Orientadores: Lucila Costallat Ricci, Wirla M. S. Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T14:19:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_VivianeDelghingaro_M.pdf: 11601280 bytes, checksum: 69569f53acee2f50cd0b8d0768b0bcca (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Neste trabalho, foram criteriosamente avaliados nove anticorpos monoc1onais (MAbs) reativos para PCFO2, quanto ao reconhecimento de epítopos na fimbria purificada a partir de duas amostras diferentes, produtoras da mesma e também frente a outros fatores de colonização (PC) purificados, expressos por amostras de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) associada à diarréia humana. Em provas preliminares de "Western blot", este fator apresentou reações positivas não apenas frente aos soros polic1onais anti-PCFO2 como com anti-CF AII, anti-CF A/II (CSl, CS3), anti-CFA/II (CS2, CS3), anti-CFA/III, anti-CFA/IV (CS4, CS6) e anti-PCFO159. Provas de ELISA indireto, desenvolvidas tanto com os 4 MAbs pertencentes ao isotipo IgA, como com os 5 do isotipo IgG2b, confirmaram estes resultados, apenas frente aos FC do complexo CF A/II. Porém, em revelações no "Western blot" apenas bandas com pesos moleculares (p.M.) correspondentes à CSl, CS2, CS3, CFA/III, CS4 e CS6 foram reveladas, demonstrando apresentarem estes antígenos homologia de epítopos com PCFO2. Estes resultados foram confirmados, também de forma direta, em reações de imunomicroscopia eletrônica reveladas com os MAbs lDIC5, do isotipo IgA e 2C4F12, do isotipo IgG2b. Pesquisando-se diferenças de reconhecimento de epítopos entre os MAbs, buscou-se obter subunidades protéicas da fimbria PCFO2 após tratamento com 6M de Guanidina HCI-0,05M Tris. As frações obtidas após ultrafiltrações deste material, em membranas XM50 e YMIO, foram analisadas em SDS-P AGE e em provas de "Western blot". Pelos resultados obtidos, verificou-se a presença de uma única banda reconhecida pelos MAbs apresentando P.M. correspondente à PCFO2. Estes dados comprovam ser esta fimbria constituída por uma única subunidade protéica de 34,5 kDa. Após a avaliação da afinidade e especificidade das soluções preparadas com os 9 anticorpos monoc1onais em "Western blot", estes foram titulados por ELISA indireto, determinando-se que as preparações dos MAbs lDlC5 e 2C4F12 apresentavam maior título. Desta forma, estes foram selecionados para a padronização da Prova de Inibição do ELISA, avaliando-se, paralelamente, também os "pools" preparados com a mistura dos líquidos ascíticos dos dois diferentes isotipos. Assim sendo, a concentração do antígeno e dos MAbs foi padronizada, de tal forma que amostras expressando PCFO2 reduzissem a D.O. da reação controle para valores superiores a 50%. Na adequação da técnica, 66 cepas de E. coli, sendo 51 amostras ETEC e 16 não ETEC, foram avaliadas. Destas, 4 cepas isoladas de dois casos de diarréia no nosso meio, foram identificadas como produtoras de PCFO2 / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Fumio Yokoya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-29T03:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiney_PatriciaAugustodeOliveira_D.pdf: 21304299 bytes, checksum: 1abf6ae1c3911fb9cf86ffbd98bb068e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Frutose é o açúcar natural mais doce, sendo uma alternativa segura para substituir a sacarose. A inulinase tem um importante papel na produção de frutose através da hidrólise enzimática da inulina, que pode ser realizada em uma única etapa e render até 95% de conversão. Este trabalho teve como objetivo estudar a produção da inulinase por Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 utilizando diferentes fontes de carbono e nitrogênio, visando obter um meio viável comercialmente, nos mesmos níveis de produção do meio convencional. Técnicas de planejamento experimental e análise de superfície de resposta foram utilizadas para otimizar o meio de cultivo para produção da enzima. Foram estudadas as variáveis concentração de melaço, água de maceração de milho e extrato de levedura. Para este estudo utilizou-se quatro planejamentos fatoriais completos, sendo alcançada uma atividade enzimática máxima de 138U/mL. Após foi possível reduzir ainda mais o custo do meio, com a substituição do extrato de levedura pelo Prodexlac, extrato de levedura produzido pela indústria Prodesa que contém 44% de proteína, e retirando-se K2HPO4 do meio, atingido-se uma atividade enzimática de 113U/mL. Verificou-se que o primeiro e segundo meios otimizados representam 13% e 1,93% do custo do meio sintético otimizado, respectivamente. Assim neste trabalho foi possível a otimização na produção da enzima, utilizando meios alternativos, sem reduzir os níveis de produção obtidos com meio sintético, tomando ainda, o meio economicamente mais viável. / Abstract: Fructose is the sweetest sugar, being a safe altemative for sucrose. Inulinase may play an important role in fructose production by enzymatic hidrolysis of inulin. The reaction occurs in a single step and it is possible to obtain up to 95% of conversion. In this work the optimization of the conditions of inulinase production by Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 using different carbon and nitrogen sources is carried out in order to obtain more suitable culture conditions for comercial exploration, with a similar production leveI to conventional culture conditions. Factorial design and surface response analysis were used to optimize the culture conditions for inulinase production and the enzymatic reaction parameters. In the enzyme production the following variables were studied: melass, AMM and yeast extract. The use of the technique of complete factorial design, resulted in a enzymatic activity of 138U/mL After that, it was possible to minimize the cost, changing the yeast extract by Prodexlac, produced by Prodesa Inc. wich contains 44% protein and removing K2HPO4 from the medium formulation, and with this medium the activity reached 113U/mL. It has been show that the first and second medium formulation represented 13% and 1,93% ofthe cost ofthe previous synthetic optimized medium, respectively. Finally, this work made possible the enzymatic production optimization, using low cost altemative medium, without reducing the production leveI achieved with the synthetic medium, tuming this process economically more interesting. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A Prolactina (PRL) é um dos hormônios mais versáteis em termos de ação biológica. Sua ação mais conhecida está relacionada com o estímulo da lactação e regulação do crescimento e da diferenciação da glândula mamária; também apresenta importante aplicação diagnóstica. Somando os crescentes estudos sobre suas possíveis aplicações terapêuticas, fica cada vez mais notória a necessidade da obtenção desse hormônio puro, biologicamente ativo e na sua forma autêntica.O objetivo fundamental desse projeto foi a produção de hPRL em escala laboratorial a partir de bactérias (E.coli) modificadas geneticamente, utilizando um sistema de expressão baseado no promotor Lambda () PL, o mesmo utilizado com sucesso em nosso laboratório na expressão do hGH. Descrevemos nesse trabalho um processo de cultivo em biorreator, onde não foi utilizado o repressor cIts, uma proteína termo-sensível que usualmente é utilizada para inibir o funcionamento do promotor PL durante crescimento a 30ºC. O processo de cultivo apresenta basicamente três etapas: na primeira etapa o crescimento é realizado sem adição contínua de nutrientes (cultivo em batch), na segunda etapa ocorre adição contínua de nutrientes e carboidrato (cultivo em fed-batch) e na última etapa é realizada a ativação, caracterizada pelo aumento da temperatura mantendo-se a adição de nutrientes e carboidrato. Esse processo de fermentação rápido e flexível, com duração média de 20 horas, permitiu obter uma biomassa final correspondente à densidade óptica de aproximadamente 30 A600nm (unidades ópticas de absorbância em 600nm) e com uma expressão da ordem de 1g de hPRL mL-1 A600 -1, as mais altas já relatadas para secreção de prolactina no espaço periplásmico. A hPRL monomérica foi purificada e caracterizada por métodos físico-químicos e biológicos, os quais confirmaram a sua atividade biológica e imunológica, o seu correto processamento e uma massa molecular relativa (Mr) de 22.906. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

The objective of the present study was to evaluate the influence of the environment upon marine shrimp farming with regard to bacteriological quality of the water, pond sediments and livestock (Litopenaeus vannamei). The study was carried out on four shrimp farms in Cearà (1, 2, 3 and 4). Of the eight samplings performed, 3 involved water (one outside the farm-PEX, one at the pumping site-PB, and one in the pond-PV); 3 involved sediment (at locations PEX, PB and PV), and two consisted of harvested and processed shrimp. Samplings were carried out in different seasons (dry, intermediary and rainy) and totaled 288 individual samples (108 water; 108 sediment; 72 shrimp). The most probable numbers (MPN) of total coliforms (TC), fecal coliforms (FC) and Escherichia coli were determined and samples were investigated for Salmonella strains. The bacteriological contamination observed on the shrimp farms was predominantly caused by TC and FC and was most intense during the intermediary season. Farms 2 and 4 yielded the highest concentrations of FC in water and sediment, respectively, at sampling locations PEX and PB during the three seasons. No shrimp sample presented E. coli values above those permitted by the European Commission (EU). However, on account of the Salmonella values observed, Farms 2 and 4 would be barred from exporting shrimp to the EU. In addition, water sampled at Farm 3 contained Salmonella strains capable of infecting the livestock. Only Farm 1 presented an exogenous and endogenous environment free of fecal contamination. The presence of Salmonella and E. coli in water and shrimp samples is disquieting, considering the fact that theses pathogens are of fecal origin and that their natural habitat is the intestinal tract of warm-blooded animals. / O presente estudo teve por objetivo pesquisar a influÃncia do meio exÃgeno à carcinicultura na qualidade bacteriolÃgica da Ãgua, sedimento dos viveiros e no camarÃo de cultivo (Litopenaeus vannamei). Foram realizadas oito coletas em quatro Fazendas 1, 2, 3 e 4, sendo trÃs de Ãgua (ponto externo-PEX, ponto de bombeamento-PB e viveiro-PV) e trÃs de sedimento (PEX, PB e PV) e duas amostras de camarÃo (despescado e processado). As coletas foram realizadas em diferentes perÃodos sazonais (seco, intermediÃrio e chuvoso), perfazendo um total de 288 amostras, sendo 108 de Ãgua, 108 de sedimento e 72 de camarÃo. Foi determinado o NÃmero Mais ProvÃvel (NMP) de coliformes totais (CT), fecais (CF), e de Escherichia coli, alÃm da pesquisa e identificaÃÃo de Salmonella. Os resultados mostram que a contaminaÃÃo microbiolÃgica das fazendas à feita predominantemente por CT e CF, com maior intensidade na estaÃÃo intermediÃria. As Fazendas que apresentaram valores mais elevados de CF nas trÃs estaÃÃes foram as Fazendas 2 (PEX e PB) e 4 (PEX e PB) nas amostras de Ãgua e sedimento, respectivamente. Nenhuma amostra de camarÃo, das fazendas, apresentou valores acima do permitido para E. coli pela ComissÃo EuropÃia (CE). PorÃm se o parÃmetro considerado for a presenÃa de Salmonella, as Fazendas 4 e 2 nÃo estariam habilitadas a exportar os crustÃceos para paÃses da UniÃo da Comunidade EuropÃia. E ainda, das Ãguas da fazenda 3 tambÃm foram isoladas Salmonella o que facilmente poderia contaminar os camarÃes cultivados. Dentre as quatro fazendas, somente a Fazenda 1, nÃo apresentou ambiente endÃgeno e exÃgeno contaminado com material fecal. A detecÃÃo de Salmonella e a presenÃa de E. coli nas amostras de Ãgua e camarÃo à preocupante, uma vez que estes patÃgenos sÃo de origem fecal e seu habitat à o trato intestinal dos animais de sangue quente e pecilotÃrmicos.

Orientador : Edir Nepomuceno da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Motta_MauricioPires_M.pdf: 14330100 bytes, checksum: fc143f74ec22dd2d0c95cc19e293c099 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A celulite aviária é uma doença identificada, na maioria das vezes, nos abatedouros e vem sendo apontada como uma das principais causas de condenação das carcaças em países com avicultura desenvolvida. No Brasil, esta afecção foi recentemente incluída como uma outra categoria nas plani1hasde condenação nos abatedouros comerciais.No entanto, há poucos estudos específicos sobre suas características e por isso a celulite é confundida com outras afecções durante o abate, como as dermatites em geral. Um grande número de bactérias tem sido associada a esta doença, sendo a Escherichia coZi a mais fteqüente. Diante disto, o objetivo deste trabaJho foi a caracterização das lesões de celulite presentes em aves de um abatedouro comercial do estado de São Paulo, através de análises macroscópicas, microbiológicas e algumas características físico-químicas. Os resultados mostraram que as lesões apresentavam-se na região do peito, próximo ao umbigo e foram caracterizadas pela cor amarelo-amarronzada, recebendo a classificação de celulite "tipo 1" moderada. Das quarenta e sete carcaças analisadas, a E. coZifoi isolada em 31,91% das lesões, sendo que em 38,30% delas a E. coZiestava presente no coração e em 31,91% no fígado. O pH médio do peito das aves com lesões apresentou-se dentro da faixa encontrada neste músculo em aves sadias, em tomo de 5,7 a 5,9. Durante o período de coleta das amostras, de juJho a setembro de 1998, a celulite não constava como uma categoria nas plani1hasde condenação no abatedouro em estudo. Entretanto, já existiam registros de condenações total e parcial devido à celulite em outros abatedouros do estado de São Paulo, sendo que estes índices eram relativamente pequenos comparados às outras afecções. Este fato pode ser explicado pela falta de conhecimento e divulgação das características das lesões da doença em estudo. Portanto, a caracterização das lesões é um importante subsídio para auxiliar os veterinários e agentes da Inspeção Federal no reconhecimento das mesmas durante o abate das aves, sendo que deve ser considerada a possibilidade de contaminação sistêmica nestas aves para a decisão de rejeição parcial ou total / Abstract: Avian cellulitis is a identified disease in the slaughterhouses, in the majority of the times, and it comes being pointed as one of the main condemnation causes of the carcasses in countries with developed aviculture. In Brazil, this infection was recently enclosed as one another category in the spread sheets of condemnation in the cornrnercial slaughterhouses. However, there are few specific studies on their characteristics and for this reason cellulitis is still confused with other infections for the Federal Inspection. A great number ofbacteria have been associated with this disease, being E. coZithe most frequentoThe objective ofthis work was the characterization of cellulites lesions presents in poultry of a cornrnercial slaughterhouse of São Paulo, through macroscopic analyses, microbiological and some physicochemical analysis. The lesions were located in the area of the chest, c1ose to the navel and they were identified for the yellow-brownish color, receiving the classification of cellulite "type 1" moderate. Of the forty-seven analyzed carcasses, E. coZiwas isolated in 31,91% of the lesions, and in 38,30% of them E. coZi was present in the heart and in 31,91% in the liver. The medium pH ofthe chest ofthe birds with lesions carne inside of the strip of pH of chest of healthy chickens, around 5,7 to 5,9. During the period of collection ofthe samples, from July to September of 1998, the cellulite was not considered as a condemnation category in the slaughterhouse in study, however, registrations of total and partial condemnations due to the cellulitis already existed in other slaughterhouses of São Paulo. These indexes were relatively mal1compared to the other infections, fact that can be explained by the bad knowledge and popularization of the disease in study. Therefore, the characterization of the lesions is an important subsidy to aid the veterinarians and agents of the Federal Inspection in the recognition of the same ones in the slaughterhouses, and the possibility of systemic infection in these chickens should be considered for the decision of partial rejection or total conrndenation / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Edir Nepomuceno da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vessoni_CintiaLopesZaganini_M.pdf: 21669586 bytes, checksum: 1e5bff4e87a4bdaa25b5505d7715eb17 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Carcaças de frangos podem funcionar como veículo de bactérias patogênicas ao homem, particularmente as salmonelas. As infecções humanas têm se tornado freqüentes a partir desta via e sua gravidade estreitamente relacionada com seu perfil de resistência a drogas. O uso indiscriminado de antibióticos na terapêutica avícola e como promotores de crescimento em rações, tem sido apontado como causa de multirresistência de patógenos e levado à seleção de bactérias resistentes dentro do ecossistema. O perfil de resistência de bactérias residentes no trato digestivo das aves, como a Escherichía colíe Enterococcus spp, pode ser indicador do uso de tais drogas. Restrição ao uso de drogas em aves tem sido proposta, em todo o mundo, como medida para redução dos problemas de resistência antimicrobiana. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar cepas de Salmonella spp., Enterococcus spp. e Escherichía calí de 100 amostras de carcaças de frango de diferentes fornecedores e provenientes de diferentes Estados do Brasil, seguido pela etapa de determinar a resistência antimicrobiana às drogas de uso animal, usadas com finalidade terapêutica e promotora de crescimento. Das 100 carcaças de frango analisadas, 24% apresentaram contaminação por Salmonella spp, 84% por Enterococcus spp e 89% por Escherichía calí. As culturas confirmadas dos microorganismos descritos foram submetidas ao teste de resistência a 17 agentes antimicrobianos. Os agentes antimicrobianos utilizados foram amicacina 30 mcg, netilmicina 30 mcg, ciprofloxacina 5 mcg, cloranfenicol 30 mcg, ampicilina 10 mcg, aztreonam 30 mcg, gentamicina 10 mcg, tetraciclina 30 mcg, polimixicina B 300 U.I., sulfazotrim 25 mcg, ácido nalidixico 30 mcg, tobramicina 10 mcg, nitrofurazona 50 mcg, bacitracina 0,04 UJ., enrofloxacina, cefoxitina (30 mcg) e cefalotina (30 mcg). Os índices de resistência, simples ou múltipla a drogas, foram 75,6%, 29,7% e 20,3%, respectivamente para Enterococcus spp., E. calí e Salmonella spp. O gênero da Salmonella, que apresentou maior resistência foi o Newport (24,9%). O teste mostrou elevado índice de resistência a drogas entre as bactérias examinadas, tanto para as de uso humano como as de uso veterinário e, também, as usadas como promotoras de crescimento em rações. / Abstract: Chicken carcasses can act as a vehicle for pathogenic bacteria to human being, particularly for salmonellas. Food poisoning in humans from this source has become more frequent, the seriousness being directly related to the drug resistance profile of the organisms. The indiscriminate use of antibiotics in poultry therapeutics and in poultry feed as growth promoters has been indicated as the cause of multi-resistance to pathogens and led to the selection of resistant bacteria within the ecosystem. The resistance profile of bacteria present in the digestive tract of poultry, such as Escherichia coli and Enterococcus spp, may be an indicator of the use of such drugs. Throughout the world proposals have been made to restrict the use of drugs in poultry, as a means of reducing the problems of anti-microbial resistance. The objective of this research was to isolate and characterize strains of Salmonella spp., Enterococcus spp and Escherichia coli from chicken carcasses from different suppliers in different Brazilian states. After this step, the anti-microbial resistance to drugs commonly used in animais for both therapeutic and growth promoter purposes, was determined. Of the 100 chicken carcasses analyzed, 24% were contaminated with Salmonella spp, 89% were contaminated with Escherichia coli and 84% were contaminated with Enterococcus spp. The confirmed cultures of the microorganisms described were submitted to a resistance test for 17 anti-microbial agents. The used anti-microbial agents were amicacin 30 mcg, netilmicin 30 mcg, ciprofloxacin 5 mcg, chloranphenicol 30 mcg, ampicilin 10 mcg, aztreonam 30 mcg, gentamicin 10 mcg, tetracyclin 30 mcg, polimixicin B 300 U.I., sulphazothrim 25 mcg, nalidixic acid 30 mcg, tobramicin 10 mcg, nitrofurazon 50 mcg, bacitracin 0,04 U.I., enrofloxacin, cephoxitin (30 mcg) e cephalotin (30 mcg). The resistance rates were 75,6%, 29,7% e 20,3%, respectively for Enterococcus spp., E. coli and Salmonella spp Newport (24,9%) was the most resistant Salmonella sorotype. The test showed a high rate of resistance to the drugs by the bacteria examined, both for those used in humans and those used for veterinary purposes and to those used in feeds to promote growth. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientadores: Lucila Costallat Ricci, Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferraz_MirtisMariaGianciani_M.pdf: 6199459 bytes, checksum: 5178264e436b95d9608ded8b8db43e6f (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: E. coli é um dos patógenos relacionados a casos de diarréia. Em nosso trabalho analisamos 27 amostras de E. coli isolados em 14 crianças portadoras do HIV, com diarréia persistente. Em 51,8% das fezes foi observada a presença de EAEC, sendo que estas amostras não apresentam nenhum fator de virulência quando analisadas por PCR, e outros testes realizados com exceção de duas amostras que apresentam o gene ast. Observou-se que 51,1% destas amostras apresentam invasão em células HeLa. Entretanto, tais amostras puderam ser caracterizadas como pertencentes ao grupo EIEC, através de provas sorológicas, bioquímicas, biológicas e moleculares. A sorogrupagem não evidenciou a presença de sorogrupos patogênicos entre estas amostras / Abstract: E. coli is pathogen relatd to episodes of diarrhea. In our study, 27 strains from 14 HIV + children with persistent diarrhea were analyzed. 51.8% of the patients showed EAEC. These E. coli did not show any virulent factors in the PCR tests, except two that presented ast gen and was not pathogenic serotype. However, 5.1% had invasion in the HeLa cells can not considered EIEC in serological, biochemistry, biological and molecular tests. The sosotype of these strains did not present pathogen serotype / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Doctora en Ciencias de la Ingeniería, Mención Química / Cada día hay un mayor interés por generar productos con valor agregado a partir de diferentes tipos de residuos. Uno de estos productos es el ácido hialurónico (hyaluronic acid, HA), polímero con variados usos en la medicina y la cosmetología. El HA es sintetizado a partir de una enzima llamada Hialuronan Sintasa o HAS. Esta enzima es una proteína de membrana que sintetiza HA a partir de 2 precursores: Ácido UDP-Glucurónico y UDP-N-Acetilglucosamina, compuestos que se encuentran naturalmente en las bacterias Escherichia coli. El presente trabajo tuvo como objetivo la construcción de una Escherichia coli recombinante capaz de sintetizar HA a partir de xilosa como fuente de carbono alternativa a la glucosa. Este azúcar es uno de los más abundantes en los residuos hemicelulósicos de la industria forestal chilena. Para mejorar el consumo de xilosa por parte de la bacteria nativa E. coli Top10 se usó la técnicade la Evolución Adaptativa de Laboratorio de Palsson (Adaptive Laboratory Evolution, ALE). Este proceso se realizó mediante un cultivo continuo en medio R2 y xilosa como única fuente de carbono. La cepa evolucionada fue transformada con el gen hasA de Streptococcus equisimilis (sehasA) obteniendo la cepa Top10 Evo:pMBAD-sseAB. Para el análisis del cambio generado por la ALE se realizó un Análisis de Balance de Flujos (Flux Balance Analysis, FBA) a partir de un Modelo a Escala Genómica (Genome Scale Model, GSM) del microorganismo. Además, se optimizó el cultivo de la cepa Top10 Evo:pMBAD-sseAB en cuanto a las siguientes condiciones: tiempo de adición de inductor y su concentración concentración, control de pH, temperatura de crecimiento post-inducción y concentración de azúcar suplementada. El ALE realizado tuvo una duración de 48 días. Como resultado se obtuvo que la velocidad especí fica de crecimiento en xilosa de la cepa E. coli Top10 aumentó un 36%: de 0,24 h-1 a 0,33 h-1. Se determinó que un mayor rendimiento de HA se obtiene al hacer 2 adiciones de inductor al cultivo. Anteriormente en la literatura se había observado este fenómeno, pero nunca en una expresión recombinante de proteína asociada a un vector regulado con el promotor PBAD, correspondiente al del presente trabajo. Una temperatura de crecimiento post-inducción de 28,5 °C presentó los mejores rendimientos. Además, se de nió que la adición de xilosa a una concentración de 20 g/L 2 horas después de la inducción, y de 12 g/L a las 24 horas de cultivo (el doble de lo presentado en la literatura) aumenta el rendimiento de HA en cultivos en xilosa. Finalmente, las condiciones de cultivo seleccionadas fueron: inducción con 2 adiciones de 0,05 g/L de L-arabinosa, temperatura de crecimiento post-inducción de 28,5 C y concentración de azúcar suplementada de 20 g/L después de la inducción y 12 de g/L a las 24 horas de cultivo. El rendimiento de HA obtenido en estas condiciones fue de 195,8 mg/g.cel, más del doble que el rendimiento obtenido en condiciones basales, el que fue de 92,6 mg/g.cel. Con el FBA realizado fue posible corroborar que la cepa evolucionada tenía mejoras metabólicas en comparación con la cepa no evolucionada, cambio producido por el ALE. Estas mejoras permitieron que los ujos asociados a las vías de las pentosas fosfato, la glicólisis y el ciclo de ácidos tricarboxílicos fueran mayores en la cepa evolucionada en un 12% y 29% en promedio, durante el consumo de xilosa y manosa, respectivamente. Además, dado que las diferencias observadas entre las cepas evolucionada y no evolucionada se observaron tanto en xilosa como en manosa, y permitieron una mayor producción de HA y de biomasa, se in rió que la ALE impactó alguna enzima de la glicólisis.

Prof. Paul Jagals Dr. Hafsatou Ndama Traoré

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