Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Maria Isabel de Mello Martins / Resumo: A hiperplasia prostática benigna (HPB) tem início no animal com um a dois anos de idade, sendo que 80% dos cães com cinco anos apresentam evidências histológicas de sua presença. A fisiopatologia da doença não está totalmente compreendida, no entanto, a diidrotestosterona é o principal hormônio envolvido. Recentemente, o efeito da toxina botulínica A (TB-A) foi investigado na próstata, mostrando que esta induz atrofia do parênquima e redução do volume. Como o cão é o único animal doméstico que apresenta esta alteração, este se apresenta como modelo experimental para novos estudos da HPB humana. Com base nisso, este estudo objetivou fornecer informações acerca dos efeitos da TB-A sobre a próstata, libido e qualidade do sêmen, comparando os dados com animais orquiectomizados. Para tanto, 18 cães adultos, com evidências ultra-sonográficas de HPB foram submetidos à castração ou administração de 250 ou 500 U de TB-A, e avaliados durante 16 semanas. A orquiectomia mostrou-se um excelente tratamento para a HPB, promovendo redução de 80% do volume prostático. Aplicação da TB-A não ocasionou alterações significativas na libido, ereção ou qualidade e características seminais. Efeitos locais e sistêmicos também não foram observados. Administração de 250 U da TB-A promoveu redução máxima de 9,4% do volume prostático, entretanto, tal redução não foi significativa. Por outro lado, a administração de 500 U de TB-A reduziu significamente as variáveis comprimento, altura e volume da próstata. Desta forma, o presente ensaio contribui de forma singular e inovadora para o conhecimento dos efeitos desta nova modalidade de tratamento na HPB canina. / Abstract: Benign prostatic hyperplasia (BPH) starts the development in animals aging about 1 - 2 years. 80% of 5 years-old dogs have histologic evidences of BPH. Despite the little knowledge concerning about this disease, dihydrotestosterone is the main involved hormone. Recently, the effect of botulinum toxin A (BT-A) on rat and human prostate was investigated, and prostatic parenchyma atrophy and decrease in glandular volume were observed. The dog is one of a few animals that can develop BPH spontaneously and is frequently used as an animal model for human prostatic hyperplasia. Based on that, this study aimed to provide information on BT-A effects on prostate, libido and semen quality, in comparison to orchiectomized dogs. For that, 18 adults dogs, with Ultrasonographic evidences of BPH were submitted to orchiectomy or administration of 250 or 500 U of BT-A, and evaluated along 16 weeks. Orchiectomy presented excellent results on BPH, reducing the prostate volume up to 80%. Administration of BT-A did not significantly interfered on libido, erection or semen characteristics. Local and systemic effects also were not observed. Administration of 250 U of BT-A has promoved a maximum decrease of 9,4% on prostatic volume. However, this reduction was not statistically significant. On the other hand, 500 U of BTA administration has shown to significantly reduce the length, height and volume of prostate. This way, the present study is an innovative and singular contribution for the knowledge of the effects of BT-A on canine prostate. / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: A correta orientação do Médico Veterinário, aos proprietários de cães, usados com finalidades reprodutivas, submetidas à quimioterapia com cisplatina, é importante na medida que este agente citostático age nas células em constante divisão, podendo ser citotóxico para as células germinativas testiculares. O objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade espermática através do espermograma, ultra-som e avaliação de ultraestruturas do testículo de cães que receberam cisplatina em diferentes momentos de análise espermática. A dose utilizada foi de 70 mg/m², dose terapêutica, em intervalos de 21 dias, totalizando 4 infusões. Os cães foram divididos em dois grupos de 4 animais cada, sendo que um dos grupos recebeu a quimioterapia e o protocolo de diurese para proteção renal, já o grupo controle não recebeu a cisplatina, estando sujeito apenas aos fatores ambientais e ao tratamento suporte. Os resultados obtidos demonstraram que a cisplatina influenciou na qualidade espermática de cães, pois elevou as patologias maiores e totais acima do aceitável para cães aptos a reprodução, além de alterações de volume testicular observados pelo exame ultra-sonográfico ao longo dos tratamentos e constatação da degeneração testicular em variados graus observados pela análise ultraestrutural. Portanto, infere-se que este citostático possa acarretar alterações morfofuncionais nos túbulos seminíferos / Abstract: The Veterinary Doctor's correct orientation, to the proprietors of dogs, used with reproductive purposes, submitted to the chemotherapy with cisplatin, it is important in the measure that this citostatic agent acts in the cells in constant division, could be toxicity for the testicle germ cells . The objective of that work was to evaluate the spermatic quality through the spermogram, ultra-sound and evaluation of ultrastructures of the testicle of dogs that received cisplatin in different moments of spermatic analysis. The used dose was of 70 mg/m², therapeutic dose, in intervals of 21 days, totaling 4 infusions. The dogs were divided in two groups of 4 animals each, and one of the groups received the chemotherapy and the diuresis protocol for renal protection, the group control didn't already receive the cisplatin, being just subject to the environmental factors and the treatment supports. The obtained results demonstrated that the cisplatin influenced in the spermatic quality of dogs, because it elevated the larger and total pathologies above the acceptable for capable dogs the reproduction, besides alterations of volume testicular observed by the ultra-sound exam along the treatments and verification of the degeneration testicular in varied degrees observed by the analysis ultrastructural. Therefore, it is inferred that this citostatic agent can cart alterations morphofunctional in the seminiferous tubules / Mestre

Orientador: Cintia Lúcia Maniscalco / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Joaquim Coutinho Netto / Resumo: A fístula oronasal é uma comunicação anormal entre a cavidade oral e nasal. É ocasionada normalmente por doença periodontal avançada, onde o vértice alveolar, principalmente do canino superior, sofre processo de degeneração resultando na injúria; também pode ser causada por traumas, corpos estranhos, extrações dentárias inadequadas, cirurgias na cavidade oral, choques elétricos e atropelamentos. Nos cães, as fístulas acarretam vários sinais clínicos como espirros, secreção nasal, sinusites, rinites, infecções no trato respiratório e até pneumonias aspirativas. Devido à periodontites crônicas e o pouco tecido circunjacente, são de difícil reparação, sendo o pós-operatório problemático pela ocorrência de deiscência de sutura e recidiva com concomitante processo inflamatório e infecção. O látex da seringueira (Hevea brasilienses) mostrou em vários outros experimentos seu poder angiogênico e cicatrizante na formação tecidual. Este experimento teve por finalidade utilizar fração proteica purificada do látex de seringueira no reparo de comunicações oronasais provocadas, para simulação experimental de fístula, após exodontia de caninos superiores de cães. Foram obtidos como resultados uma melhor qualidade na cicatrização, menor processo inflamatório ao final de 21 dias, menor ocorrência de deiscência de sutura e maior quantidade de tecido ósseo no alvéolo, concluindo-se que a utilização do fator proteico auxilia no processo de reparo, tornando-o mais rápido e eficiente / Abstract: The oronasal fistula is an abnormal communication between oral and nasal cavities. It is generally caused by advanced periodontal disease, where the alveolar vertex, especially from the superior canine tooth, become degenerated resulting in that injury; it can either be caused by trauma, foreign bodies, inappropriate dental extractions, surgeries in the oral cavity, electric shock and car run over. In dogs, fistulas may cause several clinical signs as sneeze, nasal secretion, sinusitis, rhinitis, respiratory tract infection and even aspiration pneumonia. Because of chronic periodontitis and little tissue surrounding the fistulas, they are hard to repair; with difficult post-operative period due to the occurrence of suture dehiscence and fistulae recurrence with concomitant inflammatory process and infections. In others several experiments the rubber tree latex (Hevea brasiliensis) showed its angiogenic and healing power in tissue growth formation. The purpose of this experiment was to use a purified protein fraction from rubber tree latex to repair an oronasal communication induced for experimental simulation of the fistula, after extraction of superior canines in dogs. The obtained results corresponded to better healing quality, less inflammatory process after 21 days, less suture dehiscence and more alveolar bone tissue, concluding that the utilization of the protein factor helps in the repair process, making it faster and efficient / Mestre

Orientador: José Joaquim Titton Ranzani / Resumo: O mecanismo de drenagem lacrimal do cão não é totalmente conhecido. O objetivo deste estudo foi avaliar a via lacrimal excretora do cão normal do ponto de vista histológico, na tentativa de melhor conhecer esta estrutura. Método: realizou-se um estudo envolvendo 30 cães normais (60 olhos), sem raça definida, adultos, pesando de 4,15 a 30 kg. Esses animais foram submetidos a exame ectoscópico (exame externo), dacriocistográfico e avaliação histológica da via lacrimal excretora. Resultados: a via lacrimal excretora do cão é formada por pontos, canalículos e saco lacrimal, e ducto nasolacrimal, o qual se abre no meato inferior da narina, observados ao exame dacriocistográfico. Histologicamente, a via lacrimal excretora do cão é, em parte, revestida por epitélio escamoso estratificado não queratinizado, o qual repousa em estroma de tecido conjuntivo denso; e, em parte, revestida por epitélio estratificado colunar, repousando em estroma de tecido conjuntivo frouxo. As regiões do saco lacrimal e do ducto nasolacrimal são circundadas por rica rede vascular. Não foram evidenciadas fibras musculares circundando (intimamente dispostas) a via lacrimal excretora do cão, ou justapostas a essa via. Conclusão: o cão não possui estruturas contráteis envolvendo intimamente a via lacrimal excretora, podendo-se supor que o mecanismo de drenagem lacrimal não envolva mecanismos de contração muscular. / Abstract: The mechanism of lacrimal drainage system in dogs is not still completely understood. The aim of this study was to evaluate the histological aspects of lacrimal drainage system in the healthy dog, trying to know better this anatomical structure. Method: thirty healthy adult cross-bred dogs (sixty eyes), weighting from 4.1 to 30 kg were used in this study. These animals were submited to an extern ophthalmic examination, dacryocystorhinography and a histological analysis of lacrimal drainage route. Results: the lacrimal drainage system is composed by points, lacrimal canaliculi, lacrimal sac and nasolacrimal duct. As showed at the dacryocystorhinography, the nasolacrimal duct opens towards to the meato inferior da narina. By the histological analysis, the lacrimal drainage route is partially composed by non-keratinized stratified squamous epithelium which lies on dense conjunctive tissue stroma, and partially covered by stratified columnar epithelium over a layer of cells of loose conjunctive tissue stroma. The lacrimal sac and nasolacrimal duct areas are rounded by a well developed blood vessels net. It were not observed muscle fibers rounding, or nearby, the lacrimal drainage route. Conclusion: contractile structures rounding lacrimal drainage route were not observed in the dog. We supposed that the mecanism of lacrimal drainage is not related to a muscle contractile responses. / Doutor

Resumo: O convívio do ser humano com cães e gatos tem se intensificado sem a devida adoção de posturas de posse responsável. O presente trabalho teve propósito de contribuir com os estudos da dinâmica populacional de cães e gatos em Jaboticabal, São Paulo, e avaliar o nível de conhecimento das pessoas sobre posse responsável e zoonoses. A obtenção de dados foi feita em dois bairros da periferia, nos anos 2005 e 2010, por meio de questionários. No Bairro Residencial entrevistaram-se 228 moradores em 2005 e, em 2010, foram re-entrevistados 196. No Bairro Jardim Boa Vista foram 111 em 2005, e 84 em 2010. Foram realizados a Análise de Correspondência Múltipla e o Geoprocessamento. Obteve-se um alto número de animais com livre acesso às ruas, na maioria machos e principalmente gatos. Esses animais podem ser computados como semi-restritos ou de vizinhança, com possibilidade de causar transtornos. Além de já estarem em número elevado, os animais de rua têm respaldo da comunidade, que os alimenta, dando condições para que perpetuem. Existe um programa de castração no Município, mas a população de cães e gatos continua crescendo, pois o número de animais castrados ainda é pouco expressivo. Do ano de 2005 para 2010, houve aumento significativo da quantidade de cães idosos, principalmente fêmeas; isso pode ser reflexo da postura das pessoas de maiores cuidados com os animais. As informações obtidas em muito contribuirão para que seja estabelecida a dinâmica da população de cães e gatos em todo Município de Jaboticabal. Certamente, isto dará um suporte valioso ao Serviço Municipal de Saúde para o planejamento e a adoção de medidas mais adequadas de controle de populações animais e de zoonoses / Abstract: The interaction of humans with dogs and cats has increased without proper postures of responsible ownership. The purpose of this study was to contribute to studies of population dynamics of dogs and cats in Jaboticabal, São Paulo, and assess the level of knowledge of the community about responsible ownership and zoonoses. The data collection was done with two neighborhoods, in the years 2005 and 2010, using questionnaires. In the Neighborhood Residential 228 residents were interviewed in 2005 and 196 residents were re-interviewed in 2010. In Jardim Boa Vista 111 residents were interviewed in 2005 and 84 in 2010. We performed a Multiple Correspondence Analysis and GIS. We obtained a high number of animals witch has free access to the streets, mostly male and cats. These animals could be classified as semi-restricted or neighborhood, with the possibility of causing trouble. In addition, besides the high number of animals, the street animals have the support of the community that provide food to them, giving conditions to perpetuate. There is a castration program in the city, but the cats and dogs population continues to grow due to the fact that the number of castrated animals is still small. From 2005 to 2010, there was a significant increase in the number of older dogs, especially female; this may reflect the attitude of the community to be more careful with animals. The information obtained will contribute greatly to the setting of a dynamic population of dogs and cats throughout Jaboticabal. Certainly, it will provide valuable support to the Municipal Health Service for planning and adoption of suitable measures to control animal populations and zoonoses / Orientador: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho / Coorientador: Antonio Sergio Ferraudo / Banca: Angela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Banca: Maria Angélica Dias / Mestre

Resumo: Visando à contribuição ao estudo da oncologia e ao aumento da sobrevida de cadelas com neoplasias mamárias, o objetivo deste trabalho é investigar as possíveis alterações no gene supressor de tumor p53 em tumores de mama relacionando-as com a idade, raça, tipo histológico, número e localização da neoplasia, tempo de progressão e característica macroscópica do tumor (tamanho e presença de úlcera). Foram avaliadas 30 amostras de neoplasias de mama de cadelas. Este material foi distribuído em cinco grupos, de acordo com a classificação histopatológica do tumor (adenoma, tumor misto benigno, carcinoma, tumor misto maligno e sarcoma). O Grupo Controle compreendeu cinco amostras de tecido mamário sem alterações patológicas. As possíveis mutações existentes nos exons 5 a 8 do gene p53 foi analisado por meio da técnica de PCR (reação em cadeia de polimerase) e seqüenciamento. Foram observadas cinco mutações em neoplasias malignas e uma mutação em neoplasia benigna. Dessas mutações, todas eram "missense" e três delas eram do tipo "frameshift". Comparando as mutações com os outros parâmetros clínicos, concluiu-se que alterações em p53 devem ser originadas em um estágio inicial na carcinogênese mamária canina e mutações em p53 podem estar relacionadas com a malignidade do tumor. / Abstract: Aiming at the contribution for oncology's study and the improvement of survival time of bitches with mammary neoplasm, the purpose of this research is investigate the possible alterations in tumor suppressor gene p53 in mammary neoplasm, relating then with age, breed, tumor histologic classification, neoplasm location (which mammary gland and if they are unique or multiples), progression time and neoplasm macroscopic characteristic (size and ulceration presence). Thirty canine mammary neoplasm patterns were evaluated. This material was distributed in five groups according to histologic classification of the tumor (adenoma, benign mixed tumor, carcinoma, malignant mixed tumor and sarcoma). The Control Group included five mammary tissue patterns with no pathological alterations. Possible mutations at 5 to 8 exons within p53 gene was analyzed by the PCR technique ("Polymerase Chain Reaction") and sequencing. Five mutations were observed in malignant mammary neoplasm and one mutation in benign neoplasm. About these mutations, all were missense and three of them were frameshift. Comparing the mutations with the other clinical parameters, it was concluded that p53 alterations must be started in an initial stage in canine mammary carcinogenesis and p53 mutations can be related with the tumor malignancy. / Orientador: Carlos Roberto Daleck / Coorientadora: Janete Apparecida Desidério Sena / Banca: Renata Afonso Sobral / Banca: José Jurandir Fagliari / Mestre

Orientador: José Luiz Laus / Banca: Aline Adriana Bolzan / Banca: Fabrício Villela Mamede / Banca: Delphim da Graça Macoris / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Resumo: Estudaram-se os efeitos do BandVet® na reparação corneal em cães após ceratectomia superficial. Utilizaram-se 16 cães adultos, sem raça definida, machos ou fêmeas, sendo oito tratados com o BandVet® (BV) e os demais, com cloreto de sódio a 0,9%, (CO) subdivididos em grupos para avaliação clínica diária durante os 3, 7, 14 e 28 dias de pós-operatório. Foram atribuídos escores para a avaliação clínica quanto ao blefarospasmo, congestão conjuntival, vascularização, pigmentação e edema corneais. Encontraram-se blefarospasmo e fotofobia nos períodos iniciais de pósoperatório. Houve diferença significativa quanto à congestão conjuntival e secreção ocular aos sete dias de pós-operatório. A vascularização manteve-se constante desde os períodos iniciais, desaparecendo no período final, apenas no grupo tratado. O edema corneal esteve sempre presente em ambos os grupos, diferindo estatisticamente aos 14 dias de pós-operatório. Ao término dos períodos, os olhos ceratectomizados foram enucleados e as córneas submetidas a estudo morfométrico (contagem de células inflamatórias, contagem de pontos de colágeno, contagem de fibroblastos e mensuração da espessura do epitélio e estroma corneais), histoquímico (Alcian Blue pH 1.0 e Alcian Blue pH 2.5), de análise digital (avaliação cromática tridimensional de superfície) e imunoistoquímico (expressão da fibronectina e da tenascina). Relativamente à contagem das células inflamatórias, observou-se maior quantitativo nos animais do grupo BV, durante os quatro períodos avaliados. Relativamente aos pontos de colágeno, observou-se nas córneas dos animais do grupo BV, um maior número de pontos nos quatro períodos avaliados, havendo diferença estatística, comparativamente aos valores das áreas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The effects of Bandvet® on corneal repair was studied after superficial keratectomy. Sixteen adult cross-breed dogs were used, being eight treated with Bandvet® (BV) and eight with saline 0.9% (CO). Daily clinical evaluations were accomplished 3, 7, 14 and 28 days in the post-operative period. Blepharospasm, conjuntival congestion, ocular discharge, photofobia, vascularization, pigmentation, and corneal edema were assessed by means of clinical scores. Blepharospasm and photofobia were noted at early stages of the post-operative period. Conjunctival congestion and ocular discharge changed significantly at day 7 of the post-operative period. Vascularization advanced axially in a constant manner in the early post-operative periods, disappearing in the late stages, only in the treated group. Corneal edema was observed in all time points in both of groups, changing significantly at day 14 of the postoperative period. At the completion of the study, keratectomized eyes were enucleated and corneas submitted to morphometrical evaluation (inflammatory cell count, collagen patches count, fibroblast count, and corneal epithelium and stromal thickness measurement) histochemistry (Alcian Blue pH 1.0 and Alcian Blue pH 2.5), digital analysis (tridimensional chromatic evaluation of the surface), and immunohistochemistry (fibronectin and tenascin labeling). During the 4 time points evaluated, inflammatory cell count was increased in the BV group. An enhanced number of collagen patches were observed in the corneas of the animals of the BV group, in the four time points evaluated, being significant in comparison to values observed in the transitional areas (P = 0.040). A higher fibroblast count was noted in the BV group at days 3, 14, 28, and 28. At day 7, however, the CO group showed higher... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Marcelo Emílio Beletti / Banca: José Octávio Jacomini / Banca: Maria Rita Pacheco / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar histologicamente as biópsias testiculares de cães obtidas por punção aspirativa por agulhas fina (PAAF) e "tru cut". Foram utilizados 40 cães, adultos, hígidos, distribuídos em 2 grupos: G1 - punção biópsia aspirativa; e G2 - biópsia com agulha "tru-cut". Cada grupo foi dividido em quatro subgrupos (Ga, Gb, Gc e Gd) com cinco animais cada, sendo estes orquiectomizados 3, 7, 14 e 62 dias após as biópsias PAAF ou "Tru-cut". O material colhido pela PAAF foi submetido à avaliação citológica, e o proveniente da biópsia "tru-cut" e orquiectomia submetidos à histopatologia. Foram avaliados os espermiogramas e mensuração de comprimento e largura do escroto e colhido o soro para pesquisa de anticorpo antiespermatozóides. Referente ao espermiograma e a mensuração do escroto não foram observados diferenças (p>0,05) significativas. A amostra direcionada para citologia e histologia obtida pelas duas técnicas foi considerada de quantidade suficiente para diagnóstico. Na histopatologia a PAAF apresentou menor área de lesão e reação inflamatória comparada a "tru cut", no entanto esta última apresentou maior quantidade de material, preservando a arquitetura dos túbulos seminíferos e interstício. Não foi observado diferença (p>0,05) na produção de anticorpos anti-espermatozóides, após as biopsias. Concluímos que apesar das biópsias fornecerem material em qualidade e quantidade adequadas, e da PAAF ter se mostrado menos traumática, a escolha da técnica a ser empregada dependerá da finalidade para o qual o material se destina. / Abstract: The aim of this study it was evaluate hystologicaly the testicular biopsies in dogs obtained by aspirative puncture by fine needle and "tru-cut". Forty males dogs, adults, healthies were used, distributed in 2 groups: G1 - Fine Needle aspiration; and G2- biopsy by "Tru-cut". Each group were shared in four groups (Ga, Gb, Gc e Gd) with 5 animals each, and all of then were orchiectomized after 3, 7, 14, 62 days after the biopsies by FNA and "tru-cut" being performed. The samples collected by FNA were submitted to cytology evaluate, and the sample from tru-cut biopsy and orchiectomy submitted to histopathology. The spermiograms were evaluated, the testicular length and with were measure, and the animal's blood were collected to the anti-sperm antibody quantification. About the spermogram and measurement of scrotal bag any significative difference was observed (p>0,05). The sample to cytology and histology obtained from two techniques showed be in quantity enough to diagnostic. In histopathology, the biopsy FNA showed smaller damage area and inflammatory reaction compared to tru-cut, however this one showed biggest quantity of material, preserving the seminiferous tubules architeture and interstitium. It was not observed significative difference at anti-sperm antibodies production. We concluded that althought the biopsies provide material in quantity and quality appropriate, and the PAAF showed less traumatic, the choose of the technique to be used will depend the purpose for which the material is intended. / Doutor

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Marileda Bonafim Carvalho / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Maria Angélica Dias / Resumo: A análise do líquido cerebrospinal demonstra ser uma ferramenta complementar viável e eficaz ao exame clínico-patológico do sistema nervoso, especialmente auxiliando no diagnóstico e prognóstico das suas inúmeras enfermidades. Porém, as variáveis apreciadas ao exame de rotina do liquor, nem sempre propiciam a detecção de anormalidades sutis frente a algumas situações neuropatológicas agudas, como por exemplo, nas viroses. Sendo assim, se faz necessário o aprofundamento do estudo do liquor com o escopo de se buscar técnicas mais sensíveis à identificação de alterações estruturais do tecido nervoso, bem como à avaliação do prognóstico do quadro clínico. E, recentemente, tem sido utilizada com sucesso em humanos a avaliação de marcadores bioquímicos, dentre os quais as atividades enzimáticas liquóricas da creatina quinase, lactato desidrogenase e aspartato aminotransferase. Sendo assim, idealizou-se o projeto de pesquisa, em tela, com o objetivo de se avaliar amostras liquóricas de cães acometidos por cinomose, com atenção especial às atividades enzimáticas, e sua correlação com achados histopatológicos do sistema nervoso central. Para tanto, foram colhidas amostras de LCR de 10 cães neurologicamente sadios e de 20 cães na fase neurológica da cinomose, as quais foram analisadas segundo a coloração, o aspecto, o pH, a densidade, a taxa de proteínas liquóricas totais e as atividades enzimáticas da lactato desidrogenase, da aspartato aminotransferase e da creatina quinase total e sua isoenzima CK-BB. Ademais fragmentos do encéfalo e medula espinhal também foram colhidos para posterior avaliação histopatológica. Os resultados obtidos foram capazes de demonstrar, principalmente a origem neurológica do aumento das atividades enzimáticas liquóricas, principalmente da CK e, ainda, a correlação entre o grau... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Evaluation of the cerebrospinal fluid is an important and efficient tool in the clinical-pathologic examination of the central nervous system, helping in the diagnosis and prognosis of several disorders. However, the variables presented in the cerebrospinal fluid not always allow the detection of acute neuropathology, such as viruses. It is necessary more studies with the purpose to obtain more sensitive techniques to identify structural changes in the nervous system, as well as the evaluation and prognosis of clinical signs. Recently, the evaluation of biochemical ma rkers , such as cerebrospinal enzyme activity, lactate dehidrogenase and aspartate aminotransferase, has been used in humans. Thus, the aim of the present study is to evaluate cerebrospinal samples of dogs with canine distemper, with focus on enzymatic activity and its correlation with histopathological finding of the central nervous system. For that purpose, samples of the CSF were collected from 10 dogs clinically healthy and 20 dos presenting neurological signs of canine distemper. The samples were evaluated for color, aspect, pH, density, total protein in CSF and enzyme activities (Iactate dehidrogenase, aspartate aminotransferase and total creatine kinase and its isoenzyme CK-BB). Moreover, fragments of the brain and spinal marrow were collected for histopathological evaluation. The results were capable to demonstrate the neurological origin of the increase in CSF enzyme activities, especially of CK and also the correlation between the degree of enzyme activities and the extent of desmielinizing injury found in the central nervous system. / Doutor

Orientadora: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Fernando Luiz de Lucca / Banca: Maria Célia Bertolini / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Resumo: O presente estudo objetivou clonar e analisar a expressão do gene p28 da amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis e avaliar sua utilização no diagnóstico molecular e sorológico da erliquiose canina. A PCR, baseada no gene p28 de E. canis, foi capaz de detectar o DNA de um único parasita entre um bilhão de células. Amostras sangüíneas de cães com suspeita clínica de erliquiose foram testadas pela PCR, baseada no gene p28 e pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA. O fragmento amplificado do gene p28 foi observado em 51,25% (n=41) das 80 amostras examinadas, e todas elas foram positivas para o gene 16S rRNA de E. canis, entretanto, em outros 21,25% (n=17) das amostras apenas o gene 16S rRNA foi detectado. A caracterização molecular do gene p28 mostrou similaridade com outras amostras de E. canis. Para a expressão da proteína recombinante P28, foram testados dois sistemas diferentes com linhagens de Escherichia coli BL21(DE3), BL21 Star(DE3)pLysS, BL21(DE3) pLysS e BL21-CodonPlus(DE3)-RIL. A análise pelo Western-blotting revelou reatividade de várias frações protéicas com anticorpo policlonal anti-E. canis. Porém, quando a membrana foi incubada com anticorpo monoclonal para detecção de moléculas de histidina, não houve reatividade, mostrando a ausência de expressão da proteína P28. / Abstract: The aim of this study was to clone and express the p28 gene of Ehrlichia canis Jaboticabal strain and evaluate its application in molecular and serological diagnosis of canine ehrlichiosis. The p28-based PCR was able to detect E. canis DNA of one parasite among one billion cells. Blood samples from dogs for which a diagnosis of canine ehrlichiosis was suspected were tested by p28-based PCR and by 16S rRNA-based nested PCR. Amplified fragment from p28 gene were observed in 51.25% (n=41) among 80 assayed samples and all of this positive samples were also positives for 16S rRNA gene of E. canis, however in 21.25% (n=17) only 16S rRNA gene was detected. The molecular characterization of p28 gene showed similarity with others strains of E. canis. Expression of P28 recombinant protein was tested with two different systems and in Escherichia coli BL21(DE3), BL21 Star(DE3)pLysS, BL21(DE3) pLysS and BL21-CodonPlus(DE3)-RIL strains. After expression induction, Westernblotting showed reactivity of some protein fractions against anti-E. canis antibodies. However, when samples were incubated with anti-histidine monoclonal antibodies, they did not react, demonstrating non-expression of P28 protein. / Doutor