Magistro darbe tiriama kai kurių abiotinių veiksnių įtaka hibridinės drebulės adaptacijai ex vitro sąlygomis. Darbo objektas – Smulkiadantės tuopos x drebulės (Populus tremuloides x Populus tremula) hibridas. Darbo tikslas – Nustatyti temperatūros ir substrato pH įtaką hibridinės drebulės mikroūglių adaptacijai ex vitro sąlygomis. Darbo metodai – Temperatūros ir pH įtaka adaptacijai ex vitro sąlygoms. Darbo rezultatai: Mikroūglių be šaknų, paruoštų perkėlimui į daigintuves, poveikis skirtinga temperatūra parodė, kad geriausiai mikroūgliai adaptavosi prieš tai palaikyti 12 val. +4 ºC temperatūroje. Genotipų reakcija į skirtingas temperatūros sąlygas skyrėsi nežymiai. Adaptuojamus ex vitro sąlygose hibridinės drebulės mikroūglius rekomenduojama laistyti tirpalais, kurių pH (5,5–6) artimas arba šiek tiek didesnis už fiziologinį. Augimo reguliatoriai, PBZ ir ABR, gali būti naudojami hibridinės drebulės mikroūglių adaptacijos ex vitro sąlygose pagerinimui, ypač mažiau adaptacijai palankiomis sąlygomis (kai pH 5). / This master thesis researches some effects of abiotic factors on adaptation of the hybrid aspen under ex vitro conditions. Object of the research – Hybrid aspen (Populus tremuloides x Populus tremula). Purpose of the research – Defining the impact of temperature and pH substrate on adaptation of the hybrid aspen under ex vitro conditions. Research methods – The impact of temperature and pH substrate on adaptation under ex vitro conditions. Results of the research: The effect of different temperature on rootless micro plantlets prepared for planting shows that the best results of adaptation are achieved when micro plantlets are disposed to temperature of +4 ºC for 12 hours. The reaction of genotypes to different temperature conditions is of no significant importance. For better adaptation under ex vitro conditions, it is recommended to water micro plantlets with solutions that have the same pH (5,5 – 6) or minimally larger than physiological saline. Plant growth regulators, such as PBZ and ABR, can also be used for better adaptation results under ex vitro conditions, especially under less favourable conditions (when pH is 5).

O cultivo in vitro de células, tecidos e órgãos vegetais, iniciado no começo do século XX, propiciou avanços no conhecimento científico e biotecnológico. O processo de regeneração in vitro depende tanto das condições de cultivo quanto da base genética dos explantes utilizados. Alguns autores postulam que a regeneração pode ser dividida em etapas e o balanço entre hormônios vegetais é responsável por determinar o destino dos explantes (e.g. formação de raízes, gemas ou calos). Em estudo realizado anteriormente, foi constatada a alta capacidade de regeneração de gemas caulinares adventícias in vitro do mutante Mouse-ears, que apresenta folhas com maior complexidade. Diante disso, neste trabalho outros mutantes que afetam a arquitetura foliar, como entire, procera, clausa, potato-leaf e Mouse-ears, foram avaliados ex vitro e in vitro, no \"background\" da cultivar Micro-Tom (MT). A caracterização fenotípica dos genótipos demonstrou que as mutações estudadas afetam vários outros aspectos do desenvolvimento, além das folhas. Muitas das diferenças observadas ex vitro, são em parte devidas à transição de estágio vegetativo para reprodutivo. Ao analisarmos os resultados de regeneração in vitro (formação de gemas caulinares e raízes adventícias; e crescimento de calos), nota-se que a capacidade organogenética de cada mutante não tem correlação com o grau de complexidade foliar, mas sim com tipo de mutação envolvida. Análises morfológicas de eventos in vitro e ex vitro quanto à formação de gemas caulinares adventícias e do meristema apical caulinar, respectivamente, denotam que ocorrem tanto similaridades quanto disparidades entre os dois processos. Os resultados indicam que provavelmente os mutantes entire (respota constitutiva a auxina por perda de função de um AUX/IAA) e Mouse-ears (super expressão do gene KNOX TKN2) atuam na etapa de indução de raízes e gemas, respectivamente, no processo de regeneração in vitro. Em contra partida, procera (resposta constitutiva a giberelina) atuaria na etapa de aquisição de competência ou retardo do desenvolvimento pós-indução. Além disso, TKN2 demonstrou ter um importante papel na formação de gemas caulinares adventícias in vitro. As vias para a formação de orgãos ex vitro (e.g. folhas, raízes, gemas axilares etc.) são diferentes da in vitro. Apesar disso, vários genes e moléculas recrutados em uma via de desenvolvimento ex vitro podem interferir na organogênese in vitro. / The in vitro culture of plant cells, tissues and organs, started at the beginning of the 20th century, has been leading to scientific and biotechnological advances ever since. The process of in vitro regeneration depends on the growth conditions as well as the genotype of the explant. Several authors postulated that regeneration can bedivided into steps and that the hormonal balance will determinate the fate of the explant (e.g. formation of roots, shoots or callus). In a previous study, it was found that the mutant Mouse-ears, which exhibits a more complex leaf architecture, has high capacity of shoot regeneration. Hence, in the present work others mutants affecting leaf architecture such as entire, procera, clausa, potato-leaf and Mouse-ears were measured ex vitro and in vitro in the MT background. These assessments aimed to investigate if there are similarities in organogenesis between in vitro and ex vitro. The phenotypic characterization of the genotypes showed that these mutations affect several aspects of plant development and not only the leaf architecture. Many differences observed ex vitro are in part due to the transition from vegetative to reproductive phase. When analyzing the results of in vitro regeneration (formation of adventitious shoots and roots; and callus growing) it is noticed that the organogenetic capacity of each mutant have no correlation with the degree of leaf complexity but with the type of mutation involved. Morphological analysis of in vitro and ex vitro events, such as formation of adventitious shoots and shaping of shoot apical meristem, respectively, denotes similarities and divergences between the processes. The results indicate that probably the mutants entire (constitutive response to auxin due to a loss-of-function in an AUX/IAA) and Mouse-ears (overexpression of a KNOX TKN2) act at the induction step of root and shoot, respectively, in the in vitro regeneration process. On the other hand, procera (constitutive response to gibberellin) acts at the competence step or the arrest of the development after induction. Furthermore, TKN2 showed an important role in the formation of in vitro adventitious shoots. The pathways for ex vitro organ formation (e.g. leaf, root, axillary buds, etc.) are different from that for in vitro. Nevertheless, genes and molecules recruited in the pathway of ex vitro development may interfere in the in vitro organogenesis.

O cultivo in vitro de células, tecidos e órgãos vegetais, iniciado no começo do século XX, propiciou avanços no conhecimento científico e biotecnológico. O processo de regeneração in vitro depende tanto das condições de cultivo quanto da base genética dos explantes utilizados. Alguns autores postulam que a regeneração pode ser dividida em etapas e o balanço entre hormônios vegetais é responsável por determinar o destino dos explantes (e.g. formação de raízes, gemas ou calos). Em estudo realizado anteriormente, foi constatada a alta capacidade de regeneração de gemas caulinares adventícias in vitro do mutante Mouse-ears, que apresenta folhas com maior complexidade. Diante disso, neste trabalho outros mutantes que afetam a arquitetura foliar, como entire, procera, clausa, potato-leaf e Mouse-ears, foram avaliados ex vitro e in vitro, no \"background\" da cultivar Micro-Tom (MT). A caracterização fenotípica dos genótipos demonstrou que as mutações estudadas afetam vários outros aspectos do desenvolvimento, além das folhas. Muitas das diferenças observadas ex vitro, são em parte devidas à transição de estágio vegetativo para reprodutivo. Ao analisarmos os resultados de regeneração in vitro (formação de gemas caulinares e raízes adventícias; e crescimento de calos), nota-se que a capacidade organogenética de cada mutante não tem correlação com o grau de complexidade foliar, mas sim com tipo de mutação envolvida. Análises morfológicas de eventos in vitro e ex vitro quanto à formação de gemas caulinares adventícias e do meristema apical caulinar, respectivamente, denotam que ocorrem tanto similaridades quanto disparidades entre os dois processos. Os resultados indicam que provavelmente os mutantes entire (respota constitutiva a auxina por perda de função de um AUX/IAA) e Mouse-ears (super expressão do gene KNOX TKN2) atuam na etapa de indução de raízes e gemas, respectivamente, no processo de regeneração in vitro. Em contra partida, procera (resposta constitutiva a giberelina) atuaria na etapa de aquisição de competência ou retardo do desenvolvimento pós-indução. Além disso, TKN2 demonstrou ter um importante papel na formação de gemas caulinares adventícias in vitro. As vias para a formação de orgãos ex vitro (e.g. folhas, raízes, gemas axilares etc.) são diferentes da in vitro. Apesar disso, vários genes e moléculas recrutados em uma via de desenvolvimento ex vitro podem interferir na organogênese in vitro. / The in vitro culture of plant cells, tissues and organs, started at the beginning of the 20th century, has been leading to scientific and biotechnological advances ever since. The process of in vitro regeneration depends on the growth conditions as well as the genotype of the explant. Several authors postulated that regeneration can bedivided into steps and that the hormonal balance will determinate the fate of the explant (e.g. formation of roots, shoots or callus). In a previous study, it was found that the mutant Mouse-ears, which exhibits a more complex leaf architecture, has high capacity of shoot regeneration. Hence, in the present work others mutants affecting leaf architecture such as entire, procera, clausa, potato-leaf and Mouse-ears were measured ex vitro and in vitro in the MT background. These assessments aimed to investigate if there are similarities in organogenesis between in vitro and ex vitro. The phenotypic characterization of the genotypes showed that these mutations affect several aspects of plant development and not only the leaf architecture. Many differences observed ex vitro are in part due to the transition from vegetative to reproductive phase. When analyzing the results of in vitro regeneration (formation of adventitious shoots and roots; and callus growing) it is noticed that the organogenetic capacity of each mutant have no correlation with the degree of leaf complexity but with the type of mutation involved. Morphological analysis of in vitro and ex vitro events, such as formation of adventitious shoots and shaping of shoot apical meristem, respectively, denotes similarities and divergences between the processes. The results indicate that probably the mutants entire (constitutive response to auxin due to a loss-of-function in an AUX/IAA) and Mouse-ears (overexpression of a KNOX TKN2) act at the induction step of root and shoot, respectively, in the in vitro regeneration process. On the other hand, procera (constitutive response to gibberellin) acts at the competence step or the arrest of the development after induction. Furthermore, TKN2 showed an important role in the formation of in vitro adventitious shoots. The pathways for ex vitro organ formation (e.g. leaf, root, axillary buds, etc.) are different from that for in vitro. Nevertheless, genes and molecules recruited in the pathway of ex vitro development may interfere in the in vitro organogenesis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Native medicinal plants are widely used, but are insufficient scientific information on the spread of some species and cytotoxicity. This study investigated the sexual propagation and vegetative species Solidago chilensis Meyen (Asteraceae) through seed germination, micropropagation, cuttings, evaluate the genotoxic and quantify the accumulation of secondary metabolites of plants obtained. Studies of germination in vitro and ex vitro seeds were developed by testing storage conditions, concentrations of gibberellic acid (GA3), light regimes, soaking times in water to 5ºC ± 1ºC, temperatures and populations. For micropropagation were used apical and nodal segments and combinations of benzylaminopurine BAP (0,0 e 2,0 mg L-1) and naphthalene acetic acid NAA (0,0 e 0,2 mg L-1). In the study of stem cuttings were used cuttings of branches overhead and underground rhizomes. Apical, middle and basal branches were kept in distilled water and nutrient solutions Murashige and Shoog (20%), with or without indole butyric acid (IBA) (5,0 mg L-1). For the cutting of rhizomes, segments thereof were immersed in 0, 600 and 1200 mg L-1 IBA for six hours and after cultured in Plantmax, sand or vermiculite. Apical leaves from four different origins: natural plants growing in wasteland; plants from wasteland and cultivated in the greenhouse, plants from cuttings and rhizomes micropropagated plants were collected for the assessment of genotoxicity and quantification of total polyphenols and flavonoids by spectrophotometry, and chlorogenic acid, quercetin and rutin by High Performance Liquid Chromatography Efficiency. The genotoxicity was assessed using the Allium cepa test, testing concentrations of 5 and 20 g L-1 aqueous extracts of dried leaves. Populations influenced the germination of seeds, and the wasteland of the ones who had averaged 57,2% germination. The seeds germinated under 16h photoperiod (2,4% and 22,3%) and continuous darkness (3,5% and 17,6%). The soaking time of 36 hours favored germination (56% and 24,7%) and germination rate in the experiment 2 and 3, respectively. A temperature of 20°C, in experiment 3, provided the highest percentage of seed germination, 26,6%. In micropropagation, the combination of 2,0 mg L-1 of BAP and 0,2 mg L-1 og NAA, provided 49% of complete plants and 37% survival at acclimatization. In cuttings of new shoots, rooting in the substrate occurred over water with the presence of IBA (29%). The Plantmax® provided 62% rooting in cuttings of rhizomes did not differ from sand (43%). In the evaluation of genotoxicity was detected genotoxic potential of extracts derived from micropropagated plants (5 and 20 g L-1) and grown in a greenhouse (5 g L-1). Polyphenols and flavonoids were found in all the extracts and identified flavonoids quercetin and chlorogenic acid in higher concentrations in plants of wasteland, 441,4 and 95,7 mg g-1, respectively, and rutin in similar concentration in all samples (mean 46,9 mg g-1). / Plantas nativas medicinais são amplamente utilizadas, porém as informações científicas são insuficientes sobre a propagação e a citotoxicidade de algumas espécies. Este trabalho objetivou estudar a propagação sexuada e vegetativa da espécie Solidago chilensis Meyen (Asteraceae), através da germinação de sementes, micropropagação e estaquia, além de avaliar o potencial genotóxico e quantificar o acúmulo de metabólitos secundários das plantas obtidas. Estudos da germinação in vitro e ex vitro das sementes foram desenvolvidos testando-se condições de armazenamento, doses de ácido giberélico (GA3), regimes de luz, tempos de embebição em água a 5ºC ± 1ºC, temperaturas e populações. Para a micropropagação, foram utilizados segmentos apicais e nodais e combinações de benzilaminopurina BAP (0,0 e 2,0 mg L-1) e ácido naftaleno acético ANA (0,0 e 0,2 mg L-1). No estudo da estaquia foram utilizadas estacas de ramos aéreos e de rizomas subterrâneos. Porções apicais, medianas e basais de ramos foram mantidas em água destilada e soluções nutritivas de Murashige e Shoog (20%), contendo ou não ácido indol butírico (AIB) (5,0 mg L-1). Para a estaquia de rizomas, segmentos dos mesmos foram imersos em 0, 600 e 1200 mg L-1 de AIB por seis horas e após cultivados em Plantmax®, areia ou vermiculita. Folhas apicais de quatro procedências: plantas crescendo naturalmente em terreno baldio; plantas oriundas de terreno baldio e cultivadas em casa de vegetação; plantas obtidas das estacas de rizomas e plantas micropropagadas foram coletadas para a avaliação da genotoxicidade e quantificação de polifenóis totais e flavonoides por espectrofotometria, além de ácido clorogênico, quercetina e rutina por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. A genotoxicidade foi avaliada através do teste Allium cepa, testando-se concentrações de 5 e 20 g L-1 de extratos aquosos das folhas secas. As populações influenciaram na germinação de sementes, sendo as de terreno baldio as que apresentaram em média 57,2% de germinação. As sementes germinaram sob fotoperíodo de 16 horas (em média 2,4% e 22,3%) e escuro contínuo (em média 3,5% e 17,6%) no experimento 1 e 3, respectivamente. A embebição por 36 horas favoreceu a germinação (56% e 24,7%) e velocidade de germinação no experimento 2 e 3, respectivamente. A temperatura de 20ºC, no experimento 3, proporcionou a maior porcentagem de germinação das sementes, 26,6%. Na micropropagação, a combinação de 2,0 mg L-1 de BAP + 0,2 mg L-1 de ANA, proporcionou 49% de plantas completas e 37% de sobrevivência na aclimatização. Na estaquia de ramos aéreos, ocorreu superior enraizamento no substrato água com a presença de AIB (29%). O substrato Plantmax® proporcionou 62% de enraizamento nas estacas de rizomas, não diferindo da areia (43%). Na avaliação da genotoxicidade, foi detectado potencial genotóxico dos extratos oriundos das plantas micropropagadas (5 e 20 g L-1) e das cultivadas em casa de vegetação (5 g L-1). Polifenóis e flavonoides foram encontrados em todos os extratos, sendo identificados, os flavonoides, ácido clorogênico e quercetina em maior concentração nas plantas de terreno baldio, 441,4 e 95,7 mg g-1, respectivamente, e rutina em concentração semelhante em todas as amostras (em média 46,9 mg g-1).

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Erva-mate (Ilex paraguariensis) has an economical and environmental importance to the southern area of Brazil. However, there is no enough technologies of vegetative propagation, which are important to improve yield and quality. This study had as objectives to evaluate the propagation of erva-mate trees trough cuttings and to establish an ex vitro acclimatization and micro-cutting rooting protocols from embryo cultures. Vegetative propagation potential was evaluated considering shading intensity of the stock plant and origin and size of the cuttings. Cuttings were grabbed from stock plants growing under light or shade conditions and prepared in two types (one-bud and regular types). The evaluations were the percentage of lived and died cuttings, cuttings unchanged, shoot and callus growth, shoot length, rooting, leaf survival, number and length of roots and number and length of leaves in new shoots. For acclimatization and ex vitro rooting were evaluated five concentrations of indol butyric acid (IBA) (0; 250; 500; 1,000 and 2,000 ppm) and five substrates (vermiculite, sand, carbonized rice hull, commercial substrate of pinus bark, and coconut bark). The evaluations were the percentage of cuttings unchanged, callus formation, rooting and mortality, number and length of roots, micro-cutting length, fresh weight of roots, and number of leaves in new shoots. The highest cutting unchanged was gotten with cuttings from plants growing in light. Callus formation, presence of leaves and new shoot growth affected rooting. Cuttings collected from vegetative propagated plants showed higher percentage of rooting and root length. The highest rooting percentage and micro-cutting growth were found with 1,000 ppm of IBA during acclimatization period. Acclimatization and ex vitro rooting of erva-mate micro-cuttings can be done in the substrate of carbonized rice hull and commercial substrate of pinus bark. / A erva-mate (Ilex paraguariensis) assume uma importância ambiental e socioeconômica para a região sul do Brasil, porém carece de tecnologias de propagação vegetativa necessárias para o aumento da produção e da qualidade. O presente estudo teve por objetivos analisar a propagação via estaquia de material adulto e estabelecer a aclimatização ex vitro e o enraizamento de microestacas originadas de cultivo de embriões de erva-mate. Para a estaquia, analisaram-se o efeito do nível de sombreamento da planta matriz, a origem e o tamanho da estaca, avaliando o potencial de propagação vegetativa. As estacas foram coletadas de plantas matrizes de dois níveis de sombreamento (crescimento a pleno sol e sombreado), de duas origens (seminal e propagada vegetativamente) e de dois tipos (estaca convencional e de gema única). Os parâmetros utilizados para avaliar as estacas foram a porcentagem de estacas vivas e mortas, de estacas inalteradas, emissão e comprimento de brotos, formação de calos, enraizamento, permanência das folhas primárias, número e comprimento de raízes e número e comprimento de folhas dos brotos. Na aclimatização e enraizamento ex vitro de erva-mate foram testadas cinco concentrações de ácido indol butírico (AIB) (0, 250, 500, 1.000 e 2.000 ppm), e cinco tipos de substratos (vermiculita, areia, casca de arroz carbonizada, substrato comercial a base de casca de pinus e casca de coco), visando o enraizamento de microestacas. As microestacas foram avaliadas quanto a porcentagem de estacas inalteradas, de formação de calos, de enraizamento e de mortalidade, número de raízes, comprimento de raízes, tamanho total da microestaca, biomassa radicular e número de folhas dos brotos. Estaca coletada de planta matriz em pleno sol apresentou maiores porcentagens de estacas inalteradas. A presença de calo, das folhas primárias e a emissão de brotos afetaram o enraizamento. Estacas coletadas de matrizes propagadas vegetativamente apresentam maior taxa de enraizamento e comprimento de raízes. Na microestaquia, a concentração de 1.000 ppm de AIB foi eficiente para o enraizamento e crescimento de microestacas na aclimatização. Microestacas de erva-mate podem ser aclimatizadas e enraizadas ex vitro em substrato de casca de arroz carbonizada e em substrato comercial a base de casca de pinus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the in vitro productivity of micro-stumps, in vitro and ex vitro rooting and acclimatization of micropropagated plantlets, and to assess the genetic diversity of Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbride (apuleia) with RAPD markers. Micro-stumps originated from drastic pruning of aseptic seedlings were grown in WPM culture medium supplemented with 0; 2.2; 4.4; 6.6 and 8.8 μM of 6-benzylaminopurine (BAP) and sub-cultured in WPM medium without cytokinin. Apuleia micro-stumps were also grown in WPM, MS or ½ MS, with or without 1.5 g L-1 of activated charcoal. Three shoot collections were done at 30, 60 and 90 days of cultivation. Nodal segments and micro-cuttings were maintained in WPM culture medium with 0; 4.9; 9.8; 14.7 and 19.6 μM of indole butyric acid (IBA). For acclimatization, rotted nodal segments and micro-cuttings were planted in equal proportions of commercial substrate + vermiculite + coarse sand, and commercial substrate + vermiculite. For ex vitro rooting, nodal segments and micro-cuttings were treated or not with 4920 μM of IBA for 10 seconds and cultivated in equal proportions of commercial substrate + vermiculite + coarse sand, commercial substrate + vermiculite, and commercial substrate + coarse sand. For genetic analysis, DNA was extracted from leaf samples of 88 plants of apuleia. Eighteen RAPD primers were tested. The amplified fragments were separated in agarose gel of 1.2% (v/v), containing 3 μL of ethidium bromide. The fragments were marked as absence or presence, generating a binary matrix. Total polymorphism and the relative contribution of each primer for the polymorphism were calculated. The polymorphism information content (PIC) was calculated for each fragment and primer. Cluster analysis was based upon Jaccard similarity and UPGMA method. The conservation of the apuleia micro-stumps in WPM or ½ MS media supplemented with 8.8 μM of BAP and sub-cultured in culture medium without citokynin increases number and length of shoots. Maintaining micro-stumps in culture medium supplemented with activated charcoal increases micro-cuttings production, but in its absence results in callus formation and indirect organogenesis of shoots. Nodal segments were more competent than micro-cuttings for rooting in culture medium without IBA. Substrate composition does not affect survival and growth during acclimatization of in vitro produced plantlets. Nodal segments treated with 4920 μM of IBA and cultivated in commercial substrate + vermiculite + coarse sand show the best responses for ex vitro rooting. Both in vitro conservation of apuleia micro-stumps and ex vitro rooting are promising strategies for plantlet production. The RAPD is a feasible technique for genetic analysis, and it identifies high genetic variability in apuleia. / Os objetivos deste trabalho foram avaliar a produtividade de microcepas mantidas in vitro, o enraizamento e a aclimatização de plantas micropropagadas, assim como avaliar a diversidade genética em Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbride (grápia) com uso de marcadores RAPD. Microcepas oriundas da poda drástica de plantas assépticas foram cultivadas em meio de cultura WPM acrescido de 0, 2,2, 4,4, 6,6 e 8,8 μM de 6-benzilaminopurina (BAP) e subcultivadas em meio de cultura WPM sem citocinina. Microcepas também foram cultivadas em meio de cultura WPM, MS ou ½ MS, acrescido ou não de 1,5 g L-1 de carvão ativado e submetidas a três coletas de brotos aos 30, 60 e 90 dias de cultivo. No enraizamento in vitro, segmentos nodais e microestacas foram mantidos em meio de cultura WPM com 0, 4,9, 9,8, 14,7 e 19,6 μM de ácido indolbutírico (AIB). Na aclimatização das plantas foram testadas as composições de substrato comercial + vermiculita + areia grossa e substrato comercial + vermiculita, em iguais proporções. Para o enraizamento ex vitro, segmentos nodais e microestacas foram tratados ou não com 4920 μM de AIB por 10 segundos e cultivados em iguais proporções de substrato comercial + vermiculita + areia grossa, substrato comercial + vermiculita e substrato comercial + areia grossa. Para as análises RAPD, o DNA foi extraído de amostras foliares de 88 plantas. Foram avaliados 18 iniciadores, sendo a visualização dos fragmentos realizada em gel de agarose preparado a 1,2% (p/v), contendo 3 μL de brometo de etídio e submetido a eletroforese. Os fragmentos foram pontuados com ausência ou presença gerando uma matriz binária. Foi calculada a contribuição relativa de cada iniciador para o polimorfismo bem como o polimorfismo total. Também foi calculado o conteúdo de informação para o polimorfismo (PIC) para cada fragmento e por iniciador. A análise de agrupamento foi realizada com base na similaridade de Jaccard e no método UPGMA. A manutenção das microcepas de grápia em meio de cultura WPM ou ½ MS suplementado com 8,8 μM de BAP, seguido do subcultivo em meio de cultura sem citocinina aumenta o número e comprimento das brotações. O cultivo de microcepas em meio de cultura com carvão ativado aumenta a produção de microestacas por microcepas, enquanto a ausência de carvão ativado favorece a formação de calos e brotos por organogênese indireta. Quanto ao enraizamento in vitro, os segmentos nodais apresentaram maior resposta do que microestacas, sendo necessária a suplementação do meio de cultura com AIB. A composição do substrato não afetou a sobrevivência e o crescimento das plantas produzidas in vitro durante a aclimatização. As melhores respostas de enraizamento ex vitro foram obtidas com segmentos nodais, assim como com explantes tratados com 4920 μM de AIB e cultivados em substrato comercial + vermiculita + areia grossa. Tanto a manutenção in vitro de microcepas quanto o enraizamento ex vitro são técnicas promissoras para a produção de plantas de grápia. O marcador RAPD é eficiente para a análise genética e detectou alta variabilidade genética na grápia.