Orientador: Marcia Carneiro Valera / Banca: Giulio Gavini / Banca: Cláudio Antônio Talge Carvalho / Resumo: A proposta deste trabalho foi detectar microrganismos e avaliar in vivo a ação do extrato glicólico de gengibre 20% (GENG), do hipoclorito de sódio 1% (NaOCl), da clorexidina gel 2% (CLX) como soluções irrigadoras e da medicação intracanal (MIC) de hidróxido de cálcio sobre microrganismos e endotoxinas em dentes com necrose pulpar e lesão periapical. Para isso 36 pacientes portadores de dente com necrose pulpar e lesão periapical visível radiograficamente foram submetidos ao tratamento endodôntico e divididos em 3 grupos (n=12), de acordo com a substância química auxiliar utilizada durante o preparo biomecânico: GENG; NaOCl ou CLX intercalado com solução salina fisiológica. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular com cones de papel absorvente após a abertura do dente, após a instrumentação e, após 14 dias da ação da MIC. Para todas as coletas foram realizados os seguintes testes: a) avaliação da atividade antimicrobiana pela contagem de UFC/mL e método molecular - PCR e; b) análise da quantidade de endotoxina verificada pelo lisado de amebócitos de Limulus. Os resultados foram submetidos à análise descritiva e estatística de Kruskal-Wallis e teste de Dunn. Os resultados mostraram presença de DNA bacteriano em todas as coletas, sendo que Parvimonas micra foi a espécie mais frequente. A instrumentação com as substâncias testadas reduziram significativamente microrganismos e endotoxinas dos canais radiculares. A utilização da MIC não foi capaz de potencializar os efeitos antimicrobianos nem sobre endotoxinas. Pôde-se concluir que o preparo biomecânico com GENG foi eficiente tanto em reduzir microrganismos quanto endotoxinas dos canais radiculares. A MIC de Ca(OH)2 não foi capaz de potencializar a neutralização de endotoxinas após PBM / Abstract: The purpose of this study was to detect microorganisms and to evaluate in vivo the action of 20% ginger glycolic extract (GENG), 1% sodium hypochlorite (NaOCl) and 2% chlorhexidine gel (CLX) as irrigating solutions and intracanal medication (ICM) of calcium hydroxide on microorganisms and endotoxins in teeth with necrotic pulp and periapical lesions. Thirty six patients with tooth with pulp necrosis and radiographically visible periapical lesion were submitted to endodontic treatment and divided into 3 groups (n = 12), according to the auxiliary chemical substance used during the biomechanical preparation: GENG, NaOCl or CHX interspersed with saline solution. Samples of the root canal were taken with paper cones immediately after exposure of the canal, immediately after instrumentation and 14 days after MIC. For all samples were performed the following tests: a) evaluation of antimicrobial activity by counting the CFU / mL and molecular method - PCR and b) quantification of endotoxins verified by the Limulus amoebocyte lysate. The results showed the presence of bacterial DNA in all samples, and Parvimonas micra was the most frequent species. The instrumentation with all substances tested reduced significantly microorganisms and endotoxins from root canals. The use of ICM was not able to potentiate the antimicrobial effects either on endotoxins. It was concluded that biomechanical preparation with glycolic extract of ginger was effective in reducing microorganisms and endotoxins from root canals with no significant differences from NaOCl or chlorhexidine. The Ca(OH)2 ICM could not enhance the neutralization of endotoxins after biomechanical preparation / Mestre

O presente estudo tem por objetivo principal avaliar as alterações funcionais precoces de mitocôndrias hepáticas de ratos wistar submetidos ao estímulo de sepse através da técnica de ligadura cecal e punção (cecal ligation and puncture-CLP) e indução de tolerância ao lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli. As mitocôndrias exercem papel na alteração do metabolismo celular de pacientes sépticos. Os objetivos do presente trabalho foram: (1) padronizar a técnica de indução a tolerância para ratos wistar com LPS de E. coli (2) avaliar a função mitocondrial fosforilativa e oxidativa; (3) quantificar DNA mitocondrial em tecido hepático de animais submetidos à CPL e tolerância; (4) verificar a expressão dos genes responsáveis pela biogênese mitocondrial e replicação do DNA mitocondrial: nuclear respiratory factor (NRF-1), mitochondrial transcription factor A (TFAM) e peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha (PGC-1alfa); (5) avaliar a função dos complexos respiratórios I e IV. Os resultados encontrados no presente estudo revelaram que: (a) a taxa de mortalidade dos animais submetidos a tolerância foi de 10% quando submetidos à dose letal de LPS, enquanto a taxa de mortalidade dos animais controle foi de 100% quando submetidos à dose letal de LPS; (b) observou-se que o grupo do controle respiratório que recebeu doses controladas de LPS e foi submetido à CLP apresentou razão igual ao grupo Controle, sugerindo que a fosforilação oxidativa se manteve igual ao basal, enquanto o grupo que foi submetido ao procedimento de CLP sem indução a tolerância apresentou piora da razão do controle respiratório em relação ao grupo controle; (c) a quantificação de DNA mitocondrial mostrou-se maior nos animais submetidos a CLP sem prévia indução a tolerância, com igual aumento da expressão dos fatores de biogênese mitocondrial em relação aos demais grupos; (d) houve diferença significativa na avaliação da funcionalidade dos complexo I, porém o complexo IV se manteve igual em todos os grupos. Concluiu-se que a indução a tolerância altera positivamente a função mitocondrial em animais submetidos à CLP / The aim of this study was to evaluate the early functional alterations of hepatic mitochondria of wistar rats submitted to the stimulation of sepsis through the technique of cecal ligation and puncture (CLP) and induction of tolerance to lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli. Mitochondria play a role in altering the cellular metabolism of septic patients. The objectives of the present study were: (1) to standardize the tolerance induction technique for wistar rats with E. coli LPS (2) to evaluate the mitochondrial phosphorylation and oxidative function; (3) quantify mitochondrial DNA in hepatic tissue of animals submitted to CPL and tolerance; (4) to verify the expression of genes responsible for mitochondria biogenesis and mitochondrial DNA replication nuclear mitochondrial biogenesis (NRF-1), mitochondrial transcription factor A (TFAM) and peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha (PGC-1alpha); (5) to evaluate the function of respiratory complexes I and IV. The results found in the present study revealed that: (a) the mortality rate of the animals submitted to tolerance was 10% when submitted to the lethal dose of LPS, whereas the mortality rate of the control animals was 100% when submitted to the lethal dose of LPS; (B) it was observed that the group receiving controlled doses of LPS and submitted to CLP presented a ratio equal to the control group, suggesting that oxidative phosphorylation remained the same at baseline, whereas the group that underwent CLP procedure without induction of tolerance presented worsening of the respiratory control ratio in relation to the control group; (C) the mitochondrial DNA quantification was higher in the animals submitted to CLP without prior tolerance induction, with an equal increase in mitochondrial biogenesis factors expression in relation to the other groups; (D) there was significant difference in the evaluation of the functionality of complexes I, but no difference in complex IV in all groups. It was concluded that induction of tolerance positively alters mitochondrial function in animals submitted to CLP

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-17Bitstream added on 2014-06-13T20:21:06Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_la_dr_arafcf.pdf: 878561 bytes, checksum: 1b0302d7b78c8400814eb99c68c33070 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O choque séptico, que é a maior causa de morte no Brasil e no Mundo, consequência de trauma infeccioso, a indução da óxido nítrico sintase (NOS) do endotélio vascular por produtos originados da parede de bactérias é considerado a causa, mas também parte da ativação de mecanismos de defesa do hospedeiro contra a infecção. Uma pronunciada hipotensão seguida de redução da reatividade vascular a mediadores vasoconstritores é determinada pela intensa liberação de mediadores relaxantes, como o próprio óxido nítrico (NO), que podem progredir para a morte do hospedeiro. Em ratos, este fenômeno é igualmente observado. O quadro de choque séptico ou Sepsis pode ser reproduzido pela injeção parenteral de endotoxina de várias bactérias Gram-negativas, como a endotoxina de E. coli (Etx), que produz intensa hipotensão aguda e prolongada, com pronunciada hiporreatividade a angiotensina II (AII)... / In septic schock that is major cause of death folowing in infeccious trauma, the induction of nitric oxide sinthase (NOS) of vascular endothelium by bacterial products is considered to be part of the defense mechanism of hosp against infection. But the hypotension and vascular hyporeactivity determinated by intense release of relaxing factors essentially from endothelial cells, in response to substances, released from walls bcteria which can progress to death of hosp. The hyporreactivity to angiotensin II (AII) is observed in Etx-induced hypotension. The current study show that the vasoconstriction response of AII in rats is reversed by an inhibitor of NOS (N NLA) in control rats, but in adrenalectomized rats these inhibitor did not reversed the hyporreactivity. The dexamethasone impaired the protective effect of N NLA against Etx-induced hyporreactivity . In adrenalectomized rats the N NLA not reverts vascular hyporreactivity to AII. The involvement of antiinflammatory nonsteroids drugs (diclofenac [Diclo] and nimesulide [Nime]) not was involved in reversion of vascular hyporreactivity to AII. Dextran injection, produced hypotension but not produced vascular hyporreactivity to AII. These mechanism is not clarified...(Complete abstract, access undermentioned eletronic address)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6524.pdf: 836310 bytes, checksum: 7abc8c7790ee59b230df28eb660ac2b7 (MD5) Previous issue date: 2009-12-17 / Universidade Federal de Sao Carlos / Lipopolysaccharide (LPS), an endotoxin derived from gram-negative bacteria wall, triggers a conjunct of systemic and behavioral responses grouped under the name of sickness behavior. Several works show the inhibition of ingestive behavior in animals with activated immune system by systemic LPS. The aim of this work was demonstrate that LPS inhibit sodium appetite in lower doses than those that cause lethal effects and that LPS inhibitory action on sodium appetite involves α2 adrenergic mechanisms. Were produced three works where we show the LPS effects on sodium appetite, on arterial pressure and in different kinds of thirst. In the first work, we showed that LPS inhibited sodium appetite and only higher doses produced thirst inhibition, besides reduced urinary volume and natriuresis, without alterations on cardiovascular parameters in FURO/CAP-treated rats. LPS abolished intracellular thirst e reduced urinary volume and natriuresis in 2M NaCl gavage-treated animals. LPS also reduced thirst in FURO-treated animals. These results suggest that LPS has a preferential effect on sodium appetite and on thirst intracellular thirst. In the second work we showed that LPS reduce sodium appetite and that this inhibition is abolished by previous treatment with yohimbine ip, an α2 adrenoceptor antagonist in sodium depleted rats. Yohimbine when combined with LPS produced hypotension in sodium depleted rats. LPS reduced gastric empty in sodium depleted rats and this effect wasn‟t abolished by previous treatment with yohimbine. The systemic effects do not explain the inhibition on sodium appetite and we can suggest that LPS exert an inhibitory effect on sodium appetite probably mediated by central α2 adrenoceptors. In the third work we confirmed that LPS inhibit sodium appetite and that central α2 adrenergic ways mediated this response because RX-821002, an α2 adrenoceptor antagonist injected icv, abolished sodium appetite inhibition induced by systemic LPS in sodium depleted rats without produced alterations in cardiovascular parameters. All results exposed with these three works suggest that LPS inhibit sodium appetite and this inhibition is mediated by central α2 adrenoceptors. / Lipopolissacarídeo (LPS), uma endotoxina derivada da parede da bactéria gram-negativa, desencadeia um conjunto de respostas sistêmicas e comportamentais, que se agrupam sob a denominação de comportamento de doença (sickness behavior). Grande número de trabalhos mostra a inibição de comportamento ingestivo no animal que tem ativação do sistema imune induzido por injeção sistêmica de LPS. O objetivo deste trabalho foi demonstrar que o LPS inibe o apetite ao sódio em doses menores daquelas que causam os efeitos letais desta endotoxina e que a ação inibitória do LPS sobre o apetite ao sódio envolve mecanismos adrenérgicos α2. Foram produzidos três trabalhos onde mostramos os efeitos do LPS no apetite ao sódio, na pressão arterial e em diferentes tipos de sede. No primeiro trabalho mostramos que LPS inibiu o apetite ao sódio e apenas as doses mais altas produziram inibição na sede, além de reduzir volume urinário e natriurese, sem alterar os parâmetros cardiovasculares em ratos tratados com o protocolo FURO/CAP. LPS aboliu sede intracelular e reduziu volume urinário e natriurese em ratos que receberam gavagem de NaCl 2M. A sede também foi reduzida pelo tratamento com LPS em ratos tratados com FURO apenas. Esses resultados sugerem que o LPS tem efeito preferencial sobre o apetite ao sódio e sobre a sede intracelular. No segundo trabalho mostramos que LPS reduz o apetite ao sódio e que essa inibição é abolida se há tratamento prévio com ioimbina ip, um antagonista de receptores adrenérgicos α2 em ratos depletados de sódio. Esse mesmo antagonista quando associado com LPS produz hipotensão em ratos depletados de sódio. LPS diminuiu a taxa de esvaziamento gástrico em animais depletados de sódio e esse efeito não foi abolido pelo prévio tratamento com ioimbina. Devido ao fato desses efeitos sistêmicos do LPS não explicarem a inibição no apetite ao sódio podemos sugerir que o LPS exerce um efeito inibitório no apetite ao sódio provavelmente mediado por receptores adrenérgicos α2 centrais. No terceiro trabalho confirmamos que o LPS inibe o apetite ao sódio e que vias centrais noradrenérgicas α2 centrais medeiam essa inibição pois o RX-821002, um antagonista de receptores adrenérgicos α2, injetado icv, também aboliu a inibição no apetite ao sódio induzida pelo LPS sistêmico em ratos depletados de sódio sem produzir alterações nos parâmetros cardiovasculares. Esse conjunto de resultados expostos por meio destes três trabalhos sugere que o LPS inibe o apetite ao sódio e essa inibição é mediada por receptores adrenérgicos α2 de origem central.

Resumo: O choque séptico, que é a maior causa de morte no Brasil e no Mundo, consequência de trauma infeccioso, a indução da óxido nítrico sintase (NOS) do endotélio vascular por produtos originados da parede de bactérias é considerado a causa, mas também parte da ativação de mecanismos de defesa do hospedeiro contra a infecção. Uma pronunciada hipotensão seguida de redução da reatividade vascular a mediadores vasoconstritores é determinada pela intensa liberação de mediadores relaxantes, como o próprio óxido nítrico (NO), que podem progredir para a morte do hospedeiro. Em ratos, este fenômeno é igualmente observado. O quadro de choque séptico ou Sepsis pode ser reproduzido pela injeção parenteral de endotoxina de várias bactérias Gram-negativas, como a endotoxina de E. coli (Etx), que produz intensa hipotensão aguda e prolongada, com pronunciada hiporreatividade a angiotensina II (AII)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In septic schock that is major cause of death folowing in infeccious trauma, the induction of nitric oxide sinthase (NOS) of vascular endothelium by bacterial products is considered to be part of the defense mechanism of hosp against infection. But the hypotension and vascular hyporeactivity determinated by intense release of relaxing factors essentially from endothelial cells, in response to substances, released from walls bcteria which can progress to death of hosp. The hyporreactivity to angiotensin II (AII) is observed in Etx-induced hypotension. The current study show that the vasoconstriction response of AII in rats is reversed by an inhibitor of NOS (N NLA) in control rats, but in adrenalectomized rats these inhibitor did not reversed the hyporreactivity. The dexamethasone impaired the protective effect of N NLA against Etx-induced hyporreactivity . In adrenalectomized rats the N NLA not reverts vascular hyporreactivity to AII. The involvement of antiinflammatory nonsteroids drugs (diclofenac [Diclo] and nimesulide [Nime]) not was involved in reversion of vascular hyporreactivity to AII. Dextran injection, produced hypotension but not produced vascular hyporreactivity to AII. These mechanism is not clarified...(Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Orientador: Maria Teresa Pepato / Coorientador: José Francisco Fracasso / Banca: José Ranali / Banca: Neoclair Molina / Banca: Wilson Abrão Saad / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Doutor

Os mini-implantes ortodônticos vem sendo amplamente utilizados na prática clínica como dispositivos de ancoragem. No entanto, há casos em que ocorre sua perda durante o tratamento. Inúmeros aspectos tem sido analisados com o intuito de detectar as causas do insucesso, porém estas ainda não estão totalmente esclarecidas. Portanto, utilizando-se dois grupos de mini-implantes - com estabilidade (sucesso) e sem estabilidade (falha) -, os objetivos do presente estudo in vivo foram: 1) avaliar a contaminação microbiana, empregando sondas de DNA para 40 espécies de bactérias, por meio da técnica de biologia molecular checkerboard DNA-DNA hybridization; 2) quantificar a endotoxina bacteriana presente nos mini-implantes dos dois grupos por meio do teste Limulus Amebocyte Lysate ; e 3) quantificar as citocinas pró-inflamatórias IL-1&alpha;, IL-6, IL-17 e TNF-&alpha; e proteínas marcadoras da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG) por meio da técnica real-time polymerase chain reaction. Dezesseis pacientes de ambos os sexos (11-49 anos) em tratamento ortodôntico com aparelho corretivo e mini-implantes foram selecionados, sendo obtidos 19 miniimplantes com estabilidade e 10 mini-implantes sem estabilidade. O tempo médio de permanência na boca foi de 23,8 meses para os mini-implantes estáveis e 6,7 meses para os mini-implantes sem estabilidade. Foram utilizados mini-implantes da marca Neodent, com 1,6mm de diâmetro e com 7,0 ou 9,0 mm de comprimento, colocados na maxila e/ou mandíbula. Todos os mini-implantes foram instalados e removidos pelo mesmo cirurgião. No momento da remoção, foram coletados os miniimplantes e amostras de gengiva ao redor dos mesmos. Os mini-implantes foram processados para a detecção dos micro-organismos e para a quantificação da endotoxina bacteriana. As amostras de gengiva foram processadas para a quantificação das citocinas pró-inflamatórias e proteínas marcadoras da osteoclastogênese. Os resultados obtidos foram analisados por meio do teste nãoparamétrico de soma de postos de Wilcoxon, considerando-se os conglomerados, utilizando o software SAS. O nível de significância adotado foi de 5%. Todas (100%) as 40 espécies de microorganismos foram observadas em ambos os grupos de mini-implantes, com diferentes porcentagens de ocorrência. Não foi possível observar diferença entre os grupos com relação aos complexos microbianos (azul, roxo, amarelo, verde, laranja, vermelho e outras espécies). Também não foi possível observar diferença na quantificação de endotoxina e das citocinas e marcadores da osteoclastogênese (p>0,05), com exceção da IL-6 (p<0,05). Baseado nos resultados obtidos, pode-se concluir que a contaminação microbiana e a quantidade de endotoxina nos mini-implantes, assim como a expressão das citocinas pró-inflamatórias IL-1&alpha;, IL-17 e TNF-&alpha; e dos marcadores da osteoclastogênese RANK, RANKL e OPG no tecido gengival circundante não atuaram como fatores responsáveis pela perda da estabilidade dos mini-implantes e que a maior expressão da citocina próinflamatória IL-6 pode estar diretamente relacionada à perda da estabilidade dos mini-implantes, sugerindo-se estudos adicionais. / Orthodontic mini-implants have been widely used in clinical practice as anchorage devices. However, their loss may occur during the treatment. Several aspects have been investigated to identify the causes of failure, but they are not yet completely elucidated. Therefore, using two groups of miniimplants - stable and unstable/loose - the objectives of this in vivo study were: 1) to evaluate the microbial contamination, using DNA probes for 40 bacterial species by the checkerboard DNA-DNA hybridization biomolecular technique; 2) to quantify the bacterial endotoxin present in both groups of mini-implants by the Limulus Amebocyte Lysate assay; and 3) to quantify the proinflammatory cytokines IL-1&alpha;, IL-6, IL-17 and TNF-&alpha; and the osteoclastogenesis marker proteins (RANK, RANKL and OPG) by real-time polymerase chain reaction technique. Sixteen patients of both sexes (11 to 49 years old) under orthodontic treatment with corrective appliance and mini-implants were selected, obtaining 19 stable mini-implants and 10 unstable/loose mini-implants. The mean time of permanence in the mouth was 23.8 months for stable mini-implants and 6.7 months for unstable/loose mini-implants. The mini-implants (1.6 mm diameter x 7.0 or 9.0 mm long; Neodent) were placed in the maxilla and/or mandible. All mini-implants were placed and removed by the same surgeon. At the moment of removal, the mini-implants and periimplant gingival tissue samples were collected. The mini-implants were processed for detection of microorganisms and quantification of bacterial endotoxin, while the gingival tissue samples were processed for quantification of proinflammatory cytokines and osteoclastogenesis protein markers. The results were analyzed statistically by the nonparametric Wilcoxon rank-sum test, considering the conglomerates, using SAS software. A significance level of 5% was adopted for all analyses. All (100%) 40 microbial species were observed in both groups of mini-implants, with different percentages of occurrence. No differences could be observed between the groups with respect to the microbial complexes (blue, purple, yellow, green, orange, red and other species). There was no significant difference either in the quantification of endotoxin and cytokines and osteoclastogenesis markers (p>0.05), except for IL- 6 (p<0.05). Based on the obtained results, it may be concluded that neither the microbial contamination and amount of endotoxin in mini-implants, nor the expression of proinflammatory cytokines IL-1&alpha;, IL-17 and TNF-&alpha; and osteoclastogenesis markers RANK, RANKL and OPG in the periimplant gingival tissue acted as factors responsible for the loss of stability of the mini-implants, and that the higher expression of the IL-6 proinflammatory cytokine may be directly associated with the loss of stability of the mini-implants, suggesting additional studies.

Empregando a técnica de biologia molecular Checkerboard DNA-DNA Hybridization e o teste Limulus Amebocyte Lysate, os objetivos do presente estudo clínico randomizado in vivo foram avaliar, em bráquetes ortodônticos metálicos: 1) A presença de 16 espécies de microrganismos periodontopatogênicos Gram-negativos pertencentes aos complexos laranja e vermelho, por meio de sondas de DNA; 2) A quantidade de endotoxina bacteriana presente; e 3) A eficácia da utilização do gluconato de clorexidina a 0,12%, sob a forma de bochechos, na redução da contaminação pelas 16 espécies de microrganismos periodontopatogênicos Gram-negativos e na redução da quantidade de endotoxina bacteriana. Participaram do estudo 33 pacientes de 11 a 33 anos de idade, em tratamento com aparelho ortodôntico fixo, nos quais foram colocados randomicamente 3 bráquetes metálicos novos nos pré-molares. Os pacientes do Grupo Controle (n=17) fizeram 2 bochechos semanais com solução placebo, durante 30 dias. Os pacientes do Grupo Experimental (n=16) fizeram bochechos com solução à base de gluconato de clorexidina a 0,12% (Periogard®), da mesma forma que o grupo Controle. Decorridos 30 dias, os 3 bráquetes foram removidos de cada paciente e processados para a detecção dos microrganismos, pela técnica Checkerboard DNA-DNA Hybridization, e para a quantificação da endotoxina bacteriana por meio do teste Limulus Amebocyte Lysate. Os resultados obtidos foram analisados por meio dos testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis, Mann-Whitney e pós-teste de Dunn, utilizando os softwares SAS e Graphpad Prism. O nível de significância adotado foi de 5%. De acordo com os resultados obtidos, observou-se que todos os bráquetes dos pacientes do Grupo Controle encontravam-se densamente contaminados pelos microrganismos avaliados. Nesse grupo, as espécies bacterianas do complexo laranja apresentaram-se em maiores quantidades, em relação às espécies do complexo vermelho (p<0,01). A mediana da quantidade de endotoxina para este grupo foi de 0,6673 EU/ml. Quando comparado ao grupo Controle, observou-se que o número total de microrganismos no grupo Experimental foi estatisticamente menor, com mediana de 29.150.000 no grupo Controle e de 13.130.000 no grupo Experimental (p=0,01). Quando os microrganismos foram avaliados por complexos, foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos Controle e Experimental para o complexo laranja (p=0,04), com contagens menores de bactérias após os bochechos com clorexidina. Por outro lado, observou-se que a quantidade de endotoxina no grupo Experimental foi maior, com mediana de 1,2199 EU/ml (p=0,02). Concluiu-se que os bochechos com solução de gluconato de clorexidina a 0,12% podem ser úteis, na prática clínica, com a finalidade de reduzir os níveis de microrganismos periodontopatogênicos Gram-negativos, em pacientes portadores de aparelhos ortodônticos fixos. No entanto, em função do aumento da quantidade de endotoxina bacteriana após o uso dos bochechos com clorexidina, estudos adicionais são necessários com a finalidade de desenvolver procedimentos clínicos ou agentes antimicrobianos que tenham ação sobre a endotoxina presente nos bráquetes metálicos. / Using the biomolecular technique Checkerboard DNA-DNA Hybridization and the Limulus Amebocyte Lysate (LAL) assay, the purposes of the present randomized clinical study were to evaluate in orthodontic metallic brackets: 1) The presence of 16 Gram-negative periodontopathogenic microbial species of the orange and red complexes by using DNA probes; 2) The amount of bacterial endotoxin; and 3) The efficacy of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes in reducing the contamination by the evaluated microbial species and the amount of bacterial endotoxin. Thirty-three 11-33-year-old patients undergoing orthodontic treatment with fixed appliances were enrolled in the study and all subjects had 3 new metallic brackets bonded to different premolars in a randomized manner. The patients in the Control group (n=17) were instructed to use a placebo mouthwash twice a week, while those in the Experimental group (n=16) were instructed to use a 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwash (Periogard®) in the same way. After 30 days, the 3 brackets were removed from each patient and processed for detection of the microorganisms by the Checkerboard DNADNA hybridization technique, and for quantification of bacterial endotoxin by the LAL assay. The data were analyzed statistically by the non-parametric Mann-Whitney, Kruskal-Wallis and Dunn\'s post tests using SAS and GraphPad Prism softwares. A significance level of 5% was set for all analyses. The brackets of the patients in the Control group were densely contaminated by the evaluated microbial species. In this group, the number of bacterial species of the orange complex was larger compared to the number of bacterial species of the red complex (p<0.01). The median of the amount of bacterial endotoxin for this group was 0.6673 EU/ml. The Experimental group had a significantly smaller number of microorganisms than the Control group (median 13,130,000 versus 29,150,000; p=0.01). When the microorganisms were analyzed by complex, there was statistically significant difference between the Control and Experimental groups for the orange complex (p=0.04) with smaller counts of bacteria after use of chlorhexidine oral rinses. On the other hand, there was a greater amount of bacterial endotoxin in the Experimental (median of 1,2199 EU/ml; p=0.02). In conclusion, 0.12% chlorhexidine oral rinse can be useful in the clinical practice to reduce the levels of Gram-negative periodontopathogenic microorganisms in patients with fixed orthodontic appliances. Considering the increase in the amount of bacterial endotoxin after use of chlorhexidine oral rinses, further research is necessary to develop clinical procedures or antimicrobial agents with action against the endotoxin in the metallic brackets

Empregando a técnica de biologia molecular Checkerboard DNA-DNA Hybridization e o teste Limulus Amebocyte Lysate, os objetivos do presente estudo clínico randomizado in vivo foram avaliar, em bráquetes ortodônticos metálicos: 1) A presença de 16 espécies de microrganismos periodontopatogênicos Gram-negativos pertencentes aos complexos laranja e vermelho, por meio de sondas de DNA; 2) A quantidade de endotoxina bacteriana presente; e 3) A eficácia da utilização do gluconato de clorexidina a 0,12%, sob a forma de bochechos, na redução da contaminação pelas 16 espécies de microrganismos periodontopatogênicos Gram-negativos e na redução da quantidade de endotoxina bacteriana. Participaram do estudo 33 pacientes de 11 a 33 anos de idade, em tratamento com aparelho ortodôntico fixo, nos quais foram colocados randomicamente 3 bráquetes metálicos novos nos pré-molares. Os pacientes do Grupo Controle (n=17) fizeram 2 bochechos semanais com solução placebo, durante 30 dias. Os pacientes do Grupo Experimental (n=16) fizeram bochechos com solução à base de gluconato de clorexidina a 0,12% (Periogard®), da mesma forma que o grupo Controle. Decorridos 30 dias, os 3 bráquetes foram removidos de cada paciente e processados para a detecção dos microrganismos, pela técnica Checkerboard DNA-DNA Hybridization, e para a quantificação da endotoxina bacteriana por meio do teste Limulus Amebocyte Lysate. Os resultados obtidos foram analisados por meio dos testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis, Mann-Whitney e pós-teste de Dunn, utilizando os softwares SAS e Graphpad Prism. O nível de significância adotado foi de 5%. De acordo com os resultados obtidos, observou-se que todos os bráquetes dos pacientes do Grupo Controle encontravam-se densamente contaminados pelos microrganismos avaliados. Nesse grupo, as espécies bacterianas do complexo laranja apresentaram-se em maiores quantidades, em relação às espécies do complexo vermelho (p<0,01). A mediana da quantidade de endotoxina para este grupo foi de 0,6673 EU/ml. Quando comparado ao grupo Controle, observou-se que o número total de microrganismos no grupo Experimental foi estatisticamente menor, com mediana de 29.150.000 no grupo Controle e de 13.130.000 no grupo Experimental (p=0,01). Quando os microrganismos foram avaliados por complexos, foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos Controle e Experimental para o complexo laranja (p=0,04), com contagens menores de bactérias após os bochechos com clorexidina. Por outro lado, observou-se que a quantidade de endotoxina no grupo Experimental foi maior, com mediana de 1,2199 EU/ml (p=0,02). Concluiu-se que os bochechos com solução de gluconato de clorexidina a 0,12% podem ser úteis, na prática clínica, com a finalidade de reduzir os níveis de microrganismos periodontopatogênicos Gram-negativos, em pacientes portadores de aparelhos ortodônticos fixos. No entanto, em função do aumento da quantidade de endotoxina bacteriana após o uso dos bochechos com clorexidina, estudos adicionais são necessários com a finalidade de desenvolver procedimentos clínicos ou agentes antimicrobianos que tenham ação sobre a endotoxina presente nos bráquetes metálicos. / Using the biomolecular technique Checkerboard DNA-DNA Hybridization and the Limulus Amebocyte Lysate (LAL) assay, the purposes of the present randomized clinical study were to evaluate in orthodontic metallic brackets: 1) The presence of 16 Gram-negative periodontopathogenic microbial species of the orange and red complexes by using DNA probes; 2) The amount of bacterial endotoxin; and 3) The efficacy of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes in reducing the contamination by the evaluated microbial species and the amount of bacterial endotoxin. Thirty-three 11-33-year-old patients undergoing orthodontic treatment with fixed appliances were enrolled in the study and all subjects had 3 new metallic brackets bonded to different premolars in a randomized manner. The patients in the Control group (n=17) were instructed to use a placebo mouthwash twice a week, while those in the Experimental group (n=16) were instructed to use a 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwash (Periogard®) in the same way. After 30 days, the 3 brackets were removed from each patient and processed for detection of the microorganisms by the Checkerboard DNADNA hybridization technique, and for quantification of bacterial endotoxin by the LAL assay. The data were analyzed statistically by the non-parametric Mann-Whitney, Kruskal-Wallis and Dunn\'s post tests using SAS and GraphPad Prism softwares. A significance level of 5% was set for all analyses. The brackets of the patients in the Control group were densely contaminated by the evaluated microbial species. In this group, the number of bacterial species of the orange complex was larger compared to the number of bacterial species of the red complex (p<0.01). The median of the amount of bacterial endotoxin for this group was 0.6673 EU/ml. The Experimental group had a significantly smaller number of microorganisms than the Control group (median 13,130,000 versus 29,150,000; p=0.01). When the microorganisms were analyzed by complex, there was statistically significant difference between the Control and Experimental groups for the orange complex (p=0.04) with smaller counts of bacteria after use of chlorhexidine oral rinses. On the other hand, there was a greater amount of bacterial endotoxin in the Experimental (median of 1,2199 EU/ml; p=0.02). In conclusion, 0.12% chlorhexidine oral rinse can be useful in the clinical practice to reduce the levels of Gram-negative periodontopathogenic microorganisms in patients with fixed orthodontic appliances. Considering the increase in the amount of bacterial endotoxin after use of chlorhexidine oral rinses, further research is necessary to develop clinical procedures or antimicrobial agents with action against the endotoxin in the metallic brackets