A doenca pulmonar obstrutiva cronica (DPOC) e uma das principais causas de morte e incapacitacao no mundo. E um problema de saude publica cuja fisiopatologia necessita ser melhor elucidada. Logo, o presente estudo objetivou desenvolver modelos de enfisema induzido por elastase pancreatica de porco (PPE) na tentativa de obter alteracoes morfo-funcionais do pulmao que possam se assemelhar ao enfisema humano e, assim, propiciar melhor entendimento fisiopatologico. Foram utilizados 36 camundongos Swiss machos (25-30g) que foram aleatoriamente subdivididos em grupo controle e grupo enfisema. O grupo controle (subdividido em Sal x 1 e Sal x 2) recebeu instilacao intratraqueal de solucao fisiologica, dose unica e dupla e; o grupo enfisema (subdividido em 0,3U x1, 0,3U x 2, 0,6U x 1 e 0,6U x 2) recebeu instilacao intratraqueal de elastase 0,3U ou 0,6U , dose unica (x1) e dupla (x2). Vinte dias apos a primeira instilacao, todos os animais foram sedados, anestesiados e paralisados. Os parametros da mecanica pulmonar: pressao resistiva (ƒ¢P1,L), viscoelastica (ƒ¢P2,L) e elastancia estatica (Est,L) foram aferidos pelo metodo de oclusao ao final da inspiracao. Os pulmoes foram preparados para a analise morfometrica e quantificacao de fibras elasticas e colagenas no tecido pulmonar. A exposicao pulmonar a PPE promoveu alteracao funcional no grupo 0,3U x 2 atraves da reducao do recuo elastico; alteracao estrutural no pulmao atraves do aumento do diametro alveolar medio nos grupos 0,6U x 1 e 0,3U x 2; aumento do influxo de celulas inflamatorias no parenquima pulmonar em todos os grupos induzidos ao enfisema; reducao do conteudo de fibras elasticas no parenquima pulmonar em todos os induzidos ao enfisema e aumento do conteudo de fibras colagenas nos animais do grupo 0,6U x 1 e 0,6U x 2. Em conclusao, todos os modelos empregados para a inducao do enfisema pulmonar por elastase neste estudo apresentaram caracteristicas morfologicas similares a encontradas em humanos, sendo que o grupo 0,3U x 2 foi o unico a apresentar alteracoes morfo-funcionais. / The chronic obstructive pulmonay disease (COPD) is a major cause of death and disability worldwide. It is a public health problem and the pathophysiology needs to be better elucidated. Therefore, the present study aimed to develop models of pancreatic elastase-induced emphysema (PPE) in an attempt to obtain lung functional and morphological changes that resemble human emphysema and, thus, improve the understanding of its pathophysiology. Thirty-sixs Swiss male mice (25-30g) were randomly divided into control group and emphysema. The control group (subdivided into Sal x 1 and Sal x 2) received intratracheal instillation of saline while emphysema group (subdivided into 0,3 U x 1, 0,3 U x 2, 0,6 U x 1, 0,6 U x 2) received intratracheal instillation of elastase 0,3 U or 0,6 U, single (x1) and double (x2). Twenty days after the first instillation, all animals were sedated, anesthetized and paralyzed. Lung mechanical parameters: resistive pressure (ΔP1,L), viscoelastic (ΔP2,L) and elastance (Est, L) were measured by end-inflation occlusion method. Lungs were prepared for analysis of morphometry and quantification of elastic and collagen fibers in lung tissue. The pulmonary exposure to PPE led to functional changes in 0.3U x 2 group by reducing the elastic recoil; lung morphological modifications by increasing the mean linear intercept in 0,6U x 1 and 0,3U x 2 groups; increased of inflammatory cells influx in the lung parenchyma and reduced of elastic fiber content in alveolar septa in all groups, and increased collagen fiber deposition in 0,6U x 1 and 0,6U x 2 groups. In conclusion, all developed elastase induced-emphysema models in the present study presented morphological changes similar to those found in human emphysema, but only 0.3 U x 2 group showed functional and morphological changes. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O exercício aeróbio aumenta o fluxo sanguíneo para o músculo esquelético, diminuindo esse fluxo em outros órgãos como útero e placenta o que pode prejudicar a oxigenação e nutrição do embrião. O estímulo do exercício extenuante pode ser estressor, aumentando a secreção de glicocorticóides através do eixo Hipotálamo-Hipófise-adrenal e que podem causar complicações durante a gestação, como as observadas em outras situações como o estresse alimentar e após infecção. As células Natural Killer uterinas (uNK) correspondem a maior população de leucócitos deciduais de humanos e roedores. As uNK de camundongos têm sido muito estudas por meio da citoquímica de lectina DBA (Dolichos Biflorus Agglutinin), que tem afinidade para N-acetil-D-Galactosamia expressa seletivamente nos grânulos e membrana plasmática destas células. Esta seletividade propiciou a caracterização de quatro subtipos de uNK, relacionados aos estágios de diferenciação destas células. A função mais aceita das uNK é a secreção de INF-y levando a dilatação das artérias espiraladas uterinas para manutenção da decídua e nutrição do embrião. Este estudo teve o objetivo de investigar se o exercício extenuante exerceria efeitos na implantação e integridade embrionária, bem como, no número, diferenciação, distribuição e padrão de reatividade para lectina DBA das uNK. Dez camundongos Swiss fêmeas foram mantidos sedentários (grupo 1). Outros 10 (grupo 2) foram submetidos a natação, do 1º ao 10º dia de gestação (dg), durante 60 minutos diários, dos quais os últimos 20 minutos se procederam com halter com massa de 4% do peso corporal, preso a suas caudas, em dias alternados do 1º ao 5º dg, e de 10% dessa massa do 6º ao 10º dg. Os animais do grupo 3 após prenhez, foram submetidos a natação da mesma maneira que os do grupo 2, porém passaram por um programa de treinamento de 3 semanas anterior a prenhez durante 5 dias/semana, sendo realizado 15 minutos/dia na primeira semana, aumentando gradativamente em 10 minutos/dia até 60 minutos na segunda semana e 60 minutos/dia na terceira semana. Todos os camundongos foram anestesiados e perfundidos com PFA (paraformaldeído) 4% no 10º dg. As taxas de implantação, viabilidade e reabsorção embrionárias foram avaliadas e os sítios de implantação destes animais foram coletados e embebidos em parafina para obtenção de cortes histológicos que foram analisados por lectina DBA e HE (Hematoxilina e Eosina). Foram quantificados os 4 subtipos de células uNK DBA reativos em 3 áreas da região mesometrial dos sítios de implantação. Nossos resultados mostraram que o exercício físico extenuante é capaz de causar diminuição na implantação, viabilidade embrionária e aumento na perda fetal, bem como, aumento em número e na diferenciação das células uNK, sem aparente ativação de sua citotoxicidade. O exercício realizado previamente a prenhez diminuiu estes efeitos, pois restabeleceu as taxas normais de implantação e o número total de uNK, bem como, aumentou a viabilidade e diminuiu a perda embrionária, contudo sem impedir completamente os efeitos deletérios do exercício na gestação. Nossos resultados indicam que esse modelo de estresse poderá ser útil para estudos futuros da investigação dos mecanismos neuroimunoendócrinos, envolvidos com parto prematuro e aborto causado por fatores estressores muitas vezes desconhecidos. / Aerobic exercise increases blood flow to skeletal muscle, decreasing the flow in other organs such as uterus and placenta, which may impair embryo oxygenation and nutrition. Furthermore, the continuous exercise can be stressful, changing the hypothalamic-pituitary-adrenal axis leading to secretion of glucocorticoids that may cause complications during pregnancy, such as those observed in other situations such as dietary and infection-mediated stress . Uterine natural killer cells (uNK) are the largest population of decidual leukocytes from humans and rodents. The mouse uNK have been extensively investigated by the use of DBA lectin cytochemistry, which has affinity for N-acetyl-D-Galactosamia selectively expressed in the granules and plasma membrane of these cells. This selectivity allowed the characterization of four subtypes of uNK related to their stages of differentiation. The most accepted function of uNK is the secretion of IFN-y leading to dilation of the uterine spiral arteries, maintaining the decidua and embryo nutrition. the goal of this study was to investigate whether strenuous exercise has effect in the embryo implantation and integrity, as well as, in the number, differentiation, distribution and DBA lectin reactivity pattern of uNK cells. Ten female Swiss mice were sedentary (group 1). Other 10 (group 2) were submitted to swimming, from 1st to 10th gestation day (gd) for 60 minutes daily, been the last 20 minutes conducted with a steel caudal dumbbell with 4% of their body masses, attached in alternately days from the 1st to 5th gd, and 10% of this mass from the 6th to 10th gd. The animals from group 3 after pregnancy were submitted to swimming in the same way as group 2, but went through a training program for 3 weeks, 5 days a week, being 15 minutes/day in the first week, increasing gradually by 10 minutes a day up to 60 minutes in the second week and 60 minutes a day in the third week. All mice were anesthetized and perfused with 4% PFA at 10°dg. The rates of embryo implantation, viability resorption were evaluated and the implantatio sites of these animals were collected and embedded in paraffin to obtain histological sections that were submitted to DBA lectin and H&E. We quantified the four DBA reactive uNK cells subtypes in three areas of the mesometrial region of the implantation sites. Our results showed that strenuous exercise can cause a decrease in implantation embryo viability and increased fetal loss, as well as increase in number and differentiation of uNK cells, without apparent activation of its cytotoxicity. The exercise performed prior to pregnancy decreased these effects, since restored the normal rates of implantation and the total number of UNK, as well as increased viability and decreased embryonic loss, without completely prevent the deleterious effects of exercise during pregnancy. Our results indicate that this stress model established here may be useful for future studies about the neuroimmunoendocrinology of preterm labor and abortion caused by often unknown stress factors. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O comportamento materno (CM) é crucial para o desenvolvimento adequado dos filhotes, e alterações neste tipo de comportamento podem ocasionar mudanças comportamentais dos filhotes quando adultos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da restrição proteica durante a gestação sobre o CM e suas consequências nos filhotes. Para isto, ratas Wistar foram tratadas com a dieta restrita em proteínas (6%) do dia 0 ao 15º dia de gestação (DG). Após o nascimento dos filhotes, o CM foi registrado diariamente do 2º ao 8º dia de lactação (DL), além disso foi realizada a análise do CM após separação maternal, no 9º DL. Essas mesmas análises do CM também foram realizadas nos grupos cross-fostering – mães adotivas tratadas com a dieta hipoproteica cuidando de filhotes cujas mães receberam a dieta normoproteica (22% de proteínas) e mães adotivas que receberam a dieta normoproteica cuidando de filhotes cujas mães receberam a dieta restrita em proteínas no período gestacional. Além disso, foram realizados testes comportamentais de campo aberto e labirinto em cruz elevado (LCE) nas mães dos grupos com ou sem a realização do cross-fostering. As proles provenientes do CM também foram utilizadas quando adultas para análise comportamental nos testes de campo aberto e labirinto em T elevado (LTE) em duas condições, submetidos ou não ao estresse de contenção. Adicionalmente, os filhotes adultos também foram avaliados quanto as respostas autonômicas antes, durante e após exposição ao estresse de contenção. Os resultados demonstram que filhotes de mães hipoproteicas quando cuidados por suas mães hipoproteicas apresentam um comportamento preditivo de redução da ansiedade durante a vida adulta mesmo após a situação de estresse. Isso pode ser devido essas mães serem mais motivadas a construir o ninho, além de que esses filhotes devido à restrição proteica intrauterina, demonstraram hiporresponsividade quando expostos a situações adversas na vida adulta. Além disso, após o cross-fostering houve alterações no comportamento e também nos filhotes machos quando adultos, alterando assim as respostas comportamentais e autonômicas de filhotes de mães hipoproteicas cuidados por mães normoproteicas. / The maternal behavior (MB) is crucial for the appropriate development of the offspring, and alterations in this kind of behavior may lead to behavioral changes in the offspring as adults. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of protein restriction during pregnancy on MB and its consequences in pups. For this purpose, Wistar rats were treated with protein restricted diet (6%) from day 0 to 15th of pregnancy (DP). After the birth of the pups, the MB was recorded daily from the 2th to 8th day of lactation (DL); furthermore, the MB analysis after maternal separation was performed, on the 9th DL. These same MB analyzes were also held in cross-fostering groups – adoptive mothers treated with hypoproteic diet caring for pups whose mothers received normal protein diet (22% protein), and adoptive mothers who received normal protein diet caring for pups whose mothers received restricted protein diet during pregnancy. In addition, behavioral tests of open field and elevated plus-maze (EPM) were performed on the mothers of the groups with or without cross-fostering. The offspring from the MB were also used as adults for behavioral analysis of open field and elevated T-maze (ETM) tests in two conditions, submitted or not to restraint stress. Additionally, the adult pups were also evaluated as for the autonomic responses before, during and after exposure to restraint stress. The results show that pups of hypoproteic mothers, when maintained by their hypoproteic mothers, present a predictive behavior of anxiety reduction during adulthood, even after the stress. This may be due these mothers are more motivated to build the nest, and that these puppies, due intrauterine protein restriction, demonstrated hyporesponsiveness when exposed to adverse situations in adult life. In addition, after cross-fostering, there were alterations in behavior as well as in male offspring as adults, thus changing behavioral and autonomic responses of pups of hypoproteic mothers maintained by normoproteic mothers. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A obesidade está aumentando de forma epidêmica em todo o mundo e a mesma possui efeito profundo na fisiologia da respiração, estando associada com estado de crônica inflamação sistêmica, que pode promover a hiper-reatividade das vias aéreas. Para estudar os processos que ocorrem nas vias aéreas, o presente estudo teve como objetivo avaliar a resistividade das vias aéreas de camundongos da linhagem Swiss induzidos à obesidade. Como metodologia foi realizada a análise dos efeitos da indução da obesidade pelo modelo de redução de ninhada; mecânica respiratória para analisar a resistividade do sistema respiratório pela mensuração das variáveis: elastância tecidual (Htis), das resistências dos pulmões (Gtis) e das vias aéreas (Raw) e histeresividade (η); análise morfométrica do tecido pulmonar para quantificar as células inflamatórias e os alvéolos normais, colapsados e hiperinsuflados; quantificação das proteínas colágeno III e elastina dos animais da ninhada normal e reduzida por meio da técnica do Western Blot, para verificar a presença de remodelamento. De acordo com os resultados obtidos foi possível constatar a eficácia do modelo de indução, pois houve aumento do peso corporal, do índice de Lee e da massa de gordura periepididimal e retroperitoneal. Com relação à mecânica pulmonar, não houve diferença entre os grupos para os valores basais, após a administração de salina (Sal) e metacolina (MCh), nos parâmetros Raw, Gtis, Htis e η. Frente ao desafio com salbutamol (Salb), apenas o η, que representa relação entre dissipação e conservação de energia nos tecidos pulmonares, apresentou diferença entre os grupos, sendo maior no grupo ninhada reduzida. Esse resultado pode ser atribuído a heterogeneidade acarretada pela broncoprovocação e a diminuição da resposta a broncodilatadores promovida pela inflamação e pela alteração da matriz extracelular. Houve diminuição de alvéolos normais e aumento do colapso alveolar, que pode acarretar aumento da viscoelasticidade pulmonar e heterogeneidade apresentada pelo mesmo o que também pode ser atribuído à presença do aumento de colágeno III e diminuição da elastina, encontrados neste estudo. Essa alteração do conteúdo de fibras colágenas e elásticas sugere um processo de remodelamento. Houve aumento de células inflamatórias mononucleares e polimorfonucleares o que indica presença de processo inflamatório, que também pode auxiliar no processo de remodelamento e desencadear hiper-responsividade. Portanto, a obesidade acarretou aumento de células inflamatórias, alterações na matriz extracelular do parênquima pulmonar e colapso alveolar nos animais da ninhada reduzida, porém não houve modificação nos parâmetros Raw, Gtis, Htis da mecânica pulmonar entre os grupos e no parâmetro η houve diferença após a administração do salbutamol, demonstrando que não houve alteração da responsividade. / Obesity is increasing in epidemic form throughout the world and it has a profound effect on the physiology of respiration and is associated with a state of chronic systemic inflammation, which can promote the hyperreactivity of the airways. To study the processes that occur in the airways, this study aimed to evaluate the resistivity of the airways strain obesity induced Swiss mice. We analyzed the effects of induction of obesity by reducing litter model; respiratory mechanics, to analyze the resistivity of the respiratory system by: tissue elastance (Htis), the resistances of the lungs (Gtis) and airway (Raw) and histeresividade (η), morphometric analysis of lung tissue for quantification of inflammatory cells and normal, collapsed and hyperinflated alveoli; quantification of the proteins collagen type III and elastin in animals normal and litter reduced by the technique of Western Blot to verify the presence of remodeling. According to the obtained results it can be seen that the induction model was effective because there was an increase in body weight, Lee index and mass periepididymal and retroperitoneal fat. With respect to lung mechanics, there was no difference between groups for baseline values after administration of saline (Sal) and methacholine (MCh) in Raw, Gtis, Htis and η parameters. Upon salbutamol (Salb) challenge, only the η, which represents a relationship between dissipation and energy conservation in the lung tissues, differed between groups, being higher in reduced litter group. This result can be attributed to heterogeneity entailed by bronchial provocation and diminished response to bronchodilators promoted by inflammation and alterations of the extracellular matrix. There was a decrease in normal alveoli and alveolar collapse increases, which can lead to an increased heterogeneity of lung and viscoelasticity for the same which can be attributed to the presence of increased and decreased collagen III, elastin, found in this study. This change of the content of collagen and elastic fibers suggests a remodeling process. There was an increase of mononuclear and polymorphonuclear inflammatory cells indicating the presence of inflammation, which can also aid in the remodeling process and lead to hyper- responsiveness. Therefore, obesity caused increase in inflammatory cells, changes in the extracellular matrix of the lung parenchyma and alveolar collapse in animals reduced litter, but there was no change in Raw, Gtis, Htis parameters of pulmonary mechanics between groups and the parameter η was no difference after administration of salbutamol, demonstrating that there had no change in responsiveness. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Indivíduos obesos apresentam maior risco de morbidade e mortalidade atribuída às doenças cardiovasculares. A composição da dieta é um fator que prediz o fenótipo cardíaco em resposta a obesidade e, o tipo de ácido graxo pode afetar de forma diferencial a estrutura e a função do miocárdio. Estudos têm mostrado que a disfunção mitocondrial exerce um papel chave na patogênese da insuficiência e hipertrofia cardíaca, e as alterações mitocondriais observadas em falhas cardíacas apontam para defeitos em sítios específicos da cadeia transportadora de elétrons. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a função contrátil ventricular em camundongos, alimentados com dieta hiperlipídica, rica em ácidos graxos poliinsaturados, buscando elucidações através da bioenergética mitocondrial. Após desmame, camundongos machos C57Bl/6 passaram a receber dieta manipulada contendo 7% (C) ou 19% (HF) de óleo de soja, até os 135 dias de idade. A ingestão alimentar e a massa corporal foram monitoradas e foi realizado teste de tolerância à glicose. No final do período experimental, os animais foram anestesiados e submetidos à avaliação da composição corporal por Absortimetria de Raios X de Dupla Energia (DXA), e em seguida, sacrificados por exsanguinação. No plasma foram determinados o perfil lipídico e a insulina. O coração, o tecido adiposo intra-abdominal e o subcutâneo foram coletados, pesados, processados para análise histomorfológica. Fibras cardíacas do ventrículo esquerdo foram utilizadas para análise da respiração mitocondrial através de oxígrafo. O coração também foi utilizado para a técnica de perfusão de coração isolado de Langendorff, e para análise da expressão de proteínas relacionadas à bioenergética de cardiomiócitos, através de Western Blotting. O índice de HOMA e de adiposidade foram calculados. O grupo HF apresentou maior adiposidade, sem alteração na ingestão alimentar. Foi observada intolerância a glicose, hiperinsulinemia e resistência à insulina, além de alterações desfavoráveis no perfil lipídico. Foi observado alteração na morfologia cardíaca e quadro de cardiomiopatia hipertrófica, refletindo em alteração hemodinâmica, determinando maior contratilidade, maior pressão ventricular e função diastólica prejudicada. Em relação à atividade mitocondrial dos cardiomiócitos foi observada menor oxidação de carboidratos (-47%) e de ácidos graxos (-60%). Porém, sem alteração na expressão de proteínas relacionadas à bioenergética de cardiomiócitos, CPT1, UCP2, GLUT1, GLUT4, AMPK e pAMPK. A partir desses resultados, concluímos que o tipo e a quantidade de ácidos graxos predizem o fenótipo cardíaco na obesidade, promovendo alteração na capacidade oxidativa mitocondrial, na morfologia e na hemodinâmica cardíaca / Obese individuals have a higher risk of morbidity and mortality attributed to cardiovascular disease. The diet composition is one factor that predicts the cardiac phenotype in response to obesity and the type of fatty acid differentially influences the myocardial structure and function. Studies have showed that mitochondrial dysfunction is considered to play a key role in the pathogenesis of cardiac hypertrophy and failure, also the mitochondrial alterations present in heart failure indicate to defects at specific sites in electron transport chain. Thus, the aim of the study was evaluated the ventricular contractile function in mice fed high fat diet, rich in polyunsaturated fatty acids, looking through mitochondrial bioenergetics. After weaning, mouse C57Bl/6 received manipulated diet containing 7% (C) or 19% (HF) of soybean oil, until 135 days of age. The food intake and the body mass were monitored, and the glucose tolerance test was realized. At the end of the experimental period, the animals had their body composition evaluated by Dual-energy X-ray Absorptiometry (DXA), after, were sacrificed by exsanguination. In plasma was determined the lipid profile and insulin. The heart, intraabdominal and subcutaneous adipose tissue were collected, weighted and processed to morphological analysis. The left ventricular myocardial fibers were used to analyze mitochondrial respiration by technique of high resolution respirometry. The heart was used to the Langendorff technique of isolated heart perfusion, and to analyze the expression of proteins related to the cardiomyocytes bioenergetics, through of Western Blotting. The HOMA-IR and the adiposity index were calculated. The group HF showed higher adiposity, but did not differ about food intake. Was observed glucose intolerance, hiperinsulinemia, insulin resistance and also unfavorable alterations in lipid profile. Was observed alterations in cardiac morphology and hypertrophic cardiomyopathy, reflecting in hemodinamic alterations with increase of contractility, higher ventricular pressure and impaired diastolic function. About the mitochondrial activity of cardiomyocytes was observed lower oxidation of carbohydrates (-47%) and fatty acids (-60%). However, the expression of proteins related to the cardiomyocytes bioenergetics, CPT1, UCP2, GLUT1, GLUT4, AMPK e pAMPK, did not differ between the groups. From these results, we conclude that the type and amount of fatty acids predict the cardiac phenotype in obesity, promoting the impairment of mitochondrial oxidative capacity, alterations in cardiac morphology and hemodynamics

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseTAC.pdf: 758340 bytes, checksum: 75f2768e3c1fcebb7f4cfe61b0b5aade (MD5) Previous issue date: 2005-12-19 / The present study anlyzed the in vivo and in vitro responses of the myocardium obtained from Prochilodus lineatus acclimated at 25 ºC and tested at 25 and 35 ºC. The in vivo heart rate (fH bpm) was measured during acute transitions in temperature and subsequent return to 25º C. ECG recordings (lead DI of the electrocardiography) were obtained of electrodes at cardiac region. Recordings of the isometric contraction force (Fc %) and time-dependent parameters (TPT time to peak tension; THR time to half relaxation) were obtainded in vitro from ventricle rings electrically paced in response to stimulation frequency, temperature, extracelular Ca2+, adrenaline and ryanodine (blocker of the sarcoplasmic reticulum SR). The species showed a significant increase in the fH during the transition from 25 to 35º C, showing the importance of the chronotropic adjustments in response to thermal alterations and a great tolerance and adaptation to different thermal conditions. The species did show significant decreases in the twitch force (Fc) development by the ventricular strips during the increases of temperature. The addition of crescent Ca2+ concentrations to the medium evidenced the importance of the extracellular Ca2+ as showed by the Fc increases at both 25 and 35º C. Concomitant increases in in TPT and THR here recorded at 25 ºC while at 35º C, such increases were observed only in TPT. Adrenaline caused positive inotropism only at 35º C, without effect on time-dependent parameters. The post rest tension was conducted with and without 10 µM ryanodine in the medium. A significant post rest potentiation was recorded for at 25 and 35o C These post rest potentiations were inhibited by ryanodine. The impact of increases in the imposed contraction frequency caused a decline of the force and an increase in resting tension (RT) at both temperatures. In conclusion, an important fraction of the activator Ca2+ in P. lineatus seems to derive from intracellular stores (RS). However, this species also depends on extracellular sources of Ca2+, which provide more flexibility to modulate the contraction force. / O presente estudo teve por objetivo analisar as respostas in vivo (freqüência cardíaca) e in vitro (Força Fc) do miocárdio ventricular de curimbatá, Prochilodus lineatus, aclimatados a 25º C e testados a 25 e 35º C. Os registros de freqüência cardíaca (fH bpm) após elevação gradual da temperatura, e seu retorno subseqüente a 25º C, foram feitos através de implantes de eletrodos de ECG na região cardíaca. Adicionalmente foram feitos registros das respostas inotrópicas (Fc %) e dos parâmetros tempo-dependentes (TPT tempo para o pico de força e THR tempo para 50% do relaxamento) de anéis ventriculares estimulados eletricamente a diferentes freqüências em função da temperatura, concentração extracelular de Ca2+, adrenalina e rianodina (bloqueadora da função do reticulo sacoplasmático RS). In vivo, o aumento da temperatura elevou a fH de 49 bpm a 25º C para 115 bpm a 35º C, recuperando os valores iniciais com o retorno a 25º C. A elevação da temperatura desencadeou inotropismo negativo, sendo que o TPT e o THR variaram de maneira inversa a temperatura. A adição de concentrações crescentes Ca2+ (de 1,25 até 11,25 mM) ao banho causou aumento da Fc, demonstrando a importância do Ca2+ extracelular. A 25 ºC, tanto o TPT quanto o THR foram prolongados em função das elevações nas concentrações de Ca2+ enquanto que a 35º C, apenas o TPT aumentou. A adição de adrenalina só causou efeito inotrópico positivo a 35º C, sendo que os parâmetros tempodependentes não sofreram alterações em nenhuma das temperaturas experimentais. A análise da tensão pós-pausa, com e sem 10 µM de rianodina, revelou uma significante potenciação da força tanto a 25 quanto a 35º C, sendo esta abolida pela rianodina. Com o aumento da freqüência de estimulação, observou-se redução progressiva na Fc e significativo aumento da tensão de repouso (RT). O tratamento com rianodina provocou uma diminuição na Fc independente da temperatura. Os resultados revelaram que o Ca2+ responsável pela ativação dos miofilamentos deve derivar de pelo menos duas fontes: os espaços extracelulares (evidenciado pelo aumento de Fc durante incrementos na concentração de Ca2+ extracelular) e uma fração significativa fornecida por fontes internas, ou seja, o RS.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFVD.pdf: 650664 bytes, checksum: b3b020ea2ffa53ecc995ef5f69892062 (MD5) Previous issue date: 2007-06-12 / Universidade Federal de Sao Carlos / Because of the lack of data about the mercury influence on bone metabolism it is important to investigate the bone parameters that can be affected by its effects. The aim of this study was to evaluate the physical and biomechanical bone alterations in adult rats contaminated with mercurous chloride during their development. The animals were separated in experimental and control groups: 9 male rats treated with saline 0.9% (0.1 ml/100g BW) and 16 male rats treated with mercurous chloride (1.25mg/kg BW) during 60 days, 5 days/week, by the stomacal gavage. After that, the animals were sacrificed and the right femur was dissected. The body weight, femoral length and thickness of femoral diaphysis were measured. The mechanical properties (maximum and failure forces, stiffness and yield) of femurs were evaluated by the tree-point bending test using the universal machine Instron model 4444. The bone volume was estimated by the Archimedes Principle. The wet and ash weight were also determined. The weight, length and major and minor diameters of the femurs were not different between the groups; however the length and the major diameter showed tendency to decrease. There was an increase (p=0,0460) of bone density of the contaminated animals. The mineral density and the mechanical properties were not different between the both groups. The dose of mercurous chloride used had little effect on bone development. It was observed a tendency of higher values of bone biomechanical properties and a decrease of the biometric values of the contaminated group. This would characterize a more resistant bone in spite of a lower mineral content. / Devido à carência de dados sobre o envolvimento do mercúrio sobre alterações do metabolismo ósseo, torna-se importante investigar a influência do seu efeito sobre os parâmetros ósseos. Avaliou-se as possíveis alterações físicas e biomecânicas ósseas em ratos adultos intoxicados com cloreto mercuroso durante seu desenvolvimento. Os animais foram divididos em grupo experimental e controle, sendo 09 ratos tratados com salina 9% (0,1 ml/100g PC) e 16 tratados com cloreto mercuroso (1,25mg/kg PC) durante 5 dias/semana, por 60 dias pelo método de gavagem gástrica. Posteriormente os animais foram sacrificados e foi realizada dissecação femoral direita para coleta do material ósseo. O peso corporal, comprimento femoral e espessura das diáfises femorais foram mensurados. As propriedades mecânicas (força máxima e de ruptura, rigidez e resiliência) dos fêmures foram mensuradas através do teste de flexão a três pontos realizado em uma máquina universal Instron modelo 4444. Através do Princípio de Arquimedes, calculou-se o volume ósseo e a densidade mineral, utilizando as propriedades físicas: peso imerso, úmido e das cinzas. O peso, comprimento e diâmetros femorais, não foram diferentes entre os grupos, porém o comprimento e diâmetro maior apresentaram tendência à diminuição. Houve aumento (p=0,0460) da densidade óssea dos animais contaminados. A densidade mineral e as propriedades mecânicas não foram diferentes entre os dois grupos. O Cloreto mercuroso na dose utilizada teve pouco efeito sobre o desenvolvimento ósseo. Observou-se tendência ao aumento dos valores das propriedades biomecânicas e redução das variáveis biométricas do grupo contaminado, o que caracterizaria como um tecido ósseo mais resistente, porém com menor conteúdo mineral.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1659.pdf: 645648 bytes, checksum: 6374964c1d7092a983850eef50d2bd02 (MD5) Previous issue date: 2008-01-24 / Universidade Federal de Minas Gerais / The ability to sense and respond to oxygen availability in the environment is of extreme functional importance for fish. This is even more so in tropical freshwater habitats where environmental hypoxia can occur rapidly in space and time. Recent physiological studies on the cardio-respiratory response of tropical fishes have focused on hypoxia tolerant species. This aim of this study was to examine the neural control and function of the cardio-respiratory system in a fish that is adapted to living at high levels of oxygen. Trairão, Hoplias lacerdae was chosen because it is a member of the Erythrinidae family, in which most of species are hypoxia tolerant, including some where the O2 receptors has already been characterized. The study focused on investigation of the localization, distribution and orientation of chemoreceptors of O2 in trairão. Also how the cardio-respiratory parameters were modified by hypoxia. The fish were submitted to selective denervations of the branchial branches of the cranial nerves IX and X. These were, (1) only IX nerve sectioned at the 1st gill arch (IX; n = 9), (2) first gill arch both IX and branch of X sectioned (G1; n = 9), (3) all four gill arches both IX and X sectioned (G4; n = 8), (4) a control group (n = 8) and (5) a sham-operated group that underwent surgery but no nerves were sectioned (n = 4). A cannula was inserted into the ventral aorta to monitor changes in heart rate and blood pressure. Ventilation rate and amplitude was also monitored with a cannula through the roof of the buccal cavity. The fish were exposed to a gradual hypoxia from 140 to 10 mmHg. Either the internal and external surfaces of the gill were treated with NaCN to determine the receptors orientation. Results showed that the receptors related to the heart rate control and ventilation amplitude were distributed over all gill arches on both the internal and external surfaces, and the branches of the both nerves IX and X were involved in these responses. This pattern differs from that observed for the ventilation rat. The receptors involved in the control of this response are located internally to the first gill arch. Tairão also showed blood pressure control chemorecptors on the first gill arch, involved in a very efficient barostatic control. Extrabranchial O2 chemoreceptors were not identified in trairão. This differs from the hypoxia tolerant fish, where extrabranchial chemoreceptors are important to start the cardio-respiratory responses the most fast and accurate possible / A capacidade de sentir e responder às variações de oxigênio no ambiente é de extrema importância para peixes. Isto é mais acentuado em ambientes dulceaquícolas tropicais onde a hipóxia ambiental ocorre freqüentemente. Estudos recentes sobre respostas cardio-respiratórias em peixes tropicais têm enfocado espécies tolerantes à hipóxia. O foco do presente estudo foi examinar o controle neural e a função cardio-respiratória de um peixe adaptado a ambientes bem oxigenados. O trairão, Hoplias lacerdae foi escolhido por pertencer à família Erythrinidae, que apresenta a maioria das espécies tolerantes à hipóxia, incluindo algumas onde os receptores de O2 já foram caracterizados. O foco do estudo foi investigar a localização, distribuição e orientação dos quimiorreceptores de O2 em trairão, bem como os parâmetros cardio-respiratórios são modificados pela hipóxia. Os peixes foram submetidos à denervações seletivas dos ramos branquiais dos nervos cranianos IX e X. Os grupos foram: (1) apenas nervo IX seccionado do 1o arco branquial (IX; n = 9), (2) primeiro arco, ambos IX e ramo do X seccionados (G1; n = 9), (3) os quatro arcos, ambos IX e X seccionados (G4; n = 8), (4) grupo controle (n = 8) e (5) grupo sham-operated , que passou por cirurgia, mas não teve os nervos seccionados (n = 4). Uma cânula foi inserida na aorta ventral para monitorar freqüência cardíaca e pressão arterial. A freqüência e a amplitude ventilatórias foram monitoradas por uma cânula no palato da cavidade bucal. Os peixes foram expostos à hipóxia gradual de 140 a 10 mmHg. Ambas as superfícies, interna e externa, das brânquias receberam tratamento de NaCN para determinar a orientação dos receptores. Os resultados mostraram que receptores relacionados ao controle da freqüência cardíaca e amplitude ventilatória estão distribuídos por todos os arcos branquiais, orientados tanto interna quanto externamente, e ambos os nervos IX e X estão envolvidos nesta resposta. Este padrão difere do observado para a freqüência respiratória. Os receptores envolvidos no controle dessa resposta localizam-se internamente no 1o arco branquial. O trairão também possiu quimiorreceptores de O2 envolvidos no controle da pressão arterial apenas no primeiro arco branquial, participando de um controle barostático eficiente. Não foram identificados receptores de O2 extrabranquiais em trairão. Este padrão difere da maioria dos peixes tolerantes à hipóxia onde os estes receptores são importantes para iniciar rapidamente as respostas cardio-respiratórias à hipóxia

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-14T20:00:46Z No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:22:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T19:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) Previous issue date: 2014-12-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / This thesis is part of the requirements for obtaining Ph.D. title by Joint Graduate Program in Physiological Sciences, UFSCar/UNESP. The results presented refer to experiments developed in Laboratório de Neuropsicofarmacologia da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara and Behavioral Neurosciense Branch / National Institute on Drug Abuse - National Institutes of Health, Baltimore, USA. In chapter 1 we made a general introduction on the theories that formed the basis of the current concept of drug addiction. In this chapter, we elaborate a brief history of social organization and human relationship with drugs. We wrote specifically about both substances used in our studies, ethanol and cocaine, as well as their impact on public health and the pharmacological mechanisms of action. In chapter 2 the aim was to evaluate the influence of factors such as early age of onset of ethanol use and the effect of stress on the seeking behavior and consumption of this drug. For this, we used the animal model of ethanol self-administration and two types of social stress (social deprivation and social instability) in rats during adolescence. To verify whether behavioral changes were promoted by molecular neuroadaptations, we quantified gene expression involved in the development of ethanol dependence in amygdala, responsible area for stress-induce behaviors. In chapter 3 we investigated whether daun02 inactivation method is able to inhibit cocaine-induced locomotor sensitization in rats. This method is based on the theory that only a small group of sparsely distributed neurons (neuronal ensembles) are activated during behavior exhibition. For this purpose, we used transgenic rats carrying a c-fos-lacZ promoter which when activated induces the expression of ß-galactosidase enzyme only in activated neurons. The ß-galactosidase converts the prodrug daun02 into a toxic metabolite, driving to cell apoptosis. Thus, we evaluated whether the neuronal ensembles activated during the development of locomotor sensitization are the same as those recruited in the expression of this behavior. In chapter 4 we investigate whether mice express context-specific locomotor sensitization and whether the exhibiton of this behavior is related to synaptic changes in the nucleus accumbens. For this we use male and female transgenic C57BL/6 adult mice expressing Fos-GFP, a protein sensitive to green light, only in activated cells. Thus, using a confocal microscope, we assessed the presence of silent synapses only in activated neurons (neuronal ensembles) related to the expression of locomotor sensitization. Like us, researchers in the field of neurobiology of drug addiction have been studying the factors that can facilitate the initiation and maintenance of drug use and how it may trigger the addiction. Thus, this thesis aimed to investigate the influence of age, sex, stress, memory, associative learning, different types of drugs (cocaine and ethanol) and different types of animal models (self-administration and sensitization) in the development of drug addiction. / A presente tese é parte dos requisitos exigidos para a obtenção do título de doutor pelo Programa Interinstitucional de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas – Associação ampla UFSCar/UNESP. Os resultados apresentados são referentes aos experimentos realizados no Laboratório de Neuropsicofarmacologia da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara e no Behavioral Neurosciense Branch/National Institute on Drug Abuse - National Institute of Health, Baltimore, EUA. No capítulo 1 fizemos uma introdução geral sobre as teorias que serviram de base para a elaboração do conceito atual de dependência de drogas de abuso1. Nesse mesmo capítulo, nós elaboramos um breve histórico sobre a organização social e a relação do homem com as drogas de abuso. Escrevemos especificamente sobre as duas substâncias utilizadas em nossos estudos, o etanol e a cocaína, bem como o impacto delas na saúde pública e seus mecanismos farmacológicos de ação. No capítulo 2 o objetivo foi avaliar a influência de fatores como a idade precoce do início do uso do etanol e o efeito do estresse sobre o comportamento de busca e consumo dessa droga. Para isso, utilizamos o modelo animal de autoadministração de etanol e dois tipos de estresse social (privação social e instabilidade social) durante a adolescência de ratos. Para verificar se alterações comportamentais foram promovidas por neuroadaptações moleculares, nós quantificamos a expressão de genes envolvidos no desenvolvimento da dependência de etanol na amídala, região responsável pela exibição de comportamentos maladaptados ao estresse. No capítulo 3 nós investigamos se o método de inibição por daun02 é capaz de bloquear a sensibilização locomotora induzida por cocaína em ratos. Esse método baseia-se na teoria que apenas um pequeno grupo de neurônios dispersamente distribuídos (neuronal ensembles) são ativados durante a exibição de um comportamento. Para esse propósito utilizamos ratos transgênicos contendo um promotor c-fos-lacZ que ao ser ativado induz a expressão da enzima ß-galactosidase apenas em neurônios ativados. A ß - galactosidase converte o pró-fármaco daun02 num metabólito tóxico que causa apoptose celular. Dessa maneira, nós avaliamos se os neuronal ensembles ativados durante o desenvolvimento da sensibilização locomotora são os mesmos que são recrutados na expressão desse comportamento. No capítulo 4 investigamos se camundongos expressam sensibilização locomotora contexto-específica e se a exibição desse comportamento está relacionada com alterações sinápticas no núcleo acumbens. Para isso nós utilizamos camundongos C57Bl/6 machos e fêmeas adultos transgênicos Fos- GFP que expressam uma proteína, sensível à luz verde, apenas em células ativadas. Desse modo, com a ajuda de um microscópio confocal, avaliamos a presença de sinapses silenciosas apenas em neurônios ativados (neuronal ensembles) durante a expressão da sensibilização locomotora. Assim como nós, pesquisadores da área da neurobiologia da farmacodependência vêm estudando os fatores que podem facilitar o início e manutenção do uso da droga e como isso pode desencadear a instalação da dependência. Dessa forma, essa tese teve como objetivo investigar a influência da idade, sexo, estresse, memória, aprendizado associativo, diferentes tipos de drogas (etanol e cocaína) e diferentes tipos de modelos animais (autoadministração e sensibilização) no desenvolvimento da dependência.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Indivíduos obesos apresentam maior risco de morbidade e mortalidade atribuída às doenças cardiovasculares. A composição da dieta é um fator que prediz o fenótipo cardíaco em resposta a obesidade e, o tipo de ácido graxo pode afetar de forma diferencial a estrutura e a função do miocárdio. Estudos têm mostrado que a disfunção mitocondrial exerce um papel chave na patogênese da insuficiência e hipertrofia cardíaca, e as alterações mitocondriais observadas em falhas cardíacas apontam para defeitos em sítios específicos da cadeia transportadora de elétrons. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a função contrátil ventricular em camundongos, alimentados com dieta hiperlipídica, rica em ácidos graxos poliinsaturados, buscando elucidações através da bioenergética mitocondrial. Após desmame, camundongos machos C57Bl/6 passaram a receber dieta manipulada contendo 7% (C) ou 19% (HF) de óleo de soja, até os 135 dias de idade. A ingestão alimentar e a massa corporal foram monitoradas e foi realizado teste de tolerância à glicose. No final do período experimental, os animais foram anestesiados e submetidos à avaliação da composição corporal por Absortimetria de Raios X de Dupla Energia (DXA), e em seguida, sacrificados por exsanguinação. No plasma foram determinados o perfil lipídico e a insulina. O coração, o tecido adiposo intra-abdominal e o subcutâneo foram coletados, pesados, processados para análise histomorfológica. Fibras cardíacas do ventrículo esquerdo foram utilizadas para análise da respiração mitocondrial através de oxígrafo. O coração também foi utilizado para a técnica de perfusão de coração isolado de Langendorff, e para análise da expressão de proteínas relacionadas à bioenergética de cardiomiócitos, através de Western Blotting. O índice de HOMA e de adiposidade foram calculados. O grupo HF apresentou maior adiposidade, sem alteração na ingestão alimentar. Foi observada intolerância a glicose, hiperinsulinemia e resistência à insulina, além de alterações desfavoráveis no perfil lipídico. Foi observado alteração na morfologia cardíaca e quadro de cardiomiopatia hipertrófica, refletindo em alteração hemodinâmica, determinando maior contratilidade, maior pressão ventricular e função diastólica prejudicada. Em relação à atividade mitocondrial dos cardiomiócitos foi observada menor oxidação de carboidratos (-47%) e de ácidos graxos (-60%). Porém, sem alteração na expressão de proteínas relacionadas à bioenergética de cardiomiócitos, CPT1, UCP2, GLUT1, GLUT4, AMPK e pAMPK. A partir desses resultados, concluímos que o tipo e a quantidade de ácidos graxos predizem o fenótipo cardíaco na obesidade, promovendo alteração na capacidade oxidativa mitocondrial, na morfologia e na hemodinâmica cardíaca / Obese individuals have a higher risk of morbidity and mortality attributed to cardiovascular disease. The diet composition is one factor that predicts the cardiac phenotype in response to obesity and the type of fatty acid differentially influences the myocardial structure and function. Studies have showed that mitochondrial dysfunction is considered to play a key role in the pathogenesis of cardiac hypertrophy and failure, also the mitochondrial alterations present in heart failure indicate to defects at specific sites in electron transport chain. Thus, the aim of the study was evaluated the ventricular contractile function in mice fed high fat diet, rich in polyunsaturated fatty acids, looking through mitochondrial bioenergetics. After weaning, mouse C57Bl/6 received manipulated diet containing 7% (C) or 19% (HF) of soybean oil, until 135 days of age. The food intake and the body mass were monitored, and the glucose tolerance test was realized. At the end of the experimental period, the animals had their body composition evaluated by Dual-energy X-ray Absorptiometry (DXA), after, were sacrificed by exsanguination. In plasma was determined the lipid profile and insulin. The heart, intraabdominal and subcutaneous adipose tissue were collected, weighted and processed to morphological analysis. The left ventricular myocardial fibers were used to analyze mitochondrial respiration by technique of high resolution respirometry. The heart was used to the Langendorff technique of isolated heart perfusion, and to analyze the expression of proteins related to the cardiomyocytes bioenergetics, through of Western Blotting. The HOMA-IR and the adiposity index were calculated. The group HF showed higher adiposity, but did not differ about food intake. Was observed glucose intolerance, hiperinsulinemia, insulin resistance and also unfavorable alterations in lipid profile. Was observed alterations in cardiac morphology and hypertrophic cardiomyopathy, reflecting in hemodinamic alterations with increase of contractility, higher ventricular pressure and impaired diastolic function. About the mitochondrial activity of cardiomyocytes was observed lower oxidation of carbohydrates (-47%) and fatty acids (-60%). However, the expression of proteins related to the cardiomyocytes bioenergetics, CPT1, UCP2, GLUT1, GLUT4, AMPK e pAMPK, did not differ between the groups. From these results, we conclude that the type and amount of fatty acids predict the cardiac phenotype in obesity, promoting the impairment of mitochondrial oxidative capacity, alterations in cardiac morphology and hemodynamics