Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-03-06T13:14:08Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Lucas Frederico de Almeida.pdf: 7866748 bytes, checksum: c6c7f11d9447181d9a6b3340df160336 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T12:36:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Lucas Frederico de Almeida.pdf: 7866748 bytes, checksum: c6c7f11d9447181d9a6b3340df160336 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T12:36:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Lucas Frederico de Almeida.pdf: 7866748 bytes, checksum: c6c7f11d9447181d9a6b3340df160336 (MD5) / NIH;FAPESB / Estudos prévios têm demonstrado um papel para os genes de cura de lesão na resolução das lesões cutâneas causadas por espécies de Leishmania em camundongos e humanos, incluindo o gene FLI1 (Friend leukemia vírus integration 1). O alto grau de metilação de ilhas CpG na região promotora do gene FLI1 é conhecido por tornar o gene transcricionalmente inativo. Redução da expressão de FLI1 resulta na regulação positiva dos genes COL1A1 (collagen type I alpha 1) e COL1A2 (collagen type I alpha 2), e, inversamente, na regulação negativa do gene MMP1 (matrix metallopeptidase 1). Ambos, colágeno do tipo 1 e metaloproteinase de matriz 1, desempenham um importante papel nas condições fisiológicas normais e patológicas de muitas doenças, e estão envolvidos no reparo de lesões. Adicionalmente, em estudo prévio, foi mostrada uma associação entre leishmaniose e um polimorfismo regulatório no gene IL6 (interleukin 6), e dados na literatura sugerem uma interação funcional entre IL6 e FLI1. Para entender melhor o papel desta via na leishmaniose, nós avaliamos o polimorfismo dos genes COL1A1, COL1A2 e MMP1 e sua possível associação com a leishmaniose tegumentar americana na população de Corte de Pedra, Bahia, assim como também avaliamos a expressão gênica de COL1A1, COL1A2, MMP1, FLI1, e o grau de metilação em ilhas CpG da região promotora deste último gene em biópsias de pele e em culturas de macrófagos infectados por Leishmania braziliensis. No estudo de associação genética, FBAT (Family-based association tests) mostrou uma forte associação entre os marcadores COL1A1_rs1061237 (P = 0,002) e COL1A1_rs2586488 (P = 0,027) e o fenótipo leishmaniose cutânea. O estudo com biópsias de pele revelou que a porcentagem de DNA metilado na região promotora de FLI1 foi mais baixa (P = 0,001) em biópsias de lesão de leishmaniose cutânea comparadas com biópsias de pele normal. A expressão gênica de FLI1 e de COL1A1 não diferiu entre as biópsias de lesão e as biópsias de pele normal, enquanto a expressão de COL1A2 foi menor (P = 0,033) e a expressão de MMP1 foi maior (P = 0,0002) nas biópsias de lesão de leishmaniose cutânea. Por fim, a análise da expressão gênica em macrófagos infectados mostrou que a expressão de FLI1 induzida pela infecção por Leishmania braziliensis teve um pico com 24 horas de infecção (P < 0,0001), e foi maior (P = 0,005) e teve um pico mais tardio (48 horas) na presença de IL-6. A expressão de genes de colágeno do tipo 1, COL1A1 e COL1A2, foi baixa em macrófagos infectados, e não foi detectável em macrófagos tratados com IL-6. A expressão de MMP1 foi fortemente induzida (P = 0,007) após infecção de macrófagos, mas não foi facilmente detectável em macrófagos tratados com IL-6 até 72 horas de infecção, quando o efeito da IL-6 na expressão de FLI1 diminuiu. MMP1 quebra o colágeno do tipo 1 intersticial, que é essencial para a migração de queratinócitos e o processo de re-epitelização. Porém, em lesões ativas de leishmaniose cutânea, baixos níveis de colágeno do tipo 1 junto com a exagerada expressão de MMP1 indica que o MMP1 está contribuindo para o dano tecidual em vez de levar ao reparo. Similarmente, foi observado que níveis exagerados de MMP1 contribuem para a destruição do tecido e progressão para a doença na tuberculose, levando outros autores a destacar o MMP1 como potencial alvo terapêutico. Nossos dados sugerem que a modulação desta via pode também ser relevante no tratamento da leishmaniose cutânea.

UCHOA, Paula Karina Santos. Estudo do potencial químico-farmacológico de metabólitos secundários de fungos da Costa Cearense: Aspergillus niger. 2017. 2011 f. Tese (Doutorado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-02-08T20:45:42Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_pksuchoa.pdf: 16649275 bytes, checksum: ef700c069cae733143409f052e0350e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-02-10T21:07:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_pksuchoa.pdf: 16649275 bytes, checksum: ef700c069cae733143409f052e0350e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T21:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_pksuchoa.pdf: 16649275 bytes, checksum: ef700c069cae733143409f052e0350e3 (MD5) Previous issue date: 2017 / EtOAc extract from the BRF074 strain (Aspergillus niger), cultivated in BD medium and isolated from sediments collected on Pecém beach (CE), showed high cytotoxic activity (77%, IC50 0,95) against the cancer cell line HCT-116 (colon). Thus, a bioguided study aiming the optimization of the culturing conditions of A. niger was conducted in which four different culture media were evaluated: PD (potato, dextrose), PDY (potato, dextrose and yeast), MPD (malt, peptone and dextrose) and MntPY (mannitol, peptone and yeast), in four growth periods: 07, 14, 21 and 28 days. From the cultive of A. niger in BD culture medium during 28 days, seven secondary metabolites were isolated: cyclo(4-hydroxy-L-Pro-L-Leu), cyclo(4-hydroxy-L-Pro-L-Phe), cyclo(L-Pro-L-Leu), cyclo(L-Pro-L-Phe), pseurotin D, pseurotin A and chlovalicin. The BDL culture medium (14 days) led to the isolation of the diketopiperazine cyclo(L-Pro-L-Val) and cyclopeptides malformin A and malformin C, whereas the MPD medium for 7 days provided a new compound, an ester furanic first report in the literature. Malformins A and C and the new compound were active against the cancer cell line HCT-116. A quantitative method of high performance liquid chromatography (HPLC) was developed and validated for the quantification of these cytotoxic metabolites in different nutritional media and growth periods. This method reveal that in the BDL medium, within 21 and 28 days, greater amounts of malformin A and C were produced, whereas the furanic ester was produced in higher levels in the MPD medium with 28 days. In parallel, an epigenetic study was performed using SAHA as reagent and the fungus strain LG0949. This experiment led to the isolation of the compounds phomalactone, dihydrophomalactone and acetophomalactone, acetanilide and a dimer of the SAHA. Isolation of the secondary metabolites was conducted using C18 reverse phase chromatography using a solid phase extraction cartridge and high performance liquid chromatography (HPLC). The structural characterization was done using spectrometric techniques such as mass spectrometry, nuclear magnetic resonance (1H and 13C) and infrared, in addition to comparison with literature data. / O extrato AcOEt da cepa BRF074 (Aspergillus niger), cultivada em BD e isolada a partir de sedimentos coletados na praia do Pecém (Fortaleza-CE), apresentou alta atividade citotóxica (77%; IC50 0,95) frente à linhagem de células tumorais HCT-116 (cólon). Desta forma, um estudo bioguiado de cultivo foi conduzido para este micro-organismo utilizando quatro meios de culturas distintos: BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura), MPD (malte, peptona e dextrose) e MntPL (manitol, peptona e levedura), em quatro períodos de crescimento: 07, 14, 21 e 28 dias. A partir do cultivo de A. niger em meio de cultura BD por 28 dias, foram isolados sete metabólitos secundários: ciclo(4-hidroxi-L-Pro-L-Leu), ciclo(4-hidroxi-L-Pro-L-Phe), ciclo(L-Pro-L-Leu), ciclo(L-Pro-L-Phe), pseurotin D, pseurotin A e clovalicina. O meio de cultivo BDL (14 dias) levou ao isolamento da dicetopiperazina ciclo(L-Pro-L-Val) e dos ciclopeptídeos malformina A e malformina C, enquanto que o meio MPD durante 7 dias forneceu um ester furânico, de caráter inédito na literatura. As malforminas A e C e o composto inédito apresentaram-se ativas frente a linhagem de células HCT-116. Um método quantitativo de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi desenvolvido e validado para a quantificação destes metabólitos citotóxicos em diferentes meios nutricionais e períodos de crescimento. A partir deste método, foi observado que no meio BDL, nos períodos de 21 e 28 dias as malforminas A e C foram produzidos em maior quantidade, enquanto que o ester furânico foi produzido em maiores teores no meio MPD em 28 dias. Em paralelo, foi realizado um estudo envolvendo epigenética utilizando o reagente SAHA e a cepa do fungo LG0949. A partir deste experimento foram isolados os compostos phomalactona, dihidrophomalactona e acetophomalactona, e os compostos acetanilida e dímero do reagente SAHA. O isolamento dos metabólitos secundários foi realizado através de cromatografia em fase reversa C18, utilizando cartucho para extração em fase sólida e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A caracterização estrutural foi realizada através do uso de métodos espectrométricos, tais como espectrometria de massas, ressonância magnética nuclear (1H e 13C) e infravermelho, além de comparação de dados da literatura.

Neuropeptídeos são importantes moléculas sinalizadoras cerebrais que desempenham função na regulação de memórias motivadas emocionalmente, influenciando sua aquisição, consolidação, expressão e extinção. O peptídeo liberador de gastrina se liga seletivamente a seu receptor de membrana, o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR), que atua como regulador molecular de funções cerebrais, como formação da memória, respostas emocionais e plasticidade sináptica. Evidências apontam para uma possível interação funcional entre GRPR e o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), neurotrofina envolvida em processos comuns ao GRPR. A acetilação de histonas, tipo de modificação da cromatina indiretamente regulada pela inibição de histonas desacetilases (HDACs) e que resulta em aumento na transcrição gênica, também está associada à formação da memória no hipocampo. Com base nisso, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma possível interação entre o bloqueio de GRPR e a regulação da cromatina pela inibição de HDACs na consolidação e na extinção da memória aversiva, bem como nos níveis hipocampais de BDNF e de acetilação da histona H3. Ratos Wistar machos receberam infusões bilaterais no hipocampo dorsal de salina ou do inibidor de HDACs butirato de sódio (NaB; 100 mM) e de salina ou do antagonista de GRPR RC-3095 (1μg/0,5μl), respectivamente, antes e imediatamente após o treino na tarefa de esquiva inibitória. Em um segundo experimento, as infusões das mesmas drogas foram realizadas antes e imediatamente após o teste de retenção que serviu como treino de extinção. Os efeitos prejudiciais sobre a consolidação e sobre a extinção da memória aversiva induzidos pelo RC-3095 foram prevenidos pela infusão de NaB. Além disso, observou-se aumento no BDNF hipocampal após infusões de NaB seguidas de RC-3095, embora nenhuma alteração tenha sido observada nos níveis de H3 acetilada após esses tratamentos. Esses resultados indicam que os efeitos prejudiciais induzidos pelo bloqueio de GRPR na formação e na extinção da memória aversiva podem ser prevenidos pela inibição de HDACs, e que este efeito protetor pode ser relacionado a níveis hipocampais aumentados de BDNF. Em conclusão, uma disfunção na via de sinalização por GRP/GRPR pode ser compensada por mecanismos epigenéticos para possibilitar processos relacionados à memória no hipocampo. / Neuropeptides are important brain signaling molecules that play a role in the regulation of emotionally-motivated memories, influencing their acquisition, consolidation, expression and extinction. Gastrin-releasing peptide selectively binds to its membrane receptor, the gastrin-releasing peptide receptor (GRPR), which acts as a molecular regulator of brain functions, including memory formation, emotional responses and synaptic plasticity. Findings suggest a possible functional interaction between GRPR and brain-derived neurotrophic factor (BDNF), a neurotrophin involved in common processes to GRPR. Histone acetylation, a type of chromatin modification indirectly regulated by the inhibition of histone deacetylases (HDACs) that results in an increase in gene transcription, has been also associated to memory formation in the hippocampus. Based on this, the objective of the present study was to evaluate a possible interaction between GRPR blockade and chromatin regulation by the inhibition of HDACs in the consolidation and extinction of aversive memory, as well as on hippocampal BDNF and acetylated histone H3 levels. Male Wistar rats received bilateral infusions into the dorsal hippocampus of saline or the HDAC inhibitor sodium butyrate (NaB; 100 mM) and saline or the GRPR antagonist RC-3095 (1μg/0.5-μl), respectively, before and immediately after the training in inhibitory avoidance. In a second experiment, the infusions of the same drugs were given before and immediately after a retention test trial that served as extinction training. RC-3095-induced impairing effects on consolidation and extinction of aversive memory were prevented by the infusion of NaB. In addition, it was observed an increase in hipoccampal BDNF after infusions of NaB followed by RC-3095, whereas no effect was observed in H3 acetylated levels after these treatments. The results suggest that impairing effects induced by GRPR blockade on formation and extinction of aversive memory can be prevented by HDAC inhibition, and that this protective effect could be related to increased hippocampal BDNF levels. In conclusion, a dysfunction in GRP/GRPR signaling pathway can be compensated by epigenetic mechanisms to allow processes related to memory in hippocampus.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-24. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:01Z : No. of bitstreams: 1 000854407_20170724.pdf: 663761 bytes, checksum: 60eaa36c360bd21a72c549385424c3ff (MD5) Bitstreams deleted on 2017-07-24T11:34:16Z: 000854407_20170724.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-07-24T11:35:24Z : No. of bitstreams: 1 000854407.pdf: 8174488 bytes, checksum: 9e24d2d63d9e50b4f003bc5a41502cda (MD5) / Os fungos são considerados fontes promissoras de compostos bioativos com potencial aplicação na indústria alimentícia, agricultura e medicina, e de fato, diversos medicamentos utilizados na saúde pública são originárias de fungos. Estes são encontrados em vários ecossistemas, entre os quais podemos citar os que vivem no interior das espécies vegetais. Estes micro-organismos são denominados de endófitos e tem se revelado uma fonte promissora de metabólitos bioativos. Dentro deste contexto, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico dos extratos produzidos pelos fungos endofíticos Camarops sp., Periconia atropurpurea e Pseudofusicoccum stromaticum isolados de espécies vegetais do Cerrado e, o estudo epigenético de Phoma sp. isolado de espécie vegetal do Deserto de Sonora, utilizando no cultivo o modificador epigenético SAHA. Estes endófitos foram cultivados em escala reduzida em meios de cultivo líquidos e sólidos para obtenção dos extratos brutos, os quais foram submetidos a análises químicas (CCDC, HPLC e RMN de 1H) e biológicas (antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico). Todos os extratos brutos apresentaram pelo menos uma atividade biológica, o que adicionado às análises químicas permitiram selecionar os meios de cultivo adequados para o crescimento em escala ampliada e, isolamento dos metabólitos secundários. Do cultivo de Camarops sp. no meio sólido de Milho isolou-se cinco substâncias, das quais quatro são inéditas 3-((1S,2S)-1,2-dihidroxibut-3-enil)-4-((E)-pent-1-enil)furan-2(5H)-ona (1), 3, 5, 9-trihidroxi presilfiperfolano (2), deacetilbotridial (3), ácido (E)-2,4-dimetilocta-2-enóico (4) e, ácido (E)-2,4-dimetilnon-2-enóico (5), os compostos 4 e 5 foram ativos na inibição da enzima acetilcolinesterase. Do extrato, obtido do meio líquido de Malte, de... / Fungi are considered promising sources of bioactive compounds with potential application in the food, agriculture and medicine industry, and in fact, many drugs used in public health originate from fungi. These are found in various ecosystems, among which we can mention those who live inside the plant species. These microorganisms are called endophytes and have proved to be a promising source of bioactive metabolites. Within this context, this work was carried out, aiming to obtain potentially bioactive substances from chemical and biological study of extracts produced by the endophytic fungi Camarops sp., Periconia atropurpurea and Pseudofusicoccum stromaticum isolated from plant species of the Cerrado and epigenetic studies of Phoma sp. isolated from plant species of the Sonoran Desert using in cultivation the epigenetic modifier SAHA. These endophytes were grown on small scale in liquid culture media and solid to obtain the crude extract. These were subjected to chemical analysis (TLC, HPLC and 1H NMR) and biological (antifungal, anticholinesterase and cytotoxic). All crude extracts showed at least one biological activity, which added the chemical analysis allowed to select the culture medium of appropriate for growth in large scale and isolation of secondary metabolites. The growing of Camarops sp. in solid medium of corn were isolated five compounds of which four are new 3-((1S,2S)-1,2-dihydroxybut-3-enyl)-4-((E)-pent-1-enyl)furan-2(5H)-one (1), 3, 5, 9-trihydroxy presilphiperfolane (2), deacetyl-botrydial (3), (E)-2, 4-dimetilocta-2-enoic acid (4), and (E)-2, 4-dimetilnon-2-enoic acid (5), compounds 4 and 5 were active in inhibiting the enzyme acetylcholinesterase. From the extract obtained from the liquid medium Malt, of P. atropurpurea were isolated the compounds 4,5-diethyl-3,4,5,6-tetrahydrobenzo[c][1,6]dioxecine-1,8-dione (6) and periconicina B (7). From the cultivation of P. stromaticum...

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:10Z : No. of bitstreams: 1 000834777.pdf: 1430364 bytes, checksum: 30261e6b5ab8b049a5f878857b3d4bc3 (MD5) / Estresse por calor durante a criação altera o desempenho e as características morfofuncionais de frangos de corte. Programação térmica fetal tem se mostrado efetiva na indução de características adaptativas ao calor na incubação, aumentando a termotolerância das aves no período pós-eclosão, por meio de adaptação epigenética. O presente estudo analisou os efeitos da exposição à temperatura de incubação fria ou quente durante a fase fetal sobre as características morfofisiológicas de pintos na eclosão e de frangos criados sob temperatura de preferência, recomendada para a linhagem ou alta. No Capítulo 1 é apresentada uma abordagem teórica sobre o tema. No Capítulo 2 são abordados os efeitos da temperatura fria ou quente durante a fase fetal sobre parâmetros de incubação (temperatura da casca dos ovos e eclodibilidade), temperatura de preferência e características do pinto recém-eclodido (peso corporal e dos órgãos, características da pele e das penas, temperatura superficial corporal e retal e concentração plasmática de T3, T4 e GH). Para isso, ovos férteis de matrizes de frangos de corte (Cobb 500®) foram incubados a partir do 13° dia à temperatura fria (36°C), controle (37,5°C) ou quente (39°C). Os dados mostram que exposição ao frio diminuiu a temperatura superficial corporal, a vascularização da pele e a concentração plasmática de T3 e GH. Por outro lado, exposição ao calor aumentou a eclodibilidade dos ovos, a temperatura superficial corporal e a vascularização dérmica, reduziu a espessura da pele e aumentou a temperatura de preferência dos pintos. No Capítulo 3 foi estudado se a exposição à temperatura fria ou quente de incubação altera a temperatura de preferência e resposta ao estresse dos frangos ao longo da criação. Para isso, foi adotado o mesmo protocolo de incubação utilizado no Capítulo 1. Após a eclosão, as aves foram alojadas em câmara climática com... / Heat stress changes the performance and morphological and functional characteristics of broilers. Thermal programming during fetal development has been shown to be effective in the induction of adaptive characteristics to heat, increasing the thermotolerance of the birds during the post-hatching period by epigenetic adaptation. This study examined the effects of exposure to cold or hot incubation temperature during the fetal stage on the physical and physiological characteristics of chicks, at hatching, and chickens reared under preferred, recommended or high temperature. In Chapter 1 we present a theoretical approach to the topic. In Chapter 2, the effects of cold or hot temperature during the fetal stage on incubation parameters (temperature, eggshell and hatchability), preferred ambient temperature and characteristics of newly hatched chicks (body and organs weight, skin and feathering characteristics, body surface and rectal temperature and plasma T3, T4 and GH concentrations) were examined. For this, hatching eggs from a commercial broiler breeder flock (Cobb 500®) were exposed from day 13 of incubation to cold (36°C), control (37.5°C) or hot (39°C) temperature. The data show that exposure to cold reduced body surface temperature, skin vascularity and plasma T3 and GH concentrations. Moreover, exposure to hot increased eggs hatchability, body surface temperature and dermal vascularity, reduced skin thickness and increased thermal preference of the chicks. In Chapter 3 was studied whether exposure to cold or hot incubation temperature alters preferred ambient temperature and response to heat stress of broilers along rearing phase. For this, we adopted the same incubation protocol used in Chapter 1. After hatching, the birds were housed in climatic chamber with temperature set to the recommended values for the line. Weekly, during the six weeks of rearing, thermal preference and response to heat stress of birds were ...

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:49:04Z : No. of bitstreams: 1 000844399_20160223.pdf: 224797 bytes, checksum: eac9ea801964c01cce92113640cd3a45 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-24T11:27:46Z: 000844399_20160223.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-24T11:28:32Z : No. of bitstreams: 1 000844399.pdf: 789622 bytes, checksum: 305923b9824e29cd4093940a21443c11 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Síndromes Mielodisplásicas (SMD) ou mielodisplasias compreendem um conjunto heterogêneo de doenças hematopoéticas caracterizadas por hematopoese ineficaz, que geralmente apresentam citopenias no sangue periférico, diferenciação celular displásica e propensão ao desenvolvimento de leucemia mielóide aguda. São classificadas em vários tipos e a incidência anual é estimada entre quatro casos por 100.000 pessoas da população em geral, e em até 50 casos por 100.000 indivíduos com idades avançadas. A análise cromossômica das células da medula óssea (MO) ao diagnóstico detecta alterações relacionadas com diagnóstico e prognóstico, mas alguns genes também já foram relacionados à etiologia das mielodisplasias, por apresentarem mutações e alterações epigenéticas que podem resultar em alterações na hematopoese. O gene FOXO3, um supressor de tumor, é um dos genes que mais se expressa no tecido hematopoético normal, o que faz dele um possível candidato ao envolvimento na etiopatogenia das doenças da MO. Entretanto, não foram encontrados estudos sobre FOXO3 em SMD. Alterações neste gene poderiam resultar em hematopoese anormal. O objetivo deste trabalho foi estudar células da MO de 100 indivíduos com SMD de qualquer tipo, ao diagnóstico, para investigar mutações no éxon 1 e o padrão de metilação da região promotora do FOXO3, além da presença de alterações cromossômicas. Para a análise molecular foi extraído o DNA, realizada à amplificação gênica por PCR e realizado o sequenciamento direto do éxon 1; para o estudo epigenético, foi feita a conversão do DNA por bissulfito e a MSP-PCR, e a análise citogenética foi realizada em metáfases submetidas ao bandamento GTG. No éxon 1 foi observado o polimorfismo 159C>T em 26% pacientes e em 16% controles, o que não diferiu estatisticamente (p>0,05). O estudo do padrão de metilação da ilha CpG estudada da... / Myelodysplastic syndromes (MDS) or myelodysplasia constitute a heterogeneous group of hematopoietic diseases characterized by ineffective hematopoiesis usually withperipheral bloodcytopenias, dysplastic cell differentiationanda tendency to evolve toacute myeloid leukemia. They are classified invarious typesand the annual incidence is estimated at between four cases per 100,000 individualsin the general population and up to 50 cases per 100,000 with advanced ages. A chromosomal analysis of bone marrow cells at diagnosis identifie schanges related with diagnosis and prognosis, but some genes are also associated to the etiology of myelodysplasia, for presenting mutations and epigenetic changes that may result in alteration in hematopoiesis. The FOXO3 gene, tumor suppressor, isone of the most commonly expressed genesin normal hematopoietic tissue, which makes it a possible candidate for involvement in the pathogenesis of diseases of the bone marrow. However, no studies were found on FOXO3in MDS. The changesin this genecould there for eresultina b normalhe matopoiesis. The aim of this work was to study bone marrow cells from 100 patients diagnosed with anytypeof MDS, to investigate mutations in exon 1 and the methylation pattern of FOXO3 promoter region, and the presence of chromosomal alterations. For molecular analysis, DNA was extracted, gene amplification was achieved bypolymerase chain reaction and direct sequencing of exon 1 was performed, for epigenetic study, the bisulfite conversion of DNA, and subsequently carrying out the MSP -PCR was performed, and cytogenetic analysis was performed on metaphases submitted to GTG banding. Inexon 1 was observed the 159C > Tpolymorphismin 26% patients andin 16% healthy controls, wich not statistically significant (p>0,05)...

Submitted by ADAUTO LIMA CARDOSO null (adautolimacardoso@gmail.com) on 2017-08-07T20:31:46Z No. of bitstreams: 1 Tese_Final_Adauto.pdf: 1788431 bytes, checksum: 257f753cdae88b1e8797c0626e99bb5a (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-08-10T20:17:23Z (GMT) / Submitted by ADAUTO LIMA CARDOSO null (adautolimacardoso@gmail.com) on 2017-08-17T14:38:48Z No. of bitstreams: 1 Tese_Final_Adauto.pdf: 2278150 bytes, checksum: 6afc73dfaadceeb6d4aa47ea2b6cb566 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-23T14:20:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cardoso_al_dr_bot.pdf: 2278150 bytes, checksum: 6afc73dfaadceeb6d4aa47ea2b6cb566 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-23T14:20:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cardoso_al_dr_bot.pdf: 2278150 bytes, checksum: 6afc73dfaadceeb6d4aa47ea2b6cb566 (MD5) Previous issue date: 2017-06-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cromossomos supernumerários são polimorfismos numéricos frequentemente registrados em eucariotos, sendo que seus efeitos são pouco elucidados. Em alguns indivíduos da espécie Astatotilapia latifasciata pode-se identificar um ou dois cromossomos B, que são totalmente heterocromáticos e ricos em sequências repetitivas. Em vista de compreender sua origem, evolução e efeitos, este elemento vem sendo largamente explorado por técnicas integradas de citogenética, biologia molecular e genômica. Aqui, explorou-se o padrão de marcas epigenéticas do DNA deste cromossomo B e seus efeitos nas vias de metilação do DNA e de formação de tRFs. Usando-se imunocitogenética, ferramentas de bioinformática, quantificação global de 5mC e 5hmC e RT-qPCR, identificou-se que o cromossomo B de A. latifasciata possui padrão epigenético ativo e que não é um isocromossomo. Além disso, foram observados efeitos heterogêneos deste cromossomo na expressão de epi-miRNAs candidatos, de genes de modificações epigenéticas do DNA e de genes relacionados com a formação de tRFs. Como consequência, também foram registrados efeitos de cromossomos B nos níveis globais de 5mC e 5hmC e na formação de tRFs. Essas variações observadas parecem estar relacionadas com os mecanismos de manutenção do cromossomo B e estão em desacordo com a difundida ideia de que ele seja um elemento inerte. / Supernumerary B chromosomes are numerical polymorphisms frequently registered in eukaryotes, and their effects are not elucidated. In some individuals of the species Astatotilapia latifasciata one or two B isochromosomes can be identified, which are totally heterochromatic and enriched by repetitive sequences. In order to understand its origin, evolution and effects, this element has been widely explored by integrated techniques of cytogenetics, molecular biology and genomics. Here, the pattern of epigenetic marks of the DNA of this B chromosome and its effects on the pathways of DNA methylation and formation of tRFs. Using immunocytogenetics, bioinformatics tools, global quantification of 5mC and 5hmC and RT-qPCR, it was identified that the B chromosome of A. latifasciata has active epigenetic pattern and it is not an isochromosome. In addition, heterogeneous effects of this chromosome were observed in the expression of candidate epi-miRNAs, genes of epigenetic modifications of DNA and genes related to the formation of tRFs. As a consequence, effects of B chromosomes were also registered at the global levels of 5mC and 5hmC and in the formation of tRFs. These variations appear to be related to the maintenance mechanisms of chromosome B and are in opposition with the widespread idea that they are inert elements. / FAPESP: 2012/21546-9 / FAPESP: 2016/07743-7

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-16Bitstream added on 2014-06-13T19:38:28Z : No. of bitstreams: 1 000748839.pdf: 1424826 bytes, checksum: 8b005873ea1e668e7352dd202f004baf (MD5) / A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma biotecnologia de grande impacto econômico por maximizar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores resultando em maior eficiência reprodutiva. Apesar dos avanços da PIVE, a porcentagem de embriões que se desenvolvem ainda são inferiores aos produzidos in vivo. Epigenética é a regulação da expressão gênica sem alteração na sequência do DNA. Mecanismos epigenéticos, como o remodelamento das histonas, controlam expressão gênica e são fundamentais para o correto desenvolvimento embrionário. Dessa forma, modificações específicas nas histonas podem reprimir ou estimular a transcrição gênica. Os mecanismos epigenéticos são vulneráveis aos fatores ambientais, assim, os sistemas de cultivo in vitro podem ter um impacto no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Dada a importância e a aplicabilidade da PIVE como biotecnologia reprodutiva, o papel vital dos mecanismos epigenéticos durante o desenvolvimento embrionário, e a importante correlação entre as condições de cultivo embrionário e o perfil epigenético, o presente estudo investigou a influência de diferentes condições de cultivo durante o desenvolvimento embrionário por meio da utilização de diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB) (0% ou 2,5%) e diferentes tensões de oxigênio (O2) (5% ou 20%) durante o cultivo embrionário in vitro (CIV) na regulação epigenética, especificamente no remodelamento das histonas H3K9me2 (repressiva) e H3K4me2 (permissiva) de embriões bovinos produzido in vitro. Para este fim, foram delineados quatro tratamentos durante o cultivo embrionário. T1: embriões foram cultivados em meio de cultivo “Synthetic Oviduct Fluid” (SOF) com 0% SFB sob tensão de 5% de O2; T2: embriões foram cultivados em meio SOF com 2,5% SFB sob... / In vitro production (IVP) of bovine embryos is a biotechnology of great economic impact, as it maximizes the reproductive potential of genetically superior animals, resulting in greater reproductive efficiency. Despite advances in technology in IVP, the percentage of embryos that develop to the transfer stage is still inferior to those seen in vivo. Epigenetics is the regulation of gene expression without altering DNA sequence. Epigenetic processes, such as histone remodeling, control gene expression and are essential for proper embryo development. Specific histone modifications can repress or stimulate gene transcription. Epigenetic mechanisms are under intense environmental control, therefore in vitro culturing systems can impact the expression patterns of genes that support pre-implantation embryo development. Given the importance of IVP as a reproductive biotechnology, the role of epigenetic processes during embryo development, as well the important correlation between culture conditions and epigenetic patterns, the present study was designed to investigate the influence of different culture conditions on embryo development, through the use of different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (0% and 2,5%) and different oxygen tensions (O2) (5% and 20%) during in vitro culture, in epigenetic regulation, specifically in the histone remodeling H3K9me2 (repressive) and H3K4me2 (permissive) marks, in bovine embryos produced in vitro. Four treatments were designed and utilized during embryo culture: T1: embryos were cultured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) media with 0% FBS, under 5% O2 tension; T2: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 5% O2 tension; T3: embryos were cultured in SOF media with 0% FBS, under 20% O2 tension and T4: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 20% O2 tension. Cleavage and expanded blastocyst development rates were evaluated, as ...

Orientador: Angela Regina Araujo / Banca: Ana Helena Januário / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Banca: Geraldo Humberto Silva / Banca: Afonso Duarte Leão de Souza / Resumo: Os fungos são considerados fontes promissoras de compostos bioativos com potencial aplicação na indústria alimentícia, agricultura e medicina, e de fato, diversos medicamentos utilizados na saúde pública são originárias de fungos. Estes são encontrados em vários ecossistemas, entre os quais podemos citar os que vivem no interior das espécies vegetais. Estes micro-organismos são denominados de endófitos e tem se revelado uma fonte promissora de metabólitos bioativos. Dentro deste contexto, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico dos extratos produzidos pelos fungos endofíticos Camarops sp., Periconia atropurpurea e Pseudofusicoccum stromaticum isolados de espécies vegetais do Cerrado e, o estudo epigenético de Phoma sp. isolado de espécie vegetal do Deserto de Sonora, utilizando no cultivo o modificador epigenético SAHA. Estes endófitos foram cultivados em escala reduzida em meios de cultivo líquidos e sólidos para obtenção dos extratos brutos, os quais foram submetidos a análises químicas (CCDC, HPLC e RMN de 1H) e biológicas (antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico). Todos os extratos brutos apresentaram pelo menos uma atividade biológica, o que adicionado às análises químicas permitiram selecionar os meios de cultivo adequados para o crescimento em escala ampliada e, isolamento dos metabólitos secundários. Do cultivo de Camarops sp. no meio sólido de Milho isolou-se cinco substâncias, das quais quatro são inéditas 3-((1S,2S)-1,2-dihidroxibut-3-enil)-4-((E)-pent-1-enil)furan-2(5H)-ona (1), 3, 5, 9-trihidroxi presilfiperfolano (2), deacetilbotridial (3), ácido (E)-2,4-dimetilocta-2-enóico (4) e, ácido (E)-2,4-dimetilnon-2-enóico (5), os compostos 4 e 5 foram ativos na inibição da enzima acetilcolinesterase. Do extrato, obtido do meio líquido de Malte, de... / Abstract: Fungi are considered promising sources of bioactive compounds with potential application in the food, agriculture and medicine industry, and in fact, many drugs used in public health originate from fungi. These are found in various ecosystems, among which we can mention those who live inside the plant species. These microorganisms are called endophytes and have proved to be a promising source of bioactive metabolites. Within this context, this work was carried out, aiming to obtain potentially bioactive substances from chemical and biological study of extracts produced by the endophytic fungi Camarops sp., Periconia atropurpurea and Pseudofusicoccum stromaticum isolated from plant species of the Cerrado and epigenetic studies of Phoma sp. isolated from plant species of the Sonoran Desert using in cultivation the epigenetic modifier SAHA. These endophytes were grown on small scale in liquid culture media and solid to obtain the crude extract. These were subjected to chemical analysis (TLC, HPLC and 1H NMR) and biological (antifungal, anticholinesterase and cytotoxic). All crude extracts showed at least one biological activity, which added the chemical analysis allowed to select the culture medium of appropriate for growth in large scale and isolation of secondary metabolites. The growing of Camarops sp. in solid medium of corn were isolated five compounds of which four are new 3-((1S,2S)-1,2-dihydroxybut-3-enyl)-4-((E)-pent-1-enyl)furan-2(5H)-one (1), 3, 5, 9-trihydroxy presilphiperfolane (2), deacetyl-botrydial (3), (E)-2, 4-dimetilocta-2-enoic acid (4), and (E)-2, 4-dimetilnon-2-enoic acid (5), compounds 4 and 5 were active in inhibiting the enzyme acetylcholinesterase. From the extract obtained from the liquid medium Malt, of P. atropurpurea were isolated the compounds 4,5-diethyl-3,4,5,6-tetrahydrobenzo[c][1,6]dioxecine-1,8-dione (6) and periconicina B (7). From the cultivation of P. stromaticum... / Doutor

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Marilia de Freitas Calmon Saiki / Banca: Wilson Araújo da Silva Junior / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Flávia Cristina Rodrigues Lisoni / Resumo: O carcinoma renal de células claras (ccRCC) é o mais comum dos subtipos histológicos de carcinoma renal. Este carcinoma é histologicamente caracterizado pela presença de células com citoplasma claro e abundante. O processo inicial de metástase pode ser atribuída à transição epitélio mesênquima (EMT). Neste estudo, buscou-se identificar genes diferencialmente expressos em ccRCC, construindo assim um perfil molecular para este tumor. Nós selecionamos genes descritos na literatura que apresentam relação com EMT, diferenciação e proliferação celular. Analisou-se por PCR quantitativo e imuno-histoquímica a expressão dos genes e suas proteínas, respectivamente, e os possíveis mecanismos epigenético que regulam a sua expressão em amostras de ccRCC e linhagem celular. Os genes OCLN e GAS1 foram encontrados com baixa expressão em ccRCC, e nós sugerimos que o miR-122 e miR- 34a podem regular sua expressão, respectivamente, neste tipo de câncer. Além disso, mostramos, por qPCR e imuno-histoquímica, a alta expressão de SLC2A1 foi significantemente alta em ccRCC. O conjunto de genes identificados neste estudo possibilita a compreensão das bases moleculares e de desenvolvimento do ccRCC / Abstract: Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common histological subtype of kidney cancer. This carcinoma is histologically characterized by the presence of clear and abundant cytoplasm. The initial process of ccRCC metastatic tumor formation can be attributed to epithelial- mesenchymal transition (EMT). In this study, we sought to identify genes differentially expressed in ccRCC and build a molecular profile of this cancer. We selected genes described in the literature to be related to EMT, cellular differentiation and proliferation. We analyzed the gene and protein expression by quantitative PCR and immunohistochemistry, respectively, and examined possible epigenetic mechanisms that regulate their expression in ccRCC samples and cell lines. OCLN and GAS1 genes were under-expressed in ccRCC, and we report that miR-122 and miR- 34a, respectively, may regulate their expression in this cancer. Furthermore, we showed by quantitative PCR (qPCR) and immunohistochemistry that SLC2A1 was significantly over-expressed in ccRCC. The set of genes identified in this study furthers our understanding of the molecular basis and development of ccRCC / Doutor