Made available in DSpace on 2015-04-14T13:56:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 396639.pdf: 3477259 bytes, checksum: bb4eed136036815958a125e375927b8d (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / As simula??es de Monte Carlo v?m sendo utilizadas para validar m?todos de corre??o de atenua??o e espalhamento em SPECT. O acoplamento ? simula??o de um phantom matem?tico como o NCAT, com movimentos respirat?rios e batimentos card?acos, permite uma modelagem ainda mais adequada e realista das aquisi??es em Medicina Nuclear. Este trabalho busca avaliar a influ?ncia da resolu??o espacial dos mapas de coeficientes de atenua??o na reconstru??o quantitativa em SPECT card?aco. O estudo baseia-se em diversas simula??es de Monte Carlo de imagens de SPECT, com ?nfase especial no phantom matem?tico NCAT 4D (4D NURBSbased Cardiac Torso) e avalia o efeito da varia??o da resolu??o espacial dos mapas de atenua??o n?o-uniformes utilizados na corre??o de atenua??o. A an?lise visual das imagens simuladas reconstru?das revelou que a falta de corre??o de atenua??o criou uma dispers?o das contagens ao redor do mioc?rdio e do f?gado. Nas imagens corrigidas para a atenua??o, esse efeito de borramento foi substitu?do pela uniformiza??o da atividade nas paredes do mioc?rdio, tanto na parede anterior como da parede posterior. Observou-se tamb?m um aumento de contraste quantitativo e qualitativo com a aplica??o da corre??o de atenua??o. O principal fator degradador do diagn?stico de perfus?o mioc?rdica em SPECT foi a presen?a de tecido atenuador ao redor e nas proximidades do cora??o, particularmente pr?ximo ao f?gado. A aplica??o do m?todo de corre??o de atenua??o nas imagens de perfus?o mioc?rdica em SPECT revelou-se significante para a melhoria da qualidade das imagens reconstru?das. Os resultados dos perfis de contagem mostram que, mesmo do caso de borramento severo dos mapas de coeficiente de atenua??o, n?o existe mudan?a significativa na quantifica??o das paredes do mioc?rdio, tanto com rela??o ? intensidade quanto ao contraste entre as paredes e a cavidade. Observa-se tamb?m que a utiliza??o dos mapas de atenua??o de baixa resolu??o espacial na corre??o n?o provoca o surgimento de artefatos e de componentes de alta freq??ncia, suavizando a imagem reconstru?da.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389385.pdf: 657734 bytes, checksum: ed108c6c60ff2ce1f824c37caebac2f2 (MD5) Previous issue date: 2007-03-30 / Em todo o Brasil, os anos 90 foram marcados pelo processo de reestrutura??o produtiva. Na busca de formas de aumentar a produtividade, bem como de reduzir os custos de produ??o, ocorreu uma transi??o do sistema de gest?o fordista, para o sistema de gest?o flex?vel. O objetivo desta disserta??o ? realizar uma an?lise hist?rica do impacto desta transi??o sobre a sa?de dos trabalhadores em bancos do Estado do Rio Grande do Sul. Neste sentido, faz-se uma an?lise te?rica da gest?o da m?o-de-obra: taylorista-fordista e flex?vel. Segue-se um relato da hist?ria do desenvolvimento econ?mico do Estado desde o surgimento da atividade de pecu?ria-charqueada, seguido pela implanta??o da agricultura, da base industrial, e do com?rcio. Descreve-se tamb?m o desenvolvimento do sistema financeiro regional, que no final do s?culo XX foi submetido ? importante reestrutura??o. Com a finalidade de avaliar o impacto desta mudan?a sobre a sa?de dos trabalhadores ga?chos, em especial os do sistema financeiro, estuda-se a evolu??o do trabalho no setor, desde as pequenas casas banc?rias at? as modernas ag?ncias informatizadas. Por fim, a an?lise do dados epidemiol?gico dos adoecimentos relacionados ao trabalho no per?odo de gest?o flex?vel, com enfoque nos banc?rios do Rio Grande do Sul, evidenciou elevadas taxas de preval?ncia de LER e transtornos mentais menores

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-06-12T17:44:48Z No. of bitstreams: 1 DIS_ROBERTO_FERREIRA_ZANIN_PARCIAL.pdf: 733158 bytes, checksum: a7a7b4d0022ccc0b36fa8657b48ad0ff (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T17:44:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_ROBERTO_FERREIRA_ZANIN_PARCIAL.pdf: 733158 bytes, checksum: a7a7b4d0022ccc0b36fa8657b48ad0ff (MD5) Previous issue date: 2017-01-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Temporomandibular disorders (TMD) and their treatment have a physical and psychological impact on quality of life (QOL). This study aimed to assess the impact of oral health on QOL by evaluating 50 patients with bilateral anterior disc displacement without reduction preoperatively (T0) and 3?6 months after surgery for anterior disc repositioning and anchoring (T1). Oral health-related QOL was assessed using the short form of the Oral Health Impact Profile (OHIP-14). There was a statistically significant reduction in the mean total OHIP-14 score between T0 (12.48 ? 5.81) and T1 (3.84 ? 3.00). In addition, there was a significant decrease in all 7 OHIP-14 domains (P<0.001). Younger patients (aged 28?38 years, n=26) had benefits in all domains, while older patients (aged 50?60 years, n=5) showed a significant improvement only in the physical pain domain (P=0.049). The results suggest that TMD affect individuals in many aspects of their lives and that general or condition-specific oral health-related QOL measures are valuable tools for determining the impact of joint disorders on patients? QOL. Surgical treatment for articular disc repositioning and anchoring had a positive impact on patients? QOL. / As desordens da articula??o temporomandibular (ATM) e seu tratamento possuem repercuss?es f?sicas e psicol?gicas na qualidade de vida (QOL). Este estudo avaliou o pr?-operat?rio (T0) e de 3-6 meses de p?s-operat?rio (T1) em 50 pacientes (100 discos articulares) com deslocamento anterior do disco, sem redu??o bilateral, submetidos ? cirurgia para o reposicionamento do disco articular atrav?s de ?ncoras. A QOL relacionada com a sa?de bucal foi avaliada usando a vers?o reduzida do oral health impact profile (OHIP-14). Houve uma redu??o estatisticamente significante na m?dia geral das pontua??es OHIP-14 entre T0 (12.48 ? 5.81) e T1 (3.84 ? 3.00). Em adi??o, houve uma redu??o significativa em todos os 7 dom?nios OHIP-14 (P<0,001). Pacientes mais jovens, na faixa et?ria entre 28-38 anos (n=26), foram beneficiados em todos os dom?nios avaliados, enquanto que uma melhora significativa pode ser observada apenas no dom?nio dor f?sica (P > 0.05) para os pacientes mais idosos na faixa et?ria entre 50-60 anos (n=5). Os resultados sugerem que as desordens da ATM afetam os indiv?duos em diversos aspectos de suas vidas e que as abordagens das condi??es espec?ficas e gerais de sa?de oral para avaliar a QOL possuem valor em determinar o impacto das desordens articulares na qualidade de vida destes pacientes. O tratamento cir?rgico para a ancoragem de disco da ATM teve um impacto positivo na qualidade nos pacientes avaliados.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2017-10-05T12:11:04Z No. of bitstreams: 1 LUISA_AZAMBUJA_ALCALDE_DIS.pdf: 1021854 bytes, checksum: 5eb77630a0526fda862d94ab0a753c16 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-05T14:47:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LUISA_AZAMBUJA_ALCALDE_DIS.pdf: 1021854 bytes, checksum: 5eb77630a0526fda862d94ab0a753c16 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-05T14:58:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LUISA_AZAMBUJA_ALCALDE_DIS.pdf: 1021854 bytes, checksum: 5eb77630a0526fda862d94ab0a753c16 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) is the most abundant neurotrophin in the mammalian Central Nervous System, and plays a key role in development and physiology, as well as in pathological states. Post-mortem studies demonstrated that BDNF levels are reduced in the brains of patients affected by neurodegenerative diseases, such as Alzheimer?s disease (AD). Iron accumulation has consistently been associated to the pathogenesis of neurodegenerative diseases. In rats, neonatal iron overload induces memory deficits, and increases oxidative stress and apoptotic markers, and decreases the expression of the synaptic marker, synaptophysin. Deferiprone (DFP) is an oral iron chelator used for the treatment of systemic iron overload disorders, and has recently been tested in Parkinson?s disease patients. Here, we aimed to determine the effects of iron overload on BDNF levels and glucose metabolism, measured by 18FDG uptake using positron emission tomography. Moreover, we intended to characterize the effects of DFP on iron-induced memory deficits and BDNF levels, as well as on glucose metabolism. Rats received iron or vehicle at postnatal days 12-14 and when adults, received chronic DFP or water. Recognition memory was tested 19 days after the beginning of chelation therapy. 18FDG uptake was performed 24 h after the last day of treatment. Another subset of animals was sacrificed 24 h after the last day of treatment for BDNF measurements, and TrkB and p75 expression analysis. DFP was able to restore memory impairment and increase hippocampal BDNF levels, ameliorating iron-induced effects. The present findings support the use of DFP in clinical trials including AD patients. / O ferro ? essencial no c?rebro neonatal para o desenvolvimento neurol?gico normal e para o estabelecimento da concentra??o de ferro no c?rebro adulto, j? que a absor??o de ferro ? m?xima durante o per?odo neonatal. Acredita-se que a sobrecarga de ferro contribui para o desenvolvimento da neurodegenera??o, na exacerba??o das taxas normais de apoptose, em grande parte devido ? sua participa??o na rea??o de Fenton e ? produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio. Estudos pr?vios em nosso laborat?rio demonstraram que o tratamento com ferro no per?odo neonatal induz altera??es significativas de mem?ria, bem como aumento em par?metros de estresse oxidativo e em n?veis de prote?nas apopt?ticas. Recentemente, tamb?m demonstramos que esse tratamento reduz os n?veis de sinaptofisina (um marcador sin?ptico) no hipocampo. O BDNF ? a neutrofina mais abundante no SNC dos mam?feros, tendo sua a??o mediada pelo receptor tirosina cinase de alta afinidade (TrKB). Atualmente, estudos tem demonstrado que o BDNF apresenta um papel cr?tico na forma??o da mem?ria de longa dura??o. Assim, o presente estudo teve dois objetivos principais. O primeiro objetivo foi verificar o envolvimento do BDNF nos d?ficits de mem?ria induzidos pelo ac?mulo de ferro, al?m de verificar se o tratamento com ferro alteraria os n?veis de BDNF e a express?o de seus receptores, TrKB e p75. Os ratos Wistar machos receberam ve?culo ou ferro carbonila (30 mg/kg) do 12? ao 14? dia p?s-natal. Na idade adulta, os animais foram tratados por 21 dias com o quelante de ferro, deferiprona (125 mg/kg/dia), e submetidos ? tarefa de reconhecimento do objeto. A an?lise da mem?ria foi realizada atrav?s do ?ndice de reconhecimento, expresso pela raz?o entre a quantidade de tempo gasto na explora??o do objeto novo sobre o tempo total gasto explorando ambos os objetos. Os n?veis prot?icos de BDNF e a express?o g?nica de seus receptores no hipocampo foram quantificados atrav?s de ELISA e PCR real time, respectivamente. O segundo objetivo foi avaliar o metabolismo glicol?tico cerebral realizado atrav?s do escaneamento no TriumphTM microPET e a capta??o de 18F-FDG utilizando o software PMOD v3.5 e Fusion Toolbox. Para este experimento, foram inclu?dos 4 grupos experimentais: os grupos que receberam ve?culo ou ferro no per?odo neonatal que foram divididos em subgrupos que receberam ve?culo ou deferiprona durante 21 dias consecutivos na idade adulta. Os ratos tratados com ferro no per?odo neonatal apresentaram uma diminui??o significativa nos n?veis de BDNF no hipocampo, sem altera??o da express?o g?nica dos receptrores TrkB e p75. A deferiprona foi capaz de reverter os d?ficits de mem?ria de reconhecimento, bem como aumentar os n?veis prot?icos de BDNF no hipocampo, melhorando os efeitos induzidos pelo tratamento com ferro no per?odo neonatal. N?o foram observadas altera??es no metabolismo da glicose cerebral nos animais tratados com ferro e/ou deferiprona. Os presentes achados fornecem embasamento para uso da deferiprona em ensaios cl?nicos, incluindo pacientes com doen?a de Alzheimer.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 411286.PDF: 549164 bytes, checksum: 734a48776e052e1d86baccb49d04044f (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Introdu??o: A asma ? uma doen?a inflamat?ria cr?nica e os glicocortic?ides (GCs) s?o a terapia mais efetiva para o controle da doen?a. Um subgrupo de paciente com asma severa ? resistente aos GCs, mas n?o h? dados a respeito da sensibilidade aos GCs em crian?as com essa doen?a. Objetivos: A inten??o deste estudo ? analisar a sensibilidade das c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMC) aos GCs al?m de marcadores inflamat?rios no plasma de crian?as com asma persistente. M?todos: Os pacientes com asma persistente (n=57) foram divididos em tr?s grupos (severa, moderada e leve), e comparados com crian?as saud?veis (n=18). PBMCs foram isoladas e postas em cultura in vitro para testar a prolifera??o induzida por mit?geno assim como a sensibilidade celular ? dexametasona. Quimiocinas do plasma (CCL2, CCL3, CCL5, CCL11, CCL22, CCL24, CXCL9, CXCL10 e IL-8), receptores sol?veis de TNF e fator neurotr?fico derivado do c?rebro (BDNF) foram analisados com ELISA. Principais Resultados: Pacientes com asma leve apresentaram uma relativa resist?ncia ? dexametasona. Pacientes com asma moderada e severa mostraram ter n?veis de BDNF mais elevados (p < 0.01) quando comparados com os pacientes com asma leve e controles, sendo o melhor marcador de severidade neste estudo. Conclus?es: PBMCs derivadas de crian?as com asma severa n?o s?o resistentes aos GCs in vitro. BDNF Plasm?tica ? um potencial marcador da progress?o da doen?a em crian?as asm?ticas. Nossos achados sugerem que a resist?ncia aos GCs em adultos com asma severa possa ser um processo adquirido.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418471.pdf: 941887 bytes, checksum: 83e65c46f62b9cf566ee10180ce3d11c (MD5) Previous issue date: 2009-03-19 / O receptor B&#8321; para as cininas est? normalmente ausente durante condi??es fisiol?gicas podendo ser rapidamente induzido em resposta a diversos est?mulos, como os processos infecciosos. Apesar disso, n?o existem estudos indicando como o LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg-LPS), um ativador preferencial de TLR2, pode induzir a express?o do receptor B&#8321;. No presente trabalho, foi demonstrado que a inje??o do Pg-LPS na pata de rato resulta na indu??o funcional tempo-dependente dos receptores B&#8321; (determinada pelo aumento marcante na resposta edematog?nica), que foi precedida pelo r?pido aumento na express?o do seu RNAm. A administra??o local de Pg-LPS produziu um aumento marcante na produ??o da citocina pr?-inflamat?ria TNF-G e do influxo de neutr?filos. Ambos os eventos foram observados anteriormente ? indu??o dos receptores B&#8321;. A indu??o funcional e molecular do receptor B&#8321; pelo Pg-LPS foi reduzida significantemente pelo glicocortic?ide dexametasona e pelo anticorpo monoclonal anti- TNF-G infliximab. De grande relev?ncia, foi demonstrado pela primeira vez, que uma ?nica administra??o de Resolvina E1, um mediador lip?dico pr?-resolu??o da inflama??o, foi capaz de produzir uma redu??o marcante na express?o dos receptores B&#8321; mediada pelo Pg-LPS, provavelmente inibindo produ??o de TNF-G e a migra??o de neutr?filos para o s?tio inflamat?rio. Analisados em conjunto, os dados obtidos permitem inferir que a ativa??o do TLR2 pelo Pg-LPS ? capaz de induzir a express?o dos receptores B&#8321;, atrav?s de mecanismos relacionados ? produ??o de TNF-G e ao influxo de neutr?filos, que s?o sens?veis a Resolvina E1. Assim, ? poss?vel sugerir que os receptores B&#8321; representam uma via importante nas respostas inflamat?rias desencadeadas pela P. gingivalis e seus fatores de virul?ncia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422465.pdf: 2691735 bytes, checksum: 1455a538e61f307699a636bd9041725c (MD5) Previous issue date: 2010-01-28 / A homeostasia sist?mica e celular do ferro ? regulada por uma s?rie de prote?nas que controlam a capta??o, o transporte, o armazenamento e a utiliza??o deste metal. O per?odo neonatal ? cr?tico para o estabelecimento da concentra??o de ferro no c?rebro adulto. Al?m disso, tamb?m se sabe que a concentra??o de ferro aumenta nas regi?es cerebrais durante o processo de envelhecimento. N?veis anormalmente elevados de ferro s?o observados no c?rebro de pacientes que apresentam doen?as neurodegenerativas, entretanto os mecanismos envolvidos no ac?mulo de ferro ainda n?o s?o claros. Neste estudo n?s investigamos os efeitos do envelhecimento e da sobrecarga de ferro neonatal na express?o de RNAm de prote?nas criticamente envolvidas no controle da homeostasia do ferro: Receptor de Transferrina (TfR), H-ferritina, IRP2, Transportador de Metal Divalente 1 (DMT1), Ceruloplasmina (CP) e Hepicidina. Ratos Wistar filhotes receberam uma ?nica dose di?ria de ve?culo (5% sorbitol em ?gua) ou ferro (10 mg/kg de peso corporal de Fe2+), do 12? ao 14? dia de vida p?s-natal. As express?es de RNAm destas prote?nas foram analisadas por RT-PCR, um m?todo semi-quantitativo, no c?rtex, hipocampo e estriado de ratos sacrificados em tr?s diferentes idades (15 dias; 90 dias e 2 anos de idade). Os resultados indicaram que a express?o de RNAm de TFR, H-ferritina a IRP2 foram diferentemente afetadas pelo envelhecimento e pelo tratamento neonatal com ferro nas diferentes regi?es do c?rebro estudadas. Tamb?m se observou que a express?o de RNAm de DMT1 e CP ? influenciada pela idade nos ratos controle. Al?m disso, nossos resultados sugerem que o tratamento neonatal com ferro afeta de forma diferente a express?o de RNAm de DMT1 no c?rtex e estriado de ratos jovens; e a express?o de RNAm de CP no c?rtex de ratos jovens, e no hipocampo de ratos velhos. Com rela??o ? Hepicidina, os resultados indicam que o tratamento com ferro no per?odo neonatal induz um aumento nos n?veis de RNAm no hipocampo de animais jovens. Estes resultados podem ajudar a entender de que maneira as altera??es na homeostasia do ferro podem estar associadas ? patog?nese das doen?as neurodegenerativas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432146.pdf: 1043859 bytes, checksum: 1179861d46757576425c11737bcf1dc7 (MD5) Previous issue date: 2011-03-24 / O canabidiol ? o principal constituinte n?o-psicotr?pico da Cannabis sativa e possui uma ampla variedade de efeitos farmacol?gicos, incluindo efeito anticonvulsivante, sedativo, hipn?tico, antipsic?tico, antiinflamat?rio e neuroprotetor como demonstrado em estudos cl?nicos e pr?-cl?nicos. Muitas doen?as neurodegenerativas envolvem d?ficits cognitivos e isto tem levado ao questionamento sobre a possibilidade de utiliza??o do canabidiol no tratamento dos danos de mem?ria associado a essas patologias. No presente trabalho utilizou-se um modelo animal de dano cognitivo induzido pela sobrecarga de ferro a fim de investigar os efeitos do canabidiol na disfun??o de mem?ria. Ratos Wistar machos receberam ve?culo ou 10.0 mg/kg Fe&#8314;? por via oral nos dias 12-14 p?s-natal. Quando os animais completaram 2 meses de idade (idade adulta), receberam uma inje??o intraperitonial aguda de ve?culo ou canabidiol (5.0 ou 10.0 mg/kg) imediatamente ap?s a sess?o de treino da tarefa de reconhecimento do objeto. Para investigar os efeitos do uso cr?nico de canabidiol os ratos tratados com ferro no per?odo neonatal receberam inje??es di?rias intraperitoniais de canabidiol (5.0 ou 10.0 mg/kg) durante 14 dias. Vinte e quatro horas ap?s a ?ltima inje??o eles foram submetidos ao treino de reconhecimento de objeto. As sess?es de teste de reten??o foram realizadas 24 horas ap?s o treino. Os resultados indicaram que os animais que receberam ferro no per?odo neonatal apresentaram d?ficits severos de mem?ria. Uma ?nica inje??o aguda de canabidiol na sua dose mais alta foi capaz de recuperar parcialmente a mem?ria dos ratos tratados com ferro. O uso cr?nico de canabidiol melhorou a mem?ria de reconhecimento dos ratos tratados com ferro de forma dose dependente. O uso agudo ou cr?nico de canabidiol n?o afeta a mem?ria dos ratos controles. Os resultados do presente trabalho fornecem evid?ncias que apontam para o uso do canabidiol no tratamento de d?ficit cognitivo associados ?s doen?as neurodegenerativas. Investiga??es futuras, envolvendo ensaios cl?nicos seriam necess?rias para determinar a utilidade deste f?rmaco no tratamento de seres humanos acometidos por doen?as neurodegenerativas

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 448467.pdf: 1354318 bytes, checksum: e98c36f8757b493a6c1604f1618bfb2d (MD5) Previous issue date: 2013-02-08 / Iron accumulation in the brain has been observed in both normal aging and in several neurodegenerative diseases. We have previously shown that brain iron loading results in persistent memory deficits, which are accompanied by oxidative stress. Due to the high metabolic rate of the nervous system, mitochondria are present in large numbers in nerve cells. It has been demonstrated that through fission and fusion of mitochondria, these organelles promote changes in their structure and this dynamic can affect mitochondrial function and vice-versa. Deficits in supplying energy to the synapses have been linked to neurodegenerative diseases and once the functionality of neural circuits is reduced, these cells may activate neuronal death cascades. Here, we analyzed the effects of neonatally iron treatment on the following targets: Dynamin-1-like protein (DNM1L) and Optic atrophy 1 (OPA1), proteins involved in regulating mitochondrial fission and fusion, respectively; Caspase 3, a key protease of the effector phase of apoptosis; and Synaptophysin, as a synaptic marker. Additionally, we investigated the effects of Cannabidiol (CBD), the main non-psychotropic component of Cannabis sativa, previously shown to improve memory in iron-treated rats, in reversing iron-induced effects on DNM1L, OPA1, caspase 3, and synaptophysin. Male rats received vehicle or iron carbonyl (30mg/kg) at postnatal days 12-14. At adulthood, they were treated with vehicle or CBD (10 mg/kg) for 14 days. Hippocampal and cortical protein levels and gene expression were quantified using western blotting analysis and RT-qPCR, respectively. Quantitative measurements of proteins were made using densities of individual proteins, normalized to the density of &#946;-actin. On RT-qPCR, samples were normalized to three reference genes (GAPDH, HPRT1 and RPL13A). Western blotting results indicated that neonatal iron treatment induced a significant reduction of DNM1L in the hippocampus and OPA1 in the cortex. Iron was also shown to increase caspase 3 both in the hippocampus and cortex, which was accompanied by a significant reduction of synaptophysin levels in the hippocampus. CBD reversed iron-induced effects, bringing hippocampal DNM1L, caspase 3 and synaptophysin levels back to values comparable to the control group. The present results suggest that iron may affect mitochondrial dynamics, possibly trigging synaptic loss and apoptotic cell death. The reversion of these effects by CBD, indicates its potential neuroprotective effect. / O ac?mulo de ferro no c?rebro tem sido observado tanto no envelhecimento normal quanto em muitas doen?as neurodegenerativas. Previamente, mostramos que a sobrecarga de ferro no c?rebro resulta em d?ficits de mem?ria persistentes, acompanhados por estresse oxidativo. Devido ? elevada taxa metab?lica do sistema nervoso, as mitoc?ndrias est?o presentes em grande n?mero em c?lulas nervosas. Tem sido demonstrado que, por meio da fiss?o e fus?o, essas organelas promovem altera??es na sua estrutura e essa din?mica pode afetar a fun??o mitocondrial e vice-versa. D?ficits no fornecimento de energia para as sinapses t?m sido associados a doen?as neurodegenerativas e com a redu??o da funcionalidade de circuitos neurais essas c?lulas podem ativar cascatas de morte neuronal. No presente trabalho, foram analisados os efeitos do tratamento do ferro neonatal sobre os seguintes alvos: prote?na 1 semelhante ? dinamina (DNM1L) e prote?na atr?fica ?ptica 1 (OPA1), envolvidas na regula??o de fiss?o e de fus?o mitocondrial, respectivamente; caspase 3, uma protease essencial da fase efetora da apoptose; e sinaptofisina, um marcador sin?ptico. Al?m disso, n?s investigamos os efeitos do canabidiol (CBD), principal componente n?o psicotr?pico da Cannabis sativa, j? mostrado capaz de melhorar a mem?ria de ratos tratados com ferro, na revers?o dos efeitos induzidos pelo ferro sobre as prote?nas DNM1L, OPA1, caspase 3 e sinaptofisina. Ratos machos receberam ve?culo ou ferro carbonila (30mg/kg) do 12? ao 14? dia p?s-natal. Na idade adulta, foram tratados com ve?culo ou CBD (10mg/kg) durante 14 dias. Os n?veis proteicos e a express?o g?nica no hipocampo e c?rtex foram quantificados atrav?s de Western blotting e RT-qPCR, respectivamente. A quantifica??o das prote?nas foi realizada atrav?s da medida das densidades das bandas individuais, normalizadas pela densidade de &#946;-actina. Para o RT-qPCR, as amostras foram normalizadas para 3 genes de refer?ncia (GAPDH, HPRT1 e RPL13A). Os resultados da an?lise prot?ica indicaram que o tratamento com ferro no per?odo neonatal induziu redu??o de DNM1L no hipocampo e OPA1 no c?rtex. O ferro tamb?m aumentou os n?veis de caspase 3 tanto no hipocampo quanto no c?rtex, acompanhado por redu??o dos n?veis de sinaptofisina no hipocampo. O CBD reverteu os efeitos induzidos pelo ferro, trazendo os n?veis hipocampais de DNM1L, caspase 3 e sinaptofisina de volta aos valores compar?veis ao grupo controle. Os resultados sugerem que o ferro pode afetar a din?mica mitocondrial, possivelmente desencadeando perda sin?ptica e morte celular por apoptose. A revers?o desses efeitos pelo CBD indica o seu potencial efeito neuroprotetor.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 448547.pdf: 664963 bytes, checksum: 65aa603337ed5626e1f7e96bf42a9364 (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Abdominal angiostrongyliasis is a zoonotic infection caused by Angiostrongylus costaricensis, a nematode with intravascular location in the mesentery. Humans become accidentally infected by ingesting food or water contaminated with third stage larvae present in mucus secreted by intermediate hosts, terrestrial mollusks. The confirmed diagnosis of human infection is made only through histopathology of biopsies or mesenteric tissues removed during surgical treatment. There are many cases in which the pathology is very suggestive however there is no evidence of parasite structures in the sections. Thus, the goal of this study was to standardize the extraction of DNA from formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissues from mice experimentally infected with Angiostrongylus costaricensis for DNA detection and future study of human angiostrongyliasis suspected cases. Materials and methods: 45 samples of each tissue of liver, lung, intestine and mesentery, totalizing 180 samples from 15 infected mice with A.costaricensis. Worms of Angiostrongylus cantonensis were separately embedded in paraffin as controls. From embedded tissues, histological sections of 3 &#956;m were performed and stained with HE to confirm the presence of parasite structures under the microscope. Approximately 24 to 31 sections of 10 &#956;m were used for DNA extraction. Worms were embedded in paraffin under different conditions such as fixative chemicals, time of fixation and types of paraffin. Specific DNA of Angiostrongylus was detected by Polymerase Chain Reaction (PCR) to amplify a sequence of 232bp, previously designed for detection in human serum assays. There was a positive amplification in 33 samples from liver, 12 from lung, 45 from mesentery and 36 from intestine wall. For different conditions of embedment, the amplification of the DNA with the buffered formalin fixative was more efficient compared to the unbuffered one; the time of fixation and the commercial brand of wax did not affect the detection of nucleic acids, however, the ratio of paraffin to tissue appears to influence the performance of the method since samples with residual paraffin no amplification was obtained. The 232bp segment also was not visualized in samples where there was no evidence of presence of parasite structures, suggesting that histopathology findings should guide the choice of the samples for DNA extraction, and those most likely to have parasite structures surrounding the lesion, even if degraded. The description of the performance of PCR in paraffin embedded tissues as a diagnostic tool in human abdominal angiostrongyliasis depends on the detailed evaluation criteria in histopathology and their association with a positive amplification of the specific probe. / Angiostrongil?ase abdominal ? uma infec??o zoon?tica causada por Angiostrongylus costaricensis, um nemat?deo com localiza??o intravascular no mesent?rio. O homem se infecta acidentalmente ao ingerir alimentos ou ?gua contaminados com larvas de terceiro est?gio presentes no muco secretado por moluscos terrestres, hospedeiros intermedi?rios. O diagn?stico confirmado da infec??o humana ? feito pelo exame histopatol?gico de bi?psias ou segmentos ressecados durante o tratamento cir?rgico de casos complicados. H? muitos casos em que a histopatologia ? muito sugestiva, por?m sem evidenciarem-se estruturas do parasito nos cortes. Desse modo, o objetivo foi padronizar a extra??o de DNA em tecidos embebidos em parafina em modelo murino visando ? detec??o de ?cidos nucl?icos e posterior utiliza??o no estudo de casos suspeitos a partir do exame histopatol?gico em humanos. Materiais e M?todos: 45 amostras de cada tecido de f?gado, pulm?o, mesent?rio e intestino, totalizando 180 amostras de 15 camundongos infectados com Angiostrongylus costaricensis; e vermes de Angiostrongylus cantonensis foram embebidos separadamente em parafina e nesses blocos contendo os tecidos foram realizados cortes histol?gicos de 3 &#956;m para colora??o por Hematoxilina-Eosina, e confirmado a presen?a de estruturas parasit?rias, foram coletados de 24 a 31 cortes de 10 &#956;m em um microtubo para a extra??o de DNA. Para a padroniza??o do m?todo, vermes foram embebidos em parafina em diferentes condi??es tais como o tipo de fixador, tempo de fixa??o e marcas comerciais de parafina. A partir dos cortes foram realizadas as extra??es de DNA com o Kit Quiagen DNEasy tissue. Para a detec??o de DNA espec?fico de Angiostrongylus foi utilizado a Rea??o em Cadeia da Polimerase (PCR), para amplifica??o de uma sequ?ncia de 232pb, previamente desenhada para ensaios de detec??o em soro humano. Em 33 amostras de f?gado, 12 de pulm?o, 45 de mesent?rio e 36 da parede intestinal houve amplifica??o do segmento de 232pb. Para as diferentes condi??es de emblocamento, as amplifica??es do DNA das amostras a partir do fixador formalina tamponada foram mais frequentes quando comparado com a formalina n?o tamponada; o tempo de fixa??o e o tipo de parafina n?o interferiram na detec??o de ?cidos nucl?icos, entretanto, a quantidade de parafina no tecido parece influenciar no desempenho do m?todo, pois nas amostras onde havia excesso de parafina n?o houve amplifica??o. O segmento de 232pb tamb?m n?o foi visualizado nas amostras onde n?o foi evidenciada a presen?a de estruturas parasit?rias, sugerindo que a informa??o provinda da histopatologia deve orientar a retirada da amostra para extra??o de DNA, como aquelas de maior probabilidade de possuir estruturas parasit?rias nas proximidades da les?o, mesmo que degradadas. A descri??o do desempenho da PCR como recurso diagn?stico da infec??o humana, em material embebido em parafina, depende da avalia??o detalhada dos crit?rios de suspeita na histopatologia correlacionada com a frequ?ncia e reprodutibilidade do resultado da extra??o de DNA e sua amplifica??o.