Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Automação e Sistemas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T12:55:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340506.pdf: 7060014 bytes, checksum: 5def456b81bf4cf51a73e82062478cdd (MD5) Previous issue date: 2015 / Nesta dissertação, propomos um estudo comparativo da dinâmica e da robustez entre redes de regulação gênica capazes de gerar e manter oscilações com o período próximo de 24 horas - razão pela qual são chamadas de ciclos circadianos.O objetivo é investigar quais mecanismos biológicos estão associados a comportamentos oscilatórios mais robustos e que outras dinâmicas tais redes exibem quando sofrem alterações em seus parâmetros.Existentes na maior parte dos organismos - desde arquebactérias até nós, seres humanos - os ciclos circadianos têm a função de um relógio interno à célula, que os utiliza para antever as mudanças em seu ambiente externo decorrentes dos ciclos de noite e dia e controlar seu comportamento de acordo. Apesar de poder ser reprogramado por meio de informações provenientes do meio externo - como a luz, por exemplo - esse relógio opera de forma autônoma, graças a duas características essenciais: um laço de realimentação negativa em seu controle e um atraso nele embutido. Selecionamos redes estruturalmente diferentes que apresentam ambas essas particularidades e construímos seus modelos de simulação estocástica. De forma concomitante, definimos um modelo booleano para representar com um nível maior de abstração o comportamento esperado, i.e., os ciclos circadianos.Por meio de análise numérica dos modelos estocásticos, buscamos configurações paramétricas para as quais seu comportamento é próximo daquele esperado. Para os casos em que fomos bem sucedidos nesse processo de busca, guiado pelos métodos aqui propostos, utilizamos os valores encontrados como referência e, em torno deles, variamos cada parâmetro individualmente. As variações para as quais os modelos apresentaram dinâmicas não oscilatórias - dinâmicas estas que também podem ser capturadas por modelos booleanos - fornecem um indício de como interferir no funcionamento normal dos relógios circadianos.Por fim, da análise como um todo, observamos que os modelos das redes constituídas por um par de genes ativador-repressor apresentam um comportamento mais próximo de um relógio circadiano e que suas oscilações são mais robustas às variações impostas, se comparadas àquelas formadas por um único gene que se autorreprime; ademais, a presença de um laço de realimentação que requer a formação de complexos entre as proteínas reguladas também contribui neste sentido.<br> / Abstract: In this thesis, we propose a comparative study of the dynamics and robustness among gene regulatory networks that are capable of generating and maintaining oscillations with a period close to 24 hours - hence them being called circadian cycles.The objective is to investigate which biological mechanisms are associated with more robust oscillatory behaviors, and which other dynamics such networks exhibit in face of parametric variations. Present in most organisms - from archaebacteria to us, human beings - circadian cycles have the role of a clock within the cell, which uses them to anticipate changes in its external environment due to day and night cycles and to control its behavior accordingly. Although it can be reprogrammed by means of information coming from the environment - as light, for instance -this clock operates autonomously, driven by two main characteristics: a negative feedback loop in its control, and a delay incorporated to it. We select networks that possess both of these characteristics but are structurally different, and build their stochastic simulation models. Concomitantly, we define a boolean model to represent in a higher abstraction level the expected behavior, i.e., the circadian cycles. Through a numerical analysis of the stochastic models, we seek parametric configurations for which their behavior is close to the expected one. For those cases in which we are successful in this search - guided by the methods proposed here - we utilize the obtained values as references and, in their vicinity, vary each parameter individually. The variations for which the models present non-oscillatory dynamics - also suitable to be represented by boolean models - indicate how to interfere in the normal operation of circadian clocks.Finally, from the overall analysis, we observe that the models of networks comprised of a pair of activating-repressing genes present a behavior closer to a circadian clock, and that their oscillations are more robust to the imposed variations, when compared to those formed by a single self-repressing gene; furthermore, the presence of a feedback loop that requires the formation of complexes among the regulated proteins also contributes in that direction.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:32Z : No. of bitstreams: 1 000847745_20170227.pdf: 184874 bytes, checksum: 77631070ff8a07f3359b1fb5c396f4ac (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-03T11:01:33Z: 000847745_20170227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-03T11:02:41Z : No. of bitstreams: 1 000847745.pdf: 1720621 bytes, checksum: 5da3023273e6a040671b72235040def6 (MD5) / O desenvolvimento vegetal é influenciado por diferentes fatores como os microRNAs (miRNAs) e os fitohormônios, os quaisinteragem numa complexa rede de regulação. Entre os miRNAs, o miRNA156 (miR156) regula os fatores de transcrição SQUAMOSA Promoter-Binding Protein-Like(SPL) afetando diferentes processos do desenvolvimento vegetal. Entre os fitohormônios, os brassinosteróides (BRs) participam na regulação dos eventos associados à fase juvenil da planta. A interação miR156/SPL-BRs não é conhecida, pelo qual, este estudo avaliou a interação destas duas vias durante o desenvolvimento juvenil de Arabidopsis thaliana. Formacaco da raiz principal (RP) e número de raizes laterais (RL) bem como o crescimento do hipocótilo foram utilizados como marcadores desta possivel interação. Foram utilizadas plantas de A. thaliana (Ecotipo Col-0) que expressam constitutivamente o miR156 (miR156-OE), plantas com níveis reduzidos do miR156 (Mimicry-156) e plantas selvagens (WT). Entre os BRs foi escolhido o 24-EpiBrassinolídeo (24-EBL) por ser o BR mais ativo. Plântulas miR156-OE apresentam maior comprimento da RP, maior número de RL e maior sensibilidade aos tratamentos com 24-EBL; fenótipos e comportamento opostosforam observados nas plântulas Mimicry-156. Além disso, plântulas miR156-OE apresentam maior comprimento do hipocótilo, enquanto as plântulas Mimicry-156 apresentam reduzido comprimento. Entre os genes SPLs que respondem ao tratamento com 24-EBL se encontram os SPL2, - 3, -4, -5, e -6. Entre os genes da via dos BRs foram observados alterações na expressão dos genes CPD, BZR1, BES1 e BAS1. Estes dados sugerem que a via genética do miR156/SPL interage com os BRs, e também contribuem para um melhor conhecimento da genética molecular do desenvolvimento de arabidopsis / Plant development is affected by different factors such as micro-RNAs (miRNAs) and phytohormones which interact in a complex regulation network. Among miRNAS, miRNA156 (miR156) regulates SQUAMOSA Promoter- Binding Protein-Like (SPL) transcription factor family affecting different plant development processes. Among phytohormones, brassinosteroids (BRs) participate in regulation of vegetal juvenile processes. miR156/SPL-BRs interaction is unknown whereby the aim of this work was to evaluate the interaction between those two pathways during Arabidopsis thaliana juvenile development. Main root (RP), lateral root number (RL) and hypocotyl length were selected as markers of this interaction. A. thaliana (Col-0 ecotype) overexpressing miR156 (miR156-OE), plants with miR156 reduced activity (Mimicry-156) and wild type (WT) plants were used. 24-Epibrassinolide (24- EBL), the most active BRs, was selected. miR156-OE plants have longer RP length, more RL and 24-EBL sensitivity. Opossite phenotypes were observed on Mimicry-156 plants. Besides, miR156-OE plants have longer hypocotyl length while Mimicry-156 plants have shorter. SPLs genes, SPL2, -3, -4, -5, and -6 responded to 24-EBL treatment. BRs pathway genes, CPD, BZR1, BES1 and BAS1 had changes in gene expression. Our data suggest a interaction between the miR156/SPL and BRs pathways and help to understand the molecular genetics of Arabidopsis development

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:19Z : No. of bitstreams: 1 000849609_20160301.pdf: 669909 bytes, checksum: bd1857e74b2358391e3be46d5ba709b8 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-02T17:37:25Z: 000849609_20160301.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-02T17:38:10Z : No. of bitstreams: 1 000849609.pdf: 2511879 bytes, checksum: 1123636262547a1ad0241984aa7ee9f4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na literatura é demonstrado que altos níveis de expressão de HIF-1α no CM humano estão relacionados à carcinogênese mamária e modificações moleculares decorrentes do processo de vascularização tumoral. Em trabalhos prévios do nosso grupo, demonstramos que a expressão de TGFα encontra-se aumentada nos tratamentos com T3, no entanto essa expressão não ocorre em modelos celulares que não apresentem o receptor de estrógeno ou quando as células são concomitantemente tratadas com antiestrogênio Tamoxifen. O objetivo do presente estudo é determinar a ação do hormônio T3 via extra-nuclear para a expressão dos genes HIF-1α e TGFα em linhagem celular de adenocarcinoma de mama MCF-7. A linhagem celular foi submetida ao tratamento com 10-8M de T3 nos tempos de 10', 30', 1h e 4h, na presença ou ausência dos inibidores Fulvestrant - inibidor de ER, Actinomicina D - inibidor da expressão gênica, Ciclohexamida - inibidor da síntese protéica, e LY294002 - inibidor da via PI3K. O mRNA de HIF-1α e TGFα foi analisado pela técnica de RT-PCR. Para a análise dos dados foi utilizado ANOVA complementado com teste de Tukey e adotado significância mínima de 5%. O presente trabalho confirma que a expressão gênica de HIF-1α e TGFα estão aumentadas na presença T3 nas células MCF-7 e em todos os tempos estudados. Ocorreu uma diminuição na expressão gênica de HIF-1α quando T3 está associado ao inibidor da transcrição gênica, no entanto para o gene TGFα a expressão gênica foi diminuída no tempo de 10', porém, o contrário foi observado a partir de 30' onde não houve diferença estatística com a inibição da transcrição gênica. Além disso, podemos sugerir que a ação de T3 sobre a expressão desses genes ocorre de forma indireta. A ativação da via PI3K pelo T3 é necessária para a modulação desses genes na linhagem estudada / In the literature it has been demonstrated that high levels of expression of HIF-1α in human BC are related to mammary carcinogenesis and molecular changes resulting from the tumor vascularization process. In previous work from our group, we showed that the TGFα expression is increased upon treatments with T3, but this increase does not occur in cellular models devoid of the estrogen receptor or when the cells are concomitantly treated with the antiestrogen compound Tamoxifen. The objective of this study is to determine the extranuclear action of T3 hormone on HIF-1α and TGFα expression in MCF7 breast adenocarcinoma cell line. The cells were subjected to treatment with 10-8M T3 for 10', 30', 1h and 4h in the presence or absence of inhibitors Fulvestrant- ER inhibitor-, Actinomycin D - gene expression inhibitor -, cyclohexamide - protein synthesis inhibitor-, and LY294002 - PI3K inhibitor. The HIF-1α and TGFα mRNA expressions were analyzed by RT-PCR. For data analysis we used ANOVA complemented with Tukey test and adopted minimum 5% significance. The present study confirms that the gene expressions of HIF-1α and TGFα are increased in the presence of T3 in MCF-7 cells at all times studied. T3 represses HIF-1α at all time points assessed after inhibition of transcription, though for TGFα this effect was observed only at 10', after what no significant difference in its expression was detected, with inhibition of transcription. Furthermore, we suggest that the action of T3 on the expression of these genes occurs indirectly and occurs through activation of PI3K pathway, in the cell line studied

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:22Z : No. of bitstreams: 1 000851295_20160101.pdf: 444910 bytes, checksum: 19cd7816190ec81bd428c22f310a5a70 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-04T10:26:49Z: 000851295_20160101.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-04T10:28:39Z : No. of bitstreams: 1 000851295.pdf: 3923793 bytes, checksum: 5062f0d4878e4fd01c2e5449fa419de5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez, caracterizada por hipertensão arterial e proteinúria, identificadas após a 20a semana de gestação. Essa patologia está associada com hiperuricemia, valores séricos elevados de citocinas inflamatórias, ativação de leucócitos e estresse oxidativo. Cristais de ácido úrico podem ativar um complexo intracelular denominado inflamassoma, uma estrutura multi-proteica importante para o processamento e liberação das citocinas inflamatórias interleucina-1 beta (IL-1β) e IL-18. Este estudo investigou, em gestantes portadoras de PE, o estado de ativação de monócitos, tanto endógeno como estimulado por urato monossódico (MSU), por meio da expressão gênica dos inflamassomas NLRP1 e NLRP3, bem como a associação destes complexos com a expressão de citocinas inflamatórias por estas células. Monócitos foram obtidos do sangue periférico de 23 gestantes pré-eclâmpticas e 23 gestantes normotensas (GN) no terceiro trimestre de gestação e de 23 mulheres saudáveis, não grávidas (MNG) e cultivados na presença ou ausência de 50 μg/mL de MSU por 18 h. A presença do inflamassoma foi avaliada por meio da expressão gênica de NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β, IL-18 e TNF-α por RT-qPCR em células não estimuladas (expressão endógena) ou após estímulo com MSU (expressão estimulada). A concentração das citocinas foi avaliada pelo método de ELISA. Os resultados foram analisados por meio de testes não-paramétricos com nível de significância de 5%. Em gestantes pré-eclâmpticas, a expressão gênica de NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β e TNF-α em monócitos estimulados ou não com MSU, foi significativamente maior do que nos grupos GN e MNG. Além disso, observou-se maior expressão endógena de IL-18 em gestantes com PE em comparação às gestantes normotensas, enquanto a expressão estimulada da citocina foi maior no grupo PE em relação aos grupos GN e... / Preeclampsia (PE) is a specific syndrome of pregnancy, characterized by hypertension and proteinuria, identified after the 20th week of pregnancy. This pathology is associated with hyperuricemia, elevated serum levels of inflammatory cytokines, leukocyte activation and oxidative stress. Uric acid crystals may activate an intracellular complex called inflammasome, a multi-protein structure which is important for processing and release of inflammatory cytokines such as interleukin-1 beta (IL-1β) and IL-18. This study investigated, in pregnant women with PE, the state of monocyte activation both endogenous and stimulated with monosodium urate (MSU), by gene expression of NLRP1 and NLRP3 inflammassomes as well as their association with inflammatory cytokines expression by these cells. Monocytes were obtained from peripheral blood of 23 preeclamptic pregnant women, 23 normotensive pregnant women (NT) in the third trimester of pregnancy and 23 healthy non-pregnant women (NP), and cultured in the presence or absence of 50 μg/mL of MSU for 18 h. Inflammasome activation was evaluated by the gene expression of NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β, IL-18 and TNF-α by RT-qPCR in unstimulated monocytes (endogenous expression), or after cell stimulation with MSU (stimulated expression). The concentration of cytokines was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results were analyzed using non-parametric tests at 5% significance level. In preeclamptic pregnant women, gene expression of NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β and TNF-α by monocytes, stimulated or not with MSU, was significantly higher than in NT and NP groups. In addition, there was a higher endogenous expression of IL-18 in pregnant women with PE compared with NT pregnant women, while the stimulated cytokine expression was higher in the PE group than in the other two groups studied. Stimulation of monocytes from preeclamptic and non-pregnant women with MSU induced increased ... / FAPESP: 2012/21287-3

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:39Z : No. of bitstreams: 1 000853880.pdf: 1851862 bytes, checksum: 828711480dc6e6cc9c37d4388711ad29 (MD5) / A doença de Jorge Lobo é uma infecção crônica, que afeta a pele e tecidos subcutâneos, cujo agente etiológico é o fungo Lacazia loboi. Dependendo da localização das lesões, pode ser classificada como localizada, multifocal ou disseminada e no que diz respeito aos aspectos imunológicos, estudos relatam predominância do perfil Th2 nos pacientes, além de maior frequência de células positivas para TGF-β e IL-10 no infiltrado inflamatório presente nas lesões. Porém, com a descoberta de outros perfis como Treg e Th17, outras subpopulações podem estar envolvidas na imunopatogênese da doença. Diante disso, com o intuito de explicar a imunorregulação entre estas subpopulações, este estudo teve por objetivo avaliar o papel das células Treg, Th1, Th2 e Th17, por meio da expressão de mRNA. No total, 114 amostras [pacientes portadores de lesão única (55), pacientes portadores de lesões múltiplas (47) e controles saudáveis (12)] foram avaliadas quanto a expressão gênica de alvos relacionados aos perfis Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) e T regulatório (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IL-10). Os resultados obtidos neste estudo demonstraram expressão significativamente maior de TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet e IL-17F, e significativamente menor de GATA3 e IL-4 em todos os portadores da doença avaliados. Adicionalmente, ao avaliar a expressão entre os grupos de lesão única (forma localizada) e lesões múltiplas (formas multifocais e disseminadas), TGF-β1 e IL-5 apresentaram expressão significativamente maior nos pacientes com lesão única e múltiplas, respectivamente. Em resumo, constatamos que a ação desta população está relacionada à capacidade de inibir a resposta antifúngica modulando principalmente a expressão de citocinas envolvidas na proteção, tais como, IFN-γ e IL-17F / Jorge Lobo's disease is a chronic disease that affect the skin and subcutaneous tissues, whose etiologic agent is the fungi Lacazia loboi. Depending on localization of lesions, it can be classified as localized, multifocal or disseminated. In respect to immunologic aspects, previous studies show the predominance of Th2 profile in patients, in addition to more frequent TGF-β and IL-10 positive cells in the inflammatory infiltrate present in lesions. However, the increased understanding about T regulatory (Treg) and Th17profiles suggest that other subpopulation of cells can be involved in the immunopathogenesis of Jorge Lobo's disease. Aiming at explaining the immunoregulation caused by these subpopulations, this study had as objective to evaluate the role of Treg, Th1, Th2 and Th17, through mRNA expression. A total of 114 samples [single lesion patients (55), multiple lesion patients (47) and healthy controls (12)] were evaluated by gene expression of targets associated to Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) and T regulatory (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IKZF2, IL-10) profiles. The results obtained in this study demonstrated significant higher expression of TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet and IL-17F, and significant lower expression of GATA3 and IL-4 in all patients. Additionally, the expression comparing single lesions (localized form) and multiple lesions (multifocal and disseminated forms) patients showed significant higher levels of TGF-β1 and IL-5, respectively, in single and multiple lesions patients. In summary, the role of the Treg population is associated with inhibition of the antifungal activity, thus modulating mainly the expression of cytokines associated protection against fungal infection, such as IFN-γ and IL-17F

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:32:39Z : No. of bitstreams: 1 000855647.pdf: 1653500 bytes, checksum: 8d21ecf643fe2c60ba5500eb209ac29a (MD5) / O Sarcoma Histiocítico (SH) é uma neoplasia maligna caracterizada pela proliferação de células grandes que possuem aspecto morfológico e imunofenotípico semelhantes ao histiócito maduro tecidual. É uma neoplasia rara, perfazendo menos que 1% dos Linfomas Não-Hodgkin. Tal raridade pode ser explicada pela dificuldade de sua caracterização diagnóstica e morfológica, confundindo-se com outras neoplasias malignas pleomórficas. Os objetivos do presente estudo são: avaliar alterações no padrão de ganhos e perdas genômicas pela técnica de Hibridação Genômica Comparativa (CGH-array), avaliação do perfil de MicroRNA (miRNA), apontar os principais critérios morfológicos e marcadores imunoistoquímicos (IMH) que venham a definir esta entidade e identificar quais entidades que erroneamente podem levar a subdiagnostico.Para tanto, foram revisados 7.600 laudos anatomopatológicos e, destes, foram selecionados 47 casos possíveis de SH, com apresentação nodal. Somando-se a estes, quatro casos sabidamente com diagnóstico de SH foram incluídos na análise. Foram avaliados 12 critérios morfológicos e 05 marcadores IMH. Dos 47 casos, foram localizados 07 SH, cujo diagnóstico inicial foi de neoplasia indiferenciada metastática (carcinoma indiferenciado) ou melanoma metastático. Os marcadores IMH que se mostraram mais eficientes para complementação diagnóstica foram CD163 e CD68. A avaliação do perfil de 377 miRNAs demonstrou clusterização de 51 miRNA, quando comparado ao controle, sendo 44 hipoexpresssos e 07 hiperexpressos, sendo os mais relevantes: miR-10b-5p, miR-455-5p e miR-19 (hiperexpressos); miR-486-5p, miR-92a, miR-15b-5p (hiporegulados). Tais miRNA estão envolvidos nas vias da apoptose, crescimento e proliferação celular. Os principais genes envolvidos na patogenia e candidatos a validação com futuros estudos são: ERBB2, TGFB1,TNF(ativados) e TP53 e PD98059 (inibidos).Tais genes podem corresponder a futuros... / Histiocytic sarcoma (HS) is a malignant neoplasm characterized by the proliferation of large cells that have morphological and immunophenotypic features similar to mature tissue histiocytes. It is a rare neoplasm, accounting for less than 1% of non-Hodgkin lymphomas. This rarity is partly explained by the difficulties in its diagnostic and morphological characterization, since it is confused with other pleomorphic malignant neoplasms. The objectives of this study were to evaluate changes in genomic gains and losses using the comparative genomic hybridization technique (CGH-array), microRNA profile (miRNA) evaluation, determine the principal morphological criteria and immunohistochemical markers (IMH) that could define this entity, and identify entities that can mistakenly lead to underdiagnosis. To achieve this, 7,600 pathology reports were reviewed and, of these, 47 possible cases of HS with nodal presentation were selected. Four cases with an established diagnosis of HS were also included in the analysis. Twelve morphological criteria and 5 IMH markers were evaluated. Among the 47 cases, 7 cases of HS were identified that had initially been diagnosed as undifferentiated metastatic neoplasm (undifferentiated carcinoma) or metastatic melanoma. The IMH markers that were most efficient for complementary diagnosis were CD163 and CD68. Evaluation of the profiles of 377 miRNAs showed clustering of 51 miRNA compared with the control; 44 were hypoexpressed and 7 were hyperexpressed and the most relevant were: miR-486-5p, miR-92a, miR-15b-5p (hyporegulated); and miR-10b-5p, miR-455-5p and miR-19 (hyperexpressed). These miRNA are involved in apoptosis, cell growth and proliferation pathways. The main genes involved in pathogenesis and candidates for validation in future studies are: ERBB2, TGFB1, TNF (activated); and TP53 and PD98059 (inhibited). These genes may represent future therapeutic targets. The CGH-array proved to be unfeasible in ...

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-17. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:21Z : No. of bitstreams: 1 000857883_20170806.pdf: 769729 bytes, checksum: 1dcde090f604e4d1d41fd32296602f3d (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-07T14:09:12Z: 000857883_20170806.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-07T14:10:16Z : No. of bitstreams: 1 000857883.pdf: 2232120 bytes, checksum: 69fcec972871be7dbe70a720530b6d84 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / FAPESP: 13/24606-5

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-20. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:01:21Z : No. of bitstreams: 1 000860377.pdf: 2435020 bytes, checksum: 6715f67910c92671c2473b587aa60da5 (MD5) / O tumor venéreo transmissível canino (CTVT) é um câncer transmissível que propaga-se, naturalmente, entre os cães pela transferência alogênica de células tumorais, principalmente, durante o coito. Trata-se da mais antiga linhagem tumoral conhecida na natureza e uma de suas características marcantes é a habilidade de se desenvolver e se evadir da rejeição imunológica, como enxerto alogênico, apesar da estrita e contínua vigilância do sistema imunológico. Há a hipótese de que as células do CTVT não expressam MHC-II, como um mecanismo de escape à detecção imune, e que a positividade detectada em muitas amostras tumorais possa ser atribuída à infiltração de células do hospedeiro no sítio do tumor. Objetivou-se avaliar a expressão gênica e proteica e a caracterização genotípica do loco DLADQA-1 (MHC-II) em tumores venéreos transmissíveis de ocorrência espontânea em cães. Adicionalmente, detectar a interação entre anticorpos séricos e antígenos tumorais específicos do CTVT. Para tanto, foram incluídos neste estudo 20 cães provenientes de São José do Rio Preto, São Paulo, Brasil, com CTVT de ocorrência natural. As amostras tumorais foram coletadas antes do tratamento quimioterápico (M1) e três semanas após o início da quimioterapia (M2). A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de qPCR e de expressão proteica de CD3, CD79, MAC387, Ki67 e MHC-II, pelo método de imuno-histoquímica. Foi realizado sequenciamento por capilaridade para caracterização genotípica e estudo dos antígenos tumorais pela técnica de Western Blotting. Amostras de CTVT e de seus hospedeiros provenientes de outros países foram empregados para estudos comparativos. Foi observada diferença significativa de células imunomarcadas para MHC-II e CD3 entre M1 e M2 detectando-se maior expressão em M2. Não houve expressão gênica de DLADQA-1 em nenhuma amostra de CTVT em M1 e M2. O elevado grau de... / The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a transmissible cancer that is spread between dogs by the allogeneic transfer of living cancer cells during coitus. It is the oldest cancer lineage known in nature and one of the most remarkable features of CTVT is its ability to develop and evade the immune rejection, as an allogeneic graft, despite the strict and continuous surveillance of the immune system. It has been hypothesized that CTVT cells do not express MHC-II as an escape mechanism to immune detection, and MHC-II positivity detected in tumor samples can be attributed to infiltrating host cell at the tumor site. The aims of this study were: evaluate gene and protein expression and genotypic characterization of DLADQA-1 locus (MHC-II) in spontaneous transmissible venereal tumours in dogs. Additionally, to detect the interaction between serum antibodies and specific tumor antigens of CTVT. For this, 20 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, Brazil with naturally occurring CTVT were included and samples were collected before chemotherapy (M1) and three weeks after starting chemotherapy (M2). The gene expression analysis was performed by qPCR method and protein expression of CD3, CD79, MAC387, Ki67 and MHC-II by immunohistochemistry method. Sequencing was performed by capillary method and the study of tumor antigens by the Western Blotting technique. CTVT samples and their hosts from other countries have been used for comparative studies. Significant differences were observed in MHC-II and CD3 immunostained cells between M1 and M2 with higher expression in M2. There was no gene expression of DLADQA-1 in any sample of CTVT in M1 and M2. The genotypic similarity between tumor samples, which differ from their respective hosts, is consistent with a clonal origin of this tumour. There was no significant difference between the genotypes of hosts and control dogs. The detection of two protein bands in different CTVT from Brazil ...

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study was designed to investigate the role played by AngII receptors (AT1 and AT2) in follicle development and maturation of bovine oocytes. Receptor expression was assessed by the RT-PCR technique using preantral (secondary), 3-8, 6-7, and 12mm follicles. Secondary preantral follicles did not express AngII receptors. Antral follicles expressed AngII receptors distinctly. AT1 receptors were expressed in teca (TC) and granulose cells (GC) from follicles greater than 6mm. AT2 receptors were expressed in TC and GC from follicles >6mm. AT2 receptors were expressed in TC in follicles >3mm. Only follicles >12mm expressed AT2 receptors in GC. The investigation of oocyte maturation was evaluated in cumulus-oocyte complexes (COCs) from 2-8mm follicles obtained in slaughterhouses. The treatments were carried out using the co-culture of 20 COCs with 8 follicle hemi-sections for 12h in 20μL TCM199 plus 1mg/mL polyvinyl alcohol (negative control group: CON(-)), supplemented with AngII (AngII group), with AngII plus Losartan (LOS group), and with AngII plus PD123319 (PD123319 group). For the positive control group (CON(+)), COCs were cultured without follicle hemi-sections. Oocytes were analyzed for maturation stage in germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVB), and metaphase I (MI). The oocyte rate kept in GV observed in the groups cultured with receptor inhibitors AT1 (LOS: 65.5%, 78/119) and AT2 (PD123319: 54.6%, 53/97) was greater (p<0.05) than that of CON(+) (10.8%, 12/111) and AngII (22.7%, 25/110) groups, but no difference was seen as compared with CON(-) (50%, 53/106). In the MI analysis, the oocyte percentage that reached this stage in groups CON(+) and AngII (62.1%, 69/111 and 52.2%, 58/111, respectively) was greater (p<0.05) than that seen for CON(-), LOS and PD123319 (13.2%, 14/106; 0.8%, 1/119; 1.03%, 1/97, respectively). TC and GC expressed AngII receptors (AT1 and/or AT2) before antrum formation, according to follicle size. Both AT1 and AT2 receptors take part in the resumption and progression of meiosis in bovine oocytes. / O objetivo do presente trabalho foi investigar a participação de receptores de AngII (AT1 e AT2) no desenvolvimento folicular e maturação de oócitos bovinos. A expressão dos receptores foi avaliada, por meio de RT-PCR em folículos pré-antrais (secundários) e folículos antrais de 3-4mm, 6-7mm e >12mm de diâmetro. Para verificação da maturação de oócitos foram utilizados CCOs de folículos com diâmetro entre 2-8mm obtidos em matadouro. Os tratamentos foram conduzidos com o co-cultivo, por 12h, de 20 CCOs com oito metades foliculares em 200μl de TCM-199 acrescido de 1mg/ml de álcool polivinílico (grupo controle negativo (CON(-)), suplementados com AngII (grupo AngII), AngII mais Losartan (grupo LOS) e AngII mais PD123319 (grupo PD123319). No controle positivo (CON(+)), os CCOs foram cultivados sem metades foliculares. Os oócitos foram analisados quanto a fase de maturação em VG, RVG e MI. Folículos pré-antrais secundários não expressaram receptores para AngII. Folículos antrais expressaram receptores para AngII de forma diferenciada. Receptores AT1 foram expressos em CT e CG em folículos a partir de 6 mm. Receptores AT2 foram expressos em CT a partir de folículos de 3mm, e somente folículos maiores que 12mm expressaram receptores AT2 nas CG. O percentual de oócitos mantidos em VG, observados nos grupos submetidos ao cultivo com inibidores dos receptores AT1 (LOS, 65,5%; 78/119) e AT2 (PD123319, 54,6%; 53/97) foi superior (p<0,05) ao observado nos grupos CON(+) (10,8%; 12/111) e AngII (22,7%; 25/110), porém não houve diferença com relação ao grupo CON(-) (50%; 53/106). Na avaliação da MI, o percentual de oócitos que atingiram esse estádio nos grupos CON(+) e AngII (62,1%; 69/111 e 52,2%; 58/111, respectivamente) foi superior (p<0,05) aos grupos CON(-), LOS e PD123319 (13,2%; 14/106, 0,8%; 1/119 e 1,03%; 1/97, respectivamente). CT e CG expressam receptores para AngII (AT1 e/ou AT2) a partir da formação do antro, de acordo com o tamanho folicular. Ambos os receptores AT1 e AT2 participam do reinício e progressão da meiose de oócitos bovinos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:54:03Z : No. of bitstreams: 1 lopes_l_me_jabo.pdf: 881807 bytes, checksum: 2dc7cf9d5c0a6984afa2a7eba02ad327 (MD5) / Atualmente, a cana-de-açúcar (Saccharum spp.) tem sido ameaçada pela infestação por cigarrinha-das-raízes (Mahanarva fimbriolata) e a preocupação com efeitos danosos por ela ocasionados são crescentes, especialmente em função do aumento de condições ambientais favoráveis ao desenvolvimento dessa praga, devido ao sistema de colheita em expansão, em que não há a queima da palhada. A fim de identificar Fragmentos Diferencialmente Expressos (FDE) em raízes de cana-de-açúcar infestadas por ninfas de cigarrinha, foi realizada a técnica de cDNA-AFLP. Assim, foram cultivadas e posteriormente infestadas, plantas de uma variedade suscetível (SP80-1816) e de uma variedade resistente (“menos infestada”) (SP83-5073). As amostras das raízes foram coletadas e congeladas a cada 1, 2, 7 e 14 dias de infestação. A posterior análise através da técnica de cDNA-AFLP, a partir de 3 combinações de oligonucleotídeos, permitiu observar 21 FDE, os quais foram sequenciados e revelaram similaridades com proteínas envolvidas em diferentes atividades, como a transposição de DNA, o transporte de aminoácidos e a transcrição gênica, além de outras proteínas sem similaridade encontrada. Os alinhamentos apresentaram similaridades para os genes expressos e é possível considerar que o caráter de resistência esteja relacionado a uma ação conjunta de diversos genes, além disso, alguns dos FDE obtidos não apresentam similaridades e podem exercer importante papel no mecanismo de resistência. / Currently, the sugarcane (Saccharum spp.) has been threatened by the infestation of froghopper (Mahanarva fimbriolata) and the concern about the harmful effects caused by it are growing, especially due to the increase of environmental conditions favorable the development of this pest, due to the expanding harvest system, in which there is no burning of stubble. In order to identify Differentiall Fragments Expression (FDE) in roots of sugarcane infested by froghopper nymphs was performed cDNA-AFLP technique. Thus, were grown and subsequently infested plants of a susceptible variety (SP80-1816) and a resistant variety (least infested) (SP83-5073). Samples of roots were collected and frozen every 1, 2, 7 and 14 days of infestation. The subsequent analysis by cDNA-AFLP technique from three combinations of primers allowed the observation FDE 21 which were sequenced and revealed similarities to proteins involved in various activities, such as transposition of DNA, amino acid transport and gene transcription, in addition to other proteins without similarity found. The alignments showed similarities to genes expressed and it is possible to consider the character of resistance is related to a joint action of several genes, in addition, some of the FDE obtained do not show similarities and may have an important role in the mechanism of resistance.