A ação antimicrobiana da nanopartícula de prata (AgNP) favorece seu uso em diversos produtos. Sua toxicidade está relacionada com o tamanho da nanopartícula, seu estado de agregação e a capacidade em gerar espécies reativas de oxigênio (EsRO). O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos citogenotóxicos, como também o estresse oxidativo em eritrócitos de Trachinotus carolinus expostos à AgNP. Os peixes receberam, via injeção intraperitoneal, três diferentes doses de suspensão de AgNP, 3, 1.5 e 0.75 μgAgNP/gpeixe. Após 12, 24, 36, 72 e 108 horas o sangue foi coletado para realizar o ensaio cometa e o teste do micronúcleo (MN) outras anormalidades nucleares (ANE), como também o fígado para a atividade enzimática da catalase. A AgNP demonstrou ser citogenotóxica, como também se capaz de promover o estresse oxidativo em Trachinotus carolinus. Os resultados mostram que os danos ao DNA e a ocorrência de MN e ANE apresentaram relação dose-resposta dependente. A redução no dano ao DNA mostrou estar relacionada com o aumento da atividade da catalase. / Silver nanoparticles (AgNP) are applied as antimicrobial agents to many manufactured products. Nanoparticles size, aggregation and its induction of reactive oxygen species (ROS) are associated with AgNP toxicity. This study was undertaken to examine the citogenotoxicity as well as oxidative stress of AgNP in Trachinotus carolinos erythrocytes. The fish received tree different doses of 3, 1.5 e 0.75 µgAgNP/gfish by intraperitoneal injection. Bloods samples were collected and at 12, 24, 36, 72 and 108 hours post-injection to perform the comet assay and the micronucleus test. Extract of liver were used to measure catalase activity. This study showed that AgNP is citogenotoxic to this species and is able to induce oxidative stress. The results showed that the DNA damage, micronucleus and nuclear abnormalities was dose dependent. The reduction of DNA damage exhibit a close relationship with catalase activity.

Orientador: Maria Aparecida Marin Morales / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Roberta Cornelio Ferreira Nocelli / Resumo: A industrialização apresenta inúmeros benefícios, mas também está associada à emissão constante de substâncias tóxicas no meio ambiente. As atividades industriais lançam diversos produtos químicos que contaminam os vários meios físicos como o solo, o ar e a água. A indústria de refino de petróleo representa um importante setor da economia, mas, em contra partida, produz efluentes que podem ser ricos em metais pesados e outros compostos inorgânicos perigosos, além de uma infinidade de substâncias orgânicas com potencialidade de interagir com os organismos vivos. Dentre os contaminantes orgânicos derivados do petróleo, os mais importantes são os Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPA). Os HPAs são reconhecidamente estrogênicos, ou seja, possuem potenciais de ação no sistema endócrino. Dentre os efeitos causados pelas substâncias com ação semelhante à endócrina estão a diminuição da capacidade reprodutiva, inversão sexual, problemas no desenvolvimento embrionário e câncer. Devido a estes fatores, tem havido um incentivo ao desenvolvimento e aplicação de novas técnicas que possam avaliar, de maneira eficiente, os contaminantes ambientais, decorrentes das atividades humanas. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a genotoxicidade, mutagenicidade de amostras de águas dos rios Jaquari, Atibaia e Piracicaba, que estão em uma região sob a influência da atividade da refinaria de Paulínia - SP. Para a avaliação das águas destes rios (realizadas com os extratos obtidos por extração de fase sólida - EFS), foram aplicadas técnicas desenvolvidas células de hepatoma humano (HepG2) mantidas em cultura. Foram desenvolvidos com este sistema teste o ensaio do cometa e o teste de micronúcleo. As análises químicas realizadas por HPLC indicaram a presença de naftaleno nas amostras... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Industrialization presents countless benefits, but is also associated to the constant emission of toxic substances into the environment. Industrial activities release several chemical products that contaminate the several physical media such as soil, air and water. Petroleum refinery industry represents an important sector of the economy, however, in counterpart, produces effluents that can be rich in heavy metals and other hazardous inorganic compounds, besides infinitude of organic substances with the potential to interact with living organisms. Among the organic contaminants derived from petroleum, the most important are the Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PHA). PHAs are known to be estrogenic, i.e., have the potential to act in the endocrine systems. Among the effects caused by endocrine substances are the decrease in the reproductive capacity, sex inversion, problems in the embryonic development and cancer. Due to these factors, there has been an incentive to the development and application of new techniques that can evaluate, efficiently, the environmental components resulted from human activities. Thus, the present study aimed to assess the genotoxicity and mutagenicity of water samples from Jaguari, Atibaia and Piracicaba rivers, which are in a region under the influence of the activity of a refinery of Paulínia - SP. For the evaluation of the waters of these rivers (performed with extracts obtained by solid phase extractions - SPE), it was applied techniques with human hepatoma cells (HepG2) maintained in culture. The comet assay and micronucleus test were developed with this test system. The chemical analyses showed the presence of naphthalene in the water samples of these rivers, as well as other compounds capable of inducing damages, even when at low concentrations. It was also possible... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-05-23T17:36:08Z No. of bitstreams: 1 TES_EDIO_GIACOMELLI_PARCIAL.pdf: 198707 bytes, checksum: 700e5dcbdc3f86f944c5b7b7bfc87e7f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-23T17:36:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_EDIO_GIACOMELLI_PARCIAL.pdf: 198707 bytes, checksum: 700e5dcbdc3f86f944c5b7b7bfc87e7f (MD5) Previous issue date: 2017-01-05 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The aim of this study was to evaluate the biocompatibility of conventional glass ionomer cement (GIC) modified by calcium carbonate by means of cytotoxicity and genotoxicity tests. The calcium carbonate (CC), in proportions of 1%, 5% and 10%, was added to the GIC powder. A polytetrafluoroethylene matrix (10 mm diameter and 3 mm height) was used to make the samples, and four groups were obtained (n = 4): G1 ? only GIC (control); G2 ? GIC with 1% CC; G3 ? GIC with 5% CC; G4 ? GIC with 10% CC. The preparation of the samples was carried out in accordance with ISO 10993-12. The MTT test was used to evaluate the cell cytotoxicity, and the micronucleus and comet tests were performed to evaluate the genotoxicity, by using a mouse fibroblast cell culture of the NIH/3T3 lineage. According to MTT test, the samples with 1% and 5% CC showed a higher cytotoxic potential, and the samples with 10% CC presented a cellular viability index comparable to the GIC. The micronucleus test showed that GIC with 10% CC produced an improvement in cell proliferative potential (IPBC).CIV with 5% CC had a reduction in IPBC that did not compromise the material from the genotoxic point of view. In the comet test, groups with the addition of CC had a small increase in genotoxic potential compared with GIC. It was concluded that the addition of 10% CC to the GIC had a low cytotoxic potential and it is feasible for use in the cellular environment, and the addition of 1%, 5% and 10% CC to the GIC did not induce genetic damage. / Este estudo teve o objetivo de avaliar a biocompatibilidade do cimento de ion?mero de vidro (CIV) convencional modificado por carbonato de c?lcio de conchas marinhas por meio dos testes de citotoxicidade e genotoxicidade celular. O carbonato de c?lcio (CC), nas propor??es de 1%, 5% e 10%, foi adicionado ao p? do CIV. Utilizando uma matriz de politetrafluoretileno (10 mm de di?metro e 3 mm de altura), foram confeccionadas as amostras, sendo obtidos quatro grupos (n=4): G1 ? apenas CIV (controle); G2 ? CIV com 1% de CC; G3 ? CIV com 5% de CC; G4 ? CIV com 10% de CC. A prepara??o das amostras foi realizada de acordo com a norma ISO 10993-12. O ensaio MTT foi utilizado para avaliar a citotoxicidade celular, e os ensaios de micron?cleo e cometa foram realizados para avaliar a genotoxicidade, por meio da utiliza??o de uma cultura celular de fibroblastos de camundongo da linhagem NIH/3T3. De acordo com o ensaio MTT, as amostras contendo a adi??o de 1% e 5% de CC apresentaram um maior potencial citot?xico, e as amostras com 10% de CC apresentaram um ?ndice de viabilidade celular compar?vel ao do CIV. O ensaio do micron?cleo evidenciou que o CIV com 10% de CC produziu uma melhora no potencial proliferativo celular (IPBC). CIV com 5% de CC apresentou uma redu??o no IPBC que n?o compromete o material do ponto de vista genot?xico. No ensaio cometa, os grupos com adi??o de CC mostraram um pequeno aumento do potencial genot?xico em compara??o ao CIV. Concluiu-se que a adi??o de 10% de CC ao CIV apresentou um baixo potencial citot?xico, sendo vi?vel para utiliza??o em ambiente celular, e a adi??o de 1%, 5% e 10% de CC ao CIV n?o induziu a um dano gen?tico.

O câncer é a primeira causa de mortes por doença, após 1 ano de idade, até o final da adolescência, excetuando aquelas relacionadas aos acidentes e à violência. A Leucemia Linfoide Aguda (LLA) afeta células linfoides e agrava-se rapidamente. São os tumores mais frequentes na infância e representam um terço de todas as neoplasias malignas nesta faixa etária. Em média, a taxa de cura excede 70%, todavia, apesar dos avanços das últimas décadas, os índices de crianças que apresentam recidiva da doença continua significativo. Danos endógenos ao DNA ocorrem numa frequência altíssima, além dos danos causados por terapias antitumorais. Alteração no reparo ao dano do DNA pode induzir mecanismos de resistência ao tratamento quimioterápico, resultando em aumento do reparo de lesões do DNA. Reparo por Excisão de Nucleotídeos (NER) é a via de reparo de DNA mais versátil e flexível nas células. Seus componentes estão sendo estudados como biomarcadores de prognóstico e terapias-alvo. No entanto, alguns relatórios têm abordado danos de DNA em Leucemia Linfoide Aguda (LLA) pediátrica. Neste estudo, realizamos um estudo de acompanhamento observacional em pacientes pediátricos para avaliar os danos do DNA pelo Ensaio Cometa Alcalino e expressão gênica da via de NER durante a indução da quimioterapia. Amostras de medula óssea (MO) ao diagnóstico, dia 15 (D15) e 30 (D30) do tratamento foram coletadas de 28 pacientes com LLA. Não houve aumento no índice de dano. No entanto, houve uma redução de células com baixo danos na comparação do D35 com o diagnóstico. Este resultado se confirmou em pacientes que apresentaram doença residual mínima positiva. A via de NER permaneceu constante, no entanto, em um único paciente, foi observada uma diminuição significativa da expressão dos genes, talvez devido ao silenciamento ou a regulação negativa das vias de reparo. Níveis de danos e reparação do DNA podem influenciar o resultado clínico, estar envolvidos na resistência aos fármacos e potencializar o risco de recidiva. Este é o primeiro estudo que avalia o dano ao DNA em amostras de MO de pacientes pediátricos com LLA. Apesar do pequeno número de pacientes alocados para o estudo, a partir dos achados é possível concluir que complexos de reparo merecem ser investigados a curto e a longo prazo. Acompanhamento dos resultados do paciente vai ajudar a elucidar a implicação dos nossos achados em taxas de cura e de recidiva. / Cancer is the leading cause of death by disease after 1 year old until the end of adolescence, except those related to accidents and violence. Acute Lymphoid Leukemia (ALL) affects lymphoid cells and worsens quickly. They are the most frequent tumors in childhood and account for a third of all malignancies in this age group. On average, the cure rate exceeds 70%, however, despite the progress of recent decades, rates of children with disease recurrence remains significant. Endogenous DNA damage occurs at a very high frequency, in addition to the damage caused by anti-tumor therapies. Change in the repair of DNA damage can induce resistance mechanisms to chemotherapy, resulting in increased repair of DNA lesions. Nucleotide Excision Repair (NER) pathway is the more versatile and flexible DNA repair in cells. Its components are being studied as prognostic biomarkers and targeted therapies. However, there are some reports of DNA damage in pediatric Acute Lymphoid Leukemia (ALL). In this study, we conducted an observational follow-up study in pediatric patients to assess DNA damage by alkaline comet assay and gene expression of NER pathway during induction chemotherapy. Bone marrow (BM) samples at diagnosis, 15th (D15) and 30th (D30) of treatment were collected from 28 patients with ALL. There was no increase in damage index. However, there was a reduction of cells with low damage in comparison to the D35 diagnosis. This result was confirmed in patients with positive minimal residual disease. The NER pathway remained constant, however, in one patient, a significant decrease of gene expression was observed perhaps due to the silencing or down-regulation of repair pathways. Damage levels and DNA repair can influence the clinical result and may be involved in drug resistance and enhance the risk of recurrence. This is the first study to assess DNA damage in BM samples of pediatric patients with ALL. Despite the small number of patients allocated to the study, from the findings we conclude that repair complex deserves to be investigated in the short and long term. Monitoring patient’s outcomes will help to access the implication of our findings in cure and relapse rates.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-09-10T00:55:01Z No. of bitstreams: 1 Nilton C N Santos Tese Geno Cito Endo 10 ago 20h.pdf: 2096544 bytes, checksum: fd3a63f3f5235dae758262d72d8a3bb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-10T00:55:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nilton C N Santos Tese Geno Cito Endo 10 ago 20h.pdf: 2096544 bytes, checksum: fd3a63f3f5235dae758262d72d8a3bb2 (MD5) Previous issue date: 2015-06-29 / Pulp therapy for deciduous teeth is the last resort for preventing tooth loss, but among the products used for this, i.e. so-called filling pastes, none is considered to be ideal. The objective of this study, using the micronucleus test on the bone marrow of mice and the comet assay on human lymphocytes, was to evaluate the genotoxic and cytotoxic effects of four filling pastes that are used in this therapy: zinc oxide, calcium hydroxide P.A., mineral trioxide aggregate and an iodoform paste (Guedes-Pinto paste). To perform the micronucleus test, male Swiss mice (Mus musculus) were divided into groups of ten animals each: four groups were each exposed to one of the filling pastes, administered intraperitoneally at dilutions of 1/10, 1/50, 1/500 and 1/1000. Cyclophosphamide was used as the positive control. The negative controls used were the dilution vehicles: dimethylsulfoxide (DMSO) for the Guedes paste and zinc oxide; and phosphate-buffered saline solution (PBS) for the calcium hydroxide P.A. and mineral trioxide aggregate. The animals were sacrificed 24 h and 48 h after the treatment. The bone marrow was extracted, in order to calculate the micronucleus occurrence rate in 1000 polychromatic erythrocytes (PCE) in each of the animals, under an optical microscope (1000 X), in a blinded test. Cytotoxicity was evaluated by determining the PCE/NCE (normochromatic erythrocyte) ratio in 200 erythrocytes/animal. For the comet assay, human lymphocytes were cultured in different dilutions of each of the filling pastes (1:500, 1:750, 1:1000 and 1:2000), for 3 h at 37 ?C, under an atmosphere containing 5% CO2. Two positive controls were used: methyl-methanesulfonate (0.4 ?M) for the calcium hydroxide P.A. and mineral trioxide aggregate; and doxorubicin (0.6 ?M) for the Guedes paste and zinc oxide. Two negative controls were also used here: distilled water for the calcium hydroxide P.A. and mineral trioxide aggregate; and DMSO for the Guedes paste and zinc oxide. Comets were identified by means of fluorescence microscopy (400 X), and 100 of them were counted on each of the three slides that were analyzed for each drug test. The statistical analysis on the results from the micronucleus test was performed using the conditional test for comparing proportions in situations of rare events. Analysis of variance, followed by the Tukey test, was used to assess the PCE/NCE ratio obtained from the different treatments and also to compare the means from the DNA damage indices that were obtained through the comet test, using the Prisma software, version 4.0. The micronucleus occurrence rate was significantly higher among the animals treated with Guedes paste, at all the dilutions tested and at both sacrifice times and also among the animals treated with zinc oxide and sacrificed 48 h after treatment at the dilutions of 1:50, 1:500 and 1:1000. Cytotoxic effects from these pastes were detected in the animals sacrificed at both times. Calcium hydroxide P.A. and mineral trioxide aggregate did not present any cytotoxic or genotoxic effects. The results obtained from the comet assay also showed that zinc oxide and Guedes paste presented genotoxicity, whereas calcium hydroxide P.A. and mineral trioxide aggregate did not. These results show that there is a need to reassess the use of zinc oxide and Guedes paste and provide encouragement for conducting additional studies to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of these pastes. / A terapia pulpar de dentes dec?duos se constitui no ?ltimo recurso de preven??o da perda dent?ria, mas, dentre os produtos empregados para tal, as denominadas pastas obturadoras, nenhum ? considerado como ideal. O objetivo deste trabalho foi avaliar, com o uso do teste de micron?cleo em medula ?ssea de camundongo e do ensaio cometa em linf?citos humanos, os efeitos citot?xicos e genot?xicos de quatro pastas obturadoras utilizadas nesta terapia: ?xido de zinco, hidr?xido de c?lcio P.A., agregado tri?xido mineral e uma pasta iodoformada (pasta Guedes-Pinto). Para realiza??o do teste de micron?cleo, camundongos Swiss (Mus musculus), machos, foram divididos em grupos de dez animais, que foram expostos ?s pastas obturadoras, administradas via intraperitoneal nas dilui??es de 1/10, 1/50, 1/500 e 1/1000. Ciclofosfamida foi utilizada como controle positivo. Os controles negativos foram: dimetilsulf?xido (DMSO) para a pasta Guedes-Pinto e ?xido de zinco; e solu??o salina tamponada (PBS) para o hidr?xico de c?lcio P.A. e agregado trioxido mineral. Os animais foram sacrificados 24h e 48h ap?s tratamento, a medula ?ssea foi extra?da e foram analisados 1000 eritr?citos policrom?ticos (PCE) de cada um dos animais, sob microscopia ?ptica (1000X) e em teste cego. A citotoxicidade foi avaliada pela rela??o PCE (eritr?cito policrom?tico) / NCE (eritr?cito normocrom?tico) em 200 eritr?citos/animal. Para o ensaio cometa, linf?citos humanos foram cultivados nas dilui??es de 1:500, 1:750, 1:1000 e 1:2000 das pastas obturadoras, durante 3h, a 37?C, em atmosfera de 5% de CO2. Foram utilizados dois controles positivos: metil-metanosulfonato (0,4?M) para o hidr?xido de c?lcio P.A. e agregado tri?xido mineral, e doxorrubicina (0,6 ?M) para a pasta Guedes-Pinto e ?xido de zinco. Foram tamb?m dois os controles negativos utilizados: ?gua destilada para o hidr?xido de c?lcio P.A. e agregado tri?xido mineral, e DMSO para pasta Guedes-Pinto e ?xido de zinco. A identifica??o do cometa foi realizada sob microscopia de fluoresc?ncia (400X), sendo computados 100 deles em cada uma das tr?s l?minas analisadas para cada droga teste. A an?lise estat?stica dos resultados do teste de micron?cleo foi realizada com o uso do teste condicional para compara??o de propor??es em situa??o de eventos raros. An?lise de vari?ncia, seguida do teste de Tukey, foram utilizados para avalia??o da rela??o PCE/NCE obtida com os diferentes tratamentos e tamb?m para compara??o das m?dias dos ?ndices de danos ao DNA obtidos no ensaio cometa com o software Prisma vers?o 4.0. A ocorr?ncia de micron?cleos foi significativamente maior nos animais tratados com a pasta Guedes-Pinto em todas as dilui??es testadas, nos dois tempos de sacrif?cio e tamb?m para os animais tratados com ?xido de zinco e sacrificados 48h ap?s tratamento, nas dilui??es 1:50; 1:500 e 1:1000. Efeitos citot?xicos destas pastas foram detectados nos animais sacrificados nos dois tempos. O hidr?xido de c?lcio P.A. e o agregado tri?xido mineral n?o apresentaram efeitos citot?xicos nem genot?xicos. Os resultados obtidos com o ensaio cometa tamb?m apontaram para a genotoxicidade do ?xido de zinco e pasta Guedes-Pinto, e n?o do hidr?xido de c?lcio P.A. e agregado tri?xido mineral. Estes resultados mostram a necessidade de reavalia??o do uso do ?xido de zinco e pasta Guedes-Pinto e suscitam a realiza??o de estudos adicionais avaliando a genotoxicidade e citotoxicidade destas pastas.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-31T12:07:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudosCitotoxidadeGenotoxicidade.pdf: 1733760 bytes, checksum: 0cca3fb160419636f3ea55387b97b442 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-02-01T12:16:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudosCitotoxidadeGenotoxicidade.pdf: 1733760 bytes, checksum: 0cca3fb160419636f3ea55387b97b442 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T12:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudosCitotoxidadeGenotoxicidade.pdf: 1733760 bytes, checksum: 0cca3fb160419636f3ea55387b97b442 (MD5) Previous issue date: 2014-09-30 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do presente trabalho foi realizar estudos fitoquímicos de E. plicata, bem como avaliar a citotoxicidade, o papel do estresse oxidativo e a genotoxicidade. O pó dos bulbos de E. plicata foi submetido à maceração com etanol, a solução concentrada até resíduo em rotaevaporador. O extrato etanólico foi submetido ao fracionamento em coluna cromatográfica aberta de sílica gel, sendo utilizado como fase móvel solventes de polaridade crescente. A fração diclorometano foi submetida ao refracionamento em cromatografia em camada preparativa, utilizando como fase móvel o diclorometano, sendo obtidas 3 subfrações. O extrato etanólico, suas frações e subfrações foram submetidos a análises cromatográficas e espectrofotométricas. Todas as amostras foram submetidas aos ensaios: viabilidade celular (MTT), da capacidade antioxidante (DPPH), cometa e micronúcleo. A partir do extrato etanólico obteve-se uma fração rica em naftoquinona (Fração diclorometano). O fracionamento desta levou ao isolamento da isoeleuterina (fração S2 e majoritária), sendo a fração S3 minoritária (não identificada e não testadas). Estudos cromatográficos e espectrofotométricos permitiram a identificação de S2 (isoeleuterina). O fracionamento contribuiu positivamente para citotoxicidade em células VERO, sendo a amostra mais citotóxica a S1. Para células HepG2, a citotoxicidade foi concentração dependente, sendo que o fracionamento não contribuiu positivamente para esta. Também, em relação ao tempo, quanto maior o tempo de exposição, menor foi a citotoxicidade para as células HepG2. A capacidade antioxidante máxima foi observada para subfração S1, sendo que esta possuiu baixa genotoxicidade em ambos os métodos e foi a mais citotóxica. A fração diclorometano possui uma capacidade antioxidante intermediaria, porém apresentou uma elevada genotoxicidade no ensaio do micronúcleo. A isoeleuterina (S2) mostrou-se menor capacidade antioxidante, menor citotoxicidade e resultados conflitantes na genotoxicidade. O extrato etanólico possuiu a menor capacidade antioxidante, genotoxicidade moderada e menor citotoxicidade. Ao se analisar os resultados verifica-se que: a subfração S1 é a mais promissora como candidato a 9 fármaco antimalárico, visto possuir taxas de citotoxicidade e genotoxicidade em níveis aceitáveis. A isoeleuterina necessita de investigações complementares sobre a genotoxicidade. Em relação à fração diclorometano desaconselha-se seu uso para o desenvolvimento do medicamento antimalárico, visto ser a mais genotóxica. / The purpose of this study was phytochemical studies of E. plicata, and to evaluate the cytotoxicity, the role of oxidative stress and genotoxicity. The powder of E. plicata bulbs underwent maceration with ethanol, the solution concentrated to residue in rotaevaporator. The ethanol extract was subjected to fractionation by open column chromatography over silica gel, being used as the mobile phase solvents of increasing polarity. The dichloromethane fraction was subjected to fractionation by preparative layer chromatography using dichloromethane as mobile phase, and 3 subfractions obtained. The ethanol extract, fractions and subfractions were subjected to chromatographic and spectrophotometric analysis. All samples were subjected to the tests: cellular viability (MTT), the antioxidant capacity (DPPH), comet and micronucleus assays. From the ethanol extract obtained a rich fraction naphthoquinone (dichloromethane fraction). Fractionation of this led to the isolation of: S1, S2 (major fraction), and fraction of minority S3 (unidentified, not tested). Chromatographic studies and spectrophotometric allowed the identification of S2 (isoeleuterin). Fractionation contributed positively to cytotoxicity on VERO cells, the sample being more cytotoxic to S1. The cytotoxicity in HepG2 cells was concentration dependent, being the fractionation did not contribute positively to this. Also, over time, the longer the exposure time, the lower the cytotoxicity to HepG2 cells. The maximum antioxidant activity was observed for subfraction S1, and this low genotoxicity possessed by both methods and it was the most cytotoxic. The dichloromethane fraction has an intermediate antioxidant capacity, but had a high genotoxicity in micronucleus assay. The isoeleuterin (S2) was lower antioxidant capacity, lower cytotoxicity and genotoxicity conflicting results. The ethanol extract possessed the lowest antioxidant capacity, moderate genotoxicity and lower cytotoxicity. When analyzing the results occur that: a subfraction S1 is the most promising candidate as the antimalarial drug, as have cytotoxicity and genotoxicity rates at acceptable levels. The isoeleuterin needs additional research on 11 genotoxicity. Regarding the dichloromethane fraction was not advisable to use for the development of an antimalarial drug, since it is more genotoxic.

O câncer é a primeira causa de mortes por doença, após 1 ano de idade, até o final da adolescência, excetuando aquelas relacionadas aos acidentes e à violência. A Leucemia Linfoide Aguda (LLA) afeta células linfoides e agrava-se rapidamente. São os tumores mais frequentes na infância e representam um terço de todas as neoplasias malignas nesta faixa etária. Em média, a taxa de cura excede 70%, todavia, apesar dos avanços das últimas décadas, os índices de crianças que apresentam recidiva da doença continua significativo. Danos endógenos ao DNA ocorrem numa frequência altíssima, além dos danos causados por terapias antitumorais. Alteração no reparo ao dano do DNA pode induzir mecanismos de resistência ao tratamento quimioterápico, resultando em aumento do reparo de lesões do DNA. Reparo por Excisão de Nucleotídeos (NER) é a via de reparo de DNA mais versátil e flexível nas células. Seus componentes estão sendo estudados como biomarcadores de prognóstico e terapias-alvo. No entanto, alguns relatórios têm abordado danos de DNA em Leucemia Linfoide Aguda (LLA) pediátrica. Neste estudo, realizamos um estudo de acompanhamento observacional em pacientes pediátricos para avaliar os danos do DNA pelo Ensaio Cometa Alcalino e expressão gênica da via de NER durante a indução da quimioterapia. Amostras de medula óssea (MO) ao diagnóstico, dia 15 (D15) e 30 (D30) do tratamento foram coletadas de 28 pacientes com LLA. Não houve aumento no índice de dano. No entanto, houve uma redução de células com baixo danos na comparação do D35 com o diagnóstico. Este resultado se confirmou em pacientes que apresentaram doença residual mínima positiva. A via de NER permaneceu constante, no entanto, em um único paciente, foi observada uma diminuição significativa da expressão dos genes, talvez devido ao silenciamento ou a regulação negativa das vias de reparo. Níveis de danos e reparação do DNA podem influenciar o resultado clínico, estar envolvidos na resistência aos fármacos e potencializar o risco de recidiva. Este é o primeiro estudo que avalia o dano ao DNA em amostras de MO de pacientes pediátricos com LLA. Apesar do pequeno número de pacientes alocados para o estudo, a partir dos achados é possível concluir que complexos de reparo merecem ser investigados a curto e a longo prazo. Acompanhamento dos resultados do paciente vai ajudar a elucidar a implicação dos nossos achados em taxas de cura e de recidiva. / Cancer is the leading cause of death by disease after 1 year old until the end of adolescence, except those related to accidents and violence. Acute Lymphoid Leukemia (ALL) affects lymphoid cells and worsens quickly. They are the most frequent tumors in childhood and account for a third of all malignancies in this age group. On average, the cure rate exceeds 70%, however, despite the progress of recent decades, rates of children with disease recurrence remains significant. Endogenous DNA damage occurs at a very high frequency, in addition to the damage caused by anti-tumor therapies. Change in the repair of DNA damage can induce resistance mechanisms to chemotherapy, resulting in increased repair of DNA lesions. Nucleotide Excision Repair (NER) pathway is the more versatile and flexible DNA repair in cells. Its components are being studied as prognostic biomarkers and targeted therapies. However, there are some reports of DNA damage in pediatric Acute Lymphoid Leukemia (ALL). In this study, we conducted an observational follow-up study in pediatric patients to assess DNA damage by alkaline comet assay and gene expression of NER pathway during induction chemotherapy. Bone marrow (BM) samples at diagnosis, 15th (D15) and 30th (D30) of treatment were collected from 28 patients with ALL. There was no increase in damage index. However, there was a reduction of cells with low damage in comparison to the D35 diagnosis. This result was confirmed in patients with positive minimal residual disease. The NER pathway remained constant, however, in one patient, a significant decrease of gene expression was observed perhaps due to the silencing or down-regulation of repair pathways. Damage levels and DNA repair can influence the clinical result and may be involved in drug resistance and enhance the risk of recurrence. This is the first study to assess DNA damage in BM samples of pediatric patients with ALL. Despite the small number of patients allocated to the study, from the findings we conclude that repair complex deserves to be investigated in the short and long term. Monitoring patient’s outcomes will help to access the implication of our findings in cure and relapse rates.

Introdução: As radiações ionizantes produzem efeitos na molécula do DNA e o biomonitoramento in vivo pode ser utilizado para melhor avaliar o nível de exposição interna à radiação. Os agentes genotóxicos em populações expostas geram diferentes danos ao DNA e por existir uma variabilidade genética isso acarreta sensibilidades diferentes a estes agentes. Essa variação pode ser explicada pela existência de polimorfismos genéticos envolvidos no processo de reparo, entre eles o XRCC1 e XRCC3, responsáveis por manter a integridade do genoma das células frente a danos causados pelos agentes mutagênicos, como a radiação ionizante. Objetivo: Avaliar os efeitos mutagênicos da exposição à radiação x e gama em pacientes que realizam cintilografia miocárdica e angioplastia miocárdica e relacionar os possíveis resultados positivos com os polimorfismos dos genes de reparo, XRCC1 e XRCC3. Materiais e Métodos: Foram selecionados 57 pacientes expostos à radiação gama, e 57 expostos à radiação X. A análise da instabilidade genômica foi realizada através dos testes do micronúcleo e cometa, e a genotipagem através de sonda de TaqMan, para os polimorfismos do gene de reparo XRCC1 e XRCC3. Resultados e Conclusões: Em nosso estudo, os dados encontrados demonstram que ocorre dano ao DNA, após a exposição à radiação gama (ƿ=0,026). No entanto, não observamos ocorrer influência dos diferentes genótipos em ambos polimorfismos estudados, Arg399Gln e Thr241 Met, embora a presença do genótipo mutado Met/Met, parece ter indicado menor radiossensibilidade. Apesar desta diferença não ter alcançado os níveis de significância esperados, este resultado está de acordo com dados da literatura que indicam que este genótipo poderia estar associado à capacidade de reparação do DNA. Neste mesmo grupo, não encontramos diferenças estatisticamente significativas para aberrações cromossômicas (MN e NBUDs) após a exposição, para ambos polimorfismos, exceto para o genótipo normal Arg/Arg (ƿ=0,012), que parece ter indicado maior radiossensibilidade à exposição, estando de acordo com trabalhos da literatura, os quais demostram que, este genótipo pode ser associado com a diminuição da capacidade de reparo do DNA, apresentando níveis mais altos de quebras induzidas. As evidências de radiossensibilidade celular também podem ser explicadas pela alteração da proteína resultante do polimorfismo que não corrige os danos ao DNA, podendo aumentar o acúmulo de lesões no material genético, possivelmente pelo efeito da dose, tempo e tipo de exposição da radiação. Já no grupo de pacientes expostos à radiação X, observamos que não ocorre aumento nos níveis de danos ao DNA após a exposição (ƿ=0,004) e que não existe efeito de ambos polimorfismos estudados, exceto para o genótipo mutado Met/Met que parece determinar maior radiossensibilidade (ƿ=0,041). Para este grupo, observamos que ocorre aumento nas frequências de MN (ƿ<0,001) e NBUDs (ƿ<0,001), mas que os diferentes genótipos não influenciaram diferenças para estes achados. Para os dados de aberrações cromossômicas, encontrados neste grupo, a superexposição radiológica pode ser a interpretação dos achados, já que os detectores planos dos equipamentos utilizados aumentam em torno de 65% a exposição aos pacientes, quando comparados aos antigos intensificadores de imagens. / Introduction: Ionizing radiations produce effects on the DNA molecule and biomonitoring in vivo may be used to better assess the level of internal radiation exposure. Genotoxic agents in exposed populations generate different DNA damage, and there is a genetic variation in sensitivity to these agents. This variation can be explained by the existence of genetic polymorphisms involved in the repair process, including XRCC1 and XRCC3, responsible for maintaining genome integrity of the cell by the damage caused by mutagenic agents, such as ionizing radiation. Objective: Assess the mutagenic effects of exposure to x and gamma radiation in patients undergoing myocardial scintigraphy and coronary angioplasty and relate the possible positive result with polymorphisms of repair genes, XRCC1 and XRCC3. Materials and Methods: 57 patients exposed to gamma radiation, and 57 exposed to x radiation were selected. Analysis of genomic instability was performed by the micronucleus comet assay, and genotyping using TaqMan probe for polymorphisms XRCC1 and XRCC3 repairing genes. Results and Conclusions: In our study the data found demonstrate that DNA damage occurs after exposure to gamma radiation (ƿ=0.026). However, we did not observed influence of the different genotypes for both polymorphisms, Arg399Gln and Thr241Met, although the presence of the mutated genotype Met/Met seems to be less radiosensitive. Despite this difference did not reach statistical significance, this result is in agreement with data reported in the literature indicating that this genotype might be associated with the ability of DNA repair. In this group, we found no statistically significant differences in chromosomal aberrations (MN and NBUDs) after exposure for both polymorphisms, except for the normal genotype Arg/Arg (ƿ= 0.012), that seems to have shown greater radiosensitivity exposure, which is consistent with literature studies, which demonstrate that this genotype may be associated with decreased DNA repair capacity, showing higher levels of induced breaks. Evidence of cellular radiosensitivity may also be explained by the alteration of the protein resulting from polymorphism that does not correct the DNA damage and may increase the accumulation of lesions in the genetic material, possibly the effect of the dose, time and type of radiation exposure. In the group of patients exposed to x-radiation, we observe that no increase in the levels of DNA damage after exposure (ƿ=0.004) and that there is no effect of both polymorphisms studied, except for the mutated genotype Met / Met that seems to determine higher radiosensitivity (ƿ=0.041). For this group, we observed an increase in the frequency of MN (ƿ<0.001) and NBUDs (ƿ<0.001), but the different genotypes did not influence differences for these findings. For the data of chromosomal aberrations found in this group, radiological overexposure may be the interpretation of the findings, since the flat detectors of the equipment used increase around 65% exposure to patients, when compared to the old image intensifiers.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-29Bitstream added on 2014-06-13T19:49:24Z : No. of bitstreams: 1 silva_mtp_me_rcla_parcial.pdf: 116883 bytes, checksum: 61778c76199cfbad5330e0aa6a61f5d0 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-08-22T14:57:08Z: silva_mtp_me_rcla_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-08-22T15:02:10Z : No. of bitstreams: 1 000728772.pdf: 562519 bytes, checksum: d2e60974d6cd959b15f3b431318de958 (MD5) / A industrialização apresenta inúmeros benefícios, mas também está associada à emissão constante de substâncias tóxicas no meio ambiente. As atividades industriais lançam diversos produtos químicos que contaminam os vários meios físicos como o solo, o ar e a água. A indústria de refino de petróleo representa um importante setor da economia, mas, em contra partida, produz efluentes que podem ser ricos em metais pesados e outros compostos inorgânicos perigosos, além de uma infinidade de substâncias orgânicas com potencialidade de interagir com os organismos vivos. Dentre os contaminantes orgânicos derivados do petróleo, os mais importantes são os Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPA). Os HPAs são reconhecidamente estrogênicos, ou seja, possuem potenciais de ação no sistema endócrino. Dentre os efeitos causados pelas substâncias com ação semelhante à endócrina estão a diminuição da capacidade reprodutiva, inversão sexual, problemas no desenvolvimento embrionário e câncer. Devido a estes fatores, tem havido um incentivo ao desenvolvimento e aplicação de novas técnicas que possam avaliar, de maneira eficiente, os contaminantes ambientais, decorrentes das atividades humanas. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a genotoxicidade, mutagenicidade de amostras de águas dos rios Jaquari, Atibaia e Piracicaba, que estão em uma região sob a influência da atividade da refinaria de Paulínia – SP. Para a avaliação das águas destes rios (realizadas com os extratos obtidos por extração de fase sólida - EFS), foram aplicadas técnicas desenvolvidas células de hepatoma humano (HepG2) mantidas em cultura. Foram desenvolvidos com este sistema teste o ensaio do cometa e o teste de micronúcleo. As análises químicas realizadas por HPLC indicaram a presença de naftaleno nas amostras... / Industrialization presents countless benefits, but is also associated to the constant emission of toxic substances into the environment. Industrial activities release several chemical products that contaminate the several physical media such as soil, air and water. Petroleum refinery industry represents an important sector of the economy, however, in counterpart, produces effluents that can be rich in heavy metals and other hazardous inorganic compounds, besides infinitude of organic substances with the potential to interact with living organisms. Among the organic contaminants derived from petroleum, the most important are the Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PHA). PHAs are known to be estrogenic, i.e., have the potential to act in the endocrine systems. Among the effects caused by endocrine substances are the decrease in the reproductive capacity, sex inversion, problems in the embryonic development and cancer. Due to these factors, there has been an incentive to the development and application of new techniques that can evaluate, efficiently, the environmental components resulted from human activities. Thus, the present study aimed to assess the genotoxicity and mutagenicity of water samples from Jaguari, Atibaia and Piracicaba rivers, which are in a region under the influence of the activity of a refinery of Paulínia – SP. For the evaluation of the waters of these rivers (performed with extracts obtained by solid phase extractions – SPE), it was applied techniques with human hepatoma cells (HepG2) maintained in culture. The comet assay and micronucleus test were developed with this test system. The chemical analyses showed the presence of naphthalene in the water samples of these rivers, as well as other compounds capable of inducing damages, even when at low concentrations. It was also possible... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JeffersonSB.pdf: 95921 bytes, checksum: fc181517bec40efa1a2dbb0343c7987a (MD5) Previous issue date: 2008-03-10 / The contamination of the waters resources for wastewater from industrial, agricultural, and domestic sources is a serious environment problem, compromising its use for human consumption and agriculture. The Extremoz-RN Lake is an important freshwater source for the supply of the city of Natal, supplying a population of approximately 160,000 habitants. This aquatic body is located near an industrial pole which can be a serious risk factor for quality of its waters. The objectives of this study were examined the genotoxicity of Extremoz Lake between September of 2006 and January of 2008, by a combination of the Allium micronucleus test, piscine micronucleus test and the comet assay in erythrocytes from peripheral blood of Oreochromis niloticus. Additionally, the level of eight different heavy metals was quantified through spectrometry of atomic absorption of flame. The Allium test did not detect increase in the frequencies of micronucleus in none of the analyzed periods, however a strong cytotoxic activity was demonstrated for decrease in mitotic index in the analyses carried in April and July of 2007. Negative results had been detected in the frequencies of micronucleus in O. niloticus. A statistic significant increase was observed in the levels of DNA damage in comet assay carried in July of 2007. The results of the chemical analysis had detected increase in the levels of cadmium, chromium, copper, nickel, lead and zinc in different periods. These results demonstrated an alteration of the water s quality of the Extremoz Lake caused for the contamination for heavy metals and increase of DNA strand breaks. The use of biomonitoring program of the heavy metal and other pollutants with genotoxic potential combinated with genotoxicity assays is recommends. / A contamina??o dos recursos h?dricos, por efluentes de origem dom?stica e industrial, ? um s?rio problema ambiental, que compromete o uso de suas ?guas tanto para o consumo humano quanto para a agricultura. A Lagoa de Extremoz-RN ? uma importante fonte de ?gua para o abastecimento da cidade do Natal, suprindo uma popula??o de aproximadamente 160.000 habitantes. Esse corpo aqu?tico est? localizado pr?ximo a um p?lo industrial o qual pode ser um fator de risco a qualidade de suas ?guas. O presente estudo teve como objetivo analisar o potencial genot?xico das ?guas da lagoa de Extremoz entre os meses de setembro de 2006 e janeiro de 2008, pelo uso combinado do teste Allium cepa, teste micron?cleo e ensaio cometa em eritr?citos do sangue perif?rico de Oreochromis niloticus. Adicionalmente foram quantificados os n?veis de sete diferentes metais pesados pela da t?cnica de espectrometria de absor??o at?mica de chama. O teste A. cepa n?o detectou aumento nas freq??ncias de micron?cleos em nenhum dos per?odos analisados, por?m um forte efeito citot?xico, demonstrado pela diminui??o no ?ndice mit?tico, foi observado nas an?lises realizadas em abril e julho de 2007. Resultados negativos tamb?m foram encontrados nas freq??ncias de micron?cleos em O. niloticus. Uma altera??o estatisticamente significativa foi observada nos n?veis de quebra no DNA pelo teste cometa. Nos resultados da an?lise qu?mica, foi observado aumento nos n?veis de c?dmio, cromo, cobre, n?quel, chumbo e zinco em diferentes per?odos amostrais, acima dos permitidos pela legisla??o brasileira. Em conjunto, esses resultados demonstraram uma altera??o da qualidade das ?guas da Lagoa de Extremoz causada pela contamina??o por metais pesados. Estes metais parecem estar interagindo com o material gen?tico, visto o aumento nos n?veis de quebras no DNA, identificados no teste Cometa. Contudo, os danos n?o est?o sendo fixados pela c?lula. Diante disso, ? importante recomendar um programa de monitoramento da presen?a de metais pesados, bem como de outros poluentes com potencial genot?xico, nessa ?rea de estudo.