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Otimização dos métodos de diagnóstico da esquistossomíase mansônica em áreas de baixa endemicidadeTeixeira, Candida Fagundes January 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / Classical parasitological methods are not sensitive enough to detect most of the infected individuals in low intensity transmission areas like in Esteio, Rio Grande do Sul. To optimize methods for detection of eggs in feces, when they are rare events, the estrategy was to examine large amounts of feces. A novel diagnostic method for isolation of Schistosoma mansoni eggs in feces, and an initial evaluation of its performance is now reported Helmintex. Is a concentration method with sequential steps of spontaneous sedimentation, sieving, ether-acetate centrifugation method (Ritchie) and a final step where eggs are isolated through interaction with paramagnetic beads in a magnetic field, and the sediments retained at the wall are collected and examined under a microscope. The objective of the second part of the investigation was to evaluate TaqMan Real Time PCR as an alternative for microscopic analysis as the detection procedure for final sediment resulting from Helmintex. To evaluate the new concentration method, S. mansoni eggs were added to 30 grams of normal feces to produce suspensions ranging from 0. 1 to 1. 34 eggs per gram of feces (epg) and the feces were submitted to all steps of concentration method. All the sediment was analysed by light microscopy and at least 1 egg was found in 20% (0. 1 epg); 50% (0. 24); 50% (0. 34); 60% (0. 67); 80% (1. 0) and 100% (1. 34) of the seeding experiments. For evaluation of the TaqMan Real Time PCR as an alternative for detection of eggs in feces after the concentration Helmintex method, primers and probe targeting the cytocromo-C oxidase subunit 1 gene were designed for amplification S. mansoni specific DNA. Four procedures for DNA extraction were evaluated. Suspensions in distilled water and feces were prepared containing 1, 10, 20, 40 and 80 eggs. S. mansoni DNA was extracted from 1000 eggs for determination of a standard curve to estimate the DNA concentration and determine the limits of the detection. DNA was amplified from all the spiked egg suspensions, including the samples with only 1 egg. Illustra Tissue and Cell GenomicPrep Mini Spin Kit (GE Healthcare) presented the best extraction performance. The standard curve for DNA concentration from 1000 eggs had a detection limit at 1 pg but with 13. 8 % of the reproductibility and 100 pg at 100 % of reproductibility. The novel S. mansoni detection method, named Helmintex may significantly improve diagnosis of infections with low intensity of infection, with two alternatives for the detection step: microscopic analysis and Real Time PCR Improved diagnostic methods are a main stem in the current worldwide efforts to reduce morbidity of schistosomiasis and its dissemination. / Em focos de introdução recente da esquistossomíse, como Esteio na região metropolitana de Porto Alegre, a parasitose ocorre com baixas prevalências e cargas parasitárias, resultando em dificuldades para o diagnóstico parasitológico, em virtude da sensibilidade inadequada dos métodos clássicos. O principal objetivo deste trabalho foi otimizar o desempenho de métodos de diagnóstico, em situações que os ovos nas fezes são um evento raro. A estratégia foi examinar grandes quantidades de fezes, o que resultou na descrição e avaliação de um novo método de diagnóstico para detecção de ovos de Schistosoma mansoni nas fezes denominado Helmintex. Este é um método de concentração, onde as fezes passam por uma sequência de sedimentação espontânea, tamisagem, centrifugação com acetato de etila (Ritchie) e uma etapa final onde os ovos são isolados através de interação com partículas paramagnéticas em um campo magnético. Após a concentração, na etapa de detecção dos ovos todo o sedimento resultante é analisado através de microscopia óptica. Na segunda etapa deste trabalho o objetivo foi avaliar o desempenho da PCR em tempo real (tecnologia Taqman) como alternativa de método de detecção no sedimento final do Helmintex, substituindo a análise microscópica. Para realização da primeira etapa, ovos de S. mansoni foram adicionados em 30 g de fezes negativas para a infecção, formando suspensões de 0,1 a 1,34 ovos por grama de fezes (opg), e as fezes foram submetidas a todas as etapas de concentração do método. Para cada suspensão testada foi encontrado pelo menos 1 ovo em 20% (0. 1 opg); 50% (0. 24); 50% (0. 34); 60% (0. 67); 80% (1. 0) e 100% (1. 34) das tentativas testadas para cada suspensão. Para a avaliação do desempenho da PCR,"primers" e sonda para o gene da citocromo-C oxidase subunidade 1 foram desenhados para a amplificação do DNA de S. mansoni. Para a extração do DNA foram avaliados 4 protocolos diferentes. Foram preparadas suspensões de ovos em água destilada e fezes, contendo 1, 10, 20, 40 e 80 ovos. E amostras de 1000 ovos foram extraídas para a construção de uma curva padrão da estimativa de concentração de DNA, para verificação do limite de detecção da reação. A amplificação do DNA do parasito pode ser vista em todas as suspensões testadas, inclusive a que continha 1 ovo. Dos 4 protocolos de extração avaliados, o Illustra Tissue and Cell GenomicPrep Mini Spin Kit (GE Healthcare), um kit de extração comercial, foi o que apresentou o melhor rendimento. A curva padrão construída a partir de 1000 ovos apresentou um limite de detecção de 1 pg com reprodutibilidade de 13,8%. Considerando 100% de reprodutibilidade, a reação apresentou limite de detecção de 100 pg. O novo método Helmintex descrito neste trabalho representa grande avanço no diagnóstico da esquistossomíse em infecções com baixas cargas parasitárias, além disso, apresentam-se 2 opções de métodos de detecção (visualização microscópica e amplificação de DNA dos ovos pela PCR em tempo real). Estes avanços contribuem para o esforço em curso de reduzir mundialmente a morbidade e a disseminação das áreas de transmissão das esquistossomíases.
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Avaliação Fenótipica dos Linfócitos nos diferentes graus de fibrose periportal secundária a esquistossomose mansoni Salvador – BABarreto, Andréia de Sousa Rocha 22 September 2013 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T20:35:20Z
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Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES. / A esquistossomose assume o segundo lugar em importância clínica e epidemiológica dentre as doenças parasitárias no mundo. A resposta imune do hospedeiro é considerada essencial na proteção e na patogênese da doença. A fase crônica é caracterizada pela produção de citocinas Th2, sendo as mesmas associadas ao desenvolvimento de fibrose periportal. Pouco se sabe sobre o fenotipo e o grau de ativação dos diferentes subtipos de células T no processo de fibrose. Objetivo: avaliar o fenótipo e o grau de ativação dos linfócitos T em pacientes esquistossomóticos com fibrose periportal. Método: Estudo de corte transversal, realizado no povoado de Água Preta, Gandu-Bahia, incluindo 37 indivíduos com fibrose periportal determinado por ultrassonografia. Quinze deles apresentavam fibrose incipiente, sete apresentavam fibrose moderada a grave e quinze não apresentavam fibrose. Células mononucleares do sangue periférico foram obtidas por gradiente de Ficcol-hypaque e a frequência de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e a expressão dos marcadores de superfície CD28, CD69, CD25 e CTLA-4 foram determinadas por citometria de fluxo. Resultados: Não houve diferença significativa na frequência das células TCD4+ entre os pacientes com diferentes graus de fibrose periportal, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada e grave apresentaram uma frequência menor de células TCD8+, comparados aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de células TCD8+CD28+, bem como de células TCD4+CD69+ foi maior no grupo de pacientes com fibrose incipiente, em comparação com aqueles sem fibrose. Em relação à frequência das células TCD4+CD25Low, não houve diferença significativa entre os grupos de pacientes, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada a grave apresentaram uma menor frequência de células TCD4+CD25High comparados àqueles sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de linfócitos TCD4+CTLA-4+ em indivíduos com fibrose moderada a grave foi também menor em relação aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Conclusão: A alta frequência de células T ativadas nos pacientes com fibrose indica que estas células devem participar do processo de formação da fibrose periportal. Adicionalmente, a menor frequência de células T com o perfil regulatório nos pacientes com fibrose moderada a grave reforça a hipótese de uma falta de regulação da resposta imune nestes pacientes. / Salvador
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O papel do ferro na modulação da infecção causada por Schistosoma Mansoni: do hospedeiro ao parasitaLamarão, Flávia Rachel Moreira January 2010 (has links)
Submitted by Ana Paula Macedo (ensino@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T12:30:30Z
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Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esquistossomose é uma doença complexa no qual o parasita passa por um hospedeiro intermediário até finalmente chegar ao definitivo, em uma complexa interação. Algumas consequências são consideradas como o dano tecidual, fibrose variável, câncer e morte. Tais respostas dependem de características intrínsecas do parasita, do hospedeiro, e também da interação parasita-hospedeiro. O metabolismo do hospedeiro pode ser determinante no desfecho da doença. Neste estudo o papel do ferro à luz das interações moleculares, morfológicas e parasita-hospedeiro dessa doença complexa foi observado. Foi observado o papel do ferro utilizando camundongos infectados por S. mansoni tratados com suplemento de ferro (Iron Sulfate-IS) e quelante de ferro (Deferoxamina-DFO) observando-se os seguintes parâmetros: a sobrevivência dos animais, a saturação de transferrina, a análise de aglomeração gênica, análise individual de genes do metabolismo do ferro, fibrose, apoptose, ciclo celular, estresse oxidativo, reparo do DNA, a senescência celular e sobrevivência. Alterações morfológicas, volume de colágeno do granuloma e viabilidade do miracídio também foram acessados. Os camundongos infectados tratados com as drogas mostraram aumento da sobrevida quando comparados com os animais infectados. Já os genes reguladores de ferro e seu status foram acessados por PCR em tempo real e imuno-ensaio. Para uma análise mais detalhada, um agrupamento Bayesiano da expressão do gene foi realizado demonstrando o desequilíbrio de ferro em grupos tratados e infectados formado um cluster interessante no fígado, que não foi observado no intestino. De acordo com a análise de expressão gênica, o grupo tratado com DFO apresentou desorganização na formação do granuloma. Já os genes de estresse NDRG-1 e MMT, e de ciclo celular p53, p16 e p21 mostraram expressão gênica aumentada enquanto expressão TERT foi diminuída. O volume de colágeno no granuloma e viabilidade miracídio foi diminuído neste grupo. Nossos resultados sugerem que a esquistossomose é um modelo interessante para analisar a instabilidade genética, fibrose e interação parasita-hospedeiro dentro do qual o metabolismo do ferro desempenha um papel importante. O metabolismo desequilibrado nos animais tratados com DFO interferiu na sobrevivência animal e na modulação de proteção no hospedeiro. Análises complementares são necessárias para um profundo entendimento do papel do metabolismo do ferro, o que pode modificar as perspectivas terapêuticas desta doença. / Schistosomiasis is a complex disease where the parasite passes through an intermediate host to finally reach a definitive mammalian, in a complex interaction. Some consequences take into account tissue damage, variable fibrosis, cancer and death. Such responses depend on intrinsic characteristics of the parasite, host and also host-parasite interactions. Host metabolism can be determinant on disease outcome. The role of iron in the light of molecular, morphological and host-parasite interactions of this complex disease are observed. We analyzed the role of iron using S. mansoni infected mice treated with iron supplement (Iron Sulfate-IS) and iron chelator (Deferoxamine-DFO) and observed the following parameters: animal survival, transferrin saturation, gene cluster analysis, gene-by-gene analysis of iron metabolism, fibrosis, apoptosis, cell cycle, oxidative stress, DNA repair, cell senescence and survival. Morphological changes, granuloma collagen volume and miracidium viability were also accessed. Treated infected mice showed increased survival when compared to infected animals. Iron regulatory genes and status were accessed by real-time PCR and immunoassay. For detailed analysis, a Bayesian clustering of gene expression was performed demonstrating that iron imbalance in treated and infected groups formed an interesting cluster in the liver, which was not observed in intestine. According to gene expression analysis, the DFO treated group presented disorganization of granuloma formation. Stress genes (NDRG-1 and MMT), p53, p16 and p21 showed increased gene expression while TERT expression was decreased. The granuloma collagen volume and miracidium viability was decreased in this group. Our findings suggest schistosomiasis as an interesting model to analyze fibrosis, genetic instability and host-pathogen interaction in which iron metabolism plays an important role within. DFO imbalanced metabolism interfered in: animal survival, protective modulation for host in host-pathogen interaction. Major analyses are required to understand the role of iron metabolism, which holds therapeutic prospects, in this disease.
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Avaliação de abordagens sorológicas para a discriminação das formas agudas e crônicas da esquistossomose mansônica humana / Evaluation of serological approaches for the discrimination of acute and chronic human schistosomiasis mansoniBeck, Lílian Christina Nóbrega Holsbach January 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007 / A diferenciação entre as fases aguda e crônica da esquistossomose se baseia em dados clínicos e epidemiológicos associados ao diagnóstico sorológico. Essa diferenciação é importante para definir o tratamento, pois este, nos casos agudos alivia as manifestações alérgicas e evita a evolução e o agravamento do quadro clínico. Vários testes têm sido propostos para diferenciar essas fases clínicas, porém as discordâncias entre os autores justificam uma reavaliação do tema. Para o estudo foram selecionados 54 pacientes com a fase aguda, oriundos de Porto de Galinhas, Ipojuca-PE, 54 pacientes com a fase crônica e nove pacientes com outras helmintoses, ambos oriundos São Lourenço da Mata-PE. O grupo controle foi formado por 15 indivíduos com diagnóstico negativo para S. mansoni e sem história de banho de rios, residentes no município do Recife-PE. Os anticorpos IgG, IgM e IgA contra SEA, IgG e IgM contra KLH e SWAP e IgG e IgA contra o antígeno recombinante Sm14 foram quantificados através de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). A curva ROC (receiving operating characteristics) foi empregada para avaliar a capacidade dos antígenos de diferenciar as duas fases clínicas. Os anticorpos IgA anti-SEA (AACs = 0,877) e o IgM anti-KLH (AACs = 0,825) demonstraram maior capacidade para discriminar o grupo de pacientes agudos dos crônicos. Os níveis de anticorpos IgG anti-SEA (AACs = 0,847) e anti-SWAP (AACs = 0,958) não só mostraram melhor capacidade para diferenciar os grupos dos pacientes agudos e dos indivíduos sem esquistossomose, mas também diferenciaram o grupo dos pacientes crônicos daquele sem esquistossomose (AACs = 0,720 e AACs = 0,905, respectivamente). Os níveis de IgG anti-SEA (AACs = 0,784) e anti-SWAP (AACs = 0,931) permitiram discriminar o grupo de agudos e crônicos em conjunto (infectados) daqueles não infectados com S. mansoni. O antígeno Sm14 não mostrou eficiência em nenhum dos testes utilizados. Os dados mostram que é possível discriminar os pacientes esquistossomóticos agudos dos crônicos, utilizando uma combinação de testes sorológicos, baseado em ELISA avaliando os níveis de IgA anti-SEA e IgM anti-KLH, em associação com os dados clínicos e epidemiológicos
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Influência do antígeno solúvel de ovos de Schistosoma mansoni sobre a ativação e progressão do ciclo celular de linfócitos T de indivíduos infectados e não infectados por Schistosoma mansoni e/ou Necator americanusAzevedo, Ana Carolina Campi January 2007 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T11:10:46Z
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Previous issue date: 2007 / A infecção pelo S. mansoni é muito freqüente em regiões com condições precárias de
saneamento básico, resultando em elevadas prevalências de esquistossomose nas populações
entre 10 e 20 anos de idade. A patologia desta infecção é caracterizada pela formação de
granulomas em torno dos ovos liberados pelos vermes adultos, no interior do sistema portahepático.
Sabe-se que, os pacientes portadores da infecção crônica apresentam uma modulação da
capacidade proliferativa em resposta ao antígeno solúvel de ovos de S. mansoni (SEA) e, este
estado parece ser benéfico para o hospedeiro e tem sido considerada fundamental para o
equilíbrio hospedeiro-parasito. Em contrapartida, indivíduos não infectados residentes em área
endêmica para esquistossomose apresentam uma elevada reatividade celular em resposta a estes
antígenos. Neste trabalho, comparamos a influência do SEA na progressão do ciclo celular de
linfócitos T do sangue periférico de pacientes portadores de infecção crônica pelo S. mansoni
(XTO), de indivíduos não infectados residentes em área endêmica (NEG) e de indivíduos não
infectados, porém não residentes em área endêmica, denominados por DS. Nossos resultados
mostraram que pacientes XTO apresentam uma modulação da resposta ao SEA e, sugerem que
esta imunossupressão pode ser devido a participação das células T reguladoras, que secretam IL-
10 em resposta ao SEA. A citocina IL-10 pode atuar inibindo a ativação celular de linfócitos T
CD4+ e CD8+, por meio do bloqueio destas células nas fases G0/G1 do ciclo celular, promovendo
a anergia nestas células. Este bloqueio da progressão do ciclo celular se dá por inibição da
expressão da ciclina D1,2,3 nos linfócitos T. Por outro lado, nas culturas celulares dos indivíduos
NEG estimuladas com SEA, foram detectados níveis elevados de TNF-α, ativação celular dos
linfócitos T CD4+ e CD8+ e um aumento da expressão da ciclina D1,2,3, promovendo a progressão
através do ciclo celular em resposta ao SEA. Em áreas endêmicas, existe uma alta prevalência de
ancilostomídeos co-infectando pacientes portadores de S. mansoni. Neste contexto, avaliamos
também a influência da presença da co-infecção pelo N. americanus na resposta imunológica ao SEA de pacientes infectados por S. mansoni. Nossos resultados mostraram que tanto as PBMC de pacientes mono-infectados (MONO) quanto as de co-infectados (CO) apresentaram anergia
celular em resposta ao SEA, sugerindo que a presença da infecção por N. americanus não
influencia na resposta imune ao SEA. / S. mansoni infection is frequent in regions where factors such as poor sanitary conditions occur and may lead to high prevalence of the disease mainly in individuals of the age groups of 10 to 20 years. The pathology caused by the infection is characterized by granulomatous reactions around the eggs eliminated by the parasites that are trapped in the tissues and the
hepatic-portal system. It is well known that during the chronic phase individuals that harbor the infection modulate their cellular immune response to soluble egg antigens (SEA) and this immune reactivity is highly accepted to be beneficial to the host and fundamental for the maintenance of equilibrium of the host-parasite interaction. In contrast to infected individual, those not infected but living in an endemic area for the disease show high cellular reactivity to the same antigens. In this thesis, we evaluate the effect of that the response to SEA has on the cell
cycle progression of peripheral blood T lymphocyte from patients in the chronic phase of the disease (XTO), non-infected individuals living in endemic areas (NEG) and of non-infected individuals that do not reside in endemic areas (DS). Our results show that cells from XTO have a modulated response to SEA and suggest that this immunosuppression may be due to regulatory
T cells that secret IL-10 in response to SEA. IL-10 may act via the inhibition of the activation of CD4+ and CD8+ T lymphocytes by blocking these cells in the G0/G1 phase of the cell cycle promoting anergy of these cells. The blockage of cell cycle progression occurs via the inhibition
of the expression of cyclin D1,2,3 by the T lymphocytes. On the other hand, cells from NEG stimulated in vitro with SEA, high levels of TNF-α secretion was detected, together with the activation of both CD4+ and CD8+ cells and increase on the expression of cyclin D1,2,3 with
consequent progression of these cell through the cell cycle. In endemic areas, there is a high prevalence of hookworms co-infecting individuals with S. mansoni. We therefore, evaluated the putative influence of the co-infection with N. americanus on the immune response of S. mansoni infected patients to in vitro SEA stimulation. Our results show that peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from mono-infected patients (MONO) as well as of co-infected (CO) were anergic to SEA, suggesting that the presence of the infection by N. americanus does not influence the
response to SEA.
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Proteínas quinase eucarióticas (ePKs) de Schistosoma: identificação, anotação funcional e seleção de potenciais alvos terapêuticosAndrade, Luiza Freire January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-03-11T16:27:36Z
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Previous issue date: 2012 / Apesar do praziquantel ser uma droga eficiente para o tratamento da esquistossomose, a prevalência da doença não mostrou redução significativa nos últimos anos e, até o momento, não existe uma alternativa eficaz para o tratamento dessa doença. Dessa forma, optamos por utilizar as poderosas ferramentas genômicas para identificar potenciais alvos para o desenvolvimento de um medicamento alternativo. Já que proteínas quinase eucarióticas (ePKs) são consideradas alvos para o desenvolvimento de drogas do ponto de vista médico e químico, e um número crescente de inibidores ePKs foram desenvolvidos e aprovados para o tratamento de diferentes doenças humanas, estas se tornaram o foco de estudo desse trabalho. As ePKs de S. mansoni, S. japonicum e S. haematobium foram identificadas nos proteomas preditos e classificadas em seus devidos grupos, famílias e subfamílias a partir de abordagens filogenéticas. Utilizando as informações dos ortólogos identificados, foi possível selecionar um grupo de ePKs com função predita essencial nesse parasito. A anotação funcional mostrou ainda que grande parte das ePKs selecionadas são ativadoras/efetoras da via de sinalização MAPK. Dessa forma, proteínas chave da via MAPK (SmRas, SmERK1, SmERK2, SmJNK e SmCaMK2), foram as escolhidas para validação experimental. Após redução significativa no nível de transcrito dos genes selecionados, nenhuma alteração fenotípica visível foi relatada em cultura de esquistossomulos. Contudo, o efeito da diminuição transcricional dos genes no desenvolvimento dos vermes diante do sistema imune do hospedeiro foi avaliado. Evidenciamos que proteínas MAPK JNK quando silenciada causa efeitos devastadores no tegumento de vermes adultos de S. mansoni que leva a morte dos mesmos. E, ePKs da subfamília ERK1 estão relacionadas com a produção de ovos, já que fêmeas com baixos níveis de transcritos SmERK1 e SmERK2 apresentam ovários pouco desenvolvidos e produção de ovos significativamente baixa. Além disso, foi comprovado que o fator de transcrição c-fos está diferencialmente expresso em parasitos silenciados para as proteínas MAPK SmJNK, SmCaMK2 e SmERK1/2. Dessa forma concluímos que o dado genômico, acoplado a ferramentas computacionais preditoras e abordagem experimental, compõem uma metodologia poderosa para o estudo dessa espécie. As proteínas MAPK, SmERK e SmJNK, são alvos de interesse para o desenvolvimento de drogas para tratamento da esquistossomose já que um inibidor contra essas proteínas provavelmente irá interromper o ciclo de vida de Schistosoma e impedir o progresso da doença. / Although praziquantel is an efficacious drug for schistosomiasis treatment, in recent years problems of resistance have arisen and alternatives don’t exist so far. To contribute to a solution, the important information of the recently sequenced genomes of these parasites was used to identify potential targets for the development of an alternative drug. Since eukaryotic protein kinases (ePKs) are good chemical and medical targets for drug development and an increasing number of ePK inhibitors have been approved for the treatment of different human disease, they have become the focus of this study. The ePKs were identified in the predicted proteomes of S. mansoni, S. japonicum and S. haematobium by Hidden Markov Model searches, the genes were classified in their group, family and subfamily by phylogeny approaches, and some ePKs were selected since they has essential function in the parasite. The functional annotation showed that the most selected ePKs are activators/effectors of MAPK signaling pathway, and key proteins of this pathway (SmRas, SmERK1, SmERK2, SmJNK, and SmCaMK2), were chosen for experimental validation. Gene silencing by RNA interference was used to elucidate the functional role of MAPK signaling pathways proteins in S. mansoni. After a significant reduction in the transcription level of the selected genes, no visible phenotypic changes were reported in schistosomula in culture. Therefore, mice were infected with the silenced schistosomulas and the development of adult worms was observed. It was showed that SmJNK has an important role in transformation and survival of the parasites as low number of adult worms was recovered and the tegument of survived worms was damaged. Moreover, SmERK1/SmERK2 was related to egg production, as mice infected with silenced schistosomulas, displayed significantly lower egg production and the recovered female worms had underdeveloped ovaries. Furthermore, it was showed that the c-fos transcription factor was overexpressed in parasites with low expression of SmERK1, SmJNK and SmCaMK2. We conclude that the genome contains valuable information and the functional annotation performed had an important role to improve the annotation of S. mansoni, S. haematobium and S. japonicum ePKs. Furthermore, MAPKs proteins, SmERK and SmJNK, are excellent targets for drug development as an inhibitor against these proteins will probably disrupt the life cycle of Schistosoma and prevent disease progression.
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Avaliação da função renal em pacientes com esquistossomose hepatoesplênica compensada / Assessment of renal function in patients with compensated hepatosplenic schistosomiasisDuarte, Daniella Bezerra January 2014 (has links)
DUARTE, Daniella Bezerra. Avaliação da função renal em pacientes com esquistossomose hepatoesplênica compensada. 2014. 84 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T11:40:36Z
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Previous issue date: 2014 / Background - The glomerular involvementin schistosomiasis is well documented, especially in patients with hepatosplenic disease. The aim of this study is to investigate the occurrence of renal abnormalities among patients with HSS, especially tubular disorders. Methods - This is a cross-sectional study with 20 consecutive patients with HSSfollowed in a medical center in Maceió, Alagoas, Brazil. Urinary acidification and concentration tests were performed using calcium chloride (CaCl2) and DDAVP, respectively, and after a 12h period of water and food deprivation. The biomarker MCP-1 was quantified in urine. Fractional excretion of sodium (FENa+), fractional excretion of magnesium (FEMg++) and fractional excretion of potassium (FEK+), transtubular potassium gradient (TTKG) and solute free water reabsorption (TcH2O) were calculated by standard formulae. The HSS group was compared to a group of 17 healthy volunteers (control group). Results - Patient`s average age and gender were similar to controls. Urinary acidification deficit was found in 9 HSS patients (45%), who presented urinary pH > 5.5 after CaCl2 test. Urinary osmolality was significantly lower in HSS patients (588 ± 112 vs. 764 ± 165 mOsm/kg, P =0,001) after 12h period water deprivation. Urinary concentration deficit was found in 85% of HSS patients. The values of MCP-1 were higher in HSS group than control group (122 ± 134 vs. 40 ± 28 pg/mg-Cr, P = 0.01) and positively correlated with the values of microalbuminuria and proteinuria in the HSS group. TcH2O was lower in HSS patients (0.72 ± 0.5 vs. 1.1 ± 0.3, P = 0.04). Conclusions - HSS is associated with important kidney disorders. The main abnormalities found were urinary acidification and concentration defect, indicating the occurrence of tubular dysfunction. There was also an increase in urinary MCP-1, which appears to be a more sensitive marker of renal injury that microalbuminuria. / Introdução - O envolvimento glomerular na esquistossomose mansônica está bem documentado, sobretudo naqueles pacientes com a forma hepatoesplênica da doença. O objetivo deste estudo é investigar a ocorrência de alterações renais em pacientes com EHE, em especial, as alterações tubulares. Métodos - Foi realizado estudo transversal com 20 pacientes com EHE, acompanhados em um ambulatório de Maceió, Alagoas, Brasil. Testes de acidificação e concentração urinárias foram realizados usando cloreto de cálcio (CaCl2) e DDAVP, respectivamente, e após período de 12h de jejum e privação hídrica. Foi quantificado na urina o biomarcador MCP-1. Foram calculados fração de excreção de sódio (FENa), fração de excreção de potássio (FEK), fração de excreção de magnésio (FEMg), gradiente de transporte transtubular de potássio (TTKG) e transporte de água livre de solutos (TcH2O). O grupo de pacientes com EHE foi comparado com um grupo de 17 voluntários sadios (grupo-controle). Resultados - A média de idade e a distribuição de gênero foram similares entre os dois grupos. Défice de acidificação urinária foi encontrado em nove pacientes com EHE (45%), que apresentaram pH urinário > 5,5 após o teste com CaCl2. A osmolaridade urinária foi significativamente menor entre os pacientes com EHE (588 ± 112 vs. 764 ± 165 mOsm/kg, P = 0,001), após período de 12h de jejum e privação hídrica. Défice de concentração urinária foi encontrado em 85% dos casos de EHE. Os valores de MCP-1 foram mais elevados no grupo com EHE do que no grupo-controle (122 ± 134 vs. 40 ± 28 pg/mg-Cr, P = 0,01) e correlacionaram-se positivamente com os valores de microalbuminúria e proteinúria no grupo com EHE. Os valores de TcH2O foram menores nos pacientes com EHE (0,72 ± 0,5 vs. 1,1 ± 0,3, P =0,04). Conclusão - A EHE é associada a importantes alterações renais. As principais alterações encontradas foram défice de concentração e acidificação urinária, evidenciando a ocorrência da disfunção tubular. Houve também um aumento do MCP-1 urinário, que parece ser um marcador de lesão renal mais sensível do que a microalbuminúria.
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Malacologia dos gêneros Lymnaea e Biomphalaria na mesoregião sul espírito-santense, e avaliação de extratos de Melia Azadirachta indica e Cymbopogon winterianus como agentes moluscicidasAlmeida, Bethânia Ribeiro de 27 August 2010 (has links)
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Dissertacao Bethania Ribeiro de Almeida.pdf: 1510906 bytes, checksum: 4aa893b35d3aa338d245606d7d5dced7 (MD5) / Moluscos do gênero Biomphalaria e Lymnaea possuem grande importância médica, por serem caracterizados como hospedeiros intermediários do parasito Schistosoma mansoni e do parasito Fasciola hepatica respectivamente. Neste estudo foi avaliada a presença desses moluscos em 14 municípios situados na mesorregião Sul Espiríto-Santense, pertences às Bacias hidrográficas dos rios Itapemirim, Itabapoana e Benevente. Para a identificação dos moluscos foi utilizada avaliação morfológica e molecular. Para todos os 14 municípios georreferenciados foram encontrados moluscos da espécie B. tenagophila e L. columella. Entretanto, a preocupação com o desenvolvimento de resistência destes moluscos a substâncias moluscicidas e sua baixa seletividade ocasionam na busca de substâncias biodegradáveis de origem vegetal. Este estudo analisou então a eficácia de extratos fitoterápicos compostos de Melia azedarach var azedarach, Azadirachta indica A. Juss, e Cymbopogon winterianus como possíveis agentes moluscicidas. Foram testados extratos alcoólicos, acetato de etila e hexânicos extraídos de caules e folhas dos vegetais cinamomo, nim e citronela como agentes moluscicidas para a espécie Lymnaea columella, hospedeiro intermediário da Fasciola hepatica. Os extratos nim, cinamomo e citronela demonstraram-se eficazes no controle dos moluscos analisados em baixas concentrações, diluídos em etanol, acetato de etila e hexano, e, inibiram a ovoposição dos moluscos, impedindo sua reprodutibilidade, e, por conseguinte, a disseminação destas doenças parasitárias. / Mollusks of the genders Biomphalaria and Lymnaea have great medical importance as intermediate hosts of the parasites Schistosoma mansoni and Fasciola hepatic. In this study, the occurrence of these mollusks was evaluated in 14 counties located in the catchments of the following rivers: Itapemirim, Itabapoana and Benevente in Southern Espírito Santo State, Brazil. The species B. tenagophila e L. columella were found in all counties assessed. Furthermore, the tolerance of these mollusks to molluscicides and their low selectivity raises concerns and show the importance of finding new vegetable biodegradable substances to control these mollusks. This study assessed the use of vegetable extracts originated from Melia azedarach var azedarach, Azadirachta indica A. Juss, and Cymbopogon winterianus as natural molluscicides. Hidroalcoholic, ethyl acetate and hexane crude extracts, obtained from leaves of plants, such as chinaberry, neem and citronella, were tested as molluscicides against Lymnaea columella, which is the intermediate host of Fasciola hepatica. The low concentration extracts of neem, citronella and chinaberry diluted in ethanol, ethyl acetate and hexane shown to be effective in controlling snails and inhibiting the oviposition of shellfish, preventing its reproduction, and, therefore, the spread of these parasitic diseases.
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Caracterização molecular inicial do complexo Vault em Schistosoma mansoniReis, Eneida Virgínia January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / O sucesso da parasitemia por Schistosoma mansoni apresenta uma relação direta com a adaptação do parasito a diferentes ambientes e hospedeiros durante um ciclo biológico completo. Um dos mecanismos que estão envolvidos na adaptação do parasito é a expressão estágio específica de um conjunto de genes que são expressos de maneira coordenada, cujo controle pode ser tanto a nível transcricional como traducional. Um bom exemplo destes mecanismos de regulação da expressão gênica estágio-específico é a transição de cercária a esquistossômulo onde a diferenciação e as mudanças morfológicas e bioquímicas acontecem independente de síntese protéica. Vaults são ribonucleoproteínas com 13MDa, altamente conservadas entre eucariotos inferiores e superiores e compostas por um conjunto de três proteínas: Major Vault Protein (MVP), Vault (PolyADP-Ribose) Polymerase (VPARP) e Telomerase-associated Protein (TEP1), além de um pequeno RNA não traduzido. Em células de mamíferos, o papel biológico de Vaults está associado ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas, ao transporte núcleo-citoplásmico e a vias de transdução de sinal. Até o momento a função exata deste complexo é desconhecida. A análise genômica comparada mostrou que organismos modelos como Caenorhabditis elegans e Drosophila melanogaster não possuem genes codificadores para os constituintes de Vaults, homólogos ao de mamíferos. Entretanto, estas mesmas análises mostraram a existência de genes relacionados à Vaults em S. mansoni. Estas observações levantaram várias questões, dentre elas o envolvimento de Vaults nos mecanismos de adaptação do parasito no hospedeiro mamífero. Desta forma, o objetivo geral desse trabalho foi realizar a caracterização molecular inicial dos constituintes de Vaults em S. mansoni. Através de ferramentas de bioinformática, os possíveis componentes protéicos de Vaults foram recuperados do banco de dados e utilizados na identificação, por homologia, de suas ortólogas em organismos superiores e inferiores, seguida pela análise dos dados recuperados. Os resultados sugerem que os componentes SmMVP e SmTEP-1 são conservados e que a SmVPARP e os vRNAs de S. mansoni permanecem por serem identificados. Os níveis de expressão dos componentes de Vaults foram quantificados utilizando PCR convencional e confirmados por qRTPCR utilizando RNA total de verme adulto, ovos, cercária e esquistossômulos mecanicamente transformados (EMT) com 3,5 horas, 1, 2, 3, 5 e 7 dias de cultivo in vitro. Os resultados sugerem uma expressão equivalente em todos os estágios evolutivos analisados. Para avaliar se os níveis equivalentes dos transcritos para a SmMVP iriam refletir nos níveis protéicos, foram realizados experimentos de western blot. Os resultados sugerem níveis equivalentes da MVP corroborando com os resultados da analise da expressão gênica ao nível da transcrição. Em conjunto, os resultados sugerem que o complexo Vault pode estar envolvido na regulação de processos celulares relacionados ao sucesso do parasitismo tanto durante a rota de peregrinação como na manutenção da infecção no hospedeiro mamífero. __________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The success of parasitemia by Schistosoma mansoni has a direct relation to the parasite adaptation to different environments and hosts during a complete life cycle. One of the mechanisms that are involved in the adaptation of the parasite is a stage-specific expression of a set of genes that are expressed in a coordinated manner, which can be controlled both the transcriptional and translational levels. A good example of mechanisms for stage-specific gene expression control is the cercariae-schistosomula transition in where the differentiation and morphological and biochemical changes occur independent of protein synthesis. Vaults are a 13MDa ribonucleoproteins, highly conserved between lower and higher eukaryotes and consist of a set of three proteins: Major Vault Protein (MVP), Vault (PolyADP ribose) polymerase (VPARP) and Telomerase-associated protein (TEP1), and a small untranslated RNA. In mammalian cell, the biological role of Vaults is associated with the phenotype of multidrug resistance, nuclearcytoplasmic transport and signal transduction pathways. To date, the exact function of this complex is unknown. The comparative genomic analysis showed that model organisms like Caenorhabditis elegans and Drosophila melanogaster does not possess genes coding for Vaults constituents, homologues to the mammalian. However, the same analysis showed the existence of related Vaults genes in S. mansoni. These observations raised several questions, among them the involvement of Vaults in the mechanisms of parasite adaptation in its mammalian host. Thus, the general objective of this work was the initial molecular characterization of the Vaults constituents in S. mansoni. Through bioinformatics tools, the putative Vaults protein components were recovered from database and used by search to identification of this orthologues in higher and lower organisms, followed by analysis of data retrieved. The results suggest that Vaults components SmMVP and SmTEP-1 are conserved and, for another hand SmVPARP and S. mansoni vRNA remain to be identified. The expression levels of the Vaults components were quantified using PCR and confirmed by qRT-PCR using total RNA from adult worms, eggs, cercariae and mechanically transformed schistosomula (MTS) at 3.5 hours, 1, 2, 3, 5 and 7 days of in vitro cultivation. The results suggest an equivalent expression in all developmental stages analyzed. To analyze whether equivalent levels of transcripts from SmMVP can be reflect on the protein levels, we performed western blot experiments. The results suggest equivalent levels of MVP corroborating the results of gene expression at transcriptional levels. Taken together, the results suggest that the Vault complex may be involved in cellular processes that are related to the success of parasitism during both peregrination as a maintenance of the infection in the vertebrate host.
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Desenvolvimento de nanopartículas lipídicas sólidas contendo praziquantelSouza, Ana Luiza Ribeiro de [UNESP] 11 July 2011 (has links) (PDF)
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souza_alr_dr_arafcf.pdf: 596518 bytes, checksum: d996f6cfa9e5617222527d2ebbe8cff2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O praziquantel (PZQ) é o fármaco de escolha para o tratamento da esquistossomose, sendo ativo contra todas as espécies de Schistosoma. Devido à sua baixa solubilidade em água e o risco de resistência ou tolerância do parasita a este fármaco, é importante desenvolver alternativas terapêuticas que possam aumentar sua eficácia e melhorar sua biodisponibilidade. As nanopartículas lipídicas sólidas (SLN) combinam as vantagens de diferentes carreadores coloidais tais como emulsões, lipossomas e nanopartículas poliméricas, e também evitam algumas das suas desvantagens em relação à estabilidade e dificuldade de produção em larga escala. Assim, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização de SLN contendo PZQ (SLN-PZQ) a fim de melhorar as propriedades biofarmacêuticas deste fármaco. O ácido esteárico foi selecionado como fase lipídica para o desenvolvimento das SLN devido à capacidade de solubilização do PZQ e baixo custo. As SLN foram preparadas por um método modificado de microemulsão óleoem- água sob homogeneização a alta velocidade de cisalhamento utilizando Poloxamer 188 como tensoativo. O diâmetro médio e potencial zeta das SLN-PZQ foram 505,6 nm ± 27,2 nm e -34,0 mV ± 1,1 mV, respectivamente. As nanopartículas foram observadas por microscopia eletrônica de varredura revelando a presença de partículas esféricas. Os resultados obtidos por calorimetria exploratória diferencial indicam que as SLN se apresentam no estado sólido e o fármaco está molecularmente disperso na matriz lipídica. A eficiência de encapsulação e capacidade de carga do PZQ determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência foram 99,06 % ± 0,3 % e 17,48 % ± 0,05 %, respectivamente. A formação das SLN foi confirmada por espalhamento de raio-X a baixo ângulo revelando a presença de uma estrutura lamelar com efetiva incorporação do PZQ nas partículas / Praziquantel (PZQ) is a drug of choice for the treatment of schistosomiasis, being active against all species of Schistosoma. Due to its low water solubility and risk of parasite resistance or tolerance to this drug, it is would be useful to develop therapeutical alternatives that can increase its efficacy and improve the bioavailability. Solid lipid nanoparticles (SLN) combine the advantages of different colloidal carriers such as emulsions, liposomes, and polymeric nanoparticles, and also avoid some of their disadvantages in relation to the stability and difficulty of large scale production. Thus, the aim of this research was the development and characterization of PZQ-loaded SLN (SLN-PZQ) to improve the biopharmaceuticals properties of this drug. The stearic acid was selected as lipid phase to development of SLN due to solubilization capacity of the PZQ and low cost. The SLN were prepared by a modified oil-in-water microemulsion method under high-shear homogenization using Poloxamer 188 as surfactant. The mean particle size and zeta potential to PZQ-loaded SLN were 505.6 nm ± 27.2 nm and -34.0 mV ± 1.1 mV, respectively. The nanoparticles were observed by scanning electron microscopy (SEM) revealing the presence of spherical particles. The results obtained by differential scanning calorimetry indicate that the SLN are presented in the solid state and the drug is molecularly dispersed in the lipid matrix. The entrapment efficiency and loading capacity of PZQ determined by high performance liquid chromatography were 99.06 % ± 0.3 % and 17.48 % ± 0.05 %, respectively. The SLN formation was confirmed by small angle X-ray scattering revealing the presence of a lipid lamellar structure with effective incorporation of the PZQ into particles. The stability of PZQloaded SLN stored at room temperature and at 4 ºC was investigated concerning particle size, zeta potential and entrapment efficiency
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