Hospital Federal Cardoso Fontes / Anencephaly is the most severe neural tube defect (NTD) in human fetuses. There is an increasing need for tissue replacement in chronic diseases and reconstructive surgeries. Fetal tissues have been used as a substitute for native organs. Compare the structure and morphology of the corpora cavernosa and spongiosum of penises from anencephalic and normal human fetuses to propose a new model for biological studies and tissue transplantation. We studied 11 penises from normal human fetuses, aged 14 to 23 weeks post-conception (WPC), and 5 penises from anencephalic fetuses, aged 18 to 22 WPC. The organs were removed and processed by routine histological and immunolabeling techniques. Analysis of connective tissue (Cot), smooth muscle (SMC) and elastic fibers (EF) were performed in sections. Data were expressed as area density (Ad) using digital processing and software. Means were statistically compared using the unpaired t test and linear regression was performed. Statistical significance was considered if p < 0.05. The Intracavernosal septum was present in all samples. We did not observe differences in the Ad of Cot and SMC in the penises of anencephalic fetuses when compared to normal ones. The simple linear regression suggested that during human development there is a gradual increase in Cot (R2= +0.45) and a decrease of SMC (R2=- 0.62) in the corpora cavernosa in both groups studied. Elastin was observed only in fetuses from 20th WPC. There was no difference in the structure of the corpora cavernosa and corpus spongiosum of anencephalic fetuses compared to normal ones. Elastin was documented from 20th WPC, which suggests the maintenance of erectile function. Histochemistry and immunolabeling suggested that penile shaft development is maintained and unaltered in anencephalic fetuses. Further studies should be performed to analyze anencephalic fetuses as a potential tissue donating group and a model for biological studies. / A anecencefalia é o Defeito do Tubo Neural (DTN) mais severo em fetos humanos. Há uma demanda crescente para reposição tissular em doenças crônicas e cirurgias reconstrutoras. Tecidos fetais têm sido utilizados como substitutos para órgãos sólidos. Comparar a estrutura e morfologia do corpo cavernoso e corpo esponjoso de pênis de fetos humanos anencéfalos e de controle a fim de propor um novo modelo para estudos biológicos e transplantes teciduais. Foram estudados 11 pênis de fetos de controle de 14 a 23 Semanas Pós Concepção (SPC), e cinco pênis de fetos anencéfalos de 18 a 22 SPC. Os órgãos foram removidos e processados pelas técnicas histo e imunohistoquímicas rotineiras. A análise do tecido conjuntivo, células musculares lisas e fibras elásticas foram realizadas em lâminas dos espécimes. Os dados foram expressos em Densidade de àrea (Da) utilizando-se um software de processamento digital. As médias foram comparadas utilizando-se o Teste - T não pareado e quando aplicável, a regressão linear simples foi utilizada. Foi considerada significância estatística se p<0,05. O septo intercavernoso encontrava-se presente em todas as amostras. Não foram observadas diferenças da Da do tecido colágeno e musculatura lisa dos pênis de fetos anencéfalos quando comparados aos normais. A regressão linear simples sugere que durante o desenvolvimento humano há um aumen2to gradual do tecido colágeno (R2=0,45) e uma diminuição da musculatura lisa (R =0,62) no corpo cavernoso de ambos os grupos. A elastina encontrava-se presente apenas em fetos a partir da 20 SPC. Não houve diferença na estrutura da genitália entre fetos normais e enencéfalos. Apresença da elastina em fetos a partir da 20 SPC é um dado objetivo da manutenção da capacidade de ereção nestes grupos. A histo e imunohistoquímica sugerem que o desenvolvimento do pênis destes fetos encontra-se inalterado. Futuros estudos deverão ser realizados com o objetivo de avaliar fetos anencéfalos como um potencial grupo de doadores teciduais e um adequado modelo para estudos biológicos.

Os poluentes orgânicos persistentes (POPs) são acumulados em tecidos gordurosos dos organismos vivos em concentrações relativamente altas em animais do topo da cadeia alimentar, como os golfinhos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a distribuição e acumulação de POPs em tecidos (gordura, fígado, rim e músculo) de toninhas (Pontoporia blainvillei) do litoral sul de São Paulo, bem como as diferenças/similaridades entre gênero e maturidade sexual e a transferência via placenta. Os valores de concentração mediana (ng g-1; peso úmido) para as 16 amostras de gordura, fígado, rim e músculo, respectivamente, foram: PCBs (987; 19,2; 5,08; 4,41); DDTs (550; 10,3; 2,67; 1,89); PBDEs (32,7; 0,230; 0,095; 0,050); Mirex (21,5; 0,457; 0,168; 0,083); HCB (15,4; <0,360; <0,360; <0,144); HCHs (<0,870; 2,20; <0,218; <0,087); Clordanas (<1,45; <0,362; <0,362; <0,145). Os machos jovens apresentaram as maiores concentrações dos POPs, seguidos pelos machos adultos, fêmeas jovens, fêmeas adultas e fetos. Foi observada transferência dos contaminantes das fêmeas gestantes para seus fetos entre 14 a 28% para PCBs e 19 a 45% para DDTs. A gordura apresentou correlação significativa com os demais tecidos estudados para acumulação dos PCBs, DDTs e PBDEs sugerindo a sua representatividade para estudos desses POPs em toninhas. / Persistent organic pollutants (POPs) are accumulated in fatty tissues of organisms in relatively high concentrations in animals in high position of the food chain such as dolphins. The aims of this study were to evaluate the distribution and accumulation of POPs in tissues (blubber, liver, kidney and muscle) of franciscana dolphin (Pontoporia blainvillei) collected on the southern coast of São Paulo as well as differences/similarities between genre and sexual maturity and the transplacental transfer. The values of median concentration (ng g-1; wet weight) for 16 samples of blubber, liver, kidney and muscle, respectively, were: PCBs (987; 19,2; 5,08; 4,41); DDTs (550; 10,3; 2,67; 1,89); PBDEs (32,7; 0,230; 0,095; 0,050); Mirex (21,5; 0,457; 0,168; 0,083); HCB (15,4; <0,360; <0,360; <0,144); HCHs (<0,870; 2,20; <0,218; <0,087); Chlordanes (<1,45; <0,362; <0,362; <0,145). POPs concentrations were higher in young males followed by adult males, young females, adult females and fetuses. Maternal transfer of POPs to the fetuses was between 14 to 28% for PCBs and 19 to 45% for DDTs. Blubber showed a significant correlation with the other tissues studied for PCBs, DDTs and PBDEs suggesting its representativeness for evaluation of these POPs in franciscana dolphin.

Made available in DSpace on 2016-04-26T20:28:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patricia Marques Freitas.pdf: 645702 bytes, checksum: 147be98066eb087c7b1e72fdcc0fe618 (MD5) Previous issue date: 2009-03-25 / Thanks to advances in Medicine, it is now possible to identify problems such as anencephaly in fetus formation while at the intra-uterine stage. It has led pregnant women to appeal to courts to authorize abortions. They explain about all the suffering they will have to endure during pregnancy as well as the issue of infant s short life expectation. This study analyzed the possibility of using due process of law to protect anencephalus fetuses, as the Brazilian Supreme Federal Court may decide by authorizing the abortion. Such a decision would be erga omnes and of binding effect, there is also the issue of the draft bill changing the Brazilian Criminal Code by including eugenic abortion as a non-punishable crime. Specific objectives include: to consider the legal, philosophical and ethical issues regarding protecting the fetus s right to live; to observe the ethical and legal parameters on the dignity of human beings specifically regarding fetuses in the 1988 Brazilian Federal Constitution; to define how the present issue is part of Constitutional BioLaw and Bioethics; to verify how current legislation addresses abortion; to study scientific aspects that involve anencephalic fetuses; to analyze legal discourse in jurisprudence; and, at lastly, to analyze arguments arising from the Allegation of. Violation of Fundamental Precept. The methodology used in this study was interdisciplinary descriptive bibliographic research, based on the most recent doctrinal studies on the proposed theme, comprising not only the legal field, but also History, Philosophy, Medicine and Bioethics. In addition to Jurisprudence, Judgments handed down by Brazilian Courts were studied, as well as documentary research involving international treaties and conventions, laws and bills of law. This paper advocates protection of anencephalus fetuses as living beings, pursuant to the principle of due process of law, guaranteed by the constitution, and based on the principle of human dignity, with the enshrined right to life prevailing. Opposing the fetus s inviability as a reason for abortion, we argue that such reasoning follows the ethics of utilitarianism. The paper concludes that fetuses must be supported by the human rights ethics and Constitutional BioLaw, as this is understood as a positive and universal affirmation of human rights and 21st Century Constitutionalism / A partir do avanço na área da Medicina Fetal, passou a ser possível a identificação de malformações fetais ainda em fase intrauterina, como a anencefalia. Isto tem levado várias gestantes a recorrer aos Tribunais a fim de solicitar autorizações para interrupção da gravidez, alegando o sofrimento por que passam, assim como a inviabilidade do bebê. O estudo objetivou analisar o cabimento do princípio do devido processo legal na defesa da vida dos fetos anencéfalos, frente à possibilidade de decisão do Supremo Tribunal Federal pela autorização do abortamento, de eficácia vinculante e efeito erga omnes, bem como do anteprojeto de modificação do Código Penal brasileiro pela inclusão do abortamento eugênico como cláusula de exclusão da ilicitude. Como objetivos específicos, cabe citar: a consideração dos aspectos jurídicos e filosóficos, bem como éticos da defesa da vida do feto; a observação de parâmetros ético-jurídicos quanto à dignidade da pessoa humana referente ao feto na Constituição Federal de 1988; a delimitação de como a presente questão se apresenta inserida nos âmbitos do Biodireito Constitucional e da Bioética; averiguação do tratamento do aborto pela legislação atual; realização de um estudo quanto aos aspectos científicos que envolvem o caso dos fetos anencefálicos; análise dos discursos jurídicos proferidos pela jurisprudência; e, finalmente, a apreciação dos argumentos suscitados pela Arguição de Descumprimento de Preceito Fundamental n.54. Como metodologia, recorreu-se a pesquisa bibliográfica descritiva de caráter interdisciplinar, tomando por base a produção doutrinária mais atualizada sobre o tema proposto, abrangendo não só a área jurídica, mas também a História, a Filosofia, a Psicologia, a Medicina e a Bioética. Foi efetuada também pesquisa jurisprudencial, com o acompanhamento de Acórdãos proferidos pelos Tribunais brasileiros, além de pesquisa documental, envolvendo tratados e convenções internacionais, leis e projetos de leis. Considerando o feto anencéfalo como um ser-vivo, buscou-se defender o princípio do devido processo legal, garantido constitucionalmente, tendo por base o princípio da dignidade da pessoa humana, bem como o primado do exercício do direito à vida. Em contraposição à inviabilidade do feto como autorização do aborto, argumentou-se no sentido de que o entendimento obedece à ética utilitarista. Entendeu-se, portanto, que considerando a afirmação positiva e universal dos direitos humanos e o fenômeno do Constitucionalismo do século XXI, que reaproxima o Direito à ética, as decisões acerca dos fetos anencéfalos devem ter por referência a ética dos direitos humanos e o Biodireito Constitucional

Submitted by Noeme Timbo (noeme.timbo@metodista.br) on 2017-02-14T18:25:24Z No. of bitstreams: 1 FranciscoGenciano.pdf: 1983379 bytes, checksum: ba27a07660883ff3727c63a7847ddc3d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T18:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranciscoGenciano.pdf: 1983379 bytes, checksum: ba27a07660883ff3727c63a7847ddc3d (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The decision on the Arguição de Descumprimento de Preceito Fundamental (abbreviation ADPF, meaning Accusation of Breach of Fundamental Precept) No. 54, raised by the National Confederation of Healthcare Workers, issued in 04/12/2012, which concerned the decriminalization of therapeutic induction of early deliveries of anencephalic fetuses in Brazil, established jurisprudential paradigm on the matter and possible debates in which were present the issues on the concept of the sacredness of human life, human dignity or the intrinsic worth of human life. This present research aims to analyse the use of the concept of human life sacredness in political, legal, scientific and religious speeches during the course of the trial, thus aiming to identify how the concept is structured and how it was taken over by secular and religious discourses as the ADPF No. 54 unfolded. For that to be accomplished the analysis was performed of the overlapping elements involved, such as the issue of secularization and secularity (laicity), with their respective approaches to the status of religion in the public square, and how these relate with the crucial subject of human rights and the role of religion. Said analysis was followed by a survey of the formation and actualization of the idea of sacredness of the human life, and another analysis of the content on the material related to the mentioned ADPF: Judgment and transcripts of public hearings in which were promoted the discourses of interest to the present work. / O julgamento da Arguição de Descumprimento de Preceito Fundamental nº 54, suscitada pela Confederação Nacional dos Trabalhadores na Saúde, finalizado em 12/04/2012, que versou sobre a descriminalização da antecipação terapêutica do parto de fetos anencéfalos no Brasil, estabeleceu paradigma jurisprudencial para o tema e possibilitou debates nos quais estiveram presentes a temática relativa ao conceito de sacralidade da vida humana, dignidade humana ou valor intrínseco da vida humana. A pesquisa tem por objetivo analisar o uso do conceito de sacralidade da vida humana nos discursos políticos, jurídicos, científicos e religiosos havidos durante o desenrolar do julgamento, visando assim identificar como se estrutura o conceito e como foi apoderado pelos discursos laicos e religiosos quando do julgamento da ADPF n. 54. Para tanto se efetua a análise de elementos imbricados na questão, como a temática da secularização e da laicidade, com a respectiva abordagem da condição da religião em espaços públicos, e destas com o assunto crucial dos direitos humanos e o papel da religião. Seguindo para o levantamento da formação e concretização da ideia de sacralidade da vida humana, e análise do conteúdo do material relacionado ao mencionado julgamento: Acórdão e transcrições das audiências públicas nas quais foram promovidos os discursos que interessa averiguar.

Os poluentes orgânicos persistentes (POPs) são acumulados em tecidos gordurosos dos organismos vivos em concentrações relativamente altas em animais do topo da cadeia alimentar, como os golfinhos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a distribuição e acumulação de POPs em tecidos (gordura, fígado, rim e músculo) de toninhas (Pontoporia blainvillei) do litoral sul de São Paulo, bem como as diferenças/similaridades entre gênero e maturidade sexual e a transferência via placenta. Os valores de concentração mediana (ng g-1; peso úmido) para as 16 amostras de gordura, fígado, rim e músculo, respectivamente, foram: PCBs (987; 19,2; 5,08; 4,41); DDTs (550; 10,3; 2,67; 1,89); PBDEs (32,7; 0,230; 0,095; 0,050); Mirex (21,5; 0,457; 0,168; 0,083); HCB (15,4; <0,360; <0,360; <0,144); HCHs (<0,870; 2,20; <0,218; <0,087); Clordanas (<1,45; <0,362; <0,362; <0,145). Os machos jovens apresentaram as maiores concentrações dos POPs, seguidos pelos machos adultos, fêmeas jovens, fêmeas adultas e fetos. Foi observada transferência dos contaminantes das fêmeas gestantes para seus fetos entre 14 a 28% para PCBs e 19 a 45% para DDTs. A gordura apresentou correlação significativa com os demais tecidos estudados para acumulação dos PCBs, DDTs e PBDEs sugerindo a sua representatividade para estudos desses POPs em toninhas. / Persistent organic pollutants (POPs) are accumulated in fatty tissues of organisms in relatively high concentrations in animals in high position of the food chain such as dolphins. The aims of this study were to evaluate the distribution and accumulation of POPs in tissues (blubber, liver, kidney and muscle) of franciscana dolphin (Pontoporia blainvillei) collected on the southern coast of São Paulo as well as differences/similarities between genre and sexual maturity and the transplacental transfer. The values of median concentration (ng g-1; wet weight) for 16 samples of blubber, liver, kidney and muscle, respectively, were: PCBs (987; 19,2; 5,08; 4,41); DDTs (550; 10,3; 2,67; 1,89); PBDEs (32,7; 0,230; 0,095; 0,050); Mirex (21,5; 0,457; 0,168; 0,083); HCB (15,4; <0,360; <0,360; <0,144); HCHs (<0,870; 2,20; <0,218; <0,087); Chlordanes (<1,45; <0,362; <0,362; <0,145). POPs concentrations were higher in young males followed by adult males, young females, adult females and fetuses. Maternal transfer of POPs to the fetuses was between 14 to 28% for PCBs and 19 to 45% for DDTs. Blubber showed a significant correlation with the other tissues studied for PCBs, DDTs and PBDEs suggesting its representativeness for evaluation of these POPs in franciscana dolphin.

No presente estudo realizou-se a avaliação da eficácia do exame de imagem por ressonância magnética (IRM) e de reconstruções digitais bi e tridimensionais da ATM, em diferentes estágios de desenvolvimento. Foi criado um protocolo próprio de exame de IRM, o qual foi aplicado em embriões e fetos humanos, entre 22 a 160mm de comprimento céfalo-caudal (CRL), correspondendo da 7 a a 18 a semana de vida intra-uterina (IU). Em cada amostra foram realizadas duas seqüências de imagens sagitais da cabeça inteira, com distância de 1,0mm entre os cortes. Em seguida, as imagens foram intercaladas digitalmente, gerando uma seqüência de cortes de 0,5mm distância. Estas imagens foram importadas para um programa específico que realizou a reconstrução digital, criando modelos bi e tridimensionais. Para avaliar a formação e desenvolvimento das estruturas articulares de cada uma das amostras, foram realizados cortes histológicos da ATM. O exame histológico determinou o grau de maturação da ATM e a qualidade da matriz colágena presente. Os resultados demonstraram que o protocolo desenvolvido foi capaz de capturar e processar as imagens de IRM, principalmente após a 13 a semana de vida IU, em seu estágio de maturação articular. Os cortes histológicos comprovaram que, a partir desta fase, pode-se identificar melhor as estruturas articulares no exame de IRM devido a uma maior diferenciação celular e da matriz colágena, que passa de uma composição predominante de fibras colágenas tipo III para fibras do tipo I. A criação de modelos bi e tridimensionais mostrou ser uma ferramenta eficiente no diagnóstico do desenvolvimento facial, além de facilitar sua compreensão e aprendizado, embora ainda sejam necessários maiores avanços tecnológicos para a sua aplicação na formação das estruturas da ATM. / The present study was carried out to evaluate the effectiveness of Magnetic Resonance Imaging (MRI) and bi and three-dimensional digital reconstructions of the TMJ in different stages of development, by the comparison with histological sections. A proper protocol of IRM examination was developed, which was applied in formalin-preserved human embryos and fetuses, ranging from 22 to 160mm of crown-rump length (CRL), between 7 and 18 weeks of intrauterine life (IU). Two sequences of sagital images of the entire head of each specimen were performed, with interslice gap of 1,0mm. Consequently, images were digitally intercalated, creating a slice sequence of 0,5mm of interslice gap. These images were imported to the MRIcro Ò program for bi and three-dimensional digital reconstruction. In order to evaluate the development of the articular structures of each one of the specimens, histological sections of the TMJ were obtained. The maturation’s degree and the quality of the collagen matrix of the TMJ were determined by the histological sections . The results showed that the developed protocol was capable of capture and process MR images, mainly in the articular maturation stage, after the 13 th week of IU. Histological findings also showed that articular structures are better identified in this stage by RMI examination. This can be explained due to an increase of cellular and collagen matrix differentiation, which undergoes conversion from collagen type III to type I. Bi and three-dimensional models seem to be an efficient tool for the diagnosis of facial development, facilitating its understanding and learning. Further studies and technological advances may be necessary for its application in TMJ’s structures in intrauterine period.

No presente estudo realizou-se a avaliação da eficácia do exame de imagem por ressonância magnética (IRM) e de reconstruções digitais bi e tridimensionais da ATM, em diferentes estágios de desenvolvimento. Foi criado um protocolo próprio de exame de IRM, o qual foi aplicado em embriões e fetos humanos, entre 22 a 160mm de comprimento céfalo-caudal (CRL), correspondendo da 7 a a 18 a semana de vida intra-uterina (IU). Em cada amostra foram realizadas duas seqüências de imagens sagitais da cabeça inteira, com distância de 1,0mm entre os cortes. Em seguida, as imagens foram intercaladas digitalmente, gerando uma seqüência de cortes de 0,5mm distância. Estas imagens foram importadas para um programa específico que realizou a reconstrução digital, criando modelos bi e tridimensionais. Para avaliar a formação e desenvolvimento das estruturas articulares de cada uma das amostras, foram realizados cortes histológicos da ATM. O exame histológico determinou o grau de maturação da ATM e a qualidade da matriz colágena presente. Os resultados demonstraram que o protocolo desenvolvido foi capaz de capturar e processar as imagens de IRM, principalmente após a 13 a semana de vida IU, em seu estágio de maturação articular. Os cortes histológicos comprovaram que, a partir desta fase, pode-se identificar melhor as estruturas articulares no exame de IRM devido a uma maior diferenciação celular e da matriz colágena, que passa de uma composição predominante de fibras colágenas tipo III para fibras do tipo I. A criação de modelos bi e tridimensionais mostrou ser uma ferramenta eficiente no diagnóstico do desenvolvimento facial, além de facilitar sua compreensão e aprendizado, embora ainda sejam necessários maiores avanços tecnológicos para a sua aplicação na formação das estruturas da ATM. / The present study was carried out to evaluate the effectiveness of Magnetic Resonance Imaging (MRI) and bi and three-dimensional digital reconstructions of the TMJ in different stages of development, by the comparison with histological sections. A proper protocol of IRM examination was developed, which was applied in formalin-preserved human embryos and fetuses, ranging from 22 to 160mm of crown-rump length (CRL), between 7 and 18 weeks of intrauterine life (IU). Two sequences of sagital images of the entire head of each specimen were performed, with interslice gap of 1,0mm. Consequently, images were digitally intercalated, creating a slice sequence of 0,5mm of interslice gap. These images were imported to the MRIcro Ò program for bi and three-dimensional digital reconstruction. In order to evaluate the development of the articular structures of each one of the specimens, histological sections of the TMJ were obtained. The maturation’s degree and the quality of the collagen matrix of the TMJ were determined by the histological sections . The results showed that the developed protocol was capable of capture and process MR images, mainly in the articular maturation stage, after the 13 th week of IU. Histological findings also showed that articular structures are better identified in this stage by RMI examination. This can be explained due to an increase of cellular and collagen matrix differentiation, which undergoes conversion from collagen type III to type I. Bi and three-dimensional models seem to be an efficient tool for the diagnosis of facial development, facilitating its understanding and learning. Further studies and technological advances may be necessary for its application in TMJ’s structures in intrauterine period.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA046.pdf: 2836538 bytes, checksum: df03fbb548e05bbfeb41e5f0f1ba5a4f (MD5) Previous issue date: 2010-05-13 / Porcine parvovirosis is a disease that causes reproductive failure and its causative agent is the Porcine Parvovirus Type 1 (PPV1). This disease, with high prevalence and worldwide distribution, affects mostly non-immune nulliparous sows. Clinically, it is observed return to estrus, delayed parturition date, birth of unviable piglets, weak, stillborn and particularly mummified fetuses in different sizes. These reproductive problems lead economic losses demonstrated by low productivity. This study aimed to implement and validate techniques for laboratory diagnosis PPV1 in natural infections in pig herds with reproductive problems and perform the characterization of these isolates. More specifically, it aimed to diagnose through nested-PCR, and characterize, through phylogenetic analysis, PPV1 isolates from tissue samples and stomach fluid from fetuses and reproductive tract from culled sows. The objectives were to further evaluate histologically the tissues that were positive by nested-PCR; to standardize an internal amplification control (IAC) for PVS1 nested-PCR; to standardize immunohistochemistry technique (IHC) in fetal tissues and to standardize PCR for Porcine Parvovirus Type 4 (PPV4). A total of 27 pig herds were studied, where 230 fetuses stillborn, mummified, aborted and unviable piglets were necropsied to harvest organs and stomach fluid. PPPV1 viral DNA was detected by nested-PCR in organs of six (2.61%) out of 230 fetuses analyzed, the cerebellum and spinal cord were the organs where the virus was detected more frequently (50%). Stomach fluids of three (2.75%) fetuses were positive by nested-PCR, out of 109 examined. In addition, samples of reproductive organs from 83 culled sows were collected also ovarian follicular fluid from 71 of them. The genetic material of PPV1 was diagnosed in six organs from sows (7.23%) and follicular fluid of three (4.22%) of them. Histological lesions were observed in four of 19 PPV1 positive organs of fetuses. Also, six ovaries and six uteri of six culled sows were PPV1 positive by nested-PCR. Exams showed that five of those ovaries were cycling, one was in anestrous and four uterus had some degree of endometritis. The IAC developed for nested-PCR was amplified in all reactions, as expected. In the IHC test the virus presence was confirmed in fetal tissue. The PCR for PPV4 was standardized and tested in fetal organs and reproductive organs from culled sows. Some samples from sow s reproductive organs were positive for this new porcine parvovirus. The results from this study show a low detection of PPV1 in herds analyzed, as well as from the reproductive organs of culled sows, considering the reduced PPV1 involvement in reproductive failure. Moreover, standardized techniques can be incorporated into routine diagnostic of PPV1 and PPV4 / A parvovirose suína é uma doença causadora de falhas reprodutivas e seu agente etiológico é o Parvovírus Suíno Tipo 1 (PVS1). Essa enfermidade, de alta prevalência e distribuição mundial, afeta principalmente porcas nulíparas não imunes. Clinicamente observa-se retorno ao cio, atraso na data de parição, nascimento de leitões inviáveis, fracos, natimortos e, principalmente, mumificados em diferentes tamanhos. Estes problemas reprodutivos acarretam prejuízos econômicos demonstrados pelos baixos índices produtivos. O presente trabalho objetivou implantar e validar técnicas de diagnóstico laboratorial para detecção de PVS1 em infecções naturais em rebanhos suínos que apresentam problemas reprodutivos e realizar caracterização desses isolados. Mais especificamente, objetivou-se diagnosticar, através de nested-PCR, e caracterizar, através de análise filogenética, isolados de PVS1 em amostras de tecidos e líquido estomacal de fetos e em aparelho reprodutivo de porcas descartadas. Objetivou-se ainda avaliar histologicamente os tecidos que resultaram positivos na nested-PCR; padronizar um controle interno de amplificação (CIA) para a nested-PCR de PVS1; padronizar técnica de imunohistoquímica (IHQ) em tecidos fetais e padronizar PCR para Parvovírus Suíno Tipo 4 (PVS4). De 27 rebanhos de suínos, foram colhidos 230 fetos entre natimortos, mumificados e abortados, os quais foram necropsiados para colheita de órgãos e líquido estomacal. O DNA viral foi detectado por nested-PCR em órgãos de seis (2,61%) fetos dos 230 analisados, sendo o cerebelo e a medula os órgãos onde o vírus foi detectado com maior frequência (50%). Líquido estomacal de três (2,75%) fetos foram positivos por nested-PCR, de 109 analisados. Além disso, amostras de órgãos reprodutivos de 83 porcas descartadas foram colhidas e também fluido folicular ovariano de 71 delas. O material genético do PVS1 foi diagnosticado em órgãos de seis porcas (7,23%) e em fluido folicular de três (4,22%) delas. De 19 órgãos positivos de fetos na nested-PCR, quatro tiveram lesão histológica. De seis ovários e seis úteros das seis fêmeas suínas descartadas positivas na nested-PCR, cinco ovários estavam ciclando, um estava em anestro e quatro úteros tinham algum grau de endometrite. O CIA desenvolvido para a nested-PCR foi amplificado em todas as reações, conforme o esperado. Nos testes de IHQ a presença do vírus foi confirmada em tecido fetal. A PCR para o PVS4 foi padronizada e testada em órgãos fetais e de porcas descartadas. Algumas amostras de porcas foram positivas para este novo parvovírus suíno. Os resultados obtidos no estudo evidenciam baixa freqüência do PVS1 nos rebanhos analisados, bem como nos órgãos reprodutivos de porcas descartadas, considerando baixo o envolvimento do PVS1 nas falhas reprodutivas. Além disso, as técnicas padronizadas podem ser incorporadas na rotina de diagnóstico de PVS1 e PVS4

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA09MA052.pdf: 726948 bytes, checksum: 2a141d4d92b1c5ac552655f7c9ad3c1a (MD5) Previous issue date: 2009-11-06 / Many infectious agents have been associated with reproductive failure in swine, representing significantly economic losses for production. Recently, Porcine Circovirus Type 2 (PCV2), etiologic agent of PCVAD or PCV2 associated diseases, was associated with reproductive failure in swine around the world. To confirm the pathogenic potential of PCV2 inducing reproductive failure in sows, it s necessary the viral isolation and antigen and nucleic acid demonstration in fetuses. Other viral agent, Torque Teno Vírus (TTV), also have been recently associated with infections caused by PCV2. TTV alone has not showed pathogenic signals in swine, but, its role in co-infections with other pathogens has been investigated. The present study aimed the diagnostic of PCV2 in natural infections where there was reproductive failure, as well as to establish and apply the Polimerase Chain Reaction (PCR) technique for TTV from organs. Samples from field cases, as aborted fetuses, mummified, stillborn, fragile piglets and material from abattoir sows were collected and processed to diagnostic infection in order to detect PCV2 by PCR and immunohistochemistry (IHC). Samples were collected from 21 farms; and a total of 169 fetuses were necropsied. Moreover, reproductive samples from 83 abattoir sows were collected in 4 slaughterhouses of Santa Catarina State. In the present study was possible detect viral DNA by PCR in 29 (17,1%) of 169 analyzed fetuses, where heart and lymphoid tissues showed virus DNA more frequently, 41,4% and 37,8%, respectively. Viral presence was confirmed by IHC in tissues, which detected viral antigens in 17 PCV2 positives fetuses by PCR. Samples of reproductive tissues from sows also were tested by PCR and PCV2 was identified in 4 sows (4,8%). PCR technique aimed to detect TTV was established for viral DNA from organs. Samples of reproductive tissues from sows were tested, and were found both genogroups of TTV (TTV1 and TTV2), in 25 (30,1%) and 41 (49,3%) sows, respectively. Fetuses samples that resulted positive to PCV2 by PCR were also tested to TTV, and it was observed the occurrence of co-infection between these agents. The results obtained here suggest the involvement of PCV2 in reproductive failure in sows, besides show that TTV was present in analyzed samples, corroboring the association with PCV2 / Muitos agentes infecciosos têm sido associados às falhas reprodutivas na produção de suínos, representando significativas perdas econômicas para os suinocultores. Recentemente o Circovirus Suíno tipo 2 (PCV2), agente etiológico da circovirose suína, foi associado a falhas reprodutivas em suínos em diversas partes do mundo. Para confirmar o potencial patogênico do PCV2 causando falhas reprodutivas em porcas, é necessário o isolamento do vírus e demonstração de antígeno e ácido nucléico viral em fetos. Outro agente viral, o Torque Teno Vírus (TTV), também foi recentemente associado às infecções causadas pelo PCV2. O TTV sozinho ainda não tem se mostrado patogênico em suínos, porém, seu papel em co-infecções com outros patógenos vem sendo investigado. O presente trabalho teve por objetivos diagnosticar o PCV2 em infecções naturais onde existiam falhas reprodutivas, assim como padronizar e aplicar a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para TTV a partir de órgãos. Amostras provenientes de casos clínicos de campo, como fetos abortados, mumificados, natimortos, leitões inviáveis e material de fêmeas descartadas foram coletadas e processadas para diagnóstico da infecção pelo PCV2 através de PCR e imunoistoquímica (IHQ). Foram colhidas amostras de 21 granjas produtoras de suínos, totalizando 169 fetos, que foram necropsiados para coleta de órgãos. Além disso, amostras de órgãos reprodutivos de 83 fêmeas descartadas foram colhidas em 4 abatedouros da região oeste catarinense. No presente estudo foi possível detectar DNA viral por PCR em 29 (17,1%) dos 169 fetos analisados, sendo coração e tecidos linfóides os órgãos onde o vírus foi identificado com maior freqüência, 41,4% e 37,8%, respectivamente. A presença do vírus foi confirmada por teste de IHQ dos tecidos, sendo encontrado antígeno viral em 17 fetos positivos para PCV2 por PCR. As amostras de tecido reprodutivo das fêmeas também foram testadas por PCR e o PCV2 foi identificado em 4 porcas (4,8%). Visando a detecção de TTV foram testadas por PCR amostras de órgãos reprodutivos de fêmeas suínas, sendo diagnosticados os dois genogrupos de TTV, TTV1 e TTV2 em 25 (30,1%) e 41 (49,3%) fêmeas, respectivamente. As amostras de fetos que resultaram positivas para PCV2 pela técnica de PCR também foram testadas para TTV, observando-se a ocorrência de coinfecção entre estes agentes. Os resultados obtidos evidenciam o provável envolvimento do PCV2 em falhas reprodutivas em fêmeas suínas, bem como mostram que o TTV está presente nas amostras analisadas, confirmando a associação com o PCV2

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neosporosis is a parasitic disease of wide distribution and great importance to the cattle industry, mainly due to its associated reproductive losses. The life cycle of Neospora caninum typified by the tree know infectious stages: tachyzoites, tissue cysts with bradyzoites, and oocysts. Transmission routes can be horizontal and/or vertical. The vertical transmission or transplacentally is the most frequent form of infection, and an important form of maintain the agent in herds. With aim of to determine the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in serum samples of 260 bovine fetuses, collected in a slaughter in the municipality of Santa Maria, in Rio Grande do Sul, Brazil. For detection antibodies anti-N. caninum indirect fluorescent antibody test was used and immunoglobulin G and M were detected, using a cut-off 1:25. Of the 260 serum samples tested, 15% (39/260) were positive for the presence of anti-N. caninum. Of these, in 38 the presence of IgG where detected (97.4%) and in six IgM were present (10.3%). Five samples (15.4%) tested were positive for both IgG and IgM. The results reaffirming the ability of N. caninum in determine fetal infection. The results presented on the first chapter indicated that the search of IgM anti-N. caninum is of very limited help in the detection of the transplacental infection in cattle. In second chapter, was evaluated the susceptibility to infection by N. caninum in different cell cultures, for the purpose of observe the ability in vitro multiplication this agent. For this, eight cell cultures were tested, among the cell cultures tested, four presented good susceptibility to agent: cell lines VERO (yield of 21.2 tachyzoites/cell) and MA-104 (17.1); primary bovine testicle (16.3) and lung cells (13.6). Primary bovine kidney (8.2 tachyzoites/cell), MDBK (5.1) and RK-13 cell lines (0.4) presented moderate to low sensitivity. No viable tachyzoites were detected in the culture of MDCK cells. These results demonstrate that MA-104 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to VERO cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Due to the easy manipulation, quick multiplication and relatively low nutritional equirements, these results indicate that MA-104 cells are adequate for multiplication of N. caninum in vitro. / A neosporose é uma doença parasitária de ampla distribuição e com grande importância para a bovinocultura, principalmente pelas perdas reprodutivas que determina. O ciclo do Neospora caninum caracteriza-se por apresentar três estágios infecciosos: os taquizoítos, os cistos teciduais contendo bradizoítos e os oocistos. Suas rotas de transmissão podem ser horizontal e/ou vertical. A infecção vertical ou transplacentária é a forma mais freqüente de infecção, sendo uma importante forma de manutenção do agente nos rebanhos. Com o objetivo de determinar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em fetos bovinos, foram coletadas 260 amostras de soro em abatedouro localizado no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Para detecção de anticorpos anti-N. caninum, utilizou-se a técnica de imunofluorescência indireta com a presença de imunoglobulinas G e M (IgG e IgM), sendo analisada com ponto de corte de 1:25. Do número total de amostras testadas, 15% (39/260) foram positivas para anticorpos anti-N. caninum. Destas, em 38 (97,4%) foi detectada a presença de IgG anti-N. caninum e em seis (15,4%) de IgM. Em cinco amostras (12,8%) detectaram-se ambos, IgG e IgM. Os resultados reafirmam a capacidade do N. caninum determinar infecção fetal. Os resultados obtidos no primeiro capítulo desta dissertação permitiram demonstrar que a pesquisa de IgM foi de limitada importância na detecção da infecção via transplacentária em soro fetal bovino. No segundo capítulo, foi avaliada a susceptibilidade à infecção pelo N. caninum em diferentes cultivos celulares, com a finalidade de observar a capacidade de multiplicação deste agente in vitro. Para isto, foram testados oito cultivos, sendo que quatro apresentaram boa susceptibilidade a multiplicação pelo N. caninum: células VERO (produção de 21,2 taquizoítos/célula), MA-104 (17,1), cultivo primário de testículo (16,3) e pulmão bovino (13,6). O cultivo primário de rim bovino (8,2), células MDBK (5,1) e RK-13 (0,4) apresentaram baixa sensibilidade, enquanto células MDCK não produziram taquizoítos viáveis. Os resultados obtidos demonstram que as células MA-104 apresentaram susceptibilidade semelhante a das células VERO linhagem tradicionalmente utilizada para o cultivo deste protozoário. Pela facilidade de cultivo e rápida multiplicação, menor exigência nutricional e produção de taquizoítos em níveis semelhantes às células VERO, as células MA-104 demonstraram ser adequadas para a manutenção e multiplicação do N. caninum in vitro.