Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412283-Texto+Completo-0.pdf: 206533 bytes, checksum: d36786806733ccb638b5c63789b4581c (MD5) Previous issue date: 2009 / The zebrafish (Danio rerio) is a small freshwater teleost fish, belonging to family Cyprinidae, which can easily be kept in aquariums in laboratories. Most of its genes are already known, and its genome has a similarity with the human genome. Nicotine is an alkaloid that is present in the leaves of tobacco, binding to cholinergic nicotinic receptors in the central and peripheral nervous system that are initially activated and then inhibited. Nicotine stimulates the release of several neurotransmitters including acetylcholine (ACh), which is recognized by nicotinic cholinergic receptors, dopamine, norepinephrine, serotonin and glutamate. Pharmacological and toxicological effects of nicotine exposure have been frequently reported in literature. The neurotransmission mediated by ACh is essential for the proper functioning of the central nervous system. Based on their different affinities by agents that mimic the action of ACh, cholinergic receptors are divided into different classes: muscarinic and nicotinic. The nicotinic receptors are inotropic and recognize the ACh and nicotine. Once released in the synapses, ACh is degraded by the enzyme acetylcholinesterase (AChE) to acetate and choline, the latter being recaptured by the neuron. With the inhibition of AChE, the neurotransmitter ACh is not hydrolized in neuromuscular junctions, causing an abnormal amount of ACh in that area, leading to possible effects toxic. The gene that emodes AChE has been cloned and sequenced and this enzyme activity has been detected in zebrafish brain. Considering that: (i) exposure of nicotine may impair neurobehavioral performance and affect the central nervous system cholinergic pathways; (ii) in zebrafish, nicotine presented an inverted U-shaped dose-response curve with moderate doses improving cognitive function and higher doses having less of a positive effect, and (iii) zebrafish cholinergic system was already described, the aim of this study was to investigate the in vitro and in vivo acute effects of nicotine on acetylcholinesterase activity in zebrafish brain. The effect of nicotine in vitro promoted AChE inhibition at concentration of 500 (11, 02٪) and 1000μM (7, 73٪). The in vivo study of acute nicotine (3min and 20 min) did not alter significantly the enzyme activity in zebrafish brain at the doses tested. Still, possible effects of chronic treatment of nicotine on the activity of AChE must be searched. / O peixe-zebra (Danio rerio) é um pequeno peixe teleósteo de água doce, pertencente à família Cyprinidae, que pode ser facilmente mantido dentro de aquários em laboratórios. A maioria dos seus genes já é conhecida, e o seu genoma tem uma relação de similaridade com o genoma humano. A nicotina é um alcalóide que está presente nas folhas do tabaco, atua nos receptores colinérgicos nicotínicos centrais e periféricos que são ativados e depois inibidos pela própria droga. A nicotina estimula a liberação de vários neurotransmissores incluindo a acetilcolina (ACh), que é reconhecida pelos receptores colinérgicos nicotínicos, dopamina, norepinefrina, serotonina e glutamato Efeitos tóxicos e farmacológicos causados pela exposição à nicotina têm sido frequentemente relatados na literatura. A neurotransmissão mediada pela ACh é fundamental para o correto funcionamento do SNC. Baseando-se em suas diferentes afinidades por agentes que mimetizam a ação da ACh, os receptores colinérgicos são divididos em duas classes distintas: muscarínicos e nicotínicos. Os receptores nicotínicos são ionotrópicos e reconhecem a ACh e a nicotina. Uma vez liberada nas sinapses, a ACh é degradada pela enzima acetilcolinesterase (AChE) em acetato e colina, sendo esta última recaptada pelo neurônio. Com a inibição da AChE, o neurotransmissor ACh não é hidrolizado nas junções neuromusculares, causando uma quantidade anormal de ACh nestes locais, levando a possíveis efeitos tóxicos. O gene da AChE já foi clonado e sequenciado e esta atividade enzimática já foi detectada em cérebro de peixe-zebra. Considerando que: (i) a exposição à nicotina pode causar danos a performace neurocomportamental e afetar o SNC, (ii) em peixe-zebra a nicotina apresenta uma curva de resposta de dose em U invertido, com moderadas doses melhorando as funções cognitivas e altas doses com menos efeitos positivos, e (iii) o sistema colinérgico em peixe-zebra já foi descrito; o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos in vitro e in vivo do tratamento agudo com nicotina sob a atividade da AChE no cérebro do peixe-zebra. O tratamento in vitro com nicotina nas doses de 500 (11,02٪) e 1000μM (7,73٪) promoveu inibição na atividade da AChE. No estudo in vivo o tratamento agudo com nicotina (3min e 20 min) não acarretou modificações significativas na atividade da enzima no cérebro do peixe-zebra, nas doses testadas. Ainda assim, possíveis efeitos do tratamento crônico da nicotina sob a atividade da AChE devem ser pesquisados.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437833-Texto+Completo-0.pdf: 963349 bytes, checksum: 9fc7ce9b6fb62b2118fc694c4bf21677 (MD5) Previous issue date: 2012 / Hyperargininemia is a rare disease caused by an innate error of the metabolism (EIM) biochemically characterized by the accumulation of arginine in body tissues due to arginase deficits. Mental retardation and other neurological symptoms are common in hyperargininemic patients. Several mechanisms have been proposed to describe the neurotoxicity of hiperargininemia, such as changes in antioxidant enzyme systems and neurotransmission. The purinergic system is an important pathway for which uses extracellular nucleotides and nucleosides as signaling molecules. The extracellular ATP degradation and the consequent adenosine production are performed by a cellular surface enzyme family known as ectonucleotidases, which include the NTPDases (nucleoside triphosphate diphosphoohydrolases) and the ecto-5´-nucleotidase. Adenosine is a neuromodulator that acts through the activation of P1 metabotropic receptors (A1, A2A, A2B, A3) and plays a role as an endogenous neuroprotector. Thus, the NTPDase and ecto-51-nucleotidase control the levels of nucleotides and nucleosides, modulating the purinergic system. Whereas the zebrafish is an important tool for the study of developmental biology and the hiperargininemia is a disease that occurs in the early stages of development, the objective of this study was to evaluate the effects of arginine exposure in zebrafish larvae on different biochemical, behavioral, and molecular parameters. The results showed that exposure to arginine at a concentration of 0. 1 mM in larvae of the zebrafish from to 7 days post-fertilization (dpf) was capable of changing ectonucleotidase activities, promoting an increase of ATP, ADP, and AMP hydrolysis and as causing morphological changes, such as larvae body size reduction, but did not alter the locomotor activity of animals. Acute arginine exposure (1h) in adult zebrafish was not able to alter the activity of ectonucleotidases. These data demonstrate that arginine can affect the ectonucleotidase activities and morphological parameters in zebrafish larvae, suggesting that the purinergic system is a target for neurotoxic effects induced by arginine in the early stages of developmental. / Hiperargininemia é uma doença rara causada por um erro inato do metabolismo (EIM) bioquimicamente caracterizado pelo acúmulo de arginina nos tecidos devido à deficiência de arginase. Retardo mental e outras doenças neurológicas são sintomas comuns em pacientes hiperargininêmicos. Diversos mecanismos foram propostos para descrever a neurotoxicidade da hiperargininemia, tais como, alterações nos sistemas enzimáticos antioxidantes e de neurotransmissão. O sistema purinérgico é uma importante rota de sinalização celular que utiliza nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares como moléculas sinalizadoras. A degradação do ATP extracelular é realizada por uma família de enzimas localizadas na superfície celular conhecidas como ectonucleotidases, que inclui as NTPDases (nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5´-nucleotidase. A adenosina é um neuromodulador que atua através da ativação de receptores metabotrópicos do tipo P1 (A1, A2A, A2B, A3) e pode agir como um neuroprotetor endógeno. As NTPDases hidrolisam nucleotídeos tri- e difosfatados originando a adenosina. Assim, as NTPDases e ecto-5’-nucleotidase controlam os níveis de nucleotídeos e nucleosídeos, modulando o sistema purinérgico. Considerando que o peixe-zebra é uma importante ferramenta para o estudo da Biologia do Desenvolvimento e que a hiperargininemia é uma doença que ocorre nas fases iniciais do desenvolvimento, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com arginina em larvas de peixezebra em diferentes parâmetros bioquímicos, comportamentais e moleculares. Foram avaliados os efeitos da exposição in vivo de larvas e adultos de peixe-zebra na atividade das ectonucleotidases e na locomoção. Os resultados obtidos demonstraram que a exposição à arginina na concentração de 0. 1 mM em larvas de peixe-zebra do 3º ao 7º dia pós-fertilização (dpf) foi capaz de alterar a atividade das ectonucleotidases, promovendo um aumento na hidrólise de ATP, ADP e AMP, assim como causar alterações moleculares e morfológicas, como diminuição do tamanho corporal, porém não alterou a atividade locomotora dos animais. A exposição aguda (1h) a arginina em peixes zebra adultos não foi capaz de alterar a atividade das ectonucleotidases. Esses dados demonstram que a arginina pode afetar a atividade das ectonucleotidases e parâmetros morfológicos em larvas de peixe-zebra, sugerindo que o sistema purinérgico é um alvo para os efeitos neurotóxicos induzidos pela arginina, nas fases iniciais do desenvolvimento.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424470-Texto+Completo-0.pdf: 1933848 bytes, checksum: 8ff49b9ceaa68691d9de882c207c447c (MD5) Previous issue date: 2010 / First identified in Saccharomyces cerevisie as silent information regulators (SIRs) sirtuins (SIRTs) are widely distributed in all phyla of life. These large and diverse class III histone deacetylases (HDACs) comprise a family of NAD+-dependent protein deacetylases that catalyze mono-ADP-ribosyl transfer and/or deacetylation, and are considered a highly conserved family of proteins. Zebrafish (Danio rerio) is a freshwater fish widely used as model organism in many research areas. Characteristics such as low costs of breeding and maintenance, easy water-soluble drugs administration and rapid adaptation to new environments, among others, made the zebrafish a suitable model organism for studying many human diseases; including aging-associated disorders. Despite its promising use as a vertebrate model of aging, little is known about the presence of sirtuin-related genes in zebrafish, which has been considered an important research target for its therapeutics potential. Therefore, the purpose of this study was to identify all sirtuin-related genes and to map their expression patterns in nine different tissues of adult zebrafish. Total RNA was extracted from tissues samples of male and female zebrafish. RT-PCR reactions were performed under optimized conditions for expression pattern analysis of the sirtuins-related genes, previously identified using NCBI-Blast searches. Results showed the existence of eight sirtuins-related genes, including two paralogs. Each gene presented a unique expression pattern, illustrating their wide tissue distribution. In order to test a modulatory effect on gene expression of the sirtuin members, we exposed fish to resveratrol and the results demonstrated an alteration of the expression levels of some sirtuins. In this sense, we suggest that new drugs potentially able to modulate sirtuins expression could be tested using the system here described, aiming, in the future, to develop more selective therapies for age-associated disorders / Descobertas inicialmente em Saccharomyces cerevisie como reguladoras de silenciamento de informação (SIRs), as sirtuínas (SIRTs) estão amplamente distribuídas em todos os domínios de vida. Esta grande e diversa família de histonas desacetilases da classe III (HDACs) são dependentes de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+) para exercer suas funções de desacetilação e/ou transferência de mono-ADP-ribosil. São consideradas uma família de enzimas bastante conservada não apenas entre eucariotos, nos quais são encontradas múltiplas sirtuínas, mas também em procariotos. O zebrafish (Danio rerio) é um teleósteo de água doce amplamente utilizado como animal modelo em diferentes áreas de pesquisa. Características como manutenção em pequenos espaços e com baixos custos, fácil administração de drogas solúveis em água e rápida aclimatação a novos ambientes, tornaram o zebrafish modelo de estudo para várias doenças humanas; entre elas as relacionadas ao envelhecimento. Apesar do uso crescente do zebrafish como sistema modelo, e das sirtuínas serem importantes alvos de pesquisa nos últimos anos principalmente devido seu potencial terapêutico, pouco é conhecido sobre sirtuínas e zebrafish. Portanto, identificar genes relacionados às sirtuínas e caracterizar o padrão de expressão gênica de cada membro em diferentes tecidos do zebrafish foi o objetivo deste trabalho. Para tanto, amostras de diferentes tecidos foram retiradas de animais adultos de ambos sexos e diretamente congeladas em nitrogênio líquido. Após a extração de RNA total de cada amostra, reações de RT-PCR, já padronizadas, foram realizadas para análise do padrão de expressão dos genes relacionados às sirtuínas, identificados previamente através de buscas no NCBI-Blast. Nossa investigação identificou oito genes relacionados às sirtuínas, incluindo dois parálogos. Cada um dos oito genes identificados apresentou um padrão de expressão único, ilustrando ampla distribuição tecidual dos membros da família das sirtuínas. Com o objetivo de testar a modulação na expressão destes genes, realizamos um experimento de exposição ao resveratrol que alterou os níveis de expressão gênica de algumas das sirtuínas. Neste sentido, propomos que novas drogas potencialmente moduladoras de sirtuínas sejam testadas usando o sistema aqui descrito com o objetivo de, no futuro, desenvolver terapias mais seletivas para as doenças associadas ao envelhecimento.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000448604-Texto+Completo-0.pdf: 1148296 bytes, checksum: ca8ff4b1f0199484ac8c3e8b70d970b8 (MD5) Previous issue date: 2013 / According to data from the World Health Organization (WHO), stress affects more than 90% of the world's population and is considered a global epidemy. Stress has become an integral part of human life and organisms are constantly subjected to stressful stimuli that change various physiological processes, representing a risk factor for many diseases, such as cancer, cardiovascular, metabolic, infectious and gastrointestinal deseases and depression. The zebrafish (Danio rerio) has many similarities with mammalian in terms of overall organization and the functioning of their stress regulatory systems. The zebrafish hypothalamic-pituitary-interrenal (HPI), analogous to the mammalian hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA), has been found in zebrafish and the activation of this pathway is essential for the maintenance of vital functions in response to stressful events. Despite extensive knowledge regarding stress responses in mammals, data on the relationship between chronic unpredictable stress and its effects on purinergic signaling is limited. Purinergic signaling is mediated by ATP and adenosine receptor activation through P2 and P1, respectively. The catabolism of extracellular ATP to adenosine is promoted by the ectonucleotidases, such as Ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases) and ecto-5 '-nucleotidases (E-5´NT). Adenosine is deaminated by adenosine deaminase (ADA) producing inosine. Thus, these enzymes control the levels of extracellular nucleotides and nucleosides, exerting an influence on purinergic signaling. Considering some models of stress can affect the signalling systems, the objective of this study was to verify whether the unpredictable chronic stress changes ectonucleotidases and adenosine deaminase activities in zebrafish brain. In addition, we analyzed the metabolism of ATP as well as the expression of genes related to ADA, ada1, ada2. 1, ada2. 2, adaL, adaasi and the effects of agonists and antagonists of adenosine receptors in an unpredictable chronic stress model in zebrafish. Our results demonstrated that there are no changes on ATP (P = 0. 1499), ADP (P = 0. 3615) and AMP (P = 0. 8987) hydrolysis in zebrafish brain membranes submitted to unpredictable chronic stress. In contrast, ecto-ADA activity significantly decreased (26. 8%; 8,164 ± 0. 78 NH3 min − 1 mg− 1 of protein; p 0. 05; n = 5 <) in brain membranes of animals exposed to the unpredictable chronic stress when compared to the control group (11. 15 ± 2. 16 NH3 min − 1 mg − 1 of protein; p 0. 05; n = 5). However, the activity of cytosolic ADA was not changed after the unpredictable chronic stress. Quantitative analysis by RT-qPCR did not show significant changes after chronic unpredictable stress exposure on gene expression in the genes ada1, ada2. 1, ada2. 2, adaL, adaasi. ATP metabolism in brain membrane preparations of zebrafish in the control group and stressed was measured by high-performance liquid chromatography (HPLC) and showed a significant increase of adenosine in stressed animals. Considering adenosine A1 receptor agonists have an anxyolitic activity and the A2A receptor antagonists can exert neuroprotective effects, we investigated the effect of administration of an agonist of A1 receptor, N⁶-ciclopentiladenosine (CPA), and an antagonist of A2A receptors, (ZM241385) on behavioral parameters of animals submitted to unpredictable chronic stress to check a possible relationship between the adenosinergic system and the stress. As a result we showed that these compounds have not been able to reverse the anxiogenic effect caused by unpredictable chronic stress. Since adenosine has neuromodulatory and anxiolytic effects, changes in its levels could play a role in counteracting the stress, which could be related to a compensatory mechanism in order to restore the homeostasis. / De acordo com dados da Organização Mundial de Saúde (OMS), atualmente o estresse afeta mais de 90% da população mundial, sendo considerado uma epidemia global. O estresse tornou-se parte integrante da vida humana e os organismos são constantemente submetidos a estímulos estressantes que alteram vários processos fisiológicos, sendo um fator de risco para diversas patologias, como câncer, doenças cardiovasculares, metabólicas, infecciosas, gastrointestinais e depressão. O peixe-zebra (Danio rerio) tem muitas semelhanças com mamíferos em termos de organização geral e o funcionamento dos respectivos sistemas reguladores do estresse. O eixo hipotálamo-pituitária-interrenal (HPI), um sistema análogo ao eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA), foi descrito em zebrafish e a ativação desta via é essencial para a manutenção das funções vitais como resposta a eventos estressantes. Apesar do amplo conhecimento das respostas do estresse em mamíferos, os dados sobre a relação entre o estresse crônico imprevisível e seus efeitos na sinalização purinérgica são limitados. A sinalização purinérgica é mediada por ATP e adenosina por meio da ativação dos receptores P2 e P1, respectivamente. O catabolismo de ATP extracelular até adenosina é promovido pelas ectonucleotidases, como as Ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases) e Ecto-5’- nucleotidases (E-5´NT). A adenosina produzida pode ser desaminada pela adenosina desaminase (ADA), produzindo inosina. Assim, estas enzimas controlam os níveis de nucleosídeos e nucleotídeos extracelulares, exercendo uma influência na sinalização purinérgica. Considerando que alguns modelos de estresse podem afetar os sistemas de sinalização, o objetivo deste estudo foi verificar se o estresse crônico imprevisível altera as atividades ectonucleotidásicas e adenosina desaminase em cérebro de zebrafish. Além disso, analisamos o metabolismo do ATP, bem como a expressão de genes relacionados à ADA, ada1, ada2. 1, ada2. 2, adaL, adaasi e os efeitos de agonistas e antagonistas de receptores de adenosina em zebrafish submetidos a um modelo de estresse crônico imprevisível. Nossos resultados demonstraram que não há alterações na hidrólise de ATP (P = 0. 1499), ADP (P = 0. 3615) e AMP (P = 0. 8987) em membranas cerebrais de zebrafish submetidos ao estresse crônico imprevisível. Em contraste, a atividade da ecto- ADA diminuiu significativamente (26,8%; 8. 164 ± 0,78 NH3 min−1 mg−1 de proteína; p < 0,05; n = 5) em membranas de cérebro de animais expostos ao estresse crônico imprevisível quando comparado ao grupo controle (11. 15 ± 2,16 NH3 min−1 mg−1 de proteína; p < 0,05; n = 5). No entanto, a atividade da ADA citosólica não foi alterada. A análise quantitativa por RT-qPCR não apresentou alterações significativas após a exposição do estresse crônico imprevisível na expressão gênica nos genes ada1, ada2. 1, ada2. 2, adaL, adaasi. O metabolismo do ATP em preparações de membrana de cérebro de zebrafish no grupo controle e estressado foi medido por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e mostrou um aumento significativo de adenosina nos animais estressados. Considerando que os agonistas de receptores A1 têm uma atividade ansiolítica e os antagonistas dos receptores A2A podem exercer efeitos neuroprotetores, investigamos o efeito da administração de um agonista do receptor A1, N⁶-ciclopentiladenosina (CPA), e de um antagonista de receptores A2A, (ZM241385) em parâmetros comportamentais de animais submetidos ao estresse crônico imprevisível, para verificar uma possível relação entre o sistema adenosinérgico e o estresse. Como resultado, observamos que esses compostos não foram capazes de reverter o efeito ansiogênico causado pelo estresse crônico imprevisível. Uma vez que a adenosina tem efeitos neuromodulatórios, as alterações nos níveis de adenosina podem desempenhar um papel nos mecanismos relacionados ao estresse, representando um mecanismo de compensação a fim de restaurar a homeostase.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000448546-Texto+Completo-0.pdf: 1722481 bytes, checksum: a40adfe8bfc8e436fd504a30736f22aa (MD5) Previous issue date: 2013 / Temperament can be regarded as the basis of mood, behavior and personality. It has a strong biological basis, manifested early in the development of the individual, guiding the formation of habits and is relatively stable over time. Although it is known that there are environmental influences, the relationship of temperament with biological markers and social environment is not well defined. Evidence suggests that the temperament and personality traits predict psychiatric disorders and that most of them are recurrent and chronic. Thus, this study aims to investigate the biological and social basis of behavior and in animal models of traits to assess the relationship of temperament with hyperucemia and with self-report of having been bullied in humans. To study the neurobiological basis of this trait, we selected mice with high and low exploration of a central object in an open field. Out of one hundred mice tested, the ten mice with higher (HE) and lower exploratory (LE) activity were evaluated with gene expression (Genechip Mouse Gene 1. 0 ST Array – Affymetrix) in the striatum and frontal cortex. The results showed 118 and 86 differentially expressed genes (DEGs) in the striatum and frontal cortex, respectively. Through analysis of DEGs biological processes were significantly more enriched in nervous system were development and function and cell-to-cell signaling, particularly in the striatum. These results suggest the involvement of translational and post-translational processes as well as striatal synaptic elements in the trait differences of exploratory behavior. Human studies were conducted with the data collected in a large web-survey on psychological and psychiatric measures (BRAINSTEP). In the study of biological basis of behavior we analyzed temperament in 7. 155 males (5. 1% hyperuricemic) and 25. 225 women (1. 8% hyperuricemic). Hyperuricemic subjects scored higher in anger and lower in inhibition and control, but hyperuricemic women also showed a higher emotional sensitivity and a lower degree of volition and coping. Subjects with hyperuricemia present more more externalizing and unstable emotional traits and affective temperaments In the study of the social bases of temperament assessed bullying during childhood and adolescence, through a question on time of exposure to bullying (none, <1 year, 1-3 years and> 3 years).Emotional traits and affective temperaments were evaluated with The Affective and Emotional Composite Temperament Scale (AFECTS). About half of the sample reported exposure to bullying and 10% reported being victimized by peers for longer than 3 years. Longer exposure to bullying was associated with lower Volition, Coping and Control. Bullying victimization was also associated with a much lower proportion of euthymic and hyperthymic types in both genders, which was compensated by an increase mainly in the proportion of depressive, cyclothymic and volatile types. Being bullied was associated with a broad and profound impact on emotional and cognitive domains in all dimensions of emotional traits, and with internalized and unstable affective temperaments. These results, taken together, show the importance of social factors and serum markers, as well as genetic markers of temperament. / O temperamento pode ser considerado como a base do humor, do comportamento e da personalidade, tem uma base biológica forte, manifesta-se cedo no desenvolvimento do indivíduo, norteia a formação dos hábitos sendo relativamente estável no decorrer do tempo. Apesar de se saber que há influências do meio, não está bem definida a relação entre temperamento e o meio social. Evidências sugerem que o temperamento e os traços de personalidade predispõem aos transtornos psiquiátricos e que a maioria deles é recorrente e crônico. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo investigar as bases biológicas e sociais do temperamento em modelos animais de temperamento e avaliar a relação do temperamento com hiperuricemia (elevação dos níveis séricos de ácido úrico) e com o autorrelato de ter sido vítima de bullying em humanos. Na avaliação das bases neurobiológicas do temperamento foram usados modelos animais, no qual foram selecionados camundongos com alta e baixa exploração em um teste campo aberto. Foram testados cem camundongos, e posteriormente selecionados os dez camundongos mais exploradores (HE) e os dez menos exploradores (LE), cujo mRNA de córtex frontal e estriado foi coletado para posteriormente ser avaliado através de chips para avaliação da expressão gênica (Genechip Mouse Gene 1. 0 ST Array - Affymetrix). Os resultados mostraram 86 e 118 genes expressos diferencialmente (DEGS) no estriado e no córtex frontal, respectivamente. Através da análise dos DEGs os processos biológicos mais significativamente enriquecidos foram o do desenvolvimento do sistema nervoso e da função e sinalização celular, especialmente no estriado, numa comparação entre animas HE com LE. Estes resultados sugerem o envolvimento de processos de translação e pós-tradução, assim como os elementos sinápticos do estriado nas diferenças de características de comportamento exploratório. Nos estudos em humanos, os dados foram coletados em um grande levantamento via Web através do Brazilian Internet Study on Temperament and Psychopathology (BRAINSTEP). No estudo de bases biológicas do temperamento em humanos, analisamos o temperamento em 7. 155 homens (5,1% hiperuricêmicos) e 22. 225 mulheres (1,8% hiperuricêmicas). Indivíduos hiperuricêmicos apresentaram escores mais elevados em raiva e inferiores na inibição e controle, já as mulheres hiperuricêmicas também mostram uma maior sensibilidade emocional e um menor grau de vontade e de enfrentamento. Os resultados demonstraram que indivíduos com hiperuricemia têm mais traços emocionais e temperamentos afetivos externalizados e instáveis. No estudo sobre as bases sociais do temperamento avaliamos o bullying durante a infância e adolescência, através de uma pergunta sobre tempo de exposição ao bullying (nenhum, <1 ano, 1 a 3 anos e > 3 anos).Traços emocionais e temperamentos afetivos foram avaliados com a Escala de Temperamento Afetivo e Emocional (AFECTS). Cerca de metade da amostra relatou exposição ao bullying e 10% relataram ter sido vítimas por mais de 3 anos. Vitimas de bullying também apresentam uma proporção muito menor de temperamentos eutímicos e hipertímicos em ambos os sexos, o que foi compensado por um aumento, principalmente, na proporção de traços depressivos, ciclotímicos e volátil. Sofrer bullying foi associado com um impacto amplo e profundo sobre os domínios cognitivos e emocionais em todas as dimensões de traços emocionais, e com temperamento afetivo internalizado e instável. Esses resultados, em conjunto, mostram a importância de possíveis marcadores séricos (ácido úrico) e fatores genéticos e sociais sobre os traços de temperamento.

SILVA, Ana Paula Teixeira da. Efeitos da insuficiência renal aguda sobre o esvaziamento gástrico e trânsito gastrintestinal de líquido em ratos acordados. 2003. 127 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-05T16:21:30Z No. of bitstreams: 1 2003_dis_aptsilva.pdf: 398607 bytes, checksum: 593cf4ac2f2914b6fa493255e6693dec (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:37:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2003_dis_aptsilva.pdf: 398607 bytes, checksum: 593cf4ac2f2914b6fa493255e6693dec (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003_dis_aptsilva.pdf: 398607 bytes, checksum: 593cf4ac2f2914b6fa493255e6693dec (MD5) Previous issue date: 2003 / Renal failure leads to important gastrointestinal functional changes. However, there are only few studies focused on the relationship between renal failure and gastrointestinal tract physiology. In this work we studied the gastric emptying (GE) and gastrointestinal (GI) transit of liquid 6, 12 and 24hr after awake rats had one or both kidneys surgically removed. In both experimental protocols, GE and GI transit were measured according to Reynell & Spray procedures. GE and GI transit were significantly reduced 6, 12 and 24hr after both kidney removal. Removal of only one kidney had no effect on GE and GI transit. Blood volume was greatly increased after bilateral kidney removal as well as plasmatic urea and creatinine levels. We also evaluated whether this phenomenon was caused by azotemia. In a separate group of animals, we observed that urea and creatinine infusions had no effect on GE and GI transit in intact animals. In addition, bleeding up to 30% of blood volume reversed GE and GI transit inhibitions in animals submitted to bilateral kidney removal. In summary, bilateral nephrectomy leads to GI motility inhibition, which seems to be due to hypervolemia and not to post nephrectomy azotemia. / A insuficiência renal ocasiona importantes disfunções gastrintestinais. Entretanto poucos estudos apontam a relação entre a insuficiência renal e o funcionamento do trato gastrintestinal. Neste trabalho estudamos o esvaziamento gástrico e o trânsito gastrintestinal de líquido em ratos acordados, às 6, 12 e 24 horas após a remoção cirúrgica de um ou ambos os rins. Em todos os protocolos experimentais, o esvaziamento gástrico e o trânsito gastrintestinal foram determinados segundo a técnica descrita por Reynell & Spray. O esvaziamento gástrico e o trânsito gastrintestinal foram significativamente reduzidos às 6, 12 e 24 horas após ambos os rins terem sido removidos. A remoção de um único rim não teve efeito sobre o esvaziamento gástrico e o trânsito gastrintestinal. Houve um acentuado aumento no volume sangüíneo bem como nos níveis plasmáticos de uréia e creatinina após a nefrectomia bilateral. Em seguida, avaliamos se este fenômeno foi causado pela azotemia. Num determinado grupo de animais observamos que a infusão de uréia e creatinina não teve efeito sobre o esvaziamento gástrico e o trânsito gastrintestinal nos animais intactos. Além disso, a retração de 30% do volume sangüíneo efetivo reverteu o retarde no esvaziamento gástrico e no trânsito gastrintestinal nos animais submetidos a nefrectomia bilateral. Em síntese, a nefrectomia bilateral induz a inibição da motilidade gastrintestinal que parece ser ocasionada pela hipervolemia e não pela azotemia induzida pela nefrectomia bilateral.

Submitted by Mariane Bertolucci Casalenovo null (mary_bc14@hotmail.com) on 2017-09-14T00:20:08Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL.pdf: 10749096 bytes, checksum: 4412c078d6e18d64f519d7ac0952d26d (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-09-15T13:49:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casalenovo_mb_me_bot.pdf: 10749096 bytes, checksum: 4412c078d6e18d64f519d7ac0952d26d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-15T13:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casalenovo_mb_me_bot.pdf: 10749096 bytes, checksum: 4412c078d6e18d64f519d7ac0952d26d (MD5) Previous issue date: 2017-08-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A infecção por Mycobacterium leprae (M. leprae) desencadeia alterações no status funcional das células de Schwann (SCs), responsáveis pela produção da bainha de mielina e homeostasia neural. Estudos prévios indicam que lesões nos nervos periféricos modulam a expressão de fatores-chave envolvidos na diferenciação e maturação das SCs. Na hanseníase, alterações funcionais nessas células podem estar envolvidas na patogênese do dano neural. O presente estudo buscou determinar a expressão dos fatores de transcrição KROX-20, SOX-10, JUN e do receptor p75NTR, envolvidos nos processos de diferenciação e maturação de SCs. Os dados foram obtidos a partir de cultura primária de SCs murinas expostas ao M. leprae durante sete e 14 dias, com diferentes multiplicidades de infecção (MOI 100:1, MOI 50:1). Os mesmos fatores foram avaliados in vivo, em nervos ciáticos de camundongos nude (NUFoxn1nu), após seis e nove meses de infecção. Comparando-se grupos experimentais em relação aos controles, nossos resultados em cultura de SCs demonstram redução significativa de KROX-20 e SOX-10, bem como elevação na frequência de células imunomarcadas por p75NTR. Paralelamente, nervos ciáticos de camundongos nude infectados por M. leprae apresentaram queda de KROX-20 e aumento de p75NTR, quando comparados aos animais não infectados. Em conjunto, nossos resultados corroboram achados prévios sobre a interferência de M. leprae na expressão de fatores-chave envolvidos na maturação celular, favorecendo a manutenção de fenótipo não mielinizante nas SCs, com possíveis implicações na reparação de nervos periféricos adultos. / Mycobacterium leprae infection (M. leprae) triggers changes in the functional status of Schwann cells (SCs), which are responsible for the production of myelin sheath and neural homeostasis. Previous studies indicate that peripheral nerve injury modulates the expression of key factors involved in the differentiation and maturation of SCs. In leprosy, functional changes in these cells may be involved in the pathogenesis of neural damage. The present study sought to determine the expression of the transcription factors KROX-20, SOX-10, JUN and the neurotrophic receptor p75NTR, involved in the differentiation and maturation processes of SCs. Data were obtained from primary murine SCs culture exposed to M. leprae for seven and 14 days, with different multiplicities of infection (MOI 100:1, MOI 50:1). The same factors were evaluated in vivo on sciatic nerve of nude mice (NU-Foxn1nu), after six and nine months of infection. By comparing experimental groups versus controls, our SC culture results demonstrate significant reduction of KROX-20 and SOX-10, as well as elevation in the frequency of cells immunolabelled by p75NTR. In parallel, sciatic nerves of nude mice infected with M. leprae showed a decrease in KROX-20 and an increase of p75NTR when compared to uninfected animals. Our results corroborate previous findings on M. leprae interference in the expression of key factors involved in cell maturation, favoring the maintenance of a non-myelinating phenotype in SCs, with possible implications for the repair of adult peripheral nerves.

Made available in DSpace on 2015-05-22T12:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000469018-Texto+Completo-0.pdf: 1309740 bytes, checksum: 2aed89fbf06476e1b1522282c9325099 (MD5) Previous issue date: 2015 / The ethanol exposure during early embryonic development can cause morphological and behavioral changes even when ingested in low doses. Growth retardation, microcephaly and mental retardation are some of the features observed in children with FAS (fetal alcohol syndrome) whose mothers ingested ethanol during pregnancy. The mechanisms by which ethanol affects embryonic development and cause such changes have not been fully elucidated. The increase in the extracellular adenosine levels after chronic and acute exposure to ethanol indicates that the purinergic system has an important role in this situation. Adenosine is a neuromodulator that acts through the activation of metabotropic receptors type P1 (A1, A2A, A2B and A3) and can act as an endogenous neuroprotector. In the extracellular space, adenosine can be produced by sequential hydrolysis of adenosine triphosphate (ATP) held by ectonucleotidases, a cascade of a family of enzymes located on the cell surface, which the key process to hydrolyze to adenosine is performed by ecto-5'-nucleotidase. The use of zebrafish in toxicology studies and development offers a number of advantages. Its size and breeding allow the maintenance of a large quantity of fish in a relatively small space. The production of a large number of eggs and the development occurs rapidly, and progresses through well-defined steps. Recent studies have employed the zebrafish as a model for fetal alcohol syndrome and demonstrated that embryonic exposure to ethanol results in phenotypes comparable to those observed in other vertebrate models. The objective of this study was to evaluate the role of adenosine metabolism in the morphological and locomotor parameters of zebrafish larvae exposed to ethanol. The results showed that in addition to morphological damage already known, there is a change in the enzymatic activity of ecto-5'-nucleotidase in larvae of seven days, in both treatments, acute and chronic, independent of gene expression form, which in time was not changed. Pre-treatment with AOPCP, an inhibitor of ecto-5'- nucleotidase, was unable to prevent the morphological damage in a relevant way, although statistically there was a slight prevention. Pre-treatment with dipyridamole, an adenosine transport blocker further worsened the effects caused by ethanol. Considering the changes that occur in extracellular levels of adenosine after exposure to ethanol and the involvement of the purinergic system in early stages of development, our results suggest that there is a combined action of the enzyme ecto-5'-nucleotidase and nucleoside transporters in this rising of extracellular adenosine levels, with emphasis on the inhibition of nucleoside transporters. Additionally, we can infer that there is a correlation between elevated levels of adenosine and morphological defects after exposure to ethanol. These results suggest that the purinergic system is a target for the toxic effects induced by ethanol in the early stages of development. / A exposição ao etanol durante as fases iniciais de desenvolvimento embrionário pode causar alterações morfológicas e comportamentais, mesmo quando ingerido em baixas doses. Retardo no crescimento, microcefalia e retardo mental são algumas das características observadas em crianças portadoras da SAF (síndrome alcoólica fetal), cujas mães ingeriram etanol durante a gestação. Os mecanismos pelos quais o etanol afeta o desenvolvimento embrionário e causa tais alterações ainda não foram completamente desvendados. O aumento extracelular da adenosina após exposições crônicas e agudas ao etanol indica que o sistema purinérgico tem um importante papel nesses mecanismos. A adenosina é um neuromodulador que atua através da ativação de receptores metabotrópicos do tipo P1 (A1, A2A, A2B e A3) e pode agir como um neuroprotetor endógeno. No espaço extracelular, a adenosina pode ser produzida pela hidrólise sequencial da adenosina trifosfato (ATP) realizada pela cascata das ectonucleotidases, uma família de enzimas localizada na superfície celular, sendo o processo chave – hidrólise da adenosina monofosfato (AMP) à adenosina – realizada pela ecto-5’- nucleotidase. A utilização do peixe-zebra em estudos toxicológicos e de desenvolvimento oferece uma série de vantagens. Seu tamanho e a forma de criação permitem a manutenção de uma grande quantidade de peixes em um espaço relativamente pequeno. O cruzamento resulta em um grande número de ovos e o desenvolvimento ocorre rapidamente, e progride através de etapas bem definidas. Estudos recentes têm empregado o peixe-zebra como modelo para a síndrome alcoólica fetal e demonstrado que a exposição embrionária ao etanol resulta em fenótipos comparáveis com aqueles observados em outros modelos vertebrados. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do metabolismo da adenosina nos parâmetros morfológicos e locomotores de larvas de peixe-zebra expostas ao etanol. Os resultados obtidos demonstraram que além dos danos morfológicos já conhecidos, há alteração na atividade enzimática da ecto- 5’-nucleotidase em larvas de 7 dias, em ambos os tratamentos, agudo e crônico, de uma forma independente da expressão gênica, que por sua vez, não foi alterada. O tratamento prévio com AOPCP, um inibidor da ecto-5’-nucleotidase, não foi capaz de prevenir os danos morfológicos de forma relevante, embora estatisticamente verificou-se uma leve prevenção. O pré-tratamento com dipiridamol, um bloqueador do transporte de adenosina, piorou ainda mais os efeitos causados pelo etanol. Considerando as mudanças que ocorrem nos níveis extracelulares de adenosina após exposições ao etanol e o envolvimento do sistema purinérgico em estágios iniciais do desenvolvimento, nossos resultados sugerem que existe uma ação combinada da enzima ecto-5’-nucleotidase e dos transportadores de nucleosídeos nesta elevação dos níveis extarcelulares de adenosina, com ênfase na inibição dos transportadores de nucleosídeos. Adicionalmente, podemos inferir que há uma correlação entre a elevação dos níveis de adenosina e os defeitos morfológicos característicos da exposição ao etanol. Tais resultados sugerem que o sistema purinérgico é um alvo para os efeitos tóxicos induzidos pelo etanol nas fases iniciais do desenvolvimento.

Made available in DSpace on 2015-06-20T02:07:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000470792-Texto+Completo-0.pdf: 1695613 bytes, checksum: bfea5d57cf26d524d5b14d7d3ac84cdc (MD5) Previous issue date: 2014 / Melanoma is one of the most aggressive malignant tumors, and its incidence has been increasing steadily in recent years. Usually in the early stages, treatment for melanoma is local surgery with reasonable efficiency. However, treatments such as chemotherapies for advanced melanoma have limited benefits, prolonging the patient's life in a few months. Thus the search for more effective therapies for melanoma is necessary. More recent studies suggest that tumor immune response conducted by subtypes of CD4+ T helper cells subsets have an important role in cancer control. According to tumor infiltrating Th17 and Treg cellsand the cytokines they secrete the tumor microenvironment profile may be suggested anti or pro-tumor activities or exerted by these cells. In this study, we investigated the transcriptional markers of CD4+Foxp3+ T cells and CD4+RORγt+ T cells in draining lymph nodes of animals throughout the melanoma tumor growth and evaluate whether the combined action of cisplatin (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) and TLR2 (peptidoglycan) or TLR3 (acid-Polyribosilic Polyribocytidilic) or TLR4 (lipopolysaccharide) agonists, can change these parameters. The animals were injected with melanoma cell line B16F10 and according tumor progression the tumor draining lymph node (TDLN) were excised for analysis of Treg and Th17 cells by flow cytometry. Furthermore, we analyzed the survival of animals treated with combined therapies. We found an increase in the percentage and absolute number of Th17 and Treg cells in TDLN according tumor progression, which was consistent with previous studies. Our results indicate that treatment with cisplatin promotes tumor growth by increasing Treg and Th17 cells. Treatment with CDDP plus TLR2 agonist significantly decreases the percentage of Th17 cells in TDLN. We demonstrated here, that combinated CDDP and TLR3 or TLR4 agonist therapy impairs tumor growth and modulate the frequency of these cells by decreasing the percentage of CD4+Foxp3+ T cells. In addition, this combination also showed a modest increase insurvivalof the melanoma bearing mice. These results showed that TLRs agonists may be used in combination with cisplatin as a potential adjuvant capable impair tumor growth in melanoma bearing mice. / Melanoma é um dos tumores malignos mais agressivos, e sua incidência vem aumentando continuamente nos últimos anos. Geralmente em estágios iniciais, o tratamento para melanoma é local, por cirurgia, com razoável eficácia. Contudo, os tratamentos para melanoma em estágios avançados por quimioterapia têm benefícios limitados, prolongando a vida do paciente em poucos meses. Assim se faz necessária a busca por terapias mais efetivas para melanomas. Estudos mais recentes sugerem que a resposta imunológica tumoral realizada pelos subtipos de células T CD4+ auxiliares possuem papel importante no controle do câncer. Conforme o infiltrado tumoral de células Th17 e Treg e o perfil de citocinas que elas secretam no microambiente tumoral, pode-se sugerir atividades anti ou pró-tumorais exercidas por essas células. Neste estudo, nós investigamos os marcadores transcricionais de células T CD4+Foxp3+ e células T CD4+RORγt+ em linfonodos drenantes de animais com melanoma ao longo do crescimento tumoral e avaliamos se a ação combinada de cisplatina (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) com agonistas de TLR2 (Peptidoglicano) ou TLR3 (ácido Polyribosilic-Polyribocytidilic) ou TLR4 (Lipopolissacarídeo) podem alterar esses parâmetros. Os animais foram injetados com células de melanoma linhagem B16F10 e conforme a progressão tumoral os linfonodos drenantes tumorais (TDLN) foram excisados para análise de células Th17 e Treg por citometria de fluxo. Além disso, analisamos a sobrevida dos animais com a ação combinadas das terapias. Encontramos um aumento na porcentagem e número absoluto de células Th17 e Treg no TDLN conforme a progressão tumoral o qual foi condizente com estudos anteriores. Nossos resultados indicam que o tratamento apenas com cisplatina, promove o crescimento tumoral através do aumento de células Th17 e Treg. O tratamento de cisplatina com agonista de TLR2 diminui consideravelmente a porcentagem de células Th17 no TDLN. Demonstramos aqui que a combinação de terapias utilizando CDDP juntamente com agonistas de TLR3 ou TLR4, prejudica o crescimento tumoral e pode modular a frequência dessas células através da diminuição na porcentagem de células TCD4+Foxp3+. Adicionalmente, essa combinação também mostrou um modesto aumento na sobrevivência dos animais. Esses resultados mostram que agonistas de TLRs podem ser utilizados em combinação com cisplatina como potencial adjuvante capaz de induzir inibir o crescimento tumoral em modelo de melanoma murino.

Made available in DSpace on 2015-07-17T02:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000472323-Texto+Parcial-0.pdf: 121966 bytes, checksum: 2381428855b2dc0b8ef271a500527bef (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: The exposure to early life stress (ELS) has been associated with different psychopathologies in adulthood such as mood- and anxiety-related behaviors. In animal research, the maternal separation paradigm has been widely used to investigate the longterm effects of ELS. Considering the negative effects of ELS on development, evidences suggesting that exercise could attenuate or even reverse such effects are beginning to emerge. This article aimed to investigate the impact of physical exercise on anxiety-like behavior and spatial memory in mice exposed to maternal separation. Method: Litters were assigned to one of 4 groups: The MS animals were subjected to a procedure where pups were separated from their dams daily for 180 minutes, from postnatal days (P) 2 to 15. The exercise protocol was performed at P24 and consisted of one week of habituation to treadmill and 3 weeks of exercise, with 60 min of duration at 10 m/min for 5 days a week. The performance in an open field test was evaluated to assess locomotor activity and anxiety-like behavior. Object recognition was also performed to investigate the effects of MS and exercise on spatial memory. Results: Both maternal separation and exercise increased locomotor activity in the open field. However, anxiety-like behavior was not affected by MS or exercise. In object recognition, all groups presented the same exploratory behavior. However, MS impaired the capability to recognize the new object, suggesting impairment in spatial memory. In time, MS mice that exercised were able to reverse the negative effects of MS, showing a performance similar to the control group (AFR). Taken together, our results suggest that the disruption of the normal development course—here via maternal separation paradigms—is harmful to a good development and may result in cognitive and behavioral difficulties in adulthood. Furthermore, the early engagement in a program of exercise can be effective in reversing the impairments of ELS. / Introdução: A exposição ao estresse no início da vida está associada com diferentes psicopatologias na fase adulta como transtornos de humor e ansiedade. Em pesquisas com modelos animais, o paradigma de separação materna é amplamente utilizado para investigar os efeitos de longo prazo do estresse no início da vida. Considerando os efeitos negativos do estresse no desenvolvimento, começam a surgir evidências que o exercício poderia atenuar ou até mesmo reverter os efeitos deletérios do estresse. Este trabalho se propôs a investigar o impacto do exercício físico no comportamento ansioso e memória espacial de camundongos fêmeas expostas a separação materna.Método: Os filhotes foram expostos a um protocolo de separação materna no qual eram separados da mãe diariamente por 180 minutos, do segundo dia pós natal (P2) ao P15. O protocolo de exercício físico foi realizado no P24, e consiste em uma semana de habituação a esteira elétrica e três semanas de exercício, com 5 sessões por semana de 60 minutos cada, a uma velocidade de 10m/min. O comportamento no teste de campo aberto foi avaliado para investigar a atividade locomotora e o comportamento ansioso. O teste de reconhecimento de objetos foi realizado para investigar o efeito do exercício e da separação materna na memória espacial. Resultados: A separação maternal e o exercício aumentaram a atividade locomotora dos animais no teste de campo aberto. O comportamento ansioso não foi afetado pela separação materna ou exercício. No reconhecimento de objetos, todos os grupos apresentaram o mesmo comportamento exploratório. Entretanto, a separação materna prejudicou a capacidade de reconhecimento do objeto novo, sugerindo um prejuízo na memória espacial. Ainda, os animais separados da mãe que realizaram o protocolo de exercício foram capazes de reverter os efeitos negativos da separação materna, onde mostraram um resultado semelhante ao grupo controle. Conclusões: Nossos resultados sugerem que a interrupção do curso normal do desenvolvimento, aqui realizados através da separação materna é prejudicial para um bom desenvolvimento e pode levar a dificuldades cognitivas e comportamentais na vida adulta. Além disso, a participação precoce em um programa de exercícios físicos pode ser efetivo para reverter os prejuízos causados pelo estresse no início da vida.