CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A detecÃÃo de inibidores de proteinases cisteÃnicas em raÃzes de feijÃo-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walpers] bem como o acÃmulo de fraÃÃes ricas nestes inibidores por meio de precipitaÃÃo com sulfato de amÃnio seguida de cromatografia lÃquida de fase reversa foram realizados no presente trabalho. FraÃÃes contendo os maiores nÃveis de atividade de inibidores de proteinases cisteÃnicas foram selecionadas e sujeitas à avaliaÃÃo de sua habilidade em suprimir a mobilidade de juvenis de segundo estÃgio (J2) do nematÃide das galhas Meloidogyne javanica, raÃa 1. Em adiÃÃo o efeito nematicida destas tambÃm foi avaliado. Quanto ao parÃmetro mobilidade, a fraÃÃo F 30/60 precipitada com sulfato de amÃnio, numa dose de 40 Âg de proteÃnas, mostrou ser a mais potente de todas as amostras testadas, Ãs 24 h de incubaÃÃo. No entanto, com relaÃÃo à mortalidade ambos os picos PIHPLC e PIIHPLC, obtidos dos passos de HPLC, foram os mais ativos causando um percentual de mortes de nematÃides de 95,0 e 94,7 %, respectivamente, quando as doses mais potentes destes picos foram comparadas. AlÃm disso, a fraÃÃo F 30/60 acoplada a FITC foi usada em experimentos de microscopia de luz-fluorescÃncia para responder as seguintes questÃes: 1) Estariam os efeitos observados sobre a mobilidade e mortalidade relacionados à ligaÃÃo das proteÃnas no nematÃide? e 2) Se sim, esta interaÃÃo à realizada com a superfÃcie do nematÃide ou seu intestino, ou com ambas estruturas? A fraÃÃo F 30/60 parece ser incorporada pelos juvenis e ligar-se especificamente à regiÃo correspondente ao intestino dos nematÃides Ãs 6 h apÃs incubaÃÃo, enquanto que Ãs 24 h apÃs incubaÃÃo o complexo fluorescente parece se dispersar ao longo de todo o corpo do nematÃide, como observado pela microscopia de luz-fluorescÃncia. Estes resultados, somados, sugerem o possÃvel uso dos inibidores presentes em raÃzes de feijÃo-de-corda como ferramentas biolÃgicas potenciais no controle do nematÃide das galhas, M. javanica. / Detection of cysteine proteinase inhibitors in cowpea[Vigna unguiculata(L.) Walpers] roots as well as the accumulation of inhibitors enriched fractions throughammonium sulfate precipitation followed by reversed-phase liquid chromatography were in this present work accomplished. Fractions containing higher levels of cysteine proteinase inhibitor activity were selected and subjected to evaluation of its ability of to suppress the mobility of second stage juveniles (J2) of the root-knot nematode Meloidogyne javanica, race 1. In addition, the nematicidal effect of these fractions was also tested. When the mobility parameter was analyzed the ammonium sulfate precipitated F 30/60 fraction, at a dose of 40 μg of proteins, it shown to be the most potent of all tested samples at 24 h after incubation. However, regarding to mortality the both picks, PIHPLC and PIIHPLC, obtained from the HPLC step were the more actives causing a percentage of killing nematodes of 95.0 % and 94.2 %, respectively when the most potent doses of these picks were compared. Moreover, FITC-coupled F 30/60 fraction was used in light-flu orescence microscopy experiments in order to answer the following basic questions: 1) the observed effects on mobility and mortality will be related to the binding of the proteins in the nematode? And 2) If yes, this interaction is performed with the gut or surface nematode, or yet in the both structures? F 30/60 fraction appears to be incorporated by juveniles and specifically bind to the region corresponding to the gut of nematodes at 6 h after incubation, while at 24 h after incubation the fluorescent complex appears to be widespread along the whole body of the nematode, as observed by light-fluorescence microscopy. These results, all together, suggest the possible use of the inhibitors present in cowpea roots as a potential biological tool in the control of the root-knot nematode, M. javanica.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / No presente trabalho foi realizado um estudo integrado de fisiologia, bioquÃmica e proteÃmica comparativa em feijÃo de corda, uma cultura de grande valor econÃmico, com o objetivo de entender respostas de aclimataÃÃo das plantas à salinidade. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetaÃÃo, sob condiÃÃes hidropÃnicas, utilizando dois cultivares de feijÃo de corda (Vigna unguiculata) com tolerÃncia diferencial ao estresse salino: PitiÃba (tolerante) e TVu 2331 (sensÃvel). No primeiro experimento foram avaliadas as mudanÃas fisiolÃgicas (crescimento, trocas gasosas, teor relativo de Ãgua, teor de clorofila, fluorescÃncia da clorofila) e bioquÃmicas (acÃmulo de Ãons e solutos orgÃnicos em folhas e raÃzes e padrÃo de expressÃo protÃico foliar) induzidas por concentraÃÃes crescentes de salinidade (NaCl a 50, 75 e 100 mM). Os resultados demonstraram a existÃncia de respostas contrastantes entre os cultivares estudados, especialmente com relaÃÃo à inibiÃÃo do crescimento da parte aÃrea e ao acÃmulo de solutos compatÃveis, os quais foram maiores no TVu. Contudo, a salinidade nÃo alterou os parÃmetros de fluorescÃncia da clorofila em ambos os cultivares. ConcentraÃÃes crescentes de NaCl alteraram de forma diferencial o padrÃo de expressÃo de proteÃnas nas folhas, com maiores alteraÃÃes na dose 100 mM de NaCl. Apesar disso, no segundo experimento, a concentraÃÃo moderada de sal com NaCl a 75 mM foi escolhida como referÃncia para o estudo das mudanÃas no proteoma durante o estresse salino e apÃs um perÃodo pÃs-estresse (recuperaÃÃo). A salinidade modificou a expressÃo de 22 âspotsâ protÃicos no PitiÃba, dos quais 10 (6 que aumentaram e 4 que diminuÃram) tiveram suas identidades determinadas por espectrometria de massas acoplada a cromatografia lÃquida (LC-ESI-MS/MS). No TVu foram observadas mudanÃas em 27 âspotsâ, sendo determinada a identidade de 9 (5 que aumentaram e 4 que diminuÃram). AlÃm destes, 5 âspotsâ que mantiveram suas taxas de expressÃes em condiÃÃes de salinidade no PitiÃba tambÃm foram identificados. A maioria das proteÃnas identificadas està relacionada com o processo de fotossÃntese, realizando funÃÃes enzimÃticas ou participando da constituiÃÃo molecular dos fotossistemas. ProteÃnas com papel protetor contra o estresse, como chaperonas e enzimas do estresse oxidativo (SOD) foram identificadas, assim como a calreticulina, que provavelmente està envolvida em processos de transduÃÃo de sinal. Em adiÃÃo, foi possÃvel observar que durante a recuperaÃÃo das plantas os mecanismos de homeostase Ãs novas condiÃÃes restabeleceram os nÃveis de algumas proteÃnas, o que sugere a participaÃÃo delas no processo de aclimataÃÃo ao estresse salino. No geral, os resultados fornecem informaÃÃes adicionais que podem levar a uma melhor compreensÃo das bases moleculares da tolerÃncia ou sensibilidade de plantas de feijÃo de corda à salinidade. / In the present work, an integrated physiological, biochemical and proteomic analysis on cowpea (an economically important species) was carried out in order to understand the responses of plants to salinity. Two experiments were conducted in a greenhouse under hydroponic conditions, using two cultivars of cowpea (Vigna unguiculata) with differential tolerance to salt stress: Pitiuba (tolerant) and TVu 2331 (sensitive). In the first experiment, we evaluated the physiological (growth, gas exchange, relative water content, chlorophyll content, chlorophyll fluorescence) and biochemical (ions and organic solutes accumulations) changes induced by increasing levels of salinity (50, 75 and 100 mM NaCl), as well as the influences of stress two-dimensional (2D) protein patterns in leaves tissues. The results showed the existence of contrasting responses between the cultivars studied, especially with respect to inhibition of shoot growth and the accumulation of compatible solutes, which were higher in TVu. However, salinity did not alter the fluorescence parameters in both genotypes. The global analysis of 2D protein patterns showed that increasing levels of NaCl differentially alter the expression pattern of proteins in leaves, with larger changes in dose 100 mM NaCl. Nevertheless, in the second experiment, the moderate dose of salt with 75 mM NaCl was chosen as the reference dose for the study of changes in the proteome during salt stress and recovery. Salinity altered the expression of 22 protein spots in Pitiuba. Of these spots, the identities of 10 (6 up-regulated and 4 down-regulated) were determined by liquid chromatography electro-spray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). In TVU changes were observed in 27 spots being the identity determined for 9 (5 up-regulated and 4 down-regulated). Besides these, 5 spots that kept their rates expressions in salinity conditions in PitiÃba were also identified. The majority of the identified proteins is related to the process of photosynthesis, performing enzymatic functions or participating in the molecular constitution of photosystems. Proteins with protective role against stress such as chaperones and enzymes of oxidative stress (SOD) were identified, as well as calreticulin, which are probably involved in signal transduction network. In addition, during recovery treatments homeostasis mechanisms of plants to new conditions restored the levels of certain proteins, suggesting their participation in the process of acclimation to salt stress. Overall, results provide some additional information that can lead to a better understanding of the molecular basis of salt tolerance or sensitivity in cowpea plants.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O feijÃo-de-corda (Vigna unguiculata) à uma das principais leguminosas cultivadas no Brasil. Entretanto, devido à presenÃa de fatores biÃticos e abiÃticos sÃo geradas perdas significativas na produtividade desta cultura. O VÃrus do Mosaico Severo do Caupi (CPSMV) tem atacado com grande frequÃncia os cultivos brasileiros. AlÃm disso, devido o feijÃo-de-corda ser cultivado em regiÃes onde os Ãndices pluviomÃtricos sÃo baixos, a deficiÃncia hÃdrica à bastante comum. Esse estresse promove impacto negativo substancial no crescimento e desenvolvimento das plantas, resultando em diminuiÃÃo na produÃÃo de biomassa. Em condiÃÃes de campo, os estresses mencionados acima podem ocorrer tanto individualmente quanto simultaneamente. Portanto, o presente estudo teve como objetivo estudar as respostas do feijÃo-de-corda (genÃtipo CE-31, sin. PitiÃba) submetido ao estresse hÃdrico, infectado com o CPSMV e sob pressÃo dos dois estresses combinados. Sob essas condiÃÃes, a cinÃtica enzimÃtica de proteÃnas antioxidantes (superÃxido dismutase, catalase e ascorbato peroxidase) e PR-proteÃnas (glucanase, quitinase e guaiacol peroxidase), bem como a dosagem de perÃxido de hidrogÃnio e quantificaÃÃo do CPSMV em folhas de feijÃo-de-corda foram realizadas. AlÃm disso, proteÃnas diferencialmente acumuladas em folhas de feijÃo-de-corda submetidas à esses estresses foram quantificadas e identificadas por LC-MS/MS e bancos de dados disponÃveis. A infecÃÃo viral nÃo alterou a maioria dos parÃmetros fisiolÃgicos. Jà a deficiÃncia hÃdrica contribuiu para a diminuiÃÃo da fotossÃntese lÃquida, transpiraÃÃo e condutÃncia estomÃtica. Atà 6 dias apÃs inoculaÃÃo do CPSMV, o vÃrus nÃo agravou os efeitos negativos da seca. Os resultados da cinÃtica enzimÃtica revelaram que as respostas sÃo alteradas de formas diferentes frente aos estresses quando impostos individualmente ou simultaneamente e que a presenÃa do estresse hÃdrico favoreceu a infecÃÃo viral apÃs 2 dias de inoculaÃÃo. A anÃlise proteÃmica revelou 117 proteÃnas diferencialmente acumuladas pertencentes a diferentes categorias de acordo com as funÃÃes fisiolÃgicas: energia e metabolismo, fotossÃntese, metabolismo de proteÃnas, homeostase redox, fatores de regulaÃÃo e processamento de RNA, resposta ao estresse, defesa de plantas e outras. Estes resultados sÃo importantes para a compreensÃo dos mecanismos celulares que atuam no feijÃo-de-corda, genÃtipo CE-31, quando submetido ao estresse hÃdrico, à infecÃÃo pelo CPSMV e a ambos os estresses de forma combinada. / Cowpea (Vigna unguiculata) is a legume (Fabaceae) with high nutritional value grown in Brazil. However, biotic and abiotic factors are responsible for causing significant losses to the growth and yield of leguminous plants. Cowpea mosaic severe virus (CPSMV) is one of the more severe problems affecting cowpea production in Brazil. Also, cowpea are mainly grown in regions where rainfall is low, thus water deficit is quite common. This stress promotes substantial negative impact on growth and development of plants, resulting in decreased of biomass production. Under field conditions, the stresses mentioned above can occur both individually and simultaneously. Therefore, this work aimed to study the responses of cowpea (CE-31 genotype, syn. Pitiuba) subjected to water deficit, infected with CPSMV and under pressure of the two combined stresses. Under these conditions, enzyme kinetics of antioxidant protein (superoxide dismutase, catalase and ascorbate peroxidase) and PR-proteins (glucanase, chitinase and guaiacol peroxidase) as well as hydrogen peroxide dosage and quantification of CPSMV in cowpea leaves were performed. In addition, differentially accumulated proteins from cowpea leaves subjected to these stresses were identified and quantified by LC-MS/MS. Viral infection did not affect the majority of physiological parameters. Already water deficit contributed to the decrease in net photosynthesis, transpiration and stomatal conductance. At 6 days after CPSMV inoculation, the virus did not worsen the negative effects of drought. The results revealed that the enzyme kinetics of the responses was changed across different ways when the stress imposed individually or simultaneously and the presence of water deficit favored viral infection after 2 days of CPSMV inoculation. The proteomic analysis revealed 117 differentially accumulated proteins belonging to different categories according to the physiological functions: energy and metabolism, photosynthesis, protein metabolism, redox homeostasis, regulation factors and RNA processing, response to stress, plant defense and others. These results are important for understanding the cellular mechanisms that operate in cowpea (CE-31 genotype), when subjected to water deficit, CPSMV infection and both combined stresses.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O feijÃo-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] à uma importante leguminosa usada como alimento, sendo cultivada, primariamente, nas savanas secas do Continente Africano, na Ãsia e na AmÃrica do Sul, cobrindo mais de 12 milhÃes de hectares, com produÃÃo anual de cerca de 3 milhÃes de toneladas. O feijÃo-de-corda se constitui numa cultura de extrema importÃncia em zonas semi-Ãridas dos trÃpicos, caracterizadas por baixa precipitaÃÃo pluviomÃtrica, altas temperaturas, solos arenosos e de baixa fertilidade. Dentre os organismos que causam doenÃas nos vegetais, os nematÃides geram prejuÃzos anuais de, aproximadamente, vÃrios bilhÃes de dÃlares na agricultura mundial e as espÃcies Meloidogyne incognita e Meloidogyne javanica sÃo as mais danosas. Uma das principais culturas atacadas pelos nematÃides à o feijÃo-de-corda. Em funÃÃo disso, existe sempre demanda para se buscar melhorar a compreensÃo dessa relaÃÃo entre hospedeiros e patÃgenos objetivando criar novas estratÃgias para minimizar eventuais perdas. O presente trabalho teve como objetivo identificar as proteÃnas que tÃm sua expressÃo diferenciada em raÃzes de feijÃo-de-corda resistente ao Meloidogyne incognita (inoculadas e nÃo inoculadas) usando eletroforese bidimensional (2D) associada à espectrometria de massas de proteÃnas extraÃdas da raiz total e de mitocÃndrias de raiz do cv PitiÃba (CE-31), resistente ao nematÃide, inoculada com este patÃgeno, em comparaÃÃo com plantas nÃo-inoculadas (controle) em conjunto com anÃlise de expressÃo gÃnica semi-quantitativa (PCR semi-quantitativa). Os resultados aqui obtidos demonstraram que houve alteraÃÃo de pelo menos 22 proteÃnas nas amostras de raÃzes inoculadas e mais 22 proteÃnas de mitocÃndrias de raÃzes, quando comparados com seus respectivos controles e que o Ãpice das suas alteraÃÃes ocorriam por volta do 6 dia apÃs a inoculaÃÃo do patÃgeno. As proteÃnas de mitocÃndrias nÃo puderam ser identificadas com confiabilidade. Dentre as proteÃnas de raÃzes totais identificadas podemos destacar as PR-1, 2 e 3, que sÃo reconhecidamente proteÃnas de defesa, ascorbato peroxidase e superÃxido dismutase (enzimas anti-estresse oxidativo) e uma leghemoglobina, que pode ser o primeiro relato dessa proteÃna nesse patossistema. As anÃlises de expressÃo gÃnica concordaram perfeitamente com os achados proteÃmicos. / The cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] is an important leguminous used as food, being cultivated, mostly in arid African savannas , Asia and south of America, covering more over 12 millions of hectares, with annual production about 3 millions of tons. The cowpea itâs a culture greatly important in tropics zones characterized by low pluviometric precipitation, high temperature , gravely soils and poor fertility. Among the pathogenic organism that cause plant disease, the nematode, mainly Meloydogine sp. generate annual losses about several billions of dollars all over the world and the Meloidogyne incognita and Meloidogyne javanica species be the most damagers. One of the main cultures attacked by nematodes is the cowpea. Regard it, there is always needs to improve the knowledge about the relationship between host and pathogens aimed develop novels strategies to diminish eventual losses. The present work aimed identify the differential expression of proteins in Meloidogyne incognita resistant cowpea total roots and mitochondria roots cv PitiÃba (CE-31), inoculated and mock inoculated, using 2D electrophoresis assay associated with MS identification and gene expression analyses by semi-quantitative PCR. The results obtained showed at least 22 altered proteins in inoculated total roots and more 22 proteins of mitochondria roots, when compared with their respective controls and the top of alterations occurred next to 6 day after inoculation with pathogen. Mitochondria proteins cannot be identified reliability. Among the total roots proteins we can emphasize PR-1, 2 and 3, recognized as defense proteins, ascorbate peroxidase and superoxide dismutase (anti-oxidative brush enzymes) and a leghemoglobin, which can be the first report about this protein in this pathosystem. The gene expression analyses coincided with proteomics finds.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O feijÃo caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] à um alimento de grande importÃncia comercial, sendo a principal fonte alimentÃcia em algumas regiÃes, como no Nordeste brasileiro. Infelizmente, o feijÃo-de-corda està sujeito ao ataque de vÃrios patÃgenos e pestes, acarretando perdas considerÃveis em sua produtividade. Para diminuir essas perdas, existem diversos mÃtodos quÃmicos que sÃo largamente utilizados, porÃm o uso indiscriminado de fungicidas tem causado danos ao meio ambiente e aos seres vivos. Na busca de alternativas ecologicamente saudÃveis, uma opÃÃo promissora seria a induÃÃo de mecanismos de defesa da prÃpria planta atravÃs de molÃculas elicitoras. Diante do exposto, o presente trabalho teve como objetivo elicitar respostas de defesa em feijÃo-de-corda atravÃs do uso de galactomanana sulfatada isolada de Adenanthera pavonina e induzir a resistÃncia ao fungo Colletotrichum gloeosporioides. Doze dias apÃs germinaÃÃo, plantas de feijÃo-de-corda (Vigna unguiculata) foram tratadas com galactomana de A. pavonina (nas concentraÃÃes de 100 mg/L e 200 mg/L), na ausÃncia ou presenÃa do fungo C. gloeosporioides (inoculado apÃs 6 h do tratamento com carboidrato) por 6, 12, 24 e 48 h, tendo sido realizadas as anÃlises bioquÃmicas nos extratos protÃicos obtidos das folhas primÃrias. Para as enzimas POX e APX ocorreu um significativo aumento a partir de 12 h do tratamento com a galactomanana. Em relaÃÃo a atividade das enzimas antifungicas βGLU e CHI, as plantas tratadas com a galactomanana, no geral, apresentaram um aumento acima de 50% em relaÃÃo ao controle. AnÃlises macroscÃpicas revelaram que as folhas tratadas com 200 mg/L da galactomanana e infectadas com o C. gloeosporioides apresentaram lesÃes necrÃticas visivelmente reduzidas em relaÃÃo ao controle. Ademais, a galactomana nÃo foi capaz de inibir a germinaÃÃo de esporos e crescimento vegetativo do fungo C. gloeosporioides in vitro. A partir dos resultados obtidos neste trabalho, conclui-se que, a galactomanana isolada de A. pavonina à capaz de aumentar a tolerÃncia da cultura de feijÃo-de-corda (V. unguiculata) contra o fungo C. gloeosporioides. / Cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] is a food of great commercial importance, being the main food source in some regions such as northeastern Brazil. Unfortunately, cowpea is subject to attack by various pathogens and pests, causing considerable losses in productivity. To reduce these losses, there are several chemical methods that are widely used, but the indiscriminate use of fungicides has caused damage to the environment and living beings. In search of alternative environmentally friendly, a promising option would be the induction of defense mechanisms of the plant itself through elicitor molecules. Given the above, this study aimed to elicit defense responses in cowpea through the use of galactomannan isolated from Adenanthera pavonina and induce resistance to Colletotrichum gloeosporioides. Twelve days after germination, cowpea plants (Vigna unguiculata) were treated with A. pavonina galactomannan (at concentrations of 100 mg/L and 200 mg/L) in the absence or presence of the fungus C. gloeosporioides (inoculated 6 hours after treatment with carbohydrate) for 6, 12, 24 and 48 h were carried out on biochemical analysis of protein extracts obtained from primary leaves. For enzymes POX and APX a significant increase occurred after 12 h of treatment with the galactomannan. With respect to antifungal activity of the enzymes and βGLU CHI, the plants treated with the galactomannan in general, showed an increase above 50% compared to control. Macroscopic analysis revealed that the leaves treated with 200 mg/L of galactomannan and infected with C. gloeosporioides showed necrotic lesions visibly reduced compared to control. Furthermore, the galactomannan was unable to inhibit the germination of spores and vegetative growth of the fungus C. gloeosporioides in vitro. The results of the present study indicate that galactomannan isolated from A. pavonina can increase crop tolerance of cowpea (V. unguiculata) against the fungus C. gloeosporioides.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / As sessile organisms, plants are exposed to a plethora of environmental stresses to which they must respond to maintain efficient growth and survival. Therefore, in order to improve our understanding on the complex mechanisms involved in the cowpea response to salt stress and to a compatible interaction with the cowpea severe mosaic virus (CPSMV), we used a label-free quantitative proteomic approach to identify the salt and virus responsive proteins in the leaves of the Pitiuba (CE-31) cultivar. The proteins extracted from the leaves (control and treated) 2 and 6 days post-treatment only with salt (DPS), only infected with CPSMV (DPV) or both of them (DPSV) were analyzed using mass spectrometry. At 2 DPS, 350 proteins with at least two-fold differences in abundance, in comparison with controls, were differentially accumulated in the leaves of the salt-treated (80% up and 20% down-accumulated), 281 at 2DPV (25% up and 75% down-accumulated) and 321 at 2 DPSV (45% up and 55% down-accumulated) plants. At 6 DPS, 350 proteins were differentially accumulated in the leaves of the salt-treated (90% up and 10% down-accumulated), 225 at 6 DPV (80% up and 20% down-accumulated) and 315 at 6 DPSV (94% up and 6% down-accumulated) plants. The qualitative analysis showed biochemical differences when the cowpea plants were challenged concurrently with both stresses. To cope with salinity, cowpea increased the abundance of proteins directly involved with the salt tolerance mechanisms. The results indicated that the CPSMV induce the down-accumulating of several proteins to invade and spread in host at early infection period (2 DPV), but at 6 DPV plant can induce accumulation of diverse proteins related with defense, although these strategies canât avoid the negatives effects of disease. When exposed simultaneously to salt/CPSMV stresses, a balance in protein accumulation involved in many biological process. This is the first work employing this approach in cowpea and providing evidences of the plant biochemical mechanisms involved in the responses of cowpea to these stresses. / Como organismos sÃsseis, as plantas sÃo expostas a uma variedade de estresses ambientais aos quais devem responder para sobreviverem e se desenvolverem. A fim de melhorar a nossa compreensÃo sobre os mecanismos complexos envolvidos na resposta do feijÃo-de-corda ao estresse salino e na interaÃÃo compatÃvel com o vÃrus do mosaico severo do caupi (CPSMV), foi utilizada uma abordagem proteÃmica quantitativa, livre de marcaÃÃo, para identificar proteÃnas, responsivas a essess estresses em folhas de feijÃo-de-corda, cv. CE-31. As proteÃnas extraÃdas a partir de folhas primÃrias, 2 e 6 dias apÃs o tratamento sà com o sal (DPS), somente infectadas (DPV), ou sob aÃÃo combinada dos dois (DPSV) foram analisadas, usando espectrometria de massas e comparadas com grupo controle. No 2 DPS, foram identificadas 350 proteÃnas diferencialmente acumuladas (80% aumentaram em abundÃncia e 20% diminuÃram), no 2 DPV 281 (25% aumentaram em abundÃncia e 75% diminuÃram) e no 2 DPSV 321 (45% aumentaram em abundÃncia e 55% diminuÃram). Jà no 6 DPS, foram identificadas 350 proteÃnas diferencialmente acumuladas (90% mostraram aumento em abundÃncia e 10% diminuiÃÃo), no 6 DPV 225 (80% aumentaram em abundÃncia e 20% diminuÃram) e no 6 DPSV 315 proteÃnas(94% aumentaram em abundÃncia e 6% diminuÃram). Para lidar com a salinidade, o cv. CE-31 aumentou a abundÃncia de proteÃnas envolvidas diretamente com os mecanismos de tolerÃncia ao sal. Em relaÃÃo à infecÃÃo da planta pelo CPSMV, os resultados obtidos indicaram que o vÃrus induz reduÃÃo na abundÃncia de vÃrias proteÃnas nos tempos iniciais de infecÃÃo, provavelmente favorecendo a invasÃo e propagaÃÃo na planta, mas, no 6 DPSV, a planta recupera sua capacidade de acionar mecanismos de defesa, embora esses jà nÃo sejam mais efetivos para evitar o estabelecimento da doenÃa viral. Durante exposiÃÃo simultÃnea da planta ao sal e ao vÃrus, ocorreu um equilÃbrio entre o aumento e diminuiÃÃo em abundÃncia de proteÃnas envolvidas em diversos processos metabÃlicos. Esse trabalho à pioneiro nessa abordagem em feijÃo-de-corda e fornece evidÃncias dos mecanismos bioquÃmicos envolvidos nas resposta da planta a esses estresses.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / No presente trabalho, foi realizado um estudo preliminar sobre a expressÃo de um gene de quitinase de classe I de feijÃo-de-corda (Vigna unguiculata L.Walp), a clonagem e expressÃo desse gene em cÃlulas de Escherichia coli BL21(λ)DE3 e a determinaÃÃo via modelagem por homologia da estrutura tridimensional dessa proteÃna. A expressÃo do gene da quitinase de classe I de feijÃo-de-corda foi obtida a partir de RT-PCR com oligonucleotÃdeos iniciadores especÃficos. Nessas reaÃÃes, foram usadas amostras de RNA total de sementes e vagens em diferentes estÃgios de crescimento (2, 4, 6, 8 , 10, 12, 14, 16 e 18 dias), pertencentes a dois genÃtipos contrastantes quanto a infecÃÃo pelo Callosobruchus maculatus, IT81D-1053 (resistente) e TE97-419-07F (suscetÃvel). A expressÃo foi avaliada tambÃm em folhas, raÃzes, epicÃtilo e hipocÃtilo de dois genÃtipos contrastantes quanto a infecÃÃo pelo nematÃide das galhas Meloidogyne incongnita, CE-31 (resistente) e TE97-411-1F (suscetÃvel). A clonagem do gene VuChiI foi realizada a partir do produto amplificado da RT-PCR de sementes de IT81D-1053, e do produto amplificado a partir do DNA genÃmico de MONTEIRO. Foram obtidos 11 clones confirmados, dos quais 9 foram seqÃenciados. A subclonagem do clone R7 foi realizada em pET15b e a expressÃo da proteÃna recombinante foi induzida na presenÃa de IPTG 1mM. A proteÃna recombinante, com aproximadamente 30 kDa, foi visualizada atravÃs de um SDS-PAGE. A proteÃna purificada atravÃs de uma cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose com NÃquel imobilizado nÃo apresentou atividade quitinÃsica significativa. Os modelos gerados para os clones obtidos e para a quitinase nativa, indicam que as mutaÃÃes ocorridas nÃo alteram os sÃtios ativos das molÃculas. Dessa forma, a quitinase de classe I do feijÃo-de-corda parece apresentar expressÃo constitutiva em todas as partes da planta. A quitinase recombinante obtida foi pouco ativa. As mutaÃÃes pontuais nos clones obtidos sugerem a ocorrÃncia de isoformas dessa proteÃna, o que ainda deve ser elucidado no futuro / In this work we have made a preliminary study on the expression of a class I chitinase gene from cowpea (Vigna unguiculata L.Walp), cloning and expression of this gene in Escherichia coli BL21(λ)DE3 cells and, through homology modeling, we determined the three dimensional structure of this protein. The expression of the class I quitinase gene from cowpea was performed by RTÂPCR from the total RNA, with specific primers, from seeds and pods in distinct stages of development (2, 4, 6, 8 , 10, 12, 14, 16 and 18 days), belonging to two contrasting genotypes regarding to infection by Callosobruchus maculatus, IT81DÂ1053 (resistant) e TE97Â419Â07F (susceptible). The gene expression in leaves, roots, epicotyls and hipocotyls from two contrasting genotypes considering the infection by the nematoid Meloidogyne incongnita, CEÂ31(resistant) e TE97Â411Â1F (susceptible). The VuChiI gene cloning was accomplished from the amplified product on RTÂPCR with IT81DÂ1053 seeds, and the amplified product from the genomic DNA of MONTEIRO. Eleven clones were obtained, from which nine were sequenced. The cloning of R7 clone was accomplished in pET15b vector and the expression of the recombinant protein was induced in the presence of IPTG 1mM. The protein, with 30 kDa, was visualized through a SDSÂPAGE. The protein purified through an affinity chromatography in Sepharose column with immobilized Nickel did not had a significative hydrolytic activity. The models generated for the clones and for the native chitinase, have indicated that mutations that occurred did not changed the molecule's active sites. Thus, the class I chitinase gene from feijÃo de corda seems to present constitutive expression in all parts of the plant. The recombinant chitinase obtained was inactive. The specific mutations in the resulting clones suggests the occurrence of isoforms of this protein, what should be elucidated in the future.

O pulgÃo-preto (Aphis craccivora Koch, 1854), a cigarrinha-verde (Empoasca sp.) e o manhoso (Chalcodermus bimaculatus Fiedler, 1936) sÃo importantes pragas do feijÃo-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] em vÃrias regiÃes do Nordeste do Brasil, por lhe causarem danos diretos e indiretos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o comportamento de genÃtipos de feijÃo-de-corda, em condiÃÃes de campo e sob infestaÃÃo natural de pragas, quanto à sua preferÃncia de ataque. Para isto, efetuou-se um ensaio em delineamento em blocos ao acaso, cujas repetiÃÃes variaram, no tempo, de acordo com a praga a ser avaliada. As avaliaÃÃes eram realizadas semanalmente. Os tratamentos foram dispostos em parcelas constituÃdas de cinco fileiras de quatro metros lineares, cada, espaÃadas entre si de 0,80m e com cinco plantas por metro linear. Em cada amostragem, avaliavam-se cinco plantas, aleatoriamente, dentro da Ãrea Ãtil da parcela (trÃs fileiras centrais). Os dados foram submetidos a uma anÃlise de variÃncia e as mÃdias foram separadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade de erro. Constatou-se que: em condiÃÃes de campo os genÃtipos estudos sÃo igualmente preferidos pelo pulgÃo-preto, porÃm em condiÃÃes protegidas, a cultivar Epace-10 apresenta-se menos preferida ao ataque do afÃdeo; a cultivar Vita-7 apresenta resistÃncia do tipo nÃo-preferÃncia ao ataque da cigarrinha-verde; os genÃtipos Epace-10, Paulistinha, PitiÃba e BRS Marataoà sÃo menos preferidos para alimentaÃÃo e postura do manhoso em relaÃÃo à cultivar BR 17-GurguÃia. / The black aphid (Aphis craccivora Koch, 1854), leafhopper (Empoasca sp.), and cowpea curculio (Chalcodermus bimaculatus Fiedler, 1936) are importants pests of cowpea in northeast of Brazil, for their direct and indirect effects. The aim of this research was to value the behaviour of cowpea genotypes, in field and greenhouse conditions. Treatments were applied to plants in a randomized complete block design separated in the time. The treatments were disposed in five rows (four linear meters), with 0,8m theyselves, and 0,2m between plants. The samples were realizated, at random, with 3 rows in the experimental unit. Data were transformed using the formule (x + 0,5)1/2, submitted to variance analisys, and means were separated by Tukey test at 5% of error. The evaluations were realizated weekly. The experimental unit consisted of 10 for parcel, from where were quantified the insects, in case of black aphid and leafhopper, and damage in pods for cowpea curculio.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / No Nordeste semi-Ãrido, as maiores incidÃncias de Ãreas salinizadas sÃo observadas nas terras intensamente cultivadas com o uso da irrigaÃÃo nos PerÃmetros Irrigados, sobretudo aqueles com o mÃtodo por superfÃcie. O experimento foi realizado no NÃcleo D do PerÃmetro Irrigado Curu-Pentecoste - CE. A pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito da subsolagem do solo associada com tratamentos quÃmicos e biolÃgicos, na melhoria das condiÃÃes de transmissÃo de Ãgua no perfil do solo, de atributos fÃsicos e quÃmicos do solo, na produtividade do feijÃo-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] cultivar Epace 11 alÃm dos indicadores de rentabilidade da recuperaÃÃo de um solo sÃdico irrigado por sulcos. Utilizou-se o delineamento experimental de blocos inteiramente casualizados com cinco tratamentos e cinco repetiÃÃes. Os tratamentos foram T0: testemunha; T1: 40 t.ha-1 de matÃria orgÃnica; T2: 20 t.ha-1 de gesso; T3: 20 t.ha-1 (gesso) +40 t.ha-1 (M.O); T4: 10 t.ha-1 (gesso) + 20 t.ha-1 (M.O). Os resultados permitiram as seguintes conclusÃes: 1. A produtividade do feijoeiro com o uso de melhoradores quÃmicos foi superior em 120% à produtividade sem o uso destes melhoradores e inferior em 18% à produtividade da cultura em solos sem problemas de salinidade do PerÃmetro. 2. As maiores produtividades do feijoeiro estÃo associadas a maiores profundidades do lenÃol freÃtico. O incremento de produtividade do feijoeiro com a profundidade do lenÃol freÃtico ocorreu a uma taxa crescente. 3. A aplicaÃÃo de 20 t.ha-1 de gesso e 40 t.ha-1 de matÃria orgÃnica proporcionou jà no primeiro ano, a reduÃÃo da percentagem de sÃdio trocÃvel do solo, inicialmente de um valor mÃdio superior a 50% para um valor convergente de 2%. 4. LimitaÃÃo quanto à cota de saÃda dos drenos laterais orientam para a instalaÃÃo do sistema de drenagem subterrÃnea do tipo intercepÃÃo, embora os gradientes hidrÃulicos mÃdios do movimento de Ãgua subterrÃnea sejam bem inferiores a 1%. 5. A taxa relacionada entre o valor bruto da produÃÃo gerado exclusivamente pela cultura do feijoeiro e o custo da recuperaÃÃo do solo, demonstra que a renda gerada pela cultura contribui em 12% com o custo da recuperaÃÃo do solo sÃdico. 6. O processo de recuperaÃÃo demonstra uma boa viabilidade a uma taxa de 12% ao ano e alta viabilidade a uma taxa de juros de 6% ao ano, revelando que a essa taxa todo o investimento realizado serà recuperado e remunerada e ainda um lucro extra igual a R$ 5.328,85. / In the semi-arid part of Northeastern Brazil, the highest incidences of salinized areas are observed in land subjected to intense irrigated cultivation, in the âPerÃmetros Irrigadosâ (irrigated perimeters), particularly those where is used the surface method. The experiment was performed in the âNÃcleo Dâ (D Core) of the âPerÃmetro Irrigado Curu-Pentecoste - Ceâ. The research aimed at evaluating the effect of the subsoiling of the treated area combined with the application of chemical and biological treatments in the same area. Specifically, it aimed at evaluating the effect of the said combination (a) in the improvement of the hydraulic properties in the profile of the soil, (b) in the improvement of the productivity of the cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] of the Epace 11 cultivar and (c) in the indicators of profitability of the recovery of a sodic soil irrigated by furrows. We used a randomized complete block experimental design with five treatments and five replications. The treatments were T0: control, T1: 40 t ha-1 of organic matter, T2: 20 t ha-1 gypsum T3: 20 t ha-1 (gypsum) + 40 t ha-1 (MO) T4: 10 t ha-1 (gypsum) + 20 t ha-1 (MO). The results allowed the following conclusions: 1) The grain yield with the use of chemical enhancers was 120% higher than the productivity without those enhancers and 18% lower than the productivity (of the same cultivation) in soils without salinity problems. 2) The highest bean yields are associated with the largest values of water table depth, the increase in grain yield with the depth of the water table occurring at a rate increasing with the same depth. 3) The application of 20 t ha-1 gypsum and 40 t ha-1 Organic matter, no later than in the first year, reduced the percentage of exchangeable sodium in the soil, from an initial average above 50% to a convergent value of 2%. 4) The limitation on the elevation of the outflow of lateral drains indicate the necessity of the installation of an underground drainage system of the interception type, even if the average hydraulic gradient of the of groundwater flow is well below 1%. 5) The rate between the gross value of production generated by the cowpea crop and the cost of remediation of soil, shows that the the crop contributes with 12% of the cost of soil sodium remediation . 6) The recovery process shows a good feasibility at a rate of 12% per year and high viability at a rate of interest of 6% per year, revealing that at that rate all the investment will be recovered and paid, plus yelding an extra profit of R$ 5,328.85.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O objetivo principal desse trabalho foi avaliar o efeito da aplicaÃÃo exÃgena do Ãcido ascÃrbico na reduÃÃo dos danos ocasionados pelo envelhecimento e salinidade em sementes de feijÃo-de-corda. Foram realizados trÃs experimentos, sendo o material vegetal utilizado como modelo nestes experimentos sementes de feijÃo-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.], cultivar EPACE 10, disponÃveis do Banco de Germoplasma de FeijÃo-de-corda da UFC. No primeiro experimento foram feitos testes preliminares para obtenÃÃo da melhor metodologia de aplicaÃÃo do Ãcido ascÃrbico em sementes de feijÃo-de-corda. As sementes foram incubadas com 0,42 e 0,85 mM de Ãcido ascÃrbico em diferentes tempos de exposiÃÃo (4h, 8h e 24h) atravÃs de dois diferentes mÃtodos: I - EmbebiÃÃo em papel germitest na placa de petri e II - SubmersÃo em soluÃÃo no Erlenmeyer. ApÃs a aplicaÃÃo dos tratamentos foi quantificado nas sementes o teor de Ãcido ascÃrbico (AsA) e posteriormente comparado com o teor padrÃo de Ãcido ascÃrbico endÃgeno jà existente nas sementes controle (0h). Foi observado que em todos os tratamentos analisados o teor de AsA endÃgeno das sementes de feijÃo-de-corda, foi maior que o das sementes controle, que nÃo sofreram tratamento. à medida que foi aumentando o tempo de exposiÃÃo das sementes, houve um aumento crescente no teor de Ãcido ascÃrbico das sementes, com diferenÃa estatÃstica significativa entre os tempos de exposiÃÃo analisados, sendo o mais eficiente o de 24 h. Houve diferenÃa significativa tambÃm nas concentraÃÃes exÃgenas utilizadas, sendo a de 0,85 mM a mais eficiente. Houve diferenÃa significativa entre os mÃtodos aplicados somente na concentraÃÃo de 0,85 mM. No tempo de 24 h de exposiÃÃo foi verificado que, apesar do valor numÃrico do mÃtodo II ser superior ao do mÃtodo I, nÃo foi constatada diferenÃa significativa entre os mÃtodos de aplicaÃÃo nesse tempo Podemos entÃo concluir a partir dos resultados apresentados que tanto o mÃtodo de aplicaÃÃo I como o II, com a concentraÃÃo de 0,85 mM de Ãcido ascÃrbico por um perÃodo de 24 h foi à metodologia mais eficiente para a aplicaÃÃo exÃgena de Ãcido ascÃrbico em sementes de feijÃo-de-corda, cultivar EPACE 10. No segundo experimento, tendo jà definido a metodologia de aplicaÃÃo exÃgena, foi feita entÃo a investigaÃÃo do possÃvel efeito do prà ou pÃs-tratamento com Ãcido ascÃrbico na atenuaÃÃo dos efeitos danosos provocados pelo envelhecimento nas sementes de feijÃo-de-corda, atravÃs de parÃmetros fisiolÃgicos e bioquÃmicos. As sementes foram submetidas a quatro tratamentos: T1 - sementes nÃo envelhecidas e nÃo tratadas com Ãcido ascÃrbico (AsA), tratamento controle (SNE); T2 - sementes envelhecidas (45ÂC, 99% U.R., no escuro) e nÃo-tratadas com AsA (SE); T3 - as sementes, antes do envelhecimento foram submetidas a um prÃ-tratamento com 0,85 mM de AsA (SE-PrÃ-T); T4 - as sementes, apÃs o envelhecimento, foram submetidas a um pÃs-tratamento com 0,85 mM de AsA (SE-PÃs-T). As sementes do T4 apresentaram massa fresca maior que as do controle (T1). Houve uma reduÃÃo de quase 15% na germinaÃÃo das sementes apÃs o envelhecimento, evidenciado no tratamento T2. PorÃm, quando as sementes foram tratadas com a soluÃÃo de Ãcido ascÃrbico apÃs o envelhecimento T4 a porcentagem de germinaÃÃo foi maior que o do controle (T1) em quase 13%. As sementes dos tratamentos T2 e T3 apresentaram um maior percentual de danos de membrana (35,16 e 36,82 Âs cm-1g-1semente respectivamente), avaliado pelo maior vazamento de eletrÃlitos (C.E), quando comparado com o controle T1 (17,84 Âs cm-1g-1semente). As sementes envelhecidas do tratamento T2 apresentaram um menor vigor, avaliado pelo vazamento de eletrÃlitos, que o controle T1. O T3 provocou resultados negativos nas sementes de feijÃo-de-corda, em todas as variÃveis relacionadas com o vigor e a germinaÃÃo. Entretanto, a aplicaÃÃo exÃgena de soluÃÃo de Ãcido ascÃrbico a 0,85 mM apÃs o envelhecimento por 72 h nas sementes de feijÃo-de-corda (T4) amenizou os efeitos deletÃrios provocados pelo envelhecimento no vigor e na germinaÃÃo dessas sementes. Estas melhorias observadas em T4 foram evidenciadas por um maior conteÃdo de matÃria fresca e seca, maior integridade de membranas, menor peroxidaÃÃo de lipÃdios, maior porcentagem de germinaÃÃo, porcentagem de emergÃncia de plÃntulas no campo, conteÃdo de ascorbato e atividade da peroxidase do ascorbato (APX), quando comparado com o T3. Os resultados sugerem que a aplicaÃÃo exÃgena de Ãcido ascÃrbico 0,85 mM nas sementes de feijÃo-de-corda apÃs o envelhecimento artificial (pÃs-tratamento), pode atenuar seus efeitos deletÃrios provocados sobre o vigor e germinaÃÃo dessas sementes. Finalmente, no terceiro experimento, foi investigado tambÃm o efeito da aplicaÃÃo exÃgena de Ãcido ascÃrbico na aclimataÃÃo de sementes envelhecidas de feijÃo-de-corda ao estresse salino, tambÃm atravÃs de parÃmetros fisiolÃgicos e bioquÃmicos. As sementes foram envelhecidas por 72 h em cÃmara de envelhecimento acelerado (45 ÂC, 99% U.R., no escuro) e posteriormente foram semeadas em papel germitest embebido com: Ãgua desionizada (T2); NaCl a 100 Mm (T3); Ãcido ascÃrbico a 0,85 Mm (T4); NaCl a 100 mM + Ac. AscÃrbico a 0,85 mM (T5) e o tratamento controle consiste de sementes nÃo envelhecidas, embebidas com Ãgua desionizada (T1). Foram feitas coletas em trÃs estÃdios morfofisiolÃgicos, sendo avaliadas variÃveis fisiolÃgicas relacionadas ao vigor. O T2 e o T3 afetaram o vigor das sementes com reduÃÃes na massa, na integridade das membranas e na germinaÃÃo. O T4 atenuou os efeitos provocados pelo envelhecimento na germinaÃÃo e no vigor, apresentando um maior Ãndice de velocidade de emergÃncia (IVE) e menor tempo mÃdio de emergÃncia (TME) e maior teor de Ãgua. O T3 e T5 atrasaram a mobilizaÃÃo de reservas quando comparado com o T1 e T4. O T5 reduziu a massa fresca, aumentou o vazamento de eletrÃlitos e retardou a germinaÃÃo com um menor IVE e maior TME. A aplicaÃÃo de Ãcido ascÃrbico, foi capaz de atenuar os efeitos provocados pelo envelhecimento, mÃs nÃo foi capaz de atenuar os efeitos do NaCl nas sementes envelhecidas de feijÃo-de-corda. O estudo da relaÃÃo entre o uso de antioxidantes naturais, com um possÃvel revigoramento de sementes envelhecidas, utilizando o feijÃo-de-corda como modelo experimental, pode gerar estratÃgias de meios de potencializar as defesas antioxidativas e amenizar os efeitos de estresse em ambientes de armazenamento de sementes sob condiÃÃes nÃo controladas, principalmente em pequenas e mÃdias propriedades rurais. / The main objective of this study was to evaluate the effect of exogenous application of ascorbic acid in reducing the damage caused by aging and salinity in cowpea seeds. Three experiments were conducted, and the plant material used as a template in these experiments, seeds of cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.], cultivate EPACE 10, available from the Germplasm Bank of cowpea of UFC. In the first experiment, preliminary tests were made to obtain the best methodology for the application of ascorbic acid in cowpea seeds. The seeds were incubated with 0.42 and 0.85 mM ascorbic acid at different exposure times (4h, 8h and 24h) using two different methods: (I) - Soaking in germitest paper in a petri dish and (II) - Drowning in solution in the Erlenmeyer. After applying the treatments were quantified in seeds, the ascorbic acid content and then compared to the standard content of endogenous ascorbic acid existing in the control seeds (0 h). It was observed that in all treatments examined, the endogenous AsA content of the seeds of cowpea was greater than that of control seeds, which have not undergone treatment. As has been increasing the exposure time of seeds, there was a steady increase in the ascorbic acid content of seeds, with a statistically significant difference between the exposure times examined, the most efficient of 24 h. There was a significant difference in the concentrations used exogenous, being 0.85 mM of the most efficient. There was no significant difference between the methods applied at a concentration of 0.42 mM, at a concentration of 0.85 mM. At 24 h of exposure, we observed that despite the numerical value of the method (II) is superior to the method (I), we found no statistically significant difference between application methods at that time then we can conclude from the results presented that both the method of application (I) or (II) with the concentration of 0.85 mM ascorbic acid for a period of 24 h was the most efficient methodology for the application of exogenous ascorbic acid in cowpea seeds, cultivate EPACE 10. In the second experiment, as defined the methodology of exogenous application was then made to investigate the possible effect of pre-or post-treatment with ascorbic acid in reducing the harmful effects caused by aging in the cowpea seeds, through physiological and biochemists. Seeds of cowpea rope were placed in accelerated aging chamber (45 ÂC, 99% RH in the dark). The seeds were subjected to four treatments: (T1) and aging seeds were not treated with ascorbic acid (AsA), control (SNE); (T2) and non-aged seeds treated with AsA (SE); (T3) seeds Before aging were subjected to a pretreatment with 0.85 mM AsA (SE-Pre-T); (T4) seeds, after aging, were subjected to a post-treatment with 0.85 mM AsA (Post-SE-T). The seeds of T4 showed higher fresh weight than the control (T1). There was a reduction of almost 15% seed germination after aging for 72 h, evidenced by the treatment (T2). However, when seeds were treated with ascorbic acid solution treatment (T4) the% germination was higher than in the control (T1) in almost 13%. Seed treatment (T2) and (T3) had a higher% of membrane damage (35.16 and 36.82), respectively, measured by increased electrolyte leakage (EC) when compared with the control (T1) (17.84). The aged seeds of treatment (T2) showed a smaller force, measured by electrolyte leakage, the control (T1). T3 caused negative results in the cowpea seeds with aging for 72 h in all variables related to the vigor and germination. However, exogenous application of ascorbic acid solution 0.85 mM after aging for 72 h in the cowpea seeds alleviated the harmful effects caused by aging vigor and germination of seeds. Evidenced by a higher content of fresh and dry weight, integrity of membranes, reduced lipid peroxidation, higher percentage germination, higher percentage of seedling emergence in the field, the higher content of ascorbate and APX activity increased when compared with the T3. The results suggest that exogenous application of 0.85 mM ascorbic acid in the cowpea seeds after artificial aging (after treatment), can mitigate their damaging effects on vigor and germination of these seeds. Finally, the third experiment, we investigated the effect of exogenous application of ascorbic acid in acclimation of aged seeds of cowpea to salt stress also through physiological and biochemical parameters. Seeds were aged for 72 h in the accelerated aging chamber (45 ÂC, 99% RH in the dark). After germitest were sown on paper soaked with (T2) deionized water (T3) 100 mM NaCl, (T4) and 0.85 mM ascorbic acid, (T5) at 100 mM NaCl + Ac. The 0.85 mM ascorbic acid and the control (T1), aging seeds with deionized water. Sampling was done in three stages morph physiologic, when variables related physiological effect. The T2 and T3 affect the vigor with mass reduction in membrane integrity and germination. The T4 attenuated effects caused by aging on the germination and vigor, presenting a higher emergence rate index (ESI) and lower mean emergence time (MET) and higher water content. The T3 and T5 delayed the mobilization of reserves compared with the T1 and T4. The T5 has reduced the fresh weight, increased electrolyte leakage and delayed germination with a largest ESI and smallest MET. The application of ascorbic acid, was able to mitigate the effects caused by aging, but was not able to mitigate the effects of NaCl in the aged seeds of cowpea. The study of the relationship between the use of natural antioxidants, with a possible revival of aged seeds, using the cowpea as a model, can generate media strategies to enhance antioxidative defenses and mitigating the effects of stress in storage environments seed under uncontrolled conditions, mainly in small and medium-sized farms.