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Avaliação in vitro do polímero de mamona associado ao carbonato de cálcio com gentamicina como dispositivo de liberação de antibióticos / In vitro evaluation of castor polymer associated with calcium carbonate with gentamicin as a device for release of antibiotics

Soares, Paolo Neandro Bona 18 December 2012 (has links)
Na medicina equina, procedimentos cirúrgicos ortopédicos, principalmente os que envolvem fixação de fratura, apresentam um grande índice de infecção e mortalidade. Diferentes métodos de liberação local de antibiótico têm sido utilizados com sucesso na profilaxia e tratamento das infecções musculoesqueléticas. O objetivo da presente investigação foi avaliar a capacidade da poliuretana de mamona como dispositivo de liberação local de antibiótico in vitro já que não existem relatos deste polímero para tal finalidade, além de analisar o efeito bactericida da gentamicina liberada pelo polímero. Foram confeccionados 40 corpos de prova de polímero de mamona, divididos igualmente em 4 grupos, sendo um grupo controle, este sem adição de sulfato de gentamicina e três grupos com diferentes concentrações de gentamicina (6, 12 e 24 mg/g de polímero), onde avaliou-se a liberação de gentamicina em solução PBS com pH 7,4 através da espectrofotometria colorimétrica com reação da ninhidrina em diferentes dias (01, 02, 07, 14, 21 e 28). A espectrofotometria colorimétrica com reação da ninhidrina não se mostrou o método de análise adequado para avaliar a liberação a partir deste polímero, porém a poliuretana de mamona mostrou-se efetiva como mecanismo de liberação de gentamicina quando avaliada in vitro em culturas de S. aureus. / In equine medicine, orthopedic procedures, especially those involving fracture fixation, presented a high rate of infection and mortality. Different methods of local release of antibiotics have been used successfully for prophylaxis and treatment of orthopaedic infections. The objective of this research was to evaluate the ability of castor oil polyurethane as a controlled release local antibiotic in vitro since there are no reports of this polymer for this purpose and the bactericidal effect of gentamicin released. Were prepared 40 samples of castor oil polymer, divided equally into four groups, one control group, without this addition of gentamicin sulfate and three groups with different concentrations of gentamicin (6, 12 and 24 mg / g of polymer) that was evaluated the release of gentamycin in PBS at pH 7.4 by spectrophotometry colorimetric reaction with ninhydrin in different days (01, 02, 07, 14, 21 and 28). The spectrophotometry colorimetric reaction with ninhydrin did not prove to be an appropriate method of analysis for assessing the release from this polymer, but the castor oil polyurethane proved to be an effective as a mechanism for release of gentamicin when evaluated in vitro in cultures of S. aureus
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Efeitos da administração oral de glucosamina e condroitim sulfato associados ao ácido hialurônico em cavalos com osteoartrite / Effects of oral administration of glucosamine sulfate and chondroitin sulfate associated with hyaluronic acid in horses with osteoarthritis

Coelho, Joyce Martins 17 July 2009 (has links)
A osteoartrite é a causa mais comum de claudicação em cavalos e, frequentemente está associada com a queda de desempenho e abandono precoce das atividades esportivas. Numerosos estudos têm investigado o potencial da função dos condroprotetores na desaceleração do processo degenerativo e no reparo da cartilagem articular. A finalidade deste estudo foi investigar o efeito da administração oral de glucosamina, condroitim sulfato e ácido hialurônico associados sobre a evolução clínica, radiológica, e glicosaminoglicanos (GAGs) da urina, do líquido sinovial e sérico de cavalos acometidos por osteoartrite. Foram utilizados seis equinos, com idades entre seis e doze anos, machos ou fêmeas, submetidos ao mesmo manejo nutricional. Estes animais receberam doses diárias de condroitim sulfato (CS) (2,8 g), ácido hialurônico (AH) (0,1g), glucosamina (3,1 g), via oral, por 25 dias. Exames clínicos e radiográficos foram realizados anteriormente e após o tratamento. Amostras de urina, líquido sinovial, e sangue foram coletados antes da primeira administração do suplemento; a cada 5 dias durante o tratamento e a cada 7 dias após o tratamento, durante 55 dias. Os glicosaminoglicanos urinários foram identificados por eletroforese em gel de agarose após cromatografia de troca iônica e quantificados por densitometria. A determinação de AH sérico foi realizada por ELISA. Após proteólise do líquido sinovial o CS e a AH foram igualmente identificados por eletroforese e quantificados por densitometria. No início do experimento, as concentrações médias urinárias de CS, DS, HS e GAGs totais (2,96 mg/l, 0,66 mg/l, 0,42 mg/l, 4,05 mg/l respectivamente) foram inferiores as médias urinárias, logo após o tratamento (5,38 mg/l, 1,30 mg/l, 0,96 mg/l, 7,64 mg/l respectivamente) (p<0,05) e similares após 30 dias (4,24 mg/l, 1,09 mg/l, 0,36 mg/l, 5,69 mg/l). A concentração sérica de AH aumentou após o tratamento e ao final do experimento em relação do início dos mesmos (10,61 ng/ml, 12,58 ng/ml, 21,08 ng/ml respectivamente) (p<0,05). O CS do líquido sinovial apresentou comportamento similar ao CS urinário (início: 76,13 µg/ml, final do tratamento: 93,05 µg/ml, final do experimento: 61,61µg/ml). Já o AH no líquido sinovial não sofreu alterações significativas (início: 440,07 µg/ml, final do tratamento: 351,15 µg/ml, final do experimento: 375,99 µg/ml) apesar da tendência a diminuição. Concluiu-se que a administração oral de glucosamina, CS e AH associados apresenta uma tendência ao aumento dos GAGs urinários e do CS do líquido sinovial imediatamente após o tratamento, com diminuição até 30 dias; aumento sérico do AH e manutenção da concentração de AH no líquido sinovial, com tendência a diminuição. / Osteoarthritis is the most common cause of lameness in horses, and often is frequently associated with poor performance and early end of sports activities. Numerous studies have investigated the potential function of chondroprotective drugs in slow down the degenerative process and helping to repair the joint cartilages. The purpose of this study was to investigate the effect of oral administration of glucosamine, chondroitin sulfate and hyaluronic acid associated with the clinical, radiological, and urinary glycosaminoglycans (GAGs), in the serum and synovial fluid of horses affected by osteoarthritis. We used six horses, aged between six and twelve years old, male or female, undergoing the same nutritional management. These animals received daily doses of condroitim sulfate (CS) (2.8 g), hyaluronic acid (HA) (0.1 g), glucosamine (3.1 g), oral route, for 25 days. Clinical and radiographic examinations were performed before and at the end of treatment. Samples of urine, synovial fluid and serum were collected before the first administration of the supplement, and every 5 days during the treatment and every 7 days after the end of the treatment, for a total of 55 days. The urinary glycosaminoglycans have been identified for agarose gel electrophoresis after ion-exchange chromatography on Q-Sepharose and quantified by densitometry. The determination of serum HA was performed by ELISA. After the sinovial liquid proteolysis the CS and the HA have been equally identified for eletrophoresis and quantified by densitometry. In the beginning of this study the avarage of urinary concentrations of CS, DS, HS and total GAGs (2.96 mg/l, 0.66 mg/l, 0.42 mg/l, 4.05 mg/l respectively) have been inferior the urinary averages, right after the treatment (5.38 mg/l, 1.30 mg/l, 0.96 mg/l, 7.64 mg/l respectively)(p< 0,05) and similar after 30 days (4.24 mg/l, 1.09 mg/l, 0.36 mg/l, 5.69 mg/l respectively). The HA serum concentration increased after treatment and the end of the experiment regarding the inicial values (10.61 ng/ml, 12.58 ng/ml, 21.08 ng/ml respectively) (p<0.05). The synovial fluid CS showed a similar behavior to the urinary CS (beginning: 76.13 µg/ml, end of treatment: 93.05 µg/ml, end of the experiment: 61.61 µg/ml). But the synovial fluid HA did not change significantly (beginning: 440.07 µg/ml, end of treatment: 351.15 µg/ml, end of the experiment: 375.99 µg/ml) despite the tendency to decrease. It was concluded that oral administration of glucosamine, CS and HA associated shows a tendency to increase the urinary GAGs and CS in the synovial fluid immediately after treatment, with reduction in 30 days; increase of serum HA and maintenance of the concentration of HA in synovial fluid, with a tendency to decrease.
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Identificação de infecção por protozoários da família Sarcocystidae em sistema nervoso central de equinos com sinais clínicos neurológicos e reprodutivos / Infection by protozoa of Sarcocystidae family in central nervous system from equine presenting neurological and reproductive symptomatology

Eliana Monteforte Cassaro Villalobos 27 April 2012 (has links)
Pela grande produção de equinos no Brasil, perdas econômicas causadas por mortalidade ou perdas reprodutivas neste plantel simbolizam grandes prejuízos, tanto na produção para o mercado interno quanto para a exportação. Necessário se faz o acompanhamento de enfermidades que afetam o sistema nervoso desta espécie. Agentes virais e bacterianos causando problemas neurológicos e reprodutivos, nesta espécie, são amplamente estudados no Brasil. Pouco se conhece sobre o papel dos protozoários da família Sarcocystidae em determinar sinais clínicos neurológicos e reprodutivos. O objetivo deste estudo é identificar protozoários formadores de cistos, com potencial para causar doença neurológica e reprodutiva, em amostras de tecido encefálico de equinos com diagnóstico clínico de encefalopatias e de fetos abortados. Foram analisadas 165 amostras de SNC e 21 amostras de feto abortado de equinos, enviados ao Instituto Biológico para realização de exames laboratoriais. As amostras foram submetidas à nested PCR-ITS1 com primers direcionados às regiões conservadas do lócus ribossômico de protozoários da família Sarcocystidae. Após confirmação do resultado, os produtos de amplificação foram sequenciados para a determinação das sequências ITS1, discriminatórias entre as diversas espécies de protozoários da família Sarcocystidae. Das 15 amostras positivas (duas de feto abortado e 13 de SNC de equino com sintomatologia neurológica) em 14 o protozoário envolvido foi Toxoplasma gondii e em uma delas Sarcocystis neurona. Para Neospora spp não foi encontrada nenhuma amostra positiva. Nas amostras de SNC também foi realizado o exame histopatológico para análise das alterações histopatológicas. Todos os materiais positivos para S. neurona ou T. gondii apresentaram algum tipo de alteração (infiltrado inflamatório meníngeo/neurópilo), congestão/edema, hemorragia, necrose, malácia, indicando a ação de patógeno neurotrópico. A frequência de amostras positivas pela nested PCR-ITS1, para a presença de protozoários foi 7,9% (13/165) e de abortamento por protozário (T. gondii) foi de 9,5% (2/21). Sarcocystis neurona foi encontrado em apenas uma amostra de SNC. Pelos resultados é possível inferir que a ocorrência de mieloencefalite e abortamentos causados pelos protozoários Sarcocistideos em equinos pode revelar-se maior do que se considera atualmente, caso o estudo do SNC nesta espécie seja executado rotineiramente para a conclusão de casos clínicos. / Regarding the importance of equine husbandry in Brazil, economic losses due to mortality or reproductive failures within these herds could mean significant problems for national and international trade market. Therefore, it is necessary to research for diseases affecting the central nervous system (CNS). In Brazil, a broad amount of studies has been made concerning viral and bacterial neurvous and/or reproductive diseases. Although, little is stablished about the rule of protozoan from Sarcocystidae family leading to that kind of symptomatology. This study aimed to identify cystic protozoa which are potentially pathogenic for reproductive and neural tracts using samples from equine encephalic tissue of animals diagnosed with clinical encephalopathy and aborted fetuses. 165 samples of equine CNS and 21 aborted fetuses of this same species were analyzed in the Instituto Biológico facilities. They were submitted to nested PCR-ITS1 using primer to conserved regions from ribosomal locus of Sarcocystidae family protozoa. After confirmatory results, amplified samples were submitted to sequencing for determination of ITS-1 sequences, which are discriminatory concerning the several species of protozoan from Sarcocystidae family. Among the 15 positive identified samples (2 from aborted fetuses and 13 from adult equine CNS), in 14 were detected Toxoplasma gondii as the protozoa involved with the symptoms and in one of them Sarcocystis neurona was detected. None was found positive for Neospora spp. All samples collected were examined using histopathological techniques looking for disease findings. Positive samples for S. neurona or T. gondii showed varied types of alteration (neutrophilic/meningeal inflammatory infiltrate), congestion/edema, hemorrhage, necrosis and malacia, indicating that they were affected by a neurotropic pathogen. The frequency of parasitic equine encephalitis using nested PCR-ITS1 was 7,9% (13/165) and abortion by protozoa (T. gondii was 9,5% (2/21). The incidence of these diseases may be higher than registered nowadays if equine CNS could be analyzed during clinical diagnosis routine for case conclusion.
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Infecção por Rickettsia spp em equídeos e carrapatos do Centro-Norte do Piauí / Infection with Rickettsia spp in horses and donkeys and ticks in the Center-North of Piaui

Marcos Gomes Lopes 11 July 2012 (has links)
Com o objetivo de avaliar sorológica e molecularmente a ocorrência de infecção por Rickettsia spp em equídeos e carrapatos da região Centro-Norte do estado do Piauí, foram realizadas coletas de sangue e de carrapatos que parasitavam equídeos em 10 localidades distribuídas nas microrregiões de: Campo Maior, Teresina e Valença, nos meses de agosto dos anos de 2010 e 2011. Soros de 129 equinos e 110 asininos foram analisados pela Reação de Imunofluorescência Indireta para detecção de anticorpos anti-Rickettsia spp (R. rickettsii, R. parkeri, R. amblyommii, R. rhipicephali e R. bellii) e 105 Dermacentor nitens, oito Amblyomma cajennense e três Amblyomma parvum foram submetidos a reação de polimerase em cadeia utilizando os primers dos genes gltA, ompA e ompB específicos para o gênero Rickettsia e rickettsias do grupo da febre maculosa (GFM). Do total de animais examinados 52,3% foram positivos para pelo menos uma das rickettsias testadas. Somente em dois carrapatos dos 116 analisados, ambos A. parvum, foram positivos para Rickettsia do GFM, apresentando esta cepa 100% de similaridade com \"Candidatus Rickettsia andeanae\", obtida no Peru. Pelos achados sorológicos concluiu-se que \"Candidatus Rickettsia andeanae\" cepa Piauí e ou R. amblyommii, seriam juntamente com R. bellii, os prováveis agentes circulantes na região centro-norte do estado do Piauí. D. nitens, A. cajennense e A. parvum são espécies de carrapatos que infestam equídeos na mesorregião Centro-Norte do Piauí. \"Candidatus Rickettsia andeanae\" cepa Piauí teve seu primeiro relato no Brasil. Animais com acesso à mata ou mantidos em piquetes apresentaram associação com a ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia spp (p<0.01). / In order to evaluate serological and molecular occurrence of infection with Rickettsia spp in horses and ticks in the central-northern region of the state of Piauí, blood samples were taken and ticks infesting horses are collected in ten locations distributed in the regions of: Campo Maior, Teresina and Valença, in August of 2010 and 2011. Sera from 129 horses and 110 donkeys were analyzed by immunofluorescent antibody test for detection of antibodies to Rickettsia spp (R. rickettsii, R. parkeri, R. amblyommii, R. rhipicephali and R. bellii) and 105 Dermacentor nitens, eight Amblyomma cajennense and three Amblyomma parvum were subjected to PCR analysis using primers of the genes gltA, ompA and ompB specific to the genus Rickettsia and spotted fever group (SFG). From all of the examined animals, 52.3% were positive for at least one of Rickettsia tested. Only two of the 116 ticks analyzed, both A. parvum, were positive for Rickettsia of the SFG, and the strain showing 100% similarity with \"Candidatus Rickettsia andeanae\" obtained in Peru. By the serological finds it was concluded that \"Candidatus Rickettsia andeanae\" strain Piauí and or R. amblyommii, together with R. bellii, are probably the agents circulating in the central-northern region of Piauí state. D. nitens, A. cajennense and A. parvum are species of ticks that infest horses in the region. \"Candidatus Rickettsia andeanae\" strain Piauí was firstly described in ticks in Brazil. Horses with access to forest or kept in paddocks were associated with the occurrence of anti-Rickettsia spp antibodies (p<0.01).
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Avaliação cirúrgica e laboratorial da utilização de pericárdio homólogo em lesões por abrasão em serosa de cólon maior (flexura pélvica) de equinos / Surgical and laboratorial evaluation of the use of homologous pericardium in abrasion lesions on large colon serosal surface in horses

Paulo Ari Tietböhl Leiria 16 December 2010 (has links)
As aderências intra-abdominais são complicações relativamente comuns das cirurgias abdominais dos equinos após uma intervenção cirúrgica, podendo resultar em processos obstrutivos, dor abdominal recorrente e vôlvulos. Os avanços técnicos e farmacológicos são direcionados a minimizar o trauma e a inflamação peritoneal, aumentar o processo de fibrinólise, promover movimentação intestinal e separar tecidos potencialmente adesiogênicos durante a fase inicial de cicatrização. No presente trabalho foram utilizados 10 equinos, machos, SRD, entre 4 e 15 anos e peso entre 300 e 400kg. Incluíram-se no experimento os animais que não apresentaram alterações no exame físico e laboratorial, prévios. A membrana biológica utilizada era proveniente do banco de membranas biológicas do HOVET da FMVZ-USP. O protocolo anestésico consistiu de sedação com associação de xilazina 10% (0,7mg/kg) e tartarato de butorfanol (0,04mg/kg). A laparotomia foi realizada pelo flanco esquerdo com os animais em posição quadrupedal. No ponto médio de sua exteriorização (flexura pélvica) foi induzida lesão por abrasão em superfície serosa, com dimensão de 7x7 cm. Após a indução das lesões, nos animais do grupo 1 (cinco animais), a área lesionada foi recoberta com membrana biológica. Nos animais do grupo 2 (cinco animais), o segmento intestinal exteriorizado, após a criação das lesões, foi lavado com solução fisiológica e reposicionado na cavidade abdominal. Em ambos os grupos foi realizada a sutura de um ponto simples no centro da lesão utilizando-se fio de nylon 2-0, com o objetivo de referendar a lesão criada. As suturas dos planos musculares e subcutâneo foram realizadas com sutura contínua com fio absorvível Poliglactina 910 n0 2 e n0 00 respectivamente, e a pele foi suturada de maneira contínua utilizando-se nylon n0 0. A avaliação pós-operatória consistiu de avaliação física diária e coleta de material para análise laboratorial (sangue, soro e líquido peritoneal) semanalmente, durante quatro semanas. Decorridos 30 dias após o procedimento cirúrgico, os animais foram submetidos à nova laparotomia a fim de verificar a presença de aderências intra-abdominais, aspecto macroscópico das lesões e do implante, e realização de biópsia intestinal. A coleta do material para a realização dos exames laboratoriais foi realizada nos momentos: M0- período pré-operatório imediato, M7- 7 dias de pós-operatório, M14- 14 dias de pós-operatório, M21- 21 dias de pós-operatório, M28- 28 dias de pós-operatório. A laparotomia realizada em posição mais ventral e seguindo a técnica de grade possibilitou menor trauma cirúrgico, mas esta abordagem ofereceu ao cirurgião menor campo operatório, determinando alguma dificuldade de exteriorização do segmento intestinal. A evolução clínica dos animais foi satisfatória apresentando vantagem quando comparada a citação da literatura. Durante a reavaliação cirúrgica verificou-se presença de tecido cicatricial fibroso entre os planos musculares que determinou pequena dificuldade para o acesso da cavidade abdominal. Não foram observadas aderências intra-abdominais em ambos os grupos. O aspecto macroscópico das lesões no grupo experimental caracterizou-se por extensa área de hiperemia com cobertura de tecido seroso; e no grupo controle, verificou-se pequeno tecido cicatricial recobrindo o material de sutura. A realização das biópsias intestinais foi executada com facilidade bem como sua sutura. A avaliação histológica demonstrou em ambos os grupos intensa infiltração eosinofílica, presença de colágeno em fase de maturação além de evidências de intensa neovascularização. A partir da análise dos valores laboratoriais observaram-se diferenças estatísticas significativas nos valores sanguíneos de bilirrubinas, hematócrito, monócito, uréia; e no líquido peritoneal estas diferenças foram manifestadas em proteína, densidade e número de leucócitos segmentados. Conclui-se que a abrasão focal de serosa de cólon maior como único fator promotor de aderências intra-abdominais fibrosas foi insuficiente. Além disso, a utilização de pericárdio equino como proteção de áreas de lesão intestinal, mesmo não tendo sido comprovada sua eficácia na minimização das aderências intra-abdominais, apresenta-se viável e possível, pois não foram observadas diferenças estatisticamente significativas (hematológicas, bioquímicas ou do líquido peritoneal) na comparação entre os grupos, ou alterações que determinasse efeitos deletérios aos animais. / The intra-abdominal adhesions are relatively common complications of abdominal surgery in horses and they can result in obstructive processes, abdominal pain and recurrent volvulus. The technical and pharmacological advances are aimed to minimize trauma and peritoneal inflammation, increase the fibrinolysis process, promote intestinal peristalsis and separate potentially adhesiogenic tissues during the initial phase of healing. In this study were used 10 horses, male, mixed breed, between 4 and 15 years old and weighing between 300 and 400kg. The experiment included animals that showed no changes in physical and laboratorial examination. The biological membrane was from the bank of biological membranes of the HOVET-FMVZ-USP. The anesthetic protocol consisted of sedation with a combination of ketamine 10% (0.7 mg / kg) and butorphanol (0.04 mg / kg). The laparotomy was performed by the left flank and the animal was kept in standing position. At the midpoint of the pelvic flexure was induced the injury by abrasion in serous surface, with a size of 7x7 cm. After the lesion induction, the group 1 (five animals) had the injured area covered with a biological membrane. The group 2 (five animals) had the intestinal segment exteriorized, and after the lesion creation it was washed with saline and repositioned in the abdominal cavity. In both groups was performed suturing a single point in the center of the lesion using 2-0 nylon, in order to endorse the lesion created. The sutures of the muscle layers and subcutaneous tissue were performed with continuous suture with Polyglactin 910 n0 2 and n0 00 respectively, and the skin was sutured continuously using nylon n0 0. The postoperative evaluation consisted of daily physical assessment and collection of material for laboratory analysis (blood, serum and peritoneal fluid) weekly for four weeks. After 30 days, the animals underwent another laparotomy to verify the presence of intra-abdominal adhesions, macroscopic aspect of the lesions and implant, and intestinal biopsy. The collection of material for the completion of laboratory tests was performed at moments M0- pre-operative, M7- 7 days post-operatively, M14- 14 days post-operatively, M21- 21 days post-operatively, M28- 28 days post-operatively. The laparotomy was performed in ventral position following the technique of grid that´s promoted less surgical trauma, but this approach offered to surgeon less surgical field, causing some difficulty for exteriorization of the intestinal segment. The clinical outcome was satisfactory showing advantage when compared literature. During the surgical reassessment verified the presence of fibrous scar tissue between the muscle layers that determined some trouble to access the abdominal cavity. There were no intra-abdominal adhesions in both groups. The macroscopic aspect of lesions in the experimental group was characterized by extensive area of redness covered serous tissue, and the control group there was little scar tissue overlying the suture material. The intestinal biopsies and suture were performed easily. The histological evaluation showed in both groups intense eosinophilic infiltration, presence of collagen in the maturation stage in addition to evidence of intense neovascularization. The laboratory results showed statistically significant differences in blood levels of bilirubin, hematocrit, monocyte, urea, and into peritoneal fluid, these differences were manifested in protein density and leukocytes. Concluded that the focal serosal abrasion of the large colon as the single factor promoting intra-abdominal fibrous adhesions was insufficient. Furthermore, the use of equine pericardium as protecting areas of intestinal injury, even without prove their effectiveness in minimizing intra-abdominal adhesions, it appears feasible and possible, because there were no statistically difference (hematological, biochemical or peritoneal fluid) between the groups, or changes that would determine deleterious effects to the animals.
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Avaliação cirúrgica e laboratorial da utilização de pericárdio homólogo em lesões por abrasão em serosa de cólon maior (flexura pélvica) de equinos / Surgical and laboratorial evaluation of the use of homologous pericardium in abrasion lesions on large colon serosal surface in horses

Leiria, Paulo Ari Tietböhl 16 December 2010 (has links)
As aderências intra-abdominais são complicações relativamente comuns das cirurgias abdominais dos equinos após uma intervenção cirúrgica, podendo resultar em processos obstrutivos, dor abdominal recorrente e vôlvulos. Os avanços técnicos e farmacológicos são direcionados a minimizar o trauma e a inflamação peritoneal, aumentar o processo de fibrinólise, promover movimentação intestinal e separar tecidos potencialmente adesiogênicos durante a fase inicial de cicatrização. No presente trabalho foram utilizados 10 equinos, machos, SRD, entre 4 e 15 anos e peso entre 300 e 400kg. Incluíram-se no experimento os animais que não apresentaram alterações no exame físico e laboratorial, prévios. A membrana biológica utilizada era proveniente do banco de membranas biológicas do HOVET da FMVZ-USP. O protocolo anestésico consistiu de sedação com associação de xilazina 10% (0,7mg/kg) e tartarato de butorfanol (0,04mg/kg). A laparotomia foi realizada pelo flanco esquerdo com os animais em posição quadrupedal. No ponto médio de sua exteriorização (flexura pélvica) foi induzida lesão por abrasão em superfície serosa, com dimensão de 7x7 cm. Após a indução das lesões, nos animais do grupo 1 (cinco animais), a área lesionada foi recoberta com membrana biológica. Nos animais do grupo 2 (cinco animais), o segmento intestinal exteriorizado, após a criação das lesões, foi lavado com solução fisiológica e reposicionado na cavidade abdominal. Em ambos os grupos foi realizada a sutura de um ponto simples no centro da lesão utilizando-se fio de nylon 2-0, com o objetivo de referendar a lesão criada. As suturas dos planos musculares e subcutâneo foram realizadas com sutura contínua com fio absorvível Poliglactina 910 n0 2 e n0 00 respectivamente, e a pele foi suturada de maneira contínua utilizando-se nylon n0 0. A avaliação pós-operatória consistiu de avaliação física diária e coleta de material para análise laboratorial (sangue, soro e líquido peritoneal) semanalmente, durante quatro semanas. Decorridos 30 dias após o procedimento cirúrgico, os animais foram submetidos à nova laparotomia a fim de verificar a presença de aderências intra-abdominais, aspecto macroscópico das lesões e do implante, e realização de biópsia intestinal. A coleta do material para a realização dos exames laboratoriais foi realizada nos momentos: M0- período pré-operatório imediato, M7- 7 dias de pós-operatório, M14- 14 dias de pós-operatório, M21- 21 dias de pós-operatório, M28- 28 dias de pós-operatório. A laparotomia realizada em posição mais ventral e seguindo a técnica de grade possibilitou menor trauma cirúrgico, mas esta abordagem ofereceu ao cirurgião menor campo operatório, determinando alguma dificuldade de exteriorização do segmento intestinal. A evolução clínica dos animais foi satisfatória apresentando vantagem quando comparada a citação da literatura. Durante a reavaliação cirúrgica verificou-se presença de tecido cicatricial fibroso entre os planos musculares que determinou pequena dificuldade para o acesso da cavidade abdominal. Não foram observadas aderências intra-abdominais em ambos os grupos. O aspecto macroscópico das lesões no grupo experimental caracterizou-se por extensa área de hiperemia com cobertura de tecido seroso; e no grupo controle, verificou-se pequeno tecido cicatricial recobrindo o material de sutura. A realização das biópsias intestinais foi executada com facilidade bem como sua sutura. A avaliação histológica demonstrou em ambos os grupos intensa infiltração eosinofílica, presença de colágeno em fase de maturação além de evidências de intensa neovascularização. A partir da análise dos valores laboratoriais observaram-se diferenças estatísticas significativas nos valores sanguíneos de bilirrubinas, hematócrito, monócito, uréia; e no líquido peritoneal estas diferenças foram manifestadas em proteína, densidade e número de leucócitos segmentados. Conclui-se que a abrasão focal de serosa de cólon maior como único fator promotor de aderências intra-abdominais fibrosas foi insuficiente. Além disso, a utilização de pericárdio equino como proteção de áreas de lesão intestinal, mesmo não tendo sido comprovada sua eficácia na minimização das aderências intra-abdominais, apresenta-se viável e possível, pois não foram observadas diferenças estatisticamente significativas (hematológicas, bioquímicas ou do líquido peritoneal) na comparação entre os grupos, ou alterações que determinasse efeitos deletérios aos animais. / The intra-abdominal adhesions are relatively common complications of abdominal surgery in horses and they can result in obstructive processes, abdominal pain and recurrent volvulus. The technical and pharmacological advances are aimed to minimize trauma and peritoneal inflammation, increase the fibrinolysis process, promote intestinal peristalsis and separate potentially adhesiogenic tissues during the initial phase of healing. In this study were used 10 horses, male, mixed breed, between 4 and 15 years old and weighing between 300 and 400kg. The experiment included animals that showed no changes in physical and laboratorial examination. The biological membrane was from the bank of biological membranes of the HOVET-FMVZ-USP. The anesthetic protocol consisted of sedation with a combination of ketamine 10% (0.7 mg / kg) and butorphanol (0.04 mg / kg). The laparotomy was performed by the left flank and the animal was kept in standing position. At the midpoint of the pelvic flexure was induced the injury by abrasion in serous surface, with a size of 7x7 cm. After the lesion induction, the group 1 (five animals) had the injured area covered with a biological membrane. The group 2 (five animals) had the intestinal segment exteriorized, and after the lesion creation it was washed with saline and repositioned in the abdominal cavity. In both groups was performed suturing a single point in the center of the lesion using 2-0 nylon, in order to endorse the lesion created. The sutures of the muscle layers and subcutaneous tissue were performed with continuous suture with Polyglactin 910 n0 2 and n0 00 respectively, and the skin was sutured continuously using nylon n0 0. The postoperative evaluation consisted of daily physical assessment and collection of material for laboratory analysis (blood, serum and peritoneal fluid) weekly for four weeks. After 30 days, the animals underwent another laparotomy to verify the presence of intra-abdominal adhesions, macroscopic aspect of the lesions and implant, and intestinal biopsy. The collection of material for the completion of laboratory tests was performed at moments M0- pre-operative, M7- 7 days post-operatively, M14- 14 days post-operatively, M21- 21 days post-operatively, M28- 28 days post-operatively. The laparotomy was performed in ventral position following the technique of grid that´s promoted less surgical trauma, but this approach offered to surgeon less surgical field, causing some difficulty for exteriorization of the intestinal segment. The clinical outcome was satisfactory showing advantage when compared literature. During the surgical reassessment verified the presence of fibrous scar tissue between the muscle layers that determined some trouble to access the abdominal cavity. There were no intra-abdominal adhesions in both groups. The macroscopic aspect of lesions in the experimental group was characterized by extensive area of redness covered serous tissue, and the control group there was little scar tissue overlying the suture material. The intestinal biopsies and suture were performed easily. The histological evaluation showed in both groups intense eosinophilic infiltration, presence of collagen in the maturation stage in addition to evidence of intense neovascularization. The laboratory results showed statistically significant differences in blood levels of bilirubin, hematocrit, monocyte, urea, and into peritoneal fluid, these differences were manifested in protein density and leukocytes. Concluded that the focal serosal abrasion of the large colon as the single factor promoting intra-abdominal fibrous adhesions was insufficient. Furthermore, the use of equine pericardium as protecting areas of intestinal injury, even without prove their effectiveness in minimizing intra-abdominal adhesions, it appears feasible and possible, because there were no statistically difference (hematological, biochemical or peritoneal fluid) between the groups, or changes that would determine deleterious effects to the animals.
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Avaliação da suplementação com levedura viva sobre a imunidade de éguas gestantes e potros / Evaluation of live yeast supplementation on the immunity of pregnant mares and foals

Bianconi, Camila 15 February 2019 (has links)
Pensando nas falhas de transferência de imunidade passiva e nos prejuízos gerados para a equideocultura, este projeto visou avaliar a suplementação com levedura viva, Saccharomyces cerevisiae vivas na dieta de éguas no terço final da gestação sobre a transferência de imunidade passiva, através da avaliação do colostro, concentração de imunoglobulina, perfil celular e composição e desenvolvimento do sistema imune dos potros. O experimento foi conduzido nas dependências do Laboratório de Pesquisa em Saúde Digestiva e Desempenho de Equinos (LabEqui), FMVZ/USP no Campus Fernando Costa em Pirassununga/SP. Foram utilizadas dezesseis éguas prenhes sem raça definida, com idade média de 90&#177;7 meses, mantidas em piquetes sem acesso a gramíneas durante todo o período experimental. A dieta foi formulada para atender a exigência da categoria de acordo com NRC 2007, foi composta de feno de gramínea e concentrado, água e sal mineral ad libitum. As mesmas foram divididas em dois grupos de oito animais cada, 1) grupo controle: feno de Tifton 85 e concentrado comercial sem suplementação, 2) grupo suplementado: feno de Tifton 85 e ração comercial com suplementação de Actisaf HR Plus Sc 47&reg; - 10 g/animal/dia. O delineamento foi inteiramente casualizado (DIC), com medidas repetidas no tempo. Foi observado efeito para células mononucleares no colostro no grupo suplementado (P=0,05) e para células polinucleares para grupo controle (P=0,05). Pode-se concluir que suplementação com levedura viva Saccharomyces cerevisae na dieta de éguas no terço final da gestação, melhora a qualidade do colostro no que se refere ao perfil celular porém não melhora a transferência de imunidade passiva dos potros. / Considering the failures of passive immunity transfer and losses generated for equideoculture, this project aimed to evaluate the live yeast supplement Saccharomyces cerevisiae in the diet of mares in the final third of gestation on the transference of passive immunity through the evaluation of colostrum , immunoglobulin concentration, cellular profile and composition and development of the immune system of foals. The experiment was conducted at the Laboratory of Research on Digestive Health and Performance of Equines (LabEqui), FMVZ / USP at the Fernando Costa Campus in Pirassununga / SP. Sixteen pregnant mares were used, with mean age of 90 &#177; 7 months, kept in pickets without access to grasses throughout the experimental period. The diet was formulated to meet the requirement of the category according to NRC 2007, was composed of grass hay and concentrate, water and mineral salt ad libitum. They were divided in two groups of eight animals each, 1) control group: Tifton 85 hay and commercial concentrate without supplementation, 2) supplemented group: Tifton 85 hay and commercial feed with Actisaf HR Plus Sc 47&reg;-10 supplementation g / animal / day. A completely randomized (DIC) design, with measures repeated over time was considered in the model. There was observed a statistical effect of supplementation (P = 0.05) over mononuclear cells in colostrum and for polynuclear cells (P = 0.05). It can be concluded that supplementation with live yeast Saccharomyces cerevisae in the diet of mares in the final third of gestation may improve quality of colostrum with respect to the cellular profile, but does not improve the transference of passive immunity of the colts.
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Efeito da suplementação com microalgas ricas em ácido docosahexaenóico durante o período periparto sobre a involução uterina de éguas / Effects of docosahexaenoic acid rich microalgae supplementation in periparturient mares on uterine regression

Villela, Saulo Baracat 26 October 2018 (has links)
O presente estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da adição de suplemento contendo microalgas ricas em ácido docosahexaenoico (DHA) no período periparto sobre o processo de involução uterina de éguas. Foram utilizadas 18 éguas sem raça definida, com 410 &#177; 39,5 kg (média &#177; desvio padrão) de peso corporal, 7,83 &#177; 2,01 anos de idade e escore de condição corporal 5,39 &#177; 0,61. Noventa dias antes da data de parto prevista, os animais foram aleatoriamente alocados para receber um dos tratamentos experimentais: CONT: sem a adição de suplemento rico em microalgas; e ALG: com a adição de 0,06 g/kg de peso corporal/dia de microalga (All-G Rich&reg;, Alltech, Nicholasville, KY). As éguas foram mantidas em pastagem de Cynodon e receberam 1 kg/dia de concentrado no pré-parto e 2 kg/ dia após o parto, divididos em dois fornecimentos diários. As éguas foram avaliadas por palpação retal, ultrassonografia no modo B e Doppler, aos 3, 7, 11, 15 após o parto e 4 e 7 dias após a primeira ovulação pós parto. Os dados foram divididos em avaliações pós parto (3, 7, 11 e 15 dias) e pós ovulação (4 e 7 dias) e foram avaliados como medidas repetidas no tempo, utilizando o PROC MIXED do SAS (versão 9.3). Independentemente (P &ge; 0,508) do tempo de avaliação, a adição de suplemento rico em microalgas não afetou (P &ge; 0,265) o diâmetro do endométrio. Em relação aos animais do grupo CONT, os animais do grupo ALG apresentaram menor (P = 0,042) diâmetro do mesométrio do corno gestante após o parto e tenderam (P = 0,093) a apresentar menor diâmetro no corno não gestante. Os diâmetros do endométrio e mesométrio foram afetadas (P &lt; 0,001) pelo tempo de avaliação pós parto. De maneira geral, com a passagem do tempo, os diâmetros foram reduzidos. Nem a adição de microalgas (P &ge; 0,185), nem o tempo de avaliação (P &ge; 0,164) afetaram a vascularização do endométrio e do mesométrio. A suplementação com microalgas aumentou (P = 0,004) a ecogenicidade uterina pós parto, sem afetar (P &ge; 0,392) a presença de fluido uterino, o diâmetro do folículo dominante, os intervalo entre o parto e a primeira ovulação, assim como o escore de condição corporal dos animais. Independentemente (P &ge; 0,523) do tratamento, com o passar do tempo, houve redução (P &le; 0,05) da quantidade de fluido uterino e aumento (P &le; 0,05) do diâmetro do folículo dominante. A suplementação com microalgas ricas em DHA na dieta de éguas, apesar de reduzir o diâmetro do mesométrio e aumentar a ecogenicidade uterina, não afeta a recuperação uterina pós-parto, nem reduz o intervalo entre o parto e a primeira ovulação. / The present study aimed to evaluate the effect of dietary supplementation of microalgae rich in docosahexaenoic acid (DHA) to periparturient mares on uterine involution process. Eighteen mares with 410 &#177; ± 39.5 kg (mean ± standard deviation) of body weight, 7.83 &#177; 2.01 years of age and body condition score 5.39 &#177; 0.61 were used. Ninety days before the expected calving date, animals were randomly allocated to receive one of the experimental treatments: CONT: without supplemental microalgae; and ALG: algae, with the addition of 0.06 g/kg body weight/d of microalgae (All-G Rich&reg;, Alltech, Nicholasville, KY). Animals were maintained on Cynodon pasture and received 1 kg /d of concentrate supplement in prepartum and 2 kg/d in post partum, supplied twice daily. Mares were evaluated by rectal palpation, B mode and Doppler ultrasonography at 3, 7, 11, and 15 days postpartum and 4 and 7 days post ovulation. The data were divided into postpartum (3, 7, 11 and 15 days) and post ovulation (4 and 7 days postpartum) evaluations and were evaluated as time-repeated measures using SAS MIXED PROC (version 9.3). The addition of ALG had no effect (P &ge; 0.508) on endometrial diameter regardless evaluation time (P &ge; 0.265). In relation to CONT-treated animals, the animals of the ALG group had lower (P = 0.042) mesometrial diameter of the pregnant horn and tended (P = 0.093) to show decreased diameter of non-pregnant horn. Endometrial and mesometrial diameters were affected (P &lt;0.001) by the time of postpartum evaluation. In general, with passage of time, the diameters were reduced. Neither the addition of microalgae (P &ge; 0.185) nor the time of evaluation (P &ge; 0.164) affected endometrium and mesometrium vascularization. Microalgae supplementation increased (P = 0.004) postpartum uterine echogenicity without affecting (P &ge; 0.392) the presence of uterine fluid, the diameter of dominant follicle, interval between partum and fist ovulation, and animal body score condition. Over time, there was decrease (P &le; 0.05) in the amount of uterine fluid and increase (P &le; 0.05) in dominant follicle. Dietary supplementation of DHA-rich microalgae in periparturients mares, although reducing mesometrium diameter and increasing uterine echogenicity, shows no effect on postpartum uterine recovery and interval between partum and first ovulation.
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Padronização da cultura de queratinócitos lamelares de casco equino

Pfeifer, João Pedro Hübbe January 2017 (has links)
Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Resumo: Os queratinócitos são células presentes na epiderme, constituída pelo epitélio estratificado pavimentoso queratinizado. Estas células organizam-se em camadas de diferentes estágios de maturação celular (camada basal ou germinativa, espinhosa, granulosa, lúcida e córnea) e tem a função de revestimento desses tecidos. Diversos estudos buscam elucidar e caracterizar tecidos hígidos de origem epitelial, como pele, olhos e casco, para que possam identificar os mecanismos de desenvolvimento de enfermidades nesses tecidos. O casco equino é formado por epiderme em diferentes estágios de queratinização, subdivididos em estrato externo ou parede do casco, estrato médio e estrato interno, nesse último estão localizadas as lâminas epidermais primárias (LEP) e secundárias (LES) onde os queratinócitos estão presentes junto a membrana basal (transição de epiderme e derme, junção que faz a adesão do casco com a falange distal). É notória a importância do casco na saúde dos equinos, mas o conhecimento em nível celular é pouco entendido. Estudos envolvendo o cultivo de queratinócitos equinos são escassos. Sabe-se que o desenvolvimento de cultivos de queratinócitos in vitro é uma condição para estudos sobre a biologia molecular, crescimento e diferenciação celular. Alguns métodos já estão estabelecidos, como para cultivo de queratinócitos de pele, mas poucas metodologias são encontradas para queratinócitos lamelares. O objetivo desse estudo, foi padronizar o cultivo de queratinócitos provenient... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The keratinocytes are cells presented in the epidermis, constituted by the stratified keratinized squamous epithelium. These cells organized in layers of different stages of cell maturation (basal or germinative, prickly, granular, lucid and corneal layers) and have a tissue coating function. Several studies seek to elucidate and characterize healthy tissues of epithelial origin, such as skin, eyes and hoof, so that they can identify the mechanisms of development of diseases in these tissues. The equine hoof is composed of epidermis at different stages of keratinization, subdivided into external stratum, middle stratum and internal stratum, in which the primary epidermal lamellae (PEL) and secondary epidermal (SEL) are located and where keratinocytes are present along the basement membrane (Transition of the epidermis and dermis, which joins the hoof to the distal phalanx). It is evident the importance of the hoof health of horses, but the knowledge at the cellular level is poorly understood. Studies involving the culture of equine keratinocytes are scarce. The development of keratinocyte cultures in vitro is a condition for studies on molecular biology, cell growth and differentiation. Some methods are already established, such as for culture of skin keratinocytes, but few methodologies are found for lamellar keratinocytes. The aim of this study was to standardize the cultivation of keratinocytes from equine hoof, aiming future associate with the study of regenerative medici... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Expressão dos receptores endometriais de estrógeno e progesterona em éguas acíclicas após administração de progesterona

Maciel, Luciana França Smith January 2017 (has links)
Orientador: Cezinande de Meira / Resumo: Progesterone (P4) is frequently used after the administration of estradiol, to prepare seasonal non-cyclic mares as embryo recipients, however previous studies have reported gestation of seasonal non-cyclic mares treated only with P4. The objective of the present study was to evaluate the gene and protein expression of estrogen receptor alpha (ERα), estrogen beta (ERβ) and progesterone (PR) in the endometrium of seasonal non-cyclic mares treated with long acting progesterone (LAP4). Eight mares were used during the seasonal anoestrus phase, uterine biopsies were performed immediately before and five days after administration of 1,5 g of LA P4. Blood samples were taken daily for the determination of plasma P4 concentration. The protein expression of the receptors was evaluated by the immunohistochemistry and the immunostaining area percentage was determined by the ImageJ software. Transcripts abundance for ERα (ESR1), ERβ (ESR2) and PR (PGR) were determined by RT-qPCR. ERα showed higher protein expression (p <0.05) after administration of P4LA, but there was no change in mRNA abundance encoding this gene (p> 0,05). Tendency to lower protein expression was observed (p=0,07) and gene expression inhibition (p <0,05) for ERβ, PR did not changes (p>0,05). The plasma concentration of P4 presented a higher concentration 24 hours after the application of LA P4 (D1), with subsequent decline in these values (p<0,05). The 1.5 g dose of LA P4 reached the minimum concentrations of P4 requi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

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