Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-31Bitstream added on 2014-06-13T18:20:52Z : No. of bitstreams: 1 maekawa_le_me_sjc.pdf: 1077568 bytes, checksum: e0ce27d1dd6793352dd63ea6311e97a8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A proposta deste trabalho foi avaliar a efetividade de substâncias químicas auxiliares e medicações intracanais sobre Escherichia coli e sua endotoxina em canais radiculares. Foram utilizados 120 dentes unirradiculados que após secção das coroas as raízes foram impermeabilizadas e esterilizadas. Os canais foram contaminados com suspensão de Escherichia coli por 14 dias. Após a coleta de confirmação, foram instrumentados até a lima K 50 e escalonados até a K 80. Doze raízes foram utilizadas como controle (G4) e 108 raízes foram divididas em 3 grupos (n=36), de acordo com a substância química auxiliar utilizada: G1) hipoclorito de sódio 2,5%; G2) clorexidina gel 2% (CLX); G3) solução fisiológica apirogênica. Após o preparo biomecânico (PBM) estes grupos foram subdividos de acordo com a medicação intracanal utilizada (MIC) (n=12): A) hidróxido de cálcio (Ca(OH)2), B) polimixina B e C) Ca(OH)2 + CLX. No grupo G4 foi utilizada solução fisiológica apirogênica sem MIC. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular imediatamente após o PBM (1ª coleta), após 7 dias do PBM (2ª coleta), imediatamente após 14 dias da ação da MIC (3ª coleta) e 7 dias após remoção da MIC (4ª coleta). Para todas as coletas foram avaliadas: a) atividade antimicrobiana; b) quantificação de endotoxina pelo teste cromogênico do lisado de amebócitos de Limulus. As substâncias químicas auxiliares e as MICs utilizadas foram capazes de eliminar completamente E. coli dos canais radiculares. Para os resultados da quantidade de endotoxina foi aplicado teste estatístico Kruskall-Wallis e Dunn (5%). Na primeira e na segunda coleta verificou-se que os grupos G1 e G2 foram diferentes estatisticamente do grupo G3 (p<0,05). Na terceira coleta, o grupo G2B foi semelhante aos grupos G1A, G1B e G3A e o grupo G3B foi semelhante aos demais (p>0,05). / The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of auxiliary chemical substances and intracanal medications on Escherichia coli (E. coli) and its endotoxin in root canals. The study was conducted on 120 single-rooted teeth. After sectioning of crowns, the root canals were contaminated with a suspension of E. coli for 14 days. After collection of confirmation, they were submitted to instrumentation up to K 50 file and step-back preparation up to K 80 file. Thereafter, twelve roots were used as control group (G4) and 108 roots were divided into 3 groups (n=36) according to the auxiliary chemical substance used: G1) 2.5% sodium hypochlorite; G2) 2% chlorhexidine gel (CLX); G3) apyrogenic saline solution. After biomechanical preparation (BMP), these groups were subdivided according to the intracanal medication (ICM) employed (n=12): A) calcium hydroxide (Ca(OH)2), B) polymyxin B, and C) Ca(OH)2 + 2% CLX gel. The control group (G4) was used apyrogenic saline solution without application of intracanal medication. Samples of the root canal content were collected immediately after PBM (1st collection), at 7 days after PBM (2nd collection), immediately after 14 days of ICM activity (3rd collection), and 7 days after removal of ICM (4th collection). The following aspects were evaluated for all collections: a) antimicrobial activity; b) quantification of endotoxin by the Limulus amebocyte lysate test. The auxiliary chemical substances and ICMs employed were able to completely eliminate E. coli from root canals. Results of the amount of endotoxin were analyzed by the Kruskal-Wallis and Dunn (5%) statistical tests. In the first and second collection, it was verified that groups G1 and G2 were statistically different from group G3 (p<0.05). In the third collection, groups G1C, G2A, G2C and G3C showed the lowest endotoxin values and were statistically similar to groups G1A, G1B, G3A and G3B (p>0.05).

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:38Z : No. of bitstreams: 1 000164825.pdf: 1273680 bytes, checksum: e20dc9f06fccaf20d38ac2598619675c (MD5) / Este trabalho teve por objetivos avaliar as respostas sistêmicas induzidas pela injeção intraperitoneal de 3,0 mg/kg de lipopolissacrídeo (LPS) de Escherichia coli e os eventuais efeitos da suplementação alimentar com cromo trivalente. Para tanto foram utilizados 300 pacus Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) pesando em média 80 g; distribuídos em 20 aquários e cinco tratamentos, quais sejam um grupo Controle, não suplementado e que não recebeu LPS; um grupo que recebeu somente LPS e outros três, CRa, CRb e CRc que receberam LPS e dois, quatro e seis partes por milhão de cromo trivalente na ração. Material para determinação de hematócrito, concentração plasmática de cortisol e glicose, concentração de glicogênio hepático, índice hepatossomático e avaliação histológica de brânquias foram colhidos antes e um, dois, quatro, nove, 14, 19 e 24 dias após a injeção do LPS. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5 x 8, com 4 repetições representadas pelos aquários. Os resultados demonstraram que os níveis de cortisol circulantes aumentaram em todos os grupos assim como houve incremento do estoque de glicogênio hepático. O hematócrito não apresentou diferença significativa e as brânquias apresentaram ligeiras modificações estruturais / This work had for objectives to evaluate the response systemic induced by the injection intraperitoneal of 3,0 mg/kg of lipopolissacharideo (LPS) of Escherichia coli and the eventual effects of the alimentary supplementation with mixed trivalent chromium to the ration. Were used three hundred fish Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887), weighing 80 g on average.; distributed in 20 aquariums and five treatments, which are a group control, non supplemented and that didn't receive LPS; a group that received only LPS and other three, CRa, CRb and CRc that received LPS and two, four six parts for millions of trivalent chrome in the ration. Material for haematocrit determination, concentration cortisol plasmático and glucose, concentration of hepatic glycogen, index hepatosomático and modifications in the branchial structure were appraised by histology picked before and a, two, four, nine, 14, 19 and 24 days after the injection of LPS. The experimental design was randomized entirely, in a 5 x 8 factorial. The results demonstrated that the levels of circulating cortisol increased in all the groups as well as there was increment of the stock of hepatic glycogen. The haematocrit didn't present significant difference and the gills presented quick structural modifications

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-05-02T23:09:42Z No. of bitstreams: 1 MarcosAntonioOliveiraFilho_DISSERT.pdf: 2485074 bytes, checksum: fccf471f4339887f4eea52949d0b5005 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-05-07T22:42:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarcosAntonioOliveiraFilho_DISSERT.pdf: 2485074 bytes, checksum: fccf471f4339887f4eea52949d0b5005 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-07T22:42:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarcosAntonioOliveiraFilho_DISSERT.pdf: 2485074 bytes, checksum: fccf471f4339887f4eea52949d0b5005 (MD5) Previous issue date: 2018-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O antígeno 503, uma proteína encontrada na forma amastigota de Leishmania i. chagasi, possui potencial para utilização em vacinas e testes para diagnóstico específico da leishmaniose visceral. No entanto, um problema intrínseco à purificação de proteínas expressas em E. coli é a presença de endotoxinas (LPS), componente da parede celular de bactérias gram-negativas, que provoca resposta imune quando em contato com células de defesa humana. Os sistemas aquosos bifásicos (SABs) vêm sendo utilizados na purificação de biomoléculas por apresentar vantagens como eliminar a etapa de clarificação, concentrar e purificar a molécula alvo e, no presente estudo, efetuar a remoção parcial do LPS, durante o protocolo de purificação. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os SABs baseados em polietilenoglicol (PEG 1500) e etanol com sais (fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) e sulfato de amônio ((NH4)2SO4)) e acetonitrila com glicose na recuperação e purificação parcial do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi expresso em E. coli M15 com remoção simultânea de LPS. Inicialmente, foram obtidas as curvas binodais, pelo método de titulação por ponto de nuvem a temperatura ambiente (25 ± 2 ºC) a fim de determinar as concentrações de trabalho dos componentes dos sistemas avaliados. Esses dados experimentais também foram usados para os cálculos dos parâmetros da equação proposta por Merchuk, e obtenção do comprimento das linhas de amarração – tie lines length (TTL). Definindo-se a composição dos sistemas, aplicou-se 20% de homogeneizado celular de E. coli nos SABs, observou-se que o sistema que mais favoreceu a recuperação e concentração do antígeno 503 foi o constituído por PEG 1500 e K2HPO4, atingindo um fator de purificação de 1,55 e percentual de recuperação de 116,96% na fase de topo, nas condições de 30% de PEG 1500 e 10% de sal (m/m). A remoção de LPS foi promissora para todos os sistemas avaliados, se mantendo acima de 90,0%. O ensaio que apresentou melhor purificação também se destacou na remoção desse contaminante, atingindo 99,90% de LPS removido. Deste modo, os SABs podem ser empregados como etapa precedente à cromatografia para remoção de elevadas concentrações de LPS e aumentar o grau de pureza de proteínas recombinantes expressas em E. coli. / The antigen 503, a protein found in the amastigote phase of Leishmania i. chagasi, can integrate vaccines and specific diagnosis assays for visceral leishmaniasis (VL). However, a problem on the purification of proteins expressed in E. coli is the presence of endotoxins (LPS), natural compound of gram-negative bacterial expression systems, which triggers immune response in human body and interacts with the proteins impairing possible chromatography steps. To solve this problem, Aqueous Two-phase Systems (ATPS) can be employed with the advantages of eliminate clarification steps on the whole process, indeed it also concentrates the molecule of interest and reduces the concentration of LPS, preparing the product for a more efficient adsorption in the following steps. Thus, the present work aimed evaluate ATPS based on Polyethylene glycol (PEG 1500) /Salt, Ethanol/Salt (K2HPO4 and (NH4)2SO4) and Acetonitrile/Dextrose on the partial purification of antigen 503 expressed in recombinant E. coli M15 and simultaneous removal of LPS. For that, firstly, binodal curves of these systems were constructed by cloud point titration method at room temperature (25 ± 2 ºC) in order to determine the concentrations of each evaluated system. The parameters of the equation purposed by Merchuk were calculated by these experimental data and the Tie-Line Lengths (TLL) were obtained. When 20% of cell homogenate from E. coli was applied, the system which exhibited the best results was 30% PEG 1500 and 10% K2HPO4 (m/m) achieving 116,96% of recuperation and 1,55 of purification factor (assay P3). The removal of endotoxins was promising for all the systems evaluated, as it was kept above 90,0%. The assay P3 also stood out for the LPS removal, being able to remove 99,90%. Thus, ATPS can be a precedent step to the chromatography for the removal of high LPS concentration and grow the purity of recombinant proteins from E. coli.

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Coorientadora: Profa. Dra. Gleyce Oliveira Silva / Banca : Eduardo Bresciani / Banca : Aleteia Massula de Melo Fernandes / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o comportamento biológico celular da N-Acetilcisteína (NAC), diante da estimulação ou não pelo LPS bacteriano. Foram utilizados fibroblastos do ligamento periodontal, que ficaram em contato por 48 horas com as substâncias testadas: NAC, Hidróxido de cálcio p.a. (HC), Lipopolissacarídeo de Escheria Coli (LPS), NAC + LPS e HC + LPS. Para os grupos NAC + LPS, HC + LPS e LPS, as células foram estimuladas com 2µg/mL de LPS por 24 horas, previamente aos tratamentos descritos. Foram realizados os testes biológicos de viabilidade celular (XTT), Espécies Reativas de Oxigênio (ROS), Elisa (para as citocinas IL-6, IL-8, IL-10, IL-1β e TNF-α) e Micronúcleo (MNT). Os dados foram analisados estatisticamente pela análise descritiva e pelos testes ANOVA e Kruskall Wallis, seguido do teste Dunn (p˂0.05) para os testes de XTT, ROS e MNT, e para o teste Elisa foi realizado cálculo das médias e desvio padrão. Os resultados obtidos mostraram que NAC teve um bom comportamento, frente à agressão provocada pelo LPS, quanto à produção de ROS. HC apresentou maior viabilidade celular que NAC, embora NAC não tenha apresentado citotoxicidade. Em relação à expressão das citocinas, NAC foi capaz de reduzir o potencial inflamatório do LPS quando da análise do TNF- α e IL-1β. NAC foi capaz de reduzir a genotoxicidade do LPS, como mostrado pelo teste MNT. Concluiu-se que NAC apresentou um comportamento biológico satisfatório, pela viabilidade celular dos fibroblast... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / ABSTRACT The purpose of this study was to evaluate in vitro the action of N-Acetylcysteine (NAC) and calcium hydroxide (CH) on biological activity, either without or with LPS stimulation in periodontal ligament fibroblasts (PDLF) cells. PDLF were placed in contact with NAC, CH, NAC + LPS, LPS and CH + LPS for 48 hours. PDLF were stimulated by bacterial LPS for 24 hours in NAC + LPS, LPS and CH + LPS groups, before the substances described above are applied. The LPS and NAC effect on cell viability was measured using a XTT test. Reactive oxygen species (ROS) production was evaluated using ROS/superoxide detection kit. Inflammatory cytokines (IL-6, IL-8, IL-10, IL-1β and TNF-α) were evaluated by enzyme-linked immunosorbent (ELISA) assay. Genotoxicity was measured using micronucleus test (MNT). The means and standard deviation for all tests were calculated. Data were analyzed statistically by descriptive analysis, ANOVA and Kruskall Wallis tests, followed by Dunn test (p˂.05). CH was superior to NAC on cellular viability, although NAC was not cytotoxic. The results showed that NAC was able to reduce ROS production of LPS. NAC was able to reduce the inflammatory potential of LPS by decreasing the TNF-α and IL-1β release. NAC was able to reduce the genotoxicity of LPS. It was concluded that NAC showed a satisfactory biological activity, presenting a minimal effect on cell viability of PDLF cells and reducing ROS production and inflammatory potential provoked by LPS, and to decrease its genotoxicity / Mestre

Orientador: João Martins Pizauro Junior / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Claudinei da Cruz / Resumo: O fígado é um órgão importante no metabolismo animal, sendo responsável pelo processamento e distribuição dos nutrientes, por meio da corrente sanguínea, para os outros órgãos e tecidos do organismo. Como o fígado é responsável pela realização de vários processos de síntese e tendo em vista a escassez de informação acerca das funções das fosfatases ácida e alcalina hepáticas, o presente trabalho teve por objetivo analisar as atividades dessas enzimas envolvidas no metabolismo de fósforo de girinos de rã-touro (L. catesbeianus) durante a metamorfose, visando gerar maiores informações sobre esse período da vida do animal e obtenção de imagos sadios. A metamorfose é uma etapa crucial no desenvolvimento dos anfíbios, sendo caracterizada por uma série de eventos que possibilitam aos girinos ocuparem o ambiente terrestre. Durante a metamorfose e fase adulta terrestre, a fosfatase ácida presente no fígado atua como um indicador da atividade lisossomal, o que pode ser observado pelo aumento de sua atividade no fim do clímax metamórfico, sugerindo aumento da morte celular devido ao reaproveitamento dos nutrientes. A fosfatase alcalina hepática, uma enzima de membrana, atua como fosfomonohidrolase e na detoxificação, principalmente ésteres de fosfato gerados durante o metabolismo animal. A diminuição da atividade da fosfatase alcalina quando utilizado um substrato artificial, demonstra a queda na geração de compostos secundários, devido a não ingestão de alimentos nessa fase de vida, enquanto que a utilização de um substrato fisiológico sugere um importante papel da mesma na proteção do organismo animal. / Abstract: The liver is an important organ in animal metabolism, being responsible for the processing and distribution of nutrients through the blood system to other organs and tissues. Since the liver is responsible for various processes of synthesis and concerning the lack of information about the functions of liver acid and alkaline phosphatases, the aim of the study was to analyze the activities of these enzymes involved in phosphorus metabolism of bullfrog's tadpoles (L. catesbeianus) during metamorphosis, aiming to a better understanding about this period of life of the animal and to produce healthy juveniles. Metamorphosis is a crucial stage in amphibian's development, it is characterized by a series of events that enable tadpoles to occupy the terrestrial environment. During metamorphosis and terrestrial adult stage, the acid phosphatase present in the liver acts as an indicator of lysosomal activity, it can be observed by the increase in its activity at the end of the metamorphic climax, suggesting increased cell death due to recycling of nutrients. The liver alkaline phosphatase, a membrane bound enzyme, acts as a phosphomonohydrolase and in the detoxification of compounds, especially phosphate esters generated in animal metabolism. The decrease in alkaline phosphatase activity when an artificial substrate is used demonstrates a reduction in the generation of secondary metabolites because there is no food intake at this stage of life, on the other hand the use of a physiological substrate suggests an important role in protecting the organism. / Mestre

Orientador: Carlos Augusto Araújo Valadão / Banca: Euripedes Batista Guimarães / Banca: Guilherme de Camargo Ferraz / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Rita de Cássia Campebell / Resumo: A endotoxemia é um distúrbio grave na clínica veterinária, sendo uma das principais causas de mortalidade em equinos.Trabalhos recentes relatam a eficácia do azul de metileno na prevenção dos danos impostos pelo óxido nítrico. Este estudo foi concebido com o fito de avaliar os efeitos do azul de metileno sobre as respostas clínica, celular e bioquímica, na endotoxemia experimental em equinos. Os animais foram divididos em três grupos. LPS+AM recebeu LPS e foi tratado com 3mg/kg de azul de metileno 60 minutos após a indução da endotoxemia; LPS+NaCl também recebeu LPS e foi tratado com 3mg/kg de azul de metileno 255 minutos após a indução da endotoxemia, e NaCl+AM que recebeu NaCl e foi tratado com azul de metileno 60 minutos após a infusão do NaCl. Foram realizados exames clínicos e laboratoriais durante 12 horas em quatro momentos. Observou-se aumento de temperatura, leucopenia e aumento no fibrinogênio nos animais pré-tratados com LPS, a partir do momento 90minutos. Não foi possível afirmar se houve efeito benéfico do azul de metileno sobre a resposta dos equinos frente à endotoxemia experimental. / Abstract: Endotoxemy is a severe disturb in Veterinary Clinics and one of the most important causes of deaths in equine. Recent papers report the efficiency of methylene blue in preventing the damage caused by nitric oxide. The aim of this work was to study the effects of methylene blue in clinic, cellular and biochemistry responses in experimental endotoxemy of horses. The animals were divided in three groups. The group LPS+AM received LPS and was treated with 3mg/Kg of methylene blue 60 minutes after the induction of endotoxemy; LPS+NaCl also received LPS and was treated with 3mg/Kg of methylene blue 255 minutes after the induction of endotoxemy and NaCl+AM that received NaCl and was treated with methylene blue 60 minutes after NaCl infusion. Clinical and laboratorial exams were done in four moments during 12 hours. There was an increase in temperature levels, leucopenia and increase in fibrinogen in the animals treated with LPS, beginning within 90 minutes. It was not possible to affirm if there was any benefit in the use of methylene blue in inflammatory response of horses with induced endotoxemy. / Doutor

Orientador: Carmelinda Schmidt Unterkircher / Banca: Caio Cezar Randi Ferraz / Banca: Marcia Carneiro Valera Garakis / Resumo: A parede celular das bactérias Gram-negativas é constituída principalmente por endotoxinas, que são complexos de lipopolissacarídeos com potente ação citotóxica, liberadas durante a duplicação ou morte celular destas bactérias. Assim, mesmo após o preparo biomecânico do canal, a endotoxina pode permanecer e contribuir para a manutenção da lesão periapical, impedindo o sucesso do tratamento endodôntico. Com isso, a proposta desta pesquisa foi avaliar a efetividade de curativos intracanal na eliminação das endotoxinas presentes nos canais radiculares. Para tanto, foram utilizados 75 dentes humanos unirradiculados, que tiveram suas coroas seccionadas e o ápice cortado em 3mm, padronizando o tamanho dos espécimes em 14mm. Os dentes foram preparados biomecanicamente, seus ápices radiculares vedados com resina fotopolimerizável e as raízes impermeabillzadas externamente com um adesivo epóxi (Araldite). A seguir, os espécimes foram esterilizados e foi inoculada, no interior de sessenta canais radiculares, uma solução contendo endotoxina de Escherichia coli. Os dentes foram então divididos em 5 grupos experimentais, com 15 dentes cada. O grupo 1 recebeu como medicamento intracanal a pasta de hidróxido de cálcio, o grupo 2 recebeu uma solução contendo Polimixina B pura, o grupo 3 recebeu uma solução contendo Polimixina B associada ao sulfato de neomicina e hidrocortisona, o grupo 4 (controle positivo) não recebeu nenhum medicamento e no grupo 5 (controle negativo) não foi inoculada endotoxina. Os dentes foram mantidos em estufa a uma temperatura de 37±1°C e umidade relativa 100% durante 7 dias. Após este período, a neutralização da endotoxina foi verificada utilizando-se o método do lisado de amebócito de Limulus (Sigma) e a produção de anticorpos em cultura de linfócitos B. Os resultados obtidos com o lisado de Limulus foram submetidos à análise estatística usando o teste de... / Abstract: The cell walls of Gram-negatives bacteria contain a lipopolysaccharide complex, also called endotoxin, which may be released into the environment as blebs during bacterial cell growth or as large pieces of membrane upon cell death. Endotoxins are potent agents capable of initiating various biological responses, which include initiation of osteoclastic activity and subsequent bane resorption. The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of intracanal medicaments in the elimination of the endotoxins in the root canal. Seventy-fivefreshly extracted, single-rooted, straight human anterior teeth were used in the study. The crowns were removed and the apex cut in 3mm, standardizing the size of the specimens in 14mm. The root canals of the teeth were instrumented, and the roots apex hindered with light-cure resin. The specimens were sterilized and it was inoculated endotoxin of Escherichia coli inside sixty root canals. The teeth were divided in 5 experimental groups (15 teeth). The group 1 received as intracanal medicament the paste of calcium hydroxide, the group 2 received a solution contends Polymyxin B pure, the group 3 received a solution contends Polymyxin 8, neomycin sulfate and hydrocortisone, the group 4 (control positive) didn't receive any medicament and in the group 5 (controls negative) the endotoxin was not inoculated. The teeth were maintained in stove to a temperature of 37±1ºC and relative humidity 100% for 7 days. Alter this period, the neutralization of the endotoxin was verified being used Limulus lisate and the production of antibodies in lymphocyte B culture. The results obtained with the Limulus lisate were submitted to the statistical analysis using the test of MannWhitney and was verified that the treatments with the calcium hydroxide and with the Polymyxin B pure went effective in to neutralization of the endotoxin in the root canals. The results obtained in the lymphocyte... / Mestre

As endotoxinas são responsáveis por importantes reações sistêmicas e locais, podendo comprometer o sucesso do tratamento endodôntico. O hidróxido de cálcio, mesmo com limitações, mostra-se como opção única efetiva entre as soluções irrigadoras e as medicações intracanal na redução das endotoxinas nos túbulos dentinários. O experimento realizado avaliou a eficiência do laser de Nd:YAG frente à uma endotoxina inoculada no canal radicular pela utilização de duas cinemáticas de irradiação. Após um período de incubação, confirmada a passagem da endotoxina inoculada no canal radicular através da dentina e do cemento radicular, a irradiação foi realizada ou com cinemática oscilatória ou com cinemática helicoidal, para posterior leitura e comparação com os grupos controle. Os parâmetros utilizados na irradiação com o laser de Nd:YAG de comprimento de onda de 1064 nm foram: 100mJ, 15 Hz, 1,5 W, diâmetro do núcleo da fibra 320 ?m, fluência do pulso 124 J/cm2, largura do pulso 120 ?s e intervalo de relaxação térmica 30 s. Os dados foram comparados pelo método ANOVA, complementado pelo teste de Tukey. As concentrações de endotoxina nos espécimes dos grupos irradiados (helicoidal e oscilatório) foram similares. Além disso, elas também foram similares às dos espécimes controle negativo e significantemente menores (p=0,0271) que as do controle positivo, que não sofreram irradiação. A irradiação com laser de Nd: YAG, nas condições deste experimento é efetiva na inativação da endotoxina da dentina radicular. / The endotoxins are responsible for important systemic and local reactions that could compromise the endodontic success. The calcium hydroxide even with limitations is the only effective option among the irrigant solutions and intracanal medications on the endotoxin reduction in the dentinal tubules. This experiment evaluated the Nd:YAG laser efficacy regarding the inoculated endotoxin in the root canal with two cinematic irradiation procedures. The irradiation was accomplished using an oscillatory and helicoidal technique after an incubation period where the passage of the inoculated endotoxin inside the root canal through dentin and cement was confirmed. Following this the analysis and comparison among the groups was performed. The Nd:YAG laser (?=1064 nm) irradiation, used parameters were: 100mJ, 15 Hz, 1,5 W, core fiber diameter of 320 ?m, pulse fluency of 124 J/cm2, pulse width of 120 ?s and relaxation time interval of 30 s. The data were statistically compared by ANOVA complemented by the Tukey\'s test (p<=0,005). The endotoxin concentration at the irradiated samples, regardless the techniques applied were similar. Moreover these concentrations were also similar to those of negative controls and significantly smaller than those of positive controls that were not irratiated (p=0,0271). The Nd:YAG laser irradiation under this experiment conditions was effective on the root canal endotoxin inactivation.

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-09T19:55:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vianna_MorganaEli_D.pdf: 1593735 bytes, checksum: f9177ad362c4724b87ff726decdb4f8f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a redução microbiana e de endotoxinas após o preparo químico-mecânico (PQM) e uso de medicamentos intracanais (MI) e a susceptibilidade de algumas espécies bacterianas frente a antimicrobianos. As amostras foram obtidas de dentes com polpa necrosada e lesão periapical, em diversas etapas do tratamento. Foram utilizados meios de transporte, cultura e incubação que proporcionaram o crescimento de microrganismos anaeróbios estritos. Os microrganismos foram identificados por testes bioquímicos padronizados e as endotoxinas quantificadas pelo teste Lisado de Amebócito de Limulus (LAL). O E-test foi utilizado para avaliar a susceptibilidade dos agentes antimicrobianos: benzilpenicilina, amoxicilina, eritromicina, azitromicina, cefaclor, amoxicilina+ácido clavulânico, metronidazol e clindamicina. Os resultados mostraram que as amostras coletadas dos canais radiculares com lesão periapical apresentaram microrganismos em todos os casos, as unidades formadoras de colônia (UFC/mL) variaram de 4x105 a 2,6x106. Os microrganismos mais encontrados foram: Propionibacterium acnes, Gemella morbillorum, Actinomyces naeslundii e Eubacterium lentum. As endotoxinas estavam presentes em todas amostras iniciais, variando entre 62,93 e 214,56 UE/mL. O PQM mostrou redução de mais de 99% da microbiota e de 57% da concentração de endotoxinas. Após o uso da MI foram encontrados microrganismos em 54% dos casos, a concentração de endotoxina aumentou consideravelmente comparada ao primeiro PQM. Não houve diferenças estatísticas entre os MI testados. Os antimicrobianos mais eficazes foram a amoxicilina e amoxicilina + ácido clavulânico. Fusobacterium sp. mostraram certa resistência a eritromicina e clindamicina. Em conclusão, os resultados microbiológicos sugerem que o PQM foi responsável pela maior redução na quantidade de microrganismos e endotoxinas. A amoxicilina ou amoxilina + ácido clavulânico devem ser as medicações de primeira escolha quando necessário o emprego de um agente antimicrobiano via sistêmica, para pacientes alérgios aos beta-lactâmicos a azitromicina seria uma alternativa / Abstract: The aim of the present study was to evaluate in vivo the microbial and endotoxins load after chemo-mechanical preparation (CMP) and after the use of intracanal medications (ICM), it was also aimed to evaluate in vitro the antimicrobial suscetibility from some microrganisms isolated. Samples were colected of single root teeth containing necrotic pulp tissue and periapical bone lesions, in several stage of the endodontic treatment. Transport medium, culture and incubation in favour of strict anaerobic microorganisms to grow were used. Microorganisms were identifyed by biochemichal tests and endotoxins quantified by Limulus Amebocite lysate (LAL) test. Antimicrobial susceptibility was evaluated by E-test method using the following antibiotics: benzylpenicillin, amoxicillin, amoxicillin + clavulanate, erythromycin, azithromycin, cephaclor, metronidazole, and clindamycin. Results showed that microorganisms were present in all teeth containing necrotic pulp tissue and periapical bone lesion, the colony forming unit (CFU/mL) ranged from 4x105 to 2.6x106. The microorganisms most frequent isolated were Propionibacterium acnes, Gemella morbillorum, Actinomyces naeslundii and Eubacterium lentum. Endotoxin was also present in all initial samples, ranging from 62.93 to 214.56 UE/mL. Post CMP samples showed more than 99% reduction of cultivable microbiota and 57% (mean value) of endotoxin concentration. After 7 days of ICM, residual microorganisms were still found in 54.1% of the cases and the endotoxin concentration increased considerably compared to the first CMP. No statistically significant differences among the intracanal medicament groups were found. In conclusion, the microbiological results sugested that CMP was responsible for the majority of the microbial and endotoxin reduction. Amoxicilin and amoxicilin plus clavulanic acid were the best antimicrobial agents, as all bacterial strains tested were susceptible to their action. Some Fusobacterium spp. showed to be resistant to eritromycin. In conclusion, the microbiologic results suggest that chemo-mechanical preparation was responsable for mainly microbial and endotoxin reduction. Amoxicilin and amoxicilin puls clavulanic acid are the first choice when required to use a systemic antimicrobial agent, as alternative to alergic patients the azitromicin is an option / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

A injeção de doses repetidas de lipopolissacarídeo (LPS) resulta em atenuação da resposta febril, que é chamada de tolerância a endotoxina. Esta resposta já foi caracterizada em ratos por meio de injeções sistêmicas. No presente estudo, nós testamos a hipótese que a tolerância a endotoxina ocorre localmente nos tecidos periodontais de proteção de ratos e que o óxido nítrico participa desta tolerância. Ratos machos Wistar foram injetados nos tecidos periodontais de proteção com solução salina ou LPS de Escherichia coli na dose de 100 &mu;g/kg em 3 dias consecutivos com 24 horas de intervalo. A temperatura corporal (Tc) foi medida por meio de datalogger 1 h antes e 6 h após as injeções. Outro grupo experimental recebeu injeção intracerebroventricular (i.c.v.) de L-NMMA (500 &mu;g/rato) 30 min antes da injeção de LPS no terceiro dia. Além disto, foi realizada a imunohistoquímica para proteína Fos para verificar a ativação neuronal na Área Pré-óptica do hipotálamo (POA) e no subnúcleo caudal do núcleo trigeminal espinhal no primeiro dia (animais não tolerantes) e terceiro dia (animais tolerantes) do tratamento com LPS, e também em animais que receberam L-NMMA ou salina i.c.v. no terceiro dia, antes do LPS. No dia, 1 após a injeção de LPS, foi observado uma resposta febril polifásica, no dia 2 houve uma alteração no padrão desta resposta e no dia 3 a resposta febril foi completamente abolida, caracterizando o desenvolvimento de tolerância a endotoxina na cavidade oral. Esta tolerância foi revertida com o pré-tratamento com L-NMMA no terceiro dia e os animais voltaram a apresentar febre. A imunohistoquímica detectou um aumento na expressão da proteina Fos no subnúcleo caudal do núcleo trigeminal espinhal e na POA no dia 1 em animais que receberam LPS, aumento este que foi abolido no dia 3 de tratamento com LPS. Da mesma forma que observamos a reversão do mecanismo de tolerância com o desenvolvimento da resposta febril no terceiro dia, o pré-tratamento com L-NMMA aumentou o número de células Fos positivas em ambas às áreas estudadas. Estes resultados indicam que ratos desenvolvem tolerância ao LPS nos tecidos periodontais e que o óxido nítrico participa desse mecanismo de tolerância induzido por LPS no periodonto de ratos. / Systemic injection of repeated doses of Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) results in attenuation of the febrile response, i.e. endotoxin tolerance, which has been well characterized systemically in rats. In the present study, we tested the hypothesis that endotoxin tolerance also occurs after repeated local injection of LPS into periodontal protection tissue of rats and that nitric oxide plays a role in this mechanism. Male Wistar rats were given a gingival injection of sterile saline or LPS at a dose of 100 &mu;g/kg on three consecutive days with 24 hours break. Body core temperature (Tb) was measured with a miniature datalogger 1 hour before and 6 hours after the injections. Another group received L-NMMA (500 &mu;g/rat) intracerebroventricular (i.c.v.), 30 minutes before LPS, in the third day. Besides it, was performed the Fos immunohistochemistry to verify the neuronal activation in the preoptic area of hypothalamus (POA) and in the subnucleus caudalis of spinal trigeminal nucleus in the first day (non-tolerant animals), in the third day of LPS treatment (tolerant animals) and in the animals that received L-NMMA or saline i.c.v. in the third day, before LPS. On day one we observed a polyphasic febrile response after LPS injection. On day two this response was sensitized and on day three the febrile response was completely abolished, characterizing the development of the endotoxin tolerance in the oral cavity. This tolerance was reverted with the pretreatment with L-NMMA in the third day and the animals develop the febrile response. The immunohistochemistry detected an increase in Fos protein expression in the subnucleus caudalis of spinal trigeminal nucleus and in the POA on day one in animals that received LPS and a reduction in Fos expression was observed on day three. Similarly to the reversion of the tolerance mechanism by the development of the febrile response in the third day, the pretreatment with L-NMMA, increased the number of Fos positive cells in both studied areas. These results indicate that rats develop endotoxin tolerance in periodontal tissues and that nitric oxide plays a role in this mechanism.