Orientadores: Maria Beatriz Puzzi Taube, Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T14:59:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pires_FernandaEspinosa_M.pdf: 2161075 bytes, checksum: 364c4c8044d9ce8ac17ea12e73f17c02 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A Acantose Nigricante (AN) benigna está associada a diversas endocrinopatias e alterações metabólioa., particularmente a resistencia insulinica. A dermatose " encontrada mais freqüentemente nos pacientes obesos, e obesidade é uma condição de resistência insulínica. Alguns trabalhos têm mostrado associação de resistência insulínica com presença de depósito de mucopolissacárides na derme papilar em cortes histológicos de AN. Este estudo foi realizado com o objetivo de se avaliar a resposta insulínica após o teste oral de tolerância à glicose (TaTO) em obesos com AN e comparar com grupos controle, além de correlacionar com os aspectos histopatológicos e histoquímicos. Para tanto, foram avaliados 33 pacientes: 14 Obesos com AN (Grupo 1), 9 Obesos Normais (Grupo 2), e um grupo controle de 10 pacientes com peso normal. Para o estudo histológico, foi possível obter análise de 13 pacientes obesos com AN, 8 pacientes obesos sem AN e 9 pacientes de peso normal. Foram avaliados os níveis de insulina ao jejum, aos 120', a área sob a curva de insulina e os índices insulinogênicos (O', 120' e área). Biópsias de pele foram analisadas pela coloração pelo ferro coloidal para pesquisa de mucopolissacárides na lesão cutânea e nos grupos controle, na mesma região anatômica. Os resultados mostraram diferença significativa na insulina aos 120' do TaTG entre os grupos 1 e 2 (p<0,05), e o índice insulinogênico aos 120' mostrou valores muito próximos do limite da significância estatística (p=0,053). Ao estudo de correlação, quando analisados os 3 grupos em conjunto, foi observado correlação linear positiva entre níveis de insulina (120', índice insulinogênico aos 120', área de insulina e índice de área de insulina) e espessura da epiderme e camada córnea(p<0,05) e entre medidas da papila e índice de área de insulina (p<0,05). Não houve diferenças à coloração pelo ferro coloidal na área da AN, comparada com os grupos controle. Pacientes obesos sem AN apresentaram maior área de insulina (p<O,05) quando comparados com pacientes magros sem AN, a despeito das medidas do epitélio e papila serem próximas, o que sugere que níveis altos de insulina isoladamente não justificam a lesão dermatológica.Conclui-se que obesos com AN apresentam resistência insulínica maior que obesos sem AN, que a resistência insulínica não está associada à maior presença de mucopolissacárides na derme e que níveis sangüíneos de insulina estão associados à espessura da epiderme e camada córnea. Em contrapartida, níveis altos de insulina isoladamente não justificam a lesão dermatológica. A presença de mucopolissacárides na derme papilar na região da axila mostrou ser esse um achado normal. O presente trabalho sugere influência da insulina no crescimento epitelial. Palavras-chave: Acantose Nigricante, Resistência Insulínica, Obesidade, Ferro Coloidal, Mucopolissacárides / Abstract: Benign Acanthosis Nigricans (AN) is associated to many endocrinopathies and metabolic disturbs, specially insulin resistance. The dermatosis is more ftequently found in obese patients, and obesity is a condition of insulin resistance. Some papers have shown allociatiôn ôf inlulin reli'tanoê e:rtd preliênoe of muoopolyaacoharidês in detmiíl on histological slides of AN. This study was performed to. evaluate the insulin response to the oral test of glucose tolerance in obese patientes with AN comparing with control groups, and to correlate it with histopathological and histochemical findings. For this purpose, 33 patientes were studied in 3 groups: 14 obese with AN (Group 1),9 normal obese (Group 2) and 10 nomallean (qt"oup 3). For histological analyzes, 13 patients were studied in group I,' 8 patients in group 2 and 9 patients in group 3. Insulin levels at O', 120', insulin area, insulinogen index'(at O', 120' and area) were evaluated. Skin biopsies were performed by the colloidal iron method to evaluate mucopolysaccharide presence in skin lesions of AN and incontrol. groups, in the same anatomic site. There was statistically difference on insulin of 2 hours after glucose overload between groups 1 and 2 (p<0,05), and the insulinogen index of 2 hours after glucose overload were near the significance limit (p<0,053). When the 3 groups were analysed together, there was positive linearcorrelation between insulin levels (at 120', insulinogen index at 120', insulin area and insulinogen index of area) and epitheliuÍn and homy layer thickness (p<0,05), and between papilla measurement and area insulinogen index. There wasn't difference at colloidal iron staining in AN slides, comparing with control groups. Obese patients without AN shows higher instllin area, comparing with lean patients without AN (p<0,05) in spite of close epithelium and papilla measurements, wich is suggestive that only high insulin levels does not justify the dermatologic lesion. In conclusion, obese patients with AN shows more insulin resistance than obese patients without AN, insulin resistance is not associated to more amount of mucopolysaccharides in dermis and insulin levels are correlated to . epithelium and homy layer thickness. In counterpart, on1y lúgh insulin levels does not justify the dermatologic lesion. Mucopolysaccharides in dermal papilla ofaxilar region is a normal finding. Tlús work suggests insulin influence on epithelial growth. Keywords: Acanthosis Nigricans, Mucopolysaccharides, Insulin Resistance, Obesity, Colloidal Iron / Mestrado / Mestre em Medicina

Orientador: Lourenço Bozzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sallum_EnilsonAntonio_M.pdf: 5819597 bytes, checksum: 8b5a93f504141de57618c515e0407a55 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A Fibromatose Gengival Hereditária (FGH) refere-se a aumentos do volume gengival de aspecto fibroso, transmitidas geneticamente. O padrão de hereditariedade é autossômico dominante na maioria das vezes, e recessivo em alguns casos. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Hereditary Gengival Fibromatosis (HGF) is a benign oral disease characterized by a slowly progressive enlargement of the gingiva usually transmitted by a dominant autosomal gene. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Os componentes protéticos que fazem a união entre implante e prótese são importantes para a manutenção da saúde peri-implantar sendo responsáveis pela vedação permucosa e impedindo a penetração de agentes químicos ou bacterianos desencadeadores de processos destrutivos nas estruturas ao redor do implante. Assim faz-se importante o desenvolvimento de técnicas que preservando as características de citocompatibilidade dos componentes protéticos que incorporem a sua estrutura, agentes antibacterianos que assegurem a saúde peri-implantar e que não permitam o desenvolvimento de resistência dos micro-organismos sendo ainda inócuos aos tecidos circunjacentes e ao organismo como um todo. Este trabalho teve o objetivo de testar a citocompatibilidade de discos de titânio com uma cobertura revestida usando nanotecnologia de prata em cultura de fibroblastos gengivais humanos. Discos de titânio de 5,9 mm foram preparados para o ensaio, sendo compostos por disco controle ST (N=1) sem nenhuma espécie de tratamento e disco com tratamento CT (N=3) com 3 camadas de cobertura com filme carregado com partículas de prata. O aditivo antimicrobiano à base de prata foi obtido pelo método wet chemistry por impregnação de metal homogeneamente distribuída sobre a superfície do disco. Fragmentos de gengiva foram cortados e colocados em placas de petri com meio de cultura Eagle modificado por Dulbecco. Com aproximadamente 15 dias foram retirados os fragmentos de gengiva, seguido da tripsinização das células para sua expansão. O meio de cultura foi trocado a cada 2-3 dias e a progressão da cultura foi avaliada por microscópio de fase. Os FGHs (fibroblastos de gengiva humana) na terceira passagem (p3) foram contados em um hemocitômetro e plaqueados em placas de 96 e 24 poços. As análises foram feitas com 24, 48 e 72 horas após o plaqueamento. Após a solubilização, as soluções foram transferidas para uma nova placa de 96 poços, e efetuada a leitura. A citotoxicidade dos materiais foi avaliada por espectrofotometria no aparelho Leitor de Elisa, com comprimento de onda de 590 nm. As amostras foram metalizadas e o MEV foi usado para avaliar a morfologia das células. O comportamento da cultura de fibroblastos sobre os discos de titânio em um período de 24 horas mostrou-se mais favorável na superfície ST mesmo após 48 horas quando CT apresentou valores inferiores ao ST, porém estatisticamente não significantes ao tempo de armazenamento. A avaliação após 72 horas indica que CT apresentou queda no desenvolvimento da cultura de fibroblastos em relação a ST sendo o resultado estatisticamente significante o que sugere menor característica de citocompatibilidade do material utilizado no tratamento de superfície que se potencializa com o aumento do tempo de exposição visto que quando comparado aos demais espécimes com meio de cultura com nutrientes (CC), controle sobre a superfície da placa em H2O sem nutrientes (H2O) e controle sobre a superfície da placa com meio de cultura com nutrientes acrescido de fenol a 1 % (CM) o espécime CT somente teve valores absolutos superiores para presença das células quando comparado ao espécime CM. Nossos dados indicaram a necessidade de se promover aperfeiçoamento no complexo estrutural do material de cobertura dos discos de forma que se tornem mais citocompatíveis. / The prosthetic components that make the bond between implant and prosthesis are important for maintaining healthy peri-implant permucosal being responsible for sealing and preventing penetratíon of chemicals or bacterial triggers of destructive processes in the structures around the implant. So it is important to develop techniques that preserve the characteristics of cell compatibility of prosthetic components that incorporate its structure, antibacterial agents to ensure the peri-implant health and not allow the development of resistance of micro-organisms are harmless to the tissues even and surrounding the body as a whole. This study aimed to test the cell compatibility of titanium disks coated with a covering of silver using nanotechnology in cultured human gingival fibroblasts. Titanium disks of 5.9 mm were prepared for trial, being composed of hard control ST (N = 1) without any kind of treatment and treatment disc with CT (n = 3) with 3 layers of film cover loaded with silver particles. The additive antimicrobial silver-based was obtained by wet chemistry by impregnatíon of metal homogeneously distributed over the disk surface. Gingival fragments were distributed in petri dishes with culture medium Dulbecco\'s modified Eagle. With approximately 15 days they were removed, followed by trypsinizatíon of the cells for their expansíon. The culture medium were changed every 2-3 days of culture and progressíon was evaluated by phase microscopy. The FGHs (human gingival fibroblasts) in the third passage (p3) were counted in a hemocytometer and plated in a 96 and 24 wells. Analyses from 24, 48 and 72 hours after plating were made. After solubilizatíon, the solutíons were transferred to a new 96-well plate, and made reading. The cytotoxicity of the materials were evaluated by spectrophotometric ELISA reader device with a wavelength of 590 nm. The samples were metallized and SEM was used to assess cell morphology. The behavior of cultured fibroblasts on titanium disks in a period of 24 hours was more favorable on the surface of ST even after 48 hours when the CT were lower than the ST but not statistically significant at the time of storage. The evaluatíon afetr 72 hours indicates that the CT fell in the development of cultured fibroblasts in relatíon to the ST and the result was statistically significant which suggests lower cell compatibility characteristic of the material used in surface treatment that enhances with increasing time exposure as compared to other disk with culture medium with nutrients (CC), control over the surface of the plate without nutrients H2O and control over the surface of the plate with culture medium with nutrients plus phenol 1 % (CM) the CT only had higher absolute values for the presence of cells when compared to CM. Our data indicated the need to promote improvement in the structural complex of the covering material so that the disks become more compatibility.

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-01Bitstream added on 2014-08-13T18:01:04Z : No. of bitstreams: 1 000740552_20150801.pdf: 754242 bytes, checksum: bc5e88cf87d7787c34d18c1a6e215275 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:20:57Z: 000740552_20150801.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:17Z : No. of bitstreams: 1 000740552.pdf: 1359921 bytes, checksum: 8d035cb78ff5afaa9c1f0d1ef3b02d72 (MD5) / O fator de crescimento dos fibroblastos 8 (FGF8) é expresso pelo oócito bovino, ativa os receptores expressos por células do cumulus e oócitos, e está envolvido na regulação da glicólise e meiose no CCO de murinos. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do FGF8 sobre a expansão das células do cumulus, a progressão da meiose e metabolismo energético em CCOs bovinos submetidos à MIV. Uma vez que foram observadas influências sobre a progressão da meiose e no metabolismo energético, os efeitos de FGF8 sobre a abundância de genes que codificam o RNAm que controlam estes processos foram avaliados. O FGF8 não afetou a expansão do cumulus, mas diminuiu a porcentagem de oócitos que alcançaram a metáfase II, consequentemente houve o aumento da porcentagem de oócitos na metáfase I. Tal efeito foi associado com um efeito inibitório do FGF8 sobre os níveis de RNAm que codifica a Ciclina B1 no oócito. Em contraste com os achados anteriores em murinos, o FGF8 leva à diminuição dos níveis de RNAm de NPR2 nas células do cumulus. O FGF8 tende a diminuir a absorção de glicose e produção de lactato, que foi acompanhada por uma redução significativa nos níveis de RNAm para PFKP em células de cumulus. O FGF8 também tende a diminuir a expressão de RNAm para o LDHA, mas não alterou os níveis de RNAm para GLUT1, GLUT4 e PDHA1 nas células do cumulus, enquanto que aumentou a expressão de RNAm para o PDHA1 no oócito. Este estudo apresenta evidências de que o FGF8 pode retardar a progressão da meiose durante a MIV em bovinos por meio de mecanismos que envolvam redução da expressão de Ciclina B1. Além disso, novamente em contraste com estudos em ratos, os dados sugerem um efeito inibidor modesto de FGF8 sobre o metabolismo glicolítico das células do cumulus durante a maturação in vitro de bovinos / Fibroblast growth factor 8 (FGF8) is expressed by the bovine oocyte, activate receptors expressed by cumulus cells and oocytes, and is involved in the regulation of glycolysis and meiosis in the murine COC. The first aim of this study was to assess the effects of FGF8 on cumulus expansion, meiosis progression and energy metabolism in bovine COCs submitted to IVM. Then, once influences on meiosis progression and energy metabolism were observed, effects of FGF8 on abundance of mRNA encoding genes that control these processes were assessed. FGF8 did not affect cumulus expansion but decreased the percentage of oocytes reaching metaphase II, while increasing the percentage of oocytes in metaphase I. This was associated with an inhibitory effect of FGF8 on levels of mRNA encoding Cyclin B1 in the oocyte. In contrast with previous findings in mice, FGF8 decreased mRNA levels of NPR2 in cumulus cells. FGF8 tended to decrease glucose uptake and lactate production, which was accompanied by a significant reduction in PFKP mRNA abundance in cumulus cells. FGF8 also tended to decrease LDHA mRNA expression, but did not change GLUT1, GLUT4 and PDHA1 mRNA levels in cumulus cells, while it increased PDHA1 mRNA abundance in the oocyte. This study presents novel evidence that FGF8 can slow meiosis progression during IVM in cattle through mechanisms involving reduction of Cyclin B1 expression

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T15:18:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276657.pdf: 3219044 bytes, checksum: c6d78c71a089cc2beb0d99894aa79ad8 (MD5) / Diversas pesquisas clínicas ou com cultura de células têm sido realizadas com o intuito de identificar o meio mais adequado para a conservação de dentes avulsionados ou de fibroblastos periodontais. Embora, na maioria das vezes, essas pesquisas confirmem ou refutem uma hipótese experimental, normalmente elas dão origem a algumas dúvidas. Esta tese de doutorado é composta de 4 pesquisas desenvolvidas com os objetivos de: 1) verificar se a renovação do leite, em intervalos regulares de 12, 24 ou 48h, é capaz de prolongar sua capacidade de manter a viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal humano (FLPH); 2) verificar se o tempo de estocagem da solução salina balanceada de Hank (HBSS) exerce influência sobre a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH; 3) comparar o efeito de diferentes meios de conservação sobre a viabilidade de FLPH; e 4) comparar o efeito de diferentes meios de conservação sobre a viabilidade e a capacidade proliferativa de FLPH. Para executá-las, as células foram conservadas, a 5 e/ou a 20°C, em própolis, clara de ovo, água de coco, HBSS, Save-A-Tooth®, leite desnatado e leite integral por períodos variáveis. Células armazenadas em Meio Essencial Mínimo (MEM) a 37°C e em água de torneira (5 e/ou a 20°C) serviram de controle-positivo e negativo, respectivamente. A viabilidade e a capacidade de proliferação celular foram determinadas pelo ensaio MTT. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis, Scheffé e Mann-Whitney (a=5%). Com base nos resultados obtidos nos diferentes experimentos foi possível concluir que: 1) a renovação do leite foi capaz de prolongar a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH somente quando realizada, a cada 48h, no leite mantido a 5ºC; 2) o tempo de estocagem da HBSS influenciou negativamente a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH; 3) em ambas as temperaturas, o leite desnatado foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite integral e HBSS. O própolis, a clara de ovo e a água de coco podem ser indicados para a conservação de fibroblastos periodontais por um período máximo de 3h; 4) em ambas as temperaturas, os meios mais efetivos em manter a viabilidade celular (0h) foram o leite desnatado e o leite integral. Quando os meios foram mantidos a 5°C, o leite desnatado e o leite integral proporcionaram maior capacidade proliferativa aos FLPH. Quando mantidos a 20°C, a HBSS revelou os melhores resultados. / Several clinical trials or cell culture studies have been carried out in order to identify the most appropriate storage medium for the maintenance of avulsed teeth or periodontal fibroblasts. Although in most cases, these studies confirm or refute an experimental hypothesis, they often give rise to some uncertainties. This doctoral thesis is composed of 4 studies developed with the following purposes: 1) to analyze whether the replacement of milk at 12, 24 or 48 h, can extend its ability to maintain human periodontal ligament fibroblasts (HPDLF) viability; 2) to verify if the storage time influences the effectiveness of Hank's balanced salt solution (HBSS) in maintaining HPDLF viability; 3) to compare the effect of different storage media to preserve HPDLF viability; and 4) to evaluate the effect of different storage media on the maintenance of the viability and proliferative capacity of HPDLF. The cells were stored at 5 and / or 20°C in propolis, egg white, coconut water, HBSS, Save-A-Tooth ®, skimmed and whole milk for different periods of time. Cells stored at 37°C in Minimum Essential Medium (MEM) and tap water (5 and / or 20°C) served, respectively, as positive and negative controls. The viability and cellular proliferation capacity was determined by MTT assay. Data were analyzed by Kruskal-Wallis, Scheffe and Mann-Whitney tests (á = 5%). Based on the results obtained in the different experiments, it was concluded that: 1) milk replacement was able to extend its ability to maintain HPDLF viability only when carried out every 48 hours at 5°C, 2) the storage time of HBSS negatively influenced its effectiveness, 3) at both temperatures, skim milk, followed by whole milk and HBSS preserved significantly more viable cells than any other tested solution. Propolis, egg white and coconut water can be indicated to preserve HPDLF for up to 3 hours, 4) at both temperatures, the most effective mediums to maintain cell viability (0 h) were skimmed and whole milk. When the media were kept at 5° C, skimmed and whole milk provided higher proliferative capacity to HPDLF. When kept at 20°C, HBSS showed the best results.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T06:42:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 280715.pdf: 95173377 bytes, checksum: abb1f8730c74816c3f032e641555b88c (MD5) / Cirurgias para reconstrução de tecido mole que utilizam material autógeno aumentam a morbidade e o riscos de complicações com a segunda área cirúrgica. Como alternativa para eliminar esses inconvenientes, a engenharia tecidual busca encontrar um arcabouço ideal para carrear células e fatores de crescimento responsáveis pela criação de tecidos em ambiente in vitro. Dessa forma o objetivo deste estudo é analisar quatro membranas absorvíveis como potencial arcabouço para a engenharia de tecidos. Foram utilizados fibroblastos humanos gengivais provenientes de cultura primária. Quatro membranas foram utilizadas: Osseoguard®, Genderm®, ácido poli(ácido lactico-co-glicólico) (PLGA) e ácido poli(ácido lactico-co-glicólico) associado com hidroxiapatita (PLGA+HA). Testes de proliferação, análise da degradação através da microscopia eletrônica de varredura (MEV), teste de viabilidade celular (MTT) e análise do pH do meio de cultura foram os métodos utilizados para avaliar as membranas. Os índices de proliferação não foram estatisticamente significativos entre grupos, contudo todas as membranas possibilitaram a proliferação celular. A análise do MEV mostrou que as membranas com base polimérica (PLGA e PLGA + HA) apresentam características mais apropriadas a arcabouços para engenharia tecidual. Os níveis de viabilidade celular diminuíram e os níveis de pH foram similares para todos os grupos exceto o PLGA que se apresentou ácido. A membrana de PLGA + HA é a que apresenta melhores características biológicas e estruturais para funcionar como arcabouço para a engenharia de tecidos. / Soft tissue reconstruction using autogenous material increases morbidity and risk of complications with the second surgical area, the donor site. As an alternative to eliminate these drawbacks, tissue engineering seeks to find an ideal scaffolds to wash cells and growth factors that are responsible for a tissue environment fabrication in vitro. Thus the aim of this study is to analyze four absorbable membranes as a potential scaffold for tissue engineering. Human gingival fibroblasts (HGF) from primary cell culture were used. Four types of bioabsorbable membranes were used as cell carrier: OsseoGuard®, Genderm®, poly (lactic-co-glycolic) acid (PLGA) and poly (lactic-co-glycolic) acid associated with hydroxyapatite (PLGA+HA). Proliferation assays, degradation analysis by scanning electron microscopy (SEM) cell viability assay (MTT) and pH analysis of the culture mediums were used to evaluate the membranes. The proliferation index was not statistically significant between groups, yet all the membranes allowed cell proliferation. The SEM analysis showed that the membranes based on polymers (PLGA and PLGA HA) have more appropriate scaffolds characteristics for tissue engineering. The level of cell viability decreased and the pH levels were similar for all groups except that PLGA. The PLGA+HA membrane has the best biological and structural functions as a scaffold for tissue engineering.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 263918.pdf: 1851045 bytes, checksum: b00c02c9b8564ca5d808e654762f5881 (MD5) / Os objetivos deste estudo foram: estabelecer uma linhagem de fibroblastos oriundos de ligamento periodontal de dentes humanos; avaliar a efetividade de diferentes meios de conservação em manter a viabilidade desses fibroblastos; e verificar o efeito de diferentes temperaturas sobre a efetividade dos meios estudados. Uma vez estabelecida a linhagem de fibroblastos, a viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico MTT, após a conservação a 37°C por 3, 6, 24, 48 e 72h em diferentes meios: Meio Essencial Mínimo (MEM- controle-positivo), solução salina balanceada de Hank (HBSS) estéril, HBSS não estéril, leite desnatado, Save-A-Tooth® e água (controle-negativo). Para verificar o efeito da temperatura, o experimento foi repetido utilizando-se os mesmos meios e períodos, porém cultivando-se as células em temperatura ambiente (20°C). A viabilidade celular também foi avaliada pelo método de exclusão do Azul de Tripano. As células foram coradas após 6, 24, 48 e 72h de contato com MEM, HBSS estéril, HBSS não estéril, leite desnatado e Save-A-Tooth® a 20°C. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Calculadas as médias dos valores de absorbância (MTT) e do percentual de viabilidade celular (Azul de Tripano), a comparação dos resultados foi realizada pelo teste de Kruskal-Wallis. Posteriormente, foi aplicado o teste de comparações múltiplas de Scheffé para localizar as diferenças significativas entre as médias de absorbância e o percentual de células viáveis nos diferentes meios e períodos, num nível de significância de 5%. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparar os resultados obtidos com o ensaio MTT à temperatura ambiente e a 37°C. Os resultados do MTT realizado à temperatura ambiente demonstraram que o controle-positivo (MEM-37) foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite e depois pela HBSS não estéril e estéril. Após 72h, o desempenho do leite e da HBSS estéril e não estéril foi semelhante. No experimento a 37°C, o leite foi o melhor meio de conservação até 24h. Após 48 e 72h, o desempenho do leite diminuiu e o da HBSS aumentou, apresentando resultados similares aos do grupo-controle. Independentemente da temperatura de cultivo, a água foi o pior meio de conservação e o Save-A-Tooth® demonstrou resultados semelhantes aos da água a partir de 24h. Em relação ao efeito da temperatura, no geral o cultivo a 37°C reduziu a viabilidade das células conservadas em água e em Save-A-Tooth®, mas aumentou a das mantidas em leite, HBSS estéril e HBSS não estéril, pelo menos até 24h. Pelo método do corante Azul de Tripano, os melhores meios de conservação foram o leite e a HBSS estéril e não estéril, não havendo diferença estatística entre eles, em qualquer período de tempo. Foi concluído que: a técnica de cultivo celular utilizada permitiu a obtenção de uma linhagem de fibroblastos periodontais; a temperatura interfere na efetividade do meio de conservação; leite desnatado, à temperatura ambiente, pode ser utilizado como meio de conservação até 48h. The aims of this study were to establish a fibroblast lineage from human periodontal ligament cells, to evaluate the effectiveness of different storage media for maintaining the viability of fibroblasts, and to verify the effect of different temperatures on the effectiveness of these media. After the determination of the fibroblasts lineage, the cell viability was evaluated by the MTT colorimetric method, after preservation at 37°C for 3, 6, 24, 48, and 72h in the following media: Minimal Essential Medium (MEM - positive-control), sterile and non-sterile Hank's balanced salt solution (HBSS), non-fat milk, Save-A-Tooth®, and water (negative-control). In order to verify the effect of the temperature, the experiment was repeated using the same storage media and periods, but with cell culturing at room temperature (20°C). The cell viability was also evaluated by Trypan Blue exclusion method. The cells were stained after 6, 24, 48, and 72h of contact with MEM, sterile and non-sterile HBSS, non-fat milk, and Save-A-Tooth® at 20°C. All experiments were performed in triplicate. After calculating the mean absorbance values (MTT) and the mean percent cell viability (Trypan Blue), the results were compared using the Kruskal-Wallis test. Scheffé's multiple comparisons test was used to determine the differences between absorbance means and the percent of viable cells in the different media and periods (p = 0.05). Mann-Whitney's test was used to compare the results obtained from MTT at room temperature and 37o C. MTT results at room temperature revealed that the positive-control (MEM-37) was the best storage medium, followed by milk, non-sterile HBSS, and sterile HBSS. After 72h, the performance of milk, sterile and HBSS non-sterile was similar. Milk was the best storage medium at 37o C for up to 24h. After 48 and 72h, milk performed poorer and HBSS performed better, exhibiting similar results to the positive-control. Regardless of the culture temperature, water was the poorer preservation medium, while Save-A-Tooth® showed similar results to the water after 24h. The culture at 37o C reduced the viability of cells preserved in water or Save-A-Tooth®, but increased the viability of cells maintained in milk, sterile and non-sterile HBSS, for up to 24h. The Trypan Blue staining method showed that the best storage media were milk, sterile and non-sterile HBSS, without statistical difference between them. Based on these results, it was concluded that the cell culture used allowed to obtain a periodontal fibroblasts lineage; the temperature interferes in the storage medium effect; non-fat milk at room temperature can be used for preservation for up to 48h.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-07-01T19:02:53Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EstudoVitroEfeito.pdf: 1703181 bytes, checksum: 2e6ab3e103e2113edb400a3e1d412b45 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-07-01T19:04:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EstudoVitroEfeito.pdf: 1703181 bytes, checksum: 2e6ab3e103e2113edb400a3e1d412b45 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-01T19:04:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EstudoVitroEfeito.pdf: 1703181 bytes, checksum: 2e6ab3e103e2113edb400a3e1d412b45 (MD5) Previous issue date: 2013 / Antagonistas de receptores mineralocorticoides (MR) da aldosterona (espironolactona e eplerenona) possuem efeitos benéficos no tratamento de pacientes com doenças cardíacas. Porém, muitas dessas respostas se mostraram independentes do antagonismo de MR. Nosso objetivo foi estudar os mecanismos de ação dessas drogas que levam às respostas cardioprotetoras e avaliar comparativamente seus efeitos in vitro. Os ensaios foram realizados em culturas primárias de células cardíacas de ratos neonatos. Avaliamos o efeito proliferativo da espironolactona e eplerenona em cardiomiócitos e fibroblastos, na presença e na ausência de mifepristona e aldosterona, para avaliar o efeito per se dessas drogas. Espironolactona e eplerenona promoveram proliferação em cardiomiócitos, mesmo na ausência de aldosterona. Porém, em fibroblastos, somente espironolactona apresentou efeito anti-proliferativo e reverteu o efeito mitogênico da aldosterona, enquanto a eplerenona somente reverteu o efeito da aldosterona. Para elucidar as vias bioquímicas evocadas por essas drogas nos focamos na análise dos segundos mensageiros Ca2+, AMPc e GMPc e na atividade de PKC e ERK1/2, devido à importância dessas vias no processo cardioprotetor. Espironolactona é capaz de aumentar os níveis de Ca+2, AMPc, GMPc e atividade de ERK 1/2, e reverte a ação de aldosterona na atividade de PKC e ERK1/2. Eplerenona aumenta apenas os níveis de Ca+2, GMPc e atividade de ERK1/2, e também reverte a ação de aldosterona na atividade de PKC e ERK1/2. Nossos dados sobre segundos mensageiros apoiam o fato que, além da aldosterona, a espironolactona e a eplerenona também apresentam respostas rápidas, independente de MR, como aumento de AMPc, Ca2+ e GMPc pela espironolactona e Ca2+ e GMPc pela eplerenona. As diferenças encontradas entre a ação dessas drogas apontam para uma cardioproteção mais consistente promovida pela espironolactona, porém esses efeitos ainda precisam ser testados clinicamente. ______________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Mineralocorticoid receptor (MR) antagonists of aldosterone (spironolactone and eplerenone) have beneficial effects in the treatment of patients with heart disease. However, most of these responses are independent of MR antagonistic pathway. Our objective was to study the mechanisms of action of these drugs that lead to cardioprotection and further compare their effects in vitro. Assays were performed in primary cultures of neonatal rat cardiac cells. We assessed the proliferative effects of spironolactone and eplerenone cardiomyocytes and fibroblasts in the presence and absence of mifepristone and aldosterone in order to evaluate the effect of these drugs per se. Spironolactone and eplerenone promoted cardiomyocyte proliferation, even in the absence of aldosterone. However, in fibroblasts, spironolactone alone showed anti-proliferative effect and reversed the mitogenic effect of aldosterone. While only eplerenone reversed the effect of aldosterone. To elucidate the biochemical pathways evoked by these drugs we focused on the analysis of second messengers, Ca2+, cAMP e cGMP and activity of PKC and ERK1/2 because of their importance in the process cardioprotective pathways. We observed that spironolactone is able to increase the levels of Ca2+, cAMP, cGMP and activity of ERK1/2, and reverse the action of aldosterone on the activity of PKC and ERK1/2. Eplerenone showed increases levels of Ca2+, cGMP and activity of ERK1/2, and also reversed the action of aldosterone on the activity of PKC and ERK1/2. Our second messengers data support the fact that in addition to aldosterone, spironolactone and eplerenone also feature fast response, independent of MR, as show by increased cAMP, cGMP and Ca2+ by spironolactone and eplerenone by Ca2+ and cGMP. The differences found between the action of these drugs show a more consistent cardioprotection promoted by spironolactone, but these effects have yet to be tested clinically.