Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthlea@bce.unb.br) on 2008-10-22T14:34:27Z No. of bitstreams: 1 2008_AlexandreMBailao.pdf: 7854204 bytes, checksum: c195e3862908af97d8d7b4d7b2935d84 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2008-11-12T13:42:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AlexandreMBailao.pdf: 7854204 bytes, checksum: c195e3862908af97d8d7b4d7b2935d84 (MD5) / Made available in DSpace on 2008-11-12T13:42:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AlexandreMBailao.pdf: 7854204 bytes, checksum: c195e3862908af97d8d7b4d7b2935d84 (MD5) / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é um patógeno humano com ampla distribuição na América Latina. Este microrganismo causa a paracoccidioidomicose, a micose sistêmica mais prevalente na América Latina. O fungo causa infecção quando o hospedeiro inala propágulos da fase miceliana do organismo. Estas partículas atingem o pulmão e podem disseminar para outros órgãos e tecidos. Embora o perfil de expressão gênica em P. brasiliensis tem sido estudado, pouco se conhece sobre o padrão de expressão de genes desta espécie durante o processo infeccioso. O presente trabalho descreve a análise dos genes diferencialmente expressos em células leveduriformes de P. brasiliensis recuperado de animais infectados e durante incubação com sangue humano, que mimetiza a rota hematogênica de disseminação do fungo. Adicionalmente, também foram identificados os genes preferencialmente expressos durante incubação do fungo com plasma humano, mimetizando os sítios de infecção com inflamação. Os dados revelaram que genes relacionados com captação de ferro, síntese de melanina e defesa celular foram superexpressos no modelo de infecção animal. Os transcritos induzidos durante a incubação de células leveduriformes com sangue humano foram aqueles predominantemente relacionados com síntese/remodelamento da parede celular. Genes relacionados com degradação de ácidos graxos, síntese protéica, estresse osmótico, remodelamento da parede celular e defesa celular foram superexpressos no tratamento com plasma humano. A expressão diferencial dos genes identificados foi confirmada por ensaios de dot blot, northern blot e RT-PCRsq. Os dados gerados podem facilitar estudos funcionais de novos genes induzidos os quais podem ser importantes para estratégias de sobrevivência e crescimento do P. brasiliensis em diferentes nichos do hospedeiro.

Resumo não disponível.

Visando aumentar a resistência a moléstias fúngicas, o presente trabalho teve como objetivo introduzir um gene (chit1) que codifica uma quitinase do fungo Metarhizium anisopliae em cultivares de soja [Glycine max (L.) Merrill]. A co-transformação foi a estratégia escolhida, visando a obtenção de plantas livres de transgenes marcadores na progênie das plantas transformadas. A co-transformação foi realizada via biolística, tendo como tecido-alvo conjuntos de embriões somáticos globulares das cultivares MG/BR46 Conquista e IAS-5. O plasmídeo pGusHyg, que contém o gene repórter gusA e o gene marcador hpt, foi bombardeado concomitantemente com o plasmídeo pMOG463chit1, que porta o gene chit1. Os conjuntos de embriões bombardeados foram transferidos para meio seletivo contendo higromicina, visando a obtenção de material estavelmente transformado. Os conjuntos embriogênicos higromicina-resistentes foram transferidos seqüencialmente para meios de proliferação D-20 (sem higromicina), maturação e regeneração. No total, foram obtidos 387 e 380 embriões histodiferenciados das cultivares MG/BR46 Conquista e IAS-5, respectivamente. Plantas transgênicas adultas e férteis foram regeneradas. Para avaliar a eficiência da estratégia de cotransformação, foram realizadas análises moleculares de embriões histodiferenciados e de plantas regeneradas. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram o cálculo da taxa de co-transformação de 44% para os embriões histodiferenciados da cultivar MG/BR46 Conquista e de 50% para plantas de IAS-5. Não existem, até o momento, relatos de trabalhos em soja utilizando embriões somáticos globulares em proliferação como alvo para estudos de co-transformação. / Aiming the increase of plant resistance to fungal disease, the present work was carried out with the objective of introducing a gene (chit1) coding a chitinase from Metarhizium anisopliae in soybean cultivars [Glycine max (L.) Merril]. Co-transformation was the strategy elected, in order to obtain marker-free transgenic plants in the progeny of transformed plants. Co-transformation was performed via biolistic using somatic globular embryo clusters of MG/BR46 Conquista and IAS-5 cultivars as target tissues. Plasmid pGusHyg, containg the reporter gusA gene and the selectable marker hpt gene, was co-delivered with the pMOG463chit1 plasmid containg the chit1 gene. Bombarded embryo clusters were transferred to selective medium containg hygromycin, aiming to obtain stable transformed material. Hygromycin-resistant embryogenic clusters were sequentially transferred to proliferation D20 (without hygromycin), maturation and regeneration media. A total of 387 and 380 histodifferentiated embryos were respectively obtained from MG/BR46 Conquista and IAS-5 cultivars. Transgenic adult fertile plants were regenerated. To evaluate the co-transformation eficiency, DNA from histodifferentiated embryos and from regenerated fertile plants was submitted to molecular analysis. Data obtained allowed us to calculate co-transformation frequencies of 44% and 50% for MG/BR46 Conquista and IAS-5 cultivars, respectively. As far as we are concerned there is no studies utilizing soybean somatic embryos for cotransformation via biolistic.

Microsporum canis é um dermatófito zoofílico e o fungo mais frequentemente isolado de cães e gatos, de crianças com tinea capitis e de adultos com tinea corporis. Ainda não se conhece as possíveis variáveis envolvidas no estabelecimento de infecções clínicas ou subclínicas em cães e gatos, assim como os fatores envolvidos na transmissão de M. canis para os seres humanos. Diversas técnicas de biologia molecular falharam em demonstrar variabilidade genética entre diferentes linhagens de M. canis, porém, estudos recentes indicam que a utilização de primers mais discriminatórios, como os marcadores microsatélites, possibilite a detecção de diferentes genótipos de M. canis. Os objetivos deste trabalho de pesquisa foram: identificar e comparar o genótipo de M. canis isolados de cães e gatos sintomáticos e assintomáticos e de seres humanos utilizando marcadores microssatélites e investigar uma possível correlação entre as características genotípicas e dados epidemiológicos de M. canis isolados de cães, gatos e seres humanos. Foram incluídos no estudo isolados de 102 cães e gatos sintomáticos e assintomáticos e de pacientes humanos com tinea nos quais se isolou o M. canis durante os anos de 2006 a 2010. Essas amostras foram provenientes de Curitiba, Porto Alegre, Florianópolis e Cuiabá. Dentre elas, 37 eram de gatos sintomáticos, 35 de gatos assintomáticos, 19 de pacientes humanos sintomáticos, 9 de cães assintomáticos e 2 de cães sintomáticos. A amplificação da região de microsatélites do DNA foi realizada utilizando dois primers, McGT13 e McGT17, a qual possibilitou a formação de grupos de acordo com o grau de similaridade genética baseada no número de repetições nessas duas regiões do DNA do M. canis. Os loci Mc(GT)13 e Mc(GT)17 revelaram 3 e 6 alelos, variando de 2 e 5 repetições de dinucleotídeos dentro de cada locus, respectivamente. Dos 14 genótipos e 5 grandes grupos formados após análise da árvore filogenética gerada pelo método Dc, 1 foi compartilhado por 26 isolados, outro por 21, um por 12 isolados e outros dois com 11 isolados cada um. Outros dois pequenos grupos foram formados com 7 e 5 isolados cada. Os marcadores microssatélites possibilitaram a identificação, o estudo filogenético e a comparação dos isolados de M. canis oriundos de gatos, cães e pacientes humanos incluídos no estudo. Apesar da formação de grupos geneticamente relacionados, não houve correlação entre as linhagens e os dados epidemiológicos analisados entre as isolados, incluindo fonte, sintomatologia, quadro clínico, raça, idade, sexo, moradia e localização geográfica. / Microsporum canis is a zoophilic dermatophyte and the most commonly isolated fungi from dogs, cats, children with tinea capitis and adults with tinea corporis. There are unknown variables in establishment of clinical or subclinical infection in dogs and cats and also in M. canis transmission to humans. Several molecular techniques failed to show genetic variability between different strains of M. canis, but recent studies indicate that the use of more discriminatories primers, as microsatellite markers, may detect different genotypes of this dermatophyte. This study has as objectives to identify and compare M. canis strains genotype isolated from symptomatic and asymptomatic dogs and cats and from people with dermatophytosis using microsatellite technique and to investigate a possible correlation between epidemiologic data and genotypic characteristics of M. canis isolated from dogs, cats and people. One hundred and two strains of M. canis isolated from symptomatic and asymptomatic dogs and cats and people with tinea between 2006 and 2010 were included in this study. These strains were from Curitiba, Porto Alegre, Florianópolis and Cuiaba. Among them, 37 were from symptomatic cats, 35 from asymptomatic cats, 19 from people with tinea, 9 from asymptomatic dogs and 2 from symptomatic dogs. Amplification of microsatellite DNA region was performed using two primers, McGT13 e McGT17, which allowed the formation of groups according to the degree of genetic similarity based on the amount of repetition in these two regions of M. canis DNA. Loci Mc(GT)13 e Mc(GT)17 revealed 3 and 6 alleles, varying between 2 and 5 dinucleotide repeats within each locus, respectively. Of the 14 genotypes and 5 major groups formed after phylogenetic tree analysis generated by DC method, 1 was shared by 26 strains, the other by 21, one by 12 strains and another two with 11 strains each. Microsatellite markers allowed identification, phylogenetic analysis and comparison of M. canis strains isolated from cats, dogs and people included in this study. Despite the formation of genetically related groups, there was no correlation between the lineage and epidemiologic characteristics, including source, symptoms, clinical picture, breed, age, sex, housing and geographical location.

O fungo filamentoso Bipolaris sorokiniana é um fitopatógeno que causa moléstias em cereais de inverno, tais como a mancha marrom, a ponta preta dos grãos e a podridão comum da raiz. O controle deste fungo é dificultado pelo fato do mesmo apresentar uma ampla variabilidade morfológica, fisiológica e genética. Assim sendo, os objetivos deste trabalho foram estudar a variabilidade fisiológica, genética e virulência de isolados de B. sorokiniana. Foram utilizados 35 isolados de B. sorokiniana e um isolado de B. orizae, provenientes de diferentes regiões geográficas do Brasil e de outros países. Inicialmente foi realizado o agrupamento dos isolados, conforme as características morfológicas e a medida da taxa de crescimento dos mesmos, separando-os em grupos morfológicos. Os isolados foram avaliados quanto à atividade enzimática em meio sólido, a virulência em sementes e plântulas de trigo e perfil de proteínas totais em gel SDS-PAGE. Com os resultados obtidos, cinco grupos morfológicos foram formados, com diferenças na coloração micelial e crescimento. Foram encontradas variações entre os isolados quanto à atividade enzimática, sendo a esterase a enzima que apresentou os mais altos índices de atividade. Os resultados do ensaio de virulência mostraram diferenças na porcentagem de sementes e plântulas infectadas, entre isolados da mesma região geográfica e grupo morfológico. O perfil de proteínas totais apresentou uma variação no número e intensidade das bandas no gel, onde algumas destas podem ser características da espécie. Também foi avaliada a incompatibilidade vegetativa entre os isolados, a influência de diferentes meios de cultivo sobre a incompatibilidade e a análise eletroforética de proteínas totais dos isolados, quando crescidos isoladamente e em reações de incompatibilidade e compatibilidade. Dos 31 cruzamentos de incompatibilidade realizados, 18 mostraram-se totalmente incompatíveis e essas reações apresentaram alterações nos diferentes meios de cultivo utilizados, evidenciando a influência do substrato nesta reação. Alguns isolados quando crescidos em condição de pareamento mostraram bandas mais intensas na eletroforese, sugerindo que algumas proteínas poderiam ser expressas em níveis mais elevados durante o co-cultivo. / Bipolaris sorokiniana is a phytopathogenic fungus that causes diseases in cereal crops, such as leaf spot disease, black point of the grain and common root rot. Because of its high morphological, physiological and genetic variability, the fungus control is a difficult task. The aim of this work was to study the physiological and genetic variability and the virulence of B. sorokiniana isolates. For this, 35 B. sorokiniana and one B. orizae isolates were used, proceeding from different geographic regions in Brazil and other countries. Initially, the isolates were evaluated for their morphological variability, considering mycelia color, sector formation, and growth rate. With this result the isolates were grouped by their morphologic characteristics. Extra-cellular enzymatic activity was analyzed in solid medium for all isolates, pathogenicity in wheat seeds and seedlings and analysis of total proteins by SDS-PAGE was done. Five morphological groups were formed with the results obtained with the morphological and growth characteristics. Variations among the isolates were found for enzymatic activity, and esterase was the enzyme that presented highest activity indices. The results obtained from infection of seeds and seedlings showed that isolates from the same geographic region and morphologic group had different degrees of virulence. The total protein profile presented by the isolates showed a variation in the bands number and intensity, where some of them can be characteristic of the specie. The vegetative incompatibility between the isolates was evaluated and the influences that different media culture in this reaction. The total proteins profile of the isolates was analyzed when the isolates were cultivated separately and in compatibility and incompatibility reactions. Thirty one crossings were realized and 18 out of them showed vegetative incompatibility, and theses reactions had presented alterations with different media culture. This result strongly suggests the influence of the substratum in this reaction. The isolates when pareated shown more intense protein bands in SDS-PAGE, suggesting that some proteins could be expressed in higher levels during co culture of the fungus.

As figueiras são encontradas em abundância no Parque de Itapuã, onde interagem com diversos organismos superiores e, potencialmente, com microrganismos. Os objetivos do presente trabalho foram isolar, identificar e avaliar o potencial biotecnológico de leveduras e fungos semelhantes a leveduras associados ao filoplano de figueiras no Parque de Itapuã, Viamão, RS. Foram realizadas 6 coletas em diferentes pontos do Parque de Itapuã durante o ano de 2005 e 2006. Fragmentos das folhas foram submetidos a lavagens sucessivas com 0,5% Tween 20. Diluições decimais seriadas da última lavagem foram inoculadas em meio YM modificado e incubadas a 25°C por 5-7 dias. Representantes dos diferentes morfotipos foram purificados e identificados de acordo com características morfológicas e testes bioquímicos - fisiológicos. Foi testada a produção de enzimas de interesse industrial (amilase, celobiase, caseinase, gelatinase e esterase), além de toxinas “killer” pelos isolados. Dos 175 isolados obtidos, 125 são leveduras verdadeiras e 50 fungos semelhantes a leveduras. As 125 leveduras isoladas pertencem a 45 espécies, sendo oito de afinidade ascomicética e 37 de afinidade basidiomicética. Sete isolados tiveram as regiões D1/D2 do 26S rDNA seqüenciadas, sendo que quatro pertencem a duas espécies ainda não descritas do gênero Bullera. Dos 175 isolados 29,1% produziram amilase, 46,3% caseinase e 9,7% gelatinase. Foram testados 138 isolados para verificar a atividade de esterase, sendo 81,5% produtores da enzima. Das 126 cepas testadas para produção de celobiase, 74,8% produziram a enzima. Aproximadamente 4,5% dos isolados de leveduras e fungos semelhantes a leveduras apresentaram atividade “killer”. Assim sendo, o filoplano de figueiras demonstra ser um bom substrato para o isolamento de leveduras, inclusive de novas espécies. Estas leveduras demonstram ter potencial para contribuir efetivamente para a inovação biotecnológica. / The fig trees are found in abundance in the Itapuã Park, where they interact with various higher organisms and, potentially, with microrganisms. The objectives of this study were to isolate, identify and evaluate the biotechnological potential of yeasts and yeast-like fungi associated with phylloplane of fig trees in the Itapuã Park, Viamão, RS. Six samples were performed at different points in the Itapuã Park during 2005 and 2006. Leaf pieces were submitted to successive washings with 0.5% Tween 20. Decimal serial dilutions from the last washing were inoculated in modified YM medium and incubated at 25° C for 5-7 days. Representatives of the different morphotypes were purified and identified according to morphological characteristics, physiological and biochemical tests. We tested the production of industrially interesting enzymes (amylase, cellobiase, caseinase, gelatinase and esterase), besides the production of killer toxins. Of the 175 isolates obtained, 125 are yeasts and 50 yeast-like fungi. The 125 yeasts isolated belong to 45 species, eight with ascomycetic affinity and 37 with basidiomycetic affinity. Seven isolates had their 26S rDNA D1/D2 regions sequenced and four belong to two yet undescribed species of the genus Bullera. Of the 175 isolates, 29.1% were positive for amylase, 46.3% for caseinase and 9.7% for gelatinase. One hundred and thirty-eight isolates were tested for esterase activity, and 81.5% were producers of the enzyme. Of the 126 strains tested for the production of celobiase, 74.8% produced the enzyme. Approximately 4.5% of the isolates of yeasts and yeast-like fungi had "killer" activity. Therefore, the phylloplane of fig trees demonstrates to be a good substrate for the isolation of yeasts, including new species. These yeasts have the potential to contribute effectively to the biotechnological innovation.

Objetivo: Comparar a presença de fungos na mucosa dos seios paranasais de pacientes com e sem rinossinusite crônica. Material e Métodos: Através de um estudo Tranversal, onde o desfecho foi a rinossinusite crônica e o fator em estudo a cultura para fungos, avaliou-se um amostra composta de 47 pacientes com rinossinusite crônica e um grupo controle com 28 pacientes. O material removido cirurgicamente dos seios paranasais foi avaliado através de exame direto e cultural. Resultados: Dos 47 pacientes com rinossinusite crônica, 8 (17,1%) apresentaram cultura positiva para fungo. Houve diferença estatisticamente significativa em relação a positividade das culturas entre o grupo com rinossinusite crônica e o grupo controle (p=0,002) e o grupo com rinossinusite crônica sem polipose nasossinusal e o grupo controle (p=0,004). Não houve, entretanto, diferença entre o grupo com rinossinusite crônica com polipose nasossinusal e o grupo controle (p=0,227). O gênero Aspergillus foi o fungo mais encontrado nas culturas positivas. Não houve diferença estatisticamente significativa entre a positividade das culturas e a presença de asma, intolerância a àcido acetilsalicílico, hiposmia e eosinofilia. Conclusões: Apesar de apenas 17,1% das culturas apresentarem positividade para fungo, os mesmos foram mais freqüentes nos pacientes com rinossinusite crônica. Isto evidencia, que, em alguns pacientes, possa existir associação entre fungo e rinossinusite crônica. / Objective: To compare the presence of fungi in the sinus mucosa of patients with and without chronic rhinosinusitis. Study design and setting: Cross-sectional study using conventional culture to detect fungi in the sinus mucosa. Surgical sinus mucosa samples were collected from 47 patients with chronic rhinosinusitis and 28 control subjects. Results: Fungi were detected in 17,1% of subjects with chronic rhinosinusitis and in none of the control subjects using conventional culture (p=0,002). There was statistically significant difference in the prevalence of fungi in the normal volunteers and patients with chronic rhinosinusitis without polyposis (p=0,004). There was no statistically significant difference in the prevalence of fungi in the normal volunteers and patients with chronic rhinosinusitis with polyposis (p=0,227). This study showed a predominance of Aspergillus sp from sinus mucosa sampling.There was no statistically significant difference in the prevalence of asthma, eosinophilia, acetilsalicilic intolerance and hiposmia and positive culture. Conclusion: Although 17,1% of the culture was positive for fungi, the same was more frequent in the patient with chronic rhinosinusitis. Fungi is probably important in the pathogenesis of chronic rhinosinusitis.

157 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-28T11:24:33Z No. of bitstreams: 1 Josileide Gonçalves Borges.pdf: 2770513 bytes, checksum: 6181b9ee40682864d2b94cb4fa3c3466 (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-01T17:48:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Josileide Gonçalves Borges.pdf: 2770513 bytes, checksum: 6181b9ee40682864d2b94cb4fa3c3466 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-01T17:48:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Josileide Gonçalves Borges.pdf: 2770513 bytes, checksum: 6181b9ee40682864d2b94cb4fa3c3466 (MD5) / FAPESB/CAPES / A biotecnologia é o conjunto de conhecimentos e técnicas que permite a utilização de seres vivos como parte integrante e ativa do processo de produção industrial e serviços. Os micro-organismos, incluindo os fungos filamentosos são amplamente utilizados na produção de enzimas e de biomassa microbiana, dentre outros, com ampla aplicação na indústria farmacêutica e de alimentos. Uma utilização inovadora é usar as enzimas fúngicas para degradar celulose de fibras vegetais e produzir nanofibras. Estas nanofibras são cristais de alta perfeição, que tem como características alta rigidez, excelente tensão de ruptura e alto grau de cristalinidade, podendo ser utilizados para melhorar as propriedades mecânicas dos filmes biodegradáveis. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram produzir e caracterizar novos bioprodutos, com enfoque na extração de celulases do Aspergillus niger para produção de nanofibras de celulose visando incorporá-las à nanobiocompósitos, e na biomassa extracelular obtida por fermentação submersa com fungo isolado do fruto de cacau com morte descendente. Foi selecionado o extrato enzimático bruto que apresentou melhor atividade, produzido por fermentação de bagaço de cana (7 dias, 35°C, pH 6,0) por Aspergillus niger, resultando em uma atividade específica de 12,18 U/ μg de proteínas. No entanto, o extrato enzimático apresentou condições ótimas de atividade em pH 5,0 a 30°C que foram usadas na hidrólise enzimática da polpa de celulose de eucalipto em diferentes condições. As nanofibras de celulose que apresentaram maior percentual de aumento da cristalinidade foi NFC2 (nanofibras produzidas com 90% de enzima por 120 min) com índice de cristalinidade (IC) de 75,58%. Os nanobiocompósitos contendo nanofibras de polpa de eucalipto apresentaram propriedades mecânicas melhoradas, quando comparadas a referência (filme sem incorporação de nanofibras). As nanofibras juntamente com o plastificante, foram responsáveis por aumentar em até 61% o módulo de Young dos nanobiocompósitos (F6, Filmes com nanofibras submetidas a pré-tratamento ácido diluído, 1%/15 min e hidrólise enzimática), em relação à referência, devido à rigidez destas nanopartículas. O fungo isolado do cacau foi identificado como Lasidioplodia theobromae e na fermentação de diferentes fontes de carbono produziu duas frações, uma precipitável em etanol e a outra separada por ultracentrifugação, que mostraram ser excelentes fontes de carboidratos (30,16 e 37,96%), proteínas (19,88 e 29,45%) e lipídios (11,07 e 28,79%). A composição de monômeros da fração polissacarídica, obtida por CLAE-IR, mostrou tratar-se de glucomananas. As nanofibras de celulose de polpa de eucalipto obtidas por hidrólise com celulases de Aspergillus niger, os nanobiocompósitos reforçados mecanicamente com estas nanofibras são alternativas viáveis de processo e produtos menos poluentes, e as frações do exopolímero obtido por fermentação com Lasidioplodia theobromae, são novos bioprodutos que podem ser destinados a uma grande variedade de aplicações biotecnológicas. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2012.

CORDEIRO, Rossana de Aguiar. Estratégias para o conhecimento da coccidioidomicose : uma doença emergente no nordeste brasileiro. 2006. 109 f. Tese (Doutorado) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Fortaleza, 2006 / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-06T15:52:40Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_racordeiro.pdf: 1752948 bytes, checksum: b5e5aa361d6e54b745c5d53d311964db (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-07T16:39:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_racordeiro.pdf: 1752948 bytes, checksum: b5e5aa361d6e54b745c5d53d311964db (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-07T16:39:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_racordeiro.pdf: 1752948 bytes, checksum: b5e5aa361d6e54b745c5d53d311964db (MD5) Previous issue date: 2006 / Coccidiodomycosis is a systemic infection caused by the dimorphic fungi species Coccidioides immitis and C. posadasii. The disease affects both humans and animals, and is considered endemic in the semiarid areas of Ceará State (Northeast Brazil), where it is caused by C. posadasii. The aims of this study were to analyse the phenotypical characteristics of C. posadasii and to develop culture independent methods for improving of the laboratorial diagnosis of coccidioidomycosis. The phenotypical study was conducted with 10 strains (7 from clinical and 3 from ambiental sources) by macro and micromorphology analyses; in vitro growth under different conditions of salinity, temperature and pH; nutritional analysis and antimicrobial susceptibility tests. In addition, methods of antigens extraction and amplification of C. posadasii DNA directly in sputum were also tested. The mycological analysis showed three morphological variations of C. posadasii strains cultivated in potato agar, Sabouraud agar and YEG agar. Regarding to micromorphology, it was observed that arthroconidia counts were related to colony aging and texture. Growth rates of C. posadasii strains were inhibited by high salt concentrations, temperatures above 40° C, but were not affected by the range of pH. Nutritional analyses showed that several compounds, including the oxidized ions, nitrite and nitrate, were efficiently metabolized by C. posadasii strains as carbon and/ or nitrogen sources. The antifungal susceptibility analysis showed that all of the strains of C. posadasii were sensitive to amphotericin B, caspofungin and the azoles ketoconazole, itraconazole, fluconazole, and voriconazole. With the exception of pyrazinamide, all of the tested drugs interfered with the in vitro growth of C. posadasii. Combined antituberculosis drugs also inhibit fungal growth in vitro. Experimental protocols produced a stable and immunoreactive antigen, suitable in presumptive serologic tests for the diagnosis of coccidioidomycosis. Molecular identification of C. posadasii was achieved by PCR amplification of the specific pra gene directly from filamentous cultures and sputum with fungal parasitic structures. The data obtained by phenotypical analyses may be useful in future studies for biological distinction of C. immitis and C. posadasii species. The results of this study provided approaches for a better understanding of coccidioidomycosis in Brazil / A coccidioidomicose é uma infecção sistêmica causada pelos fungos dimórficos Coccidioides immitis e C. posadasii. A doença acomete o homem e uma grande variedade de animais, sendo endêmica no Estado do Ceará, onde é causada pela espécie C. posadasii. O presente estudo buscou analisar as características fenotípicas de C. posadasii e desenvolver métodos independentes de cultivo para o diagnóstico laboratorial da coccidioidomicose. O estudo fenotípico de 10 cepas (7 isolados clínicos e 3 isolados ambientais) foi conduzido por análises macro e micromorfológica, análise da cinética de crescimento frente a estresse salino, térmico e de pH; testes de assimilação de fontes de carbono e nitrogênio e determinação do perfil de sensibilidade frente a antimicrobianos. Adicionalmente, foram avaliados métodos de extração de antígenos de cepas locais de C. posadasii e amplificação de seqüências genéticas exclusivas do fungo em escarro. Foram observadas três variações morfológicas das cepas de C. posadasii cultivadas em ágar batata, ágar Sabouraud dextrose a 2% e ágar YEG. Com relação a micromorfologia, foi detectado que a quantificação de artroconídios estava relacionada à idade e a morfologia das colônias. A avaliação da cinética de crescimento das cepas, in vitro, revelou que as cepas de C. posadasii são inibidas por elevada concentração salina e temperaturas acima de 40 C, mas não sofrem influência quanto à variação de pH do meio. A análise nutricional demonstrou que vários compostos, inclusive os íons oxidados nitrito e nitrato, podem ser utilizados como fontes de carbono e/ou nitrogênio. Todas as cepas de C. posadasii foram sensíveis às drogas antifúngicas anfotericina B, caspofungina e aos derivados azólicos cetononazol, itraconazol, fluconazol e voriconazol. Foi observado que, a exceção da pirazinamida, todos as demais drogas antituberculose alteraram o crescimento das cepas de C. posadasii in vitro. Combinações formadas pelos quimioterápicos antituberculose também mostraram efeito inibitório sobre o crescimento das cepas. Os protocolos experimentais culminaram com uma preparação antigênica estável e imunoreativa, adequada para utilização em testes sorológicos presuntivos para diagnóstico da coccidioidomicose. A identificação molecular de C. posadasii foi realizada, com sucesso, a partir da amplificação da seqüência do gene pra diretamente de culturas filamentosas e escarro contendo estruturas parasitárias do fungo. Acredita-se que as características fenotípicas descritas para as cepas de C. posadasii poderão auxiliar estudos futuros que objetivem a individualização biológica das espécies C. immitis e C. posadasii. Os resultados desse estudo contribuíram para o estabelecimento de estratégias para o maior conhecimento da coccidioidomicose no Brasil

PAIVA, J. R. Estudo do potencial biocatalítico do fungo Rhizopus stolonifer na biotransformação de produtos naturais. 2014. 75 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-17T19:43:15Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_jrpaiva.pdf: 3168577 bytes, checksum: 2dccc004cc1f31dfdf97995945f8f1db (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-22T19:59:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_jrpaiva.pdf: 3168577 bytes, checksum: 2dccc004cc1f31dfdf97995945f8f1db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-22T19:59:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_jrpaiva.pdf: 3168577 bytes, checksum: 2dccc004cc1f31dfdf97995945f8f1db (MD5) Previous issue date: 2014 / In this work the biocatalytic potential of the fungus Rhizopus stolonifer a phytopathogenic fungus in biotransformations of natural secondary metabolites was investigated Two of these metabolites the diterpene 3,12-dioxo-15,16-epoxy-4-hydroxycleroda-13(16),14-diene and the phenolic derivative 6-gingerol was biotransformed and their products was isolated and quantified by HPLC The structural determination of biotransformation products was obtained by analysis of 1H NMR 13C NMR 13C-NMR DEPT 135 IV and MS spectrum The products were obtained by a biorreduction process revealing the potential of this fungus in selective reduction of unconjugated carbonyl groups The products from bioreduction were submitted to antitumor assay against human tumor cell lines OVCAR-8 (ovarian) SF-295 (glioblastoma) and HCT-8 (colon) The biotransformation product 6-gingerdiol showed the highest percentage of inhibition of cell growth: 91,83; 70,90 e 78,56, respectively / Neste trabalho investigou-se o potencial biocatalítico do fungo Rhizopus stolonifer um fungo fitopatogênico em biotransformações de metabólitos secundários naturais Dois desses metabolitos, o diterpeno 3,12-dioxo-15,16-epoxi-4-hidroxicleroda-13(16),14-dieno e o derivado fenólico 6-gingerol foram biotransformados e seus respectivos produtos isolados e quantificados por CLAE A elucidação estrutural dos produtos de biotransformação pelo fungo Rhizopus stolonifer foram realizadas por análise dos espectros de RMN 1H RMN 13C RMN 13C-DEPT 135 IV e EM Identificou-se que os produtos obtidos eram provenientes de uma biorredução revelando o potencial deste fungo na redução quimio e regiosseletivas de grupos carbonilas não conjugados Realizou-se o estudo cinético dos produtos de biorredução por CLAE e ensaios citotoxicidade frente às linhagens tumorais humanas OVCAR-8 (ovário) SF-295 (glioblastoma) e HCT-8 (cólon) O produto biorreduzido 6-gingerdiol apresentou os melhores percentuais de inibição do crescimento celular: 91,83; 70,90 e 78,56 respectivamente