Os fungos fitopatogênicos pertencentes ao gênero Fusarium são conhecidos causadores de doenças de plantas em diversos hospedeiros. Dentre os quais se destaca o tomateiro, atacado pelas três raças conhecidas de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), causadoras da murcha vascular. Para o controle dessa doença, o emprego de microrganismos, como os isolados antagonistas de Trichoderma sp. pode ser uma alternativa ao emprego de agroquímicos. No presente trabalho foi avaliada a patogenicidade de dez isolados de Fol em cultivares diferenciadoras de tomateiro, sendo que apenas quatro se mostraram patogênicos a cultivar suscetível, e nenhum deles foi diagnosticado como pertencente à raça 3. Os resultados obtidos nos testes de confronto direto com os isolados de Trichoderma sp. apresentaram alta variabilidade em relação à capacidade micoparasítica, com os melhores resultados de sobreposição para os isolados T3, T8 e T17. Nestes casos foi observada evidência de sobreposição da colônia do hospedeiro para pelo menos seis dos nove isolados antagonistas. Em relação à capacidade inibitória destes isolados, os resultados de maior inibição de crescimento da colônia do fitopatógeno foram obtidos para os isolados T2 e T3. A linhagem 34970 de Fol foi a mais resistente às ações antagonistas dos isolados de Trichoderma sp., e o isolado TO 11 sofreu as maiores médias de inibição. Em teste de produção de metabólitos voláteis somente os isolados Fusarium 23, Fusarium 27 e 34970 de Fol, foram inibidos após 120 horas de teste. No controle biológico da fusariose do tomateiro, provocada pelo isolado TO 245 de Fol, as plântulas tratadas com os isolados T6 e T17 de Trichoderma sp. apresentaram menor incidência de doença, com notas iguais a 1,25 e 0,75 respectivamente em comparação a 1,87 do grupo controle, de acordo com a escala de severidade de doença de Vakalounakis et al. (2004). Os tratamentos com os isolados T6 e T17 em substrato contaminado com o isolado 1205/2 de Fol apresentaram valor de 0,50 e 0,38, de acordo com a escala, em comparação com 0,50 do tratamento controle. As médias de alturas, comprimento e peso seco das raízes não apresentaram diferença estatística para nenhum dos tratamentos, porém o peso seco da parte aérea foi significativamente maior para as plantas tratadas com o isolado T6 em substrato infestado pelo isolado 1205/2 de Fol. Todos os isolados patogênicos pareados com as linhagens padrão dos grupos de compatibilidade vegetativa apresentaram sinais de heterocariose com a linhagem padrão 34970 correspondente ao GCV 0030, indicando uma possível similaridade genética entre os isolados utilizados. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-16T11:38:53Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Carolina Fialho Pereira.pdf: 2001718 bytes, checksum: 632dd2c23a45df8ec1d67dd4cb96810f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-16T11:38:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Carolina Fialho Pereira.pdf: 2001718 bytes, checksum: 632dd2c23a45df8ec1d67dd4cb96810f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Phytopathogenic fungi belonging to Fusarium genera are known as the agents responsible of many diseases in plants. Among these, tomato plants are attacked by the 3 races of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), which causes vascular wilt. To control this disease, many techniques have been employed, mostly the use of resistant cultivars and chemical fungicides. Alternatively, the use of antagonistic microorganisms for biological control and decrease of inoculum of plant pathogens by introducing mass production of Trichoderma sp. has been studied for many years. In this study we evaluated the pathogenicity of 10 isolates of Fol on differential cultivars of tomato, where only four of ten isolates proved pathogenic to susceptible cultivar to this disease and none of which was diagnosed as belonging to race 3. The results obtained in tests of direct confrontation with Trichoderma sp. isolates showed high variability in relation to mycoparasitism, with the best results for agressiveness the isolates T3, T8 and T17. In these cases it was observed evidence of growth of the host colony for at least six of nine isolates tested. Regarding the inhibitory effect of these isolates, the results of greater inhibition of colony growth of plant pathogenic fungus were obtained for the isolated T3 and T2. The strain 34970 of Fol was the least inhibited by isolates of Trichoderma sp., and isolated TO 11 showed the highest average of inhibition. With regards to the production of volatile metabolites, only the isolates Fusarium 23, Fusarium 27 and 34970 of Fol were inhibited after 120 hours of testing. In the biological control of Fusarium wilt of tomato caused by isolate TO 245, seedlings treated with isolates T6 and T17 of Trichoderma sp. showed a lower incidence of disease, with 1.25 and 0.75 respectively compared to 1.87 of the control group in accordance with scale of severity of disease by Vakalounakis et al. (2004). The treatments with the isolates T6 and T17 in substrate inoculated with isolate 1205/2 showed values of 0.5 and 0.375 according to the scale, compared with 0.5 in the control treatment without the presence of Trichoderma sp. The average height, length and dry weight of roots did not differ significantly for any treatment. The dry weight of shoot was significantly higher for plants treated with isolate T6 in substrate infested by the isolated 1205/2. All the pathogenic isolates of Fol were paired with the standard strains of vegetative compatibility groups and showed signs of heterokaryosis with the standard strain 34970 corresponding to VCG 0030, indicating a possible genetic similarity among the isolates used.

Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-11-28T11:32:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Claudia Bruscato.pdf: 128333 bytes, checksum: 7a4b48725acb871afa7e2d357f04dc0f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-28T11:32:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Claudia Bruscato.pdf: 128333 bytes, checksum: 7a4b48725acb871afa7e2d357f04dc0f (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq

Orientador: Sandra Mara Martins Franchetti / Banca: José Carlos Marconato / Banca: José Augusto Marcondes Agnelli / Resumo: Os plasticos constituem um dos materiais mais utilizados em nosso cotidiano. Assim, os residuos plasticos tem aumentado bastante e hoje representam 20% do total do volume de residuos, em lixoes municipais. O PVC (policloreto de vinila) e um polimero sintetico, instavel em relacao ao calor e luz, que degrada a temperatura relativamente baixa (aproximadamente 130oC), e libera HCl. A desidrocloracao gera novas especies na cadeia polimerica, ou seja, sequencias de polienos que podem ser verificadas atraves da espectroscopia de absorcao na faixa do UV-Visivel. A reciclagem do PVC apresenta algumas dificuldades intrinsecas ao comportamento do polimero, durante o processo tecnologico e, alem disso, sua biodegradacao e dificil. O PCL (poli α-caprolactona), um poliester sintetico, e sensivel a acao de enzimas microbianas, e pode sofrer hidrolise e degradacao. A mistura desses polimeros, isto e, a blenda de PVC e PCL pode constituir um meio para facilitar o ataque microbiano ao PVC, alem de melhorar ou manter as propriedades mecanicas da blenda. Processos termo e fotodegradativos podem facilitar o ataque microbiano a matriz polimerica do PVC. O presente trabalho pretende investigar a termo, foto e biotransformacao de filmes de blendas de PVC/PCL 1:1 e 3:1 com fungos de solo (Phanerochaete chrysosporium e Aspergillus fumigatus). As mudancas estruturais foram analisadas atraves da espectroscopia de absorcao no infravermelho (FTIR) e no UV-Visivel e as mudancas morfologicas, atraves de Microscopia Eletronica de Varredura (MEV) / Abstract: The plastics are one of used the most materials daily. Thus, the plastics wastes have increased considerably and today represent 20% of the waste total volume in the municipal landfills. PVC (poly vinyl chloride) is a synthetic polymer, unstable in the presence of heat and light, that degrades on relative low temperature (approximately 130ºC), and releases HCl. The dehydrochlorination produces new species on polymeric chain, thus, polyenes sequences, that can be checked by the UV-Visible absorption spectroscopy. The recycling of PVC presents some difficulties due its behaviour during the technological processing and its biodegradation is difficult. PCL (polycaprolactone), a synthetic polyester is susceptible to enzymes action, and undergo hydrolysis and degradation. The blend of PVC and PCL can be one way to facilitate the microorganisms attack to the PVC polymer and to improve the mechanical properties of the blend. Thermal and photodegradation process can to facilite the microorganisms attack on PVC polymeric chain. The present work intends to investigate the thermal, photo and biotransformation of polymer films and blends of PVC/PCL 1:1 and 3:1 blends, with soil fungi (Phanerochaete chrysosporium and Aspergillus fumigatus). The structural changes were analysed by infrared absorption spectroscopy (FTIR) and the UV-Visible. The morphologics changes were investigated by scanning electron microscopy (SEM) / Mestre

Resumo: Fungos do grupo das leveduras negras têm revelado grande potencial em degradar compostos aromáticos como únicas fontes de carbono, capacidade de sobreviver sob atmosferas contendo hidrocarbonetos e habitar nichos com baixa concentração de nutrientes. Apesar do potencial de aplicação destes nas áreas ambiental e industrial, sua ecologia é pouco conhecida e seu isolamento na natureza ainda é difícil. A técnica de flotação em óleo (IWATSU et al., 1981) é aplicada com sucesso para recuperação de leveduras negras provenientes da natureza. No entanto, os mecanismos envolvidos neste método são desconhecidos. Assim, neste trabalho, testaram-se três hipóteses de seleção da técnica: hidrofobicidade celular, assimilação de hidrocarbonetos e oligotrofismo. A metodologia foi aplicada em amostras de solo de "landfarming" da Refinaria do Planalto Paulista (REPLAN). Cepas isoladas e padrão foram submetidas aos testes para verificação das hipóteses formuladas. A hidrofobicidade celular das cepas foi verificada mediante quantificação da concentração celular da suspensão na fase oleosa após agitação com hidrocarboneto. Os testes de assimilação de hidrocarbonetos e oligotrofismo foram realizados mediante análises de curvas de crescimento obtidas por leituras de absorbância. Os resultados obtidos mostraram que o solo de "landfarming" é um local propício para o estudo de leveduras negras, uma vez que 107 cepas foram recuperadas e a análise molecular revelou uma espécie nova: Cladophialophora immunda. O teste de hidrofobicidade indicou que, a hidrofobicidade celular pode não ser o principal fator seletivo, pois espécies hidrofóbicas e hidrofílicas foram recuperadas pela técnica em estudo. A maioria das cepas de leveduras negras testadas apresentou crescimento em meio contendo hidrocarbonetos como fontes únicas de carbono,...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Black yeast fungi have shown great potential to degrade aromatic hydrocarbons as single carbon source, ability to survive under atmospheres with hydrocarbons and to live in niches poor in nutrient. Despite the application potential of these fungi in the environmental and industrial areas, the knowledge about their ecology is incomplete and their isolation from nature is still difficult. The oil flotation technique (IWATSU et al., 1981) has been succeed on the black yeast strains recovery from nature, however, mechanisms involved in this method are still unknown. The present study tests three hypothesis on its selective mechanisms: cell surface hydrophobicity, hydrocarbon assimilation and oligotrophism. The methodology was applied in landfarming soil samples from Planalto Paulísta Refinery (REPLAN). Six isolates and control strains were submitted to experiments to verify the hypothesis done. Hydrophobicity was studied through quantification of oil-phase cell concentration after shaking the cell suspension with hydrocarbon. Hydrocarbon assimilation and oligotrophism were verified by analyzing the growth curves obtained with absorbance data. The results showed that landfarming soil has great potential for black yeast isolation, as 107 strains were recovered and a new species - Cladophialophora immunda- was revealed by molecular analyzes. Hydrophobicity test showed that cell hydrophobicity could not be the main selective factor, since hydrophobic and hydrophillic strains were recovered. Growth in media with hydrocarbons as sole carbon source was observed in the majority of the tested black yeast strains, indicating that hydrocarbon assimilation or tolerance to these substances could be the selective factors of the method. Exophiala xenobiotica was able to grow in the poor media tested, what suggests that this substrate with the addition of hydrocarbons could be used for the isolation...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Derlene Attili de Angelis / Coorientador: Dejanira de Francechi de Angelis / Banca: Rosely Ana Piccolo Grandi / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Mestre

A rinossinusite crônica é uma doença complexa, com etiologia multifatorial. O seu manejo é controverso, principalmente no paciente pediátrico. O tratamento preconizado é a antibioticoterapia empírica, embora o papel da infecção bacteriana não esteja completamente definido na patogênese da rinossinusite crônica. A técnica de coleta de secreção considerada padrão áureo é a punção do seio maxilar via fossa canina. Entretanto, provoca dor, necessita da colaboração do paciente, pode causar dano ao nervo infraorbitário e em crianças, pode lesionar brotos dentários. Além disso, principalmente em pacientes pediátricos, requer sedação ou anestesia geral e identifica apenas germes restritos ao seio maxilar. A visualização do meato médio, considerado área-chave da doença rinossinusal, através de endoscópios, permite a coleta de amostras com desconforto mínimo e a execução de culturas e testes de sensibilidade. Este estudo visou determinar a microbiologia do meato médio por meio de coleta sob visão endoscópica em crianças com rinossinusite crônica bem como testar a sensibilidade dos germes identificados. Foram incluídos na pesquisa 39 pacientes pediátricos com sinais e sintomas de rinossinusite por mais de 3 meses, cujas endoscopias nasais evidenciaram secreção no meato médio e com tomografia computadorizada demonstrando comprometimento dos seios paranasais. Um grupo de 94 adultos com rinossinusite crônica (RSC) foi estudado paralelamente. Os germes mais freqüentemente encontrados no grupo das crianças foram o Streptococcus pneumoniae (33%), a Moraxella catharralis (23%) e oHaemophilus influenzae (21%). O Streptococcus pneumoniae foi resistente a sulfametoxazol-trimetropim em 23% e à penicilina em 17% das amostras. Cepas produtoras de beta-lactamase foram encontradas em 67% e 12,5% das amostras de Moraxella catharralis e Haemophilus influenzae, respectivamente. Nos adultos, o Staphylococcus aureus e o Staphylococcus coagulasenegativo foram os germes mais freqüentes, e apresentaram 83 % e 89 % de resistência à penicilina, respectivamente. Bactérias Gram-negativas e Streptococcus pneumoniae foram estatisticamente mais freqüentes no grupo das crianças. Haemophilus influenzae e Staphylococcus coagulase negativo foram os germes que apresentaram diferença estatisticamente significativa em relação à resistência antimicrobiana entre crianças e adultos, sendo mais resistentes nestes últimos. / Chronic rhinosinusitis is a complex disease and its etiology multifactorial. Its management is controversal, especially in the pediatric population. Although bacterial infection is not totally defined in its pathogenesis the recomended treatment is still empiric antibiotics. The gold standard technique to obtain secretion for culture is piercing the maxillary sinus through the canine fossa. It needs patient´s colaboration, may damage the infraorbitary nerve and, in children, may hurt the teeth buds. In children it may also require sedation or general anesthesia, and it can only help identify microorganisms restricted to the maxillary sinuses. Visualization through the middle meatus, considered the key area for the rhinosinusal disease, through endoscopy, permits the collection of samples for culture, with minimum discomfort. This study tried to determine the microbiology of the middle meatus through collection of samples for culture and sensitivity testing under direct endoscopic vision in children with chronic rhinusinusitis. Thirty nine children and ninety four adults with signs and symptoms attributable to rhinosinusitis for longer than three months were included in this study. All patients had nasal endoscopy with evidence of secretion in the middle meatus and computed tomography showing envolvment of the paranasal sinuses. The microorganisms most frequently encountered among children were: Streptococcus pneumoniae 33%, Moraxella catharralis 23%, Haemophilus influenzae 21%. Streptococcus pneumoniae was resistant tosulfametoxazol-trimetropim in 23%, and to penicillin in 17% of the samples. Beta-lactamase producing organisms were found in 67% of Moraxella catharralis and 12,5% of the Haemophilus influenzae samples. In adults, Staphylococcus aureus and Staphylococcus coagulase negative were the most frequently found bacteria and were resistant to penicillin in 83% and 89% respectively. Gram-negative bacteria and Streptococcus pneumoniae were statistically most frequent in the children group. Haemophilus influenzae and Staphylococcus coagulase negative showed a statistically significant diference regarding resistance to antimicrobials, between children and adults, being more resistant in the latter.

Dissertação (mestrado)—Universidade Brasília, Instituto de Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Gabriela Botelho (gabrielabotelho@bce.unb.br) on 2012-07-11T18:08:22Z No. of bitstreams: 1 2012_AmandaRochaMortoza.pdf: 1061965 bytes, checksum: f6a12b9f2b8fce76ff9bb1aaa8b5cb4e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-13T11:24:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AmandaRochaMortoza.pdf: 1061965 bytes, checksum: f6a12b9f2b8fce76ff9bb1aaa8b5cb4e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-13T11:24:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AmandaRochaMortoza.pdf: 1061965 bytes, checksum: f6a12b9f2b8fce76ff9bb1aaa8b5cb4e (MD5) / Lactase é o nome popularmente utilizado para a enzima β-galactosidase (E.C.3.2.1.23). As β-galactosidases são encontradas na natureza em vegetais, animais e microrganismos, sendo que suas características variam de acordo com sua origem. A literatura apresenta várias enzimas produzidas por fungos e outros microrganismos com ação de interesse biológico que foram purificadas e caracterizadas. Com a melhoria no conhecimento e na purificação de enzimas, novas possibilidades de processos industriais e aplicações na saúde humana surgiram. Neste contexto, a β-galactosidase é uma importante enzima produzida por microrganismos que desperta grande interesse à saúde, pois quando ausente no organismo dos mamíferos a lactose consumida não é digerida. A ingestão oral direta da β-galactosidase por pessoas intolerantes a lactose é uma forma diferente de aplicação da β-galactosidase, visando à digestão da lactose do leite e seus derivados. Além da ingestão da β-galactosidase, esta enzima também está sendo aplicada na indústria de laticínios para hidrolisar a lactose do leite obtendo-se, assim, alimentos com baixos teores de lactose, melhorando a solubilidade e digestibilidade do leite e derivados lácteos, ideais para consumidores intolerantes à lactose. Esta aplicação dá origem a novas pesquisas nesta área, na procura de β-galactosidase com características favoráveis ao ambiente gástrico ou indicadas para o uso industrial. Neste trabalho o fungo Aspergillus foetidus isolado do Cerrado expressou a enzima β-galactosidase em meio líquido contendo resíduo de soja como fonte de carbono após sete dias de fermentação a 28°C. A enzima produzida extracelularmente foi purificada por sistema micelar de duas fases aquosas. A melhor condição de purificação foi obtida com sistema formado por 8%(p/p) Triton X-114, 10%(p/p) caldo fermentado e 28°C como temperatura de incubação. Nesta condição, 89,8% da atividade enzimática adicionada ao sistema foi recuperada na fase pobre em micelas. A caracterização bioquímica da enzima presente na fase pobre em micela revelou um pH ótimo igual a 2,6 e uma temperatura ótima igual a 60°C, valores que favorecem a aplicação industrial da β-galactosidase purificada. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Lactase is the name popularly used for the enzyme β-galactosidase (EC3.2.1.23). β-galactosidases are found naturally in plants, animals and microorganisms, and their characteristics vary according to their origin. The literature contains several enzymes produced by fungi and other microorganisms which shows biological activity. Such enzymes have been purified and characterized. With growing knowledge and greater enzyme purification, new possibilities for applications in industrial processes and human health have emerged. In this context, the β-galactosidase is an important enzyme produced by microorganisms that attracts great interest to health, because when absent in the body of mammals the ingested lactose is not digested. The direct oral intake of β-galactosidase by lactose intolerant people is a different form of application of the enzyme in order to digest lactose present in milk and dairy products. Besides the intake of β-galactosidase, this enzyme is also being applied in the dairy industry to hydrolyze the lactose in milk yielding foods with lactose low levels, improving the solubility and digestibility of milk and dairy products, which is ideal for lactose intolerant consumers. This application gives rise to new research in this area, in the search for β-galactosidase with favorable characteristics to the gastric environment or suitable for industrial use. In this work the fungus Aspergillus foetidus isolated from the Cerrado expressed the enzyme β-galactosidase in liquid medium containing soybean waste as carbon source after seven days of fermentation at 28 °C. The enzyme produced in the medium was purified by aqueous two-phase micellar system. The best condition was obtained in a purification system consisting of 8% (w/w) Triton X-114, 10% (w/w) fermentation broth and 28 °C as incubation temperature. In this condition, 89.8% of enzyme activity added to the system was recovered in the micelle-poor phase. The biochemical characterization of the enzyme present in the micelle-poor phase revealed an optimum pH equal to 2.6 and an optimum temperature equal to 60 °C, favoring the industrial application of purified β-galactosidase.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-05-13T13:38:11Z No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-15T11:34:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-15T11:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5) / Cryptococcus neoformans é um fungo encapsulado patogênico humano que afeta principalmente indivíduos imunossuprimidos. Sua cápsula é um dos mais importantes fatores de virulência, e está envolvida com os processos de evasão da resposta imune e disseminação no hospedeiro. Neste trabalho foi investigado a ativação do inflamassoma por C. neoformans e o papel de sua cápsula nesse processo. Observou-se que o mutante acapsular de C. neoformans induziu elevados níveis da secreção de IL-1β e ativação da protease caspase-1. A secreção de IL-1β foi analisada em macrófagos derivados de medula deficientes para as proteínas ASC, caspase-1, NLRP3 e NLRC4, demonstrando que essa secreção depende do inflamassoma NLRP3, mas não de NLRC4. Além disso, os componentes do inflamassoma se mostraram dispensáveis para fagocitose e atividade antifúngica frente a infecção. Os mecanismos envolvidos no processamento de IL-1β foram dependentes de catepsina B frente ao dano lisossomal e sinalização via quinase Syk. Foi demonstrado também que a sinalização por IL-1β não aumenta a atividade antifúngica de macrófagos. No entanto, ela participa na restrição da taxa de infecção por mecanismos desconhecidos. Estes resultados mostram pela primeira vez que C. neoformans ativa o inflamassoma NLRP3 de forma dependente de caspase-1 através da liberação de catepsina B e sinalização via Syk, levando a produção de IL-1β e restrição da taxa de infecção. Adicionalmente, esses dados demonstram que os isolados encapsulados conseguem diminuir a ativação do inflamassoma. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryptococcus neoformans is an encapsulated human pathogenic fungus that affects primarly immunocompromised individuals. It has a prominent capsule that is an important virulence factor, which is involved in immune response evasion and fungal dissemination. In the present study we investigated whether C. neoformans was able of triggering inflammasome activation and the role of its capsule in this event. The results showed that the acapsular mutant induced high levels of IL-1β secretion and caspase-1 activation. IL-1β -/- -/-secretion induced by C. neoformans was assessed in WT, Asc , Casp1 , -/- -/- Nlrp3 and Nlrc4 bone marrow-derived macrophages, showing IL-1β secretion to be dependent on NLRP3, but independent on NLRC4 inflammasome. In addition, inflammasome components were dispensable for C. neoformans uptake or killing. The mechanisms underlying IL-1β processing and release were dependent on cathepsin B release following lysosomal destabilization and Syk tirosine kinase signaling. We also demonstrate that IL- 1β signaling is not required to restrict intracellular yeast, but limited the rate of infection by an unknown mechanism. Together, our data show for the first time that acapsular C. neoformans activates the NLRP3 inflammasome and IL-1β secretion in a caspase-1 dependent manner and that the mechanisms involved in this event rely on cathepsin B released during lysosomal damage and Syk signaling, leading to restriction of infection rate. Furthermore, our results show that encapsulated C. neoformans is able to dimish inflammasome activation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2008. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-09-29T13:57:27Z No. of bitstreams: 1 2008_CesarMarcosMarcello.pdf: 1454599 bytes, checksum: a756918626271ef79f64ecdf6eae900c (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-02-02T23:01:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_CesarMarcosMarcello.pdf: 1454599 bytes, checksum: a756918626271ef79f64ecdf6eae900c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-02-02T23:01:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_CesarMarcosMarcello.pdf: 1454599 bytes, checksum: a756918626271ef79f64ecdf6eae900c (MD5) Previous issue date: 2008-08 / Espécies do gênero Trichoderma têm sido encontrados atacando uma grande variedade de fungos patogênicos e usados como agente de biocontrole. A maioria das preparações a base de Trichoderma, utilizadas comercialmente para controle biológico, são de Trichoderma atroviride ou Trichoderma harzianum. Entretanto, Trichoderma asperellum, uma espécie pouco estudada, é um efetivo agente de controle biológico contra alguns fungos patogênicos. A interação de T. asperellum com Rhizoctonia solani é característica de micoparasitismo, envolvendo crescimento em direção ao hospedeiro, produção de estruturas semelhantes à apressórios e enrolamento das hifas. A maioria dos fungos fitopatogênicos possui parede celular contendo quitina, organizada em camadas regularmente ordenadas e ß-1,3-glucanas arranjadas como um enchimento de maneira amorfa. Quitinases e ß-1,3-glucanases tem sido diretamente envolvidas nas interações de micoparasitismo entre espécies de Trichoderma e seus hospedeiros. Neste trabalho nós apresentamos a análise da expressão de exo-ß-1,3-glucanases produzidas por T. asperellum durante o crescimento em diferentes fontes de carbono. Também demonstramos que a expressão do gene tag83 ocorre quando o T. asperellum cresce sob simulação de antagonismo contra R. solani. Estudamos a regulação do gene codante da exo-ß-1,3-glucanase extracelular (tag83) produzida pelo micoparasita T. asperellum. Foi detectada atividade enzimática em todas as fontes de carbono avaliadas, com níveis elevados encontrados quando amido e parede celular de R. solani foram utilizados. Estes resultados são apoiados pela presença de uma forte banda com atividade enzimática em gel nãodesnaturante (PAGE). Experimentos utilizando RT-PCR demonstrou que a indução da exo-ß-1,3-glucanase em T. asperellum ocorrem em nível transcricional. Também utilizamos RT-PCR e PCR em tempo real para analisar a expressão do gene tag83 durante ensaio in vivo do T. asperellum contra R. solani. Demonstramos ainda que a expressão de tag83 está significativamente aumentada na presença de R. solani. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Species of the genus Trichoderma have been found to attack a wide range of plant-pathogenic fungi and have been used as biocontrol agents. The majority of Trichoderma preparations used commercially for biological control are Trichoderma atroviride or Trichoderma harzianum. However, Trichoderma asperellum, a less well studied species, is also an effective biological control agent against some phytopathogen fungi. The interaction of T. asperellum with Rhizoctonia solani is characteristically mycoparasitic, involving growth along the host hyphae, production of appressoria-like structures and coiling. Most phytopathogenic fungi have cell wall that contain chitin as a structural backbone arranged in regularly ordered layers and â-1,3-glucan as a filling material arranged in an amorphous manner. Chitinases and â-1,3-glucanases have been found to be directly involved in the mycoparasitism interaction between Trichoderma species and its hosts. In this study, we reported the analysis of expression of the exo-ß-1,3-glucanase encoding gene tag83 produced by T. asperellum during growth in different carbon sources. We also show that expression of tag83 gene occurs when T. asperellum grows under simulated antagonism against R. solani. The regulation of the gene encoding the extracellular exo-â-1,3-glucanase (tag83) produced by the mycoparasite Trichoderma asperellum was studied. Enzyme activity was detected in all carbon sources, but highest levels were found when starch and purified cell walls from Rhizoctonia solani were used. These results are supported by the appearance of one strong band with enzyme activity in non-denaturing PAGE. Experiments using RT-PCR showed that exo-ß-1,3-glucanase induction in T. asperellum occurred at the transcriptional level. We used RT-PCR and real-time PCR analysis to examine the expression of tag83 gene during in vivo assay of T. asperellum against R. solani. We showed that the expression of tag83 is significantly increased by the presence of R. solani.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-09-29T18:45:29Z No. of bitstreams: 1 Dissert_Viviane Furlan.PDF: 1488185 bytes, checksum: 9382c9b43bf0e5df184ad2e6b2f4035d (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-02-04T22:29:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_Viviane Furlan.PDF: 1488185 bytes, checksum: 9382c9b43bf0e5df184ad2e6b2f4035d (MD5) / Made available in DSpace on 2010-02-04T22:29:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_Viviane Furlan.PDF: 1488185 bytes, checksum: 9382c9b43bf0e5df184ad2e6b2f4035d (MD5) Previous issue date: 2008-03 / A proteína CTLA-4 é expressa principalmente em células T ativadas, possuindo um papel fundamental na resposta imune, exercendo efeito regulador na ativação de célula T através da sua ligação com as moléculas da família B7, as quais são expressas em células apresentadoras de antígenos. Polimorfismos no gene CTLA-4 têm sido associados a várias doenças autoimunes e, recentemente, à doenças neoplásicas e infecciosas. A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas desta doença estão associadas a vários fatores como a secreção alterada de citocinas, hipergamaglobulinemia, e depressão da imunidade celular, sendo que a hiporesponsividade é também atribuída a uma maior expressão de CTLA-4 em células T de pacientes quando comparados a indivíduos controles. O presente trabalho teve por objetivo estudar a possível associação dos SNPs -318C/T na região promotora e +49A/G do éxon 1 do gene CTLA-4 com a PCM. Para isso, 74 pacientes com PCM e 76 indivíduos controles provenientes de regiões distintas do País tiveram suas freqüências alélicas e genotípicas determinadas. A comparação das freqüências genotípicas e alélicas, entre os grupos pacientes e controles, não mostrou diferenças significativas que pudessem associar o polimorfismo dos SNPs -318 e +49 do gene CTLA-4 com a PCM. A análise dos resultados referentes às freqüências haplotípicas obtidas mostrou que existe um forte desequilíbrio de ligação (D'=1) entre os SNPs -318 e +49 para os dois grupos estudados. Porém, a análise realizada não revelou diferenças significativas entre as freqüências haplotípicas dos grupos. Outro ponto importante analisado foi o estudo da estrutura genética (ancestralidade) dos grupos de pacientes e controles. Verificou-se que há predomínio de ancestralidade européia sobre as ancestralidades ameríndia e africana em ambos os grupos. Através desses resultados foi possível determinar que a população utilizada no estudo é geneticamente homogênea, e que o resultado negativo da associação detectado para o gene CTLA-4 e a PCM não está relacionado a ancestralidade da amostragem. Este trabalho demonstra que não foi observada nenhuma associação entre o polimorfismo dos SNPs -318 e +49 do gene CTLA-4 com a resistência e/ou susceptibilidade à Paracoccidioidomicose.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-09-30T03:40:23Z No. of bitstreams: 1 2006_Carine Ribeiro Pessoa.pdf: 968782 bytes, checksum: 645626ff01f51ee15826cfb0d9a84107 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-02-05T00:15:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Carine Ribeiro Pessoa.pdf: 968782 bytes, checksum: 645626ff01f51ee15826cfb0d9a84107 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-02-05T00:15:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Carine Ribeiro Pessoa.pdf: 968782 bytes, checksum: 645626ff01f51ee15826cfb0d9a84107 (MD5) Previous issue date: 2006-07 / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é dimórfico e patogênico ao homem. Ele é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica de maior incidência da América Latina. O estabelecimento da infecção é dependente da transição de micélio para levedura e este processo in vitro é reversível e regulado pela mudança de temperatura de 22 °C para 36 °C. O projeto ¿Genoma funcional e diferencial do fungo Paracoccidioides brasiliensis¿ identificou 6.022 PbAEST, que correspondem a genes expressos no fungo, representando aproximadamente 80% do genoma do fungo. Na interação patógeno-hospedeiro, a resposta eficiente do patógeno contra o ataque oxidativo imposto pelas células fagocitárias do hospedeiro facilita a sua sobrevivência no hospedeiro. Os genes potencialmente envolvidos na resposta ao estresse oxidativo em P. brasiliensis, identificados no projeto transcriptoma, foram categorizados em 4 classes: enzimas antioxidantes (12 PbAESTs), biossíntese e metabolismo da glutationa e regeneração de NADPH (11 PbAESTs), homeostase de íons metálicos (3 PbAEST) e fatores transcricionais (7 PbAESTs). Entre as seqüências anotadas no transcriptoma, foram estudadas neste trabalho aquelas que codificam para a CuZn superóxido dismutase GPI-ancorada (PbSOD3) e a citocromo c peroxidase (PbCCP). A superóxido dismutase retira do ambiente radical superóxido produzindo peróxido de hidrogênio e por sua vez, a citocromo c peroxidase, uma das peroxidases existentes nas células, reduz o peróxido de hidrogênio a água. A seqüência de cDNA que codifica para a enzima CuZnSOD GPI-ancorada (PbSOD3) de P. brasiliensis foi completamente seqüenciada. Esta enzima possui massa molecular deduzida de 24,3 kDa e a assinatura característica da família CuZnSOD e da região de ancoragem a GPI na região carboxi-terminal. A análise comparativa das seqüências protéicas PbSOD3 e Sod5 de C. albicans indicou cerca de 40% de similaridade em toda a extensão da proteína, sendo mais conservadas as regiões da assinatura do sítio catalítico e de ancoragem a GPI. A análise no programa PSORT II indicou que a PbSOD3 deve estar localizada na parede celular (34,8% de probabilidade) ou com a mesma probabilidade, na membrana celular. A seqüência de cDNA que codifica para a citocromo c peroxidase (PbCCP) está parcial e a seqüência da proteína deduzida mostra a presença do sítio ativo da peroxidase, sendo bastante conservada quando comparada com CCPs de outros fungos. A análise de Southern blot indicou que os genes que codificam para as enzimas PbSOD3 e CCP estão presentes no genoma do fungo em cópia única. A análise da expressão dos genes que codificam para a PbSOD3 e PbCCP durante a transição dimórfica in vitro, mostrou que ocorreu uma oscilação; entretanto, não ocorreu uma alteração do padrão de expressão significativamente diferente entre as formas de micélio e levedura. Também não foi observada variação significativa da expressão para ambos os genes, em nível transcricional, durante o choque térmico a 42 °C. Os ensaios de medida de atividade enzimática extracelular para a enzima SOD de P. brasiliensis, utilizando o meio de cultura das células de levedura, não detectaram atividade desta enzima, sugerindo que a mesma deve estar associada à parede celular e/ou membrana celular. A atividade enzimática da CCP de P. brasiliensis durante o choque térmico a 42 °C diminuiu em função do tempo de incubação das células de levedura, entretanto os valores ainda eram altos no fim do choque térmico, indicando que provavelmente este patógeno é capaz de responder ao estresse oxidativo durante esta condição de drástica alteração fisiológica. Os dados sugerem fortemente que o P. brasiliensis está apto, desde a forma de micélio, a responder contra as injúrias provocadas pelo estresse oxidativo, uma vez que este patógeno apresenta níveis similares de expressão dos genes sod3 e ccp nas duas formas, micélio e levedura. Experimentos de RNAi ou nocaute dos genes sod3 e ccp de P. brasiliensis devem ser realizados para efetivamente demonstrar a função destas enzimas na proteção contra o estresse oxidativo. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic and human pathogenic fungus. It is the causative agent of paracoccidiodoμycoses (PCM), an endemic disease widespread in Latin América. The establishment of infection depends on the transition from mycelium to yeast form and this process in vitro is reversible and dependent on temperature shifts from 22 C to 36 C. The transcriptome project identified 6.022 PbAEST that corresponds to expressed genes in fungus, representing approximately 80% of fungus genome. This data has allowed the identification of genes related in different biological processes of the fungus such as dimorphism, virulence and pathogenicity. In pathogen−host interaction, an efficient pathogen.s response against oxidative attack imposed from host phagocytic cells facilitates the pathogen survival in host. The genes potentially related in oxidative stress response in P. brasiliensis identified in transcriptoma project were categorized in 4 groups: antioxidant enzymes (12 PbAESTs); biosynthesis and metabolism of glutathione and NADPH regeneration (11 PbAESTs); ions homeostasis (3 PbAESTs) and transcription factors (7 PbAESTs). Among the annoted sequences in transcriptome, that ones coding for enzymes superoxide dismutase GPI−anchored (PbSOD3) and cytochrome c peroxidase (PbCCP) were analyzed in this study. The enzyme superoxide dismutase removes superoxide radical producing hydrogen peroxide and cytochroμe c peroxidase, one of peroxidases existing in cells, reduces hydrogen peroxide to water. The cDNA sequence coding for CuZnSOD GPI−anchored enzyμe from P. brasiliensis was completely sequenced. The deduced amino acid sequence of PbSOD3 has the molecular mass predicted of 24,3 kDa and pI of 6,05; furthermore, it has the protein signature of CuZnSOD family and a region for GPI anchoring in carboxyl−terminus. The comparative analysis of protein sequences of PbSOD3 and Sod5 of C. albicans indicated approximately 40% of similarity for the entire protein, where the most conserved regions are catalytic site of enzyme and GPI anchoring. The PSORTII program analysis revealed that PbSOD3 may be located in cell wall (34,8% of probability) or membrane plasmatic with the same probability. The cDNA sequence coding for cytochroμe c peroxidase is parcial and the protein deduced sequence has the active site of peroxidases and this region is very conserved when compared with CCPs of other fungi. The Southern blot analysis revealed that the genes coding for enzymes PbSOD3 and PbCCP are present as single copies in the fungus genome. The expression analysis of the same genes demonstrated an oscillation during dimorphic transition in vitro, however, do not occur any significantly difference in the gene expression pattern between mycelium and yeast forms. Also, it has not shown any significant difference in gene expression pattern during heat shock at 42 C, at transcriptional level, for both genes. The extracellular enzymatic activity assay, using yeast culture medium (or supernatant), was done to verify P. brasiliensis SOD activity with no activity detected. This result suggests that this enzyme may be associated to cell wall and/or plasmatic membrane. The enzymatic activity of P. brasiliensis CCP during heat shock at 42 C decreases in function of incubation time of yeast cells, but the values remained high at the end of heat shock, indicating that probably this pathogen is able to respond to oxidative stress during this drastic physiological change. These data strongly suggest that P. brasiliensis is capable, since mycelium form, to counteract injuries from oxidative stress, because this pathogen presents siμilar levels of gene expression for sod3 and ccp in mycelium and yeast forms. Experiments in vitro and in vivo through gene silencing (RNAi) or nocaute may be designed utilizing P. brasiliensis sod3 e ccp genes to efficiently determine if these enzimes are important to protect against oxidative stress.