A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) é uma das principais causas de morbidade crônica e mortalidade em todo o mundo e tem como principal manifestação o enfisema pulmonar, caracterizado pelo contínuo e progressivo remodelamento dos componentes da matriz extracelular (MEC). De acordo com estudos experimentais e clínicos esse remodelamento pode ser atribuído à ação proteolítica das metaloproteases de matriz (MMPs), especialmente da MMP-12, sobre os componentes da MEC, sendo a elastina considerada, até recentemente, a principal fibra alvo da proteólise. Dessa forma, só recentemente tem sido esclarecida a importância de outros componentes da MEC e outras MMPs, como as colagenases, no remodelamento da MEC. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a progressão do remodelamento das fibras no parênquima pulmonar e a expressão gênica das MMPs no início do desenvolvimento do enfisema. Para isso camundongos C57BL/6 receberam instilação intranasal de elastase pancreática suína (PPE 0,667 UI / Grupos ELA: n=40) ou o mesmo tratamento com solução salina (NaCl 0,9% / Grupos controle SAL: n=40). Os animais foram anestesiados, eutanasiados e separados em sub-grupos iguais (n=8) de acordo com o tempo após a instilação de PPE (1, 3, 6 horas, 3 e 21 dias) para remoção dos seus pulmões. Foram medidos o intercepto linear médio (Lm) e as proporções do volume de colágeno tipo I e tipo III, elastina e fibrilina. A expressão gênica para metaloproteinases (MMP-1a, MMP-1b, MMP-8, MMP-12 e MMP-13) no parênquima pulmonar foi avaliada por RT-PCR em tempo real. Os resultados demonstraram que o Lm aumentou desde 3 horas após a instilação de PPE, atingindo os maiores aumentos no 3º e 21º dias, sugerindo uma progressão no alargamento alveolar. Em comparação com o grupo SAL, os grupos ELA apresentaram uma diminuição no colágeno tipo I (no 3º dia) e colágeno tipo III (a partir de 6 horas até 3 dias) em tempos posteriores ao aumento da expressão gênica para MMP-8 (a partir de 3 até 6 horas) e - 13 (a partir de 1 até 6 horas). Após 21 dias, o colágeno tipo III apresentou aumento e o colágeno tipo I retornou a valores semelhantes aos do seu respectivo grupo controle. A expressão gênica para MMP-12 aumentou nos grupos ELA em tempos anteriores (3 e 6 horas) aos que constatamos a redução na proporção de elastina no pulmão (3º dia), reforçando a importância já estabelecida da MMP-12 na quebra deste componente da MEC. A proporção de volume de elastina aumentou no grupo ELA em relação ao respectivo grupo SAL no 21º dia. Não houve aumento na expressão gênica da MMP-1b em nenhum momento e a MMP-1a não teve expressão mensurável em nenhum dos grupos. Não foram observadas diferenças entre os grupos experimentais na avaliação da fibrilina. Nossos resultados serão úteis para melhor elucidar as alterações dinâmicas nos componentes da MEC e a importância, não só da metaloelastase, mas também das colagenases em estágios iniciais do enfisema, fornecendo novas ferramentas para futuros estudos sobre possíveis alvos terapêuticos / Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a major cause of chronic morbidity and mortality worldwide and has as the major manifestation pulmonary emphysema in which the components of the extracellular matrix (ECM) are in a continuous process of remodeling. According to experimental and clinical studies that remodeling can be attributed to proteolytic action of matrix metalloproteinases (MMPs), particularly MMP-12, on the ECM components, with elastin being considered until recently, the primary target fiber of proteolysis. Therefore, only recently has been clarified the importance of other components of the ECM and other MMPs such as collagenases on ECM remodeling. Thus, the objective of this study was to analyze the progression of lung parenchymal fibers remodeling and the gene expression of MMPs in the early development of emphysema. For this C57BL/6 mice were given intranasal instillation of porcine pancreatic elastase (PPE 0,667 IU / ELA groups: n=40) or the same treatment with saline (0.9% NaCl / SAL Control groups: n=40). The animals were anesthetized and euthanized divided into equal sub-groups (n=8) according to time after PPE instillation (1, 3, 6 hours, 3 and 21 days) to remove their lungs. The mean linear intercept (Lm) and the volume proportions of type I and type III collagen, elastin and fibrillin were measured. Gene expression of metalloproteinases (MMP-1a, 1b-MMP, MMP-8, MMP-12 and MMP-13) in the lung parenchyma was evaluated by Real Time RT-PCR. The results demonstrated that the Lm has increased from 3 hours after PPE instillation, with the highest increases reached at 3rd and 21th day, suggesting a progression in the alveolar enlargement. Compared to SAL group, ELA group showed a decrease in type I collagen (3rd day) and collagen type III (from 6 hours to 3 days) on later times to the increase in MMP-8 gene expression (from 3 to 6 hours) and - 13 (from 1 to 6 hours). After 21 days, type III collagen showed an increase and collagen type I returned to values similar to those of their respective control group. Gene expression for MMP-12 increased on PPE groups in earlier times (3 and 6 hours) at which we detected reduction in elastin proportion in the lung (3rd day), reinforcing the importance already established of MMP-12 in the breakage of this ECM component. The elastin volume proportion increased in PPE group compared to respective SAL group at 21st day. There was no increase in MMP-1b gene expression at any time and MMP-1a shows no measurable expression in either group. There were no differences between the experimental groups in the evaluation of fibrillin. Our results will be useful to better elucidate the dynamic changes in ECM components and the importance not only of metalloelastase but also of collagenases in the early stages of emphysema, providing new tools for future studies of potential therapeutic targets

Introdução: A síndrome de Williams-Beuren (SWB) consiste de uma deleção no cromossomo 7q11.23, região responsável pela codificação de 28 genes, estando o gene codificador da elastina situado aproximadamente no ponto médio dos extremos da deleção; a mutação no gene da elastina leva a alterações fenotípicas no paciente, com prejuízo do desenvolvimento neuropsicomotor de graus variados, fáscies características, anormalidades cardiovasculares, hipercalcemia, disfunções urológicas e osteoarticulares. O presente estudo avaliou a prevalência de escoliose em pacientes com diagnóstico de SWB, bem como sua relação com o padrão das curvas nos portadores de escoliose. Métodos: Foram incluídos 41 pacientes com diagnóstico de SWB através da realização de anamnese, exame físico e investigação radiográfica, sendo 25 do sexo masculino. Realizou-se a interpretação das radiografias e obtenção do ângulo de Cobb. Resultados: Observou-se que 14 pacientes eram portadores de escoliose, sendo 10 do sexo masculino. O padrão da deformidade apresentou-se, nos pacientes mais jovens, através de curvas simples e flexíveis, e, apesar de adultos apresentarem ocorrência de duplas curvas e triplas curvas, a análise estatística não evidenciou relação entre escoliose e idade ou sexo dos pacientes. Conclusões: O estudo evidenciou prevalência de escoliose em portadores de SWB: 34,1%; entretanto, as variáveis idade e sexo não apresentaram relação com a ocorrência de escoliose, assim como a gravidade das curvas apresentadas / Introduction: Williams-Beuren syndrome (WBS) consists of a chromosome 7q11.23 deletion in the region responsible for encoding 28 genes, with the elastin encoding gene situated approximately at the midpoint of the extremes of deletion; mutation of the elastin gene leads to phenotypic changes in patients with neurodevelopment impairment of varying degrees, characteristic facies, cardiovascular abnormalities, hypercalcemia, and urological and bone and joint dysfunctions. This study assessed the prevalence of scoliosis in patients with WBS, and the relationship with the pattern of scoliotic curves. Methods: A total of 41 patients diagnosed with SWB were included in the study, 25 males, through anamnesis, physical examination and radiographic investigation. Radiographic imaging was interpreted and the Cobb angle was calculated. Results: It was observed that 14 patients had scoliosis, and 10 of them were male. The pattern of the deformity in younger patients was of flexible and simple curves, and although adults presented double and triple curves, statistical analysis showed no relationship between scoliosis and age or sex. Conclusion: The study revealed a prevalence of scoliosis in patients with SWB of 34.1%; however, the variables age and sex had were not significantly associated with scoliosis, nor with the severity of the curves

Pacientes submetidos ao tratamento cirúrgico da obesidade mórbida apresentam perda ponderal acentuada e dismorfismo corporal e, com frequência, solicitam cirurgias plásticas visando um contorno corporal mais adequado. Os resultados dessas cirurgias plásticas são, em parte, limitados pela qualidade da pele resultante do grande emagrecimento. O presente estudo observacional teve como objetivo comparar fragmentos de pele da região epigástrica de 20 pacientes após perda ponderal acentuada consequente à cirurgia bariátrica com 20 pacientes portadores de obesidade mórbida, no sentido de analisar as alterações estruturais da pele como consequência do emagrecimento. A análise histomorfométrica foi realizada sobre o sistema colagênico através da metodologia Picrossírius/luz polarizada, e sobre o sistema elástico através da metodologia resorcinafucsina de Weigert. Foram observados, a redução das fibras colagênicas grossas (p=0,048); o aumento das fibras colagênicas finas (p=0,0085); e o aumento da densidade das fibras elásticas (p=0,0000009033) no grupo de pacientes emagrecidas. Não houve diferença entre os grupos quanto à média de idades (p=0,917) e quantidade total de fibras colágenas (p=0,3619). Os resultados evidenciaram as alterações estruturais da derme decorrentes do emagrecimento acentuado, demonstradas por meio do remodelamento colagênico, com a consequente redução das fibras espessas, organizadas, estruturadas e direcionadas em prol do aumento de fibras finas, desalinhadas e frouxamente dispostas, isso em associação ao aumento da elasticidade da pele. Isto explica cientificamente a já estabelecida percepção clínica das alterações cutâneas dos pacientes emagrecidos após cirurgias bariátricas, apresentando menor resistência e maior flacidez, quando comparadas ao período anterior ao emagrecimento / Post-bariatric patients develop body contour deformities and need plastic surgery procedures for reduction of excess skin and subcutaneous tissue. The results of these contouring procedures are typically limited by the poor quality of the skin. This observational study compared the epigastric skin of 20 post-bariatric with massive weight loss women with 20 women with morbid obesity through histomorphometric analysis of collagen fibers (picrosiriuspolarization) and elastic fibers (Weigert\'s resorcin-fuchsin). A reduction of thick collagen fibers (p=0.048), increase of thin collagen fibers (p=0.0085) and increase of the density of elastic fibers (p=0.0000009) were observed in the group of post-bariatric patients. There was no difference between the groups for mean age (p=0.917) and the total amount of collagen fibers (p=0.3619). These results represent structural changes in the dermis due to the massive weight loss once it demonstrates collagen modifications with reduction of thickness, organized and structured fibers, increase of thin, misaligned and disarranged fibers, and augmentation of the density of elastic fibers. This brings the scientific explanation for the established clinical perception that the skins of post-bariatric patients are less resistant and with more laxity when compared with what they were before the bariatric surgery

Introdução: A hiperidrose primária consiste em uma sudorese excessiva em regiões limitadas do corpo. A simpatectomia torácica videotoracoscópica é um dos tratamentos propostos para a hiperidrose primária palmar, aliando alto sucesso terapêutico com baixo risco. A fisiopatologia da hiperidrose primária ainda não está totalmente esclarecida. Objetivos: Analisar as características morfométricas dos gânglios simpáticos torácicos (G3), removidos cirurgicamente de pacientes portadores de hiperidrose palmar. Como controle foram utilizados os gânglios simpáticos, removidos no mesmo nível (G3), de pacientes doadores de órgãos por morte encefálica, sabidamente sem hiperidrose. Foram estudadas a estereologia e a apoptose celular e as fibras do sistema colágeno /elastina da matriz extracelular. Métodos: Estudo transversal, no qual foram incluídos 40 gânglios simpáticos torácicos (G3) removidos do hemitórax esquerdo, provenientes de pacientes com hiperidrose palmar (Grupo I), submetidos à simpatectomia videotoracoscópica, e 14 gânglios simpáticos de pacientes controle sabidamente sem hiperidrose (Grupo II), removidos por esternotomia mediana. Resultados: Em relação ao sexo, a proporção de mulheres e homens foi de 30:10, no Grupo I, e 7:7 no Grupo II, com p = 0,103. A idade no Grupo I, variou de 10 a 42 anos, com uma média de 23,73 (+ 7,51) e no Grupo II variou de 17 a 68 anos, com uma média de 37,57 (+ 16,65) , apresentando um p = 0,009. A média das células ganglionares nos pacientes do Grupo I foi de 14,25 (+ 3,81) e no Grupo II foi de 10,65 (+ 4,93) com p = 0,007. A média das células ganglionares coradas pela caspase (apoptose) no Grupo I foi de 2,37 (+ 0,79) e no Grupo II foi de 0,77 (+ 0,28) com p < 0,001. A mediana da área de colágeno corada pelo Picrosírius no Grupo I foi de 0,80 IQ (0,08-1,87) e no Grupo II foi de 2,36 IQ (0,49-5,98) com p = 0,061. Conclusões: Os pacientes portadores de hiperidrose primária palmar apresentam um maior número de células ganglionares no gânglio simpático, em relação aos do grupo controle. Há um número maior de células ganglionares simpáticas em apoptose na hiperidrose. Os pacientes portadores de hiperidrose apresentam menos colágeno no gânglio simpático / Introduction: Primary hyperhidrosis consists of excessive sweating in small areas of the body. The video-assisted thoracic sympathectomy is one of the suggested treatments for primary palmar hyperhidrosis, which combines high therapeutic success with low risk. The pathophysiology of primary hyperhidrosis is not fully understood yet. Objectives: Analyzing the morphometric characteristics of the thoracic sympathetic ganglion (G3) surgically removed from patients with palmar hyperhidrosis. The sympathetic ganglion removed at the same level (G3) from patients who are organ donors after brain death and who did not have hyperhidrosis were used as control. Stereology and cellular apoptosis, as well as the fibers of the collagen/elastin system of the extracellular matrix were subjected to scrutiny. Methods: Cross-sectional study, which included 40 thoracic sympathetic ganglion (G3) removed from the left hemithorax of patients who have palmar hyperhidrosis (Group I) and underwent video-assisted thoracoscopic sympathectomy, and also 14 sympathetic ganglion from control patients who did not have hyperhidrosis (Group II), which were removed with median sternotomy. Results: In regards to gender , the proportion of women to men was 30:10 in Group I and 7:7 in Group II, with p = 0.103. The age Group I ranged from 10 to 42 years, with an average of 23.73 (+ 7.51) years and in Group II, from to 17 to 68 years, with an average of 37.57 (+ 16.65) years, with p = 0.009. The average of ganglion cells in Group I was 14.25 (+ 3.81) and in Group II, 10.65 (+ 4.93) with p = 0.007. The average ganglion cells stained by Caspase (apoptosis) in Group I was 2.37 (+0.79) and in Group II, 0.77 (+ 0.28) with p = 0.001. The median collagen area by Picrosirius in Group I was 0.80 IQ (0.08-1.87) and in Group II, 2.36 IQ (0.49-5.98) with p = 0.061. Conclusions: Patients with primary palmar hyperhidrosis have an increased number of ganglion cells in the sympathetic ganglion in comparison to the control group. There are a higher number of sympathetic ganglion cells in apoptosis in hyperhidrosis. Patients with hyperhidrosis have less collagen in sympathetic ganglion

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Casuística e Métodos: Durante a histerectomia total, biópsias de parede vaginal anterior foram obtidas de mulheres caucasianas na pré-menopausa (fase proliferativa do ciclo menstrual) e na pós-menopausa com POP acentuado (POPQ estadio III e IV), e de controles assintomáticas (POPQ 0). RNAm e proteínas totais foram extraídos usando Trizol e RIPA Buffer, e os genes e proteínas de interesse quantificados por RT-PCR em tempo real e Imunobloting, respectivamente. As seguintes análises comparativas foram realizadas: (1) expressão dos genes e das proteínas da família LOX (LOX e LOXL1-4), fibulina-5 e fibrilinas- 1 e -2 em pacientes na pré-menopausa com e sem POP; (2) expressão do gene e da proteína PCP/BMP1 em pacientes na pré- e pós-menopausa com POP, e respectivos controles. Os testes de Wilcoxon signed-rank e Fisher foram usados para as análises estatísticas (p<0.05). Resultados: Obtivemos amostras de 15 pacientes e 11 controles na pré-menopausa para o estudo (1), e 39 pacientes na pré-menopausa (POP=23 e Controle=16) e 18 na pósmenopausa (POP=13 e Controle=5) para o estudo (2). A partir das análises, observamos (1) diminuição significativa na expressão dos genes LOX, LOXL1 e LOXL3, bem como nas proteínas LOX e LOXL3 no tecido vaginal de pacientes POP na pré-menopausa comparadas com mulheres assintomáticas (p<0.05); (2) hipoexpressão do gene PCP/BMP1 nos tecidos vaginais de mulheres com POP acentuado comparadas com controles, tanto na prémenopausa como na pós-menopausa (ambos p=0.01); redução significativa das isoformas 130kDa, 92,5kDa e 82,5kDa da PCP/BMP1 no tecido vaginal de pacientes na pósmenopausa (p=0.01), bem como hiperexpressão da isoforma 130kDa nas mulheres com POP acentuado na pré-menopausa (p=0.009), comparadas com as respectivas controles. Conclusão: As expressões das enzimas LOXs e pró-colágeno C proteinase estão alteradas no tecido vaginal de mulheres com POP, e são moduladas pelo estado hormonal. A alteração na regulação destas enzimas, envolvidas na biossíntese da matriz extracelular, pode contribuir para deficiente síntese do tecido conjuntivo e do suporte vaginal, e estar envolvida no desenvolvimento do POP. / Objective: Pelvic organ prolapse (POP) results from the failure of pelvic floor support, and connective tissue abnormalities may be involved in the etiology and/or progression of the dysfunction. We aimed to analyze the differential expression of genes and proteins related to the collagen and elastin biogenesis: lysyl oxidases (LOXs), fibulin-5, fibrillin -1 and -2, and procollagen C proteinase (PCP/BMP1) in vaginal tissue of women without and with advanced POP controlled by hormonal status. Materials and Methods: During total hysterectomy, anterior vaginal wall biopsies were obtained from Caucasian premenopausal women (proliferative phase of menstrual cycle) and postmenopausal women with severe POP (POPQ stage III and IV) and asymptomatic controls (POPQ 0). Total mRNA and protein were extracted using Trizol and RIPA buffer, and the genes and proteins of interest were quantified by real-time RT-PCR and Immunoblotting, respectively. The following analysis were performed: (1) expression of LOX family genes and proteins (LOX and LOXL1-4), fibulin-5, fibrillin-1 and -2 in premenopausal women with and without POP; (2) PCP/BMP1 gene and protein expression in vaginal tissue of pre- and postmenopausal POP women, and respective controls. Wilcoxon signed-rank and Fisher tests were used for statistical analysis (p<0.05). Results: Samples from 15 premenopausal patients and 11 controls were obtained for study (1); 39 premenopausal (POP=23 and Control=16) and 18 postmenopausal women samples (POP=13 and Control=5) for study (2). We observed: (1) significant decrease in expression of LOX, LOXL1 and LOXL3 genes, as well as LOX and LOXL3 proteins in vaginal tissue of premenopausal POP patients compared with asymptomatic women (p<0.05); (2) PCP/BMP1 gene downregulation in the vagina of women with severe POP compared with controls, in both premenopausal and postmenopausal phase (both p=0.01); significant reduction of 130 kDa, 92.5 kDa and 82.5 kDa PCP/BMP1 isoforms in vaginal tissue of postmenopausal patients (p=0.01), and 130 kDa isoform upregulation in premenopausal women with severe POP (p=0.009), compared with their respective controls. Conclusion: The expression of LOXs enzymes and PCP/BMP1 are altered in vaginal tissue of women with severe POP, and are modulated by hormonal status. Dysregulation of these enzymes involved in the extracellular matrix biogenesis may contribute to impaired tissue and vaginal support, and may be involved in POP development. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações