Orientador: Danilo Florentino Pereira / Resumo: O incubatório de ovos tem grande importância na cadeia produtiva, pois éa partir dele que a cadeia produtiva de frango é abastecida. Assim, a ineficiência noincubatório afeta todo o segmento. Foi realizado um experimento com o objetivo deobservar os efeitos da idade da matriz pesada sobre o rendimento de incubação e aperda de calor dos ovos durante o trajeto da sala de incubação até o nascedouro.Foram incubados ovos de matrizes pesadas da linhagem Cobb de três idades: 26,32 e 53 semanas. Esses ovos foram separados em dois tratamentos, sendo T0 otratamento controle, que respeitou os procedimentos adotados normalmente pelaempresa incubadora e T1, que utilizou uma caixa térmica para o transporte dos ovosdurante a transferência. Para ambos os tratamentos a transferência durou cerca de10 minutos em todas as três repetições. Após o nascimento foi realizada a contagemdos pintos nascidos, dos ovos não eclodidos, os cálculos de eclosão eeclodibilidade, a quebra dos ovos não eclodidos para averiguar em qual momento dodesenvolvimento ocorreu mortalidade embrionária, e o peso dos pintos nascidos. Osresultados obtidos mostraram que os ovos de 26 semanas tiveram maiorinfertilidade, o que fez com que a eclosão se apresentasse menor, a eclodibilidade emortalidade não foram diferentes entre as idades. O peso dos pintinhos diferiu nastrês idades mostrando que os pintinhos de matrizes mais velhas são mais pesados.Quanto à perda de calor, os resultados mostrar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incubatory of eggs has great importance in the production chain,since it is the supplier of the production chain. Thus, inefficiency in the incubatoryaffects the entire production chain. An experiment was performed in order to observethe effects of the broiler breeders and the heat loss of the eggs during the transferfrom the hatchery to the hatcher on the yield of the incubation. Eggs from three ages:26, 32 and 53 weeks of Cobb broiler breeders were incubated. These eggs wereseparated into two treatments: T0 as the control treatment, which complied with theprocedures normally adopted by the incubator company and T1 which used a coolerto transport the eggs during the transfer. For both treatments the transfer took about10 minutes in all the three repetitions. After the birth it was made the counting of thehatched chicks, of the unhatched eggs, the calculations of hatching and hatchability,the breaking of the unhatched eggs; all to determine at what time of the developmentthe embryonary mortality took place, and the weight of the hatched chicks. Theresults obtained showed that the eggs of the 26-week breeders had higher infertility,which led to the lower hatching. Hatchability and mortality did not differ between theages. The weight of the chicks differed in the three ages showing that the chicks ofolder breeders were heavier. Regarding the heat loss, the results showed that all theplaces evaluated had temperature and RH out of the recomme... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marco Antônio Alvarenga / Resumo: Na espécie equina, o embrião se movimenta no útero entre os dias 9 e 16 após a ovulação, o concepto apresenta uma forma esférica e se move constantemente no lúmen uterino mediante contrações miometriais, produzidas por estimulação química da vesícula embrionária. O deslocamento embrionário durante este período é essencial para o reconhecimento materno da gestação. Este longo período de estímulo garante que o embrião produza sinais anti-luteolíticos no endométrio, evitando a luteólise. Após 17 dias, a vesícula embrionária cessa a mobilidade e ocorre a fixação em um dos cornos. Durante a mobilidade, o embrião produz prostaglandinas PGE-2, PGF-2α e PGI-2. Se houver uma falha durante a migração embrionária, o reconhecimento materno da gestação pode ser afetado e consequentemente há lise do corpo lúteo, resultando na perda precoce da prenhes. O uso do anti-inflamatório flunixin meglumine imediatamente após a transferência do embrião é amplamente utilizado para prevenir uma reação inflamatória local, a luteólise e a perda embrionária precoce. No entanto, de acordo com a literatura, o ácido mefenâmico causa menos efeitos sobre a mobilidade embrionária e aumenta as taxas de gestação. O objetivo deste estudo foi elucidar o efeito do ácido mefenâmico sobre a mobilidade embrionária em éguas. Foram selecionadas 10 éguas para o estudo. Após a confirmação da gestação com ultrassom transretal, a mobilidade embrionária foi avaliada por ultrassonografia em série (a cada 5 minutos) durante 1 h... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the equine specie, the embryo moves in the uterus between days 9 and 16 after ovulation, the conceptus presents a spherical shape and moves constantly in the uterine lumen through myometrial contractions, produced by chemical stimulation of the embryonic vesicle. Embryonic displacement during this period is essential for maternal recognition of pregnancy. This long stimulus period ensures that the embryo produces anti-luteolytic signals to the endometrium, avoiding the luteolysis. After 17 days the embryonic vesicle stops the mobility and occurs the fixation in one of the horns. During mobility, the embryo produces prostaglandins PGE-2, PGF, and PGI-2. If there is a failure during embryo migration the maternal recognition of pregnancy may be affected and consequently lysis of corpus luteum, resulting in the early pregnancy loss. The use of the anti-inflammatory flunixin meglumine immediately after the embryo transfer is widely used in order to prevent a local inflammatory reaction, luteolysis, and early embryonic loss. However, according to the literature, mefenamic acid cause less effects on embryonic mobility and increases pregnancy rates. The objective of this study was to elucidate the effect of mefenamic acid on embryonic mobility in mares. There were selected 10 mares for the study. After confirmation of pregnancy with transrectal ultrasound, the embryo mobility was evaluated by serial ultrasonography (every 5 minutes) during 1 hour. This examination was considered t... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O objetivo deste experimento foi determinar a sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificado em palhetas na presença de uma haste metálica .Blastocistos Mus domesticus domesticus coletados no quarto dia após a fecundação, foram avaliados morfologicamente e divididos aleatoriamente em três grupos. Os embriões do grupo controle foram transferidos para gotas de meio KSOM e cultivados in vitro por 48 horas. Os embriões selecionados para criopreservação foram expostos a uma solução crioprotetora constituída por PBSm + de 10% etileno-glicol + 10% propileno-glicol, para promover uma desidratação das células embrionárias. Após foram transferidos para a solução de vitrificação que continha 20% etilenoglicol + 20% propilenoglicol diluídos em PBSm, e mantidos durante 25 segundos, sendo imediatamente imersos em nitrogênio submetido à vácuo. As taxas de sobrevivência embrionária revelaram uma maior eficiência da técnica com a inserção da peça metálica (56,21% - 86/153) em relação ao método convencional (18,84% - 26/138). Concluímos assim que a presença da peça metálica em contato com a amostra propiciou maior taxa de sobrevivência dos embriões submetidos à vitrificação envasados em palhetas de 0,25 mL. / The aim of this experiment was determine the Mus domesticus domesticus blastocysts survival rates after vitrification in straws containing a metallic stick, that allows to increase the temperature changes among the nitrogen and the embryo sample. Day 4 Mus domesticus domesticus blastocysts were collected from superovulated donnors and after morphologically evaluation were randomly divided in three groups. The embryos select as control group were transferred to KSOM medium drops and in vitro cultured during 48 hours. The crioperservation selected embryos were first exposed to a cryoprotective solution (modified PBS + 10% ethylene-glycol and 10% propylene-glycol) to promote embryo cell dehydration and after exposed during 25 seconds to the vitrification solution composed by modified PBS + 20% ethylene-glycol and 20% propylene-glycol, and immediately plunged into slush liquid nitrogen. The embryo survival rate in group vitrified in the straws containing the metallic stick (56,21% - 86/153) was significantly different from the observed in the group loaded in original straws (18,84% - 26/138). In conclusion, the presence of the metallic stick in contact with the sample was efficient to enhance more suitable survival rates after vitrification of Mus domesticus domesticus blastocysts loaded in 0,25 mL straws.

O desenvolvimento de protocolos eficientes para a vitrificação de embriões mamíferos ainda é um desafio para os especialistas em reprodução. Soluções crioprotetoras de baixa toxicidade associadas a técnicas seguras de envase são fatores fundamentais, para proporcionarem uma eficiente identificação e controle sanitário das amostras. Dois experimentos foram realizados para determinar a taxa de sobrevivência de embriões Mus domesticus domesticus envasados em palhetas convencionais (0,25 mL), na presença de uma haste metálica de ouro, empregando soluções crioprotetoras descritas para a vitrificação em microvolume. No experimento 1, avaliou-se a toxicidade da solução de desidratação (SD: PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0,5 M sacarose), expondo-se os embriões por diferentes tempos: 1 (T1), 3 (T2) ou 10 min (T3). A toxicidade da solução de vitrificação (SV: PBSm + 20% EG + 20% PROH) foi determinada pela exposição dos embriões durante 25, 60 ou 180 seg, previamente desidratados por 1 ou 3 min. No experimento 2, avaliou-se a utilização do macrovolume (palhetas com a haste de ouro) e microvolume (micropipetas de vidro - GMP) na vitrificação dos blastocistos expostos à SV por 25 seg, previamente desidratados por 1 ou 3 min. Os dados foram analisados pelo teste Qui-Quadrado (P<0,05). No experimento 1, não foi observada diferença estatística entre as taxas de eclosão dos embriões desidratados: T1=68,0% (38/56), T2=72,0% (36/50), T3=71,0% (39/55) e o grupo controle, (74,0% - 48/65). No entanto, houve diferença significativa (P<0,05) na taxa de eclosão em relação ao tempo de exposição dos embriões à SV. Os embriões desidratados por 1 ou 3 min e expostos à SV por 25 seg proporcionaram maiores taxas de re-expansão (79,0% vs 84,0%) e de eclosão (58,0% vs 72,0%), em relação aos tempos de exposição de 60 e 180 seg. No experimento 2, após a vitrificação dos embriões envasados nas palhetas com a haste de ouro, a taxa de eclosão dos blastocistos previamente desidratados por 1 min foi de 16,0% (10/64) e de 4,0% (2/57) quando previamente desidratados por 3 min. Por outro lado, os embriões envasados nas GMP, e previamente desidratados por 3 min, foram os que apresentaram maior taxa de eclosão (60,0% - 52/86). A vitrificação de embriões utilizando soluções crioprototetoras descritas para microvolume não foi eficiente na crioproteção dos blastocistos envasados em palhetas convencionais com a haste de ouro. / The development of efficient vitrification protocols for mammalian embryos still is a challenge for reproductive biologists. Low toxicity cryoprotectant solutions and safe vitrifications procedures that allow sample identification and sanitary control are fundamental factors. Two experiments were conducted to determine the survival rate of vitrified Mus domesticus domesticus embryos loaded into straws containing a metallic piece (manufactured in gold), using cryoprotectant solutions described for microvolume vitrification procedures. In Experiment 1, the toxicity of the dehydratation solution (SD: PBSm +10% EG + 10% PROH + 0,5 M sucrose) was evaluated using three different embryo exposure times: 1 (T1), 3 (T2) or 10 min (T3), in addition as well as the toxicity of the vitrification solution (SV: PBSm + 20% EG + 20% PROH) was also tested upon embryo exposure for 25, 60 or 180 sec, previously dehydration for 1 or 3 min. In Experiment 2, the use of macrovolume (straw with a stem of gold) or microvolume (glass micropipettes – GMP) was evaluated for the vitrification of blastocysts after exposure to SV for 25 sec and previous dehydration for 1 or 3 min. Data were analized by the Chi-square test (P<0,05). In Experiment 1, statistical differences were not observed between hatching rates of dehydrated embryos: T1=68.0% (38/56), T2=72.0% (36/50), T3=71.0% (39/55) and control group embryos, (74.0% - 48/65). However, a significant difference (P <0,05) was observed between hatching rates after embryos exposure to the SV. Embryos dehydrated for 1 or 3 min and exposed for 25 sec to the SV showed higher re-expansion (79.0% vs. 84.0%) and hatching rates (58.0% vs. 72.0%) than embryos exposed to SV for 60 or 180 sec. In Experiment 2, after vitrification of the embryos loaded into straws containing a metallic piece showed a hatching rate of 16.0% (10/64) when previouslly dehydrated for 1 min, and 4.0% (2/57) when for 3 min. On the other hand, embryos loaded into GMP, previouslly dehydrated for 3 min, showed a higher hatching rate, (60.0% - 52/60). Embryo vitrification using a cryoprotectant solution described as suitable for microvolume was not efficient to cryoprotect blastocysts loaded into macrovolume straws containing a metallic piece.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-08T16:57:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 228366 bytes, checksum: 5f2b48170e9b0dcd8dea1c4e1dca462b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T16:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 228366 bytes, checksum: 5f2b48170e9b0dcd8dea1c4e1dca462b (MD5) Previous issue date: 2005-02-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O experimento foi conduzido em duas etapas. A primeira etapa consistiu na realização de colpocitologia para avaliação do ciclo estral de gatas domésticas. Nesta etapa foram monitoradas por um período de 12 meses, seis gatas adultas não gestantes, sem raça definida, mantidas em um gatil em ambiente coletivo, sendo fornecido água e ração ad libitum. Os animais foram monitorados diariamente quanto a manifestações comportamentais das diferentes fases do ciclo estral, sendo obtidos três esfregaços vaginais semanalmente. Foram considerados os seguintes tipos celulares: células parabasais e intermediárias, células superficiais e células anucleadas, sendo analisadas cerca de 100 células em cada lâmina. Todos os animais avaliados apresentaram sinais comportamentais característicos das diferentes fases do ciclo estral durante todo o ano. O número médio de ciclos foi de 11,2 ao ano, sendo 8,8 observados nos meses de maior insolação e 2,4 nos meses de menor insolação média. Neste período a duração média dos ciclos estrais foi de 22,5 dias, enquanto no outono e inverno a duração média dos ciclos foi de 53 dias. as células parabasais e intermediárias estavam em maiores proporções no pós-estro (57,4%), reduzindo drasticamente no proestro (22,1%) e atingindo os menores valores observados no período de estro (15,95%). As células superficiais apresentaram menores variações durante as fases do ciclo estral sendo 28,7% no pós-estro, 43,6% no proestro e 33,2 % no estro. Já as células anucleadas apresentaram aumento considerável do período de proestro para o período de estro (34,3 % para 51,0 %), sendo no período de pós-estro registrado os menores valores (13,9%). A segunda etapa consistiu na indução da atividade ovariana e da ovulação, objetivando coleta e transferência de embriões. Nesta etapa foram utilizadas, dezesseis gatas domésticas adultas e dois machos adultos reprodutores. Todas as fêmeas receberam uma única aplicação de 150 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) no pós-estro, como indutor da atividade ovariana, e 80 a 84 horas após, receberam uma única aplicação de 100 UI de gonadotrofina coriônica humana (hCG) como indutor da ovulação. Após a aplicação de hCG, oito gatas doadoras foram naturalmente acasaladas. As oito gatas receptoras receberam estímulo extra de indução da ovulação através da manipulação de um swab intravaginal. De cinco a seis dias após a aplicação de hCG, as gatas foram submetidas a uma laparotomia, para a coleta dos embriões, a qual foi efetuada através de lavagem uterina transcornual. Foram cirurgicamente inovulados em média seis embriões, classificados como mórula compacta e blastocisto dos tipos I a III, em quatro receptoras. Três animais apresentaram gestação confirmada por ultrassonografia aos 36 dias sendo que destes dois animais pariram ninhadas com dois e quatro filhotes, respectivamente 66 e 63 dias após a indução da ovulação. Excetuando-se um natimorto, todos os filhotes apresentaram desenvolvimento normal. / The experiment was led in two stages. The first stage consisted of the accomplishment of colpocitology for evaluation of the cycle estral of domestic cats. In this stage six queens non pregnant, without defined race, were monitored by a period of 12 months and maintained in a collective atmosphere, being supplied water and ration ad libitum. The animals were monitored daily as to estrous behavior of the different phases of the estrous cycle, being weekly obtained three vaginal smears. The following cellular types were considered: Parabasal Cells and Intermediate Cell; Superficial Cells and Anuclear Cells, being analyzed and quantified about 100 cells in each sheet. All the appraised animals presented estrous behavior of the different phases of the cycle estral. The medium number of cycles was from 11,3 a year and about 70% of the estrous cycles they showed in the period of November to April (spring and summer). In this period the medium duration of the estrous cycles in the researched animals, was of 22,5 days, while in the autumn and winter the medium duration of the cycles was of 53 days. The Parabasal Cells and Intermediate were in larger proportions in the post-estrus (57,4%), reducing drastically in the proestrus (22,1%) and reaching the smallest values observed in the estrus (15,95%). The superficial cells presented smaller variations during the phases of the estrous cycle being 28,7% in the post-estrus, 43,6% in the proestrus and 33,2% in the estrus. The Anuclear Cells already presented considerable increase of the period of proestrus for the estrus (34,3% for 51,0%), being in the period of post-estrus registered the smallest values (13,9%). The second stage consisted of the induction of the ovarian activity and of the ovulation, aiming at collection and transfer of embryos. In this stage were used, sixteen queens and two tom. All the females xreceived an only application of 150 UI of Gonadotrofina Equine Coriônica (eCG) in the post-estrus, as inductor of the ovarian activity, and 80-84h after they received an only application of 100 UI of Chorionic Gonadotropins Human Coriônica (hCG) as inductor of the ovulation. After the hCG application, the queens donors were just coupled naturally. The recipients received extra incentive of induction of the ovulation through the manipulation of a swab intravaginal. Targeting recovery from donors, the uterus were excised six days after hCG administration from donors under general anesthesia, and the uterine horns were flushed downward. The embryos were infused into the uterine horn on average six embryos, classified as compacted morulae and early blastocysts of the types I, II, III in four recipients. Three animals impregnated, these two animals had two and four newborns respectively, and duration of pregnancy was respectively 66 and 63 days after the induction of the ovulation. Being excepted one newborn, all the newborns presented normal development.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T11:33:37Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 14552 bytes, checksum: c7feb5483902e97430fd0ecfd37fc98b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T11:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 14552 bytes, checksum: c7feb5483902e97430fd0ecfd37fc98b (MD5) Previous issue date: 2005-03-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O vírus da doença infecciosa bursal é um importante agente patogênico de aves e desde 1962 tem estado relacionado com grandes prejuízos econômicos. Ainda hoje não foi estabelecido um protocolo de vacinação realmente eficiente e falhas na imunização das aves são geralmente descritas. Os motivos dessas falhas vem sendo pesquisados e as causas alegadas são desde o surgimento de cepas patogênicas por mutações na região do gene que codifica para a VP2, uso mal assessorado de vacinas pouco atenuadas e a reversão vacinal. Este trabalho teve como objetivo pesquisar e comparar a patogenicidade de isolados de campo com a de cepas vacinais. Foram testadas 21 amostras de bursa que foram submetidas à Unidade de Sanidade Avícola da Universidade Federal de Viçosa com suspeita de doença infecciosa bursal e três amostras vacinais. O isolamento viral foi realizado em células VERO, sendo o vírus isolado de 14,28% (3/21) das amostras de campo e de todas as amostras vacinais. As amostras foram padronizadas pela habilidade de provocar efeito patogênico em cultivo celular e foram inoculadas em ovos embrionados de 10 dias de idade. Amostras de fígado, rins, bursa, baço e intestino de cada um dos embriões foram coletadas durante 8 dias e as alterações macroscópicas avaliadas. Metade de cada amostra coletada foi mantida à 4°C e metade foi fixada com formol 10%. As amostras fixadas foram processadas pelo método de inclusão em parafina, coradas com hematoxilina e eosina e as alterações microscópicas avaliadas. Das amostras mantidas a 4°C foi extraído o RNA total pelo método do TRIzol e testadas pela técnica de RT- PCR. Nas observações anatomopatológicas os embriões inoculados apresentavam tamanho reduzido quando comparado aos embriões controle e órgãos com lesões sugestivas de danos vasculares. Nas análises histopatológicas, os órgãos linfóides apresentaram pronunciada depleção linfóide, os hepátocitos vacuolização citoplasmática e os rins estruturas basófilas dentro de túbulos. No teste de RT-PCR foi possível detectar a presença do ácido nucléico viral em todos os tecidos, sendo que a distribuição tecidual dos isolados de campo foi maior quando comparada aos isolados vacinais. Esses resultados revelaram não haver grande diferença quando comparadas as lesões causadas pelos isolados de campo com as lesões causadas por algumas amostras vacinais. Porém há distintos padrões de distribuição em tecidos que poderia indicar uma variação na atenuação de algumas amostras vacinais. Esses resultados sugerem que as amostras vacinais podem causar lesões características da doença e que o uso de determinada cepa, mais ou menos invasiva, deve ser avaliada com cuidado pelo profissional no campo. / The infectious bursal disease virus is an important pathological agent of poultry and since 1962 it has been related to great economical losses. Until now, an efficient vaccination protocol has not been established and faults in poultry immunization are generally described. These faults motifs are being searched and various causes have been quoted, from the emergence of pathogenic strains by mutations in the gene responsible for coding VP2, to bad usage of vaccines attenuated for low passage and vaccinal reversion. The aim of this work was to examine and compare field isolates pathogenicity with vaccinal strains. Twenty-one bursa samples suspicious of infectious bursal disease submitted to Unidade de Sanidade Avícola da Universidade Federal de Viçosa and three vaccinal samples were tested. The viral isolation was accomplished in VERO cells, the virus was isolated in 14,28% (3/21) of field samples and in all vaccinal samples. The samples were standardized by its ability to provoke pathogenic effect in cellular culture and were inoculated in 10 days embryonic eggs. Liver, kidney, bursa, spleen and gut samples of each embryo were collected during 8 days and the macroscopic alterations evaluated. Half of each collected sample was stored at 4°C and the other half was fixed with 10% formol. The fixed samples were processed by paraffin xinclusion method, dyed with hematoxilin and eosin and the microscopic alterations evaluated. Total RNA extraction was performed on those samples stored at 4°C by TRIzol method and tested by RT-PCR technique. In anatomopathological observations inoculated embryos presented reduced size when compared to control embryos and organs with characteristics lesions of vascular injury. In histopathological analysis lymphoid organs presented an accentuated lymphoid depletion, hepatocytes presented citoplasmatic vacuolization and kidneys basophiles structures inside tubules. In RT-PCR test was possible to detect the presence of viral nucleic acid in each and every tissues, and the distribution of field isolates was larger when compared to vaccinal isolates. The results revealed that there is not much difference between lesions caused by field isolates with lesions caused by some of vaccinal samples. However, there are distinct distribution patterns in tissues that could indicate a variation on attenuation in some vaccinal samples. These results suggest that vaccinal samples could cause characteristics disease lesions and that the use of a determinate strain more or less invasive should be evaluated with care by the field professional.

Orientadora: Profa. Dra. Marcella Pecora Milazzotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2014. / A cinética do desenvolvimento embrionário pode estar relacionada com a viabilidade dos embriões produzidos in vitro (PIV) no que diz respeito ao estresse celular. Embora ainda permaneça a hipótese de que embriões que apresentam cinética de desenvolvimento mais rápida podem apresentar maior viabilidade, embriões que se desenvolvem mais rápido nas suas primeiras clivagens também podem apresentar maior resposta ao estresse. Com base nesses dados nossos objetivos foram caracterizar o perfil de morte celular por apoptose em embriões bovinos PIV com diferentes cinéticas de desenvolvimento, além de verificar possíveis marcadores de resposta ao estresse nestes embriões. Para tal, os complexos cumulus-oócitos obtidos de ovários de vacas de abatedouro comercial foram selecionados, maturados (MIV) e fecundados in vitro (FIV). Os zigotos denudados foram cultivados in vitro (CIV) individualmente e, 40 horas pós inseminação (hpi) os embriões foram classificados de acordo com suas primeiras clivagens em: rápidos (4 células) e lentos (2 ou 3 células), gerando dois grupos que foram avaliados nos seguintes estádios: clivagem (40hpi), mórula (96hpi) e blastocisto (186hpi). As avaliações consistiram de índice de embriões clivados (D2) e blastocistos (D7), número total de células, fragmentação de DNA (teste TUNEL), presença de caspase 3 e 7 ativas, presença de caspase total ativa e avaliação molecular dos genes candidatos (HSP60, GRP78, SOD1 e MORF4L2). Os dados foram submetidos ao teste t-student ou ANOVA seguida de teste Tukey quando apropriado (Prism 5 GraphPad Inc.). Não houve diferença entre os índices de clivagem dos grupos rápido e lento, no entanto maior quantidade de embriões rápidos chegaram ao estádio de blastocisto quando comparado com o grupo lento. Não houve diferença no número total de células e células TUNEL positivas entre grupos em nenhum dos momentos analisados. Apesar disso, quando o embrião está no estádio de mórula, no qual ocorre a ativação do genoma, classificada como uma fase crítica, as quantidades de caspase 3 e 7 e caspase total ativas foram maiores no grupo lento quando comparado com grupo rápido. Pela análise de expressão dos genes candidatos GRP78, HSP60, SOD1 e MORF4L2, foi possível evidenciar que os mecanismos de resposta ao ambiente PIV são diferentes entre os grupos analisados. Esse trabalho nos permite concluir que quando submetidos a PIV, embriões de diferentes cinéticas ativam vias distintas de resposta ao estresse, que podem ou não levar a morte celular por apoptose. Mais ainda, a fase de ativação do genoma embrionário é a fase mais crítica para ambos os grupos.

Orientadora: Prof. Dra. Marcella Pecora Milazzotto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2015. / A morfologia e as taxas de clivagem e de blastocistos têm sido critérios utilizados para avaliação da competência embrionária. Entretanto, com o advento de novas biotecnologias tem-se tornado claro que a competência embrionária pode ser severamente comprometida sem alterações morfológicas perceptíveis. Estudos em embriões humanos propuseram avaliações morfológicas adicionais relacionadas ao momento das primeiras divisões celulares embrionárias (rápida e lenta) que parecem estar relacionadas com a viabilidade do embrião. No entanto, ainda não existem muitos dados dessa análise morfocinética em bovinos. A viabilidade embrionária também pode ser severamente comprometida pelo acúmulo de lipídeos nos embriões PIV, podendo inclusive prejudicar aplicações comerciais como a criopreservação. Com isso, o objetivo desse estudo foi caracterizar em embriões bovinos de cinéticas diferentes de desenvolvimento (rápido e lento) o padrão de metabolismo lipídico. Para tal, embriões produzidos in vitro foram analisados quanto a quantidade de lipídeos totais e caracterização de lipídeos de membrana nos estádios iniciais de clivagem (22hpi e 96hpi) e blastocisto. Para o estádio de blastocisto também foi incluído um grupo de embriões in vivo. Foi possível evidenciar menor quantidade de lipídeos totais pela coloração SUDAN BLACK B nos grupos lentos. As análises de MALDI-MS evidenciaram lipídeos de membrana com padrões distintos nos grupos rápidos e lentos nos estádios de clivagem e mórula. Já nos estádios de blastocistos os dados nos permitem inferir que o grupo de blastocisto lento parece estar mais próximo do grupo in vivo, pela semelhança na abundância/intensidade relativa no maior número de íons revelados pelas análises multivariadas. No entanto, o grupo lento ainda mostra alguma semelhança com o grupo rápido devido a exposição ao mesmo ambiente in vitro. / Embryo viability and competence have been evaluated by criteria such as morphology and cleavage and blastocyst rates. However, the advent and application of new biotechnologies have demonstrated that embryonic competence can be severely compromised without noticeable morphological changes. Human embryo studies proposed the use of additional morphological evaluations related to the moment of the first embryonic cell divisions and its kinetic (fast and slow), which appear to be relevant to the embryo viability. Nevertheless, there are still not enough data available related to the morphokinetic analysis of embryos in bovine cattle. Embryo viability can also be severely compromised by lipid accumulation in IVP (in vitro produced) embryos and can even harm commercial applications such as cryopreservation. Therefore, the aim of this study was to evaluate and characterize the pattern of lipid metabolism on bovine embryos with different developmental kinetics (fast and slow). For this goal, IVP embryos were analyzed considering the lipids total amount and membrane lipids characterization during the cleavage early stages (22hpi and 96hpi) and blastocyst stage. The study also included a group of in vivo embryos at the blastocyst stage. The results, using SUDAN BLACK B staining technique, showed a smaller amount of total lipids in the slow groups. The MALDI-MS analysis results showed different patterns of membrane lipids in the fast and slow groups in the cleavage and morulae stages. The data obtained at the blastocyst stage allow us to infer that the slow group is more similar to the in vivo group, since the results showed similarity in relative quantity/intensity in a greater number of ions revealed by multivariate analysis. However, the slow group still shows some similarity with the fast group due to the exposure to the same in vitro environment.

Resumo: O uso de progestágenos e a estimulação da ovulação com gonadotrofinas permite a superovulação de ovelhas durante o anestro sazonal e a sincronização de seus ciclos. A resposta aos tratamentos superovulatórios foi determinada com o uso de hormônio folículo estimulante (FSH) e gonadotrofina do soro de égua prenhe (PMSG) no anestro sazonal em ovelhas Suffolk. As ovelhas (n=15) previamente sincronizadas com implantes subcutâneos (Norgestomet) foram divididas em dois grupos experimentais, que receberam 250 Ul de FSH e 1000 Ul de PMSG, respectivamente. Todas as ovelhas foram submetidas à monta natural. A coleta de embriões foi realizada no dia 7 após a retirada do implante. A média do número de corpos lúteos (taxa de ovulação), o número total de embriões e o número de embriões viáveis colhidos foram maiores (P<0,05) para o tratamento com FSH do que para o tratamento com PMSG. Amostras de sangue foram colhidas durante o tratamento e no dia da coleta de embriões para estudar a taxa de progesterona. Os níveis de progesterona não diferiram entre os tratamentos. O uso de FSH aumentou a resposta superovulatória e mostrou ser melhor do que o PMSG no anestro sazonal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-02Bitstream added on 2014-06-13T20:48:03Z : No. of bitstreams: 1 martinhago_cd_dr_botfm_prot.pdf: 1810275 bytes, checksum: 5592d92db2f6fd8dea862970f2f6df15 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cpdp - Centro Paulista de Pesquisa e Diagnostico / O diagnóstico genético pré-implantacional (PGD) é um procedimento o qual permite que embriões sejam testados perante uma doença genética antes de sua transferência para o útero materno, ou seja, antes... / Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is a procedure that permits embryos to be tested for a possible genetic diseade before being transferred to the maternal uterus, i.e., before the beginning of pregnancy... (Complete abstract click electronic access below)