Este trabalho foi conduzido com a finalidade de se verificar a influência da receptora e do embrião sobre o índice de prenhez (IP) e proporção de sexo. Um total de 431 embriões produzidos in vitro foram transferidos não cirurgicamente para o corno uterino de receptoras mestiças, previamente sincronizadas, de acordo com o desenvolvimento embrionário e grau de qualidade do embriâo. O primeiro exame de diagnóstico de prenhez (DP) foi realizado aos 26-28 dias da transferência e o segundo, aos 50-52 dias, quando foram também realizadas as avaliações das receptoras e a determinação do sexo dos fetos através da ultra-sonografia. O índice de prenhez foi de 38,0% (164/431) para o primeiro DP e 92,1% (151/164) das receptoras permaneceram prenhes aos 50-52 dias, evidenciando 7,9% (13/164) de perdas embrionárias e/ou fetais entre os exames. Maiores índices de prenhez (P<0,05) foram obtidos para embriões classificados como de grau 1 (86,5%) e desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto expandido (Bx; 40,1%). A avaliação das receptoras revelou maior ocorrência de corpos lúteos (CL) no ovário direito (65,1% vs. 34,9%), contudo, sem influenciar no IP, com 92,8% e 88,5% de prenhez, respectivamente, para CL no ovário direito e esquerdo. O tipo de CL (grau 1, 2 ou 3) afetou o IP, com o Cl de grau 1 (53,8%) produzindo mais animais prenhes (P<0,05) do que os demais. A presença de folículo em um ou ambos ovários, não influenciou (P>0,05) o IP, a despeito de sua ocorrência no lado direito (90,6%) ou esquerdo (92,0%). Mais (P<0,05) fetos macho (66,67%) do que fêmea (33,33%) foram obtidos a partir de embriões transferidos ao estágio de blastocisto inicial. Contudo, considerando os estágios de mórula, blastocisto inicial, blastocisto e blastocisto expandido, não houve diferença significativa (P>0,05) entre a proporção de fetos diagnosticados como sendo macho ou fêmea. Os diâmetros dos corpos lúteos, respectivamente, de 1,83, 1,88, 1,81 e 1,85cm, para receptoras com pelagem clara, malhada, marrom e preta, não influenciaram (P>0,05) os índices de prenhez, o mesmo acontecendo com relação ao tamanho do folículo, o qual variou de 0,50 a 1,6 cm de diâmetro. Baseado nos resultados obtidos, podemos concluir que tanto a receptora quanto o embrião influenciaram os índices de prenhez, sendo que o estágio do embrião também afetou a proporção de sexo dos fetos. / This study was carried out to verify the influence of the recipient and embryo on pregnancy rate (PR) and proportion of sex. A total of 431 in vitro- produced embryos were non-surgically transferred to the uterine horns from crossbred recipients previously synchronized, according to the embryo development stage and quality grade. The first exam for pregnancy was performed between 26th-28th day of embryo transfer following a second exam between 50th-52th day, when recipient evaluation and fetal sex determination were performed by ultrasonography. The pregnancy rate was 38,0% (164/431) for the first exam and 92,1% (151/164) of the recipients were kept pregnants on day 50-52, leading a 7,9% (12/164) of embryonic and/or fetal loss between the exams. Higher pregnancy rate (P<0,05) were obtained for embryo graded as 1 (86,5%) and embryo development at expanded blastocyst stage (EB;40,1%). The recipients evaluation showed more corpora lutea (CL) in the right ovary (65,1% vs.34,9%); however, it did not influence PR, with 92,8% and 88,5% of pregnancies, respectively, to CL in the right or left ovary. The type of CL affected the PR, with CL graded as 1 (53,8%) producing more pregnancies (P<0,05) than the others. The presence of a follicle in one or both ovaries did not influence (P>0,05) the PR, in despite of its presence in the right side (90,6%) or in the left side (92,0%). More (P< 0,05) male fetus (66,67%) than female ones (33,33%) were obtained from transferred embryos to the early blastocyst stage. However, considering the early blastocyst, blastocyst and expanded blastocyst stages, no difference (P>0,05) between the proportion of sex fetus was found. The CL diameters, respectively, from 1,83, 1,88, 1,81 and 1,85 cm for light-hair, threshed, brown and black recipients, did not affect (P>0,05) the PR, and the same happend in relation to the size of the follicle, which varied from 0,50 to 1,6 cm in diameter. These results suggest that the recipient and the embryo can influence the pregnancy rate and embryo development stage also affect the proportion of sex.

O status oxidativo do espermatozoide atua sobre ele de diferentes formas, desde a capacitação até a fecundação do oócito. No entanto, as espécies reativas de oxigênio (EROs) podem ser benéficas ou prejudiciais dependendo do contexto celular. Tendo em vista a baixa proteção antioxidante do sêmen criopreservado, associado às sucessivas manipulações que antecedem a fecundação in vitro, entender como esta célula se comporta em um ambiente oxidante e os impactos deste sobre o embrião é de suma importância. Com isto, o objetivo deste trabalho foi propor um modelo dose-dependente para o estudo do estresse oxidativo sobre o espermatozoide e possível impacto no desenvolvimento embrionário. Para isto, no experimento 1, palhetas de sêmen criopreservado de touros (n=5) da raça Nelore foram submetidas à incubação por 1 hora a 38,5 &ordm;C e 5% CO2, com doses crescentes de peróxido de hidrogênio (0; 12,5; 25; e 50 &micro;M). Ao final da incubação, os parâmetros de motilidade foram avaliados pelo sistema Computer Assisted System Analysis (CASA). No experimento 2, foram escolhidas duas doses de peróxido de hidrogênio com base nos resultados do experimento 1: alta (50 &micro;M), baixa (12,5 &micro;M) e também um controle (0 &micro;M). Os espermatozoides foram incubados com as respectivas doses de peróxido de hidrogênio por 1 hora, e ao final da incubação foram utilizados para a fecundação in vitro (D=0). Neste experimento, além das análises do CASA, foram feitas avaliações do status oxidativo (CellROX® green e 2&#x27;-7&#x27;diacetato de diclorofluoresceína - DCFH), do potencial mitocondrial (JC-1), da cromatina (LA) e da capacitação espermática (clortetraciclina). Os embriões foram avaliados com relação à taxa de clivagem rápida (30 horas pós-inseminação), taxa de clivagem (D=3), taxa de desenvolvimento (D=5) e taxa de blastocisto (D=8). Para análise estatística foi utilizado o modelo de regressão polinomial, considerando p&le;0,05. Tanto no experimento 1 quanto no experimento 2 houve detrimento dose-dependente do peróxido de hidrogênio sobre o padrão de movimento e de porcentagem de células móveis. Houve aumento dose-dependente da porcentagem de células positivas para CellROX&reg; células capacitadas e positivas para o LA. Com relação às taxas de clivagem e de blastocisto, houve diminuição da porcentagem de embriões clivados e de blastocistos, conforme a dose de peróxido de hidrogênio foi aumentada. Referente à taxa de desenvolvimento embrionário, houve bloqueio das estruturas em 2-4 células. Nestas condições, o espermatozoide quando exposto a um ambiente oxidante, apresenta alterações no padrão de motilidade, no status oxidativo e na capacitação, sendo que estas interferem de forma negativa no desenvolvimento embrionário, desde o início da clivagem até a formação do blastocisto. / Oxidative status may influence spermatozoa by distinct mechanisms, from capacitation to oocyte fertilization. However, reactive oxygen species (ROS) could be beneficial or harmful depending on cellular context. Due to the low levels of antioxidant enzymes of cryopreserved semen, associated to successive manipulations prior to in vitro fertilization (IVF), it is momentous to understand the mechanism involved on sperm status in such conditions and the further impact on embryo development. The present study aimed to assess the possible impact of a dose-dependent model for sperm oxidative stress on embryo development. In experiment 1, straws from five Nelore bulls were subjected to a 1 hour incubation at 38,5 &ordm;C and 5% CO2, with increase doses of hydrogen peroxide (0; 12,5; 25; e 50 &microM). At the end of incubation period, motility parameters were evaluated by Computed Assisted System Analysis (CASA). Based on the results of the experiment 1, experiment 2 was designed to study a high (50 &micro;M) and a low (12,5 &micro;M) dose of hydrogen peroxide and also a control (0 &micro;M). Sperm samples were incubated with each dose for 1 hour and subsequently used for in vitro fertilization (D=0). Samples were analyzed by CASA, oxidative status (CellROX&reg; green and 2&#x27;-7&#x27; diclorofluorescein diacetate - DCFH), mitochondrial potential (JC-1), chromatin (LA) and sperm capacitation status (chlortetraciclin). Embryos were evaluated based on fast cleavage rate (30 hours pos-insemination), cleavage rate (D=3), development rate (D=5) and blastocyst rate (D=8). Statistical analysis was performed by polynomial regression model, considering significant a p&le;0,05. A dose-dependent deleterious effect of hydrogen peroxide was observed on most motility variables evaluated by CASA, including the percentage of motile cells. Similarly, a dose-dependent increase was observed on the percentages of positive cells for CellROX&reg;, capacitated sperm and also for LA. A decrease on the percentage of cleaved embryos and blastocyst was observed as hydrogen peroxide increased. Interestingly, a blockage was detected during the 2-4 cell stage. In these conditions when exposed to oxidative environment, sperm may present disabled motility characteristics, oxidative status and premature capacitation and such abnormalities result on impaired embryo development, from the first cleavage to blastocyst.

Visando elevar a taxa de concepção das receptoras em programas de transferência de embriões (TE), pesquisadores têm buscado aumentar o perfil progesterônico visando aumentar a taxa de prenhez. Para isto, tem se utilizado fármacos, como anti-prostaglandínicos, progesterona, gonadotrofina coriônica humana (hCG) e análogos do GnRH. Estes estudos vêm apresentando resultados de grande importância, uma vez que o aumento do perfil progesterônico torna possível diminuir o número de receptoras por embrião, minimizando os custos e com isso possibilitando uma maior difusão da técnica de TE. Neste estudo a hCG foi utilizada no intuito de melhorar as condições reprodutivas de fêmeas eqüinas candidatas a receptoras de embriões. As éguas foram divididas em três grupos: G 1 (n=28)- administração, IM, de 1 mL de solução fisiológica, quando o folículo atingiu diâmetro médio &ge; 35 mm; G 2 (n=28)- administração de 2.500 UI de hCG (Vetecor&reg;), IM, quando o folículo atingiu diâmetro médio &ge; 35 mm e G 3 (n=28)- administração de 2.500 UI de hCG (Vetecort&reg;), IM, no dia seguinte a ovulação (D1). Nos três grupos foram avaliadas, no D6, por palpação retal e/ou ultra-sonografia as seguintes características reprodutivas: tônus uterino e cervical, morfoecogenicidade uterina e luteal e diâmetro do corpo lúteo. De acordo com estes dados as fêmeas eqüinas foram ordenadas como de 1&ordf;, 2&ordf;, 3&ordf; ou 4&ordf; escolha, sendo as éguas que apresentaram as características reprodutivas desejadas em receptoras foram consideradas como de 1&ordf; escolha, e as que apresentaram as características menos desejadas como 4&ordf; escolha. As concentrações plasmáticas de progesterona foram mensuradas nos dias D0, D2, D4, D6 e D8. Foi encontrada maior concentração de progesterona plasmática nos grupos tratados (G2 e G3) em relação ao controle (G1) no dia da ovulação (D0), no D4 e na concentração média total dos dias [(D0+D2+D4+D6+D8)/5] (P&lt;0,05). O tônus cervical apresentou diferença entre os grupos (P&lt;0,05), sendo que o G3 foi o melhor grupo para essa categoria reprodutiva. A ordem de escolha da receptora diferiu (P&lt;0,05) entre os grupos, sendo que o G3 apresentou uma maior porcentagem de éguas classificadas como de 1&ordf; escolha. Constatou-se correlação positiva e moderada entre o tamanho do corpo lúteo e a produção de progesterona (r=0,41) (P&lt;0,05). Neste estudo pode-se concluir que: a hCG induz aumento na concentração plasmática de progesterona e eleva a porcentagem de receptoras aptas a receberem embriões; existe correlação entre o tamanho do corpo lúteo e a produção de progesterona; e a morfoecogenicidade do corpo lúteo não influencia na concentração plasmática de progesterona em fêmeas eqüinas. / To improve the conception rates of the recipients in embryo transfer (ET) programs, researchers have studied how to increase the progesteronic profile aiming to increase the pregnancy rate. This results were reached by exogenous administration of anti-prostaglandins, progesterone, human chorionic gonadotropin (hCG) and gonadotropin (hCG) and analogs of the GnRH. These works had showed greater results, at once, the elevation of the progesteronic profile made possible the decrease in the number of recipients per embryo: reducing the costs and facilitating the diffusion of the ET technique. In this study, hCG was used in an attempt to improve the reproductive conditions of mare candidates to embryo recipients. The mares were located in three groups: G 1 (n=28) - administration IM of 1 mL of saline solution, when follicle reached mean diameter &ge; 35 mm; G 2 (n=28) - administration of 2.500 UI of hCG (Vetecort&reg;), IM, when follicle reached &ge; 35 mm mean diameter and G 3 (n=28) - administration of 2.500 UI of hCG (Vetecort&reg;), IM, on the following day of the ovulation (D1). Reproductive characteristics were assessed on the D6 by rectal palpation and/or ultrasonographic scanning: uterine and cervical tone, uterine and luteal morphoechogenicity and diameter of the corpus luteum. Based on the reproductive characteristics assessment, equine females were put into four classifications. The mares that had presented the most desirable reproductive characteristics were the 1st classification, and the ones that had presented the worst desired characteristics were the 4th choice. The plasmatic concentrations of progesterone were measured out on the days D0, D2, D4, D6 and D8. Higher plasmatic progesterone concentration was found in G2 and G3 on the day of the ovulation (D0), and on D4 (p&lt;0.05). In addition, higher plasmatic progesterone mean concentration was found for days D0, D2, D4, D6 and D8 (p&lt;0.05). Cervical tone presented difference among the groups (p&lt;0.05) in which the G3 was the best group for this reproductive characteristic. The order of choice of the recipients differed (p&lt;0.05) among the groups. The G3 showed a higher percentage of mares in the 1st choice classification. Positive and moderate correlation was evidenced between the size of the corpus luteum and the production of progesterone (r=0.41) (p&lt;0.05). In this study, it can be concluded that: hCG induces an increase in the plasmatic concentration of progesterone and raises the number of mares with the capacity to receive embryos; correlation exists between the size of the corpus luteum and the production of progesterone; and the morphoechogenicity of the corpus luteum does not influence the plasmatic concentration of progesterone in mares.

Dez vacas Gir foram adaptadas em tie-stall por 28 dias (Fase I/ pré-tratamento/ dias -28 a -1), sendo submetidas a duas sessões de OPU (dias -14 e -7). Na Fase II (tratamento/ dias 0 a 28) as mesmas foram divididas em Controle (GC/n=5) e Estresse (GE/n=5). O GC permaneceu em normotermia e o GE foi submetido a estresse calórico (EC) em câmara climática com temperatura e umidade controladas [38°C e 80% UR (DIA); 30°C e 80% UR (NOITE)], por 28 dias, procendendo-se, nesta fase, cinco OPU/fêmea. Na Fase III (pós-tratamento / dias 28 a 147) todas as fêmeas retornaram à normotermia (ambiente), sendo realizadas mais 17 OPU/fêmea. Diariamente foram registradas as temperaturas de bulbo seco (TBS) e úmido (TBU) e o índice de temperatura e umidade (ITU). As respostas fisiológicas avaliadas foram consumo de matéria seca (CMS), freqüência respiratória (FR), temperatura retal (TR), temperatura cutânea (TC), taxa de sudação (TS) e concentrações de cortisol e progesterona (P4). Fase luteínica foi definida como o período compreendido entre colheitas com P4 <1,0ng/mL. Semanalmente, com auxílio de um ultra-som (Scanner 200s) equipado com transdutor setorial intravaginal de 7,5MHz, foram aferidas a população folicular e o diâmetro dos dois maiores folículos. Em seguida, os folículos &ge;3mm foram puncionados e os oócitos recuperados foram avaliados morfologicamente, selecionados, maturados, fertilizados e cultivados in vitro. Os efeitos das variáveis classificatórias (animal, tratamento, fase e semana/sessão de OPU) sobre as variáveis resposta, e suas interações, foram analisadas por ANOVA para medidas repetidas no tempo (PROC MIXED do SAS®) e pelo teste de Qui-quadrado, com significância de 5%. Um animal foi excluído do GE após seis sessões, permanecendo somente quatro animais no GE e cinco no GC. O ITU durante o tratamento foi aumentado no GE em relação ao GC (93,1±0,15 vs. 73,6±0,5, respectivamente; P<0,05), acompanhado de uma elevação altamente significativa na FR, TR e TC (P<0,0001), caracterizando EC efetivo no grupo tratado. Na Fase II o GE apresentou CMS inferior ao GC (6,9±0,2 vs. 8,0±0,3, respectivamente; P<0,05). Nas fases pré e pós-estresse todas as variáveis climáticas e fisiológicas foram similares (P>0,05) entre tratamentos. Não houve efeito do EC na TS e nas concentrações de cortisol. O EC ocasionou longos períodos de aciclicidade (P4 <1ng/mL) e ciclos de curta duração (GE; 37,5% vs. GC; 8,6%; P<0,001). Houve efeito de sessão de OPU, mas não de tratamento no número de folículos visualizados e CCO\'s recuperados. Houve aumento no diâmetro folicular e codominância no GE. O percentual de CCO\'s selecionados para MIV e a taxa de clivagem não sofreram efeito do EC, contudo houve efeito imediato e tardio na taxa de produção de blastocistos, sendo de 35,5% no GE vs. 25,0% no CG (P=0,15) na fase II, e 27,2% vs. 13,3% (P<0,05) para os respectivos grupos, na fase III. De acordo com os dados aqui apresentados conclui-se que o EC em Bos indicus afetou negativamente a dinâmica ovariana, ocasionando falha no mecanismo de dominância folicular e diminuição na produção in vitro de embriões por um período superior a 105 dias. / Ten Gir (Bos indicus) cows were kept in tie-stalls for 28 days (Phase I/ before-trial/ days -28 to -1). Cows were submitted to two OPU sessions (days -14 and -7). In Phase II (trial/ days 0 to 28), cows were divided in Control (C/n=5) and Heat-stressed (HS/n=5). The CG remained in thermoneutral environment and the HS was kept under heat-stress in environmental chamber with controlled temperature and humidity [38°C and 80%UR (DAY), 30°C and 80%UR (NIGHT)], for 28 days. During this phase five OPU sessions were accomplished. In Phase III (post-trial/ days 28 to 147) all cows returned to thermoneutral environmental temperatures and 17 OPU sessions were performed. The dry (DBT) and humid (HBT) bulb temperatures were daily measured and obtained the temperature-humidity index (THI). Physiological responses as dry matter intake (DMI), respiratory frequency (RF), rectal temperature (RT), skin temperature (ST), sweating rate (SR), plasma cortisol and progesterone (P4) were assessed. Luteal phase was defined as the period between two samples with P4 below 1.0ng/mL. Once a week, prior to OPU procedure, the number of follicles in the ovary and the diameter of the two biggest follicles were evaluated using an ultrasound (Scanner 200s, 7.5MHz sectorial probe). Subsequently, all follicles &ge;3mm were aspirated and the oocytes morphologically evaluated, selected, maturated, fertilized and cultivated for embryo production in vitro. The effects of independent variables (cow, treatment, phase, and week/OPU session) on the dependent variables were analyzed by ANOVA for repeated measures (PROC MIXED of SAS®) and by Chi-square test, both with a significance level of 5%. One animal was excluded from HS after sixth session, having remained four vs. five cows for CG and HS groups respectively. The THI increased during heat-stress treatment (93.1 ± 0.15 vs. 73.6 ± 0.5 for HS and CG respectively, P<0.05), simultaneously to a significant increase in RF, RT and ST (P<0.0001). It was characterized as effective heat-stress on the treated cows. In phase II the HS showed lower DMI than CG (6.9±0.2 vs. 8.0±0.3 respectively, P<0.05). All environmental and physiologic variables were similar (P>0.05) between treatments in the periods before and post heat-stress. There was no effect of heat-stress on SR and cortisol levels. The HS treatment induced to longer periods of ovarian inactivity (P4 <1ng/mL) as well as short cycles (HS, 37.5% vs. CG, 8.6%, P<0.001). There was effect of OPU session but not of treatment on number of visualized follicles or recovered oocytes. The diameter of the biggest follicles and incidence of codominance increased in HS treatment (P<0.05). Moreover, there was no effect of heat-stress on percentage of COCs selected to IVF or cleaved. However, immediate and delayed effects were observed on blastocists yield (35.5% vs. 25.0%, P=0.15, for CG and HS groups on the phase II and 27.2% vs. 13.3%, P<0.05, for respective groups on the phase III). Our results suggest that the ovarian dynamics of Bos indicus cattle was affected by heat-stress exposure, showing failures on follicular dominance and on in vitro embryos yield for at least 105 days after the heat-stress subside.

Tendo em vista a possibilidade de que a adição de ácidos graxos ao meio de cultivo embrionário aumente a sobrevivência ao congelamento, a proposta deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de quatro ácidos graxos isoladamente ao meio de cultivo, dois do grupo ômega 6 (ácido linoléico e ácido linoléico conjugado) e dois do grupo ômega 3 (ácido eicosapentaenóico e ácido docosahexaenóico), na produção de embriões, no número de células, na quantidade de lipídeos, na taxa de re-expansão da blastocele após 48 horas de cultivos pós-descongelamento, na taxa de eclosão pósdescongelamento e na taxa de gestação. Para tal, os oócitos bovinos colhidos de ovários de vacas abatidas foram maturados, fecundados e cultivados in vitro em atmosfera de 5% CO2 em ar, à 38,8°C e máxima umidade. No cultivo, foi adicionado isoladamente um destes ácidos graxos, e foram avaliadas a taxa de clivagem, e a produção de embriões no sétimo e oitavo dia de cultivo. No sétimo dia, os blastocistos expandidos foram congelados com 1,5M de etileno glicol. Eles permaneceram nesta solução por 9 minutos antes de serem envasados e seguirem para a maquina de congelamento numa taxa de resfriamento de 0,5°C/minuto até chegarem à temperatura de -32°C. Dos embriões que foram congelados, alguns seguiram para o descongelamento e voltaram para o cultivo in vitro para avaliação da reexpansão e taxa de eclosão pós-descongelamento. Outros foram transferidos para receptoras sincronizadas para avaliação da taxa de gestação. Outros grupos de embriões permaneceram até o oitavo dia de cultivo e foram corados com Hoechst 33342 para contagem dos núcleos, e corados com Nile Red para avaliação do conteúdo total de lipídeos. Em geral, a adição isolada de ácidos graxos do grupo ômega 6 (CLA e LA) na produção in vitro de embriões bovinos aumentou a taxa de sobrevivência ao congelamento (criotolerância), no entanto, não houve um aumento no número de células, nem diferença no conteúdo total de lipídeos nos embriões analisados. A taxa de gestação também não diferiu estatisticamente entre os grupos testados in vivo, porém foi observado um aumento de 200% na taxa de gestação dos embriões cultivados na presença de CLA. Novos estudos devem ser desenvolvidos para comprovar o efeito do aumento da criotolerância e melhorias nas taxas de gestações dos embriões, além de estudos da composição de lipídeos nos embriões e membranas. / In the view of the possibility that the addition of fatty acids in the embryo growing medium increase the survival rate after cryopreservation, this study was proposed to evaluate the effect of the addition of four fatty acids in culture medium, two of the omega 6 group (linoleic acid and conjugated linoleic acid) and two of the omega 3 group (eicosapentainoic acid and docosahexaenoic acid), in the rate of production of blastocysts, blastocyst cell number, blastocyst amount of lipids , re-expansion of blastocele rate after 48 hours of culture post-thaw, post-thaw hatching rate and pregnancy rate. The oocytes obtained by punction of slaughterhouse cows were matured in vitro, fertilized in vitro and cultured in vitro in an atmosphere of 5% CO2 in air, to 38,8°C and maximum moisture. Fatty acids were supplemented individually and cleavage rate and production of embryos in the seventh and eighth days of culture were assessed. On seventh day, the expanded blastocysts were frozen with 1.5M of ethylene glycol. They remained in this solution for nine minutes before introduction in a straw followed and then in a freezing machine with a chilling rate of 0,5°C/minute until temperature of -32°C. Frozen embryos were then divide in two groups: one was thawed and returned to in vitro culture in other to assess the reexpansion and post-hatching rate, and other was transferred to synchronized recipients to assess the pregnancy rate. Another unfreezed group of embryos were stained with Hoechst 33342 for counting the nuclei, or stained with Nile Red to estimate the lipids contents. In general, the addition of fatty acids omega 6 group (LA and CLA) increased the survival rate to the freezing (cryotolerancy), however, there was no increase in the number of cells, or difference in the lipids contents. In the CLA treated embryos, the pregnancy rate of the freezed embryos did not differ from groups tested in vivo, but there was a 200% increase in the pregnancy rate. Further studies should be developed to prove the improvements in the rates of pregnancies of omega 6 treated embryos, besides a study of the composition of lipids of embryos and membranes should be conducted.

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta superovulatória, a produção embrionária e a resistência à criopreservação através de congelação ou vitrificação de embriões de novilhas Nelore suplementadas com gordura protegida ruminal (Megalac-E®). Foram utilizadas 40 novilhas da raça Nelore mantidas a pasto, divididas em dois grupos experimentais de acordo com o tipo de suplementação fornecido (G = concentrado com gordura protegida ruminal e C = suplementação controle, sem adição de gordura). Os suplementos foram formulados para serem isoenergéticos e isoprotéicos. O delineamento foi do tipo cross-over com 67 (primeira repetição) e 70 d (segunda repetição) de duração. Após 50 d de suplementação dietética, foi realizada a sincronização da emergência da onda para iniciar o protocolo de superovulação. Os embriões colhidos foram congelados ou vitrificados e avaliação de desenvolvimento embrionário in vitro foi realizada posteriormente. Não houve diferença (P > 0,10) entre os Grupos G e C em relação à resposta superestimulatória, ao número total de estruturas, embriões congeláveis, degenerados e ovócitos não fecundados colhidos. Apesar do grupo C ter mostrado maior reposta superovulatória que o G (15,7 ± 1,2 vs 18,0 ± 1,3 CL; P = 0,06), os embriões do Grupo C apresentaram maior taxa de eclosão, independentemente do método de criopreservação, às 48 h (33,1 ± 4,0%; n = 148 vs 17,3 ± 3,3%; n = 137; P = 0,009) e às 72 h (44,3 ± 4,2%; n = 148 vs 30,9 ± 4,0%; n = 137; P = 0,04) de cultivo do que os do grupo G. Além disso, os embriões vitrificados e congelados apresentaram taxas similares de eclosão (P > 0,10). Nas condições do presente estudo, o suplemento composto com gordura protegida não afetou a resposta superestimulatória e a produção de embriões, e os embriões do Grupo Controle foram mais tolerantes à criopreservação. / Abstract: The aim of the current study was to evaluate the superovulatory response and embryo production, as well as embryo resistance to cryopreservation through freezing or vitrification of embryos from Nellore heifers supplemented with rumen-protected fat, Megalac-E®. Forty heifers kept in pasture were randomly divided into two experimental groups according to supplement source (G = supplement with rumen-protected fat and C = Control, without fat supplementation). The supplements were formulated to be isocaloric and isoproteic. Each female underwent both treatments in a cross-over design with approximately 67 d (first replicate) and 70 d (second replicate). After 50 d of feeding, the emergence of the wave was synchronized with the aid of hormones to iniciate the superovulation protocol. The embryos recovered were frozen or vitrified and subsequently in vitro embryo development evaluation was accomplished. There was no difference between G and C groups (P > 0.10) regarding superstimulatory response, number of total embryos/ova, viable embryos, degenerate embryos, or unfertilized oocytes recovered. However, group C had a greater superovulatory response than G (15.7 ± 1.2 vs 18.0 ± 1.3 CL; P = 0.06). Group C embryos presented greater hatching rate, independently of the cryopreservation method, at 48 h (33.1 ± 4.0%; n = 148 vs 17.3 ± 3.3%; n = 137; P = 0.009) and at 72 h (44.3 ± 4.2%; n = 148 vs 30.9 ± 4.0%; n = 137; P = 0.04) of in vitro culture. Moreover, vitrified and frozen embryos had similar hatching rate (P > 0.10). Under the conditions of the present study, supplementation with protected fat did not affect superstimulatory response, quantity or quality of embryos. However embryos from the Control group were more tolerant to cryopreservation. / Mestre

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: O processo de criopreservação afeta a capacidade funcional dos espermatozóides, diminuindo a fertilidade. Tendo conhecimento desses danos a diluição do sêmen é necessária antes de submetê-lo ao choque térmico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o sêmen bovino congelado com dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma delas submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e a outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). Após a diluição o sêmen foi congelado e armazenado em nitrogênio líquido de acordo com os padrões pré-estabelecidos da central de inseminação artificial. No experimento I, cinco palhetas do diluidor A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade (análise subjetiva e computadorizada), vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termo-resistência lento (TTL), avaliação da integridade de membranas por meio da associação das sondas Iodeto de Propídio (PI), Isotiocionato de Fluoresceína - Pisum sativum (FITC-PSA) e Carbocianina Catiônica Lipofílica (JC-1) e avaliação funcional da membrana plasmática através do teste hiposmótico (HIPO). A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina (LA). No experimento II, o sêmen congelado com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro (FIV), sendo observada as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. A análise estatística foi efetuada através dos testes de Análise de Variância (ANOVA), teste de Tukey e teste de Wilcoxon. Em relação aos resultados obtidos com os experimentos I e II não foi observado diferença estatística entre os diluidores testados, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays the embryo transfer is a biotechnology widely used, however not much is know about the best place to put embryos into the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum (CL). In addition, not much is known about the morphological characteristics thorough the uterine horn and if it could improve or damage the uterine environment. The aims of this study were: to investigate the effect of the site of embryo placement (cranial, medial or caudal) into the uterine horn adjacent to the CL on pregnancy rates; to analyze the morphology from these tree portions of the both uterine horns adjacent and opposite to CL using histology and scanning electron microscopy; and establish the relation between pregnancy rates and morphofunctions characteristics to indicate the best place to transfer embryos. In this study 600 in vivo produced embryos (fresh and frozen-thawed) and 315 in vitro produced embryos were transferred to Holstein and crossbred recipients, in order. Nine crossbred heifers were slaughtered approximately seven days after estrus and the uterus were studied to analyze its morphology at the same time that the embryos have been transferred. The results showed that the site of embryo placement did not influence (P>0.05) the pregnancy rates in recipients receiving fresh embryos during summertime. During the winter, the pregnancy rates were greater (P<0.05) for fresh embryos transferred into the caudal portion of the uterus horn than cranial portion. For animals that received in vitro produced embryo, the site of embryo placement did not interfere (P>0.05) in the pregnancy rates. Morphophological characteristics observed by histology and scanning electron microscopy was similar in all parts of the uterine horn ipsilateral to the CL studied. However, the average number of blood vessels counted was lower in the contralateral uterine... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Rodolpho Satrapa / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: O desempenho reprodutivo bovino pode sofrer interferência de diversos fatores, dentre os quais os relacionados à fisiologia, à patologia, à genética, à nutrição e ao manejo zootécnico-sanitário dos rebanhos, os quais, direta ou indiretamente podem comprometer o embrião, o feto e o trato reprodutivo das fêmeas. O propósito desse estudo foi estabelecer em receptoras de embriões (n=235), se e em qual proporção a resposta aos protocolos de sincronização hormonal, as taxas de prenhez e de perda embrionária foram, negativamente, afetadas devido à constatação de soropositividade para enfermidades reprodutivas, das concentrações plasmáticas de cortisol e de P4, das temperaturas ambiente, retal e umidade relativa do ar. Avaliou-se, ainda, o volume do CL e sua relação com a produção de P4. As taxas de soropositividade para brucelose, leptospirose, diarreia viral bovina (BVD), rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) e neosporose foram 2,89% (n=7), 54,47% (n=128), 43,83% (n=98), 74,04% (n=174) e 63,82% (n=150), respectivamente. Com respeito às enfermidades, as diferenças entre as taxas de receptoras reagentes e não reagentes mostraram-se estatisticamente significantes (p<0,05) para as associações da leptospirose e da neosporose, com a taxa de aproveitamento e da brucelose e IBR com a taxa de perda embrionária. Nas avaliações sobre cortisol e P4, observou-se que as diferenças entre suas respectivas concentrações plasmáticas não diferiram estatisticamente (p>0,05) entre as receptoras que resultaram prenhas (17,24±7,59; 13,58±6,41) e as não prenhas (17,78±5,54; 14,15±7,16), mas apresentaram correlação positiva (p<0,05) Desse modo, essas concentrações plasmáticas de cortisol observadas, presumivelmente, não interferiram com a capacidade de resposta das receptoras aos protocolos, mas, nos grupos de animais "Resp.P." e "N.Resp.P." suas concentrações diferiram estatisticamente (p<0,05). Em relação ao VCL e à ... / Abstract: Beef catle reproductive performance is under the interference of several factors among which those related to physiology , pathology , genetics , nutrition and management of health - livestock herds , which directly or indirectly may affect the embryo , fetus and reproductive tract of females . The purpose of this study was to establish in recipient embryos (n=235), if and in some extent, the response to synchronization protocols hormone, pregnancy and embryonic loss rates were negatively affected due to the finding of reproductive diseases serumpositivity, of cortisol and P4 serum levels and of ambient and rectal temperatures and air relative humidity; it was also evaluated the CL volume and its relation to P4 production. Brucellosis, leptospirosis, bovine viral diarrhea (BVD), infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and neosporosis seropositivity rates were 2.89% (n=7), 54.47% (n=128), 43.83% (n=98), 74.04% (n=174) and 63.82% (n=150), respectively. Correlations of leptospirosis and neosporosis with responsive cows to protocols and of brucelosis and IBR with embryonic loss rate were all statistically significant (p<0.05). Pregnant and non- pregnant recipient cows cortisol and P4 respective serum levels (17.24±7.59, 13.58±6.41; 17.78±5.54, 14.15±7.16) did not differ statistically (p>0,05), but were positively correlated (p<0,05), thus this cortisol serum level, presumably, did not interfere with recipient cows responsiveness to the protocols, but in groups "Resp.P." and "N.Resp.P." their concentrations differed significantly (p<0,05). Regarding the VCL and the concentration of P4 , no difference was found statistically significant (p>0,05) between the mean values. For all cases studied, only correlation was observed between the amount of CL and P4 production (p < 0,05) in group "small". In relation to environmental temperatures, rectal and relative humidity values in averages were 30.07°C , 39.38°C and 69.23, respectively. Was ... / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Eunice Oba / Banca: Mateus José Sudano / Resumo: O sistema de cultivo in vitro de embriões apresenta menor eficiência em relação ao in vivo, sendo caracterizado por menores taxas de desenvolvimento e de adesão, além de uma menor tolerância à certas alterações que provocam estresse, como agentes físicos, químicos, térmicos, osmóticos, oxidativos, radioativos, entre outros. De acordo com a intensidade do estresse, pode-se estimular uma resposta celular favorecendo o desenvolvimento embrionário, adquirindo maior tolerância através de aceleração no metabolismo, proliferação e crescimento celular. O objetivo do presente trabalho foi analisar o efeito do estresse óptico em diferentes momentos ao longo do cultivo e conhecer as possíveis aplicações, a partir do estresse subletal e da bioestimulação promovida pela irradiação com diodo emissor de luz (LED). Com isto, os resultados demonstraram que em alguns estágios do desenvolvimento embrionário, tal como em blastocistos, o uso do estresse óptico pode ser benéfico ao embrião, protegendo-o de eventos como a apoptose. Os principais resultados demonstram que na produção de blastocistos houve aumento na produção dos mesmos nos grupos irradiados, apesar de não haver diferença estatística (Controle 23,2; IRD3inf 31,3; IRD6Infra 33,3). O estímulo por LED prévio à vitrificação mostrou que a irradiação por infravermelho em D3 pode estimular o aumento, em média, do numero de células (Controle: 91,9; IRD3inf: 112,8). Em relação às células apoptóticas, grupos irradiados com luz infravermelha mostraram menos número de células envolvidas neste processo (Controle: 11,6; IRD6inf: 6,6; IRFIVinf: 7,8), e a irradiação por luz vermelha pareceu aumentar a apoptose (IRD3verm: 15,6; IRD6verm: 16,1). Em relação à taxa de reexpansão, o a irradiação por luz vermelha teve efeito sobre o grupo irradiado em D3, mostrando uma diminuição significativa para o mesmo (Controle: 70,5 IRD3 verm; 39,3). De ... / Abstract: The in vitro embryo culture system has lower efficiency compared to in vivo, because the in vitro system is characterized by lower rates of development, deployment, and a lower tolerance to certain changes that cause stress, such as physical, chemical, thermal, osmotic, oxidative and radioactive among others. According to the stress intensity it is possible to stimulate a cellular response promoting embryonic development and acquiring greater tolerance by the acceleration of metabolism, cell proliferation and growth. The objective of this study was to analyze the effect of the optical stress at different periods throughout the embryo development and understand the possible applications for this stimulation, from sublethal stress and biostimulation promoted by irradiation with lasers. Therefore, the results showed that optical stress can be beneficial to the embryos at certain stages of their development, such as blastocysts stage, protecting them from apoptosis. The main results show that an increase in blastocysts production for infrared irradiated groups, although there was no statistical difference (control 23.2; IRD3inf 31.3; IRD6Inf 33.3). The infrared LED stimulus prior to vitrification showed a higher number of cells for embryos in D3 (control: 91.9; IRD3inf: 112.8). Also, infrared irradiation appeared to decrease the number of apoptotics cells, when compared to controls (control: 11.6; IRD6inf: 6.6; IRFIVinf: 7.8), and red light irradiation appeared to increase apoptosis (IRD3verm: 15.6; IRD6verm: 16.1). Regarding re-expansion rate, the red light irradiation in D3 is related a significant decrease in the rate (control: 70.5; IRD3verm: 39.3). According to the results, irradiation with infrared light effect is shown in blastocyst production, which is economically important to embryos IVP. Moreover, the apoptosis analysis showed that the association between the techniques applied in this study are important for the in ... / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Alício martins Júnior / Banca: Edson Guimarães Lo Turco / Resumo: Este trabalho teve como objetivo geral averiguar o efeito da BL-I e da ROS em bloquear temporariamente a retomada da meiose, atuando sobre os fatores que controlam o ciclo celular meiótico de oócitos bovinos e a expansão das células do cumulus oophoros. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6, 12 e 24 h na presença de duas concentrações de ROS (12,5 μM e 25 μM) ou na presença de BL-I (50 μ e 100 μM) ou na presença da associação de ROS (6,25 μM) + BL-I (25 μM) e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de fármacos por 18 h, 12 h ou 24 h. Após esse tempo, os oócitos inibidos por 6 ou 12 h foram fertilizados e cultivados in vitro. O tratamento com ROS e BL-I não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, quando utilizados por 24 h, elevadas taxas de degeneração oocitária foram encontradas. Quando estes fármacos foram utilizados por 12 h com reversão por mais 12 h, verificamos uma menor taxa produção de blastocistos em relação ao grupo controle. No entanto, após a retirada do bloqueio por 6 h e maturação por 18 h um maior número de oócitos tratados tanto com ROS, como BL-I encontraram-se em MII. Da mesma forma, ao reduzirmos a dose e o tempo de inibição, os grupos tratados por 6 h de inibição meiótica e reversão por 18 h apresentaram taxas de produção embrionária similares ao grupo controle. No Experimento II, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6h na presença de 12,5 μM de ROS ou na presença de 50 μM de BL-I ou com a associação de ROS (6,25 μM) + BL-I (25 μM) sendo em seguida cultivados em meio MIV livre de fármacos por 18 h. Após esse tempo, os oócitos inibidos foram fertilizados, cultivados in vitro e os embriões produzidos foram submetidos a vitrificação. Os grupos BI-I e ROS + BL-I apresentaram superioridade de produção embrionária, tanto em relação ao grupo ROS como o controle. O grupo ... / Abstract: This work had as main objective to investigate the effect of BL-I and ROS in temporarily blocking the resumption of meiosis, acting on the factors that control the meiotic cell cycle of bovine oocytes and expansion of cumulus oophoros cells. In Experiment I, the oocytes remained in IVM mediafor 6, 12 and 24h in the presence of two concentrations of ROS (12.5 μM and 25 μM) or in the presence of BL-I (50 μ to 100 mM) or the association of ROS (6.25 μM) + BL-I (25 μM) and then cultured in a drug-free IVM media for 18, 12 or 24 h. After this time, the inhibited oocytes by 6 or 12 h were fertilized and cultured in vitro. Treatment with ROS and BL-I did not resulted in delay in germinal vesicle breakdown in relation to control. However, when used for 24 h, higher rates of oocyte degeneration were found. When these drugs were used for 12 h with reversion for more than 12 h, a lower blastocyst production rate compared to the control group was verified. However, after removal of the blockage for 6 h and maturation for 18 h, a higher number of oocytes treated with both ROS and BL-I were found in MII. Similarly, when the dose and duration of inhibition were reduced, the groups treated for 6 h of meiotic inhibition and reversion for 18 h showed similar embryo production rates to the control group. In Experiment II, oocytes remained in IVM mediafor 6 h in the presence of 12.5 μM of ROS or the presence of 50 μM of BL-I or the association of ROS (6.25 μM) + BL-I (25 μM) and then cultured in drug-free IVM media for 18 h. After this time, the inhibited oocytes were fertilized in vitro and the produced embryos were submitted to vitrification. The BI-I and ROS + BL-I groups showed superiority in embryo production, both in relation to the control as ROS group. The ROS + BL-I group showed higher rate of re-expansion after vitrification. Additionally, embryos from BL-I and BL-I + ROS showed lower number of apoptotic cells when compared to ... / Doutor