Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-02-15T13:55:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1142937 bytes, checksum: 0984fe5cce7d693509543f408c6416db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-15T13:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1142937 bytes, checksum: 0984fe5cce7d693509543f408c6416db (MD5) Previous issue date: 2015-06-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O feijão-caupi (V. unguiculata) destaca-se como alimento para a população e alternativa de renda principalmente no Nordeste, com 60% da produção do gênero Vigna. O cultivo deste feijão está sujeito a perdas pós-colheita, devido a pragas no armazenamento, incluindo Callosobruchus maculatus (Coleoptera: Bruchidae). Inseticidas sintéticos são eficazes contra essa praga, mas seu uso excessivo pode comprometer a qualidade dos alimentos e ocasionar resistência nos insetos. Em razão deste problema, métodos alternativos para o controle de insetos em grãos armazenados, como inseticidas de origem vegetal, tem sido pesquisados. O objetivo deste trabalho foi avaliar a inibição da oviposição, taxa instantânea de crescimento populacional (ri), taxa de desenvolvimento de C. maculatus e a perda de massa de grãos de feijão-caupi após aplicação dos óleo essenciais de Ocimum basilicum (manjericão) e Vanillosmopsis arborea (candeeiro) e seus principais componentes (linalol, estragol e - bisabolol). As unidades experimentais foram constituídas por frascos de 0,8 L tratados com -1 -1 -1 -1 de ar de ar; -1 -1 de ar -1 de ar -1 de ar -1 de ar dos óleos essenciais de manjericão, linalol e estragol -1 de ar -1 de ar -1 de ar de ar -1 de ar -1 de ar de ar de ar; -1 -bisabolol. O óleo essencial de manjericão e os componentes linalol e estragol foram diluídos em etanol e o óleo essencial de candeeiro e o componente -bisabolol em h ou componente foi aplicado por disco de papel filtro com uma microsseringa. O disco de papel foi colocado em placa de Petri coberta com organza em um frasco com 20 insetos adultos sexados ou não, para a avaliação da toxicidade para machos e fêmeas de C. maculatus com 1 a 2 dias de idade. Cada tratamento teve quatro repetições com os insetos expostos ao óleo por fumigação durante 48 h. A taxa de desenvolvimento de C. maculatus foi avaliada com procedimento semelhante, mas a contagem dos adultos foi realizada diariamente após a emergência do primeiro. A oviposição desse inseto foi avaliada nas concentrações letais (CL50, CL25, CL10 e CL1) com 10 casais expostos as mesmas por fumigação durante 48 h (4 repetições por tratamento) e o número de ovos contabilizado por repetição. As CL50 e CL95 do estragol L-1 de ar, -1 -bisabolol foram de -1 -1 de ar -1 de ar -1 respectivamente. As CL50 e CL95 foram de -1 -1 de ar de ar de ar -1 de ar -1 de ar, de ar para de ar para linalol. O aumento das concentrações dos óleos essenciais reduziu a ri, a taxa de desenvolvimento, oviposição e o número de ovos. A perda de massa do feijão tratado com óleo essencial de manjericão foi de 8,2% e a do controle de 14,9%. O feijão tratado com o óleo essencial de candeeiro mostrou perda de 8,4% comparado ao controle, de 15%. Linalol e estragol foram letais a C. maculatus em menores concentrações que os óleos essenciais de manjericão e candeeiro e mostraram maiores inclinações das curvas de mortalidade, o que pode ser explicado pela sua ação de inibição mista à enzima acetilcolinesterase (AChE) ao se ligar à enzima livre e ao complexo enzima- -bisabolol foi mais letal em menores concentrações (CL50 e CL95) para C. maculatus que o óleo essencial de candeeiro, o que pode se explica pelo seu mecanismo de ação que está relacionado com a ativação dos canais K+ATP. Os óleos essenciais de manjericão e candeeiro -bisabolol, possuem efeito inseticida fumigante sobre adultos de C. maculatus e representam uma alternativa ao uso de inseticidas sintéticos. / The cowpea (V. unguiculata) stands out as food for the population and alternative income mainly in the Northeast, with 60% of production of Vigna genre. The cultivation of beans is subjected to postharvest losses due to storage pests, including Callosobruchus maculatus (Coleoptera: Bruchidae). Synthetic insecticides are effective against this pest, but their excessive use may compromise the quality of food and cause resistance in insects. By reason of this problem, alternative methods for the control of insects in stored grains such as vegetable insecticides, have been researched. The objective of this study was to evaluate the inhibition of oviposition, instantaneous rate of population growth (laughs), C. maculatus development rate and the mass loss of cowpea beans after application of the essential oil of Ocimum basilicum (basil) and Vanillosmopsis arborea (lamp) and its main components -bisabolol). The experimental units consisted of 0.8 L bottles treated with 1,2 L L-1 air; 1,6 L L-1 air; 2 L L-1 air; 2,4 L L-1 air; 2,8 L L-1 air; 3,2 L L-1 air and 3,6 L L-1 air to basil essential oil, linalool and estragole and ,2 L L-1 air; 1,6 L L-1 air; 2 L L-1 air, 2,4 L L-1 air; 2,8 L L-1 air; 5,6 L L-1 air; 8,4 L L-1 air e 11,2 L L-1 air for the essential oil lamp and the -bisabolol. The essential oil of basil and linalool and estragole were dil -bisabolol in hexane. A total of 25 L of each solution or oil component was applied by the filter paper disc with a microsyringe. The paper disc was placed in a covered petri dish with organza a vial with the components sexed and 20 adult insects or not for the evaluation of toxicity to C. maculatus males and females with 1 to 2 days old. Each treatment was replicated four times with the oil insects exposed for 48 h. The instantaneous rate of increase (ri) in the presence of essential oils was determined with the lethal concentrations (LC50, LC25, LC10, LC1, LC0,5 e LC0,25) of bioassays of toxicity. Bottles with 100 g of bean and 20 adult insects, non-sexed aged 1-2 days, and four replications were used for LC. After 45 days, the adult offspring was recorded. A similar procedure was done to assess the development rate, but the count was performed daily after the emergence of the first adult. The paper disc was placed in a covered Petri dish with organza and added at the bottom of the flasks then received 20 adult insects or unsexed sexed in the case of the evaluation of toxicity for males and females aged 1 to 2 days. Each treatment consisted of 4 replications, and the insects were exposed to oil for fumigation for 48 h. The instantaneous rate of increase (laughs) insects in the presence of essential oils was determined using the lethal. Oviposition was evaluated in lethal concentrations (LC 50, LC25, LC10 and LC1) 10 couples with the same exposed for fumigation for 48 hours (four replications per treatment), and counted the number of eggs per replicate. The LC 50 and LC95 were 1.79 L L-1 air and 4.36 L L-1 air to 1.68 L L-1 air and basil oil and 3.35 L L-1 air to linalool respectively. The LC50 and LC95 showed estragole 1.51 L L-1 air and 2.87 L L-1 air, essential oil lamp showed 5.23 L L-1 air for the LC50 and LC95 was 12.97 L L-1 air. The -bisabolol 2.47 L L-1 air and 8.82 L L-1 air to LC50 and LC95, respectively. Increasing concentrations of essential oils decreased the laughs, the rate of development and oviposition. The number of eggs decreased with increasing concentrations. The mass loss of the treated beans with basil essential oil was 8.2% and in control of 14.9%. The essential oil lamp showed loss of 8.4% compared to the control of 15%. Linalool and estragole were lethal to C. maculatus at concentrations less than the essential oils of basil and lamp and showed higher slopes of the mortality curves, which can be explained by its action mixed inhibiting the enzyme acetylcholinesterase (AChE) to connect to free and enzyme-substrate complex -bisabolol was deadliest in lower concentrations (LC50 and LC95) for C. maculatus that the essential oil lamp, which can be explained by their mechanism of action that is related to the activation of K+ ATP channels. The essential oil of basil and lamp and its -bisabolol possess fumigant insecticidal effect on adults C. maculatus and represent an alternative to the use of synthetic insecticides.

Introdução: As proteínas alimentares são fontes de peptídeos atuantes em vários processos metabólicos. Existem evidências de que a proteína do feijão caupi (Vigna unguiculata L. Walp) é capaz de reduzir o colesterol em hamsters e em humanos, porém, a permeabilidade após a digestão, o mecanismo de ação e a evidência direta da participação de peptídeos no metabolismo colesterol não são claros. Objetivo: Investigar a permeabilidade intestinal e avaliar o efeito nas vias luminal e endógena do metabolismo do colesterol de peptídeos provenientes de feijão caupi (Vigna unguiculata L. Walp). Metodologia: A permeabilidade dos peptídeos provenientes do caupi produzidos por hidrólise enzimática foi testada em linhagens de células Caco-2 usando placas Transwell®. Para investigar o efeito na via luminal, três peptídeos identificados na fração 3 kDa do hidrolisado (LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE e LNL) foram testados na solubilização de colesterol e fosfatidilcolina, no tamanho das micelas de colesterol e interação com ácidos biliares in vitro. Para verificar o efeito no metabolismo endógeno, linhagens de células HepG2 foram incubadas com peptídeos sintéticos (MELNAVSVVHS e MELNAVSVVSH) identificados como resultado do ensaio de permeação nas células Caco-2. A expressão de RNAm dos transportadores de colesterol NPC1L1, ABCA1 e ABCG1 foi realizada nas células Caco-2 e a expressão de HMGCR, SREBP2, LDLR, LXR, AMPK1 foi avaliada nas células HepG2. Resultados: A exposição das células Caco-2 à fração 3 kDa do hidrolisado (2,5 e 5 mg/mL) aumentou a expressão de ABCG1 nos tempos 6 h e 12 h. O níveis de RNAm dos genes SREBP2, HMGCR e LDLR reduziram nas HepG2 após 24h do tratamento com o peptídeo MELNAVSVVHS (50 M e 100 M). A fração 3 kDa do hidrolisado e os peptídeos LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE e LNL foram capazes de reduzir a solubilidade do colesterol micelar in vitro em no máximo 42 por cento , bem como, provocaram mudanças estruturais ao interagirem com a fosfatidilcolina, com destaque ao peptídeo LNL (50 por cento de ligação). O peptídeo LNL foi o único capaz de promover a precipitação do colesterol em forma de cristais devido à interação com os ácidos biliares. Conclusões: A fração 3 kDa do hidrolisado e todos os peptídeos testados foram capazes de insolubilizar o colesterol in vitro. Constata-se que o mecanismo de competição pelo espaço intramicelar com o colesterol se dá pela interação com os componentes micelares e não diretamente com o colesterol. O peptídeo do feijão caupi MELNAVSVVHS foi permeável e foi capaz de reduzir a expressão do fator de transcrição SREBP2 (consequentemente reduzindo HMGCR e LDLR) / Introduction: Food proteins are sources of peptides acting in sevral metabolic processes. There is evidence that cowpea (Vigna unguiculata L. Walp) protein is able to lower cholesterol levels in hamsters and humans, but its permeability after digestion, mechanism of action and direct evidences of peptide participation in cholesterol metabolism are not clear. Objective: To investigate the intestinal permeability and to evaluate the effect on the luminal and endogenous cholesterol metabolism pathways of peptides from cowpea (Vigna unguiculata L. Walp). Methods: The permeability of the cowpea peptides produced by enzymatic hydrolysis was tested on Caco-2 cell lines using Transwell® plates. To investigate the effect on the luminal pathway, three peptides identified in the 3 kDa hydrolyzate fraction (LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE and LNL) were tested for in vitro cholesterol and phosphatidylcholine solubilization, cholesterol micelle size changing and interaction with bile acids. To verify the effect on endogenous metabolism, HepG2 cell lines were incubated with synthetic peptides (MELNAVSVVHS or MELNAVSVVSH) identified as a result of the permeation assay on Caco-2 cells. The mRNA expression of the cholesterol transporters NPC1L1, ABCA1 and ABCG1 was performed on Caco-2 cells and the expression of HMGCR, SREBP2, LDLR, LXR, AMPK1 was evaluated in HepG2 cells. Results: Exposure of Caco-2 cells to the 3 kDa hydrolyzate fraction (2.5 and 5 mg/mL) increased ABCG1 expression at 6 h and 12 h times. The mRNA levels of the SREBP2, HMGCR and LDLR genes were reduced in HepG2 after 24h of treatment with the MELNAVSVVHS peptide (50 M and 100 M). The 3 kDa of the hydrolyzate fraction and the peptides LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE and LNL were able to reduce the solubility of micellar cholesterol in vitro in a maximum of 42 per cent , as well as, caused structural changes when interacting with phosphatidylcholine, with emphasis on the LNL peptide (50 per cent of binding). The LNL peptide alone was able to promote cholesterol precipitation in the form of crystals due to interaction with bile acids. Conclusions: The 3 kDa hydrolysate fraction and all peptides tested were able to insolubilize cholesterol in vitro. It was observed that the mechanism of competition for the intramicellar space with cholesterol is given by the interaction with the micellar components and not directly with the cholesterol. The MELNAVSVVHS cowpea peptide was permeable and was able to reduce the expression of the SREBP2 transcription factor (thereby reducing HMGCR and LDLR)

Introdução: As doenças cardiovasculares representam a principal causa de morte no mundo, sendo o aumento da concentração de colesterol sanguíneo um dos seus principais fatores de risco. O processo aterosclerótico envolve não apenas a deposição de colesterol nas artérias, mas a inflamação tem papel central em todas as fases do processo aterosclerótico. Estudo em animais mostrou, por sua vez, que a proteína de feijão caupi é um potente redutor na concentração de colesterol sangüíneo. Objetivo: Avaliar a influência da proteína de feijão caupi sobre o perfil lipídico, apolipoproteínas, glicose, insulina, HOMA-IR, marcadores de inflamação e de disfunção endotelial em pacientes hipercolesterolêmicos. Métodos: A proteína de feijão caupi foi isolada por precipitação isoelétrica da farinha de feijão caupi desengordurada. O isolado protéico de caupi (IPC) foi utilizado no desenvolvimento do shake à base de proteína de caupi, caseinato de cálcio foi utilizado para desenvolvimento do shake controle. Realizou-se um ensaio clínico do tipo crossover, aleatorizado, cego e controlado. Uma amostra de 44 indivíduos hipercolesterolêmicos foi dividida em 2 grupos (Grupo Controle e Grupo IPC), cada grupo recebeu shake caseína e shake IPC, respectivamente, por 6 semanas cada. Depois do washout de 4 semanas, os indivíduos receberam o shake oposto por mais 6 semanas. Foram quantificadas as variáveis bioquímicas: colesterol total, LDL-c, HDL-c, triglicerídeos, colesterol não-HDL, apo A1, apo B, razão LDL/HDL, razão TG/HDL, razão apo B/apo A1, glicose de jejum, insulina de jejum, HOMA-IR (modelo de avaliação da homeostase), proteína C reativa (PCR), molécula de adesão intercelular solúvel-1 (sICAM-1) e molécula de adesão vascular solúvel-1 (sVCAM- 1) antes e após cada período experimental. A diferença entre os shakes foi analisada com ANOVA para medidas repetidas ao nível de significância de 5 por cento . Resultados: A amostra final foi composta por 38 indivíduos com idade média de 57 anos. A redução em cadeia (delta após consumo de proteína de feijão caupi menos delta após consumo de caseína) no colesterol total foi de 21,0 mg.dL-1 (p < 0,001), CT( por cento ) foi de 8,4 por cento (p < 0,001), LDL( por cento ) foi de 14,4 por cento (p < 0,001), colesterol não-HDL foi de 24,3 mg.dL-1 (p < 0,001) e apo B foi de 15,5 mg.dL-1 (p < 0,001). A ingestão de proteína de caupi afetou significativamente o HDL-c e a mudança em cadeia observada foi um aumento de 3,2 mg.dL-1 (p =0,044). Os marcadores de metabolismo glicídico (glicose de jejum, insulina de jejum e HOMA-IR), bem como os marcadores de inflamação (PCR) e de disfunção endotelial (sVCAM-1 e sICAM- 1) não sofreram modificações significativas após consumo de proteína de feijão caupi (p > 0,05). Conclusão: O presente estudo mostra que a ingestão diária de 25 g de proteína de feijão caupi durante 6 semanas é capaz de reduz os níveis de colesterol sanguíneo, em especial a fração LDL-c; no entanto, não parece exercer influência sobre os marcadores de inflamação subclínica e de disfunção endotelial. Portanto, o aumento do consumo de feijão caupi pode representar uma alternativa eficaz, barata e viável na melhora dos níveis lipídicos em indivíduos hipercolesterolêmicos / Introduction: Cardiovascular diseases are the leading cause of death worldwide, and the increase of cholesterol in blood is one of their main risk factors. The atherosclerotic process involves not only the deposition of cholesterol in the arteries, inflammation plays a central role in all stages of atherosclerosis. Animal study showed that the protein of cowpea is a potent reducer of blood cholesterol. Objective: To evaluate the influence of cowpea protein on blood lipids, apolipoproteins, glucose, insulin, HOMA-IR, markers of inflammation and endothelial dysfunction in hypercholesterolemic patients. Methods: The protein of cowpea was isolated by isoelectric precipitation of defatted flour of cowpea. Cowpea protein isolate (CPI) was used to develop the cowpea protein shake, and calcium caseinate was used for development of the control shake. A cross-over, randomized, blinded and controlled clinical trial was conducted with a sample of 44 hypercholesterolemic subjects, which was divided into two groups (control group and CPI group). Each group received casein shake and CPI shake, respectively, for taken for 6 weeks. After this period and a 4-week washout, subjects received the opposite shake for taken for 6 weeks. Biochemical variables were measured: total cholesterol, LDL-C, HDL-C, triglycerides, non-HDL cholesterol, apo A1, apo B, LDL/HDL ratio, TG/HDL ratio, apo B/apo A1 ration, fasting glucose, fasting insulin, HOMA-IR (homeostasis model assessment), C-reactive protein (CRP), soluble intercellular adhesion molecule-1 (sICAM-1) and soluble vascular adhesion molecule-1 (sVCAM-1) before and after each experimental period. The difference between the shakes was analyzed with repeated measures analysis of variance (ANOVA) at a significance level of 5 per cent . Results: The final sample consisted of 38 subjects with mean age of 57 years. The net changes in serum total cholesterol concentrations was a decrease of -21.05 mg.dL-1 (p < 0.001), in total cholesterol was -8.42 per cent (p < 0.001), in LDL-c was -14.36 per cent (p < 0.001), in non-HDL cholesterol was -24.29 mg.dL-1 (p < 0.001) and apoB was -15.55 mg.dL-1 (p < 0.001). Cowpea protein intake significantly affected serum HDL-c concentrations, the net change was a increase of 3.24 mg.dL-1 (p= 0,044). Markers of glycemic control (fasting glucose, fasting insulin and HOMA-IR) and inflammation markers (CRP) and endothelial dysfunction (sICAM-1 and sVCAM-1) have not changed significantly after consumption of cowpea protein (p > 0.05). Conclusion: This study shows that daily intake of 25 g of cowpea protein for 6 weeks can reduce levels of blood cholesterol, especially LDL-c, however did not exhibit influence on markers of subclinical inflammation and endothelial dysfunction. Therefore, the consumption of cowpea can be an effective, inexpensive and feasible way to control blood lipids of hypercholesterolemic subjects

Introdução: Doenças cardiovasculares constituem importante causa de morte em todo mundo e a hipercolesterolemia está diretamente relacionada a elas. A dieta desempenha papel importante neste processo e alguns alimentos como o feijão caupi (Vigna unguiculata L. Walp), especialmente sua proteína, tem sido apontado com potencial capacidade de redução do colesterol plasmático. Os efeitos hipocolesterolêmicos já observados indicaram o uso da proteína do feijão caupi, ou dos seus peptídeos, como ingrediente funcional de alimentos para a promoção da saúde e a redução do risco de doenças. Entretanto, as consequências da digestão gastrointestinal na absorção destes peptídeos são claramente complexas tornando essenciais estudos in vitro e in vivo para avaliar a sua bioacessibilidade e sua resistência à degradação gastrointestinal, além da disponibilidade e real eficácia destes peptídeos. Objetivo: Analisar a biodisponibilidade de peptídeos e avaliar parâmetros ligados ao metabolismo do colesterol em modelos animais após ingestão de isolado proteico de feijão caupi. Métodos: A farinha de feijão caupi foi desengordurada e sua proteína isolada. O isolado proteico foi submetido a métodos de hidrólise in vitro, para verificação das frações peptídicas formadas e inferência sobre a capacidade de ligação à albumina. Dois experimentos in vivo foram conduzidos. No primeiro, o isolado proteico do feijão caupi foi administrado a ratos e a concentração dos peptídeos monitorada no sangue, por 2 horas. O experimento in vivo 2 consistiu na alimentação de hamsters com dietas normo (N) - e hipercolesterolêmicas por 21 dias, contendo a proteína do feijão caupi como única proteína da ração (I), comparada ao controle de caseína (H). Neste experimento foram analisados no plasma: colesterol total (CT) e frações (LDLc, VLDLc e HDLc), triglicerídeos (TG) e peptídeos; nas fezes: colesterol total (CF) e ácidos biliares (AB); no fígado: colesterol (CH) e lipídeos totais (LH), HMGCR (atividade enzimática e expressão) e expressão de SREBP2, LDLR, ABCA1, ABCG1, ABCG5, ABCG8, LXRa e AMPK. Resultados: Os peptídeos identificados a partir da hidrólise proteica do feijão caupi, ou a partir do plasma dos animais estudados não evidenciaram similaridades entre os experimentos ou corresponderam a sequências previamente identificadas para o feijão caupi a partir de banco de dados. CT, VLDLc, HDLc, TG, CH dos hamsters foram maiores nos grupos H e I quando comparado ao N; LDLc foi maior para I comparado aos demais; LH foi maior em H comparado a N, sendo que I não diferiu dos demais; CF foi maior para I comparado a N, sendo que H não diferiu dos demais. A expressão de ABCA1 foi maior para I em relação aos demais; LXRa foi maior para I em relação a H, mas N não diferiu dos demais; SREBP2 foi menor em H em comparação aos demais; HMGCR foi mais expressa em N em comparação aos demais, ao passo que a atividade desta enzima foi maior em I quando comparado a N, sendo que H não diferiu dos demais. Não houve diferença entre os grupos quanto a AB ou expressão de ABCG8 ou AMPK. Não foram obtidos resultados de expressão para LDLR, ABCG1 e ABCG5. Conclusão: Apesar de pesquisas anteriores a este trabalho terem evidenciado a capacidade do isolado proteico do feijão caupi em inibir a atividade da HMGCR, inibir a solubilização micelar ou melhorar o perfil de lipídeos plasmáticos, no trabalho atual esta matéria prima não mostrou atuação positiva quanto ao metabolismo do colesterol de hamsters nas condições experimentais utilizadas. Os fragmentos indicados como peptídeos obtidos a partir da hidrólise proteica do feijão caupi, ou do plasma dos animais estudados não corresponderam a peptídeos com comprovada, ou até mesmo, com indicação de bioatividade / Introduction: Cardiovascular diseases are important cause of death worldwide and hypercholesterolemia is directly related to them. Diet plays an important role in this process and some foods such as cowpea (Vigna unguiculata L. Walp), especially its protein, have been shown to have a potential for reducing plasma cholesterol. The hypocholesterolemic effects already observed indicated the use of cowpea protein, or its peptides, as a functional food ingredient for health promotion and reduction of disease risk. However, the consequences of gastrointestinal digestion on the absorption of these peptides are clearly complex, making in vitro and in vivo studies essential to assess their bioaccessibility and resistance to gastrointestinal degradation, as well as the availability and actual efficacy of these peptides. Objectives: To analyze the bioavailability of peptides and evaluate parameters related to cholesterol metabolism in animal models after ingestion of protein isolate of cowpea. Methods: Cowpea flour was defatted and its protein isolated. The protein isolate was subjected to in vitro hydrolysis methods to verify the formed peptide fractions and inference about albumin binding ability. Two in vivo experiments were conducted. In the first, the cowpea protein isolate was administered to rats and the concentration of the peptides monitored in the blood for 2 hours. The in vivo experiment 2 consisted of feeding hamsters with normal (N) - and hypercholesterolemic diets for 21 days, containing the cowpea protein as the sole dietary protein (I), compared to casein control (H). In this experiment were analyzed in the plasma: total cholesterol (TC) and fractions (LDLc, VLDLc and HDLc), triglycerides (TG) and peptides; In feces: total cholesterol (CF) and bile acids (AB); In the liver: cholesterol (CH) and total lipids (LH), HMGCR (enzymatic activity and expression) and expression of SREBP2, LDLR, ABCA1, ABCG1, ABCG5, ABCG8, LXRa and AMPK. XX. Results: The peptides identified from the protein hydrolysis of cowpea or from the plasma of the animals studied did not show similarities among the experiments or correspond to sequences previously identified for the cowpea from the database. CT, VLDLc, HDLc, TG, CH of hamsters were higher in groups H and I when compared to N; LDLc was higher for I compared to the others; LH was higher in H compared to N, and I did not differ from the others; CF was higher for I compared to N, and H did not differ from the others. The expression of ABCA1 was higher for I than the others; LXRa was higher for I than H, but N did not differ from the others; SREBP2 was lower in H compared to the others; HMGCR was more expressed in N compared to the others, whereas the activity of this enzyme was higher in I when compared to N, and H did not differ from the others. There was no difference between groups regarding AB or expression of ABCG8 or AMPK. No expression results were obtained for LDLR, ABCG1 and ABCG5. Conclusion: Although previous research to this work evidenced the ability of the cowpea protein isolate to inhibit HMGCR activity, inhibit micellar solubilization or improve the plasma lipid profile, in the current work this raw material did not show a positive cholesterol metabolism of hamsters under the experimental conditions used. The fragments indicated as peptides obtained from the protein hydrolysis of cowpea beans, or from the plasma of the animals studied did not correspond to peptides with proven, or even, with indication of bioactivity

Introdução: As proteínas alimentares são fontes de peptídeos atuantes em vários processos metabólicos. Existem evidências de que a proteína do feijão caupi (Vigna unguiculata L. Walp) é capaz de reduzir o colesterol em hamsters e em humanos, porém, a permeabilidade após a digestão, o mecanismo de ação e a evidência direta da participação de peptídeos no metabolismo colesterol não são claros. Objetivo: Investigar a permeabilidade intestinal e avaliar o efeito nas vias luminal e endógena do metabolismo do colesterol de peptídeos provenientes de feijão caupi (Vigna unguiculata L. Walp). Metodologia: A permeabilidade dos peptídeos provenientes do caupi produzidos por hidrólise enzimática foi testada em linhagens de células Caco-2 usando placas Transwell®. Para investigar o efeito na via luminal, três peptídeos identificados na fração 3 kDa do hidrolisado (LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE e LNL) foram testados na solubilização de colesterol e fosfatidilcolina, no tamanho das micelas de colesterol e interação com ácidos biliares in vitro. Para verificar o efeito no metabolismo endógeno, linhagens de células HepG2 foram incubadas com peptídeos sintéticos (MELNAVSVVHS e MELNAVSVVSH) identificados como resultado do ensaio de permeação nas células Caco-2. A expressão de RNAm dos transportadores de colesterol NPC1L1, ABCA1 e ABCG1 foi realizada nas células Caco-2 e a expressão de HMGCR, SREBP2, LDLR, LXR, AMPK1 foi avaliada nas células HepG2. Resultados: A exposição das células Caco-2 à fração 3 kDa do hidrolisado (2,5 e 5 mg/mL) aumentou a expressão de ABCG1 nos tempos 6 h e 12 h. O níveis de RNAm dos genes SREBP2, HMGCR e LDLR reduziram nas HepG2 após 24h do tratamento com o peptídeo MELNAVSVVHS (50 M e 100 M). A fração 3 kDa do hidrolisado e os peptídeos LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE e LNL foram capazes de reduzir a solubilidade do colesterol micelar in vitro em no máximo 42 por cento , bem como, provocaram mudanças estruturais ao interagirem com a fosfatidilcolina, com destaque ao peptídeo LNL (50 por cento de ligação). O peptídeo LNL foi o único capaz de promover a precipitação do colesterol em forma de cristais devido à interação com os ácidos biliares. Conclusões: A fração 3 kDa do hidrolisado e todos os peptídeos testados foram capazes de insolubilizar o colesterol in vitro. Constata-se que o mecanismo de competição pelo espaço intramicelar com o colesterol se dá pela interação com os componentes micelares e não diretamente com o colesterol. O peptídeo do feijão caupi MELNAVSVVHS foi permeável e foi capaz de reduzir a expressão do fator de transcrição SREBP2 (consequentemente reduzindo HMGCR e LDLR) / Introduction: Food proteins are sources of peptides acting in sevral metabolic processes. There is evidence that cowpea (Vigna unguiculata L. Walp) protein is able to lower cholesterol levels in hamsters and humans, but its permeability after digestion, mechanism of action and direct evidences of peptide participation in cholesterol metabolism are not clear. Objective: To investigate the intestinal permeability and to evaluate the effect on the luminal and endogenous cholesterol metabolism pathways of peptides from cowpea (Vigna unguiculata L. Walp). Methods: The permeability of the cowpea peptides produced by enzymatic hydrolysis was tested on Caco-2 cell lines using Transwell® plates. To investigate the effect on the luminal pathway, three peptides identified in the 3 kDa hydrolyzate fraction (LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE and LNL) were tested for in vitro cholesterol and phosphatidylcholine solubilization, cholesterol micelle size changing and interaction with bile acids. To verify the effect on endogenous metabolism, HepG2 cell lines were incubated with synthetic peptides (MELNAVSVVHS or MELNAVSVVSH) identified as a result of the permeation assay on Caco-2 cells. The mRNA expression of the cholesterol transporters NPC1L1, ABCA1 and ABCG1 was performed on Caco-2 cells and the expression of HMGCR, SREBP2, LDLR, LXR, AMPK1 was evaluated in HepG2 cells. Results: Exposure of Caco-2 cells to the 3 kDa hydrolyzate fraction (2.5 and 5 mg/mL) increased ABCG1 expression at 6 h and 12 h times. The mRNA levels of the SREBP2, HMGCR and LDLR genes were reduced in HepG2 after 24h of treatment with the MELNAVSVVHS peptide (50 M and 100 M). The 3 kDa of the hydrolyzate fraction and the peptides LLNPDDEQL; FFFGQDGGSKGEE and LNL were able to reduce the solubility of micellar cholesterol in vitro in a maximum of 42 per cent , as well as, caused structural changes when interacting with phosphatidylcholine, with emphasis on the LNL peptide (50 per cent of binding). The LNL peptide alone was able to promote cholesterol precipitation in the form of crystals due to interaction with bile acids. Conclusions: The 3 kDa hydrolysate fraction and all peptides tested were able to insolubilize cholesterol in vitro. It was observed that the mechanism of competition for the intramicellar space with cholesterol is given by the interaction with the micellar components and not directly with the cholesterol. The MELNAVSVVHS cowpea peptide was permeable and was able to reduce the expression of the SREBP2 transcription factor (thereby reducing HMGCR and LDLR)

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-12-22T12:34:03Z No. of bitstreams: 1 Karmile Maria da Silva.pdf: 752860 bytes, checksum: 79554571701439a052d6a07f24499392 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-22T12:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karmile Maria da Silva.pdf: 752860 bytes, checksum: 79554571701439a052d6a07f24499392 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The seeds of cowpea (Vigna uniguiculata (L.) Walp.) Can be treated with essential oil, in order to reduce the attack of insect pests during storage, but it is important that this treatment does not interfere so harmful physiological quality seed. The aim of this study was to evaluate the feasibility and the degree of infestation of cowpea seeds, cv. IPA 206 treated with essential oil of clove and stored for a period of six months at ambient conditions, both in paper and in PET bottles. We used two methods of applying essential oil, a direct method (immersion) at concentrations of 0, 1, 2, 4 and 8%, and an indirect method (fumigation) in the following doses: 0, 5, 10, 15 and 20μL. We used a completely randomized case (DIC) for each type of packaging two experiments were conducted in factorial 5 x 4 (concentrations or dosages and storage periods) with four replications. The following variables were determined: Seedling emergence, speed of emergence index, mean emergence time, emergence rate coefficient, length of the area and root dry mass of the aerial part and root system of the seedling fresh weight part of the area and the root system and electrical conductivity. This was followed by the analysis of variance, treatment means were compared by Tukey test at 5% probability by the program SISVARUFLA, performed the analysis of simple linear correlation at a significance level of 1% (p <0,01), using the statistical program Soc (NTIA / EMBRAPA, 1989), with the exception of water content and degree of infestation. We conclude that the plastic pet bottle got better efficiency, along with the direct method (immersion) that maintained the physiological quality of seeds treated and controlled better insect pests in storage period of six months, except for the concentration 8%. As for the indirect method the highest doses 15 and 20μL, were the most efficient. / As sementes de feijão caupi (Vigna uniguiculata (L.) Walp.) podem ser tratadas com óleo essencial, com intuito de diminuir o ataque de insetos-praga durante o armazenamento, mas é importante que este tratamento não interfira de modo prejudicial na qualidade fisiológica das sementes. O objetivo desse trabalho foi avaliar a viabilidade e o grau de infestação das sementes de feijão caupi, cv. IPA 206, tratadas com óleo essencial de cravo da índia e armazenadas durante um período de seis meses em condições ambientais, tanto em sacos de papel como em garrafas pet. Foram utilizados dois métodos de aplicação do óleo essencial, um método direto (imersão) nas concentrações de 0; 1; 2; 4 e 8%, e um método indireto (fumigação) nas seguintes dosagens: 0; 5; 10; 15 e 20μL. Utilizou-se o delineamento inteiramente ao caso (DIC), para cada tipo de embalagem foram realizados dois experimentos em esquema fatorial 5 x 4 (concentrações ou dosagens e períodos de armazenamento) com quatro repetições. Foram determinadas as seguintes variáveis: Emergência de plântulas, índice de velocidade de emergência, tempo médio de emergência, coeficiente de velocidade de emergência, comprimento da parte área e do sistema radicular, massa seca da parte área e do sistema radicular da plântula, massa fresca da parte área e do sistema radicular e teste de condutividade elétrica. Posteriormente, foi realizada a análise de variância, as médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade pelo programa SISVAR-UFLA, Realizou-se a análise de correlação linear simples, em nível de significância de 1% (p< 0,01), utilizando-se o programa estatístico Soc (NTIA/EMBRAPA, 1989), com exceção do teor de água e grau de infestação. Conclui-se que a embalagem plástica de garrafa pet obteve melhor eficiência, juntamente, com o método direto (imersão) que mantiveram a qualidade fisiológica das sementes tratadas e controlaram melhor os insetos-praga no período de armazenamento de seis meses, com exceção da concentração de 8%. Já para o método indireto as maiores doses 15 e 20μL, foram as mais eficientes.

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-16T16:59:31Z No. of bitstreams: 1 Iradenia da Silva Sousa.pdf: 500772 bytes, checksum: 8fe476304d2b3fb43577f5ce58d236e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T16:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Iradenia da Silva Sousa.pdf: 500772 bytes, checksum: 8fe476304d2b3fb43577f5ce58d236e7 (MD5) Previous issue date: 2008-04-04 / The cowpea is a main source of vegetable protein for the people of lower purchasing power of Asia, Africa, Europe and North America, Central and South. In the North and Northeast of Brazil, represent one the most important leguminous food of the diet. Most of the genotypes grown in the world have simple inflorescence. However, cultivars with composite inflorescence were find in cowpea. The aim this work was to study the inherintance of the characters related to production and to inflorescence in crosses between genotypes with simple inflorescence and composite inflorescence. The work was realized at Embrapa Meio-Norte, in Teresina, PI, in the years from 2006 to 2007. It was been made crosses between TVx 5058-09C (P2) x Cacheadoroxo (P1) and Cacheado-roxo (P1) x AU94-MOB-816 (P3). The genitor Cacheadoroxo with composite inflorescence and the other two genitors presenting simple inflorescence. The parents, the generations F1's, F2's and the backcrosses were evaluated in complete randomized blocks design with six repetitions. The parents and F1's consisted of a plot per block, the F2 generations and the backcrosses consisted of five and two rows per block, respectively. The plots were represented per one row with 7,0 m of length, the spacing between rows was 1,0 m and between hole in rows of 0,70 m. The genetic studies were realized with based on the means and variances, with help of the Program Genes. The comparison of means between the populations with simple inflorescence and with composite inflorescence was made using the “t” test with the degrees of freedom obtained by the approach of Satterthwaite. The complete model was enough to explain the observed variation in the characters related to production and peduncle. The additive effect was the more important in the genetic control for most of the characters, suggests are useful in the selection for increased of the production. The heritabilities were low and average magnitudes, recommending that the selection is made in generations more advanced. Statisticaly were differences significant between the mean of the population with simple inflorescence and the averages of populations with composite inflorescence for the characters under study. / O feijão-caupi é uma das principais fontes de proteína vegetal, para as populações de menor poder aquisitivo da Ásia, África, Europa e Américas do Norte, Central e do Sul. Nas regiões Norte e Nordeste do Brasil, representa uma das leguminosas mais importantes da dieta alimentar. A maioria dos genótipos cultivados em todo o mundo possui inflorescência simples. Contudo, foram encontradas cultivares com inflorescência composta. O objetivo deste trabalho foi estudar a herança dos caracteres relacionados à produção e à inflorescência em cruzamentos entre genótipos com inflorescência simples e inflorescência composta. O trabalho foi realizado na Embrapa Meio-Norte, em Teresina, PI, nos anos de 2006 a 2007. Foram feitos dois cruzamentos entre TVx 5058-09C (P2) x Cacheado-roxo (P1) e Cacheado-roxo (P1) x AU94-MOB-816 (P3). O genitor Cacheado-roxo com inflorescência composta e os outros dois genitores apresentam inflorescência simples. Os genitores, as gerações F1’s, F2’s e os respectivos retrocruzamentos foram avaliados quanto aos caracteres relacionados à produção e à inflorescência em um experimento em blocos casualizados com seis repetições. Os genitores e as F1’s constaram de uma parcela por bloco; as gerações F2’s e os retrocruzamentos constaram de cinco e duas fileiras por bloco,respectivamente. As parcelas foram representadas por uma fileira com 7,0 m de comprimento, o espaçamento entre fileiras foi de 1,0 m e entre covas dentro da fileira de 0,70 m. Os estudos genéticos foram realizados com base nas médias e variâncias com auxilio do Programa Genes. A comparação de médias entre as populações com inflorescência simples e composta foi feito utilizando-se o teste ‘’t’’ com o grau de liberdade obtido pela aproximação de Satterthwaite. O modelo completo foi suficiente para explicar a variação observada nos caracteres relacionados à produção e ao pedúnculo. O efeito aditivo foi o mais importante no controle genético para a maioria dos caracteres, sendo úteis na seleção para aumento da produção. As herdabilidades foram de baixa e média magnitudes, recomendando-se que a seleção seja feita em gerações mais avançadas. Estatisticamente, houve diferenças significativas entre as médias das populações com inflorescência simples e as das populações com inflorescência composta para os caracteres em estudo.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T12:45:37Z No. of bitstreams: 1 Arlinda Pereira Eloy.pdf: 539902 bytes, checksum: b58cec9ba237d600ff69b073b4bcf24c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T12:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arlinda Pereira Eloy.pdf: 539902 bytes, checksum: b58cec9ba237d600ff69b073b4bcf24c (MD5) Previous issue date: 2003-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Fusarium wilt, caused by Fusarium oxysporum f. sp. tracheiphilum, reduces cowpea yield in Northeastern Brazil. This work aimed to characterize the nature and ability to transfer cowpea Fusarium wilt suppressiveness of a soil; to analyze populational dynamic of F. oxysporum f. sp. tracheiphilum and others soilborne microorganisms in two soils with different levels of suppressiveness, as well as to determine the relation of disease severity and the reductions of yield in cowpea seeds, in two plant seasons. In the nature and transfer of suppressiveness analyses the two soils samples used were previously classified as suppressive (CAC) and conducive (GOI) to cowpea Fusarium wilt, and did not slown indigenous populations of Fusarium oxysporum. When the samples were infested with the pathogen and sown with BR 17 Gurguéia (highly susceptible) and IPA 206 (moderately susceptible) cowpea cultivars, total populations of both fungi and bacteria, and Bacillus spp. were higherin rhizosphere of the suppressive soil samples than in the conducive ones. The suppressiveness was not related to a suppressive effect on the pathogen population. Soil sterilization did not change the suppressive capability, pointing out its abiotic origin. The ability suppressiveness transfer to a conducive soil was demonstrated only. In the suppressive soil, a significant influence of pH levels on Fusarium wilt severity was verified, which decreased in increasing pH. The inoculum density alone did not determine the severity of Fusarium wilt on plants cultivated in both soils, due to the influence of the efficiency of the inoculum, which was significantly lower in the suppressive soil. Aiming to determine the linkage of disease severity to the reduction of cowpea seed yield, cultivated during two different period of time, an essay was carried out using plots artificially infested with the pathogen. The first planting was made in April 2002, while the second one in October, in thesame year. At the harvest, yield for each plot was determined through the total weight of seed per plant. After harvesting the severity of Fusarium wilt was evaluated in all plants. There was no significant correlation between inoculum densities of the pathogen that was present in the soil before planting and the disease severity. The yield in the first planting period was higher than in the second one, in non-infested plots, what may have been due to the water stress to which the plants were submitted right before the blossom.Differences between the severity average levels and yield losses were not verified for both essays. Fusarium wilt severity ranged between 3.2 and 93.3%, while the yield losses ranged between 2.2 and 98.1%. / A murcha-de-fusário, causada por Fusarium oxysporum f. sp. tracheiphilum, é responsável por grandes reduções de rendimento na cultura do caupi no Nordeste brasileiro. O trabalho teve como objetivos caracterizar a natureza e a capacidade de transferência de supressividade de um solo à murcha-de-fusário do caupi, analisar a dinâmica populacional de F. oxysporum f. sp tracheiphilum e outros microrganismos em dois solos com diferentes níveis de supressividade, bem como determinar a relação entre a severidade da doença e as reduções no rendimento de sementes de caupi em duas épocas de cultivo. Na análise da natureza e transferência da supressividade foram utilizadas amostras de dois solos, classificados previamente como supressivo (CAC) e conducivo (GOI) à murcha-de-fusário do caupi, nos quais não foram detectadas populações autóctones de F. oxysporum. Quando os solos foram infestados com o patógeno e semeados com as cultivares de caupi BR 17Gurguéia (altamente suscetível) e IPA 206 (moderadamente suscetível), as populações de fungos totais, bactérias totais e Bacillus spp. foram maiores na rizosfera no solo supressivo que no conducivo. A supressividade à doença não foi relacionada com um efeito supressivo sobre a população do patógeno. A esterilização não alterou a capacidade supressiva do solo, indicando sua natureza abiótica, bem como foi comprovada a capacidade de transferência da supressividade para o solo conducivo. Somente no solo supressivo foi constatada influência significativa dos níveis de pH na severidade da murcha-de-fusário, que decresceu proporcionalmente à elevação do pH. A eficiência do inóculo do patógeno foi significativamente inferior no solo supressivo. A análise da relação entre a severidade da doença e as reduções no rendimento de sementes de caupi cultivado em duas épocas, foiconduzida em parcelas artificialmente infestadas com o patógeno, em dois períodos de cultivo, sendo o primeiro plantio realizado em abril de 2002 e o segundo em outubro do mesmo ano. Na fase de colheita de cada época de plantio, foi determinado o rendimento por parcela, representado pelo peso total de sementes por planta. Após a colheita, a severidade da murcha-de-fusário foi avaliada em todas as plantas. Não foram constatadas correlações significativas entre as densidades de inóculo do patógeno detectadas nas parcelas antes do plantio e os níveis de severidade da doença. Nas parcelas não infestadas pelo patógeno, o rendimento no primeiro plantio foi superior ao do segundo plantio, o que pode ter sido conseqüência do estresse hídrico a que as plantas foram submetidas na fase de pré-floração. As reduções no rendimento de sementes foram influenciadas significativamente pelos níveis de severidade da doença. Não foram constatadas diferenças entre os níveis médios de severidade da doença e de perdas de rendimento nos dois períodos de cultivo. A severidade da murcha-de-fusário variou entre 3,2 e 93,3%, enquanto as perdas de rendimento entre 2,2 e 98,1%.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-20T11:47:13Z No. of bitstreams: 1 Leonardo Tavares de Souza.pdf: 1990421 bytes, checksum: 18cb117ba50c4733f5f4993b3f387024 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T11:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leonardo Tavares de Souza.pdf: 1990421 bytes, checksum: 18cb117ba50c4733f5f4993b3f387024 (MD5) Previous issue date: 2013-02-15 / The southern blight, caused by Sclerotium rolfsii soilborne fungi, is an important disease in the culture of cowpea (Vigna unguiculata). The present work aimed: a) select, identify and verify the stability of antagonistic yeast isolates to S. rolfsii for biological control potential of rot southern blight in cowpea; b) elucidate the possible antagonistic activity in vitro of the yeast S. rolfsii, and the ability of yeast for growth promotion of cowpea plants. The experiments were conducted under conditions of a green house and in vitro assays. A total of five isolates, among 74 evaluated yeasts were selected in order to reduce the severity of southern blight in cowpea plants caused by an isolate of S. rolfsii pre selected in pathogenicity tests. Experimental tests showed that four out of five selected strains of yeast were stable in reducing disease severity in plants against three different isolates of S. rolfsii. There was a significant decrease in disease control was reduced when the concentration of these isolates yeast suspensions for seed treatment. The five selected yeast isolates were submitted to classification by classical taxonomy, considering the morphological, physiological and biochemical, as well as identifying the level of molecular biology, through sequencing of genomic regions ITS1 and ITS4. The five selected yeast isolates were identified as belonging to species Kodamaea ohmeri. In assays in vitro, all five strains of K. ohmeri showed activity "killer" positive, and observed an inhibition of mycelial growth of isolates of S. rolfsi grown on culture medium containing filtered extracted from strains of K. ohmeri for the majority of interactions tested. In tests of colonies pairings, only one isolate of K. ohmeri was effective in inhibiting the mycelial growth of two isolates of S. rolfsii between three pathogen strains evaluated. The tests of promoting plant growth, all five isolates K. ohmeri selected have generated significant gains in Shoot biomass of plants from seed treatment. The use of isolated K. ohmeri selected been shown as a promising tool for biological control to be incremented in the management of diseases caused by S. rolfsii in cowpea culture / A podridão-de-esclerócio, causada pelo fungo habitante do solo Sclerotium rolfsii, é uma importante doença na cultura do feijão caupi (Vigna unguiculata). O presente trabalho teve como objetivos: a) selecionar, identificar e verificar a estabilidade antagônica de isolados de leveduras a S. rolfsii no potencial de controle biológico da podridão-de-esclerócio em feijão caupi; b) elucidar as possíveis atividades antagônicas in vitro de leveduras sobre S. rolfsii, bem como a capacidade destas leveduras na promoção de crescimento de plantas de feijão caupi. Os experimentos foram conduzidos em condições de casa-de-vegetação e em ensaios in vitro. Um total de cinco isolados, dentre 74 leveduras avaliadas, foram selecionados visando a redução da severidade da podridão-de-esclerócio em plantas de feijão caupi ocasionada por um isolado de S. rolfsii pré-selecionado em testes de patogenicidade. Ensaios experimentais demonstraram que quatro dos cinco isolados de leveduras selecionados foram estáveis na redução da severidade da doença em plantas perante três diferentes isolados de S. rolfsii. Ocorreu uma significativa diminuição do controle da doença quando foi reduzida a concentração de suspensões destes isolados leveduras no tratamento de sementes. Os cinco isolados de leveduras selecionados foram submetidas à classificação por taxonomia clássica, considerando os caracteres morfológicos, fisiológicos e bioquímicos, bem como por identificação à nível de biologia molecular, através do sequenciamento das regiões genômicas ITS1 e ITS4. Os cinco isolados de leveduras selecionados foram identificados como pertencentes à espécie Kodamaea ohmeri. Em ensaios in vitro, todos os cinco isolados de K. ohmeri apresentaram atividade “killer” positiva, sendo observada uma inibição do crescimento micelial de isolados de S. rolfsi crescidos sobre meio de cultivo contendo filtrados extraídos dos isolados de K. ohmeri para a maioria das interações testadas. Em testes de pareamentos de colônias, somente um isolado de K. ohmeri foi eficiente na inibição do crescimento micelial de dois isolados de S. rolfsii entre três isolados do patógeno avaliado. Nos testes de promoção de crescimento de plantas, todos os cinco isolados de K. ohmeri selecionados geraram ganhos significativos na biomassa de parte aérea de plantas a partir do tratamento de sementes. O uso de isolados K. ohmeri selecionados, se demonstrou como uma ferramenta promissora de controle biológico a ser incrementada no manejo de doenças causadas por S. rolfsii na cultura caupi.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-21T14:50:39Z No. of bitstreams: 1 Marcelo Garcia de Oliveira.pdf: 229150 bytes, checksum: cb960836d78efca26b86c65b585f44af (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T14:50:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Garcia de Oliveira.pdf: 229150 bytes, checksum: cb960836d78efca26b86c65b585f44af (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / The Rhizoctonia canker, caused by Rhizoctonia solani, is an important disease of cowpea in northeastern Brazil. This work aimed to select cowpea rhizobacteria as biocontrol agents of Rhizoctonia canker and to assess the stability of the control by promising isolates for different isolates and inoculum densities of the pathogen, and soil types. Samples of cowpea plants with no symptoms of root diseases were collected in 22 fields and 87 bacterial isolates were obtained from their rhizoplane, with 59 strains of Bacillus spp. and 28 strains of fluorescent Pseudomonas spp. These strains were evaluated for their efficacy in reducing the severity of Rhizoctonia canker of cowpea under greenhouse conditions. In a preliminary screening cowpea seeds (cv. IPA-206) were immersed in bacterial suspension(approximately 108 cells/mL) prepared in 0.1 M MgSO4 solution and sown in trays containing unsterilized soil (Camaragibe) previously infested (isolated CMM-2656) with 150 mg of substrate (rice) colonized/kg soil. The assessment of disease severity was determined after 15 days, using a scale from 0 to 4, where 0 = no symptoms and 4 = non-germinated seeds and/or non-emerged plantlets. Only five bacterial strains (B-05, B-13, B-63, B-65 and B-71), all from the genus Bacillus, reduced levels of disease severity above 45% and were evaluated in relation to five isolates (CMM-2651, CMM-2654, CMM-2666, CMM-2675 and CMM-2682) and three inoculum densities (200, 250 and 300 mg/kg soil) of R. solani, and five soil types (Aldeia, Goiana, Itapirema, Pombos and Vitória). Only the bacterial strain B-71 showed similar levels of Rhizoctonia canker control induced by different isolates of the pathogen, with an average of 24.5% in the reduction of severity levels. The strain B-65 had the highest levels of disease control at the three inoculum densities of R. solani, with an average of 22.2%. It was evident the influence of soil on the effectiveness of the strains. The great variability of results in the control of Rhizoctonia canker due to different isolates and inoculum densities of R. solani as well as the unstable response in different soil types may be factors limiting the use of Bacillus spp. in the treatment of cowpea seeds in field conditions. / A rizoctoniose, causada pelo fungo Rhizoctonia solani, é uma importante doença do caupi no Nordeste brasileiro. Esta dissertação teve como objetivos efetuar a prospecção de rizobactérias de caupi como agentes de biocontrole da rizoctoniose e avaliar a estabilidade do controle por isolados promissores em relação a diferentes isolados e densidades de inóculo do patógeno, e tipos de solos. Foram efetuadas coletas de plantas de caupi sem sintomas de doenças radiculares em 22 áreas de plantio. Destas plantas, foram obtidos 87 isolados bacterianos do rizoplano, sendo 59 isolados de Bacillus spp. e 28 isolados de Pseudomonas spp. do grupo fluorescente. Esses isolados foram avaliados quanto à eficácia na redução da severidade da rizoctoniose do caupi em casa de vegetação. Na seleção preliminar, sementes de caupi (cv. IPA-206) foram imersas nas suspensões bacterianas (aproximadamente 108 células/mL) preparadas em solução de MgSO4 0,1M e semeadas em bandejas contendo solo não esterilizado (Camaragibe) previamente infestado com o patógeno (isolado CMM-2656), na densidade de 150 mg de substrato (arroz) colonizado/kg de solo. A avaliação da severidade da doença foi efetuada após 15 dias, utilizando-se escala de notas de 0 a 4, onde 0 = sem sintomas e 4 = sementes não germinadas e/ou plântulas não emergidas. Somente cinco isolados bacterianos (B-05, B-13, B-63, B-65 e B-71), todos do gênero Bacillus, propiciaram níveis de redução da severidade da doença superiores a 45% e foram avaliados em relação a cinco isolados (CMM-2651, CMM-2654, CMM-2666, CMM-2675 e CMM-2682) e três densidades de inóculo (200, 250 e 300 mg/kg de solo) de R. solani, bem como cinco tipos de solos (Aldeia, Goiana, Itapirema, Pombos e Vitória). Somente o isolado bacteriano B-71 apresentou níveis similares de controle da rizoctoniose induzidos pelos diferentes isolados do patógeno, com redução média de 24,5% nos níveis de severidade. O isolado bacteriano B-65 apresentou os maiores níveis de controle da doença nas três densidades de inóculo de R. solani, com média de 22,2%. Ficou evidente a influência do solo na eficácia dos isolados bacterianos. A grande variabilidade dos resultados no controle da rizoctoniose em função dos diferentes isolados e densidades de inóculo de R. solani, assim como da resposta instável em diferentes tipos de solos, podem ser fatores limitantes à utilização dos isolados de Bacillus spp. no tratamento de sementes de caupi em condições de campo.