Resumo não disponível

OLIVEIRA FILHO, Manoel. Estudo dos aspectos da termografia digital infravermelha, da PAAF (citológico e imunocitologico), e dos achados histológicose imunohistoquimicos da endometriose subcutânea na mulher. 2013. 100 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-26T16:26:39Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_moliveirafilho.pdf: 4848592 bytes, checksum: cd067e10267591c4e6f29f9ed1cd559f (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-26T16:30:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_moliveirafilho.pdf: 4848592 bytes, checksum: cd067e10267591c4e6f29f9ed1cd559f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T16:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_moliveirafilho.pdf: 4848592 bytes, checksum: cd067e10267591c4e6f29f9ed1cd559f (MD5) Previous issue date: 2013 / Endometriosis is defined as the presence of endometrial glands and stroma in an anatomical site other than the uterine cavity and muscles, which may be pelvic or extra - pelvic, affecting up to 5 - 1 5% of women of childbearing age, in its various presentations. Extra pelvic endometriosis affects 12% of women with endometriosis, a condition that is rare umbilical endometriosis - about 0.5% of all patients with ectopic endometrium. Most cases of subcuta neous endometriosis develop from pelvic organs to surgery scars in young women in the reproductive age. The complaints are tumor growth in the abdominal wall after interventional procedures and pain. It must be differentiated from incisional hernias, granu lomas, abscesses and benign and malignant tumors. The methods are based on clinical diagnosis and in fine needle aspiration (FNA) cytology. The excision and histopathological analysis, the ultrasound, the computed tomography and magnetic resonance imaging and in our research, teletermography use (not reported in the literature). The morphological characteristics allow the cytological diagnosis from fine needle aspiration (FNA). However, to date, the immunohistochemical profile and biological characteristics of this unusual type of endometriosis is poorly understood, requiring cellular phenotyping studies for understanding the pathophysiology and its possible treatments. Objectives : We formed a study group (20 cases) from the smears of fine needle aspiration and its analysis by immunocytochemistry, assessing the teletermography digital and histopathological lesions. In seven cases (07) were performed immunohistochemistry for estrogen receptors, progesterone and marker of cell proliferation (Ki - 67). The morphol ogical aspects will be faced with the possibility or not of the markers. To store data, will be created spreadsheet Excel/Office 2000. The database will be exported to the Soft Prism 5.0, which will be the logical consistency of the final typed information . Statistical significance will be performed by Fisher's exact test with a confidence interval of 95%. Results. Twenty patients with a mean age of 30.4±1.3 years were evaluated during the period January 2007 to December 2010. The location was more frequent in surgical scar resulting from cesarean section (n=18), in the suprapubic region level of the umbilicus (laparoscopy) (n=1), resulting in surgical scar of hysterectomy (n=1). Thirteen were primiparous, four secundiparous, two nulliparous and one tercípar ous. During this period, 6818 deliveries were performed by cesarean. The incidence of endometriosis in the scar was 0.26%, the time interval between surgery and onset of symptoms ranged from 6 to 36 months with a mean of 17±1.6. The most common complaint w as pain in the scar (80%) of these 40% reported pain cyclical. Lump in the scar was found in 17 patients (85%), fixed and painful. In two cases presented hematometra or hematoma. Eleven patients (55%) reported increased nodule during the pre and menstrual. FNA showed endometrial cells and stromal cells in the cytologig smears (65%), the digital telethermography was performed in all. The thermographic asymmetry indicates inflammation. All cases were treated with surgical resection. No clinical treatment was done before and after surgery. All patients were followed for a period exceeding two years and recurrence of 3 in 20 patients (15%). In two patients, the recurrence was after 12 months, the third was to 24 months, both with a history of peritoneal endometr iosis. The results of immunohistochemical showed epithelium and stroma receptor s in 80% and 100% and 72% Ki - 67 / A endometriose é definida como a presença de estroma e glândulas endometriais em um sítio anatômico diferente da cavidade uterina e musculatura, podendo ser pélvica ou extrapélvica, chegando a acometer, nas diversas apresentações, de 5 a 15% das mulheres em idade fértil. A endometriose extrapélvica acomete 12% das mulheres com endometriose, sendo rara a condição de endometriose umbilical – cerca de 0,5% de todas as pacientes com ectopia endometrial. A maioria dos casos de endometriose subcutânea desenvolve-se com origem em cicatrizes cirúrgicas pélvicas em mulheres jovens no período reprodutivo, que apresentam crescimento tumoral na parede abdominal, após procedimentos intervencionistas. Faz-se diagnóstico diferencial com hérnias incisionais, granulomas de corpo estranho, abscesso e neoplasias. Os métodos diagnósticos são baseados na clínica, na punção aspirativa com agulha fina (PAAF) e do seu estudo citológico, na exérese da lesão e da análise histopatológica, na ultrassonografia, na tomografia computadorizada, na ressonância magnética, e neste experimento, o uso da Teletermografia. As características morfológicas permitem o diagnóstico citopatológico com base na punção aspirativa com agulha fina (PAAF). Até o momento, no entanto, o perfil imuno-histoquímico e as características biológicas desse tipo incomum de endometriose estão mal entendidos, necessitando de estudos de fenotipagem celular para a compreensão da fisiopatologia e de seus eventuais tratamentos. Objetivo. Foi constituído um grupo de estudo (20 casos) com suporte nos esfregaços de punção aspirativa com agulha fina (PAAF) e da sua analise pela imunocitoquimica, pela avaliação da Teletermografia digital e do estudo histopatológico das lesões. Em sete casos (07), foram realizados imunohistoquímica para receptores de estrogênio, progesterona e marcador de proliferação celular (KI-67). Os aspectos morfológicos serão confrontados com a positividade ou não dos marcadores. Para armazenar dados, será criada planilha de Excel/Office 2000. O banco de dados será exportado para o Soft Prism 5.0, onde será feita a consistência lógica final das informações digitadas. A significância estatística será realizada pelo Teste Exato, de Fisher, com intervalo de confiança de 95%. Resultados. 20 pacientes com média de idade de 30,4±1,3 anos foram avaliados. A localização mais frequente foi em cicatriz cirúrgica decorrente de parto abdominal (n=18), na região suprapúbica em nível da cicatriz umbilical (videolaparoscopia) (n=1), em cicatriz cirúrgica decorrente de histerectomia (n=1). Treze eram primíparas, quatro secundíparas, duas tercíparas e uma nulípara. Nesse período, foram realizados 6.818 partos por via abdominal. A incidência de endometriose na cicatriz foi de 0,26%. O intervalo de tempo da cirurgia ao surgimento dos sintomas variou de seis a 36 meses com media de 17±1,6. A queixa mais comum foi dor na cicatriz 80%; destas, 40% referiam dor cíclica. Nódulo na cicatriz foi encontrado em 17 pacientes (85%), fixo e doloroso. Em dois casos apresentaram hematometra ou hematoma. Onze pacientes (55%) descreveram aumento do nódulo durante o período pré e menstrual. A PAAF mostrou células endometriais e estromais em 13 citologias 65%; e a Teletermografia digital foi realizada em todas. A assimetria termográfica indica processo inflamatório. Todos os casos foram tratados com ressecção cirúrgica. Não foi realizado nenhum tratamento clinico pré e pós-cirúrgico. Todas as pacientes foram acompanhadas por um período superior a dois anos e houve recidiva em 3/20 (15%). Em duas a recidiva foi aos 12 meses, a terceira foi aos 24 meses, ambas com antecedentes de endometriose peritoneal. Os resultados imuno histoquímicos mostraram receptores de E no epitélio e no estroma em 80%; os de P foram 100% e o Ki-67 72%

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-31Bitstream added on 2014-06-13T19:53:54Z : No. of bitstreams: 1 zimbardi_d_me_botib.pdf: 1403669 bytes, checksum: 19185c803cd5bc8168341c616f75325f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A endometriose constitui uma doença de etiologia incerta, caracterizada pela presença de tecido endometriótico fora da cavidade uterina. E uma causa comum de morbidade, atingindo 5 a 10% das mulheres em idade reprodutiva. A metilção anormal na região promotora de genes especificos e os niveis de expressão alterados das DNA metiltransferases (DNMTs) compoem 0 conjunto de evidencias recentes indicando a endometriose como uma doença epigenetica. 0 presente estudo propos a investigaçao do perfil diferencial de metilaçao do DNA na endometriose, utilizando uma abordagem genomica de alta resoluçao baseada na metodologia de microarrays. Para isso, foram coletadas amostras pareadas de endometrio eutópico e de endometriose intestinal profunda de 18 pacientes. Foram selecionadas dez amostras pareadas para a hibridação do DNA: cinco casos foram submetidos ao enriquecimento das sequencias não metiladas (digerido com a enzima de restrição dependente de metilação McrBC ) e nove ao enriquecimento das sequencias metiladas (digerido com 0 coquetel de enzimas sensiveis a metilação do DNA Acil, HinP11, HpyCH41Ve Hpall). Os ensaios foram realizados em duplicatas totalizando 28 hibridações independentes na plataforma disponivel comercialmente Human CpG Island ChIP-on-Chip Set 244K (Agilent Technologies). Este protocolo foi previamente padronizada utilizando-se 0 DNA das linhagens derivadas de carcinomas de c610n HCT116 e DKO (celulas HCT116 duplo knockout para as DNMT1 e DNMT3b) usando marcação reversa (dye swap). Os dados foram avaliados nos software Agilent Technologies Genomic Workbench (DNA Analytics 5.0) e GeneSpring 7.3 (Agilent Technologies). Estre os 925 genes que apresentaram metila9ao diferencial, 55 foram recorrentes em dois ou mais casos. Varios destes genes mostram-se interessantes por exercerem funções relacionadas a fatores de transcrição (MSX1, EMX2, HOXB13, HOXD8 e HOXD9)... / Endometriosis is a disease of unknown etiology characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity. It is a common cause of morbidity, affecting 5-10% of women in reproductive ages. The aberrant methylation in the promoter region of specific genes and the higher expression levels of DNA methyltransferases (DNMTs) in comparison with normal endometrium have been reported as evidences indicating that endometriosis is an epigenetic disease. The present study investigated the differential profile of DNA methylation in endometriosis using a high-resolution microarray-based assay. There were collected paired samples of eutopic endometrium and deep intestinal endometriosis from 18 patients and, subsequently, it was selected ten pairs to the DNA hybridization: five matched samples were submitted to the enrichment of unmethylated sequences (digested with the methylation-dependent restriction enzyme McrBG) and ten to the enrichment of methylated sequences (digested with the cocktail of enzymes sensitive to DNA methylation AGII, HinP1/, HpyGH4/V and Hpa/I). The assays were performed in duplicates totalizing 28 independent hybridizations in the commercially available platform Human CpG Island ChIP-on-Chip Set 244K (Agilent Technologies). The protocol was previously standardized using the DNA from the colon carcinomas cell lines HCT116 and DKO (HCT116 cells double-knockout for DNMT1 and DNMT3b) using reverse labeling (dye swap). The data were evaluated using the software Genomic Workbench (DNA Analytics 5.0) and GeneSpring 7.3. Among the 925 genes showing differential methylation, 55 genes were detected in at least two cases. Several of these gene could be considered good candidates to molecular biomarkers of endometriosis since that they act as transcription factors (MSX1, EMX2, HOXB13, HOXDB e HOXD9) , chromatin remodeling (MAD1L 1, WDR5 e BGOR)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-30Bitstream added on 2014-06-13T20:23:15Z : No. of bitstreams: 1 silveira_cgt_dr_botib.pdf: 2492157 bytes, checksum: 96e0023d4fecc0d746ebf4a3705ecbc8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A endometriose (EDT) é uma doença ginecológica crônica e heterogênea considerada um importante problema de saúde pública. As metodologias de Hibridação Genômica Comparativa de Alta resolução (HR-CGH) e CGH array (aCGH) são ferramentas importantes para a triagem de alterações genômicas em diferentes lesões endometrióides. No presente estudo, as análises de HR-CGH foram realizadas em 20 amostras de EDT fixadas em formalina e em blocos de parafina, de diferentes sítios e tipos histológicos, obtidas de oito pacientes submetidas à laparoscopia (Grupo I). Os componentes estromais e epiteliais foram isolados por microdissecção a laser. As amostras de endométrio tópico de três pacientes apresentaram perfis genômicos normais. Nos tecidos ectópicos, foi observada uma média de 68 regiões alteradas por caso. Análises comparativas entre os componentes estromais e epiteliais demonstraram alta freqüência de alterações genômicas comuns. As perdas foram mais prevalentes e envolveram principalmente os cromossomos 3p, 5q, 7p, 9p, 11q, 16q, 18q e 19q. A comparação entre os perfis de alteração de lesões de diferentes localizações derivadas da mesma paciente revelou a predominância de regiões comuns envolvidas em perdas e ganhos. Baseado nestes resultados foi realizada a análise de expressão protéica de sete marcadores de células-tronco pela metodologia de imunohistoquímica. A maioria das amostras apresentou expressão positiva dos marcadores CD9, CD34, c-Kit e Oct-4 em células isoladas do epitélio glandular e/ou células estromais. A presença de alterações genômicas comuns nos componentes estromal e epitelial de diferentes lesões sugere que a EDT apresenta uma origem monoclonal e a expressão positiva de marcadores de células-tronco sugere fortemente o envolvimento... / Endometriosis (EDT) is a chronic and heterogeneous gynecological disease increasingly recognized as an important women’s health issue. High Resolution Comparative Genomic Hybridization (HR-CGH) and array-CGH (aCGH) methods are potential tools for screening of genomic imbalances in distinct EDT lesions. In this study, HR-CGH was performed on 20 formalin-fixed paraffin-embedded EDT samples from different anatomical sites and histological types obtained from eight patients undergoing laparoscopy (Group 1). Stromal and epithelial components from each sample were laser microdissected. Eutopic endometrium from three patients was also analyzed and presented normal genomic pattern. In ectopic tissues, an average of 68 genomic imbalances was detected per sample. The comparison between stroma and epithelia showed the prevalence of common genomic alterations. DNA losses were more frequently detected and involved mainly 3p, 5q, 7p, 9p, 11q, 16q, 18q and 19q. Interestingly, the comparison among genomic profiles of distinct endometriotic lesions from particular patients also showed a high frequency of common losses and gains. Based on these findings, we also evaluated the expression of seven stemness-related markers by immunohistochemistry. Positive immunostaining for CD9, CD34, c-kit and Oct-4 markers was detected in isolated epithelial and/or stromal cells in majority of analyzed samples. The presence of common genomic alterations in stromal and epithelial cells from different sites and the expression of stemness-related markers suggested that EDT presents a clonal proliferation like in tumors and it may have a stem cell origin. Additionally, we investigated copy number variation (CNV) by high resolution array-CGH (aCGH) in 18 fresh microdissected infiltrating EDT lesions (Group II) using 4x44K oligonucleotide... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-10Bitstream added on 2014-06-13T19:02:56Z : No. of bitstreams: 1 ihlenfeld_mfk_dr_botfm.pdf: 6706392 bytes, checksum: 84cf4d5e562c51fba34d16bf95473913 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / As dosagens da leptina, da interleucina-6 (IL-6) e do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) foram avaliadas no diagnóstico da endometriose peritoneal mínima e leve (estádios I e 11 - American Society for Reproductive Medicine). Participaram, deste estudo prospectivo e casocontrole, 29 mulheres, em idade reprodutiva, submetidas a videolaparoscopia. O grupo de estudo foi composto por 15 pacientes em investigação de esterilidade conjugal ou dor pélvica crônica (grupo E) e o grupo controle por 14 mulheres assintomáticas encaminhadas para realização de ligadura tubária (grupo C). Foram coletadas amostras de sangue periférico e líquido peritoneal para a dosagem laboratorial das citocinas determinadas por meio de testes ELlSA. No soro, não se observou diferenças significantes nas amostras de leptina, de IL-6 e do TNF-Q entre os grupos estudados (p>O,05). No líquido peritoneal, houve diferenças significantes nas dosagens da leptina e do TNF-Q entre os grupos estudados (p<O,05);não havendo diferenças significantes para as amostras de IL-6 (p>O,05). No líquido peritoneal, há evidências da possibilidade da utilização da leptina e do TNF-Q no diagnóstico da endometriose mínima ou leve, na amostra estudada. / The levels of leptin, interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-o) were evaluated as a diagnostic tool for minimal and mild peritoneal endometriosis (stages I and II - American Society for Reproductive Medicine). lhe subjects of this prospective, case-control study were 29 women of reproductive age, who underwent laparoscopy. Subjects of the study-group were 15 women under investigation of infertility or chronic pelvic pain (E-group) and controls were patients with no symptoms in which tubal ligation would be performed (C-group). In ali these patients were collected samples of peripheral blood and peritoneal f1uid, in order to determine cytokine levels employing ELlSA tests. There were no statistical differences of the sera on the studied groups concerning the levels of leptin, IL-6 and TNF-o (p> 0.05). There were statistical differences in the peritoneal fluid of the studied groups, concerning the levels of leptin and TNF-o (p< 0.05) but not for IL-6 (p> 0.05). There is an evidence of using leptin and TNF-o in the peritoneal f1uid as a diagnostic tool for minimal and mild endometriosis.

Resumo não disponível

Orientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Mauricio Simões Abrão / Banca: Georgi Sabio Porto Mundin / Banca: José Ricardo Paciência Rodrigues / Banca: Claudia Aparecida Rainho / Resumo: A endometriose (EDT) é uma doença ginecológica crônica e heterogênea considerada um importante problema de saúde pública. As metodologias de Hibridação Genômica Comparativa de Alta resolução (HR-CGH) e CGH array (aCGH) são ferramentas importantes para a triagem de alterações genômicas em diferentes lesões endometrióides. No presente estudo, as análises de HR-CGH foram realizadas em 20 amostras de EDT fixadas em formalina e em blocos de parafina, de diferentes sítios e tipos histológicos, obtidas de oito pacientes submetidas à laparoscopia (Grupo I). Os componentes estromais e epiteliais foram isolados por microdissecção a laser. As amostras de endométrio tópico de três pacientes apresentaram perfis genômicos normais. Nos tecidos ectópicos, foi observada uma média de 68 regiões alteradas por caso. Análises comparativas entre os componentes estromais e epiteliais demonstraram alta freqüência de alterações genômicas comuns. As perdas foram mais prevalentes e envolveram principalmente os cromossomos 3p, 5q, 7p, 9p, 11q, 16q, 18q e 19q. A comparação entre os perfis de alteração de lesões de diferentes localizações derivadas da mesma paciente revelou a predominância de regiões comuns envolvidas em perdas e ganhos. Baseado nestes resultados foi realizada a análise de expressão protéica de sete marcadores de células-tronco pela metodologia de imunohistoquímica. A maioria das amostras apresentou expressão positiva dos marcadores CD9, CD34, c-Kit e Oct-4 em células isoladas do epitélio glandular e/ou células estromais. A presença de alterações genômicas comuns nos componentes estromal e epitelial de diferentes lesões sugere que a EDT apresenta uma origem monoclonal e a expressão positiva de marcadores de células-tronco sugere fortemente o envolvimento ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometriosis (EDT) is a chronic and heterogeneous gynecological disease increasingly recognized as an important women's health issue. High Resolution Comparative Genomic Hybridization (HR-CGH) and array-CGH (aCGH) methods are potential tools for screening of genomic imbalances in distinct EDT lesions. In this study, HR-CGH was performed on 20 formalin-fixed paraffin-embedded EDT samples from different anatomical sites and histological types obtained from eight patients undergoing laparoscopy (Group 1). Stromal and epithelial components from each sample were laser microdissected. Eutopic endometrium from three patients was also analyzed and presented normal genomic pattern. In ectopic tissues, an average of 68 genomic imbalances was detected per sample. The comparison between stroma and epithelia showed the prevalence of common genomic alterations. DNA losses were more frequently detected and involved mainly 3p, 5q, 7p, 9p, 11q, 16q, 18q and 19q. Interestingly, the comparison among genomic profiles of distinct endometriotic lesions from particular patients also showed a high frequency of common losses and gains. Based on these findings, we also evaluated the expression of seven stemness-related markers by immunohistochemistry. Positive immunostaining for CD9, CD34, c-kit and Oct-4 markers was detected in isolated epithelial and/or stromal cells in majority of analyzed samples. The presence of common genomic alterations in stromal and epithelial cells from different sites and the expression of stemness-related markers suggested that EDT presents a clonal proliferation like in tumors and it may have a stem cell origin. Additionally, we investigated copy number variation (CNV) by high resolution array-CGH (aCGH) in 18 fresh microdissected infiltrating EDT lesions (Group II) using 4x44K oligonucleotide... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-24T01:01:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000464257-Texto+Completo-0.pdf: 2419406 bytes, checksum: 7e6915df6695417911cc50d9c2a4ea00 (MD5) Previous issue date: 2014 / Endometriosis is a well know estrogen dependent disease and it´s most common symptoms are severe pelvic pain and infertility. It affects up to 15% of patients on reproductive age and up to 50% of infertile patients. Its pathogenesis still unclear and there is evidence for a role of genetic components. The microRNA135a and 135b (miR135) silence gene expression and increased miR135 down-regulated HOXA 10, a key mediator of endometrial receptivity and implantation. MiRNA are aberrantly regulated in the endometrium of women with endometriosis when compared to the endometrium of disease free women. Considering that several genes are known to be differentially expressed in eutopic and ectopic endometrium of women with endometriosis, we analyzed the expression of miR135 in the ectopic endometrium, compared with the expression in the eutopic from the same patients, and also evaluate if there is different levels of expression during the menstrual cycle. We evaluated thirty one subjects who underwent surgery from March 2013 through May 2014 for diagnosis or treatment of endometriosis, they had endometrium and endometriosis lesions biopsies taken. Approval was obtained from the PUCRS and Santa Casa Hospital Investigations Committee. Eight subjects were excluded due to low levels of mRNA. The samples were divided according to the menstrual cycle as follows: proliferative, day 1-14 (n=11) and secretory, day 15-28 (n=12). For miRNA detection, we used the poly (A) RT-PCR method using Invitrogen NCode miRNA first-strand cDNA synthesis MIRC-50 kit (Invitrogen, California, USA). Gene transcripts were amplified by real-time PCR using the AB 7500 (Applied Biosystems, California, USA) with the forward specific primers to miR135a and miR135b and the universal reverse primer complementary to the anchor primer. U6 small nuclear RNA was used as a control to determine relative miRNA expression. Relative mRNA level was presented using the formula 2−ΔΔCt. Statistical analysis was performed using unpaired Mann Whitney test for the ectopic vs. eutopic endometrium samples and for comparison between different phases of the menstrual cycle. All the analyses considered a p< 0. 05 as significant. Tweenty three patients submitted to laparoscopic surgery for diagnosis or treatment of endometriosis had endometrium biopsy taken and excision of endometriosis lesions. All endometriosis lesions samples expressed miR135a and miR135b. Comparing with the eutopic endometrium, there weren´t difference on its expression. When the subjects were divided by the menstrual cycle phase, during the secretory phase the expression of mir135a and 135b was lower in the ectopic endometrium comparing to the proliferative phase. MicroRNA is involved in endometrial receptivity, and there is evidence of a relation between miR135a and miR135b with HOXA10, a well know gene that is down regulated in women with endometriosis and has a strong influence on embryo implantation. Here we showed similar expression levels of miR135a and miR135b in the ectopic endometrium when compared with eutopic endometrium. However, we detected a lower expression of miR135 during the secretory phase that is likely due to physiological lower levels of estrogen and higher levels of progesterone during this phase. / Endometriose é uma doença estrogênio dependente que, entre seus sintomas mais comuns, estão dor pélvica e infertilidade. Afeta até 15% das pacientes em idade reprodutiva e até 50% das pacientes inférteis. A etiopatogenia ainda não é bem clara, mas há evidências do envolvimento de componentes genéticos. O microRNA 135a e 135b (miR135) silencia a expressão gênica e o aumento na expressão do miR135 diminui a expressão do HOXA 10, um importante mediador da receptividade endometrial e implantação. MicroRNAs têm sua expressão alterada no endométrio de mulheres com endometriose quando comparado com o endométrio de mulheres sem a doença. Considerando que vários genes são conhecidos por terem sua expressão alterada no endométrio tópico quando comparado ao endométrio ectópico das pacientes com endometriose, foi analisado a expressão do miR135 neste dois tecidos endometriais na mesma paciente em diferentes fases do ciclo menstrual. Após aprovação pelos Comitês de Ética em Pesquisa do Hospital São Lucas da PUCRS e da Santa Casa de Porto Alegre, foram realizadas biopsias endometriais e exérese de lesões de endometriose de trinta e uma pacientes submetidas à cirurgia no período de março de 2013 a maio 2014 para diagnóstico ou tratamento de endometriose Oito pacientes foram excluídas devido a níveis de mRNA muito baixos. As amostras foram divididas de acordo com o ciclo menstrual, fase proliferativa, dia 1 a 14 (n=11) e fase secretora, dia 15 a 28 (n=12). Para a detecção de miRNA foi utilizado o método poly (A) RT-PCR utilizando o kit Invitrogen NCode miRNA first-strand cDNA synthesis MIRC-50 kit (Invitrogen, California, USA). A transcrição gênica foi amplificada por PCR em tempo real, utilizando o aparelho AB 7500 (Applied Biosystems, Califórnia, USA). Foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores específicos para o miR135a e 135b e oligonucleotídeo iniciador universal. Para determinar a expressão relativa, foi utilizado o gene U6. Níveis relativos de mRNA foram apresentados utilizando a formula 2−ΔΔCt. Análise estatística foi realizada utilizando o teste de Mann Whitney, considerando como significativo um p<0,05.Vinte e três pacientes tiveram suas amostras analisadas. Todas as amostras expressavam níveis de miR135a e miR135b. Comparando o endométrio ectópico com o endométrio tópico não houve diferença na expressão do microRNA. Quando as pacientes foram divididas nas diferentes fases do ciclo menstrual, observou-se que durante a fase secretora, a expressão do miR135a e miR135b foi menor do que na fase proliferativa. Em conclusão, microRNAs estão envolvidos na receptividade endometrial e há evidência da relação entre o miR135a e miR135b com HOXA10, um gene sabidamente diminuído na endometriose e relacionado à implantação embrionária. Neste trabalho, foi demonstrado uma expressão semelhante do miR135 no endométrio ectópico em comparação com o endométrio tópico e uma diminuição nesta expressão quando comparado a fase secretora com a proliferativa, provavelmente devido a baixos níveis de estrogênio e altos níveis de progesterona presentes nesta fase.

Resumo não disponível

Resumo não disponível