Los portadores lipídicos nanoestructurados (NLCs) son sistemas organizados actualmente estudiados para el transporte de fármacos. Estos sistemas están constituidos por matrices lipídicas a escala nanométrica, sólidas a temperaturas fisiológicas y estabilizadas por la presencia de tensoactivos. Así, sus componentes generales incluyen lípidos y agentes tensoactivos. El objetivo de la presente Tesis es investigar la obtención de sistemas de transporte de fármacos basados en NLCs a partir de reactivos seguros. Además, se pretende estudiar su potencial como sistema de transporte del fármaco piroxicam (PX), presentando así el sistema portador como una alternativa para la administración de principios activos que involucren efectos adversos relacionados con su incorporación directa. A su vez, el trabajo apunta al desarrollo de métodos analíticos para el estudio de los principios activos que son vehiculizados en este tipo de sistemas portadores. Para la obtención de los NLCs se propuso un método simple, de baja energía y sin un uso considerable de solventes orgánicos. El sistema obtenido se caracterizó para corroborar la presencia de un sistema coloidal estable. Para esto se utilizaron técnicas experimentales, como dispersión dinámica de luz (DLS), microelectroforesis de láser Doppler y microscopía electrónica de transmisión (TEM). Los parámetros resultantes fueron satisfactorios, obteniéndose nanopartículas monodispersas, de morfología esférica, estables y con tamaños de partícula menores de 200 nm. Se incorporó el PX y se volvió a caracterizar el sistema. Se observó que la incorporación del principio activo no modificó sustancialmente las características del sistema portador. Se llevaron a cabo estudios por espectroscopia de absorción UV-visible y de fluorescencia tanto del fármaco como del sistema portador, lográndose corroborar la incorporación de PX en los NLCs y establecer que, desde el primer día de preparadas las nanopartículas, existe un reparto del PX entre la fase acuosa externa y el interior de los portadores. Lo cual se vio posteriormente reflejado en la eficiencia de encapsulamiento del sistema. Se desarrollaron dos nuevos métodos analíticos: uno de ellos, basado en electroforesis capilar, que permitió determinar el porcentaje de encapsulamiento de fármaco en sistemas portadores y el otro, basado en voltametría de onda cuadrada (VOC), el cual posibilitó la obtención de los perfiles de liberación del fármaco. Se llevó a cabo el estudio de liberación in vitro del PX desde el sistema portador mediante VOC obteniéndose el correspondiente perfil de liberación. A su vez, los resultados obtenidos por VOC permitieron conocer la eficiencia de encapsulamiento del sistema. Los portadores exhibieron una fase inicial de liberación lenta de fármaco seguida por una liberación sostenida, dando como resultado un perfil aproximadamente sigmoideo. El sistema mostró una liberación del 60% del principio activo incorporado y una eficiencia de encapsulamiento del 75%. El tipo de patrón de liberación lenta y prolongada, es deseable para la mayoría de las aplicaciones de sistemas de administración de fármacos. La acción a largo plazo observada permite que la formulación sea adecuada para aplicaciones del tipo tópicas. El perfil de liberación permitió establecer también que el sistema obtenido presenta una estructura tipo II, la cual conduce a una difusión lenta del fármaco desde la matriz. La última etapa del presente trabajo de Tesis consistió en proponer una formulación farmacéutica apta para la administración del fármaco. En función de las propiedades del PX se desarrolló un gel tópico apuntando a su aplicación transdérmica. La tesis concluyó con el estudio de la eficiencia del gel como sistema de soporte de los NLCs. / The nanostructured lipid carriers (NLCs) are organized systems currently studied for drugs transportation. These systems consist of nanoscale lipid matrices, solid at physiological temperatures and stabilized by the presence of surfactants. Thus, they are basically composed by lipids and surfactants. The objective of this Thesis was focused on obtaining drug delivery systems based on NLCs from safe reagents. Particularly, the designed delivery systems were intended for carrying active substances that present adverse effects related to its direct incorporation, such as the drug piroxicam (PX). This research also aimed at developing analytical methods able to determine the active principles in this type of carrier systems. In order to obtain the NLCs, a simple, low-energy method with minimal use of organic solvents was proposed. The system obtained was characterized to corroborate the presence of a stable colloidal system. For this purpose, experimental techniques, such as dynamic light scattering (DLS), Doppler laser microelectrophoresis and transmission electron microscopy (TEM) were used. The parameters were satisfactory and consistent with monodisperse spherical nanoparticles, in a stable suspension, with particle size lower than 200 nm. The PX was successfully incorporated in the NLCs and the system was characterized again. In this regard, the incorporation of the active principle did not substantially modify the characteristics of the system. Also, an exhaustive spectroscopic study using UV-visible and fluorescence was carried out for both PX and the PX-loaded NLC system in order to understand how the PX was incorporated in the delivery system. The incorporation of PX in the NLCs was confirmed and was also possible to establish that there is a distribution of the PX between the external aqueous phase and interior of the NLCs from the first day. This fact was related with the system entrapment efficiency. Two new analytical methods were developed: one of them, based on capillary electrophoresis, made it possible to determine the percentage of drug encapsulation in carrier systems and the other, based on square wave voltammetry (VOC), which allowed the drug release profiles to be obtained. In vitro release profile of PX was studied by VOC. The new method based on VOC measurements made it possible to know the entrapment efficiency of the system. The NLCs exhibited an initial phase of slow drug release followed by a sustained release, resulting in an approximately sigmoidal profile. The system showed a 60% release of the incorporated active principle and an entrapment efficiency of 75%. This type of slow and prolonged release pattern is desirable for most applications of drug delivery systems. The observed long-term action allows the formulation to be suitable for topical applications. The shape of the release profile was in accordance with a type II structure of the system, which led to a drug slow diffusion from the matrix. The last stage of the current Thesis was to propose a suitable pharmaceutical formulation for PX-NLCs administration. To do this, a topical gel for dermal application was developed. The Thesis concluded with the study of the gel efficiency as a support system for the NLCs.

A ocorrência de produtos farmacêuticos no ambiente aquático pode causar efeitos adversos à saúde humana e às comunidades aquáticas. Propranolol, -bloqueador não seletivo, é largamente prescrito no tratamento de doenças ligadas ao coração como angina e hipertensão. Simples medidas de efeito, como a CL50, não fornece informações sobre o impacto de contaminantes em populações. A taxa de crescimento populacional (r) é uma ferramenta importante para estudos que objetiva determinar os efeitos em nível populacional. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de estabelecer a toxicidade aguda e crônica de Propranolol para a espécie autóctone Ceriodaphnia silvestrii (CLADOCERA, CRUSTACEA) com ênfase em efeitos nas populações. Os valores determinados para CE(I)50;48H foram de 2,87 e 2,63 mg.L-1 para água destilada e natural reconstituídas, respectivamente. Para a toxicidade crônica, os valores obtidos para CENO e CEO encontraram-se na faixa de 0,62-1,25 e 1,25-2,50 mg.L-1 para água natural reconstituída. Como critérios de aceitabilidade para os ensaios crônicos populacionais foram estabelecidos para o controle 73 neonatas (±10 DP) e taxa intrínseca de aumento natural de 0,596 (±0,13 DP) em sete dias de experimento com água natural reconstituída. No teste de sensibilidade, os valores obtidos para CENO e CEO populacional foram 0,275 e 0,723 g.L-1 de NaCl, respectivamente, semelhante aos valores nos ensaios crônicos individuais. Para Propranolol, as análises indicaram que os ensaios populacionais foram iguais ou mais sensíveis que a exposição individual. Os resultados nos ensaios crônicos populacionais e com indivíduos encontraram-se entre 1,25 (CENO) e 2,50 mg.L-1 (CEO), respectivamente. Os endpoints populacionais parecem ser medidas mais sensíveis. Comparando-se os valores de ICP para populações e indivíduos, observa-se que as populações foram mais sensíveis na ordem de 70%. / The pharmaceutical products occurrence in the aquatic environment could cause adverse effects on the human health and aquatic communities. Propranolol, non selective -blocker, is widely prescribed for the treatment of heart related diseases as angina and hypertension. Simple effect measures, like LC50, dont provide information about contaminant impacts in populations. The intrinsic population growth rate (r) is an important tool for doing research on determining the effects in population level. This work has been developed with the goal to establish the Propranolol acute and chronic toxicity to the autochthon specie Ceriodaphnia silvestrii (CLADOCERA, CRUSTACEA) with emphasis on the effects on the populations. The determined values to EC(I)50;48H were 2.87 and 2.63 mg.L-1 to distillated and natural reconstituted waters, respectively. To the chronic toxicity, the obtained values to NOEC and OEC ranged from 0.62 to 1.25 and 1.25 to 2.50 mg.L-1. As acceptance criteria to the chronic populational assays 73 neonates (±10 SD) and an intrinsic rate of natural increase of 0.596 (±0,13 SD) were established to its control for seven days of experiment with reconstituted natural water. In the sensitivity test, the obtained values to populations NOEC and OEC were 0.275 and 0.723 g.L-1 of NaCl, respectively, similar to the values in the individual chronic assays. To propranolol, the analyses indicated that the populational assays were similar or more sensitive than the individual exposition. The results in the chronic populational assays and with individuals were between 1.25 (NOEC) and 2.50 mg.L-1 (LOEC), respectively. The populational endpoints seem to be more sensitive measure. Comparing the ICP values to both populations and individuals, it is observed that the populations were more sensitive of the order of 70%.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-05Bitstream added on 2014-06-13T20:23:04Z : No. of bitstreams: 1 ferrari_pc_dr_arafcf.pdf: 1233795 bytes, checksum: a7486ae71eacda126f26925b58c89a78 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O desenvolvimento de formas farmacêuticas administradas pela via oral e utilizadas para liberação colônica de fármacos, visando o tratamento local de doenças inflamatórias intestinais, tem sido bastante estudado. Com essa finalidade, no presente trabalho foram preparados pellets de metronidazol (MT), constituídos ou não de quitosana (QS) e revestidos com QS, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCP), Kollicoat MAE® e Kollicoat SR®. Os pellets foram preparados por extrusão-esferonização e revestidos em leito fluidizado. Três delineamentos experimentais foram planejados com a finalidade de se definir as formulações a serem preparadas e analisadas. Os pellets e seus constituintes foram analisados por espectrofotometria no IV e por análise térmica, para verificação de possíveis interações entre o fármaco e o excipiente. A morfologia dos pellets foi analisada através de estereoscópio e por microscopia eletrônica de varredura. Outras análises incluíram área superficial, granulometria, densidade e grau de intumescimento. Também foi realizada a liberação in vitro do fármaco durante 8 horas, utilizando-se os Aparatos I e III da Farmacopéia Americana, e análise de absorção intestinal pela técnica do saco intestinal invertido. As análises térmica e espectrofotométrica por IV revelaram que não há interações físico-químicas entre o MT e os demais componentes dos pellets. A análise morfológica revelou que os pellets são esféricos; as análises de área superficial e microscopia eletrônica de varredura mostraram que o processo de revestimento não foi eficaz para algumas amostras, pois apresentaram poros em suas estruturas. Os pellets também foram analisados quanto à capacidade de intumescimento, demonstrando que a presença de QS acentua o grau de intumescimento das amostras... / The development of oral administered dosage forms used for colonic drug delivery aiming the local treatment of intestinal inflammatory diseases has been well studied. Thus, in the present work metronidazol (MT)-containing pellets, constituted or not by chitosan (QS) and covered with QS, hydroxypropyl methylcellulose phtalate (HPMCP), Kollicoat MAE® and Kollicoat SR® were developed. The pellets were prepared by extrusion-spheronization and covered on fluidized bed. Three experimental designs were used to define the formulations to be prepared and analyzed. The pellets and their constituents were analyzed by IR spectrophotometry and thermal analysis, in order to assess possible interactions between the drug and the excipients. Pellets’ morphology was verified under a stereoscope and by means of scanning electronic microscopy. Other analyses included surface area, size distribution, density and degree of swelling. In vitro drug release, using Apparatuses I and III of United States Pharmacopoeia, and the assay of intestinal absorption by the everted gut sac technique were also carried out. Both thermal and IR spectrophotometric analyses revealed no physicochemical interactions between MT and the other constituents of the pellets. Morphological analyses showed that the pellets have spherical shape. The covering process was not efficient for some samples, since it was possible to identify pores on their surfaces, as assessed by surface area determination and scanning electronic microscopy. The presence of QS increased the swelling ratio. The in vitro ability of the pellets to reach colonic conditions, after resisting against gastric and enteric environments was also demonstrated. Firstly, it was observed that most of the drug was released in gastric medium from uncovered pellets or from those covered with QS or HPMCP, mainly due to the defects observed in such coatings... (Complete abstract click electronic access below)

A ocorrência de produtos farmacêuticos no ambiente aquático pode causar efeitos adversos à saúde humana e às comunidades aquáticas. Propranolol, -bloqueador não seletivo, é largamente prescrito no tratamento de doenças ligadas ao coração como angina e hipertensão. Simples medidas de efeito, como a CL50, não fornece informações sobre o impacto de contaminantes em populações. A taxa de crescimento populacional (r) é uma ferramenta importante para estudos que objetiva determinar os efeitos em nível populacional. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de estabelecer a toxicidade aguda e crônica de Propranolol para a espécie autóctone Ceriodaphnia silvestrii (CLADOCERA, CRUSTACEA) com ênfase em efeitos nas populações. Os valores determinados para CE(I)50;48H foram de 2,87 e 2,63 mg.L-1 para água destilada e natural reconstituídas, respectivamente. Para a toxicidade crônica, os valores obtidos para CENO e CEO encontraram-se na faixa de 0,62-1,25 e 1,25-2,50 mg.L-1 para água natural reconstituída. Como critérios de aceitabilidade para os ensaios crônicos populacionais foram estabelecidos para o controle 73 neonatas (±10 DP) e taxa intrínseca de aumento natural de 0,596 (±0,13 DP) em sete dias de experimento com água natural reconstituída. No teste de sensibilidade, os valores obtidos para CENO e CEO populacional foram 0,275 e 0,723 g.L-1 de NaCl, respectivamente, semelhante aos valores nos ensaios crônicos individuais. Para Propranolol, as análises indicaram que os ensaios populacionais foram iguais ou mais sensíveis que a exposição individual. Os resultados nos ensaios crônicos populacionais e com indivíduos encontraram-se entre 1,25 (CENO) e 2,50 mg.L-1 (CEO), respectivamente. Os endpoints populacionais parecem ser medidas mais sensíveis. Comparando-se os valores de ICP para populações e indivíduos, observa-se que as populações foram mais sensíveis na ordem de 70%. / The pharmaceutical products occurrence in the aquatic environment could cause adverse effects on the human health and aquatic communities. Propranolol, non selective -blocker, is widely prescribed for the treatment of heart related diseases as angina and hypertension. Simple effect measures, like LC50, dont provide information about contaminant impacts in populations. The intrinsic population growth rate (r) is an important tool for doing research on determining the effects in population level. This work has been developed with the goal to establish the Propranolol acute and chronic toxicity to the autochthon specie Ceriodaphnia silvestrii (CLADOCERA, CRUSTACEA) with emphasis on the effects on the populations. The determined values to EC(I)50;48H were 2.87 and 2.63 mg.L-1 to distillated and natural reconstituted waters, respectively. To the chronic toxicity, the obtained values to NOEC and OEC ranged from 0.62 to 1.25 and 1.25 to 2.50 mg.L-1. As acceptance criteria to the chronic populational assays 73 neonates (±10 SD) and an intrinsic rate of natural increase of 0.596 (±0,13 SD) were established to its control for seven days of experiment with reconstituted natural water. In the sensitivity test, the obtained values to populations NOEC and OEC were 0.275 and 0.723 g.L-1 of NaCl, respectively, similar to the values in the individual chronic assays. To propranolol, the analyses indicated that the populational assays were similar or more sensitive than the individual exposition. The results in the chronic populational assays and with individuals were between 1.25 (NOEC) and 2.50 mg.L-1 (LOEC), respectively. The populational endpoints seem to be more sensitive measure. Comparing the ICP values to both populations and individuals, it is observed that the populations were more sensitive of the order of 70%.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-31Bitstream added on 2014-08-13T18:01:10Z : No. of bitstreams: 1 000736566_20150130.pdf: 244976 bytes, checksum: 4db88f6cb248d427923c8451ba01cd63 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-04T11:39:27Z: 000736566_20150130.pdf,Bitstream added on 2015-02-04T11:40:12Z : No. of bitstreams: 1 000736566.pdf: 4569372 bytes, checksum: d17a9574b6a943f990f595b3489ec244 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A alta amilose, um amido modificado com alto teor de amilose (70%), que demonstrou em diversos estudos ser um material promissor para o controle da liberação de diferentes fármacos. A habilidade da alta amilose em formar complexos de inclusão e a elevada resistência enzimática foi explorada para a obtenção de sistemas de liberação controlada de fármacos com intuito vetorizar a liberação do fármaco no intestino, através da digestão pela enzima pancreatina. Diferentes complexos foram produzidos e a influencia da proporção fármaco: polímero, temperatura, e a presença de ácido palmítico foram avaliados através da caracterização dos complexos pelas análises de DSC, difração de Raios-X, distribuição granulométrica, RMN e determinação da capacidade de absorção de líquido. O desempenho como sistemas de liberação controlada de fármacos foi avaliado através da determinação da liberação in vitro dos fármacos nimesulida (NMS) e praziquantel (PZQ) em diferentes meios, simulando as diferentes regiões do trato gastrintestinal (TGI). A metodologia para a obtenção dos complexos mostrou-se eficiente com rendimento superior a 57% e teor de fármaco complexado de até 68,16%. Os dados de DSC, difração de Raios-X e RMN relevaram a interação entre fármaco e polímero, bem como a formação dos complexos de inclusão com estruturas semi-cristalinas associadas a formação de complexos do tipo II, de elevada resistência enzimática. A maior cristalinidade e a presença de fármacos próximos à superfície dos complexos promoveram redução da capacidade de absorção de líquido. A inclusão dos fármacos nos complexos permitiu a redução de suas taxas de liberação nos meios sem enzima (ácido, pH 1,2 e tampão fosfato pH 6,9). A adição da enzima pancreatina promoveu significativa aceleração das taxas de liberação dos fármacos (NMS e PZQ) demostrando a degradabilidade desses complexos. A maior ... / High amylose, one modified starch with high content of amylose (70%) is a promising material for controlling the delivery of different drugs. The ability of the high amylose to form inclusion complexes with high enzymatic resistance was exploited for obtaining controlled drugs delivery systems for targeting the drug release in the intestine by digestion with pancreatin enzyme. Different complexes were produced and the influence of the ratio drug: polymer, temperature and the presence of palmitic acid were evaluated through the characterization of the complexes by DSC, X-ray diffraction, particle size distribution, NMR and liquid uptake analysis. The performance of these complexes as controlled drug delivery systems was evaluated by determining the in vitro release of nimesulide (NMS) and praziquantel (PZQ) in different media, simulating the different regions of the gastrointestinal (GI) tract. The methodology to obtain the complex has been successful with a yield over 57% and the content of drug complexation until 68.16%. The DSC, diffraction of X-rays and NMR data showed the interaction between drug and polymer as well as the formation of inclusion complexes with semi-crystalline structures which were related to the formation of type II complexes with high enzymatic resistance. The higher crystallinity and the presence of drugs near to the complexes surface promoted the reduction of liquid uptake ability. The inclusion of drugs in complex allowed the reduction of their rates of release in the acid media (pH 1.2) and phosphate buffer (pH 6.9). The addition of pancreatin enzyme caused a significant acceleration of the rate of release of drugs (NMS and PZQ) showing the degradability of these complexes. The higher crystallinity of PZQ1:30AG60°C complex showed its highest enzymatic resistance providing the release of PZQ during 240min, while the complexes with NMS and PZQ 1:5AG90°C complex released the drug in 60min. The release data in media...

Orientador: Raul Cesar Evangelista / Banca: Letícia Norma Carpentiere Rodrigues / Banca: Osvaldo de Freitas / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Ana Dóris de Castro / Resumo: O desenvolvimento de formas farmacêuticas administradas pela via oral e utilizadas para liberação colônica de fármacos, visando o tratamento local de doenças inflamatórias intestinais, tem sido bastante estudado. Com essa finalidade, no presente trabalho foram preparados pellets de metronidazol (MT), constituídos ou não de quitosana (QS) e revestidos com QS, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCP), Kollicoat MAE® e Kollicoat SR®. Os pellets foram preparados por extrusão-esferonização e revestidos em leito fluidizado. Três delineamentos experimentais foram planejados com a finalidade de se definir as formulações a serem preparadas e analisadas. Os pellets e seus constituintes foram analisados por espectrofotometria no IV e por análise térmica, para verificação de possíveis interações entre o fármaco e o excipiente. A morfologia dos pellets foi analisada através de estereoscópio e por microscopia eletrônica de varredura. Outras análises incluíram área superficial, granulometria, densidade e grau de intumescimento. Também foi realizada a liberação in vitro do fármaco durante 8 horas, utilizando-se os Aparatos I e III da Farmacopéia Americana, e análise de absorção intestinal pela técnica do saco intestinal invertido. As análises térmica e espectrofotométrica por IV revelaram que não há interações físico-químicas entre o MT e os demais componentes dos pellets. A análise morfológica revelou que os pellets são esféricos; as análises de área superficial e microscopia eletrônica de varredura mostraram que o processo de revestimento não foi eficaz para algumas amostras, pois apresentaram poros em suas estruturas. Os pellets também foram analisados quanto à capacidade de intumescimento, demonstrando que a presença de QS acentua o grau de intumescimento das amostras... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The development of oral administered dosage forms used for colonic drug delivery aiming the local treatment of intestinal inflammatory diseases has been well studied. Thus, in the present work metronidazol (MT)-containing pellets, constituted or not by chitosan (QS) and covered with QS, hydroxypropyl methylcellulose phtalate (HPMCP), Kollicoat MAE® and Kollicoat SR® were developed. The pellets were prepared by extrusion-spheronization and covered on fluidized bed. Three experimental designs were used to define the formulations to be prepared and analyzed. The pellets and their constituents were analyzed by IR spectrophotometry and thermal analysis, in order to assess possible interactions between the drug and the excipients. Pellets' morphology was verified under a stereoscope and by means of scanning electronic microscopy. Other analyses included surface area, size distribution, density and degree of swelling. In vitro drug release, using Apparatuses I and III of United States Pharmacopoeia, and the assay of intestinal absorption by the everted gut sac technique were also carried out. Both thermal and IR spectrophotometric analyses revealed no physicochemical interactions between MT and the other constituents of the pellets. Morphological analyses showed that the pellets have spherical shape. The covering process was not efficient for some samples, since it was possible to identify pores on their surfaces, as assessed by surface area determination and scanning electronic microscopy. The presence of QS increased the swelling ratio. The in vitro ability of the pellets to reach colonic conditions, after resisting against gastric and enteric environments was also demonstrated. Firstly, it was observed that most of the drug was released in gastric medium from uncovered pellets or from those covered with QS or HPMCP, mainly due to the defects observed in such coatings... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-10T16:20:01Z No. of bitstreams: 1 2016_LubhandwaSebastianBiswaro.pdf: 2616385 bytes, checksum: 2795a754581f3627c2de38ff8b29cb3c (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-11T11:21:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LubhandwaSebastianBiswaro.pdf: 2616385 bytes, checksum: 2795a754581f3627c2de38ff8b29cb3c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-11T11:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LubhandwaSebastianBiswaro.pdf: 2616385 bytes, checksum: 2795a754581f3627c2de38ff8b29cb3c (MD5) / A leishmaniose é uma doença negligenciada causada por um protozoário leishmania e é transmitida por flebotomíneos. Está doença acomete mais de 350 milhões de pessoas em todo o mundo. Os medicamentos de primeira linha utilizados para tratar esta doença foram os antimoniais, os quais possuem resistência e apresentam efeitos colaterais severos. O Itraconazol é um antimicótico que também é usado no tratamento de leishmaniose. No presente estudo, o Itraconazol foi encapsulado em nanopartículas utilizando o co-polímero láctico co-ácido glicólico (PLGA) e recobertas com manose. Estas nanopartículas foram caracterizadas e testadas em ensaios de citotoxicidade e atividade anti-leishmania. As nanopartículas de PLGA vazias apresentaram um diâmetro hidrodinâmico médio de 220 nm ± 27 e um potencial zeta de -1,1 mV ± 0,7, enquanto nanopartículas de PLGA com itraconazol recobertas com manose (PLGA ITZ manose) apresentaram 263 nm ± 12,6 e -1,9 mV ± 0,5. Por meio do ensaio de MTT, a citotoxicidade das nanopartículas vazias foi de 13,7% e 12,6% para as células THP-1 e J774, respectivamente, enquanto PLGA ITZ manose foram de 1% e 20,7% para as células THP-1 e J774, respectivamente. A análise da atividade anti-leishmaniose foi avaliada pela redução do número de células que continham mais de 20 amastigotas intracelulares e observou-se que PLGA ITZ manose a 0,1 mM e de PLGA ITZ a 0,2 mM reduziram o percentual de amastigotas intracelulares de 34,6% para 13,7 % ± 2,8 e 5,7 % ± 2,1 (p<0,05), respectivamente, para L (V.) panamensis. Já para L (L.) infantum, a atividade leishmanicida de PLGA ITZ manose e nanopartículas de PLGA ITZ conseguiu reduzir os amastigotas de 16,7% para 4,8% ± 2,8 e 8,3% ± 0,3, respectivamente. Para L (L.) braziliensis, a atividade leishmanicida de PLGA e PLGA ITZ manose houve uma redução dos amastigotas com diferença estatistíca significativa (p <0,05) de 68,6% para 28 ± 2,4% e 21,1% ± 4,6, respectivamente. As três cepas testadas responderam de forma diferente para as nanoformualções de PLGA contendo itraconazol com ou sem manose. As nanopartículas de PLGA carregadas com itraconazol revestidas com manose conseguiu reduzir mais amastigotas de L (L.) infantum, enquanto que nanopartículas de PLGA com itraconazol sem manose conseguiu reduzir mais amastigotas intracelulares de L (V.) Panamensis e L. (L.) braziliensis. O fato das nanopartículas de PLGA contendo itraconazol revestidas com manose terem apresentado uma maior eficácia na redução das formas amastigotas de L (L.) infantum, foi possivelmente devido à adição de manose a nanoformulação. Como recomendação sugere-se que sejam realizados estudos in vivo das nanopartículas de itraconazol revestidas com manose para investigar e/ou confirmar o potencial dessas nanopartículas. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis is a neglected disease caused by the protozoa Leishmania and is transmitted by sand flies. This disease affects over 350 million people worldwide. The first-line drugs used to treat this disease were antimonials, which resistance and severe side effects have been associated with. Itraconazole is an antifungal which is also used in the treatment of leishmaniasis. In the present study, Itraconazole was encapsulated in nanoparticles using the copolymer lactic co-glycolic acid (PLGA) and coated with mannose. These nanoparticles were characterized and tested in cytotoxicity assays and anti-leishmania activity. The empty PLGA nanoparticles had a mean hydrodynamic diameter of 220 nm ± 27 and a zeta potential of -1.1 mV ± 0.7, while PLGA nanoparticles coated with mannose itraconazole (ITZ mannose PLGA) were 263 nm ± 12, 6 and -1.9 ± 0.5 mV. By means of the MTT assay, cytotoxicity of empty nanoparticles was 13.7% and 12.6% for THP-1 cells and J774, respectively, while PLGA ITZ mannose were 1% and 20.7% for the cells THP-1 and J774, respectively. The analysis of anti-leishmanial activity was evaluated by the reduction in the number of cells containing intracellular amastigotes more than 20 and it was noted that the PLGA ITZ 0.1 mM mannose and PLGA ITZ 0.2 mM reduced the percentage of intracellular amastigotes 34.6% to 13.7% ± 2.8 and 5.7 ± 2.1% (p <0.05), respectively, to L (V.) panamensis. As for L (L.) infantum, the leishmanicide activity of PLGA nanoparticles ITZ mannose and PLGA ITZ could reduce amastigotes from 16.7% to 4.8% ± 2.8 and 8.3 ± 0.3%, respectively. For L (L.) braziliensis, the anti-leishmanial activity of PLGA and PLGA ITZ mannose there was a reduction of amastigotes with statistically significant difference (p <0.05) from 68.6% to 28 ± 2.4% and 21.1% ± 4.6, respectively. The three strains tested responded differently to nanoformulation of PLGA containing itraconazole with and without mannose. The PLGA nanoparticles loaded with itraconazole coated with mannose could further reduce amastigotes L (L.) infantum, while PLGA nanoparticles with itraconazole without mannose could further reduce intracellular amastigotes L (V.) panamensis, and L. (L.) braziliensis. The fact that PLGA nanoparticles containing itraconazole coated with mannose have shown greater effectiveness in reducing amastigotes of L (L.) infantum, was possibly due to the addition of mannose to nanoformulação. As a recommendation is suggested that in vivo studies of itraconazole nanoparticles coated with mannose are carried out to investigate and / or confirm the potential of these nanoparticles.

O presente trabalho conjuga estudo de fármacos e pesticidas em nível de traços como poluentes no meio aquoso, envolvendo o uso de cromatografia líquida com detector espectrofotométrico na região do ultravioleta (HPLC-UV) para fármacos e cromatografia líquida com detector espectrométrico de massas (LC-ESI-MS-MS) para pesticidas. Quatro fármacos (antibióticos), a saber: ampicilina, amoxilina, tetraciclina e cefalexina, foram avaliados em presença de diversas fases móveis, que foram selecionadas de acordo com a melhor performance cromatográfica, sendo que ampicilina e amoxilina apresentaram melhor performance cromatográfica na mesma fase móvel. Para extração em fase sólida dos fármacos amoxilina e ampicilina foram avaliados três fases comerciais: LC- 18 (SUPELCLEAN), Supelclean TM ENVI TM-Chrom P, Abselut NEXUS. Para os fármacos cefalexina e tetraciclina, além das fases comercias foram avaliadas três novas fases a base de sílicas funcionalizadas com zirconocenos: (MeCp)2ZrCl2, (nBuCp)2ZrCl2 e (iBuCp)2ZrCl2. Amoxilina e ampicilina não apresentaram boas recuperações nas fases e eluentes estudados. Para tetraciclina e cefalexina, a fase comercial Chrom P apresentou boas recuperações quando utilizados os solventes metanol e a mistura 1% de solução aquosa de ácido acético e metanol (60:40), respectivamente. Com relação aos pesticidas, diversas classes (triazinas, feniluréias, organofosforados, anilina, ácidos, molinato e propanil) foram estudadas, somando um total de 20 pesticidas. Três colunas foram avaliadas em diferentes gradientes. Foi selecionada a coluna Purospher START RP e o gradiente acetonitrila-água. Triazinas, feniluréias, organosfosforados, anilinas e o pesticida propanil foram determinadas em modo de ionização spray eletrônico positivo, os pesticidas ácidos e propanil foram determinados em modo de ionização spray eletrônico negativo. Para cada pesticida foi encontrada duas transições (íon produtor-íon produzido) e confirmadas por MRM (Multiple Reaction Monitoring). O método apresentou linearidade com coeficientes de correlação maiores que 0,99. Uma metodologia para extração em fase sólida on line foi também desenvolvida. Essa metodologia apresentou-se altamente sensível (limites de detecção entre 0,040 e 2,794 ng L-1), simples rápida (45 minutos por análise) e precisa (desvio padrão relativo entre 1,99 e 12,15 %).

Este trabalho apresenta um estudo sobre o desenvolvimento de métodos de análise de alguns antimicrobianos em meio aquoso, utilizando novos materiais à base de sílica e poliméricos como sistemas de pré-concentração/extração em nível de traços. A determinação quantitativa da eficiência de extração e concentração destes materiais, frente aos compostos em estudo, foi realizada através de cromatografia líquida com detector espectrofotométrico na região do ultravioleta (CLAE-UV). Os métodos cromatográficos utilizados são farmacopêicos e por estarem fora do seu escopo de análise de compostos majoritários e de matriz, eles foram re-validados. A capacidade de retenção das fases sólidas foi avaliada frente aos antimicrobianos Tetraciclina (TC), Sulfametoxazol (SMX) e Trimetoprima (TM) empregando a extração em fase sólida (EFS) off line e a quantificação foi conduzida através de dois métodos cromatográficos, um para TC e outro para SMX e TM. Os resultados, expressos em recuperação, ficaram restritos aos sólidos à base de sílica, pois não foi possível concluir este estudo nos polímeros devido às dificuldades de síntese dos mesmos. O melhor percentual de recuperação para TC (70%) foi quando utilizou como eluente o solvente de diluição (Tabela VIII) na sílica 200ºC e metanol:água (50:50) para SMX (40%) e TM (90%) na sílica comercial (C18 da Waters). Alguns parâmetros de desempenho dos melhores resultados foram avaliados nas amostras padrão e nas amostras reais. Os dados foram tratados estatisticamente obtendo-se curvas analíticas com baixa dispersão no conjunto de pontos experimentais e menor incerteza dos coeficientes de regressão, estimados nos intervalos propostos. O volume de quebra foi de 25 mL e o fator de concentração foi de 5 para os três analitos. A precisão foi avaliada pela repetibilidade, obtendo-se coeficientes de variação dentro dos limites de concentração aceitos em análises de traços. Foram avaliados os limites de detecção (3,6 μg/l para TC; 0,3 μg/l para SMX e 0,3 μg/l para TM) e quantificação (12 μg/l para TC; 1,1 μg/l para SMX e 0,9 μg/l para TM) do método, em água do arroio Dilúvio. As análises das amostras coletadas no arroio Dilúvio de Porto Alegre e na água potável coletada da torneira do Laboratório de Análises Ambientais do Instituto de Química em agosto de 2007 não apresentaram os antimicrobianos em estudo, nos níveis detectáveis pelos métodos. / This work presents a study for the development of some methods of analysis of antimicobians in aqueous medium; using home-made silica-based and polymeric materials as a pre-concentration/extraction system in trace level. The quantitative determination of the efficiency of extraction and concentration of these materials compared to the pharmaceuticals in study was made through liquid chromatography with ultraviolet spectrophotometer detector in the ultraviolet region (CLAE-UV). The chromatographic methods used are pharmacopoeia and because they are out of the target analysis of majority composts and the source, they were revalidated. The retention capacity of these solid phases was evaluated considering the antimicrobialses: tetracicline (TC), sulfametoxazol (SMX) and trimetoprime (TMI) using solid-phase extraction (SFE) off line and the quantification was lead through two chromatographic methods, one for TC and another one for SMX and TM. The results, known in recovery, were restricted to silica-based solids; therefore, it was not possible to conclude this study for polymers due to the synthesis difficulties. The best percentage of recovery for TC (70%) was when it was used as eluente solvent of dilution (Table VIII) in 200ºC silica and methanol:water (50:50) for SMX (40%) and TM (90%) in commercial silica (C18 Waters). Some performance parameters were evaluated for standard and for real sample. The data were statistically evaluated resulting in analytical curves with low dispersion in the set of experimental points and lower uncertainty of the coefficients regression, predicted in the intervals considered. The breakthrough volume, in all cases was determined as 25 mL resulting in a concentration factor of 5. The precision was evaluated for analysis repeatability with acceptable coefficient of variation inside of limits of concentration in trace level. The limits of detection (3,6 μg/l for TC; 0,3 μg/l for SMX and 0,3 μg/l for TM) and quantification (12 μg/l for TC; 1,1 μg/l for SMX and 0,9 μg/l for TM) were determined in Dilúvio stream water. The analyses of the samples collected in Dilúvio stream in Porto Alegre and the tap water collected in the lab, in August 2007 did not present antimicrobians contamination, in the levels detected by the method.

NOGUEIRA, Carlos Renato Alves. Avaliação dos efeitos anticonvulsivantes e neuroprotetores da doxiciclina em ratos adultos jovens. 2008. 97 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-07T16:01:51Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_cranogueira.pdf: 5167899 bytes, checksum: 473f23f6bd86c23276d59f601dc7d6b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-08T11:26:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_cranogueira.pdf: 5167899 bytes, checksum: 473f23f6bd86c23276d59f601dc7d6b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-08T11:26:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_cranogueira.pdf: 5167899 bytes, checksum: 473f23f6bd86c23276d59f601dc7d6b5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Pilocarpine is known to induce convulsions leading to status epilepticus, similar to the temporal lobe epilepsy in humans. In the present work, we evaluated the possible protection affored by doxycyvline, a 2nd generation tetracycline, agaist pilocarpine- induced convulsions in male Wistar rats (P300mg/kg, i.p) in the absence and in the presence of doxicycline (25 to 100 mg/kg i.p.) daily for 7 days.After the pilocarpine injection, all groups were observed for cholinergic signs, latency to the first convulsion and latency to death. Besides, amino acid concentrations in temporal córtices were determined by RP-HPLC, as well catalase activity and levels of TBARS and Nitrite. Results showed that doxycycline did not alter cholinergic signs but increased the latency time to the first convulsion (1.6 to 5 times increase), as compared to P300, and the highest effect was observed with the dose of 25 mg/kg. Similar results were demonstrated to death latency that increased from 1.9 to 9.9 times with doxyciclyne at the doses of 25, 50 and 100 mg/kg. In fact we showed that the pre-treatment with doxycycline decreased in 25% MDA levels, 64% nitrite levels and 67.7% catalase activity. Interestingly, doxycycline decreased glutamate concentrations in 28 and 33% and increased GABA in 112 and 91% at the doses of 50 and 100mg/kg respectively. At the higher dose the drug altered aspartate and taurine concentrations, decreased aspartate levels in 61%, while increasing taurine levels in 34%. Surprisingly, only the lower dose altered glycine levels, increasing its concentration by 132%. In conclusion, we showed that the onset and intensity of pilocarpine-induced seizures were significantly reduced by doxycycline. Furthermore, at least in part, its mechanism of action seems to be mediated by the decrease and increase of excitatory and inhibitory aminoacids, respectively. In addiction the doxycycline capacity to reduce the oxidative stress associated with the pilocarpine-induced may also play a role / A Pilocarpina é um agonista colinérgico característico por induzir convulsões que evoluem para status epilépticus, similar à epilepsia do lobo temporal humana. Neste presente trabalho, nós avaliamos a possível ação neuroprotetora da doxiciclina, uma tetraciclina de segunda geração, nas convulsões induzidas pela pilocarpina em ratos Wistar machos, que receberam pilocarpina (300mg/kg i.p) presença ou na ausência de doxiciclina (25 à 100 mg/kg) administrada intraperitonealmente uma vez ao dia durante sete dias. Após a injeção de pilocarpina, foram observados os sinais colinérgicos periféricos, as latências de 1° convulsão e de morte. Foram determinadas as concentrações de aminoácidos no córtex temporal através de cromatografia líquida de alta eficiência HPLC, e a atividade do sistema antioxidante, catalase e as dosagens dos níveis de TBARS e nitrito. Os resultados mostraram que a doxiciclina não alterou os sinais colinérgicos periféricos, contudo aumentou a latência decorrida para a primeira convulsão (1.6 a 5 vezes), quando comparada ao grupo (P300). Resultados semelhantes foram demonstrados com a latência de morte, que foi aumentada de 1.9 a 9.9 vezes. Observou - se que o pré-tratamento com doxiciclina 50 mg/kg foi capaz de reduzir em 25% os níveis de MDA, 64% os níveis de nitrito e 67.7% a atividade da catalase no córtex temporal desses animais, demonstrando com clareza seu potencial antioxidante. Interessantemente, a doxiciclina diminuiu as concentrações de glutamato de 28 a 33%, e aumentou GABA em 112 e 91%, nas dose de 50 e 100mg/kg respectivamente nos animais administrados com P300, Na maior dose, a droga alterou os níveis de aspartato e taurina, diminuindo em 61% aspartato enquanto elevou os níveis de taurina em cerca de 34%. Surpreendentemente, somente a menor dose alterou os níveis de glicina, aumentendo a concentração deste aminoácido em 132%. Em conclusão, mostramos que o início e a intensidade das convulsões induzidas pela pilocarpina foram significativamente reduzidos pela doxiciclina. Portanto, pelo menos em parte, este mecanismo de ação parece estar relacionado a uma diminuição nos níveis de aminoácidos excitatórios e a um aumento nas concentrações de aminoácidos inibitórios no córtex temporal desses animais.