Submitted by KEREN BASTOS VALEZI null (keren.valezi@hotmail.com) on 2017-12-18T18:47:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Keren Valezi.pdf: 1447594 bytes, checksum: 988c2b1fc1fbd371daf1230457df1fa9 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2017-12-19T14:03:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 valezi_kb_me-int.pdf: 1447594 bytes, checksum: 988c2b1fc1fbd371daf1230457df1fa9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-19T14:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 valezi_kb_me-int.pdf: 1447594 bytes, checksum: 988c2b1fc1fbd371daf1230457df1fa9 (MD5) Previous issue date: 2017-11-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose é uma doença antropozoonótica causada pelo protozoário do gênero Leishmania. Ele apresenta três formas clínicas, conhecidas como leishmaniose visceral, leishmaniose cutânea e leishmaniose mucocutânea. A leishmaniose visceral afeta dois milhões de indivíduos anualmente no mundo. Os fato res genéticos envolvidos na interação hospedeiro - parasita foram associados ao desfecho clínico da doença. Este estudo investigou pela primeira vez a associação de polimorfismos nos genes candidatos IL10, NOD2 e TLR1 com leishmaniose visceral na população b rasileira. Para isso, escolhemos três marcadores anteriormente associados a infecções causadas por parasitas intracelulares na população brasileira. Nós genotipificamos 135 pacientes e 380 controles saudáveis. A presença do alelo G do rs4833095 no gene TLR 1 foi fortemente associada à susceptibilidade a esta doença: análise do alelo G (OR 2.04; IC 1.22 - 3.39; p - value 0.0061); Análise do genótipo GG (OR 3,87; 95 %IC 1,85 - 8,08, p - valor 0,0003); Análise de portadores de G (OR 2,5; 95 %IC 1,33 - 5,00; valor p 0,0047) . Para o gene NOD2, também encontramos uma associação para o genótipo AA (OR 2.07 95 %IC 1.05 - 4.05, p - value 0.0335) do polimorfismo rs8057341. Finalmente, poderíamos confirmar a associação do marcador rs1800871 na região promotora do gene IL10 com susceptib ilidade à leishmaniose visceral, para o genótipo TT (OR 2,34; CI 95 %IC 1,11 - 4,94 p - value 0,0245). Conclusão. Nossos dados demonstram pela primeira vez a associação desses genes candidatos com leishmaniose visceral na população brasileira, colocando esses ma rcadores como candidatos fortes na composição de futuros painéis genéticos para prever o risco de infecções na população brasileira e para estudos de meta - análise em visceral leishmaniose / 193614-1

Recentemente estudos demonstraram que os SNPs (polimorfismos de base única) rs8099917 e rs12979860 localizados próximos ao gene da IL28B explicam a variação de resposta à infecção e tratamento do paciente contra o genótipo 1 do HCV, porém não para o genótipo 3 deste vírus. Este trabalho encontrou associação significativa entre resposta à infecção devida ao genótipo 3 pelo tratamento (PEG-INF e RBV) e o polimorfismo rs8099917 em uma amostra da população de Santos - SP. Para o polimorfismo rs12979860, esta associação somente foi encontrada ao se parear indivíduos para sexo, idade e grau de fibrose hepática, demonstrando a importância da retirada de efeitos de estratificação neste tipo de análise. Estes resultados se confirmam ao se agregar dados de uma população proveniente da Bahia em uma meta-análise. Além disso, fez-se um estudo GWAS a fim de se conhecer outras variações genéticas envolvidas nessa resposta. Esta análise indicou a existência de alguns SNPs candidatos com sugestão de associação, dentre eles a tiroglobulina, relacionada aos hormônios da tireóide. / Recently, studies have shown that SNPs (single nucleotide polymorphisms) rs8099917 and rs12979860, located near the gene IL28B explain the changes in the response to infection and treatment of a patient against the HCV genotype 1, but not for the genotype 3 of the virus. This study found a significant association between response to infection due to treatment by genotype 3 (PEG-INF and RBV) and the rs8099917 polymorphism in a population sample from Santos - SP. To the rs12979860 polymorphism, this association was only found when individuals are paired for sex, age and degree of hepatic fibrosis, demonstrating the importance of the withdrawal effects of stratification in this type of analysis. These results confirm the aggregate data from a population of Bahia in a meta-analysis. In addition, a GWAS was made in order to search other genetic variations involved in this response. This analysis indicated the existence of some candidate SNPs with suggestion of association, including thyroglobulin, thyroid hormones related to.

Orientador: Ana Carla Pereira [UNESP[ Latini / Resumo: A hanseníase é causada pelo Mycobacterium leprae, que infecta macrófagos e células de Schwann, gerando lesões cutâneas e comprometendo nervos periféricos. A doença se apresenta sob diferentes formas clínicas, fortemente determinadas pela resposta imune do hospedeiro, podendo ser classificada como multibacilar (MB) e paucibacilar (PB). Trata-se de uma doença complexa e estudos voltados para a relação genótipo/fenótipo têm evidenciado a participação do componente genético humano nos desfechos da doença. O gene IL2RA está localizado na região cromossômica 10p15, próximo à região 10p13 que foi previamente associada à forma PB da doença, sendo um candidato posicional e funcional para estudos de associação genética com a forma clínica da hanseníase. Este receptor, também denominado CD25, tem papel fundamental na atividade imunorregulatória exercida pelas células Tregs. O TGF-β1 é uma das principais citocinas efetoras da atividade imunorreugulatória das Tregs e está presente em maior quantidade na forma MB. O objetivo do presente trabalho é investigar a associação dos genes IL2RA e TGFB1com as formas clínicas da hanseníase. Para tanto, conduzimos um estudo de associação baseado em duas amostras caso-controles incluindo 885 casos de hanseníase: 406 casos de Rondonópolis-MT como população primária; 479 casos provenientes do Estado de São Paulo como população de replicação. Os dados de frequências nos grupos de pacientes MB e PB foram comparados por modelo de regressão logística univar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leprosy is an infectious chronic disease compromising skin and peripheral nerves. There is a spectrum encompassing the clinical forms of leprosy, directed by host immune response. Leprosy has been classified as multibacillary (MB) and paucibacillary (PB), in accord to number of lesions and bacillary burden. Here we have conducted a genetic association study to clinical forms of leprosy based on two case-control samples from Brazil. We have investigated the association of the IL2RA and TGFB1 genes with clinical forms of leprosy. These genes codify important molecules to immunosuppressive activity of the Treg cells, and present differential expressions in accord to the clinical forms of leprosy. A total of 885 leprosy cases were included in the study: 406 cases from Rondonópolis municipality as start population, and 479 cases from the State of São Paulo as a replication population. The AA genotype of the rs2386841 polymorphism in the IL2RA gene was associated to PB form in the start population (OR: 4.29; p-value = 0.0043), but this was not confirmed for the replication population. The C allele of the rs1800470 marker at the TGFB1 gene was associated to MB form in the start population (OR: 2.36; p-value = 0.0238). This association was replicated for the replication population (OR: 2.10; p-value = 0.0300). In a combined analysis joining both populations the association of the rs1800470 was confirmed (OR: 1.81; p-value = 0.0475). We have demonstrated, for the first time, an associ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2014-10-03T18:26:58Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL GUSTAVO COSTA. 2014.pdf: 2966354 bytes, checksum: 03e2bef54d23cadea3e32bfc6a5e8093 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2014-10-07T14:06:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE FINAL GUSTAVO COSTA. 2014.pdf: 2966354 bytes, checksum: 03e2bef54d23cadea3e32bfc6a5e8093 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-07T14:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE FINAL GUSTAVO COSTA. 2014.pdf: 2966354 bytes, checksum: 03e2bef54d23cadea3e32bfc6a5e8093 (MD5) / As doenças complexas são aquelas cujas manifestações, dependem da exposição a múltiplos fatores ambientais e sociais e a fatores genéticos. Os estudos epidemiológicos clássicos são incapazes de abranger todos estes fatores que determinam uma doença complexa. Houve a necessidade de novas abordagens metodológicas que preenchesse esta lacuna. Neste contexto, a epidemiologia genética surgiu como uma área com grandes perspectivas de avanços no que corresponde a melhor compreensão destas doenças. É um campo que busca ampliar o conhecimento tradicional da epidemiologia nos determinantes de doenças e, em especial, nos efeitos conjuntos de determinantes genéticos, ambientais e sociais. Este campo se ampliou com o desenvolvimento da genômica e de suas técnicas de varredura do material genético dos indivíduos. Grandes esforços da comunidade científica internacional têm sido feitos para determinar a arquitetura genética de diversas doenças complexas A mãe da criança, entre as quais incluem-se a asma e as alergias. A causalidade genética vem ganhando cada vez mais importância no entendimento da asma e alergias e apesar da descoberta de diversos genes associados a estes desfechos a reprodutibilidade nos estudos de gene candidato é baixa. No Brasil, o projeto SCAALA (Social Changes, Asthma and Allergy in Latin America Programme) vem contribuindo com informações importantes para a compreensão dos fatores ambientais e sociais relacionados a prevalência de asma e alergias em uma população miscigenada. Isto criou oportunidade para desenvolvermos um estudo sobre fatores genéticos que possa contribuir para o entendimento da alta ocorrência de asma e alergias nesta população. A tese foi desenvolvida sob a forma de três artigos, o primeiro teve como objetivos estudar os efeitos de fatores de risco genéticos no desenvolvimento dos sintomas de asma, através de uma análise exploratória, por varredura genômica, além disso, visava estimar a herdabilidade e identificar possíveis rotas metabólicas associadas a sintomas de asma. O segundo artigo teve como objetivo estudar os efeitos de fatores de risco genéticos no surgimento da atopia através da análise de um painel com alta densidade de polimorfismos genéticos numa população susceptivel a niveis elevados de IgE especifica, estimar pequenos efeitos genéticos e inferir rotas metabólicas associadas a atopía. O terceiro artigo teve como objetivo confirmar o papel das variantes genéticas da região 17q21 nos sintomas de asma na infância em uma população urbana de crianças latino-americanas, e explorar as interações com atopia e outras exposições selecionadas pela sua relevância.

Recentemente estudos demonstraram que os SNPs (polimorfismos de base única) rs8099917 e rs12979860 localizados próximos ao gene da IL28B explicam a variação de resposta à infecção e tratamento do paciente contra o genótipo 1 do HCV, porém não para o genótipo 3 deste vírus. Este trabalho encontrou associação significativa entre resposta à infecção devida ao genótipo 3 pelo tratamento (PEG-INF e RBV) e o polimorfismo rs8099917 em uma amostra da população de Santos - SP. Para o polimorfismo rs12979860, esta associação somente foi encontrada ao se parear indivíduos para sexo, idade e grau de fibrose hepática, demonstrando a importância da retirada de efeitos de estratificação neste tipo de análise. Estes resultados se confirmam ao se agregar dados de uma população proveniente da Bahia em uma meta-análise. Além disso, fez-se um estudo GWAS a fim de se conhecer outras variações genéticas envolvidas nessa resposta. Esta análise indicou a existência de alguns SNPs candidatos com sugestão de associação, dentre eles a tiroglobulina, relacionada aos hormônios da tireóide. / Recently, studies have shown that SNPs (single nucleotide polymorphisms) rs8099917 and rs12979860, located near the gene IL28B explain the changes in the response to infection and treatment of a patient against the HCV genotype 1, but not for the genotype 3 of the virus. This study found a significant association between response to infection due to treatment by genotype 3 (PEG-INF and RBV) and the rs8099917 polymorphism in a population sample from Santos - SP. To the rs12979860 polymorphism, this association was only found when individuals are paired for sex, age and degree of hepatic fibrosis, demonstrating the importance of the withdrawal effects of stratification in this type of analysis. These results confirm the aggregate data from a population of Bahia in a meta-analysis. In addition, a GWAS was made in order to search other genetic variations involved in this response. This analysis indicated the existence of some candidate SNPs with suggestion of association, including thyroglobulin, thyroid hormones related to.

A doença cardiovascular é a principal causa de morte no mundo e no Brasil. A manifestação da doença cardiovascular aterosclerótica, a mais comum das doenças cardiovasculares, é evidenciada principalmente na vida adulta, entretanto o processo aterosclerótico inicia-se na infância e, em ambas as fases, este processo se atrela à presença de fatores de risco cardiovascular. Por outro lado, a prática regular de atividade física e a manutenção de uma aptidão física elevada auxiliam no controle do risco cardiovascular. Entretanto, as relações entre esses aspectos (risco cardiovascular, atividade física e aptidão física) são influenciadas por fatores genéticos e ambientais. Visando o entendimento mais profundo dessas associações em um contexto socioeconômico pouco explorado, uma cidade de pequeno porte, esta tese teve por objetivo investigar em famílias nucleares de Muzambinho - MG: i) a associação entre indicadores de risco cardiovascular e de atividade e aptidão físicas em crianças/adolescentes e adultos e; ii) a agregação familiar e a heritabilidade desses fenótipos. Para tanto, foram utilizados dados coletados entre 2008 e 2009, em 139 famílias de Muzambinho, compostas por 237 pais e 246 filhos, nos quais foram avaliados: composição corporal (índice de massa corporal e circunferência da cintura), fatores metabólicos (glicemia e colesterolemia de jejum), fatores cardiovasculares (pressão arterial sistólica e diastólica), indicadores de atividade física (volume semanal de atividade física total) e a aptidão física (aptidão aeróbica e força manual). A análise estatística incluiu análise exploratória, regressões simples e múltiplas e técnicas de análise de Epidemiologia Genética. Observou-se que nas crianças/adolescentes, os indicadores de obesidade diminuíram com o aumento da aptidão aeróbica, enquanto que a glicemia e o risco cardiovascular global diminuíram com o aumento do volume semanal de atividade física total. Nos adultos, o índice de massa corporal diminuiu com o aumento da força manual, enquanto que a pressão arterial diastólica diminuiu com o aumento do volume semanal de atividade física total. Nas famílias de Muzambinho, os indicadores de risco cardiovascular apresentaram agregação familiar e heritabilidade baixas a moderadas, o que também foi observado para a força muscular manual. Esses resultados sugerem que, numa população com características semelhantes às da população de Muzambinho, as associações entre risco cardiovascular e atividade/aptidão física variam de um indicador para outro e que há influência genética e do ambiente compartilhado pela família nos indicadores de risco cardiovascular e na força manual / Cardiovascular disease is the leading cause of death in the world and in Brazil. Atherosclerotic cardiovascular disease, the most common cardiovascular disease, usually triggers cardiovascular events during adulthood; however, the atherosclerotic process begins during childhood. In addition, at both phases of life, this process is associated with the presence of cardiovascular risk factors. On the other hand, regular physical activity and maintaining high fitness help in controlling cardiovascular risk. However, the relationships among all these aspects (cardiovascular risk, physical activity and physical fitness) are influenced by genetic and environmental factors. To develop a deeper understanding about these associations under an underexplored socioeconomic context, a small size city, this thesis had as an objective to investigate, in nuclear families from Muzambinho - MG: i) the association between cardiovascular risk and physical activity and fitness in children/adolescents and adults; and ii) the familial aggregation and heritability of these phenotypes. For that, the study used the data collected between 2008 and 2009 in 139 families of Muzambinho, consisting of 237 parents and 246 children. At that time, body composition (body mass index and waist circumference), metabolic factors (glycemia and fasting blood cholesterol), cardiovascular factors (systolic and diastolic blood pressures), physical activity marker (total weekly volume of physical activity) and physical fitness (aerobic fitness and manual strength) were assessed. Statistical analysis includes exploratory analysis, simple and multiple regressions and Genetic Epidemiology analysis techniques. Results in children/adolescents showed that obesity markers decreased with increasing aerobic fitness, while glycemia and global cardiovascular risk decreased with increasing total weekly volume of physical activity. In adults, body mass index deceased with increasing manual strength, and diastolic blood pressure decreased with increasing total weekly volume of physical activity. In Muzambinho\'s families, cardiovascular risk markers presented low to moderate familiar aggregations and heritabilities, which was also observed for manual strength. These results suggest that, in a population similar to Muzambinho\'s population, the associations between cardiovascular risk and physical activity and fitness vary from one marker to another, and that genetic and familiar common environment factors influence cardiovascular risk markers and manual strength

A doença cardiovascular é a principal causa de morte no mundo e no Brasil. A manifestação da doença cardiovascular aterosclerótica, a mais comum das doenças cardiovasculares, é evidenciada principalmente na vida adulta, entretanto o processo aterosclerótico inicia-se na infância e, em ambas as fases, este processo se atrela à presença de fatores de risco cardiovascular. Por outro lado, a prática regular de atividade física e a manutenção de uma aptidão física elevada auxiliam no controle do risco cardiovascular. Entretanto, as relações entre esses aspectos (risco cardiovascular, atividade física e aptidão física) são influenciadas por fatores genéticos e ambientais. Visando o entendimento mais profundo dessas associações em um contexto socioeconômico pouco explorado, uma cidade de pequeno porte, esta tese teve por objetivo investigar em famílias nucleares de Muzambinho - MG: i) a associação entre indicadores de risco cardiovascular e de atividade e aptidão físicas em crianças/adolescentes e adultos e; ii) a agregação familiar e a heritabilidade desses fenótipos. Para tanto, foram utilizados dados coletados entre 2008 e 2009, em 139 famílias de Muzambinho, compostas por 237 pais e 246 filhos, nos quais foram avaliados: composição corporal (índice de massa corporal e circunferência da cintura), fatores metabólicos (glicemia e colesterolemia de jejum), fatores cardiovasculares (pressão arterial sistólica e diastólica), indicadores de atividade física (volume semanal de atividade física total) e a aptidão física (aptidão aeróbica e força manual). A análise estatística incluiu análise exploratória, regressões simples e múltiplas e técnicas de análise de Epidemiologia Genética. Observou-se que nas crianças/adolescentes, os indicadores de obesidade diminuíram com o aumento da aptidão aeróbica, enquanto que a glicemia e o risco cardiovascular global diminuíram com o aumento do volume semanal de atividade física total. Nos adultos, o índice de massa corporal diminuiu com o aumento da força manual, enquanto que a pressão arterial diastólica diminuiu com o aumento do volume semanal de atividade física total. Nas famílias de Muzambinho, os indicadores de risco cardiovascular apresentaram agregação familiar e heritabilidade baixas a moderadas, o que também foi observado para a força muscular manual. Esses resultados sugerem que, numa população com características semelhantes às da população de Muzambinho, as associações entre risco cardiovascular e atividade/aptidão física variam de um indicador para outro e que há influência genética e do ambiente compartilhado pela família nos indicadores de risco cardiovascular e na força manual / Cardiovascular disease is the leading cause of death in the world and in Brazil. Atherosclerotic cardiovascular disease, the most common cardiovascular disease, usually triggers cardiovascular events during adulthood; however, the atherosclerotic process begins during childhood. In addition, at both phases of life, this process is associated with the presence of cardiovascular risk factors. On the other hand, regular physical activity and maintaining high fitness help in controlling cardiovascular risk. However, the relationships among all these aspects (cardiovascular risk, physical activity and physical fitness) are influenced by genetic and environmental factors. To develop a deeper understanding about these associations under an underexplored socioeconomic context, a small size city, this thesis had as an objective to investigate, in nuclear families from Muzambinho - MG: i) the association between cardiovascular risk and physical activity and fitness in children/adolescents and adults; and ii) the familial aggregation and heritability of these phenotypes. For that, the study used the data collected between 2008 and 2009 in 139 families of Muzambinho, consisting of 237 parents and 246 children. At that time, body composition (body mass index and waist circumference), metabolic factors (glycemia and fasting blood cholesterol), cardiovascular factors (systolic and diastolic blood pressures), physical activity marker (total weekly volume of physical activity) and physical fitness (aerobic fitness and manual strength) were assessed. Statistical analysis includes exploratory analysis, simple and multiple regressions and Genetic Epidemiology analysis techniques. Results in children/adolescents showed that obesity markers decreased with increasing aerobic fitness, while glycemia and global cardiovascular risk decreased with increasing total weekly volume of physical activity. In adults, body mass index deceased with increasing manual strength, and diastolic blood pressure decreased with increasing total weekly volume of physical activity. In Muzambinho\'s families, cardiovascular risk markers presented low to moderate familiar aggregations and heritabilities, which was also observed for manual strength. These results suggest that, in a population similar to Muzambinho\'s population, the associations between cardiovascular risk and physical activity and fitness vary from one marker to another, and that genetic and familiar common environment factors influence cardiovascular risk markers and manual strength

A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e atinge cerca de 12 milhões de pessoas no continente americano, a forma clássica de transmissão ocorre por intermédio do inseto vetor da subfamília Triatominae, popularmente chamado de barbeiro.Em um trabalho anterior, foi realizada uma análise de segregação complexa que indicou a presença de um gene principal, com um componente multifatorial influenciando a predisposição à infecção por Trypanosoma cruzi. A população é composta por 4697 indivíduos pertencentes a 886 famílias vindas do Nordeste do Brasil e tiveram os dados e amostras de sangue e saliva coletados entre 1969 e 1970.No presente estudo foi utilizada uma amostra de 69 indivíduos, sendo 18 positivos para a infecção por Trypanosoma cruzi e 51 negativos, distribuídos em 14 famílias. Os indivíduos tiveram seu DNA extraído e genotipado utilizando microarranjos de DNA de 260 K SNPs (GeneChip Mapping Affymetrix). Testes de associação mostraram significância entre a infecção por T. cruzi e o SNP rs17469997 do cromossomo 10, com P=0,015 após a correção de Bonferroni. Para validar estes inéditos resultados, análises de ligação multi-ponto foi feita com o programa GeneHunter (KRUGLYAK et al., 1996) e ligação dois-pontos com o programa SuperLink (FISHELSON e GEIGER, 2002), mas ambas não apresentaram resultados significativos, devido ao pequeno número de famílias informativas. / Chagas disease is caused by the protozoan Trypanosssoma cruzi and is usually transmitted by Triatominae bugs and affects about 12 million people in the American continent. In a previous study, segregation analysis showed evidence of a major gene with a small multifactorial component influencing the predisposition to the Trypanosoma cruzi infection in a population composed by 4697 individuals of 886 families from Northeastern Brazil in 1969-1970 at São Paulo, Brazil. In the present work, 69 individuals (18 positives to T. cruzi infection and 51 negative) belonging to 14 families were selected. They had the DNA extracted and genotyped using 250K SNPs DNA microarrays (GeneChip Mapping Affymetrix). 18 SNPs showed evidence of association between infection to T. cruzi with P<10-5, although after Bonferroni\'s correction only the SNP rs17469997 (minor allele frequency = 0.1667, adjusted-Bonferroni P = 0.015) on chromosome 10 was significant. The other 17 SNPs that showed association with T. cruzi infection with P<10-5 can still be informative in linkage analyses. On an effort to validate these findings, a multi point linkage analyses was performed with GeneHunter (KRUGLYAK et al., 1996) program and a two point linkage analyses were performed with SuperLink (FISHELSON e GEIGER, 2002) program, both analyses showed no significant results.

A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e atinge cerca de 12 milhões de pessoas no continente americano, a forma clássica de transmissão ocorre por intermédio do inseto vetor da subfamília Triatominae, popularmente chamado de barbeiro.Em um trabalho anterior, foi realizada uma análise de segregação complexa que indicou a presença de um gene principal, com um componente multifatorial influenciando a predisposição à infecção por Trypanosoma cruzi. A população é composta por 4697 indivíduos pertencentes a 886 famílias vindas do Nordeste do Brasil e tiveram os dados e amostras de sangue e saliva coletados entre 1969 e 1970.No presente estudo foi utilizada uma amostra de 69 indivíduos, sendo 18 positivos para a infecção por Trypanosoma cruzi e 51 negativos, distribuídos em 14 famílias. Os indivíduos tiveram seu DNA extraído e genotipado utilizando microarranjos de DNA de 260 K SNPs (GeneChip Mapping Affymetrix). Testes de associação mostraram significância entre a infecção por T. cruzi e o SNP rs17469997 do cromossomo 10, com P=0,015 após a correção de Bonferroni. Para validar estes inéditos resultados, análises de ligação multi-ponto foi feita com o programa GeneHunter (KRUGLYAK et al., 1996) e ligação dois-pontos com o programa SuperLink (FISHELSON e GEIGER, 2002), mas ambas não apresentaram resultados significativos, devido ao pequeno número de famílias informativas. / Chagas disease is caused by the protozoan Trypanosssoma cruzi and is usually transmitted by Triatominae bugs and affects about 12 million people in the American continent. In a previous study, segregation analysis showed evidence of a major gene with a small multifactorial component influencing the predisposition to the Trypanosoma cruzi infection in a population composed by 4697 individuals of 886 families from Northeastern Brazil in 1969-1970 at São Paulo, Brazil. In the present work, 69 individuals (18 positives to T. cruzi infection and 51 negative) belonging to 14 families were selected. They had the DNA extracted and genotyped using 250K SNPs DNA microarrays (GeneChip Mapping Affymetrix). 18 SNPs showed evidence of association between infection to T. cruzi with P<10-5, although after Bonferroni\'s correction only the SNP rs17469997 (minor allele frequency = 0.1667, adjusted-Bonferroni P = 0.015) on chromosome 10 was significant. The other 17 SNPs that showed association with T. cruzi infection with P<10-5 can still be informative in linkage analyses. On an effort to validate these findings, a multi point linkage analyses was performed with GeneHunter (KRUGLYAK et al., 1996) program and a two point linkage analyses were performed with SuperLink (FISHELSON e GEIGER, 2002) program, both analyses showed no significant results.

Introdução: estudos com Enfuvirtida (ENF) mostraram que mutações na HR1 da gp41 levam à resistência primária de cepas em pacientes sem tratamento prévio com inibidores de fusão (Derdeyn et al., 2000; Rimsky et. al., 1998; Sista et. al., 2002). Outros, que o uso contínuo de HAART leva à falha virológica (Shafer et. al., 1998; Shafer & Vuitton, 1999). Para a melhor escolha terapêutica recomenda-se usar a Genotipagem do HIV1 (Ministério da Saúde, 2008b; Perez-Elias et. al., 2003; Shafer et. al., 2001). Objetivos: avaliar o perfil de resistência do HIV1 ao ENF pelo sequenciamento da HR1 da gp41 em pacientes sob HAART, sem uso de inibidor de fusão. Realizar fenotipagem virtual da pol do HIV1 em trinta e duas cepas com resistência aos NRTI, NtRTI , NNRTI e PI para verificar indicação do ENF. Métodos: investigamos 877 prontuários de pacientes do CRT-DST/AIDS entre 5/2002 a 7/2005 e verificamos que 92 que haviam realizado o Teste de Genotipagem do HIV1 em nosso laboratório, sem tratamento prévio com inibidores de entrada poderiam participar do nosso estudo. O primeiro grupo, com 60 pacientes apresentou cepas sensíveis à pelo menos um antirretroviral (ARV) e o segundo com 32 cujas cepas apresentaram resistência parcial e completa às drogas. A região HR1/HR2 da gp41 foi seqüenciada com o kit Big Dye Terminator vs. 3.1. Alinhamos as seqüências e as comparamos com HXB2 através do programa BioEdit vs.7.0.9.0. As mutações de resistência ao ENF foram determinadas pelo algoritmo Francês (ANRS) e pelo da Universidade de Stanford. Submetemos as sequências ao Virtual Phenotype Assay (Virco, Bélgica) para obtermos a Fenotipagem Virtual. Os subtipos da HR1/HR2 da gp41 e do pol foram determinados por análises filogenéticas e os recombinantes, pelo Simplot v 3.5.1. Resultados: 89(97%) amostras foram seqüenciadas, 2 (2%) não amplificaram e 1 (1%) não tinha material suficiente. Destas, 82 (92%) eram do subtipo B, 6(7%) do F1 e 1(1%), do BF na gp41. No pol, 80(87%) eram B, 4(4%) eram F e 7(8%), eram FB. Três (3%) apresentaram resistência primária ao ENF, determinada pela N42D (1%), N43H (1%) e L44M (1%). Dez amostras tinham os polimorfismos Q39R(10%), N42H(10%), N42R(10%), N42N/S(10%) e N42S(60%). Na HR2, as mutações N126N/K, N126K/Q/E, E137E/K, E137K e S138S/A estavam presentes em 26% das cepas. Apesar das cepas apresentarem resistência aos ARV pelo teste de genotipagem, a fenotipagem virtual mostrou que 10% dos ARV ainda atuavam sobre elas, enquanto que 75% delas apresentaram resistência parcial e 15%, completa às drogas. Conclusão: nosso estudo sugere a introdução do teste de genotipagem da HR1/HR2 da gp41 antes de indicar do ENF em pacientes com falha terapêutica e que a Fenotipagem Virtual pode ser usada para a escolha do melhor esquema antirretroviral que permita uma supressão viral sustentada. / Background: studies using Enfuvirtide (ENF) have showed that mutations in the HR1 (gp41) have been associated with primary resistance in strains of the patients without previous treatment with fusion inhibitors. (Rimsky et. al.,1998; Derdeyn et al.,2000, Sista et. al.,2002). The widespread use of HAART may achieve maximal suppression of the viral load, but the viral rebound may occur, leading to virologic failure (Shafer et. al.,1998; Shafer & Vuitton,1999). To optimize therapeutic choices it is recommended to use the HIV1 Genotypic Assay. Objective: to evaluate the resistance profile in the HR1 in patients submitted to HAART, but naïve entry inhibitors. To make the Virtual Phenotypic Assay in the pol of the HIV1 strains isolated of the 32 patients with resistance to the antiretroviral (ARV) and to verify the possibility of using the ENF. Methods: we investigated 877 handbook patients of the CRT-DST/AIDS from May/2002 to July/2005. We identified 92 naïve patients to entry inhibitors included in our cohort to do genotypic assay; they were included in our research. The first group was composed by 60 persons with sensible strains to only one ARV. The second, with 32 presented strains with resistance to all ARV. HR1/HR2 was sequenced (ABIPrism BigDye Terminator vs 3.1). Bioedit Software vs.7.0.9.0 was used to compare sequences with the HIVHXB2. The resistance mutations to ENF were analyzed using French ANRS and Stanford HIV Drug Resistance Algorithm. The results by Virtual Phenotype Assay of 32 patients that presented regimen failure by Genotypic Assay predicted HIV phenotypic resistance. Subtype analysis were did by Phylogeny and the recombinants strains results, confirmed by Simplot v.3.5.1. Results: 89(97%) out of 92 samples were sequenced. Two of them (2%) could not be amplified and one (1%) we did not have enough material to use. In the HR1/HR2 82(92%) of the samples were typed as B, 6(7%), as F and 1(1%) as FB. In the pol 80(87%) were classified as B, 4(4%), as F and 7(8%) as FB. According to algorithms used, 3(3%) out of 89 ENF naïve patients presented complete resistance to this drug. One virus harbored the N42D mutation (1%), another, the N43H(1%) and the other one the L44M(1%). In 10 samples we observed the polymorphisms Q39R(1%), N42H(1%), N42R(1%), N42N/S(1%) and N42S(7%). In the HR2 domain the substitutions N126N/K, N126K/Q/E, E137E/K, E137K and S138S/A were present in 26% of the samples. Although strains presented resistance to the ARV by Genotypic Assay, in the Virtual Phenotypic Assay we verified that 10% of the drugs had some effect upon them. 75% of the strains presented partial and 15% completed resistance to ARV. Conclusion: it is important to introduce the HR1/HR2 genotyping test to verify resistance mutations to ENF before indicating this drug to patients with virologic failure. The virtual phenotypic assay can be used to select the better combination therapy to obtain viral suppression sustained response.