Introdução e objetivos: A produção de beta-lactamases de espectro ampliado (ESBLs) tem sido restrita a espécies do gênero Klebsiella spp. e E. coli, sendo associada a altos índices de resistência, morbidade e mortalidade. Uma vez que os determinantes genéticos para ESBLs (genes blaESBL) são mediados por plasmídios, a sua disseminação para outras espécies de importância médica é considerada uma urgência epidemiológica. Os genes que codificam para ESBLs são mais comumente encontrados em membros da família Enterobacteriaceae, porém, plasmídeos, integrons, e sequências de inserção têm contribuído para o aumento da incidência de genes blaESBL entre outras bactérias Gramnegativas, incluindo Pseudomonas aeruginosa. Infelizmente, uma das maiores dificuldades associada à identificação precoce da produção de ESBL em agentes de infecção hospitalar como Pseudomonas aeruginosa tem sido a padronização de métodos fenotípicos, os quais são afetados por resultados falso-negativos, decorrentes de mecanismos intrínsecos que mascaram a presença destas enzimas (i.e., produção de beta-lactamase AmpC de origem cromossômica). O presente estudo teve como objetivo caracterizar feno e genotipicamente a produção de ESBLs em isolados clínicos de P. aeruginosa recuperados de diferentes hospitais do Estado de São Paulo durante o período de 2004-2008. Materiais e métodos: 35 amostras de P. aeruginosa provenientes de 4 diferentes centros médicos de São Paulo, com perfil de resitência às cefalosporinas de terceira geração, foram submetidas à triagem fenotípica para a produção de ESBL na presença e ausência de inibidores específicos (ácido clavulânico e cloxacilina). A confirmação genotípica foi realizada por PCR e sequenciamento, usando iniciadores para pesquisa dos genes blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, blaOXA, blaPER e blaGES, e para o mapeamento de integron Classe 1. A diversidade genética das amostras foi realizada com auxílio do método de ERIC PCR e o índice de similaridade calculado empregando-se o coeficiente de Dice. Resultados e conclusão: Os métodos fenotípicos identificaram 3 cepas produtoras de ESBL, porém, a presença dos genes blaCTX-M e blaOXA-10 foi confirmada em 9 (33%) e 2 (7%) cepas de P. aeruginosa, respectivamente, recuperadas em 3 centros. O mapeamento e seqüenciamento do integron classe 1 encontrado revelou que duas cepas carregam 2 diferentes integrons classe 1 com genes blaCTX-M-2, aac6, e aadA6 de resistência para as cefalosporinas de terceira geração e para aminoglicosídeos. A transferência horizontal dos genes blaESBL não foi confirmada por transformação. Este estudo descreve que o aparecimento e disseminação de genes blaCTX-M em isolados clínicos de P. aeruginosa no Brasil teve sua origem a partir de 2005. Uma vez que ESBLs do tipo CTX-M têm sido amplamente descritas em Enterobactérias, a identificação destes genes em isolados de P. aeruginosa é alarmante e mostra que a mobilização horizontal do gene blaCTX-M entre diferentes gêneros e espécies é uma realidade no Brasil. Os genes que conferem resistência às metilases 16s RNAr não estavam relacionados a cepa de Pseudomonas aeruginosa produtores da enzima ESBL isoladas nas amostras de São Paulo. As cepas de Pseudomonas aeruginosa do presente estudo mostraram vários elementos de mobilização genéticos, como integrons e sequências de inserção, que podem estar participando na disseminação de resistência aos antibióticos beta- lactâmicos de amplo espectro. / Introduction and aim: The production of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) has been restricted to Klebsiella spp. and Escherichia coli, being associated with high rates of resistance, morbidity and mortality. Since genetic determinants for ESBLs (blaESBL genes) are mediated by plasmids, the spread to other medical important species is considered an epidemiological urgency. These genes encoding ESBLs are commonly found in members of the Enterobacteriaceae however, plasmids, integrons, and insertion sequences have contributed to the increase in the incidence of blaESBL genes among other gram-negative bacteria, including Pseudomonas aeruginosa. Unfortunately, one of the biggest difficulties associated with the early identification of the production of ESBL in nosocomial agents as Pseudomonas aeruginosa has been the standardization of phenotypic methods, which are affected by false-negative results stemming from intrinsic mechanisms which can mask the presence of these enzymes (i.e., production of chromosomal beta-lactamase AmpC). The aim of this study is to characterize phenotypical and genotypical ESBL production in clinical isolates of P. aeruginosa recovered in different hospitals in São Paulo during the period of 2004 to 2008. Materials and methods: 35 P .aeruginosa isolates intermediately resistant or resistant to third generation cephalosporin were phenotypically analyzed for the presence of ESBL with and without inhibitors (clavulanic acid and cloxacilin).Genotipic confirmation with specific primers for blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, blaOXA, blaPER and blaGES and the characterization of the genetic environment of blaCTX-M was performed by PCR and DNA sequencing.The random amplified polymorphism DNA technique with primer ERIC-2 was carried out for the isolates genotyping and the similarity index calculated with coefficient of Dice. Results and conclusion: the phenotypic methods identified 3 ESBL producing strains, however, the presence of genes blaCTX-M and blaOXA-10 has been confirmed in 9 (33%) and 2 (7%) strains of P. aeruginosa, respectively, from 3 medical centers. The mapping and sequencing of integron class 1 revealed that two strains harbored two different class 1 integrons with aadA6-like , aac6 gene and blaCTX-M-2-like genes conferring resistance to aminoglicosydes and third generation cephalosporins. The blaESBL horizontal transferation has not been confirmed by transformation. This study describes that the emergence and spread of genes blaCTX-M in clinical isolates of P. aeruginosa in Brazil had its origin from 2005. Since CTX-M type ESBLs have been widely described in Enterobacteriaceae, the identification of these genes in P. aeruginosa is alarming and shows that the blaCTX-M horizontal mobilization among different genus and species is a reality in Brazil. The genes that confer resistance to 16s RNAr methylases are not related to ESBL positive Pseudomonas aeruginosa strains in samples of São Paulo. The Pseudomonas aeruginosa strains of this study showed several genetic mobilization elements, such as integrons and insertion sequences, which may be participating in the spread of resistance to broad spectrum betalactams.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A cadeia produtiva do frango de corte depende da biosseguranÃa e da qualidade dos produtos que sÃo ofertados à populaÃÃo, visto ser essa a fonte de proteÃna mais acessÃvel e barata. O intenso processamento de produtos avÃcolas necessita de constantes averiguaÃÃes a respeito da sua qualidade microbiolÃgica. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo avaliar as condiÃÃes microbiolÃgicas e de realizar o teste de susceptibilidade antimicrobiana e detecÃÃo de bactÃrias produtoras de ESBL das cepas de microrganismos isoladas das amostras coletadas. No perÃodo de abril a novembro de 2006 foram coletadas 80 amostras de carne de frango resfriada e congelada comercializada na cidade de Fortaleza, CearÃ. O protocolo microbiolÃgico incluiu a contagem de bactÃrias aerÃbias mesÃfilas, determinaÃÃo do NMP de coliformes a 35ÂC e a 45ÂC, de acordo com a RDC n 12 de 02 de janeiro de 2001 da ANVISA. Para o teste de susceptibilidade a antimicrobianos foi utilizada a tÃcnica de difusÃo em placas segundo KIRBY-BAUER e CLSI, para detecÃÃo de cepas produtoras de ESBL. Os antibiÃticos usados foram: amicacina (30Âg), ampicilina (10Âg), ciprofloxacina (05Âg), ceftazidima (30Âg), estreptomicina (10Âg), doxiciclina (30Âg), gentamicina (10Âg), imipenem (10Âg), sulfonamida (300Âg) e sulfametoxazol/trimetroprim (25Âg). Das 80 amostras analisadas, a contagem de mesÃfilos variou de <1,0 x 10 UFC/g a 6,3 x 105 UFC/g, 34 (43%) das amostras foram positivas para coliformes a 35ÂC e 17 (21%) para coliformes a 45ÂC. Quanto ao teste de susceptibilidade antimicrobiana, o maior percentual de resistÃncia encontrado nas 11 cepas de Escherichia coli foi à doxiciclina (91%); 27% das cepas foram 100% sensÃveis a amicacina, gentamicina e imipenem. Das 22 cepas de Klebsiella pneumoniae isoladas, a maior resistÃncia foi à ampicilina (94,5%); maior sensibilidade a gentamicina, sulfametoxazol/trimetroprim e amicacina, 94,5%, 94,5% e 90%, respectivamente. Das 19 cepas de Enterobacter aerogenes, 90,1% foram resistentes a ampicilina e 95,4% apresentaram sensibilidade a ciprofloxacina. Das 11 cepas de Escherichia coli, 22 de Klebsiella pneumoniae e 19 de Enterobacter aerogenes, apenas 4, 9 e 5 cepas apresentaram o fenÃtipo produtor de ESBL, respectivamente, e destas somente 3 (33%) das cepas de Klebsiella pneumoniae e 3 (60%) das cepas de Enterobacter aerogenes foram confirmadas como produtoras de ESBL. Foi possÃvel constatar que a carne de frango apresentaram falhas em relaÃÃo a qualidade microbiolÃgica, como demonstrado pela presenÃa de elevado nÃmero de bactÃrias aerÃbias mesÃfilas, coliformes a 35ÂC e coliformes a 45ÂC, sinalizando para o risco potencial de ocorrÃncia de DTA, inclusive por microrganismos multi-resistentes à antimicrobianos e produtores de ESBL. A implementaÃÃo de um sistema de AnÃlise de Perigos e Pontos CrÃticos de Controle (APPCC), envolvendo todas as etapas do processamento, pode constituir uma medida eficaz para a melhoria da qualidade e seguranÃa do produto / The poultry processing industry depends on the biosafety and quality of the products offered to the population, and is the cheapest and more affordable source of proteins. The intensive production process of poultry products requires constant microbiological controls. This study was aimed to assess the microbiological conditions of this product and to perform an antimicrobial susceptibility test and the screening of ESBL-producing bacteria on the strains isolated from the collected samples. Between April and November 2006, 80 samples of fresh and freezed poultry meat marketed in the city of Fortaleza were collected. The microbiological protocol included an aerobic mesophile bacterial count, and the determination of the coliform MPN at 35oC and 45oC, according to the ANVISA (National Sanitary Surveillance Agency) resolution RDC 12 of January 02, 2001. The susceptibility test was carried out according to the disk diffusion technique (KIRBY-BAUER), and the screening for ESBL-producing strains was performed by CLSI. The used antibiotics were amikacine (30Âg), ampicillin (10Âg), ciprofloxacin (5Âg), ceftazidime (30Âg), streptomycin (10Âg), doxycycline (30Âg), gentamicin (10Âg), imipenem (10Âg), sulphonamide (300Âg) and sulfamethoxazol/trimetroprim (25Âg). The mesophile bacterial count in the 80 tested strains ranged from <1.0 x 10 CFU/g to 6.3 x 10 CFU/g. 34 (43%) of the samples were positive for coliforms at 35oC and 17 (21%) for coliforms at 45oC. In the 11 E. coli strains, the highest resistance was found against doxycycline (91%), while 27% of the strains were 100% sensitive to amikacin, gentamicin and imipenem. Within the 22 Klebsiella pneumonia isolated strains, the highest resistance was against ampicillin (94.5%), with the highest sensitivity to gentamicin, sulfamethoxazol/trimetroprim and amikacin (94.5%, 94.5%, and 90%, respectively). Of the 19 Enterobacter aerogenes strains, 90.1% were resistant to ampicillin and 95.4% showed to be sensitive to ciprofloxacin. Of the 11 strains of Escherichia coli, 22 of Klebsiella pneumoniae and 19 of Enterobacter aerogenes, only 4, 9 and 5 strains, respectively, showed to have an ESBL-producing phenotype, and only 3 (33%) of the K. pneumoniae strains and 3 (60%) of the E. aerogenes strains were confirmed as being ESBL producers. We verified the poultry meat to be microbiologically flawed, as shown by the high number of mesophile aerobic bacteria and coliforms grown at 35oC and at 45oC, being a warning sign for the occurrence of DTA, even by microorganisms resistant to multipleantibiotics and ESBL producers. The implementation of a Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) system involving all the processing stages can be an effective measure in order to improve the quality and safety of this product.

O uso excessivo de antimicrobianos em medicina veterinária e humana tem contribuído para o surgimento e seleção de bactérias multirresistentes (MR) em animais de produção, sendo que a presença de resíduos de antibióticos em alimentos derivados constitui uma predisposição para o estabelecimento de reações alérgicas para o consumidor, e altera as características organolépticas dos alimentos. No Brasil, embora a presença de Escherichia coli produtora de &#946;-lactamase de espectro estendido (ESBL) em avicultura, bubalinocultura e suinocultura tenha sido documentada recentemente, não há informações sobre sua prevalência em bovinocultura, que é um setor importante do agronegócio no país. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar a presença de linhagens de Escherichia coli produtoras de ESBLs na microbiota intestinal de bovinos de leite, em uma fazenda comercial com prática de uso rotineiro de cefalosporinas na forma terapêutica. Amostras de suabe retal foram coletadas em 95 ruminantes (lactantes e adultos saudáveis), na presença de um regime de tratamento com ceftiofur terapêutico, em uma fazenda no estado de São Paulo. As amostras foram triadas para a presença de bactérias Gram-negativas produtoras de ESBL, onde os isolados positivos foram identificados por MALDI-TOF, com posterior identificação dos genes codificando variantes ESBL, por PCR e sequenciamento. A presença de cepas de E. coli multirresistentes (resistência a >= 3 classes de antibióticos) foi confirmada em 45 ruminantes (47,3%). Adicionalmente, foram identificadas 68 cepas de E. coli produtoras de ESBL (71,5%), sendo 7 portadoras do gene blaCTX-M-2, 11 portadoras do gene blaCTX-M-8, e 50 portadoras do gene blaCTX-M-15. As cepas de E. coli produtoras de CTX-M-15 foram clonalmente relacionadas por ERIC-PCR e PFGE, confirmando-se a presença de linhagens clonais em diferentes animais, na mesma propriedade. Quatro cepas representativas deste clone tiveram seus genomas sequenciados, demonstrando pertencer ao complexo clonal 23 (ST90), mundialmente reportado em animais e humanos. Estes resultados denotam uma alta prevalência de E. coli produtora de ESBL do tipo CTX-M na microbiota intestinal do gado leiteiro, com predominância de clones de importância clínica humana e veterinária, que hipoteticamente possuem uma genética que favorece sua adaptação (provavelmente favorecida pela pressão seletiva de antibióticos) na interface animal-humana, o que representa um potencial zoonótico de importância para a saúde pública. / The excessive use of antimicrobials in veterinary medicine has contributed to the emergence and selection of multiresistant (MR) bacteria in livestock animals, and the presence of residues of antibiotics in food products is a predisposition for the establishment of allergic reactions to the consumer, changing the organoleptic characteristics of food. In Brazil, although the presence of Escherichia coli-producing extended-spectrum &#946;-lactamase (ESBL) in poultry, buffalo and swine farming has been documented recently, there is no information on its prevalence in cattle breeding, which is an important sector of agribusiness in the country. Thus, the present study aimed to investigate the presence of Escherichia coli strains producing ESBLs in the intestinal microbiota of dairy cattle in a commercial farm with routine practice of cephalosporins in the therapeutic form. Rectal swab samples were collected from 95 ruminants (healthy calf and adults) in the presence of a treatment regimen with ceftiofur therapeutic, on a farm in the state of São Paulo. The samples were screened for the presence of ESBL-producing Gram-negative bacteria, where positive isolates were identified by MALDI-TOF, with subsequent identification of genes encoding ESBL variants, by PCR and sequencing. The presence of multiresistant strains of E. coli (resistance to >= 3 classes of antibiotics) was confirmed in 45 ruminants (47.3%). In addition, 68 ESBL-producing E. coli strains (71.5%) were identified, 7 of which were carriers of the blaCTX-M-2 gene, 11 carriers of the blaCTX-M-8 gene, and 50 carriers of the blaCTX-M-15. The E. coli strains producing CTX-M-15 were clonally related by ERIC-PCR and PFGE, confirming the presence of clonal lineages in different animals, on the same property. Four representative strains of this clone had their genomes sequenced, demonstrating belonging to the clonal complex 23 (ST90), worldwide reported in animals and humans. These results indicate a high prevalence of E. coli producing CTX-M ESBL in the intestinal microbiota of dairy cattle, with a predominance of clones of human and veterinary clinical importance, which hypothetically have a genetics that favors their adaptation (probably favored by the selective pressure of antibiotics) at the animal-human interface, which represents a zoonotic potential of public health importance.

Este estudo foi elaborado com o objetivo de elucidar os mecanismos de resistência às quinolonas presentes em enterobactérias isoladas de pacientes de duas regiões metropolitanas brasileiras. Foram avaliadas possíveis alterações nas proteínas relacionadas com o sítio de ação das quinolonas, bem como a presença de plasmídeos e integrons que carregam determinantes gênicos que codificam resistência às quinolonas. A associação destes com mecanismos plasmideais de resistência aos antibióticos -lactâmicos também foi analisada. Foram avaliadas 257 enterobactérias resistentes ao ácido nalidíxico isoladas de pacientes hospitalizados e da comunidade no período de 2000 a 2005. Por PCR e seqüenciamento, foram analisadas as mutações presentes nos genes cromossômicos gyrA e parC e as estruturas gênicas associadas com determinantes plasmideais de resistência às quinolonas, Qnr, e aos -lactâmicos de amplo espectro. Foram determinados os perfis plasmideais e a transferabilidade dos plasmídeos que carrearam estes determinantes. A extração e a análise das proteínas de membrana externa foi realizada para avaliar uma possível perda ou diminuição da expressão de porinas, também relacionada com os mecanismos de resistência avaliados. Todas as amostras foram resistentes ao ácido nalidíxico, apresentando concentração inibitória mínima (CIM) superior a 16 g/mL, e em média, 70% apresentaram diminuição de sensibilidade às fluoroquinolonas testadas. De 257 enterobactérias resistentes ao ácido nalidíxico, em seis enterobactérias (2,3%), incluindo 3 E. coli, 2 K. pneumoniae e 1 C. freundii foi encontrado o gene qnrB. Cinco linhagens apresentaram suas seqüências idênticas ao gene qnrB2, e uma linhagem, C. freundii JF79, apresentou uma seqüência idêntica ao gene qnrB8. Em uma linhagem de E. cloacae foi detectado o gene qnrA1 (0,37%). Os genes qnrA e qnrB apresentaram-se localizados em plasmídeos que apresentaram de 55 a 180 kilobases. A análise da estrutura gênica indicou que os genes qnrA1 e qnrB2 estavam associados com um integron classe 1 e localizados entre o elemento ISCR1 e a segunda cópia do segmento conservado 3. Na coleção bacteriana avaliada, as principais mutações observadas foram nos códons 83 e 87 em gyrA, e nos códons 80 e 84 em parC. Todas as enterobactérias que exibiram unicamente mutações no gene gyrA apresentaram CIM 16 µg/mL para o ácido nalidíxico. A diferença encontrada nos valores da CIM de fluoroquinolonas em enterobactérias que apresentaram as mesmas substituições em GyrA e ParC foi explicada pela ausência ou diminuição da expressão de porinas. Em relação à produção de -lactamase de espectro ampliado (ESBL), sua presença foi comprovada em 24 (9,3%) enterobactérias. O seqüenciamento de blaCTX-M identificou 18 determinantes: CTX-M-2 (n=13), incluindo dois novos variantes, CTX-M-8 (n=2) e CTX-M-9 (n=3) mediados por plasmídeos de 48 a 180 kilobases, não conjugativos, em maioria. O gene blaSHV-5 foi detectado em seis enterobactérias. Todos os determinantes do grupo 2 apresentaram-se associados com um elemento ISCR1, enquanto que aqueles do grupo 9 estiveram relacionados com ISEcp1. Concluindo, o principal mecanismo de resistência às quinolonas detectado foi a presença de substituições em GyrA e ParC, apesar de outros mecanismos, como a diminuição da expressão de porinas estarem envolvidos nas enterobactérias avaliadas. A associação da produção de ESBL foi significativa devido ao encontro de uma grande diversidade de genótipos circulando na comunidade, com uma predominância de enterobactérias produtoras de CTX-M. Quanto aos determinantes Qnr descritos neste estudo, que notoriamente foram os primeiros relatos no Brasil, somente dois deles apresentaram-se relacionados com a produção de ESBL. / The aim of this study was to investigate the main mechanisms of quinolone resistance among enterobacterial isolates recovered from hospitalized patients and outpatients in Brazil. The modification of the quinolone targets with changes of DNA gyrase and of topoisomerase IV genes and the presence of determinants codifying plasmid- mediated quinolone and oxymino- cephalosporins resistance were investigated. Two hundred fifty seven non-duplicate nalidixic-acid resistant enterobacterial isolates recovered from January 2000 to May 2005 were analysed. Mutations in the topoisomerases gyrA and parC genes and the genetic structures surrounding Qnr and CTX-M determinants were recognized by PCR and sequencing. Conjugation experiments were performed to determine whether the qnr- and blaCTX-M carrying plasmids were self transferable. Also, decrease in the level of porin expression related to quinolone resistance was assessed. All enterobacterial isolates were resistant to nalidixic-acid, showing minimal inhibitory concentrations (MIC) 16 g/mL and 70% of these isolates showed decreased susceptibility to fluoroquinolone. Six qnrB-positive (2.3%) out of 257 nalidixic-acid resistant enterobacterial isolates, were identified, including 3 Escherichia coli, 2 Klebsiella pneumoniae and 1 Citrobacter freundii. Five isolates had an identical qnrB2 sequence and one isolate, C. freundii 79, possessed the qnrB8. A single Enterobacter cloacae carrying a plasmid encoding qnrA gene was identified (0.37%). All isolates were negative for the qnrS genes. Plasmid-mediated quinolone resistance ranged from 55- to 180-kb in size. Sequence analysis of the genetic structures surrounding of the qnrA and qnrB genes identified an ISCR1 element at the left-hand boundary and a partial copy of the 3-end segment of class 1 integrons. Concerning the changes of DNA gyrase and topoisomerase IV, the most common modification in the enterobacterial isolates analyzed were present at codons 83 and 87 in GyrA and in ParC at codons 80 and 84. All isolates that exhibited mutations in gyrA gene showed nalidixic-acid MIC 16 µg/mL. The finding of different MIC values to fluoroquinolones in enterobacterial isolates with the same GyrA and ParC modification was explained by a decreasing in the level of porin expression. Regarding -lactam resistance mechanisms, twenty four (9.3%) ESBL-producing enterobacterial isolates were detected. Sequencing of the CTX-M-encoding genes identified 18 determinants belonging to CTX-M-2 (n=13), CTX-M-8 (n=2) and CTX-M-9 (n=3) groups. CTX-M-2 group determinants included blaCTX-M-2 and the two novel variants. Plasmids harboring blaCTX-M genes ranged from 48- to 180- kb in size and were not transferable, in their majority. The blaSHV-5 genes were detected in all the 6 blaCTX-M negative isolates. All alleles belonging to the group 2 were associated with ISCR1 element, while all blaCTX-M-9 genes were related to ISEcp1 element. In conclusion, alterations in the targets of quinolones, GyrA and ParC was the main mechanism of quinolone resistance identified in this study, although a decreasing of the porins expression had been identified among nalidixic-acid resistant enterobacterial isolates. In the surveyed area, the prevalence of ESBL producers was important (9.3%), provided that this finding was related to a large diversity of genotypes circulating in the community, mainly CTX-M-producing isolates. This study constituted the first epidemiological survey of QnrA and QnrB determinants among Brazilian isolates. Interestingly, the qnrB2 gene was identified in non ESBL producers isolates and qnrS genes were not found.

Kliniska användandet av antibiotika är under ett allt större hot då bakterier har utvecklat resistens mot många klasser av antibiotika som används i sjukvården. Resistensgener hos bakterier finns kromosomalt eller burna av plasmider som kan förvärvas från andra bakterier. Spridning av resistens mot β-laktamantibiotika är oroande hos Enterobacteriaceae där inte många antibiotikaalternativ finns. Några plasmidburna β-laktamaser med ett utökat spektrum (ESBL) har blivit vanligare. Syftet med studien var jämförelse och utvärdering av tre kommersiella kromogena medier (CHROMagar™ C3GR, Chromatic™ ESBL+AmpC och CHROMagar™ mSuperCARBA™) selektiva för ESBL-producenter och jämföra dessa mot nuvarande metod (selektivt medium för gramnegativa bakterier och antibiotikadiskar). Kända stammar (11 st) med ESBLA / ESBLM tillväxte på C3GR och ESBL+AmpC men tendens till starkare tillväxt fanns på ESBL+AmpC. mSuperCARBA™ detekterade samtliga (14 st) karbapenemresistenta stammar. Vid jämförelse av 85 kliniska prov som analyserades med nuvarande metod för detektion av ESBL-producerande bakterier, och kromogena medier detekterades alla nio positiva för ESBLA på C3GR och ESBL+AmpC. Två ESBLM-producenter detekterades med säkerhet på ESBL+AmpC men ej på C3GR. Bland de negativa proverna gav 11växt på C3GR och sju på ESBL+AmpC, dessa innehöll bakterier som hade minskad cefalosporin-känslighet men ej klassificerades som ESBL-producerande. mSuperCARBA™ detekterade ESBLCARBA-producenter bättre än nuvarande metod som missade vissa. Slutsats från studien blev att ESBL+AmpC gav bättre tillväxt och selekterade bort fler arter och isolat som bar på minskad känslighet mot cefalosporiner men ej klassificerades som ESBL-producerande. Användning av medierna ESBL+AmpC och mSuperCARBA i kombination som ersättning för nuvarande metod innebär ökad känslighet och förenklad avläsning. / The clinical use of antibiotics is becoming less successful as bacteria have developed resistance to many antibiotics used in health care. Resistance genes in bacteria are chromosomal or carried by plasmids that can be acquired from other bacteria. The resistance to β-lactam antibiotics is particularly worrying in Enterobacteriaceae where there are few options available for treatment. Some plasmid-encoded β-lactamases with extended spectrum (ESBLs) have become common. The aim of the study was to compare and evaluate three commercial chromogenic media (CHROMagar™ C3GR, Chromatic™ ESBL+AmpC and CHROMagar™ mSuperCARBA™) selective for ESBL-producing bacteria and comparing them to the current method using selective medium for gram negative bacteria and antibiotic disks. All known ESBL-producing strains tested (11) with ESBLA or ESBLM grew on C3GR and ESBL+AmpC but there was a tendency towards stronger growth on ESBL+AmpC. mSuperCARBA™ detected all tested (14) carbapenem-resistant strains. In an analysis of 85 clinical samples, the chromogenic media detected all positive ESBLA producers, both C3GR and ESBL+AmpC. Two positive ESBLM producerswere detected by ESBL+AmpC with certainty but not on C3GR. Among the negative samples 11 gave growth on C3GR and seven on ESBL+AmpC. These bacteria had a slightly decreased cephalosporin sensitivity but were not classified as ESBL producers. mSuperCARBA™ detected ESBLCARBA producers better than the current method. The conclusion was that ESBL+AmpC gave better growth and was more selective against species and isolates carrying reduced susceptibility to cephalosporines, without being ESBL producing. ESBL+AmpC and mSuperCARBA™ could be used together for detecting the ESBL producing bacteria to increase sensibility.

Antibiotic resistance is a serious global public health problem. ESBLs are enzymes that destroy expanded-spectrum beta-lactam antibiotics rendering these drugs ineffective. Infection with ESBL-producing K.pneumoniae are hard to treat and result in longer hospital stay and higher mortality rates. The Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI) have standard methods for detection of ESBL producing strains of bacteria in infected patients to guide antibiotic therapy, reduce the risk of mortality and risk of transmission. The presence of K.pneumoniae and E.coli which produce ESBLs have been confirmed in natural environments such as soil and water but no standard methods exist to identify directly and quantify these bacteria to understand the risk of human exposure in these settings. The purpose of this research is to assess the ability of an agar dilution method, using a differential agar Bio-Rad Rapid E.coli 2 agar utilized in environmental water quality studies, to identify correctly ESBL-producing K.pneumoniae. The minimum inhibitory concentration (MIC) of ceftriaxone antibiotic for wild-type ESBL producing K.pneumoniae isolates were compared on Mueller-Hinton broth (MHB) and Bio-Rad Rapid E.coli 2 agar. Using the MIC values, the isolates were classified as susceptible, intermediate or resistant. The MIC of wild-type strains of K.pneumoniae were above 4μg/mL for both methods on all susceptibility tests performed. The results of this research suggest that Bio-Rad Agar dilution method performed well, correctly identifying these strains as resistant to ceftriaxone, an indication of ESBL production. The Bio-Rad agar dilution method can be considered as a viable standard method for direct identification of ESBL-producing K.pneumoniae in natural environments.

<p>Vanlig tarmbakterie som Escherichia coli (E. coli) kan bland annat orsaka infektioner i bukhålan och urinvägsinfektioner. Infektioner orsakade av bakterien har ofta behandlats med betalaktamantibiotika, som penicilliner och cefalosporiner, vilket har resulterat i selektion av antibiotikaresistenta bakterier. Extended-Spectrum Beta-Lactamases (ESBL) är enzymer som hydrolyserar 3:e generationens cefalosporiner som cefotaxim, ceftazidim och ceftriaxon, men kan även bryta ner penicilliner, monobaktamer och övriga cefalosporiner. ESBL förekommer främst hos E. coli och Klebsiella pneumoniae. I början utgjordes ESBL-enzymerna av TEM och SHV, men idag är CTX-M den vanligaste ESBL-varianten. CTX-M genen finns i över 50 olika varianter, vilka delas in i fem subgrupper (CTX-M-1, CTX-M-2, CTX-M-8, CTX-M-9 och CTX-M-25). Syfte med arbetet var att utföra en genotypisk bestämning av ESBL-producerande E. coli, som isolerats i Kronobergs län 2009, med hjälp av realtids-PCR (Polymerase Chain Reaction). För detektion av CTX-M användes multiplex-realtids-PCR med vilken de fem olika grupperna kunde detekteras under samma PCR-analys. Resultatet visade att den vanligaste ESBL-varianten bland ESBL-producerande E. coli i Kronobergs län 2009 var CTX-M-1 (88 positiva av 123), men ett stort antal var positiva både för CTX-M-1 och TEM (41 isolat). Den minst förekommande varianten visade sig vara SHV (2 isolat). En ökad antibiotikaresistens kan leda till svårigheter att behandla vissa vanliga infektioner som urinvägsinfektioner och infektioner efter bukoperationer. Med tanke på att E. coli är en vanlig tarmbakterie är det viktigt att motverka uppkomst och spridning av ESBL. En genotypisk karaktärisering av förekommande ESBL-stammar i Kronoberg är därför en viktig del av övervakningen<em>.</em></p>

Šio tyrimo tikslas palyginti diskų difuzijos ir automatizuotą metodus, nustatančius Enterobacteriaceae šeimos bakterijų plataus veikimo &#946;-laktamazių (PVBLazių) fenotipą ir įvertinti PVBLazių paplitimą Vilniaus universiteto ligoninės Santariškių klinikose 2008-2010 metais. Tyrimų analizei buvo pasirinkta 58 Enterobacteriaceae šeimos bakterijos, išskirtos 2009-2011 metais ligoniams, besigydžiusiems Vilniaus Universiteto ligoninės Santariškių klinikose. Bakterijos ištirtos naudojant fenotipinius PVBL nustatymo metodus: automatizuotą Phoenix sistemą (Becton Dickenson, Sparks, MD, JAV), kombinuotą diskų difuzijos metodą ir dvigubos difuzijos metodą. Automatizuota Phoenix sistema tyrime laikyta kaip patvirtinantis metodas identifikuojant bakterijas ir nustatant PVBLazių gamybos fenotipą. Tiriamąją grupę sudarė šios bakterijų rūšys: K. pneumoniae, E.coli, Enterobacter spp., Proteus spp., Serratia spp., Morganella spp. ir Providencia spp.. Ištyrus 58 bakterijas patvirtinačiu metodu nustatyta, kad 31 iš jų gamina plataus veikimo beta-laktamazes. Atliktas palyginamasis diskų difuzijos metodų įvertinimas ir nustatytas jautrumas, specifiškumas, teigiama prognostinė vertė (PPV) ir neigiama prognostinė vertė (NPV). Įvertinus atliktų tyrimų duomenis nustatyta, kad kombinuoto diskų difuzijos metodo jautrumas - 100%, specifiškumas - 100%, PPV - 100%, NPV - 100%. Dvigubos difuzijos metodo jautrumas - 100%, specifiškumas – 88,9%, PPV – 91,2%, NPV - 100%. Gauti tyrimų rezultatai rodo, jog... [toliau žr. visą tekstą] / The aim of this study is to compare disk diffusion and automated methods for determining the Enterobacteriaceae extended spectrum-&#946;-lactamases (ESBL) phenotype and to assess the prevalence of (ESBL) at University Hospital Clinics in 2008-2010. For the study were chosen 58 bacteria from the Enterobacteriaceae family that were isolated in 2009-2011 in patients that were treated at Vilnius University Hospital Clinic. The bacteria studied using phenotypic methods ESBL: Phoenix automated system (Becton Dickenson, Sparks, MD, USA) combined disc diffusion method and the double-diffusion method. Automated system of Phoenix for the study was considered as a method of confirming the identification of bacteria and determination of (ESBL) production phenotype. The studied group consisted of the following bacterial species: K. pneumoniae, E. coli, Enterobacter spp., Proteus spp., Serratia spp., Morganella spp. and Providencia spp . The examination with the validated method of 58 bacteria showed that 31 of them produce an extended spectrum beta lactamases. A performed comparative disc diffusion method was made and the evaluation of the sensitivity, specificity, positive prognostic value (PPV) and negative prognostic value (NPV) was identified. The evaluation of the data from studies showed that the combined disc diffusion method for sensitivity - 100% and specificity - 100%, PPV - 100%, NPV - 100%. Double-diffusion method for sensitivity - 100% and specificity - 88.9%, PPV - 91.2%... [to full text]

Vanlig tarmbakterie som Escherichia coli (E. coli) kan bland annat orsaka infektioner i bukhålan och urinvägsinfektioner. Infektioner orsakade av bakterien har ofta behandlats med betalaktamantibiotika, som penicilliner och cefalosporiner, vilket har resulterat i selektion av antibiotikaresistenta bakterier. Extended-Spectrum Beta-Lactamases (ESBL) är enzymer som hydrolyserar 3:e generationens cefalosporiner som cefotaxim, ceftazidim och ceftriaxon, men kan även bryta ner penicilliner, monobaktamer och övriga cefalosporiner. ESBL förekommer främst hos E. coli och Klebsiella pneumoniae. I början utgjordes ESBL-enzymerna av TEM och SHV, men idag är CTX-M den vanligaste ESBL-varianten. CTX-M genen finns i över 50 olika varianter, vilka delas in i fem subgrupper (CTX-M-1, CTX-M-2, CTX-M-8, CTX-M-9 och CTX-M-25). Syfte med arbetet var att utföra en genotypisk bestämning av ESBL-producerande E. coli, som isolerats i Kronobergs län 2009, med hjälp av realtids-PCR (Polymerase Chain Reaction). För detektion av CTX-M användes multiplex-realtids-PCR med vilken de fem olika grupperna kunde detekteras under samma PCR-analys. Resultatet visade att den vanligaste ESBL-varianten bland ESBL-producerande E. coli i Kronobergs län 2009 var CTX-M-1 (88 positiva av 123), men ett stort antal var positiva både för CTX-M-1 och TEM (41 isolat). Den minst förekommande varianten visade sig vara SHV (2 isolat). En ökad antibiotikaresistens kan leda till svårigheter att behandla vissa vanliga infektioner som urinvägsinfektioner och infektioner efter bukoperationer. Med tanke på att E. coli är en vanlig tarmbakterie är det viktigt att motverka uppkomst och spridning av ESBL. En genotypisk karaktärisering av förekommande ESBL-stammar i Kronoberg är därför en viktig del av övervakningen.

SAMMANFATTNING Bakgrund Multiresistenta bakterier har visat sig vara ett växande globalt problem. Betalaktamas med utvidgat spektrum kan orsaka svårbehandlade infektioner och prevalensen av betalaktamas med utvidgat spektrum har ökat kraftigt i Sverige. I sjukhusmiljöer har bristande vårdhygien, hög beläggningsgrad och personalbrist visat sig vara riskfaktorer för smittspridning. Förebyggande av smittspridning ingår i sjuksköterskans kompetensområde. Förbättring och utveckling bör alltid eftersträvas inom hälso- och sjukvård. Syfte Syftet var att undersöka hur sjuksköterskor upplever att på vårdavdelningar utföra omvårdnadshandlingar som omfattar individer med betalaktamas med utvidgat spektrum. Metod En kvalitativ studie med semistrukturerade intervjuer utfördes med sex sjuksköterskor och analyserades med en manifest kvalitativ innehållsanalys. Resultat Sjuksköterskorna som deltog i föreliggande studie lade vikt vid att följa riktlinjer och hygienrutiner. Samtliga sjuksköterskor i studien ansåg att de inte var rädda för att bli smittade, och upplevde att bemötandet gentemot patienten var oberoende av om de hade diagnosen betalaktamas med utvidgat spektrum eller inte. Däremot framkom en tendens till att minimera kontakttillfällena av olika skäl. Bristande områden som sjuksköterskor upplevde fanns var tidsresurser, platstillgång, personaltillgång, och informationsåtkomst. Slutsats Sjuksköterskorna i denna studie lade vikt vid att utförandet av omvårdnadshandlingar var i enighet med riktlinjer, samt uppmärksammade hygienrutinerna. Sjuksköterskorna hyste delade åsikter kring riktlinjernas funktion, tydlighet och tillgänglighet. Känsla av säkerhet och osäkerhet baserades på deras kunskaper. De ansåg att deras bemötande av patienten inte påverkades av om patienten var bärare av betalaktamas med utvidgat spektrum, dock framkom en tendens att minimera kontakterna med dessa patienter. Tid-, plats- och personalbrist påverkade deras upplevelse av hur de utförde omvårdnadshandlingar.