Made available in DSpace on 2015-10-03T02:04:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475296-Texto+Completo-0.pdf: 1059884 bytes, checksum: dfe493d659fd6e13b6ac8c1bcc09a9aa (MD5) Previous issue date: 2015 / Neonatal exposure to lipopolysaccharides (LPS) generates a stressful stimulus capable of affecting the development of important systems, which causes lasting behavioral and neuroendocrine alterations. The aim of this study is to evaluate the response to an inflammatory stimulus in Balb/c mice exposed to LPS-induced neonatal stress at different ages and genders. Mice underwent intraperitonial injections on postnatal days 3 and 10 with either LPS (100ug/Kg) or saline solution. After 21 or 60 days of age, either saline solution was injected or an inflammatory stimulus was induced by the injection of 1% carrageenan. Inflammatory cytokines, reactive oxygen species and NETs production were measured in the peritoneal lavage. Our findings indicate that LPS-induced neonatal stress can reduce inflammatory cytokines in young animals, males and females. In adults, however, only females showed the same response pattern. In nLPS group, an increase in NETs production was observed in animals that were 60-days-old when compared to 21-days-old in both genders, which indicates an effect of neonatal stress on the ontogeny of NETs formation. The production of ROS was not affected by neonatal stress, even though an increased production was found among adults regardless of neonatal intervention. The results shown here indicate that LPS-induced neonatal stress can alter cytokine production in response to inflammatory stimuli at different ages, in a gender dependent way. Moreover, it seems like the formation of NETs throughout life is also influenced by alterations undergone during the neonatal period. / A exposição neonatal ao lipopolissacarídeo (LPS) gera um estimulo estressor capaz de afetar o desenvolvimento de importantes sistemas, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas duradoras. O objetivo desta dissertação é avaliar a resposta a um estímulo inflamatório em camundongos Balb/c submetidos à estresse neonatal por LPS em diferentes idades e sexos. Os camundongos receberam, no 3º e 10º dias de vida, injeção i. p. de LPS (100μg /Kg) ou solução salina. Após 21 ou 60 dias de vida, os mesmos foram submetidos à injeção de solução salina ou a um estímulo inflamatório através da injeção de carragenina 1%. Foram mensurados no lavado peritoneal citocinas inflamatórias, espécies reativas de oxigênio e produção de Redes Extracelulares de Neutrófilos (NETs). Os resultados encontrados demonstram que o estresse neonatal por LPS diminui a liberação de citocinas inflamatórias nos animais jovens machos e fêmeas.Já nos adultos, somente as fêmeas apresentaram a mesma resposta. Foi encontrado um aumento na produção de NETs nos animais do grupo nLPS com 60 dias quando comparado com animais nLPS com 21 dias, em ambos os sexos, indicando um efeito do estresse neonatal sobre a ontogenia da formação de NETs. A produção de ROS não sofreu influência do estresse neonatal, porém foi encontrada uma maior produção na idade adulta, independente da intervenção neonatal. Os resultados do presente estudo indicam que o estresse neonatal por LPS altera a produção de citocinas em resposta a um estímulo inflamatório em diferentes idades, em um efeito dependente do sexo. Além disso, parece que a formação de NETs ao longo da vida também é influenciada pelas alterações no período neonatal.

Made available in DSpace on 2016-02-13T01:07:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477249-Texto+Completo-0.pdf: 4728791 bytes, checksum: 9cc2c815f6f8eda49ba630d9796f6ea8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Regeneration of lost tissues can be obtained in a predictable way by using the Guided Bone Regeneration (GBR) concept. The development of such concept is based on the observation that to regenerate a certain type of tissue, specific cells with the ability to reconstruct such kind of tissue must repopulate the wound. GBR was applied to heal different type of bone defects and the isolation of it by using resorbable and nonresorbable membranes resulted in a predictable healing through the formation of new bone. Nowadays the GBR concept is used for the treatment of multiple clinical situations in dentistry, even with dental implants. Osteoporosis is the most common chronic bone disease and may interfere in the healing of regenerative procedures. The increase in life expectancy results in a larger number of elderly patients referred for bone regeneration and dental implants. Osteoporosis is associated with aging, menopause and chronic use of some types of drugs. Regenerative protocols must be postulated taking into account this category of patients. Limited scientific evidence suggests that osteoporosis can negatively influence bone healing as well as the osseointegration of dental implants. In addition to disease, the use of drugs for its prevention and treatment may affect healing of GBR procedures. Bisphosphonates (BP) are the most frequently used drugs for treatment and prevention of osteoporosis. The drug acts mainly in the inhibition of bone resorption by its action on osteoclasts. Among the commercially prescribed BP, zoledronic acid (ZA) is known to be the most potent of all. In the first paper of this thesis osteoporosis was induced in rats and these animals were submitted to regenerative procedures comparing samples with and without osteoporosis as well as with and without the use of ZA. To assess GBR, critical size defects (CSD) were made in the animals’ calvarial bone. Microporous non-resorbable PTFE (polytetrafluorethylene) membranes were used to promote GBR in healthy, osteoporotic and osteoporotic animals treated with ZA. Forty-eight Wistar rats with 6 months of age were included in the study. Experimental osteoporosis was induced by ovariectomy (OVX) associated with hipocalcic diet in 32 animals. Sixteen OVX rats received a single dose of ZA (OZ) while the other 16 osteoporotic rats received no treatment (O). The remaining 16 animals were SHAM operated; the ovaries were exposed but not removed, being considered the control group (C). Six weeks after osteoporosis induction, each animal from the OZ group received a single dose of ZA. One week latter (7 weeks after baseline) two 5-mm CSD were performed bilaterally in the parietal bones and one of these defects was treated with two membranes, one located internally, in contact to the Dura, and the other was placed on top of the defect. GBR healing periods were 30 and 60 days for each group. Evaluation of new bone formation (NBF) was done by qualitative and quantitative histological analysis. Differences in means between groups (O, OZ and C), the use of membranes as well as the observation period (days 30 and 60) were analyzed by ANOVA for each variable. When a statistically significant difference was identified between the averages, the Bonferroni post hoc test was used. The results showed that treatment with ZA (p = 0. 001) and the use of membranes (p = 0. 000) significantly increased the amount of regenerated bone tissue and the presence of osteoporosis may have reduced NBF (p = 0. 028). / Regeneração de tecido ósseo perdido pode ser alcançada de forma previsível utilizando-se o conceito de Regeneração Óssea Guiada (ROG). O desenvolvimento deste conceito é baseado na observação de que para realizar a regeneração de um tipo de tecido, células específicas, com habilidade de regenerar este tecido especificamente, devem repopular a ferida. Quando ROG foi utilizada para regeneração de vários tipos de defeitos ósseos, o isolamento destes, com o uso de barreiras físicas reabsorvíveis e não reabsorvíveis, as membranas, resultou em uma cicatrização previsível através da formação de novo tecido ósseo. Atualmente, o príncípio de ROG é usado para o tratamento de várias situações clínicas na odontologia, com ou sem o uso associado de implantes dentários. Osteoporose é a doença óssea crônica mais prevalente e pode interferir na cicatrização de procedimentos regenerativos. O aumento na expectativa de vida da população resulta em um maior número de pacientes idosos indicados para regeneração óssea e implantes dentários. Considerando que a osteoporose está relacionada com fatores como idade, menopausa e uso crônico de alguns tipos de fármacos, a prevalência desta doença é alta. Protocolos regenerativos devem ser postulados levando-se em conta esta categoria de pacientes. Porém, limitada evidência científica sugere que osteoporose pode influenciar negativamente a cicatrização óssea assim como a osseointegração de implantes dentários. Somado à doença, o uso de drogas para prevenção e tratamento da osteoporose pode influenciar na cicatrização de procedimentos regenerativos. Bisfosfonatos (BF) são os fármacos mais utilizados para tratamento da osteoporose. A droga age na inibição da reabsorção óssea através da sua ação principalmente sobre os osteoclastos. Dentre os BF existentes comercialmente, o ácido zoledrônico (AZ) é reconhecidamente o mais potente de todos. Sendo assim, o primeiro artigo desta tese buscou criar condições de osteoporose em ratas e, nestes animais, procedimentos regenerativos foram feitos comparando amostras com e sem osteoporose assim como com e sem o uso de AZ. Para avaliar ROG, defeitos críticos (CSD) foram feitos na calvária dos animais. Membranas não reabsorvíveis microporosas de teflon foram utilizadas para ROG em animais saudáveis, osteoporóticos e osteoporóticos tratados com AZ. Quarenta e oito ratas Wistar, com 6 meses de idade, foram incluídas no estudo. Osteoporose experimental foi induzida através de ovariectomia (OVX) associada à dieta hipocálcica em 32 animais. Dezesseis ratos OVX receberam uma dose única de AZ (OZ) enquanto as outras 16 ratas osteoporóticas não receberam tratamento (O). Os demais 16 animais foram submetidos à cirurgia controle, onde os ovários não foram removidos, sendo considerado o grupo controle (C). Seis semanas após a indução da osteoporose, o grupo OZ recebeu uma dose única de AZ. Após mais uma semana (7 semanas após OVX), dois CSD de 5 mm foram feitos, bilateralmente, nos ossos parietais, sendo que um destes defeitos foi tratado com duas membranas, uma instalada internamente ao defeito, sobre a dura mater, e outra na porção externa. Os períodos de cicatrização de ROG foram de 30 e 60 dias para cada grupo. Avaliação da formação de tecido ósseo (NBF) foi feita através de análise histológica qualitativa e quantitativa. Diferenças entre as médias entre os grupos (O, OZ e C), o uso de membranas assim como o período de observação (30 e 60 dias) foram analisados através de ANOVA para cada variável. Quando uma diferença estatística era identificada entre as médias, o teste pós hoc Bonferroni foi utilizado. Os resultados mostraram que o tratamento com AZ (p=0,001) e o uso de membranas (p=0,000) aumentaram significativamente a quantidade de tecido ósseo regenerado e que a presença de osteoporose pode ter reduzido a formação de novo osso (p=0,028).

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411533-Texto+Completo-0.pdf: 10784164 bytes, checksum: 73554a4ce1f4dd536f8f451c4ea37d2c (MD5) Previous issue date: 2009 / Evidence suggests that the NO/cGMP/PKG pathway plays a key role in memory processing but the actual participation of this signaling cascade in the consolidation of declarative memory, such as object recognition (OR), remains unknown. Here we show that consolidation of long-term object recognition memory enhances the nitric oxide synthase neuronal activity (nNOS) in the CA1 region of the dorsal hippocampus of rats. Indeed, when infused immediately after but not 180 and 360 min after training in the OR task, the nNOS inhibitor, L-NN, hindered long-term memory retention without affecting locomotion, exploratory behavior, anxiety state or hippocampal functionality. The amnesic effect of L-NN was not due to statedependency and was equally produced by the hippocampal infusion of soluble guanylyl cyclase (sGC) inhibitor, LY83583, and by the protein kinase G (PKG) inhibitor, KT5823.Furthermore, post-training infusion of the non-hydrolysable analog of cGMP, 8Br-cGMP, reversed the L-NN and LY83583 effect but not that induced by KT5823. The noradrenaline (NA) regulate NO/sGC/PKG pathway activation in distinct preparations. In accordance with this fact, the amnesia induced by intrahippocampal administration of antagonist -adrenergic receptor, timolol, immediately after training in the OR task is not reversed by co-infusion of 8-Br-cGMP or of NO donator, SNAP. When administrated in the CA1 region of the dorsal hippocampus together with LY-83583, KT-5823 or L-NN, NA reversed the amnesic effect of these compounds. Our results indicate that the activation of NO/cGMP/PKG pathway in the CA1 region of the dorsal hippocampus is essential for consolidation of OR memory and suggests that the ß-adrenergic receptors, has a fundamental participation on regulation of these events. / Evidências sugerem que a via de sinalização NO/GMPc/PKG tem papel chave no processamento da memória, entretanto a atuação desta cascata de sinalização no hipocampo durante a consolidação de memórias declarativas, tais como a de reconhecimento de objetos (RO), permanece desconhecida. Aqui será mostrado que a aquisição da memória associada ao treino na tarefa de reconhecimento de objetos aumenta a atividade da óxido nítrico sintase neuronal (NOSn) na região CA1 do hipocampo dorsal de ratos. Ainda mais, quando infundido nesta região do cérebro imediatamente, mas não 180 ou 360 min após o treino na tarefa de RO, o inibidor da NOSn, L-NN, prejudica a retenção da memória em questão, sem afetar a locomoção, o comportamento exploratório, nem o estado de ansiedade dos animais ou causar lesão ao hipocampo. O efeito amnésico do L-NN não se deve a indução de dependência de estado e é mimetizado pela infusão intra-hipocampal do inibidor da guanilil-ciclase solúvel (GCs), LY83583 ou do inibidor da proteína cinase G (PKG), KT5823.Ainda, a infusão pós-treino do análogo não-hidrolizável do GMPc, 8- Br-GMPc, reverte o efeito de L-NN e LY5823, mas não o de KT5823. A noradrenalina (NA) regula a ativação da via NO/GMPc/PKG em distintas preparações. Em concordância com este fato a amnésia induzida pela administração intra-hipocampal do antagonista -adrenérgico, timolol, imediatamente após o treino na tarefa de RO não é revertida pela co-infusão de 8-Br-GMPc e do doador de NO, SNAP. Quando administrada na região CA1 do hipocampo dorsal juntamente com LY-83583, KT-5823 ou L-NN, a NA reverte o efeito amnésico destes agentes. Nossos dados indicam que a ativação da cascata de sinalização NO/GMPc/PKG na região CA1 do hipocampo dorsal é fundamental para a normal consolidação da memória de reconhecimento de objetos e sugerem que os receptores ß-adrenérgicos desempenham um papel fundamental na regulação destes eventos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434098-Texto+Completo-0.pdf: 2377536 bytes, checksum: d543049346103c6373ccd32e8c137ceb (MD5) Previous issue date: 2011 / Introduction: Animal models studies of asthma have been criticized because of some limitations. Protocols with features and remote results of human asthma are widely used, mainly because of the need to use adjuvant and intraperitoneal administration of allergens for sensitization. Aims: We have tested alternative protocols using animal models of acute and chronic asthma, with features closer to human disease, using OVA without adjuvant. Methods: Adult female BALB/c mice were used and divided into groups according to sensitization with OVA. The acute model used two doses of OVA subcutaneously (s. c. ) without adjuvant, on days 0 and 7, and after intranasal (i. n. ) challenge for consecutives three days, compared with a standard protocol using three doses of OVA for sensitization. The chronic model also used OVA s. c. for sensitization, adjuvant-free, on days 0 and 14, and after i. n. challenge, 3 times a week, for consecutives eight weeks. Total (TCC) and differential cell counts from bronchoalveolar lavage (BAL) and histopathology of the lungs were performed 24 hours after the last OVA challenge. Results: In the two models of protocols studied, acute and chronic, we have observed similar allergic pulmonary response between the groups. Cell counts and histological analysis of lung tissue showed no significant difference between groups. Conclusion: the use of sensitization with OVA s. c., with no adjuvant, resulted in an expected allergic pulmonary response, with predominant eosinophils. These protocols may be a future option to animal models of asthma closer to the human disease, both in the acute and chronic patterns. / Introdução: estudos em modelos animais de asma têm sido criticados devido a algumas limitações. Protocolos com características e resultados distantes da asma em humanos são muito utilizados, principalmente devido à necessidade do uso de adjuvante e administração intraperitoneal do alergeno para sensibilização. Objetivo: testar alternativas de protocolos com modelos animais de asma aguda e crônica que apresentem características mais próximas da doença em humanos, utilizando OVA livre de adjuvante.Métodos: foram utilizadas fêmeas adultas de camundongos BALB/c, divididas em grupos de acordo com as sensibilizações com OVA. O modelo agudo utilizou duas doses de OVA subcutânea (s. c. ), sem adjuvante, com intervalo de 7 dias, com posterior desafio intranasal (i. n. ) durante 3 dias, comparado ao protocolo padrão que utiliza 3 doses de OVA intraperitoneal (i. p. ), no período de sensibilização. O modelo crônico também utilizou OVA s. c. livre de adjuvante para sensibilização, com intervalo de 14 dias e posterior desafio i. n., 3 vezes por semana, durante 8 semanas. Contagem total (CTC) e diferencial de células no lavado broncoalveolar (LBA) e análise histológica dos pulmões foram realizadas 24 horas após o último desafio com OVA. Resultados: nos dois modelos estudados, agudo e crônico, observamos uma resposta eosinofilica pulmonar semelhante entre os grupos. Contagem de células e análise histológica do tecido pulmonar não apresentaram diferença significativa entre os grupos estudados. Conclusão: o uso de sensibilização s. c. com OVA, sem adjuvante, resulta em uma significativa resposta inflamatória pulmonar alérgica, com predomínio de eosinófilos, podendo ser uma opção futura para experimentos mais próximos ao modelo humano, tanto na fase aguda, como na fase crônica da doença.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000443017-Texto+Completo-0.pdf: 2210506 bytes, checksum: 3a7acd28aaf707a50f139c101de1198b (MD5) Previous issue date: 2012 / Objective : To compare the effectiveness of two techniques of respiratory therapy in an experimental model of atelectasis by bronchial obstruction in newborn pigs. Methods : 24 pigs were analgesiados, sedated, tracheostomized and mechanically ventilated. For the induction of atelectasis, artificial mucus was infused (ethylene oxide, Sigma-Aldrich ™, USA) using an infusion pump through the tracheal tube with the pigs in the lateral position and inclined to the 30th. Confirmation of atelectasis was a chest X-ray or by a pressure drop of oxygen in arterial blood. After the animals were divided into 3 groups: group 1 that received tracheal aspiration after 20 minutes of confirmation of atelectasis, group 2 underwent the technique of bag squeezing over tracheal aspiration and group 3 received vibration chest. To evaluate the effectiveness of techniques one second X-ray was done. To evaluate the changes during the procedures were performed arterial blood gases and pulmonary mechanics evaluation pneumotachograph before and after the induction of atelectasis immediately and 30 minutes after the procedure. Results : The mean percentage change in the PO2 was statistically detect significant between the groups (control: 97,80±37,33, bag squeezing: 166,75±68,63 e vibration: 104,41±45,45, p=0,0408), with improvement in oxygenation in the group undergoing the technique of squeezing bag. The remaining variables did not differ. Conclusions : the results suggest that the technique of squeezing bag is more efficient than manual vibration, but clinical improvement was not accompanied by detectable radiological improvement. / Objetivo : comparar a eficácia de duas técnicas de fisioterapia respiratória, em modelo experimental de atelectasia, por obstrução brônquica em suínos recém-nascidos.Métodos : 24 suínos foram analgesiados, sedados, traqueostomizados e ventilados mecanicamente. Para a indução da atelectasia, foi infundido muco artificial Poli (oxido de etileno), (Sigma- Aldrich™, Estados Unidos), com bomba de infusão, através do tubo traqueal ,com os suínos posicionados em decúbito lateral, com inclinação de 30o. A produção de atelectasia foi confirmada através de radiologia torácica. Para tanto, os animais foram divididos em 3 grupos: o grupo 1 recebeu apenas aspiração traqueal após 20 minutos da confirmação da atelectasia; o grupo 2 foi submetido à técnica de bag squeezing seguida de aspiração traqueal; e o grupo 3 recebeu vibração torácica seguida de aspiração traqueal. A eficácia das técnicas foi avaliada através de exame radiológico, feito por dois radiologistas independentes. Para avaliar as alterações durante os procedimentos, foram feitas gasometria arterial e avaliação da mecânica pulmonar antes e depois da indução de atelectasia, bem como imediatamente e 30 minutos após os procedimentos. Resultados : a média da variação percentual da PO2 foi estatisticamente significante entre os grupos (controle: 97,80±37,33, bag squeezing: 166,75±68,63 e vibração: 104,41±45,45, p=0,0408), evidenciando melhora na oxigenação para o grupo submetido a técnica de bag squeezing. As demais variáveis analisadas não apresentaram diferenças significativas. Conclusões : os resultados sugerem que a técnica de bag squeezing seja mais eficiente do que a vibração manual, porém a melhora clínica não foi acompanhada de melhora radiológica detectável.

Made available in DSpace on 2014-04-11T02:01:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000456861-Texto+Completo-0.pdf: 2147908 bytes, checksum: b9bc5ecae0f349a191f0641931e9e7d7 (MD5) Previous issue date: 2014 / The effects on kinin B1 receptor (B1R) deletion were examined on bone regeneration in streptozotocin (STZ)-type-1 diabetic mice, subjected to a model of femoral critical-size defect. Diabetes induction in wild-type C57/BL6 (WT C57/BL6) mice was allied to decrease of body weight and hyperglycemia, in relation to the non-diabetic group of the same strain. The lack of B1R did not affect STZ-elicited body weight loss, although it partially prevented hyperglycemia. Type-1 diabetic mice presented a clear delay in bone regeneration, with large areas of loose connective tissue within the region corresponding to the defects, when compared to wide areas of newly-formed woven bone in non-diabetic WT C57/BL6 mice. Notably, either non-diabetic or diabetic B1R knockout (B1RKO) mice displayed bone regeneration levels comparable to that seen in control WT C57/BL6 mice. The improved bone regeneration in animals lacking B1R was further confirmed by analysis of collagen contents. WT C57/BL6 STZ-diabetic mice presented a marked reduction of collagen contents within the bone defect gap, whereas diabetic B1RKO displayed collagen levels comparable to those observed in non-diabetic WT C57/BL6 or B1RKO mice. The enhanced bone regeneration in diabetic mice lacking B1R does not seem to be associated to lessened osteoclast activity, as no prominent difference was detected in the levels of tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) positivity, or even in the immunolabeling for the proteins of the RANK/RANKL/OPG system thoughout all the experimental groups. Data brings novel evidence on the relevance of B1R under type-1 diabetes, especially concerning its role in bone regeneration after surgical procedures. / Os efeitos da deleção gênica do receptor B1 das cininas na regeneração óssea foram avaliados em camundongos com diabetes tipo 1 induzida por estreptozotocina, submetidos a um modelo de defeito crítico no fêmur. Como resultado da indução de diabetes nos camundongos wild-type C57/BL6, houve um decréscimo do peso corporal e hiperglicemia em relação ao grupo não-diabético da mesma cepa. Os animais diabéticos, com ausência do receptor B1 apresentaram perda do peso corporal e, uma prevenção parcial da hiperglicemia. Camundongos diabéticos do tipo 1 tiveram um atraso na regeneração óssea, apresentando um tecido conectivo desorganizado na região correspondente ao defeito crítico, quando comparados a extensas áreas de tecido ósseo recém-formado em camundongos WT C57/BL6 não diabéticos. Camundongos B1R nocaute, diabéticos ou não diabéticos, exibiram níveis de regeneração óssea semelhantes aos observados no grupo controle WT C57/BL6. A melhora na regeneração óssea nos animais sem o receptor B1 foi confirmada pela análise da quantidade de colágeno. Camundongos WT C57/BL6 diabéticos apresentaram uma redução acentuada da distribuição de colágeno na região do defeito ósseo, enquanto que os animais B1RKO diabéticos exibiram níveis de colágeno similares àqueles observados nos camundongos não diabéticos, tanto WT C57/BL6, quanto B1RKO.A melhora da regeneração óssea nos camundongos diabéticos sem o receptor B1 não parece estar associado à atividade osteoclástica diminuída. Ademais, nenhuma diferença marcante foi encontrada nos níveis de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) ou, na imunomarcação para as proteínas do sistema RANK/RANKL/OPG, em todos grupos experimentais avaliados. Os resultados deste trabalho fornecem novas evidências a respeito da relevância dos receptores B1 no diabetes do tipo 1, especialmente no que diz respeito ao seu papel na regeneração óssea após procedimentos cirúrgicos.

Made available in DSpace on 2014-05-06T02:01:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000457610-Texto+Completo-0.pdf: 991749 bytes, checksum: d91843d27688e0357561bae1a127e7a1 (MD5) Previous issue date: 2014 / This study investigated whether the spinal or systemic treatment with the lipid resolution mediators resolvin D1 (RvD1), aspirin-triggered resolvin D1 (AT-RvD1) and resolvin D2 (RvD2) might interfere with behavioral and neurochemical changes in the mouse fibromyalgia-like model induced by reserpine. Acute administration of AT-RvD1 and RvD2 produced a significant inhibition of mechanical allodynia and thermal sensitization in reserpine-treated mice, whereas RvD1 was devoid of effects. A similar antinociceptive effect was obtained by acutely treating animals with the reference drug pregabalin. Noteworthy, the repeated administration of AT-RvD1 and RvD2 also prevented the depressive-like behavior in reserpine-treated animals, according to assessment of immobility time, although the chronic administration of pregabalin failed to affect this parameter. The induction of fibromyalgia by reserpine triggered a marked decrease of dopamine and serotonin (5-HT) levels, as examined in total brain, spinal cord, cortex and thalamus. Reserpine also elicited a reduction of glutamate levels in total brain, and a significant increase in the spinal cord and thalamus. Chronic treatment with RvD2 prevented 5-HT reduction in total brain, and reversed the glutamate increases in total brain and spinal cord. Otherwise, AT-RvD1 led to a recovery of dopamine levels in cortex, and 5-HT in thalamus, whilst it diminished brain glutamate contents. Concerning pregabalin, this drug prevented dopamine reduction in total brain, and inhibited glutamate increase in brain and spinal cord of reserpine-treated animals. Our data provide novel evidence, showing the ability of D-series resolvins AT-RvD1, and mainly RvD2, in reducing painful and depressive symptoms allied to fibromyalgia in mice. / O presente estudo investigou o possível efeito do tratamento central ou sistêmico com os mediadores lipídicos de resolução da inflamação, Resolvina D1 (RvD1), RvD1 ativada pela aspirina (AT-RvD1) e Resolvina D2 (RvD2) sobre mudanças comportamentais e neuroquímicas em um model de fibromialgia induzido por reserpina em camundongos. A administração aguda de AT-RvD1 e RvD2 produziu um efeito inibitório significativo sobre a alodínia mecânica e a hipersensibilização térmica nos animais tratados com reserpina, sendo que nenhum efeito foi observado quando os animais foram tratados com RvD1. A administração aguda de pregabalina, fármaco de referência para o tratamento da fibromialgia, apresentou um efeito antinociceptivo similar àquele observado para AT-RvD1 e RvD2. Interessante, a administração repetida e sistêmica de AT-RvD1 e RvD2 também preveniu o comportamento depressivo nos animais que receberam reserpina, de acordo com a avaliação do tempo de imobilidade, enquanto que a administração crônica de pregabalina não apresentou efeito sobre esse parâmetro. A indução de fibromialgia pela reserpina produziu uma redução marcante dos níveis de dopamina e serotonina (5-HT), quando avaliados no cérebro total, medula espinhal, córtex e tálamo. A reserpina também promoveu uma redução nos níveis de glutamato no cérebro total e, um aumento significativo na medula espinhal e no tálamo. O tratamento crônico com RvD2 preveniu a redução de 5-HT no cérebro total e, reverteu o aumento do glutamato no cérebro total e medula espinhal. Por outro lado, AT-RvD1 restaurou os níveis de dopamina no córtex e de 5-HT no tálamo, ao mesmo tempo em que, reduziu os níveis de glutamato no cérebro. Em relação à pregabalina, ela preveniu a redução de dopamina no cérebro total e inibiu o aumento do glutamato no cérebro e na medula espinhal dos animais tratados com reserpina. Nossos resultados fornecem novas evidências quanto aos efeitos da AT-RvD1 e, principalmente RvD2 na redução da dor e, ainda, da depressão, no modelo de fibromialgia induzida por em camundongos.

Made available in DSpace on 2014-07-11T02:02:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459166-Texto+Completo-0.pdf: 2547388 bytes, checksum: 27814fb2b5f7b670424cdc2d80523d6f (MD5) Previous issue date: 2014 / Disturbances in glutamatergic signaling have been proposed as the cause of many diseases of the nervous system. The zebrafish has been considered as an efficient model in the investigation of the neurochemical basis of various disorders, such as schizophrenia and epilepsy. Several neurotransmitter systems have been characterized in zebrafish, including the glutamatergic system. Moreover, a vast repertoire of behavioral responses to drugs has been characterized in particular in adults. However, little information is available about the ability to generate response to classic drugs of glutamatergic action in the early stages of development in zebrafish.Throughout development, ionotropic glutamate receptors have an orderly variability between the subunits that compose them, giving them different pharmacokinetic properties and degree of affinity for their ligands. In this way, we analyzed the locomotor/behavioral profile of zebrafish in response to the glutamate receptor antagonist, MK-801, in different doses in 30, 60, 120 days post-fertilization (dpf) and 2 years post-fertilization animals, as well the effect of caffeine pre-exposure on MK-801 action. Additionally, we analyzed the expression profile of subunits that comprise the NMDA receptor in whole brain of zebrafish during development. Locomotor/behavioral response to kainic acid (KA) was evaluated in different doses at ages 7, 15 and 30 dpf.Also, the pre-exposure to kainic acid in 24 hours post-fertilization (hpf) and 7 and 15 dpf animals was challenged by a second exposure to kainic acid at 2 months post-fertilization The results demonstrated that zebrafish has an age-dependent response to MK-801 and kainic acid, at least on the locomotor/behavior aspects. The peak of locomotor response to MK-801 occurred at 60-120 days post-fertilization, which was partially prevented by caffeine and able to alter the time on upper zone of aquarium as a measure of anxiety. Analysis of gene expression of NMDA receptor subunits in zebrafish brain demonstrated that NR2C and NR2D subunits have later expression in comparison to subunits NR1, NR2A and NR2B. The animals that were exposed to KA showed alterations in locomotor activity without displaying classic convulsive characteristics. However, pre- exposure to 7dpf KA was able to partially prevent the seizure events in response to KA injection (6 mg / K) at 2 months post- fertilization. / Distúrbios na sinalização glutamatérgica são propostos como a causa de inúmeras patologias do sistema nervoso. O peixe-zebra tem sido considerado um eficiente modelo na investigação das bases neuroquímicas de diversos transtornos, tais como a esquizofrenia e a epilepsia. Diversos sistemas de neurotransmissão já foram caracterizados em peixe-zebra, incluindo o sistema glutamatérgico. Além disto, um vasto repertório de respostas comportamentais a fármacos já foram caracterizados em especial em indivíduos adultos. Entretanto, pouca informação é disponível a cerca da capacidade de gerar resposta a clássicas drogas de ação glutamatérgica em fases iniciais do desenvolvimento em peixe-zebra. Ao longo do desenvolvimento, os receptores glutamatérgicos apresentam uma ordenada variabilidade entre as subunidades que os compõem, o que lhes confere diferentes propriedades farmacocinéticas e grau de afinidade por seus ligantes.Desta forma, neste trabalho foi analisado o perfil de resposta locomotora/comportamental do peixe-zebra ao antagonista glutamatérgico MK-801 em diferentes doses nas idades de 30, 60, 120 dias pós-fertilização (dpf) e 2 anos pós-fertilização(apf), bem como o efeito da pré-exposição à cafeína sobre os efeitos do MK-801. Adicionalmente, foi analisado o perfil de expressão das subunidades que compõem o receptor NMDA em cérebro total de peixe-zebra ao longo do desenvolvimento. A resposta locomotora ao ácido caínico (KA) também foi avaliada em diferentes doses nas idades de 7, 15 e 30 dpf. A pré-exposição ao ácido caínico em animais de 24 horas pós-fertilização (hpf) e 7 e 15 dpf foi confrontada pela exposição ao ácido caínico aos 2 meses de vida do peixe-zebra. Os resultados encontrados neste trabalho demonstram haver uma resposta idade-dependente na atividade locomotora do peixe-zebra, tanto para MK-801 quanto para ácido caínico.O pico de resposta locomotora ao MK-801 foi entre 60 e 120 dpf, o qual foi parcialmente prevenido pela pré-exposição à cafeína e foi capaz de alterar de forma idade-dependente o tempo no topo do aquário, utilizado como uma medida de ansiedade. A análise de expressão das subunidades dos receptores NMDA em cérebro de peixe-zebra demonstrou que as subunidades NR2C e NR2D possuem expressão tardia em relação às subunidades NR1, NR2A e NR2B. Os animais que foram expostos ao KA apresentaram alteração na atividade locomotora sem exibir características convulsivas clássicas. Entretanto, a pré-exposição ao KA aos 7dpf foi capaz de prevenir parcialmente os eventos convulsivos em resposta à injeção de KA (6 mg/Kg, i. p) aos 2 meses pós-fertilização.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418471-Texto+Completo-0.pdf: 941887 bytes, checksum: 83e65c46f62b9cf566ee10180ce3d11c (MD5) Previous issue date: 2009 / It has been demonstrated that kinin B1 receptors are highly upregulated under several stressful stimuli, such as infection. In spite of that, there is no evidence indicating whether Porphyromonas gingivalis LPS (Pg-LPS), a preferential TLR2 activator, might lead to B1 receptor upregulation. In this study, we demonstrate that Pg-LPS injection into the rat paw resulted in a marked functional upregulation of B1 receptors (as measured by an increase of B1 receptor-induced edema formation), which was preceded by a rapid raise in B1 receptor mRNA expression. The local administration of Pg-LPS also resulted in a prominent production of the proinflammatory cytokine TNF-G, followed by an increase of neutrophil influx; both events were observed at time periods prior to B1 receptor induction. The functional and molecular Pg-LPS-elicited B1 receptor upregulation was significantly reduced by the glucocorticoid dexamethasone, and to a lesser extent by the chimeric anti-TNFa antibody infliximab. Of high relevance, we show for the first time that a single administration of the pro-resolution lipid mediator Resolvin E1 was able to markedly down-regulate Pg-LPS-driven B1 receptor expression, probably by inhibiting TNFG production and neutrophil migration to the inflammatory set. Collectively, the present findings clearly suggest that TLR2 activation by Pg-LPS is able to induce the upregulation of B1 receptors, through mechanisms involving TNFa release and neutrophil influx, which are largely sensitive to Resolvin E1. It is tempting to suggest that kinin B1 receptors might well represent a pivotal pathway for the inflammatory responses evoked by P. gingivalis and its virulence factors. / O receptor B₁ para as cininas está normalmente ausente durante condições fisiológicas podendo ser rapidamente induzido em resposta a diversos estímulos, como os processos infecciosos. Apesar disso, não existem estudos indicando como o LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg-LPS), um ativador preferencial de TLR2, pode induzir a expressão do receptor B₁. No presente trabalho, foi demonstrado que a injeção do Pg-LPS na pata de rato resulta na indução funcional tempo-dependente dos receptores B₁ (determinada pelo aumento marcante na resposta edematogênica), que foi precedida pelo rápido aumento na expressão do seu RNAm. A administração local de Pg-LPS produziu um aumento marcante na produção da citocina pró-inflamatória TNF-G e do influxo de neutrófilos. Ambos os eventos foram observados anteriormente à indução dos receptores B₁. A indução funcional e molecular do receptor B₁ pelo Pg-LPS foi reduzida significantemente pelo glicocorticóide dexametasona e pelo anticorpo monoclonal anti- TNF-G infliximab. De grande relevância, foi demonstrado pela primeira vez, que uma única administração de Resolvina E1, um mediador lipídico pró-resolução da inflamação, foi capaz de produzir uma redução marcante na expressão dos receptores B₁ mediada pelo Pg-LPS, provavelmente inibindo produção de TNF-G e a migração de neutrófilos para o sítio inflamatório. Analisados em conjunto, os dados obtidos permitem inferir que a ativação do TLR2 pelo Pg-LPS é capaz de induzir a expressão dos receptores B₁, através de mecanismos relacionados à produção de TNF-G e ao influxo de neutrófilos, que são sensíveis a Resolvina E1. Assim, é possível sugerir que os receptores B₁ representam uma via importante nas respostas inflamatórias desencadeadas pela P. gingivalis e seus fatores de virulência.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438119-Texto+Completo-0.pdf: 1374944 bytes, checksum: ed0d2c4ba08c684fb0fe51136bb75979 (MD5) Previous issue date: 2012 / Endosulfan is a broad spectrum organochlorine pesticide that is still widely used in many developing countries. Following application endosulfan can get to watercourses through surface runoff from agricultural fields and disturb the nontarget aquatic animals including freshwater fish species. Given that the activity of the enzyme acetylcholinesterase (AChE) is one of the most recurrently used biomarkers of exposure to pesticides and there are controversial results concerning the effects of endosulfan exposure and AChE activity in fish, the aim of the present study was to evaluate the effects of endosulfan in brain AChE activity and its gene expression pattern using adult zebrafish (Danio rerio) as an animal model. Moreover, we have analyzed the effects of endosulfan exposure in different parameters of zebrafish swimming activity and in long-term memory formation. After 96 hours of exposition, fish in the 2. 4 μg endosulfan/L group presented a significant decrease in AChE activity (9. 44 ± 1. 038 μmol SCh. h-1. mg protein-1; p = 0. 0205) when compared to the control group (15. 87 ± 1. 768 μmol SCh. h-1. mg protein-1; p = 0. 0205). The downregulation of brain AChE activity is not directly related with the transcriptional control as demonstrated by the RT-qPCR analysis. Our results reinforce AChE activity inhibition as a pathway of endosulfan-induced toxicity in brain of fish species. In addition, exposure to 2. 4 μg endosulfan/L during 96 hours impaired all exploratory parameters evaluated: decreased line crossings (273. 7 ± 28. 12 number of line crossings compared to the control group 344. 6 ± 21. 30, p=0. 0483), traveled distance (23. 44 ± 2. 127 meters compared to the control group 29. 39 ± 1. 585, p=0. 0281), mean speed (0. 03 ± 0. 003 meters/seconds compared to the control group 0. 04 ± 0. 002, p=0. 0275) and body turn angle (69,940 ± 4,871 absolute turn angle compared to the control group 88,010 ± 4,560 p=0. 0114). These results suggest that endosulfan exposure significantly impairs animals' exploratory performance, and potentially compromises their ecological and interspecific interaction. Our results also showed that the same endusulfan exposure did not compromise animals' performance in the inhibitory avoidance apparatus. These findings provide further evidence of the deleterious effects of endosulfan exposure in the nervous system. / Endosulfan é um pesticida organoclorado de amplo espectro ainda utilizado largamente em muitos países subdesenvolvidos. As aplicações repetidas de endosulfan podem se incorporar aos cursos de água por meio da lixiviação dos solos das plantações e atingir animais aquáticos, incluindo espécies de peixes. Dado que a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE) é um dos biomarcadores de exposição aos pesticidas mais utilizados de forma recorrente e há resultados controversos envolvendo os efeitos da exposição ao endosulfan e a atividade da AChE em peixes, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do endosulfan na atividade da AChE cerebral e seu padrão de expressão gênica utilizando zebrafish adulto (Danio rerio) como modelo experimental. Além disso, nós analisamos os efeitos da exposição ao endosulfan em diferentes parâmetros de locomoção do zebrafish e na formação da memória de longo prazo. Após 96h de exposição, os peixes do tempo com 2,4 μg/L de endosulfam apresentaram um decréscimo significante na atividade da AChE (9. 44 ± 1. 038 μmol SCh. h-1. mg proteína-1; p = 0. 0205) quando comparados com o grupo controle (15. 87 ± 1. 768 μmol SCh. h-1. mg proteína-1; p = 0. 0205). A regulação inibitória da atividade da AChE cerebral não está diretamente relacionada com o controle transcricional como demostrado pela análise de RT-qPCR. Nossos resultados reforçam a inibição da atividade da AChE como via da toxicidade induzida pelo endosulfan em cérebro de de peixe. Além disso, a exposição de 2,4 μg/L do endosulfan durante 96h prejudicou todos os parâmetros exploratórios avaliados: linhas cruzadas (273. 7 ± 28. 12 número de linhas cruzadas em comparação com o grupo controle: 344. 6 ± 21. 30, p=0. 0483), distância viajada (23. 44 ± 2. 127 metros comparados com o grupo controle 29. 39 ± 1. 585, p=0. 0281), velocidade média (0. 03 ± 0. 003 metros/segundos comparados com o grupo controle 0. 04 ± 0. 002, p=0. 0275) e mudanças de ângulo (69,940 ± 4,871 mudanças de ângulo absolutas comparadas com o grupo controle 88,010 ± 4,560 p=0. 0114). Esses resultados sugerem que a exposição ao endosulfan prejudica significativamente a performance exploratória dos animais e, potencialmente, compromete suas interações interespecíficas e ecológicas. Nossos resultados também demonstraram que a mesma exposição ao endosulfan não compromete a performance dos animais no aparato de esquiva inibitória. Esses achados fornecem evidências adicionais de efeitos deletérios da exposição ao endosulfan no sistema nervoso.