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Estudo citológico da medula óssea de cães portadores de Ehrlichiose Monocítica Canina na fase aguda / Cytological study of bone marrow in dogs infected with canine monocytic ehrlichiosis during the acute phase

Caxito, Marília Salgado [UNESP] 17 February 2017 (has links)
Submitted by Marília Salgado Caxito null (mariliasalgado@ymail.com) on 2017-02-24T00:12:23Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO (MARÍLIA SALGADO CAXITO) - Defesa em 17-02-2017.pdf: 1916563 bytes, checksum: ad7825421c4deb080f61ac2ac7c94a42 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-06T13:44:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 caxito_ms_me_bot.pdf: 1916563 bytes, checksum: ad7825421c4deb080f61ac2ac7c94a42 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T13:44:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 caxito_ms_me_bot.pdf: 1916563 bytes, checksum: ad7825421c4deb080f61ac2ac7c94a42 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Ehrlichiose Monocítica Canina (EMC), causada por Ehrlichia canis, destaca-se dentre as hemoparasitoses de cães. A EMC causa doença multissistêmica e pode ser classificada em fase aguda, subclínica ou crônica. A fase crônica caracteriza-se por hipoplasia/aplasia medular e muitos cães vêm a óbito por falência medular, embora as causas da supressão medular ainda sejam indefinidas. Neste estudo, foi investigado se a fase crônica resulta de alterações medulares iniciadas na fase aguda. Em particular, verificar se, durante a fase aguda, células precursoras podem ser parasitadas por E. canis e se processos imunomediados podem ser responsáveis por alterações hematológicas durante o curso da doença. Dezoito cães com EMC na fase aguda foram submetidos a exames hematológicos (hemograma, bioquímica sérica e mielograma) e sorológicos. A presença de E. canis foi confirmada mediante PCR e cultivo celular. A citologia de medula óssea revelou alterações principalmente na série eritróide que comumente estão associadas a doenças imunomediadas, inclusive em animais não anêmicos. Também confirmou-se a presença de E. canis na medula óssea de 11/18 cães e certa tendência entre a positividade das amostras medulares e a série eritróide, embora sem significância estatística. Os títulos sorológicos de 2560 em 9/18 e 10240 nos demais confirmou a resposta humoral exacerbada descrita pela literatura, contudo também sem relação significativa com a presença de E. canis na medula e algumas variáveis medulares. Este estudo evidenciou a importância do mielograma na EMC, inclusive para predizer alterações hematológicas em cães com hemograma normal. / The Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME), caused by Ehrlichia canis, one of the most frequent hemoparasites dogs. CME causes multisystemic disease and includes a acute, subclinical or chronic phase. The chronic phase is characterized by medullary hypoplasia/aplasia and many dogs die from bone marrow failure. However, the causes of medullary suppression remain unknow. In this study, we investigated whether the chronic phase can result from marrow changes initiated during the acute phase. In particular, we evaluated if precursor cells can be parasitized by E. canis during the acute phase and whether immune-mediated processes are responsible for hematological changes during the course of the disease. Eighteen dogs with CME in the acute phase were submitted to hematological (hemogram, serum biochemistry and myelogram) and serological tests. The presence of E. canis was confirmed by PCR and cell culture. Bone marrow cytology analyses mainly revealed changes in the erythroid series that are usually associated with immune-mediated diseases, including in non-anemic animals. This study confirmed the presence of E. canis in the bone marrow of the 11/18 dogs and a potential positive relation between the positivity of the marrow samples and the erythroid series was observed, although whithout statistical significance. The serological titers of 2560 in 9/18 and 10240 in the others confirmed an exacerbated humoral response to CME described in the literature, but they were not associated with the presence of E. canis in the bone marrow and medullary alterations. This study evidenced the importance of the myelogram, as well predicting hematological alterations in dogs with normal hemogram.
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Estudo citológico da medula óssea de cães portadores de Ehrlichiose Monocítica Canina na fase aguda

Caxito, Marília Salgado. January 2017 (has links)
Orientador: Antonio Carlos Paes / Resumo: A Ehrlichiose Monocítica Canina (EMC), causada por Ehrlichia canis, destaca-se dentre as hemoparasitoses de cães. A EMC causa doença multissistêmica e pode ser classificada em fase aguda, subclínica ou crônica. A fase crônica caracteriza-se por hipoplasia/aplasia medular e muitos cães vêm a óbito por falência medular, embora as causas da supressão medular ainda sejam indefinidas. Neste estudo, foi investigado se a fase crônica resulta de alterações medulares iniciadas na fase aguda. Em particular, verificar se, durante a fase aguda, células precursoras podem ser parasitadas por E. canis e se processos imunomediados podem ser responsáveis por alterações hematológicas durante o curso da doença. Dezoito cães com EMC na fase aguda foram submetidos a exames hematológicos (hemograma, bioquímica sérica e mielograma) e sorológicos. A presença de E. canis foi confirmada mediante PCR e cultivo celular. A citologia de medula óssea revelou alterações principalmente na série eritróide que comumente estão associadas a doenças imunomediadas, inclusive em animais não anêmicos. Também confirmou-se a presença de E. canis na medula óssea de 11/18 cães e certa tendência entre a positividade das amostras medulares e a série eritróide, embora sem significância estatística. Os títulos sorológicos de 2560 em 9/18 e 10240 nos demais confirmou a resposta humoral exacerbada descrita pela literatura, contudo também sem relação significativa com a presença de E. canis na medula e algumas variáveis medula... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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Prevalência de Ehrlichia canis pela técnica de nested-PCR e correlação com a presença de mórula e trombocitopenia em cães de Alegre-ES

Sales, Mara Rúbia Rocha Pereira 26 June 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mara Rubia Rocha Pereira Sales.pdf: 980226 bytes, checksum: 42a133fd63917e32301d6df4c9b4fca5 (MD5) Previous issue date: 2012-06-26 / The aim of this study was determined by nested-PCR the presence of Ehrlichia canis in dogs located in the municipality of Alegre-ES and evaluate its correlation with morulae and thrombocytopenia. For this purpose blood samples were collected from 85 dogs, regardless of race, age, sex or health status. With these, slides were obtained for the detection of morulae, thrombocytopenia, and execution of nested-PCR technique. We verified a prevalence of 1.17% to investigated the presence of morulae, 5.6% when using the technique of nested-PCR, and was verified that 17.64% of the CBCs were thrombocytopenia. However, only 40% of positive samples by nested-PCR showed thrombocytopenia. The results presented in this study demonstrate that the introduction of molecular diagnostic techniques such as nested-PCR is an important method to aid in the early diagnosis of diseases / Objetivou-se com este estudo determinar por meio da nested-PCR a prevalência da Ehrlichia canis em cães da região de Alegre-ES, e avaliar sua correlação com a presença de mórulas e trombocitopenia. Para isso, foram colhidas amostras sanguíneas de 85 cães, independente de raça, sexo, idade e estado de saúde. Com estas, foram confeccionadas lâminas para a pesquisa de mórulas, trombocitopenia, e execução da técnica de nested-PCR. Foi verificada uma prevalência de 1,17% ao pesquisar a presença de mórulas, 5,6% ao utilizar a técnica da nested-PCR, e foi verificada que 17,64% dos hemogramas apresentavam trombocitopenia. No entanto, somente 40% das amostras positivas pela nested-PCR, apresentaram trombocitopenia. Os resultados apresentados neste estudo demonstram que a introdução de técnicas de diagnóstico molecular como a nested-PCR é um método importante para o auxílio no diagnóstico precoce de patologias
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Estudo da erliquiose em cães expostos a carrapatos Rhipicephalus sanguineus experimentalmente infectados / Study of the ehrlichiosis in dogs exposed to experimentally infected Rhipicephalus sanguineus ticks

Taís Berelli Saito 16 February 2009 (has links)
A erliquiose monocitotrópica canina é caracterizada como uma infecção persistente, podendo evoluir para doença fatal. Mecanismos imunopatogênicos estão implicados no desenvolvimento da doença, porém não é completamente compreendido o papel da resposta imune celular nas infecções causadas por Ehrlichia canis transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. A infecção do vetor ocorre somente durante o repasto em cães riquetsêmicos, porém não é reconhecido o nível de riquetsemia infectante durante o curso da infecção nos cães. O objetivo desse estudo foi verificar os níveis de riquetsemia relativa capazes de infectar o vetor (R. sanguineus) durante o curso da erliquiose canina; e avaliar a resposta imune celular induzida por exposição de cães a carrapatos infectados com Ehrlichia canis. Um cão foi utilizado para produção do inoculo e infecção de ninfas de R. sanguineus. Subseqüentemente, os carrapatos adultos infectados, oriundos das ninfas que se alimentaram nos cães infectados, foram utilizados para infecção dos cães dos grupos I (n=3) e II (n=3). Cães do grupo III (n=3) foram inoculados com sangue infectado com E. canis, por via intravenosa. Os grupos IV (n=3) e V (n=3) foram compostos por cães não infectados. Os grupos II e IV foram reinfestados periodicamente com ninfas não infectadas de R. sanguineus. Foram observadas, alterações clínicas como febre, apatia e disorexia nos cães infectados, durante a fase aguda da infecção, porém de forma mais intensa e precoce nos cães infectados por inoculação intravenosa (grupo III). As alterações hematológicas mais evidentes foram redução do número de plaquetas, leve redução na série vermelha e branca. Todos os animais infectados soroconverteram aos 14 dias após inoculação ou infestação com carrapatos infectados (dpi), mantendo títulos entre 10240 e 81920. Os níveis de riquetsemia foram variáveis durante o curso da infecção, persistindo até 364 dpi, porém mais constante na fase aguda da doença. Um pequeno número de carrapatos alimentados nos cães infectados apresentou amplificação de DNA de E. canis, porém foram demonstrados até 308 dpi. Foi observada uma redução na relação CD4:CD8 nos animais infectados, no 28° dpi, mantendo-se de forma mais branda até 252 dpi. Uma maior proporção de linfócitos T CD4+ produtores de IFN-γ e IL-4 foi observada no tempo zero de cães que não adquiriram infecção após infestação com carrapatos infectados. Os níveis séricos de citocinas mostraram de forma mais evidente a elevação de IL-10 e TNF-α em um cão que desenvolveu doença fatal, podendo indicar a participação de mecanismos imunes na apresentação clínica e na persistência do agente no organismo hospedeiro. / The canine monocytic ehrlichiosis is characterized as a persistent infection, which can develop fatal disease. Immunopathogenic mechanisms are implicated in the development of the disease, however it is not completely understood the role of cellular immune in the infection caused by Ehrlichia canis transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. The vector becomes infected only while feeding on rickettsemic dogs, however the level of rickettsemia is not recognized during the course of the infection in the dogs. The objective of this study was to verify the level of relative rickettsemia capable to infect the vector (R. sanguineus) during the course of the canine ehrlichiosis; and to evaluate the cellular immune induced in dogs exposed to Ehrlichia canis-infected ticks. A dog was used for production of the inoculum and infection of nymphs of R. sanguineus. Infected adult ticks that had fed as nymphs on the infected dog were used to feed on and transmit the infection to dogs of groups I (n=3) and II (n=3). Group III dogs (n=3) were intravenously inoculated with E. canis-infected dogs. Group IV (n=3) and V (n=3) dogs were the control groups, never exposed to E. canis. Dogs of groups II and IV were reinfested periodically with uninfected R. sanguineus nymphs. Clinical alterations such as fever, apathy and dysorexia were observed in the infected dogs during the acute phase of the infection, however in a more intense and precocious form in the dogs infected by intravenous inoculation (group III). The more evident hematological alterations were reduction of the number of platelets, mild reduction in the red and white cells series. All infected animals soroconverted by 14 days after inoculation or infestation by infected ticks (dpi), showing titers between 10240 and 81920 during the study. The rickettsemia levels were variable during the course of the infection, persisting up to 364 dpi, however more constant in the acute phase of the disease. A small number of ticks that fed on infected dogs presented amplification of E. canis DNA, however they were demonstrated up to 308 dpi. A reduction in the relationship CD4:CD8 in the infected animals was observed in 28th dpi, keeping in a mild form up to 252 dpi. A larger proportion of lymphocytes T CD4+ producing IFN-γ and IL-4 it was observed in the zero time of dogs that did not acquire infection after infestation with infected ticks. The cytokine seric levels showed the elevation in a more evident form of IL-10 and TNF-α in a dog that developed fatal disease, what could indicate the participation of immune mechanisms in the clinical presentation and in the persistence of the agent in the organism host.
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Ehrlichia canis e Anaplasma platys em c?es (Canis familiaris, Linnaeus, 1758) trombocitop?nicos da Regi?o dos Lagos do Rio de Janeiro. / Ehrlichia canis and Anaplasma platys in trombocitopenic dogs (Canis familiaris, Linnaeus, 1758) of Regi?o dos Lagos, Rio de Janeiro, Brazil.

Accetta, ?rica Mateus Toledo 27 August 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-28T20:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Erica Mateus Toledo Accetta.pdf: 809163 bytes, checksum: 04d79d0b9854d1e99fd77cff6ae68a4f (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / Canine ehrlichiosis is an important infectious disease whose prevalence has been increasead in most areas of Brazil. Clinical signals and the laboratorial findings are variable. The present work had as objective to determine the frequency of the infection for E. canis and Anaplasma platys in dogs with trombocytopenia at Regi?o dos Lagos - State of Rio de Janeiro. It has been evaluated the CBC of 1127 dogs with trombocytopenia, a total of 3019 laboratorial tests carried through in the period of June 2006 and July 2007, at CEVET Lagos Lab, providing atendence to several clinics of Araruama, Iguaba Grande, S?o Pedro d Aldeia, Cabo Frio, Arraial do Cabo and B?zios. Erliquiosis was diagnosised through haemoparasit in smears of total blood s research stained with Panoptic kit. Eighty-four dogs (7.45%) were considered infected by the discovery of morulae of Ehrlichia spp. e Anaplasma platys. Normocytic normochromic anaemia and monocytosis were the most hematological alterations found. / A erliquiose canina ? uma importante doen?a infecciosa cuja preval?ncia tem aumentado significativamente em v?rias regi?es do Brasil. Os sinais cl?nicos e os achados laboratoriais s?o vari?veis. O presente trabalho teve como objetivo determinar a freq??ncia da infec??o por E. canis e A. platys em c?es com trombocitopenia na Regi?o dos Lagos do Estado do Rio de Janeiro. Foram avaliados os exames hematol?gicos de 1127 c?es com trombocitopenia de um total de 3019 exames realizados no per?odo de junho de 2006 a julho de 2007, no laborat?rio CEVET Lagos, que presta atendimento ?s diversas cl?nicas dos munic?pios de Araruama, Iguaba Grande, S?o Pedro d Aldeia, Cabo Frio, Arraial do Cabo e B?zios. A erliquiose foi diagnosticada atrav?s da pesquisa de hemoparasitos em esfrega?os de sangue total corados com kit pan?ptico. O diagn?stico baseou-se no achado de m?rulas de Ehrlichia spp. e Anaplasma platys, sendo considerados infectados 84 (7,45%) c?es. Anemia normoc?tica normocr?mica e monocitose foram as altera??es hematol?gicas mais freq?entes.
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Estudo da erliquiose em cães expostos a carrapatos Rhipicephalus sanguineus experimentalmente infectados / Study of the ehrlichiosis in dogs exposed to experimentally infected Rhipicephalus sanguineus ticks

Saito, Taís Berelli 16 February 2009 (has links)
A erliquiose monocitotrópica canina é caracterizada como uma infecção persistente, podendo evoluir para doença fatal. Mecanismos imunopatogênicos estão implicados no desenvolvimento da doença, porém não é completamente compreendido o papel da resposta imune celular nas infecções causadas por Ehrlichia canis transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. A infecção do vetor ocorre somente durante o repasto em cães riquetsêmicos, porém não é reconhecido o nível de riquetsemia infectante durante o curso da infecção nos cães. O objetivo desse estudo foi verificar os níveis de riquetsemia relativa capazes de infectar o vetor (R. sanguineus) durante o curso da erliquiose canina; e avaliar a resposta imune celular induzida por exposição de cães a carrapatos infectados com Ehrlichia canis. Um cão foi utilizado para produção do inoculo e infecção de ninfas de R. sanguineus. Subseqüentemente, os carrapatos adultos infectados, oriundos das ninfas que se alimentaram nos cães infectados, foram utilizados para infecção dos cães dos grupos I (n=3) e II (n=3). Cães do grupo III (n=3) foram inoculados com sangue infectado com E. canis, por via intravenosa. Os grupos IV (n=3) e V (n=3) foram compostos por cães não infectados. Os grupos II e IV foram reinfestados periodicamente com ninfas não infectadas de R. sanguineus. Foram observadas, alterações clínicas como febre, apatia e disorexia nos cães infectados, durante a fase aguda da infecção, porém de forma mais intensa e precoce nos cães infectados por inoculação intravenosa (grupo III). As alterações hematológicas mais evidentes foram redução do número de plaquetas, leve redução na série vermelha e branca. Todos os animais infectados soroconverteram aos 14 dias após inoculação ou infestação com carrapatos infectados (dpi), mantendo títulos entre 10240 e 81920. Os níveis de riquetsemia foram variáveis durante o curso da infecção, persistindo até 364 dpi, porém mais constante na fase aguda da doença. Um pequeno número de carrapatos alimentados nos cães infectados apresentou amplificação de DNA de E. canis, porém foram demonstrados até 308 dpi. Foi observada uma redução na relação CD4:CD8 nos animais infectados, no 28° dpi, mantendo-se de forma mais branda até 252 dpi. Uma maior proporção de linfócitos T CD4+ produtores de IFN-γ e IL-4 foi observada no tempo zero de cães que não adquiriram infecção após infestação com carrapatos infectados. Os níveis séricos de citocinas mostraram de forma mais evidente a elevação de IL-10 e TNF-α em um cão que desenvolveu doença fatal, podendo indicar a participação de mecanismos imunes na apresentação clínica e na persistência do agente no organismo hospedeiro. / The canine monocytic ehrlichiosis is characterized as a persistent infection, which can develop fatal disease. Immunopathogenic mechanisms are implicated in the development of the disease, however it is not completely understood the role of cellular immune in the infection caused by Ehrlichia canis transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. The vector becomes infected only while feeding on rickettsemic dogs, however the level of rickettsemia is not recognized during the course of the infection in the dogs. The objective of this study was to verify the level of relative rickettsemia capable to infect the vector (R. sanguineus) during the course of the canine ehrlichiosis; and to evaluate the cellular immune induced in dogs exposed to Ehrlichia canis-infected ticks. A dog was used for production of the inoculum and infection of nymphs of R. sanguineus. Infected adult ticks that had fed as nymphs on the infected dog were used to feed on and transmit the infection to dogs of groups I (n=3) and II (n=3). Group III dogs (n=3) were intravenously inoculated with E. canis-infected dogs. Group IV (n=3) and V (n=3) dogs were the control groups, never exposed to E. canis. Dogs of groups II and IV were reinfested periodically with uninfected R. sanguineus nymphs. Clinical alterations such as fever, apathy and dysorexia were observed in the infected dogs during the acute phase of the infection, however in a more intense and precocious form in the dogs infected by intravenous inoculation (group III). The more evident hematological alterations were reduction of the number of platelets, mild reduction in the red and white cells series. All infected animals soroconverted by 14 days after inoculation or infestation by infected ticks (dpi), showing titers between 10240 and 81920 during the study. The rickettsemia levels were variable during the course of the infection, persisting up to 364 dpi, however more constant in the acute phase of the disease. A small number of ticks that fed on infected dogs presented amplification of E. canis DNA, however they were demonstrated up to 308 dpi. A reduction in the relationship CD4:CD8 in the infected animals was observed in 28th dpi, keeping in a mild form up to 252 dpi. A larger proportion of lymphocytes T CD4+ producing IFN-γ and IL-4 it was observed in the zero time of dogs that did not acquire infection after infestation with infected ticks. The cytokine seric levels showed the elevation in a more evident form of IL-10 and TNF-α in a dog that developed fatal disease, what could indicate the participation of immune mechanisms in the clinical presentation and in the persistence of the agent in the organism host.
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Cultura de células embrionárias de carrapatos do gênero Rhipicephalus para cultivo de Ehrlichia canis e Anaplasma marginale / Embryonic cell culture of ticks of the genus Rhipicephalus for cultivation of Ehrlichia canis and Anaplasma marginale

Duarte, Leidiane Lima 15 August 2017 (has links)
No Brasil, carrapatos do gênero Rhipicephalus são representados pelas espécies Rhipicephalus sanguineuss.l. (Latreille) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), sendo que a primeira espécie possui especificidade com cães domésticos e a segunda com bovinos. Para o cão, R. sanguineus s.l. é o principal vetor de agentes causadores da babesiose canina e da erliquiose, enquanto que nos bovinos, R. microplus é responsável, principalmente, pela transmissão de agentes causadores da babesiose e anaplasmose. Alguns dos patógenos causadores dessas doenças são difíceis de serem cultivados in vitro, e não crescem em meios artificiais, especialmente Anaplasma spp. Assim, muitas linhagens celulares de carrapatos foram desenvolvidas nos últimos 40 anos e têm sido amplamente utilizadas para isolamento e propagação de microrganismos patogênicos. Cultivos celulares obtidos de células embrionárias de carrapatos oferecem um sistema de vetor in vitro, que é útil principalmente para estudos de agentes intracelulares. Dessa forma, a obtenção de culturas de células embrionárias de R. sanguineus (origens tropical e temperada) e de R. (B.) microplus, bem como, sua infecção com Ehrlichia canis e Anaplasma marginale, respectivamente, são objetivos do presente estudo. Os cultivos celulares dessas espécies de carrapatos foram preparados com massas de ovos de diferentes idades e mantidos à 30 °C em meio de cultura L15-B, suplementado com 10% de Triptose Fosfato e 20% de Soro Fetal Bovino. Subcultivos foram realizados após a formação da monocamada celular confluente. As identidades celulares foram confirmadas pela PCR e sequenciamento, utilizando um fragmento do gene mitocondrial 16S rDNA. As sequências das culturas de células de R. sanguineus (tropical e temperada) e de R. microplus foram depositadas no GenBank. Essas culturas de células foram infectadas com E. canis e A. marginale (cepas Jaboticabal), respectivamente, e mantidas em meio L-15B (Vitrocell) suplementado com Soro Fetal Bovino enriquecido com ferro (Hyclone) nas concentrações de 2% e 5%. As células infectadas foram mantidas em propagações sucessivas até a terceira passagem, para novas culturas de células não infectadas, sendo então criopreservadas. O DNA extraído das células infectadas e não infectadas de R. sanguineus (de ambas as origens) e de R. microplus, foi analisado pela PCR quantitativa em tempo real (qPCR), utilizando os genes E. canis-dsb e msp1β, respectivamente. Propagações de células de carrapatos infectadas para as novas culturas de R. sanguineus (origem tropical) e R. (B) microplus, foram bem sucedidas. Por outro lado, as células de R. sanguineus (origem temperada) não se tornaram infectadas no presente estudo. / In Brazil, ticks of the genus Rhipicephalus are represented by the species Rhipicephalus sanguineus s.l. (Latreille) and Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), being that the first one has specificity with domestic dogs and the second with cattle. For dogs, R. sanguineus s.l. is the main vector of causative agents of canine babesiosis and ehrlichiosis, whereas in cattle, R. microplus is responsible, mainly, for the transmission of agents that cause babesiosis and anaplasmosis. Some of the pathogens that cause these diseases are difficult to grow in vitro, and do not grow on artificial media, especially Anaplasma spp. Therefore, many tick cell lines were developed in the last 40 years and have been used for the isolation and propagation of pathogenic microorganisms. Cell cultures obtained from embryonic tick cells offer an in vitro vector system, which is mainly useful for studies of intracellular agents. The aim of the present study was to obtain cultures of R. sanguineus (tropical and temperate lineages) and R. microplus embryonic cells and their infection with Ehrlichia canis and Anaplasma marginale. Cell cultures from the tick species were prepared with egg masses of different ages and kept at 30 ° C in L15-B culture medium supplemented with 10% Tryptose Broth and 20% Fetal Bovine Serum. Subcultures were done after confluent cell monolayer formation. Cellular identities were confirmed by PCR and sequencing using a 16S rDNA mitochondrial gene fragment. Sequences of R. sanguineus (tropical and temperate) and R. microplus cell cultures were deposited on GenBank. These cell cultures were infected with E. canis and A. marginale (Jaboticabal strains), respectively, and maintained in L-15B medium and Fetal Bovine Serum with iron (Hyclone) supplemented at 2% and 5% concentrations. The infected cells were maintained in successive propagations until the third passage, to new cultures of uninfected cells, and then were cryopreserved. DNA extracted from infected and uninfected R. sanguineus (both origin) and R. microplus cells was analyzed by quantitative real-time PCR (qPCR) using the E. canis-dsb and msp1β genes, respectively. Propagations of infected tick cells to the new cultures of R. sanguineus (tropical origin) and R. microplus, were successful. On the other hand, the R. sanguineus cells (temperate origin) did become infected in the present study.
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Detecção molecular e sorológica de Ehrlichia canis e Babesia canis em felídeos selvagens brasileiros mantidos em cativeiro

André, Marcos Rogério [UNESP] 25 February 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:56:53Z : No. of bitstreams: 1 andre_mr_me_jabo.pdf: 427316 bytes, checksum: 366b68e3f9cae8ab0938b9ab1032ffb9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Poucos relatos têm sido feitos sobre o diagnóstico da erliquiose e babesiose em felinos domésticos e selvagens brasileiros, os quais são baseados diretamente pela presença de mórulas em leucócitos e piroplasmas em eritrócitos, e indiretamente pela detecção de anticorpos anti-Ehrlichia canis. O presente estudo teve como objetivo realizar a detecção molecular de E. canis e B. canis e a presença de anticorpos da classe IgG contra esses hemoparasitas em amostras de sangue e soro, respectivamente. Neste utilizamos 72 felídeos selvagens brasileiros mantidos em cativeiro em algumas instituições e zoológicos. Pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), dezoito (25%) e cinqüenta e três (73,6%) dos 72 animais amostrados foram sororeagentes frente aos antígenos de E. canis e B. canis, respectivamente. Na PCR para E. canis, onze (15,3%) dos 72 animais amostrados foram positivos. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e o DNA de E. canis encontrado mostrou grande similaridade genética com amostras de E. canis isoladas no Brasil, México, Portugal, Grécia e Taiwan, com 98% de similaridade. Nenhuma das amostras foi positiva na PCR para B. canis. Destaca-se a importância e a primeira detecção molecular de E. canis e presença de anticorpos anti-E. canis e anti-B. canis em felídeos selvagens brasileiros mantidos em cativeiro. / Few are the reports that have been carried out on ehrlichiosis and babesiosis diagnostic in Brazilian domestic and wild felids, which are based directly on the presence of morulae in leucocytes and piroplasms in erythrocytes, and indirectly by detection of antibodies against E. canis. The aim of this study was to detect molecularly E. canis and B. canis and the presence of anti-E. canis and B. canis IgG antibodies in the blood and sera samples, respectively, from 72 Brazilian wild captive felids maintained in some instituitions and zoos. Eighteen (25.0%) and fifty-three (73.6%) out of 72 animals were seroreagent for E. canis and B. canis antigen, respectively, by IFA (Indirect Immunofluorescent Assay). Eleven (15.3%) of the 72 samples were positive for nPCR E. canis. The amplicons were confirmed by sequencing and the E. canis DNA found appeared to be closely related to E. canis samples from Brazil, Mexico, Portugal, Greece and Taiwan with 98% percent identity. None of the 72 samples were positive for B. canis by PCR. This is the first molecular detection of E. canis and presence of seroreactivity for both B. canis and E. canis in Brazilian wild captive felids.
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Estudo clínico e imunopatológico da infecção experimental em cães com a amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis na fase aguda e após o tratamento : expreção de citocinas no baço e sangue e de subpopulações de células imunes no baço /

Faria, Joice Lara Maia. January 2010 (has links)
Orientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Aguemi Kohayagawa / Banca: Tiago Wilson Patriarca Mineo / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Aureo Evangelista Santana / Resumo: A infecção aguda experimental pela amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis provoca alterações clínicas severas no hospedeiro, com graves distúrbios sanguíneos e imunológicos, que podem comprometer a vida do animal. Com este estudo buscou-se avaliar a expressão gênica de TNF-α, IFN-γ e IL-10, pesquisar a presença de mórulas no baço e avaliar o imunofenótipo das células esplênicas antes, nos dias 6, 18 e 30 após a inoculação e 25 dias após o tratamento com cloridrato de doxicilina, em cinco cães sem definição racial inoculados com a amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis. Nas condições experimentais desta pesquisa, o início do desenvolvimento dos sinais clínicos, seis dias após a inoculação (D6) foi acompanhado pela expressão de TNF-α e aumento de células MHC II+ (P<0,05) na citologia esplênica em relação ao controle. Com o desenvolvimento da infecção experimental (D18) ocorreu o agravamento dos sinais clínicos, os cães apresentaram febre, linfadenomegalia e esplenomegalia acompanhados de trombocitopenia, leucopenia e anemia, mórulas na citologia esplênica, aumento significativo da expressão de TNF-α em leucócitos e células esplênicas, detecção de IL-10, tanto em leucócitos como em células esplênicas e redução de células CD4+ (P<0,05), em relação ao momento anterior e ao grupo controle, macrófagos (P<0,05) em relação ao controle, e aumento de células B (P<0,05) em relação a D-1 e ao grupo controle. Aos 30 dias os cães já não apresentavam sinais clínicos da infecção, porém persistia a trombocitopenia. Além disso, persistência do aumento das células B+ esplênicas (P<0,05), diminuição significativa das células CD4+ e dos macrófagos em relação ao D18 e ao controle. O TNF-α atingiu sua maior taxa de expressão e ocorreu a detecção de IFN-γ. / Abstract: The experimental acute infection by Ehrlichia canis Jaboticabal sample provokes severe clinical alterations in the host with serious blood and immunological disorders that may compromise the animal's life. The present study aimed to evaluate the gene expression of TNF-α, IFN-γ and IL-10, search morulae presence in the spleen and evaluate the splenic cells' immunophenotype before, at days 6, 18 and 30 days post inoculation and 25 days after the treatment with doxycycline cloridrate, in five cross-bred dogs inoculated with Ehrlichia canis Jaboticabal sample. At the experimental conditions of this research, the beginning of the development of the clinical signs, six days after the inoculation (D6) was accompanied by expression of TNF-α and increase of MHC II+ cells (P<0,05) at the splenic cytology when compared to the control group. As long as the experimental infection was developed (D18) the clinical signs were becoming worse, the dogs presented fever, lymphadenomegalia and spleenomegalia accompanied by thrombocytopenia, leucopenia and anemia, morulae in the splenic cytology, significant increase of the expression of TNF-α in leukocytes and splenic cells, detection of IL-10 both in leukocytes and in splenic cells and the decrease of CD4+ cells (P<0,05) in comparison to the previous moment and to the control group, macrophages (P<0,05) compared to the control group, and increase of cells B (P<0,05) in comparison to the control group and D-1. At day 30 the dogs no more presented the infection clinical signs, although the thrombocytopenia persisted. Besides, persistent splenic cells B+ increase (P<0,05), significant reduction of CD4+ cells and macrophages compared to D18 and to the control group were observed. The TNF-α reached its highest expression rate and the detection of IFN-γ ocurred. / Doutor
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Estudo clínico e imunopatológico da infecção experimental em cães com a amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis na fase aguda e após o tratamento: expreção de citocinas no baço e sangue e de subpopulações de células imunes no baço

Faria, Joice Lara Maia [UNESP] 19 January 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:22:02Z : No. of bitstreams: 1 faria_jlm_dr_jabo.pdf: 2769905 bytes, checksum: 15c4be53d67c11751ac4644728993d4f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A infecção aguda experimental pela amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis provoca alterações clínicas severas no hospedeiro, com graves distúrbios sanguíneos e imunológicos, que podem comprometer a vida do animal. Com este estudo buscou-se avaliar a expressão gênica de TNF-α, IFN-γ e IL-10, pesquisar a presença de mórulas no baço e avaliar o imunofenótipo das células esplênicas antes, nos dias 6, 18 e 30 após a inoculação e 25 dias após o tratamento com cloridrato de doxicilina, em cinco cães sem definição racial inoculados com a amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis. Nas condições experimentais desta pesquisa, o início do desenvolvimento dos sinais clínicos, seis dias após a inoculação (D6) foi acompanhado pela expressão de TNF-α e aumento de células MHC II+ (P<0,05) na citologia esplênica em relação ao controle. Com o desenvolvimento da infecção experimental (D18) ocorreu o agravamento dos sinais clínicos, os cães apresentaram febre, linfadenomegalia e esplenomegalia acompanhados de trombocitopenia, leucopenia e anemia, mórulas na citologia esplênica, aumento significativo da expressão de TNF-α em leucócitos e células esplênicas, detecção de IL-10, tanto em leucócitos como em células esplênicas e redução de células CD4+ (P<0,05), em relação ao momento anterior e ao grupo controle, macrófagos (P<0,05) em relação ao controle, e aumento de células B (P<0,05) em relação a D-1 e ao grupo controle. Aos 30 dias os cães já não apresentavam sinais clínicos da infecção, porém persistia a trombocitopenia. Além disso, persistência do aumento das células B+ esplênicas (P<0,05), diminuição significativa das células CD4+ e dos macrófagos em relação ao D18 e ao controle. O TNF-α atingiu sua maior taxa de expressão e ocorreu a detecção de IFN-γ. / The experimental acute infection by Ehrlichia canis Jaboticabal sample provokes severe clinical alterations in the host with serious blood and immunological disorders that may compromise the animal’s life. The present study aimed to evaluate the gene expression of TNF-α, IFN-γ and IL-10, search morulae presence in the spleen and evaluate the splenic cells’ immunophenotype before, at days 6, 18 and 30 days post inoculation and 25 days after the treatment with doxycycline cloridrate, in five cross-bred dogs inoculated with Ehrlichia canis Jaboticabal sample. At the experimental conditions of this research, the beginning of the development of the clinical signs, six days after the inoculation (D6) was accompanied by expression of TNF-α and increase of MHC II+ cells (P<0,05) at the splenic cytology when compared to the control group. As long as the experimental infection was developed (D18) the clinical signs were becoming worse, the dogs presented fever, lymphadenomegalia and spleenomegalia accompanied by thrombocytopenia, leucopenia and anemia, morulae in the splenic cytology, significant increase of the expression of TNF-α in leukocytes and splenic cells, detection of IL-10 both in leukocytes and in splenic cells and the decrease of CD4+ cells (P<0,05) in comparison to the previous moment and to the control group, macrophages (P<0,05) compared to the control group, and increase of cells B (P<0,05) in comparison to the control group and D-1. At day 30 the dogs no more presented the infection clinical signs, although the thrombocytopenia persisted. Besides, persistent splenic cells B+ increase (P<0,05), significant reduction of CD4+ cells and macrophages compared to D18 and to the control group were observed. The TNF-α reached its highest expression rate and the detection of IFN-γ ocurred.

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