Orientador: Claudia Herrera Tambeli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-09-19T14:06:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fischer_Luana_D.pdf: 1122094 bytes, checksum: 8b6c9b3ab833b6c7931a0c3408f48170 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência dos hormônios sexuais na nocicepção da articulação temporomandibular (ATM) de ratos e os possíveis mecanismos envolvidos. A injeção de formalina na ATM em uma concentração (0,5%) que não induziu nocicepção em machos intactos, induziu em machos gonadectomizados e em fêmeas intactas, o que sugere que os níveis fisiológicos de testosterona diminuem o risco de machos desenvolverem nocicepção da ATM. A resposta nociceptiva induzida pela injeção de uma alta concentração de formalina (1,5%) na ATM de machos é significativamente menor que àquela induzida na ATM de fêmeas em diestro, fase do ciclo estral com baixos níveis de estrógeno, mas semelhante àquela induzida na ATM de fêmeas em proestro, faze do ciclo estral com altos níveis de estrógeno. Esse resultado sugere que a nocicepção da ATM, em fêmeas, é exacerbada durante a fase do ciclo estral em que os níveis de estrógeno estão baixos. A administração sistêmica de estrógeno ou progesterona em fêmeas gonadectomizadas e de testosterona em machos gonadectomizados reduz a resposta nociceptiva induzida pela injeção de formalina na ATM. A influência do sexo e dos hormônios ovarianos na nocicepção induzida pela injeção de formalina ou de glutamato na ATM foi exatamente a mesma, o que demonstra que o efeito antinociceptivo dos hormônios ovarianos na ATM não é estritamente relacionado a nocicepção induzida pela formalina. A semelhança entre estudos clínicos e os resultados obtidos utilizando estes dois agentes nociceptivos sugere que o modelo comportamental de nocicepção da ATM pode ser útil e confiável para estudar os mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo dos hormônios sexuais na ATM de ratos. A administração de drogas no líquido cefalorraquidiano da região de complexo sensorial trigeminal também é útil para o estudo desses mecanismos, mas o procedimento cirúrgico realizado para a implantação do cateter usado para a injeção pode afetar a expressão dos comportamentos relacionados a nocicepção orofacial. Portanto, a técnica que permite a injeção direta de drogas nessa região, sem a necessidade de procedimentos cirúrgicos contribui para o estudo dos mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo dos hormônios sexuais na ATM de ratos. A administração, por meio dessa técnica, do antagonista de receptores opióides naloxona no espaço subaracnóide da região do complexo sensorial trigeminal bloqueou o efeito antinociceptivo induzido pelos níveis fisiológicos de estrógeno em fêmeas em proestro e pela administração sistêmica de estrógeno ou progesterona em fêmeas gonadectomizadas e de testosterona em machos o gonadectomizados. No entanto, a co-administração de naloxona e formalina na ATM bloqueou o efeito antinociceptivo da progesterona e da testosterona, mas não do estrógeno. Esses dados sugerem que mecanismos opióides centrais medeiam o efeito antinociceptivo do estrógeno, da progesterona e da testosterona, enquanto mecanismos opióides periféricos também medeiam o efeito antinociceptivo da progesterona e da testosterona. A administração local de estrógeno, conjugado ou não com a albumina plasmática, na ATM de fêmeas reduziu significativamente a nocicepção induzida pela formalina. Como o estrógeno conjugado com a albumina tem ação restrita a receptores de membrana, esse dado sugere que o estrógeno reduz a nocicepção através de uma ação periférica não genômica. O efeito antinociceptivo do estrógeno foi bloqueado pelo antagonista de receptores estrogênicos ICI 182 780 e pelos inibidores da óxido nítrico sintase, L-NNA, e da guanilato ciclase, ODQ, mas não pelo antagonista de receptores opióides, naloxona. Esse dado sugere que o efeito antinociceptivo periférico do estrógeno é mediado pela ativação da via do óxido nítrico/GMP cíclico. Juntos, os resultados desse estudo demonstram que os níveis fisiológicos de testosterona diminuem o risco de ratos desenvolverem nocicepção da ATM e os de estrógeno diminuem a nocicepção da ATM em ratas. Além disso, a nocicepção da ATM também é diminuída pela administração sistêmica de estrógeno ou progesterona em ratas e de testosterona em ratos. O efeito antinociceptivo dos hormônios sexuais é mediado por mecanismos opióides centrais, enquanto mecanismos opióides periféricos medeiam o efeito da progesterona e da testosterona, mas não do estrógeno. De fato, a administração de estrógeno na ATM reduz a nocicepção através de um mecanismo periférico não genômico, mediado pela ativação da via do óxido nítrico-GMPc, mas não pela ativação do sistema opióide periférico / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of sex hormones on temporomandibular joint (TMJ) nociception in rats and the possible mechanisms underlying their effect. The TMJ injection of 0.5% formalin induced nociception in intact females and gonadectomized males, but not in intact males, suggesting that the physiological level of testosterone protect males by decreasing their probability to develop TMJ pain. A higher dose of formalin (1.5%) induced a nociceptive behavior response significantly higher in female rats during diestrus phase of the estrous cycle than in those during proestrus phase and male rats. Since estradiol serum level was higher in proestrus than in diestrus females, this finding suggests that during low estradiol level of the estrous cycle the TMJ nociception is increased in female rats. Systemic administration of estradiol or progesterone in gonadectomized females and of testosterone in gonadectomized males significantly decreased 1.5% formalin-induced TMJ nociception. The role of sex and ovarian hormones in formalin and glutamate-induced TMJ nociception was virtually the same, showing that the antinociceptive effect of ovarian hormones was not exclusively related to the nociception induced by formalin. The similarity between clinical studies and the present results, obtained by using two different nociceptive agents, suggests that the TMJ behavior model may be useful and reliable to study the mechanisms underling the antinociceptive effect of sex hormones in the TMJ. Drug delivery to the medullary cerebrospinal fluid is also useful to study these mechanisms, however, the surgical procedure for implantation of the catheter used for drug delivery may affect the expression of the nociceptive behaviors related to orofacial nociception. Therefore, the technique for direct drug delivery to the medullary cerebrospinal fluid, without catheter implantation, will contribute for the study of the mechanisms underling the antinociceptive effect of sex hormones in the TMJ. The administration, though this technique, of the opioid receptor antagonist naloxone in the medullary region blocked the antinociceptive effect of estradiol, progesterone and testosterone. However, the co-administration of naloxone with formalin into the TMJ blocked the antinociceptive effect of progesterone and testosterone, but not of estradiol. These findings suggest that central opioid mechanisms mediate the antinociceptive effect of estradiol, progesterone and testosterone, while peripheral opioid mechanisms also mediated the antinociceptive effect of progesterone and testosterone. The local administration of estradiol, conjugated or not with the bovine serum albumin, significantly decreased formalin-induced TMJ nociception in female rats. Given that estradiol conjugated with bovine serum albumin is a membrane impermeable compound, these findings suggest that estradiol decreases TMJ nociception by a peripheral nongenomic mechanism. The antinociceptive effect of estradiol was blocked by an estrogen receptor antagonist and by a nitric oxide synthase and a guanilato cyclase inhibitors, but not by a opioid receptor antagonist. These findings suggest that estradiol decreases TMJ nociception in female rats through a peripheral activation of NO-cGMP signaling pathway. Taken together, the findings of this study suggest that the high physiological level of testosterone decreases the risk of male rats develop TMJ pain and that of estradiol decreases TMJ nociception in female rats. Furthermore, TMJ nociception was also decreased by systemic administration of estradiol or progesterone in female and of testosterone in male rats. The antinociceptive effect of sex hormones is mediated by central opioid mechanisms, while peripheral opioid mechanisms mediate the antinociceptive effect of progesterone and testosterone, but not of estradiol. In fact, the administration of estradiol in the TMJ decreases nociception by a peripheral non-genomic mechanism mediated by activation of the nitric oxide-cGMP signaling pathway, but not by opioid receptors / Doutorado / Fisiologia Oral / Doutor em Odontologia

INTRODUÇÃO: O tratamento estrogênico isolado e contínuo por seis meses é uma opção no tratamento de sintomas climatéricos. A monitorização endometrial deve ser realizada rotineiramente; nela, a ultra-sonografia (US) e a biópsia uterina têm papel importante. A US e a Dopplervelocimetria também avaliam as mudanças circulatórias uterinas. OBJETIVO: Estudar o comportamento da vascularização uterina e do endométrio em mulheres na pós-menopausa tratadas com estrógeno contínuo por seis meses, seguido de progestógeno isolado por 14 dias, e estabelecer suas relações com a proliferação endometrial. MÉTODO: Estudo clínico, prospectivo e controlado, onde quarenta mulheres na pós-menopausa, sem contraindicações para tratamento hormonal (TH). Foram divididas em dois grupos: Estrógeno e Controle. As do Grupo Estrógeno (GE), n= 24, receberam 50 mcg de estradiol-17 beta (E2) transdérmico, duas vezes por semana, durante seis meses. As mulheres do Grupo Controle (GC), n=16, não receberam TH. Todas realizaram FSH, E2 e glicemia de jejum; US transvaginal; Dopplervelocimetria das artérias uterinas, miometriais e endometriais e biópsia aspirativa de endométrio. O GE repetiu os mesmos exames, com exceção de FSH, E2 e glicemia, no terceiro e no sexto mês de tratamento. No GC, a biópsia do endométrio foi repetida apenas no sexto mês de tratamento. As mulheres do GE utilizaram, ao fim de seis meses, 10 mg de acetato de medroxiprogesterona por dia, durante 14 dias. RESULTADOS: No GE, a resistência vascular das artérias uterinas diminuiu no terceiro e no sexto mês de tratamento. O fluxo miometrial das artérias arqueadas aumentou significantemente no sexto mês de tratamento. O aumento da espessura do endométrio ocorreu de forma significante no terceiro mês. No GE houve hiperplasia endometrial simples e sem atipias em 20,8 % das mulheres. No GE, comparando as mulheres que tiveram proliferação com aquelas que mantiveram a atrofia endometrial, observou-se que, no sexto mês de tratamento, o grupo que apresentou proliferação teve diminuição significante da resistência vascular da artéria uterina esquerda, enquanto no grupo que manteve a atrofia, a resistência vascular aumentou na artéria uterina direita. No GC não ocorreu variação da resistência vascular das artérias uterinas bilaterais; o fluxo miometrial das artérias arqueadas não se modificou e não houve proliferação endometrial. CONCLUSÃO: A terapia estrogênica isolada por seis meses diminuiu a resistência vascular das artérias uterinas bilateralmente. A proliferação endometrial precedeu o aumento de vascularização miometrial. Houve associação entre a proliferação endometrial e a diminuição da resistência vascular na artéria uterina esquerda, no final do sexto mês de tratamento estrogênico / INTRODUCTION: Isolated continuous estrogen therapy for 6 months is an option to manage climacteric symptoms. Endometrial monitoring should be performed as a routine, in which ultrasound and uterine biopsy have an important role. Ultrasound with Dopplervelocimetry also assesses uterine circulatory changes. OBJECTIVE: To study the uterine circulatory changes of women in continuous estrogen therapy for 6 months using Doppler velocimetry and to define correlations with endometrial proliferation. METHOD: Clinical prospective controlled study. Forty menopause women were studied, without contraindications to hormone therapy (HT). They were divided into 2 groups: Estrogen and Control. In the Estrogen Group (EG) n = 24, they were treated with transdermal 50mcg estradiol-17 beta (E2), changed twice a week for 6 months. Women in the Control Group (CG) n=16, were not treated with hormones. They all underwent FSH, E2, fast glucose, transvaginal ultrasound , uterine, myometrial and endometrial artery Dopplervelocimetry and aspiration biopsy of endometrium. The EG repeated the same procedures in months 3 and 6 of treatment. In CG, endometrial biopsy was repeated only in the 6th month of treatment. At the end of treatment, EG women received 10 mg of medroxyprogesterone acetate per day for 14 days. RESULTS: In EG, vascular resistance of uterine arteries reduced in the 3rd and 6th months of treatment. Myometrial flow of arcuate arteries was significantly increased in the 6th month of treatment. Increased endometrial thickness was significant in the 3rd month. In EG, the authors detected simple endometrial hyperplasia without atypias in 20.8% of the subjects. In EG, in the 6th month of treatment, upon comparing women who had proliferation and those who maintained the endometrial atrophy, we observed that the group that presented proliferation had significant reduction of vascular resistance of left uterine artery, whereas the group that maintained atrophy had increase in vascular resistance of right uterine artery. In CG, there was no vascular resistance modification, no myometrial flow diference and no endometrial proliferation. CONCLUSION: Isolated estrogen therapy for 6 months reduced vascular resistance of bilateral uterine arteries. Morphological affections to the endometrium preceded myometrial vascular abnormalities. There was association of endometrial proliferation and reduction of vascular resistance of the left uterine artery in the 6th month of estrogen treatment

INTRODUÇÃO: Os fatores genéticos que influenciam o início da puberdade precoce ainda não são totalmente conhecidos. Assim, investigar os mecanismos gênicos que estariam envolvidos na sua gênese é muito importante, pois, além de possibilitar o diagnóstico em fases iniciais, pode contribuir para o desenvolvimento de novas terapias, com melhora do prognóstico. Para alguns investigadores, o estradiol também seria um fator contribuinte no determinismo da puberdade. OBJETIVOS: Estudar três genes que codificam enzimas relacionadas à esteroidogênese (CYP1A1, CYP1B1 e CYP17) em meninas com puberdade precoce central. Avaliar a associação entre variações na sequência desses genes e a puberdade precoce central. MÉTODOS: Foram incluídas 177 pacientes, divididas em dois grupos: Grupo Controle - formado por 104 meninas sem puberdade precoce, acompanhadas no Setor de Ginecologia da Infância e da Adolescência da Divisão de Clínica Ginecológica do HC-FMUSP por outros diagnósticos; Grupo Caso - composto por 73 meninas com diagnóstico de puberdade precoce central, acompanhadas no mesmo setor. Foi avaliada a presença de mutação em genes envolvidos no metabolismo do estrogênio (CYP1A1, CYP1B1 e CYP17) pela técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), utilizando DNA obtido a partir de sangue periférico. RESULTADOS: A distribuição dos genótipos de CYP1A1 MspI (p=0,86) e CYP17 (p=0,12) não apresentou diferença significante entre os grupos. Para o CYP1B1 Eco571, o genótipo mutado C/C foi mais frequente no Grupo Controle que no Grupo Caso (p=0,03). CONCLUSÃO: Nossos dados sugerem que a variação do gene CYP1B1 Eco571 poderia estar associada ao determinismo da puberdade / INTRODUCTION: The genetic factors influencing onset of precocious puberty are not as yet fully known. Therefore, it is very important to investigate the genetic mechanisms involved in its genesis, for the resulting knowledge would not only enable diagnosis in the early stages but also contribute to the development of new therapies for improvement in prognosis. According to some researchers, estradiol would also be a contributory factor in puberty timing. OBJECTIVES: To investigate three genes which codify enzymes associated with steroidogenesis (CYP1A1, CYP1B1, and CYP17) in girls with central precocious puberty by focusing on the association between the sequence variation of these genes and central precocious puberty. METHODS: A total of 177 patients was included and divided into two groups: Control Group with 104 girls without precocious puberty who were being treated for other diagnoses at the Sector of Gynecology of Childhood and Adolescence, Division of Gynecology Clinic, HC-FMUSP; Case Group with 73 girls diagnosed with central precocious puberty. Mutations in genes involved in estrogen metabolism (CYP1A1, CYP1B1, and CYP17) were assessed by the RFLP (restriction fragment length polymorphism) technique using DNA obtained from peripheral blood. RESULTS: No significant difference in the distribution of the CYP1A1 MspI (p=0.86) and CYP17 (p=0.12) genotypes was detected between the two study groups. As for CYP1B1 Eco571, the mutated C/C genotype was found to be more frequent in the Control Group than in the Case Group (p=0.03). CONCLUSION: Our data suggest the CYP1B1 Eco571 gene variation is associated with puberty timing

INTRODUÇÃO: O câncer de mama é a neoplasia maligna mais comum no sexo feminino e a segunda causa de óbito por câncer na mulher. Apesar dos avanços no conhecimento da patogênese e dos aspectos moleculares da doença, a exposição prolongada tanto ao estrogênio endógeno quanto exógeno constitui importante fator na carcinogênese mamária. Produtos da degradação e inativação do estrogênio podem ter ação proliferativa e causar danos ao DNA. Genes de baixa penetrância relacionados ao metabolismo hormonal, atuando em conjunto com fatores comportamentais e endógenos, podem ser responsáveis por parte dos casos de câncer de mama, atuando em conjunto a genes de alta penetrância. OBJETIVOS: Analisar polimorfismos no receptor de estrogênio e em genes relacionados ao seu metabolismo em mulheres com e sem câncer de mama, observando suas frequências em cada um dos grupos. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Foram incluídas mulheres portadoras de carcinoma mamário recém-diagnosticado, com idade superior a 40 anos e sem histórico de outros tipos de neoplasia maligna (grupo estudo) e mulheres sem câncer de mama, apresentando exame mamográfico normal realizado há no máximo 12 meses, com mais de 40 anos de idade e sem histórico de câncer (grupo controle). Foi realizada coleta de sangue periférico para extração e análise de DNA genômico. Avaliaram-se os polimorfismos em CYP1A1 MspI, CYP3A4*1B, COMT L/L, ESR1 PvuII e XbaI e UGT1A1*28. RESULTADOS: Os polimorfismos em UGT1A1*28 e ESR1 PvuII foram mais frequentes no grupo de mulheres com câncer de mama, porém sem atingir significância estatística. As mutações em ESR1 XbaI, CYP3A4*1B e CYP1A1 MspI foram mais frequentes no grupo controle, também sem significância estatística. Já o genótipo L/L do gene COMT foi mais significativamente mais frequente no grupo controle. CONCLUSÕES: A frequência de polimorfismos em UGT1A1*28 e ESR1 PvuII foi de 16,8% e 39,4% nas mulheres com câncer de mama e 10,8% e 18,3% nas sem câncer. A frequência de mutações em ESR1 XbaI, CYP3A4*1B e CYP1A1 MspI foi de 15,1, 44,2 e 3,6% nas mulheres sem câncer de mama e de 25, 22,2% e 0 nas com câncer de mama. O genótipo L/L do gene COMT foi significantemente mais frequente no grupo controle (28,9 vs. 8,6%), sugerindo que este polimorfismo poderia ser um fator protetor ao câncer de mama na população estudada / INTRODUCTION: Breast cancer is the most common malignancy in women and second leading cause of cancer death in women. Despite advances in studies on the pathogenesis and molecular aspects of the disease, prolonged exposure to endogenous and exogenous estrogen is an important factor for mammary carcinogenesis. Products of degradation and inactivation of estrogen may have proliferative action and cause DNA damage. Low penetrance genes related to hormone metabolism, acting in conjunction with behavioral and endogenous factors may be responsible for most cases of breast cancer, and together with high penetrance genes. OBJECTIVES: To analyze polymorphisms in genes related to the estrogen receptor and metabolism in patients with and without breast cancer, observing the frequencies in each group. MATERIALS AND METHODS: We included women with newly diagnosed breast cancer, aged 40 years or more and without history of other types of malignancy (study group) and women without breast cancer, with a normal mammography performed for no more than 12 months, with more than 40 years old and no history of cancer (control group). A sample of peripheral was collected for genomic DNA extraction and analysis. The polymorphisms in CYP1A1 MspI, CYP3A4*1B, COMT L/L, ESR1 PvuII and XbaI and UGT1A1*28 were evaluated. RESULTS: The polymorphisms in UGT1A1*28 and ESR1 PvuII were more frequent in the group of women with breast cancer, without reaching statistical significance. The mutations in ESR1 XbaI, CYP3A4*1B and CYP1A1 MspI were more frequent in the control group, also not statistically significant. The COMT genotype L/L was significantly more frequent in control group. CONCLUSIONS: The frequency of polymorphisms in UGT1A1*28 and ESR1 PvuII was 16.8% and 39.4% in women with breast cancer and 10.8% and 18.3% in those without cancer. The frequency of mutations in ESR1 XbaI, CYP3A4*1B and CYP1A1 MspI was 15.1, 44.2 and 3.6% in women without breast cancer and 25, 22.2 and 0% in breast cancer. The L/L genotype of the COMT gene was significantly more frequent in the control group (28.9 vs. 8.6%), suggesting that this polymorphism could be a protective factor against breast cancer in this population

Orientador: Cláudio Angelo Agostinho / Banca: Marcos Lívio Panhoza Tse / Banca: Luciano Caetano de Oliveira / Resumo: O presente estudo foi realizado na primeira quinzena do mês de abril de 2013 com o objetivo de avaliar diferentes taxas de alimentação em alta frequência com alimentação continua (diurna e noturna) na reversão sexual de larvas de tilápias da linhagem GIFT recém eclodidas, alimentadas com ração comercial com 30 mg de 17-α-metiltestosterona/kg-1. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado com três tratamentos, um grupo controle e quatro repetições. Os tratamentos consistiam em três taxas de alimentação sendo elas: superior, médio e inferior. Na primeira semana as taxas foram de 250, 200 e 150% da biomassa para cada tratamento e na segunda semana estes valores foram reduzidos para 200, 150 e 100% respectivamente, o grupo controle recebia 185% do peso vivo em ração, sem adição de hormônio durante todo o período. As larvas com peso inicial de 0,021±0,01g foram distribuídas na densidade de 1000 larvas por hapa de 343 litros. A ração foi fornecida por alimentadores automáticos de 30 em 30 minutos de acordo com o tratamento e ajustada diariamente por Controlador Lógico Programável (CLP). Os resultados da reversão sexual não diferiram estatisticamente entre si dentro dos tratamentos, exceto no grupo controle que diferenciou de todos os outros. As porcentagens de machos aos sete dias foram 94,6, 97,6 e 96,6% para os tratamentos superior, médio e inferior respectivamente. A automação do fornecimento de ração é uma alternativa para a diminuição da quantidade de hormônio dispensada, pois a redução do período de reversão para sete dias devido à alta frequência e alimentação continua (diurna e noturna) evita o fornecimento de ração com hormônio dos sete aos 14 dias podendo ser uma possível substituta da técnica convencional praticada em pisciculturas comerciais / Abstract: This study was conducted in the first fortnight of April 2013 in order to evaluate different feed rates for high frequency power continues (day and night) in the sex reversal of tilapia larvae newly hatched GIFT strain, fed with commercial feed with 30 mg of 17-α-methyltestosterone / kg-1. The experimental design was completely randomized with three treatments, a control group and four replications. The treatments consisted of three power rates which are: upper, middle and lower. In the first week the rates were 250, 200 and 150% of the biomass for each treatment and the second week these figures were reduced to 200, 150 and 100% respectively, the control group received 185% of body weight in feed without adding hormone throughout the period. The larvae with initial weight of 0.021 ± 0.01 g were distributed in the density of 1,000 larvae per hapa of 343 liters. The ration was provided by automatic feeders 30 in 30 minutes according to the treatment and adjusted daily for Programmable Logic Controller (PLC). The results of sex reversal did not differ among themselves within the processed than in the control group differed from all others. The percentages of males to the seven days were 94.6, 97.6 and 96.6% for the top treatments, middle and bottom respectively. The automation of feeding is an alternative for decreasing the amount of hormone dispensed, since reducing the reversal period for seven days due to the high frequency power continues (day and night) prevents the supply of feed hormone with from seven to 14 days and may be a possible replacement for the conventional technique practiced in commercial fish farms / Mestre

Orientador: Maria Del Pilar Taboada Sotomayor / Banca: Luis Francisco Moreira Gonçalves / Banca Débora Gonçalves / Resumo: O desenvolvimento de métodos analíticos cada vez mais seletivos e sensíveis é de grande importância para uma melhor qualidade na determinação de espécies químicas, aumentando assim a confiabilidade dos resultados obtidos. Com isso, o emprego e otimização das etapas de separação/concentração se faz necessário. O emprego de polímeros molecularmente impressos (do inglês - "Molecularly Imprinted Polymers" - MIP) tem demonstrado ser uma eficiente ferramenta analítica com grande potencialidade para minimizar as limitações das técnicas de separação/concentração tradicionalmente empregadas. No caso deste trabalho, o template utilizado será o valerato de estradiol, principalmente pela sua importância inerente na reposição hormonal feminina e por se tratar de um disruptor endócrino (hormônio) lançado ao meio ambiente sem nenhum controle. Assim a síntese do polímero para identificação do valerato de estradiol foi realizada por diferentes rotas (bulk e precipitação) através de duas vias de polimerização (termopolimerização e fotopolimerização) variando o monômero funcional (MAA, acrilonitrila, 2-vinil-piridina e 1-vinilimidazol). O MIP e NIP foram colocados, um de cada vez, em sistema soxhlet contendo metanol/ácido acético na proporção 70/30 a 60º C, para remoção da molécula impressa, através de cinco lavagens sucessivas em períodos de 24 h. Essas águas de lavagem foram analisadas utilizando espectrofotometria UV/Vis. Posteriormente com os parâmetros otimizados o polímero que apresentou ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The development of selective and sensitive analytical methods has significant importance for an improvement at determination of chemical species; increasing the reliability of the results obtained. So, the use and optimization of separation and concentration steps is necessary. The use of Molecularly Imprinted Polymers (MIP) has been shown to be an efficient analytical tool with great potential to minimize the limitations of separation/concentration techniques traditionally employed. In the case of this study, the template used will be estradiol valerate, once of its inherent importance in female hormone replacement and because it is an endocrine disruptor (hormone) released into the environment without any control. Thus, the synthesis of the polymer for the identification of estradiol valerate was performed by different routes (bulk and precipitation) through two polymerization techniques (thermopolymerization and photopolymerization) by varying the functional monomer (MAA, acrylonitrile, 2-vinyl pyridine and 1- vinylimidazole). MIP and NIP were placed in a soxhlet system containing 70/30 methanol/acetic acid at 60 ° C for removal of the imprinted molecule through five successive washes in 24 h periods. These wash waters were analyzed using UV/Vis spectrophotometry. Subsequently, with the optimized parameters, the polymer that presented the best result was modified with magnetic nanoparticles (core@shell); being synthesized magnetic MIP (MMIP) for estradiol valerate, increas... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: João Eduardo Gomes Filho / Coorientador: Rita Cássia Menegati Dornelles / Banca: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Carla Renata Sipert / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do raloxifeno RLX em lesões periapicais em ratas ovariectomizadas (OVX). Ratas Wistar (6 meses) foram distribuídas nos grupos: SHAM/VEI, OVX/VEI e OVX/RLX e receberam, por 60 dias, veículo (VEI) ou RLX, por gavagem. Durante o tratamento, a polpa do primeiro molar inferior direito e esquerdo foram expostas ao ambiente oral permitindo a análise da lesão aos 7 e 30 dias. Coleta sanguínea foi realizada para análise bioquímica. Logo após os animais foram eutanasiados e as mandíbulas separadas, radiografadas, processadas para análises histopatológica, histométrica e imunoistoquímica. Os dados foram submetidos ao teste de Tukey ou Dunn (p<0,05). A concentração plasmática de estradiol evidenciou o hipoestrogenismo em ratas OVX. A análise radiográfica mostrou diferença significativa apenas entre os períodos, as lesões com 7 dias apresentaram menor extensão que aquelas com 30 dias. Aos 7 dias, a atividade da fosfatase alcalina e o cálcio plasmático foram superiores em OVX/RLX em relação ao grupo SHAM/VEI. O fósforo plasmático foi maior no grupo OVX/RLX em ambos os períodos. O grupo OVX/VEI apresentou inflamação mais intensa com maior área de lesão e imunomarcação de RANKL, HIF1- alfa e células TRAP-positivas que outros grupos em ambos os períodos. Enquanto o tratamento com RLX reverteu este quadro com padrão semelante à SHAM/VEI. Não houve diferença estatística na imunorreatividade de OPG e BALP entre os grupos em ambos sos períodos. Os resultados mostram que o hipoestrogenismo potencializa os efeitos da lesão periapical a qual é amenizada pela ação do RLX devido aos seus efeitos combinados em diminuir a atividade osteoclástica e amenizar o turnover ósseo / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of raloxifene (RLX) on periapical lesions in ovarietomized rats (OVX). Wistar rats (6 months) were distributed into groups: SHAM/veh, OVX/veh and OVX/RLX that received for 60 days vehicle or RLX by gavage. During treatment, the pulp of lower first molar was exposed to the oral environment to enable lesion analysis on 7 and 30 days.Blood collection was performed for biochemical analysis. Soon after the animals were killed, the jaws separated, radiographed and processed for histological, histometric and immunohistochemical analyzes. Data were submitted to Tukey or Dunn test (p <0.05). The plasma concentration of estradiol showed hypoestrogenism in OVX rats.Radiographically, the groups were similar but lesions on day 7 were smaller than lesions on day 30. On day 7, the alkaline phosphatase activity and plasma calcium were higher in OVX-RLX than the SHAM-veh. After 30 days of lesion, significant decrease was observed in calcium level in the raloxifene group. The alkaline phosphatase activity was higher in groups without RLX after 30 days oflesion. The plasma concentration of phosphorus was higher in RLX group, in both time points. The OVX/veh group presented more intense inflammation, larger area of periapical lesion and immunostaining of RANKL, HIF-1alpha and TRAP-positive cells than other groups in both time points. While treatment with RLX reversed this condition and was similar to SHAM/veh. There was no statistical difference in immunoreactivity of OPG and BALP between groups in both time points. The results showed that hypoestrogenism potentiates the effects of periapical lesions, and this potentiation is diminished by RLX due its effects in decreasing osteoclast activity and soften bone turnover / Mestre

Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Juliana Mazzonetto Teófilo / Banca: Ana Lia Anbinder / Banca: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Banca: Horácio Faig Leite / Abstract: Due to the adverse effects of estrogen, new therapies have been proposed, such as soy isoflavones. However, their effects on bone repair and uterus epithelium remain unclear. The aim of this work was to study the acute effects of ovariectomy and treatment with estrogen and soy isoflavones, isolated or in association, on rat bone repair and uterus epithelium. 120 rats were used; 96 ovariectomized and 24 Sham-operated (SHAM). The ovariectomized rats were dibided into 4 groups, receiving orally: 1 mg/kg/day of 17 'beta'-estradiol valerate(OVZ-E); 15mg/kg/day of isoflavones (OVZ-I); associated treatments (OVZ-A); and vehile (OVZ). SHAM rats received vehicle. Treatment began on the ovariectomy day. The lower first molar was removed on both sides 15 days after ovariectomy. The rats received the treatment until sacrificed, which occurred at seven, 21 and 45 days after dental extraction. The uterus was submitted to histological analyses and the mandible to histological, histomorphometric, backscattered electron microscopy (BSE) and immunohistochemistry analyses. Concerning bone repair, no difference was observed in trabecular volume between the OVZ and SHAM groups for each period. Histological analysis and BSE revealed changes in bone microarchitecture after 45 days. Verification showed that the SHAM group presented a higher mean osteoid volume at seven days compared to the OVZ and OVZ-E groups and that the OVZ-A group showed the highest mean for this period. The number of mast cells tended to be higher in the OVZ group at 45 days. Strong expression of TGF-'beta' was observed at seven days, which diminished over time. The OVZ-E group presented the lowest mineral apposition rate at seven days. No difference was observed for the remaining periods. The SHAM, OVZ-E and OVZ-A... / Doutor

O estrogênio, principal hormônio sexual feminino, tem importante papel na regulação da contratilidade miocárdica e função vascular. A escassez estrogênica esta associada ao aumento do risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares em mulheres. Uma vez que o estrogênio tem capacidade antioxidante e age estimulando tanto a síntese, quanto a liberação do óxido nítrico (NO), um potente vasodilatador, buscou-se verificar qual a influência dessas propriedades do estrogênio na contratilidade cardíaca e na função coronariana. Para isso foram utilizadas 29 ratas Wistar (± 200g) divididas em 3 grupos: SHAM, o qual foi submetido à cirurgia fictícia (sham operation) de ovariectomia bilateral; OVX, que foi ovariectomizado e OVX+RH, que foi ovariectomizado e recebeu reposição estrogênica. Os grupos foram subdivididos em 2 sub-grupos para o procedimento de perfusão do coração isolado, de acordo com a solução utilizada (TYRODE ou TYRODE+LNAME). Sete dias após cirurgia de ovariectomia ou simulação da mesma, foi iniciada a reposição hormonal com a implantação de cápsulas preenchidas com 17β-estradiol (5%(p:v)) ou apenas óleo de girassol (grupos SHAM e OVX). A reposição persistiu por 21 dias e, ao término desse período, foi iniciada a determinação do ciclo estral nas ratas não submetidas à OVX. Foram utilizadas no experimento as ratas que se encontravam na fase do diesto. Feito isso, foi coletado sangue pelo plexo retrorbital, sob anestesia etérea, de todos os animais e, em seguida, eles foram mortos por deslocamento cervical e iniciado protocolo de isquemia-reperfusão. Esse protocolo consistiu de estabilização por 20 minutos, seguida de isquemia global normotérmica por 30 minutos e reperfusão por 20 minutos. Foram avaliados os seguintes parâmetros: freqüência cardíaca (FC), pressão sistólica do ventrículo esquerdo (PSVE), pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE), índice de contratilidade (+dP/dt), índice de relaxamento (-dP/dt) e pressão de perfusão (PP). Ao término do protocolo, os corações foram pesados e preparados para análise das concentrações de peróxido de hidrogênio (H2O2) e nitratos totais (NO3 -), além da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). A concentração plasmática de 17β-estradiol no grupo SHAM foi de 30,7 ± 5,6 pg/ml. A OVX bilateral diminuiu em 53% a concentração estrogênica e a reposição hormonal aumentou 343% em relação ao grupo OVX as concentrações desse hormônio, comprovando a eficácia da reposição hormonal. A PP mostrou variação semelhante a atividade da CAT e oposta as concentrações de NO3 - e H2O2. Ao ser perfundido com TYRODE, o grupo OVX apresentou PP e atividade da CAT elevadas (28% e 20%, respectivamente) e menores concentrações de NO3 - e H2O2 (ambos 35%) em relação ao SHAM. Nos animais que receberam reposição hormonal, esses parâmetros foram parcialmente restabelecidos. Quando perfundidos com LNAME, foi observado, nos animais SHAM e OVX+RH, concentrações de NO3 - (22% e 18%, respectivamente) e H2O2 (36% e 30%, respectivamente) diminuídas e aumento na PP (54% e 22%, respectivamente) e CAT (19% e 31%, respectivamente) em relação aos mesmos grupos perfundidos com TYRODE. OVX-LNAME apresentaram menor contratura cardíaca isquêmica que os demais grupos. Não foram observadas diferenças significativas nos outros parâmetros hemodinâmicos, assim como na atividade da SOD, entre os demais grupos experimentais. Na ausência de estrogênio parece não haver uma dependência do NO na modulação do tônus vascular coronariano. Além do mais, parece haver uma influência desse vasodilatador no desenvolvimento da contratura cardíaca isquêmica nos animais ovariectomizados. Possivelmente o balanço desregulado entre pró e antioxidantes promova adaptações que alterem as respostas cardiovasculares à isquemia-reperfusão.

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:30:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-28. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:34:16Z : No. of bitstreams: 1 000857773.pdf: 1062070 bytes, checksum: 71a62107765cf558c1418c16cda5314d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desse estudo foi analisar se há diferenças no efeito do desuso e da deficiência de estrógeno sobre o tecido ósseo trabecular e cortical, e se estes efeitos influenciam na qualidade do tecido ósseo aumentando sua fragilidade. Para este estudo, 30 ratas Wistar com 19 semanas de idade foram distribuídas nos grupos: controle (CON), descarregamento dos membros posteriores (HLU) e ovariectomizado (OVX). As análises da densidade óssea in vivo (DXA) dos fêmures e tíbias e as dosagens plasmáticas de cálcio, fósforo, fosfatase alcalina, TRAP (espectrofotometria) e E2 (ELISA) foram realizadas no início e fim do experimento, com 19 e 27 semanas de idade respectivamente. Na 27a semana, os fêmures e as tíbias foram desarticulados e armazenados para avaliar a microestrutura do osso trabecular e cortical (microtomografia computadorizada), além das propriedades biomecânicas do colo femoral e da diáfise femoral e tibial (ensaio mecânico). O grupo HLU apresentou diminuição na concentração plasmática de cálcio e atividade da fosfatase alcalina total, diminuição na DMOa do fêmur com aumento na porosidade cortical e diminuição na resistência óssea, entretanto, não foram observadas estas alterações na tíbia. O grupo OVX apresentou diminuição nas concentrações plasmáticas de cálcio, diminuição da DMOa do fêmur, deterioração trabecular no fêmur e na tíbia, com maior deterioração nas trabéculas ósseas tibiais, sem alteração na resistência óssea em ambos os ossos. Esses resultados demonstram que apesar do grupo HLU e OVX apresentassem alterações na densidade mineral óssea e microarquitetura óssea, podemos concluir que o desuso determinou maior perda no tecido cortical e na resistência óssea em relação à deficiência de estrógeno. Portanto, as análises da estrutura do tecido cortical, como a porosidade cortical, podem ser preponderantes para prever o risco de fratura / The objective of this study was to analyze whether there are differences in the effect of disuse and estrogen deficiency on trabecular and cortical bone tissue, and whether these effects influence the quality of bone tissue increasing its fragility. For this study, 30 Wistar rats with 19 weeks old, were divided into groups: control (CON), hindlimb unloading (HLU) and ovariectomy (OVX). In vivo analysis of bone density (DXA) from femurs and tibias and plasma levels of calcium, phosphorus, alkaline phosphatase, TRAP (spectrophotometry) and E2 (ELISA) were performed at the beginning and end of the experiment, and 19 age 27 weeks, respectively. In the 27th week, the femur and tibia were disjointed and stored to assess the microstructure of trabecular and cortical bone (microcomputed tomography) and biomechanical properties of the femoral neck and femoral shaft and tibial (mechanical tests). The HLU group showed a decrease in plasma calcium concentration and total alkaline phosphatase activity, decreased femoral BMAD with increased cortical porosity and decrease in bone strength, however, there were no such changes in the tibia. The OVX group showed a decrease in plasma concentrations of calcium, decreased femoral BMAD, trabecular deterioration in the femur and tibia, with further deterioration in the tibial trabecular bone, with no change in bone strength in both bones. These results demonstrate that although the HLU and OVX group showed changes in bone mineral density and bone microarchitecture, we can conclude that the in disuse determined higher cortical tissue loss and bone strength relative to estrogen deficiency. Therefore, the analysis of the cortical tissue structure, such as cortical porosity can be prevalent to predict fracture risk