possível a redução de custos e na poluição ambiental. / Initially the present study aimed to evaluate the effects of different sources of copper and zinc in the diet of weaned piglets. However, it was necessary to use the same sources and only change the inclusion levels of these minerals, which justifies the title (which couldnt be replaced later). Newly weaned piglets show reduced nutrients digestibility, due to the lack of maturity of the digestive system to the solid diet, leading to a reduction in nutrient absorption and consequently, diarrhea and performance reduction. One of the alternatives used after weaning, especially with the reduction of the use of antibiotics as growth promoters, is the use of microminerals, mainly zinc (Zn) and copper (Cu). Among the sources, zinc oxide (ZnO) and copper sulfate (CuSO4) are commonly used at pharmacological levels, 3000 mg/kg and 250 mg/kg, respectively, due to low cost and to improve performance, fecal consistency and maintenance of intestinal integrity. It is possible that piglets supplemented with the association of CuSO4 and ZnO at reduced levels in the diet show performance, diarrhea frequency and intestinal morphology similar to piglets supplemented with higher levels and that there is no interference on Cu hepatic absorption and Zn concentration in tibia. Thus, the present study evaluated the association between CuSO4 and ZnO at reduced levels on performance, intestinal morphology, frequency of days with diarrhea and concentration on the liver and tibia in piglets during the nursery phase. A total of 80 piglets were weaned at 21 days of age divided into 2 treatments according to the following phases: Pre-starter (21 to 35 days): T1, 3000 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; Starter 1 (35 to 49 days): T1, 2500 mg/kg ZnO + CuSO4; T2, CuSO4; and in the Starter 2 (49 to 63 days): T1 and T2, 100 mg/kg ZnO + CuSO4, with inclusion of 180 mg/kg of CuSO4 in all phases. The experimental design was in randomized blocks, with room and weight considered as blocks. The diarrhea frequency was transformed by the sine function and the characteristics were submitted to analysis of variance using SAS software (v. 9.3). The level of significance was 5%. Piglets receiving lower levels of ZnO had greater diarrhea frequency from 35 to 49 days of age (P < 0.05), however performance, intestinal morphology and Cu concentration in the liver were similar between treatments. Infers that this result was obtained by Zn, Cu and palliative care, such as oral serum supply and therapeutic antibiotic therapy in animals with liquid feces. It is conclude that the piglets that received reduced ZnO inclusion, levels below 3000 mg/kg, associated with 180 mg/kg of CuSO4 showed higher frequency of days with diarrhea from 35 to 49 days, with no impairment in performance and intestinal morphology, enabling possible the reduction of costs and environmental pollution.

O patótipo de Escherichia coli diarreiogênica denominado E. coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizado pela expressão do padrão de adesão agregativo (AA) em células epiteliais cultivadas. Amostras de EAEC são classificadas como típicas ou atípicas, dependendo da presença ou não do gene aggR, respectivamente. O padrão AA no teste de adesão em células epiteliais é o diagnóstico padrão para a classificação de EAEC. Técnicas moleculares, como a PCR multiplex, são alternativas a esse teste. No presente estudo foi desenvolvida uma PCR multiplex para o diagnóstico molecular de EAEC típica e atípica, baseada na detecção dos genes aatA, aggR, aaiA e aaiG. A partir de colônias isoladas de E. coli de origem fecal o teste apresentou sensibilidade de 94,8%, especificidade de 94,7%, valor preditivo de teste positivo de 74,3% e valor preditivo de teste negativo de 99,1%. O teste desenvolvido mostrou-se uma alternativa diagnóstica sensível e específica para EAEC e permite um acréscimo significativo na detecção de EAEC atípica. / The diarrheagenic Escherichia coli pathotype known as enteroaggregative E. coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence pattern (AA) on cultured epithelial cells. EAEC strains are classified as typical or atypical, depending on the presence or absence of the aggR gene, respectively. The AA pattern in the adherence assay with epithelial cells is the gold standard diagnostic for EAEC. Molecular techniques, such as multiplex PCR, are alternatives to this test. In the present study we developed a multiplex PCR for the molecular diagnostic of typical and atypical EAEC, based on the detection of aatA, aggR, aaiA and aaiG genes. The test presented 96.5% of sensitivity, 94.8% of specificity, 74.3% of positive predictive value and 99.1% of negative predictive value, when tested in isolated colonies of E. coli from feces. The test developed is a sensitive and specific diagnostic alternative for EAEC and allows a significant increase in atypical EAEC detection.

EPECa tem sido identificada como o principal agente de diarreia aguda em crianças de países em desenvolvimento. Biofilmes são estruturas bacterianas envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a influência de diferentes condições de cultivo na formação de biofilme por EPECa isoladas de crianças com diarreia e pesquisar a presença de genes relacionados com a formação de biofilme. As sequências genéticas dos genes csgA, crl, fimH e bcsA foram pesquisadas através da PCR e verificadas em 6 (26%), 23 (100%), 22 (95,6%) e 23 (100%) das amostras respectivamente. A formação de biofilme em placas de MTP por EPECa foi melhor evidenciada em meio LB sem sal a 26 °C e em caldo E. coli a 37 °C, tanto em número de amostras quanto em intensidade da formação de biofilme. As microscopias confocal e de varredura propiciaram uma análise qualitativa de microcolônias e pilares, além de EPS respectivamente. As condições de cultivo devem ser usadas com precaução para realmente aferir a capacidade de formação de biofilme por amostras de EPECa. / aEPEC has been identified as the main agent of acute diarrhea in children in developing countries. Biofilms are bacterial structures which are surrounded by a matrix of exopolysaccharides. The aim of this study was investigate the influence of different culture conditions on biofilm formation by 23 aEPEC strains isolated from children with diarrhea and search for the presence of genes related to biofilm formation. The genetic sequences of the csgA, crl, fimH and bcsA genes were screened by PCR and were found in 6 (26%), 23 (100%) 22 (95.6%) and 23 (100%) of the strains respectively. Biofilm formation in MTP plates for aEPEC strains was better evidenced in LB medium without NaCl at 26 ° C and in E. coli broth at 37 ° C, both in number and intensity of biofilm formation. The confocal and scanning electron microscopy provided a qualitative analysis of structures such as microcolonies and pillars, and respectively EPS. The growing conditions should be used with caution to measure the real ability of biofilm formation by strains of aEPEC.