Nefropatia diabética (ND) é uma importante complicação crônica do diabetes mellitus (DM), sendo responsável por uma proporção importante dos novos casos de diálise. Os principais fatores de risco são a hiperglicemia, hipertensão arterial sistêmica (HAS), a dislipidemia e o tabagismo. Está claro que a ND apresenta também um componente genético, entretanto os genes envolvidos na sua etiologia ainda não estão totalmente identificados. O sistema renina-angiotensina (SRA) tem um importante papel na gênese e progressão da ND. Recentemente, acumulam-se evidências que endotelinas também podem participar na patogênese da ND. As endotelinas são peptídeos com potente ação vasoconstritora e atuam modulando o tono vasomotor, proliferação celular e produção hormonal. Estes peptídeos agem através de dois receptores (ET-A e ET-B) que são expressos nas células endoteliais e no músculo liso vascular. Ativação destes receptores nas células renais levam a uma complexa cascata de alterações resultando em proliferação e hipertrofia das células mesangiais, vasoconstrição das arteríolas aferentes e eferentes e acúmulo da matriz extra-celular. Essas alterações hemodinâmicas renais estão associadas com o aparecimento e progressão da doença renal no DM. Níveis plasmáticos elevados de endotelina-1 (ET-1) têm sido relatados em pacientes com DM, tanto com e sem microalbuminúria, sugerindo que a disfunção endotelial relacionada ao DM poderia aumentar a produção vascular de ET-1, que levaria ao dano glomerular. O uso de drogas antagonistas do receptor da ET-1 em situações de DM experimental tem mostrado propriedades nefroprotetoras, reforçando a importância deste sistema na ND.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226731.pdf: 602945 bytes, checksum: 0075e137862a7d8a18dcf2bfd893ba9e (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334505.pdf: 7755473 bytes, checksum: 73d900cb90e365173681d8a2697c5eaf (MD5) Previous issue date: 2015 / Lesões medulares traumáticas resultam em um dano neurológico que, geralmente, resulta em dor neuropática, a qual impacta negativamente a qualidade de vida dos lesados medulares. As endotelinas são peptídeos que exercem seus efeitos através dos receptores ETA (ETAR) e ETB (ETBR) e, contribuem para alterações sensoriais associadas aos processos inflamatórios e dores neuropáticas. No entanto, o envolvimento desses receptores na dor neuropática após trauma medular precisa ser elucidado. Ratos Wistar machos foram submetidos a lesão medular traumática no nível torácico T10 por compressão através de catéter Fogarty-2F. As avaliações comportamentais e coletas de amostras foram realizadas em 2, 7, 14, 21 e 28 dias após o procedimento cirúrgico. Os níveis de expressão dos receptores ETA e ETB foram mensurados através de western blot e imunohistoquímica, e seus correpondentes níveis de RNAm avaliados por PCR-em tempo real. Além de avaliações funcionais pela escala BBB e comportamentais através de filamentos de von Frey e avaliação de sensibilidade térmica por aparato de Hargreave s nas patas anteriores e posteriores . No dia 28 o escore BBB destes animais foi de 4 pontos, que se caracteriza por movimento discreto das três articulações  quadril, joelho e tornozelo. No entanto, os animais lesados medulares tiveram um aumento significativo em comparação ao grupo falso-operado nas respostas ao estímulo mecânico das patas posteriores, tanto com o filamento de 4 gramas quanto com o de 15 gramas. Essas alterações de sensibilidade foram significantes entre os dia 14 e 28 após o procedimento cirúrgico. O dano medular resultou no desenvolvimento de hiperalgesia nos membros posteriores a partir do 14o dia após a lesão medular, redução na sensibilidade térmica a partir do 7o dia, um aumento nos níveis de RNAm para ETAR e ETBR, além de um aumento na expressão da proteína do receptor ETA na medula espinhal. Observou-se, também, um aumento da expresão de ETAR na substância cinzenta da medula espinhal de animais lesados medulares no 14 dias após o trauma. O tratamento no 21o dia após a lesão medular com antagonista peptídico de ETAR, BQ-123 (40 e 90 pmol, i.t.) e tratamento com o antagonista dual para ETAR e ETBR, bosentan (30 and 100 mg/kg, oralmente) foram capazes de reduzir significativamente a hiperalgesia por algumas horas após o tratamento, no entanto o tratamento com o antagonista seletivo para ETBR, BQ-788 (20 e 90 pmol, i.t), foi ineficaz na redução da hiperalgesia. Assim, esse estudo demonstra que há uma participação de ETAR e ETBR, na dor neuropática decorrente do trauma medular, em especial do ETAR e estes resultadados podem contribuir para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento desta importante comorbidade dos lesados medulares.<br> / Abstract : Traumatic spinal cord injury (SCI) is a devastating neurologic disorder that often inflicts neuropathic pain, which further impacts negatively on the patient s quality of life. Endothelin peptides, which exert their effects via endothelin A (ETAR) and endothelin B (ETBR) receptors, can contribute to sensory changes associated with inflammatory and neuropathic pain, but their role in nociception following SCI is unknown. At different time points (2, 7, 14, 21 and 28 d) after subjecting male Wistar rats to surgery for compression-induced T10 level SCI, the spinal cord levels of ETAR and ETBR were assessed by Western blot and immunohistochemistry, and the corresponding mRNAs by real-time PCR, alongside recordings of locomotor behaviour by BBB scale and behavioral responses to mechanical and thermal stimulation of the forepaws and hind paws with von Frey hairs. Animal subjected to SCI ended the 28th time-period with a score of 4 within the BBB scale, which represents slight movements of the hip, knee and ankle. SCI was associated with development of hind paw mechanical hyperalgesia from day 14 onwards and heat hyperalgesia from day 7 to day 21, and up-regulation of ETAR and ETBR mRNA in the spinal cord and of ETAR protein in the spinal cord. SCI increased ETAR protein expression in spinal grey matter on the 14th day after injury. Treatment on day 21 after surgery with the ETAR selective antagonist BQ-123 (40 and 90 pmol, i.t.) or the dual ETAR/ETBR antagonist bosentan (30 and 100 mg/kg, orally) transiently reduced SCI-induced mechanical hyperalgesia, but the ETBR antagonist BQ-788 (20 and 90 pmol, i.t.) was ineffective. Conclusions. Altogether, these data show that SCI upregulates ETAR expression in the spinal cord, which appears to contribute to the hind paw mechanical hyperalgesia associated with this condition. Therapies directed towards blockade of spinal ETAR may hold potential to limit SCI-induced neuropathic pain.

Nefropatia diabética (ND) é uma importante complicação crônica do diabetes mellitus (DM), sendo responsável por uma proporção importante dos novos casos de diálise. Os principais fatores de risco são a hiperglicemia, hipertensão arterial sistêmica (HAS), a dislipidemia e o tabagismo. Está claro que a ND apresenta também um componente genético, entretanto os genes envolvidos na sua etiologia ainda não estão totalmente identificados. O sistema renina-angiotensina (SRA) tem um importante papel na gênese e progressão da ND. Recentemente, acumulam-se evidências que endotelinas também podem participar na patogênese da ND. As endotelinas são peptídeos com potente ação vasoconstritora e atuam modulando o tono vasomotor, proliferação celular e produção hormonal. Estes peptídeos agem através de dois receptores (ET-A e ET-B) que são expressos nas células endoteliais e no músculo liso vascular. Ativação destes receptores nas células renais levam a uma complexa cascata de alterações resultando em proliferação e hipertrofia das células mesangiais, vasoconstrição das arteríolas aferentes e eferentes e acúmulo da matriz extra-celular. Essas alterações hemodinâmicas renais estão associadas com o aparecimento e progressão da doença renal no DM. Níveis plasmáticos elevados de endotelina-1 (ET-1) têm sido relatados em pacientes com DM, tanto com e sem microalbuminúria, sugerindo que a disfunção endotelial relacionada ao DM poderia aumentar a produção vascular de ET-1, que levaria ao dano glomerular. O uso de drogas antagonistas do receptor da ET-1 em situações de DM experimental tem mostrado propriedades nefroprotetoras, reforçando a importância deste sistema na ND.

Nefropatia diabética (ND) é uma importante complicação crônica do diabetes mellitus (DM), sendo responsável por uma proporção importante dos novos casos de diálise. Os principais fatores de risco são a hiperglicemia, hipertensão arterial sistêmica (HAS), a dislipidemia e o tabagismo. Está claro que a ND apresenta também um componente genético, entretanto os genes envolvidos na sua etiologia ainda não estão totalmente identificados. O sistema renina-angiotensina (SRA) tem um importante papel na gênese e progressão da ND. Recentemente, acumulam-se evidências que endotelinas também podem participar na patogênese da ND. As endotelinas são peptídeos com potente ação vasoconstritora e atuam modulando o tono vasomotor, proliferação celular e produção hormonal. Estes peptídeos agem através de dois receptores (ET-A e ET-B) que são expressos nas células endoteliais e no músculo liso vascular. Ativação destes receptores nas células renais levam a uma complexa cascata de alterações resultando em proliferação e hipertrofia das células mesangiais, vasoconstrição das arteríolas aferentes e eferentes e acúmulo da matriz extra-celular. Essas alterações hemodinâmicas renais estão associadas com o aparecimento e progressão da doença renal no DM. Níveis plasmáticos elevados de endotelina-1 (ET-1) têm sido relatados em pacientes com DM, tanto com e sem microalbuminúria, sugerindo que a disfunção endotelial relacionada ao DM poderia aumentar a produção vascular de ET-1, que levaria ao dano glomerular. O uso de drogas antagonistas do receptor da ET-1 em situações de DM experimental tem mostrado propriedades nefroprotetoras, reforçando a importância deste sistema na ND.

Orientador: Jose Geraldo P. Ferraz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T20:45:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camara_PaulaRubyadeSouza_D.pdf: 2256684 bytes, checksum: 9dc8fd88329e14f1e7a96cce313eb651 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A resistência reduzida da mucosa gástrica hipertensiva portal, perante os agentes lesivos, é observada frequentemente em pacientes portadores de cirrose hepática e hipertensão portal. Trata-se de complicação grave que predispõe ao desenvolvimento de hemorragia digestiva alta ou anemia, secundária à perda crônica sangüínea, resultando na necessidade de frequêntes transfusões sangüíneas. Os fatores que determinam a resistência diminuída da mucosa gástrica hipertensiva portal perante os agentes nocivos incluem uma complexa interação entre vários mediadores continuamente liberados durante o desenvolvimento da circulação hiperdinâmica na hipertensão portal. Os neurônios aferentes primários podem contribuir para esse fenômeno, uma vez que eles foram previamente implicados no desenvolvimento da hiperemia esplâncnica na hipertensão portal. O presente estudo teve como objetivo ivestigar a contribuição da inibição crônica do óxido nítrico, bem como a participação das prostaglandinas e endotelinas, na resistência reduzida da mucosa gástrica à lesão induzida pelo etanol 40% usando modelos experimetais em ratos. Modelos distintos de hipertensão portal (ligadura de ducto biliar comum e estenose calibrada de veia porta) foram realizados em ratos Sprague-Dawley. As lesões gástricas induzidas pelo etanol foram avaliadas utilizando o modelo ex vivo de câmara gástrica. A resposta microcirculatória da mucosa foi avaliada através de fluxometria por laser-Doppler usando o mesmo modelo ex vivo. O papel da inibição prolongada de óxido nítrico foi realizado através da adição de L-NAME à água de beber dos ratos controles e com hipertensão portal antes dos experimentos de câmara gástrica. Similarmente, a função das endotelinas e das prostaglandinas foi avaliada através da utilização de agonistas, antagonistas ou de inibidores. A participação de neurônios aferentes no desenvolvimento da circulação hiperdinâmica da hipertensão portal e sua repercussão sobre a resistência da mucosa gástrica ao etanol foi avaliada através do tratamento neonatal com capsaicina ou do uso de antagonista de taquicininas. A sinalização molecular para produção óxido nítrico, prostaglandinas e endotelinas, bem como o efeito da endotoxemia e o pH intragástrico foi também avaliado. Nossos resultados indicam que a hipertensão portal associada à disfunção hepática reduz a capacidade da mucosa gástrica de se defender contra a aplicação tópica de etanol. Esse fenômeno é influenciado pelo pH intragástrico, bem como pela presença de endotoxemia. Os resultados também indicam que os neurônios aferentes primários participam no desenvolvimento da circulação hiperdinâmica da hipertensão portal, afetando a capacidade de defesa da mucosa gástrica perante os agentes agressores. Nós concluímos que a capacidade de defesa da mucosa gástrica hipertensiva portal, avaliada nos modelos experimentais utilizados, é modulada pelos neurônios aferentes primários, e resulta de uma complexa interação entre o óxido nítrico liberado, prostaglandinas, endotelinas e o sistema nervoso entérico / Abstract: The reduced resistance of the portal hypertensive gastric mucosa is frequently observed in patients with liver cirrhosis associated with portal hypertension. It can predispose to upper gastrointestinal hemorrhage as well as anemia secondary to chronic blood loss. It is usually associated with the need of multiple blood transfusions. The mechanisms involved in the reduced resistance of the portal hypertensive gastric mucosa include a complex interaction between several vasoactive mediators continuously released during the development of the hyperdynamic circulation of portal hypertension. Primary afferent neurons may also contribute to this phenomenon, as they have been previously implicated in the development of the splanchnic hyperemia in portal hypertension. The objective of the present study was to investigate the role of chronic inhibition of nitric oxide, as well as prostaglandins and endothelins, in the reduced resistance of the gastric mucosa to ethanol (40%)-induced injury using an experimental rat model. Portal hypertension was induced by bile duct ligation or calibrated portal vein stenosis in male Sprague-Dawley rats. Ethanol-induced gastric damage was assessed using an ex vivo gastric chamber preparation. Gastric blood flow responses were measured using laser Doppler flowmetry using the ex vivo preparation as well. The role of chronic nitric oxide inhibition was achieved by adding L-NAME to drinking water of control and portal hypertensive rats prior to chamber experiments. Similarly, the function of endothelins and prostaglandins was investigated using agonists, antagonists or inhibitors. The participation of primary afferent neurons in both development of hyperkinetic circulation in portal hypertension and its contribution on gastric resistance to ethanol-induced injury were investigated by induction of cirrhosis by bile duct ligation in either capsaicin newborn or takikinin antagonist treated rats. The molecular signaling for generation of nitric oxide, prostaglandins and endothelins was studied using RT-PCR. The gastric prostaglandin synthetic capacity was assessed using ELISA in samples collected at the end of the different experiments. The impact of endotoxemia and intragastric pH on gastric resistance to ethanol-induced injury was also investigated. Our results indicated that induction of liver dysfunction and portal hypertension reduces the gastric resistance to topical application of ethanol. This is influenced by the intragastric pH, as well as by the presence of endotoxemia. This phenomenon is result of a complex interplay between the production and release of nitric oxide, prostaglandins and entothelins. In addition, primary afferent neurons participate in the development of the hyperdynamic circulation of portal hypertension, affecting the ability of the gastric mucosa to defend against injury. We conclude that gastric defence against topical application of ethanol in the presence of experimental portal hypertension is modulated by primary afferent neurons, and result of a complex interplay among the release of nitric oxide, prostaglandins, endothelins and the enteric nervous system / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Emmanuel Gomes Ciolac / Banca: Bruno Martinelli / Banca: Silvia Regina Barrile / Resumo: Pesquisas recentes têm mostrado que o treinamento intervalado de alta intensidade (TI) é superior ao treinamento contínuo de moderada intensidade (TC) para a melhora da capacidade cardiorrespiratória, bem como de inúmeras variáveis associadas à fisiopatologia do Diabetes Mellitus (DM). A atual prescrição de TI é baseada na resposta da frequência cardíaca (FC) máxima, consumo máximo de oxigênio e/ou limiares ventilatórios durante um teste progressivo de esforço máximo, o que requer equipamentos de alto custo. A percepção subjetiva de esforço (PSE) é uma medida simples e sem custo, sendo opção atrativa para prescrição e automonitoramento do exercício. Porém, pouco se sabe sobre as respostas agudas do TI prescrito e automonitorado por essa ferramenta em indivíduos diabéticos. O objetivo deste estudo foi investigar a eficiência da escala de PSE como ferramenta de prescrição e automonitoramento do TI em indivíduos com DM tipo 2 (DM2). Foram estudados 11 indivíduos (2 homens) portadores de DM2 (idade = 52,3±3 anos; tempo de diagnóstico = 9,5±1,6 anos). Foi realizado teste ergométrico em esteira e 4 intervenções em ordem aleatória: TI-PSE, 4 min de aquecimento caminhando no nível 9 de PSE e 21 min de TI alternando 1 min de caminhada/corrida no nível 15-17 com 2 min de caminhada no nível 9-11; TI-FC, 4 min de aquecimento caminhando com FC a 50% da FC de reserva e 21 min de TI alternando 1 min de caminhada/corrida com FC a 85% da FC de reserva com 2 min de caminhada com FC a 50% da FC... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: High-intensity interval training (HIIT) is a time-efficient intervention for preventing and treating type 2 diabetes mellitus (T2DM). Its prescription requires an expensive method (cardiopulmonary exercise testing, CPX) that is not commonly available to general population. Rate of perceived exertion scale (RPE) is a simple and inexpensive tool for prescribing and self-regulating exercise. However, its usefulness for prescribing and self-regulating HIIT in T2DM is unkown. The objective of this study was to analyze the use and efficiency of the 6-20 RPE scale for prescribing and self-regulating HIIT in patients with T2DM. Eleven (two males) T2DM patients (time since diagnosis = 9.5±1.6 yr) aged 52.3±3 yr underwent a symptom-limited CPX on a treadmill to determine their heart rate (HR) response to exercise. Patients were then assigned to perform of HIITRPE (4 min of warm-up and 21 min of jogging/running at 15-17 (1 min) alternating with walking at 9-11 (2 min) on the 6-20 RPE scale), HIIT prescribed and regulated by HR response to CPX (HIITHR, 4 min of warm-up and 21 min of jogging/running at 85% (1 min) alternating with walking at 50% (2 min) of reserve HR), continous moderate exercise (CME) prescribed and self-regulated by RPE (30 min of walking at 11-13 on the 6-20 RPE scale), and control session (CON, sitting in a quiet environment) in a random order (3 to 15 days between intervention). Blood pressure, heart rate, capillary glucose, heart rate variability, endothelial function and carotid-femoral pulse wave velocity (PWV) were assessed before, immediately after and 45 min after each intervention. 24-h ambulatory HR and blood pressure (ABP) after each intervention. Exercise HR, distance and speed were not different between HIITRPE and HIITHR. T2DM patients showed similar reductions in capillary glucose after HIITRPE (22.5±3.6%) and HIITHR (23.5±4.7%), wich were... (Complete abstract electronic below) / Mestre

O exercício físico traz inúmeros benefícios para o sistema nervoso, dentre eles a melhora da memória e cognição, além de um efeito protetor em relação ao declínio mental decorrente do envelhecimento e de lesões do sistema nervoso. Este estudo teve como objetivo observar os efeitos plásticos do exercício moderado de curta duração no hipocampo e em regiões motoras do encéfalo de ratos, frequentemente afetadas por lesões ou doenças neurodegenerativas. As metodologias empregadas nestas análises foram a imuno-histoquímica, o Western blotting,o PCR em tempo real, avaliação dos níveis de neurogênese pela injeção de BrdU e imageamento de Ca2+ de astrócitos corticais. Os resultados encontrados mostram que o exercício moderado de curta duração promoveu alterações plásticas específicas em todas as regiões estudadas, variando na dependência do marcador utilizado e do decurso temporal do exercício. Acreditamos que este é suficiente para promover plasticidade difusa no sistema nervoso, que pode ser parte do substrato do efeito benéfico do exercício no sistema nervoso. / Evidence shows that physical exercise is neuroprotective and enhances brain function by improving cognition, learning and memory. It has also been associated with structural changes such as angiogenesis, synaptogenesis and neurogenesis. The aim of this study was to observe the effects of a moderate, short-term exercise protocol on the hippocampus and brain regions related to motor function, commonly affected by neurodegenerative diseases. The methods used for these analyses were immunohistochemistry, Western blotting, real-time PCR, evaluation of the levels of hippocampal neurogenesis with injections of BrdU and Ca2+ imaging of cortical astrocytes. Our results show that short-term moderate physical exercise induced specific plastic changes in all regions studied, which varied depending on the marker and time course of exercise and is enough to modulate synaptic and structural elements of neurons as well as astrocytes, playing an important role in the diffuse exercise-dependent plasticity which may underlie the beneficial effects of exercise in the brain.

O exercício físico traz inúmeros benefícios para o sistema nervoso, dentre eles a melhora da memória e cognição, além de um efeito protetor em relação ao declínio mental decorrente do envelhecimento e de lesões do sistema nervoso. Este estudo teve como objetivo observar os efeitos plásticos do exercício moderado de curta duração no hipocampo e em regiões motoras do encéfalo de ratos, frequentemente afetadas por lesões ou doenças neurodegenerativas. As metodologias empregadas nestas análises foram a imuno-histoquímica, o Western blotting,o PCR em tempo real, avaliação dos níveis de neurogênese pela injeção de BrdU e imageamento de Ca2+ de astrócitos corticais. Os resultados encontrados mostram que o exercício moderado de curta duração promoveu alterações plásticas específicas em todas as regiões estudadas, variando na dependência do marcador utilizado e do decurso temporal do exercício. Acreditamos que este é suficiente para promover plasticidade difusa no sistema nervoso, que pode ser parte do substrato do efeito benéfico do exercício no sistema nervoso. / Evidence shows that physical exercise is neuroprotective and enhances brain function by improving cognition, learning and memory. It has also been associated with structural changes such as angiogenesis, synaptogenesis and neurogenesis. The aim of this study was to observe the effects of a moderate, short-term exercise protocol on the hippocampus and brain regions related to motor function, commonly affected by neurodegenerative diseases. The methods used for these analyses were immunohistochemistry, Western blotting, real-time PCR, evaluation of the levels of hippocampal neurogenesis with injections of BrdU and Ca2+ imaging of cortical astrocytes. Our results show that short-term moderate physical exercise induced specific plastic changes in all regions studied, which varied depending on the marker and time course of exercise and is enough to modulate synaptic and structural elements of neurons as well as astrocytes, playing an important role in the diffuse exercise-dependent plasticity which may underlie the beneficial effects of exercise in the brain.

Endotelinas (ETs) e sarafotoxinas (SRTXs) pertencem a uma família de peptídeos vasconstritores que podem regular a migração e/ou produção de pigmentos em células pigmentares de vertebrados (cromatóforos). Em peixes teleósteos, ETs/SRTXs induzem a migração de pigmentos. Em melanócitos humanos, as ETs promovem a melanogênese e mitogênese. ETs também regulam a transcrição de diversos genes. Esses efeitos são mediados por diferentes vias de sinalização intracelular, dentre elas a via da fosfolipase C (PLC), da proteína quinase C (PKC) e da cascata de sinalização por proteína quinases ativadas por mitógeno (MAPKs). A rodopsina é um fotopigmento responsável pela detecção de fótons presente nos bastonetes dos olhos dos vertebrados. A modulação da transcrição do gene para rodopsina em peixes teleósteos e mamíferos parece ocorrer através de elementos conservados. Cromatóforos podem responder diretamente à luz, resultando no deslocamento dos grânulos de pigmentos através dos processos dendríticos das células. Essas respostas evocadas por luz são provavelmente mediadas por moléculas fotorreceptoras expressas por essas células. A linhagem celular GEM-81, proveniente de eritroforoma do peixe teleósteo Carassius auratus, assim como os melanócitos B16 de Mus musculus expressam rodopsina e receptores para ETs dos subtipos ETB e ETA, respectivamente. O objetivo deste trabalho foi determinar se: 1) os níveis do RNAm para rodopsina poderiam ser modulados por SRTX S6c em GEM-81 e por ET-1 em B16 e quais os mecanismos de sinalização intracelular envolvidos nessa modulação; 2) os níveis protéicos de rodopsina também poderiam ser modulados por SRTX S6c em GEM-81 e por ET-1 em B16. Através de PCR em tempo real (quantitativo), demonstrou-se que SRTX S6c e ET-1 modulam os níveis do RNAm para rodopsina em GEM-81 e B16, respectivamente, de forma temporal e dose-dependente. Em GEM-81, essa modulação envolve a ativação de uma PKC e da cascata das MAPKs. Já em B16, há o envolvimento de PLC, cálcio como mensageiro intracelular, calmodulina, quinase dependente de cálcio/calmodulina e PKC. Através de ensaios de Western blotting, foi demostrado que na linhagem GEM-81 os níveis protéicos de rodopsina não são significativamente alterados por 24 horas de tratamento com SRTX 10-9M S6c, sugerindo o envolvimento de mecanismos de controle pós-transcricional na modulação da expressão protéica de rodopsina. Nas células B16 cuja extração de proteína total ocorreu 0 ou 6h após o fim do tratamento de 24h com ET-1 10-10M, os níveis protéicos de rodopsina não são significativamente alterados. Já nas células cuja proteína total foi extraída 3h após o fim do tratamento com ET-1, observou-se uma diminuição significativa dos níveis da proteína rodopsina. Esses resultados sugerem o envolvimento de mecanismos de controle pós-transcricional na modulação da expressão protéica de rodopsina, mecanismos estes exacerbados nas células B16 cuja extração de proteína ocorreu 3h após o fim do tratamento. / Endothelins (ETs) and sarafotoxins (SRTXs) belong to a family of vasoconstrictor peptides, which can regulate pigment migration and/or production in vertebrate pigment cells (chromatophores). In teleostean fish, ETs/SRTXs induce pigment migration. In human melanocytes, ETs promote melanogenesis and mitogenesis. ETs also regulate the transcription of several genes. These effects are mediated by different intracellular signaling pathways, such as the phospholipase C (PLC), protein kinase C (PKC) and the mitogen-activated protein kinase (MAPK) cascade. Rhodopsin is a photopigment responsible for photon detection, found in vertebrate rod cells. Rhodopsin gene transcription regulation in teleostean fish and mammals seems to occur through conserved elements. Chromatophores can respond directly to light, promoting the migration of pigment granules along the cells dedritic processes. These light-evoked responses are probably mediated by photoreceptive molecules expressed by these cells. The teleost Carassius auratus erythrophoroma cell line, GEM-81 and Mus musculus B16 melanocytes express rhodopsin, as well as the ET receptors, ETB and ETA, respectively. The aim of this study was to determine whether 1) rhodopsin mRNA levels could be modulated by SRTX S6c in GEM-81 cells and ET-1 in B16 cells and the intracellular signaling mechanisms involved; 2) rhodopsin protein levels could also be modulated by SRTX S6c in GEM-81 and ET-1 in B16 cells. Using real time (quantitative) PCR, we demonstrated that SRTX S6c and ET-1 modulate rhodopsin mRNA levels in GEM-81 and B16, respectively, in a time and dose-dependent way. In GEM-81, this modulation involves the activation of a PKC and the MAPK cascade. In B16, it involves PLC, calcium as a second messenger, calmodulin, a calcium/calmodulin dependent kinase and PKC. The Western blotting assays demonstrated that in GEM-81 cells rhodopsin protein levels are not significantly altered by a 24-hour treatment with 10-9M SRTX S6c, suggesting the involvement of post-transcriptional mechanisms in the modulation of rhodopsin expression. In B16 cells, whose total protein was extracted 0 or 6 hours after the 24-hour treatment with 10-10M ET-1, rhodopsin protein levels were not significantly altered. When the cells total protein was extracted 3 hours after the 24-hour treatment with ET-1, a significant reduction in rhodopsin protein levels was observed. These results also suggest the involvement of post-transcriptional mechanisms in the modulation of rhodopsin expression in this cell line. These mechanisms could be somehow exacerbated in B16 cells whose protein was extracted 3 hours after the treatment.