Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-03T09:09:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-03T09:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) Previous issue date: 2010-04-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A invasão de plantas exóticas representa uma das maiores ameaças para a biodiversidade do planeta. Muitos países enfrentam situações graves com invasões biológicas promovidas por plantas nativas do Brasil que, depois de introduzidas a partir de seu centro de origem, livres de seus inimigos naturais, passaram a invadir ecossistemas naturais ameaçando a sua integridade e processos ecológicos fundamentais. A utilização das medidas de controle convencionais, utilizadas na agricultura é, nesses casos, contra- indicada ou inviável. O controle biológico clássico pela introdução de inimigos naturais específicos provenientes do centro de origem da planta é a única opção que apresenta exemplos de sucesso duradouro e é reconhecidamente sustentável. Fungos associados a três espécies de plantas invasoras (Rottboellia cochinchinensis capim-camalote, Tradescantia fluminensis trapoeraba branca e Schinus terebinthifolius aroeira) foram estudados no contexto do controle biológico clássico com o propósito de contribuir para a mitigação de invasões nos EUA e Nova Zelândia e os resultados são aqui apresentados. Um hifomiceto foi descoberto atacando R. cochinchinensis no Brasil e sua identidade foi esclarecida como sendo Bipolaris chloridis. Este fungo nunca havia sido antes relatado no Brasil e nem sobre este hospedeiro. Ele se mostrou capaz de atacar outras gramíneas além de R. cochinchinensis, milho e capim de Rhodes (seu hospedeiro originalmente conhecido). As implicações desta descoberta para o controle biológico foram discutidas. Sobre T. fluminensis foram encontrados nove espécies de fungos durante o levantamento: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp.nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. e Uromyces commelinae. A taxonomia da nova espécie Kordyana brasiliensis foi esclarecida por exames morfológicos e estudos moleculares (com a utilização dos primers NL1 e NL4) e o fungo se mostrou promissor como agente de biocontrole, sendo específico para T. fluminensis (entre 69 espécies testadas de 32 famílias botânicas) e capaz de causar uma doença severa sobre este hospedeiro. Sob condições de infecção natural o fungo apresentou uma incidência de doença na ordem de 70% e causou severidade média de 42% em 200 folhas avaliadas. Os levantamentos da micobiota de S. terebinthifolius, revelaram uma grande diversidade de fungos potencialmente fitopatogênicos. Dentre estes, no presente trabalho, examinou- se com atenção os fungos coletados reconhecidos como pertencentes à família Meliolaceae e também, considerando-se o seu aparente potencialpara o controle biológico,um isolado de Corynespora cassiicola causador de doença severa sobre S. terebinthifolius. Três espécies de fungos causadores de míldio negro (uma doença de pequeno impacto sobre S. terebinthifolius) foram encontradas colonizando S. terebinthifolius em várias regiões do Brasil: Irenopsis schini-terebenthifolii sp. nov, Meliola chilensis e Meliola rhois var. africana. A primeira espécie foi reconhecida como nova e descrita enquanto que as duas demais foram reconhecidas como representando novas associações patógeno-hospedeiro, pois os fungos não eram conhecidos ainda sobre S. terebinthifolius. A morfologia de um hifomiceto associado a manchas e queimas foliares de S. terebinthifolius foi reconhecida como equivalente à dos fungos da espécie C. cassiicola e confirmada por métodos moleculares envolvendo a utilização dos primers ITS1 e ITS4. Além disso, foi realizado um teste de especificidade envolvendo 23 espécies de plantas de diferentes famílias botânicas, inclusive Anacardiaceae, e o patotipo se mostrou especifico a S. terebinthifolius, sendo proposto o seu reconhecimento como C. cassiicola f. sp. schinii e também o seu potencial para utilização como agente de controle biológico para infestações de S. terebinthifolius na Flórida e Havaí (EUA). / Invansions of natural ecosystems by exotic plants represent one of the greatest threats to biodiversity. Many countries face serious problems with such biological invasions involving plants that are native from Brazil. After its having been introduced from their center of origin and free from their natural enemies they invade natural ecosystems and threaten the integrity of ecological processes. The conventional control measures used in agriculture, in ssuch cases, are not viable nor recommended. The classical biological control involving the introduction of specific natural enemies from the center of origin of the plant is the only option that provides examples of success and is widely recognized as the sole sustainable alternative. Fungi associated with three weed species (Rottboellia cochinchinensis - Itchgrass, Tradescantia fluminensis - wandering jew and Schinus terebinthifolius - brazilian pepper tree) were studied in the context of biological control with the aim of contributing to the mitigation of invasions in the U.S., New Zealand and Brazil and the results are presented herein. A hyphomycete was discovered attacking R. cochinchinensis and identified as Bipolaris chloridis. This fungus has never been reported before from Brazil nor on this host. This fungus was able to attack other grasses besides R. cochinchinensis, namely corn and rhodes grass (its original host ). The implications of these finding for biological control were discussed. In T. fluminensis, nine species of fungi were collected during the survey: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp. nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. and Uromyces commelinae. The taxonomy of the new species Kordyana brasiliensis was clarified by examinations of morphological characters and molecular studies (using the primers NL1 and NL4). This fungus was regarded as showing a high potential for use in biocontrol agent. It was specific to T. fluminensis (among 69 species tested from 32 botanical families) and capable of causing severe disease on this host. Under conditions of natural infection bu this fungus an incidence of 70% and a level of 42% of disease severity was reached. Surveys of the mycoflora S. terebinthifolius showed a great diversity of potentially pathogenic fungi among which are fungi belonging to a poorly known group of ascomycetes causing black mildews, the Meliolaceae. Three species were found on this host: Irenopsis schini- terebenthifolii sp. nov., Meliola chilensis and Meliola rhois var. africana. The first species was described as new whereas the other two were new host-pathogen associations. The potential for practical application in biological control of an isolate of Corynespora cassiicola found causing a severe disease on S. terebinthifolius. was investigated. Its identity was confirmed as C. cassiicola by a combination of morphology studies and molecular methods involving the use of primers ITS1 and ITS4. In addition, we performed a specificity test involving 23 species of plants of different botanical families, including several Anacardiaceae. The isolate from S. terebinthifolius was shown to be host- specific and the new forma specialis C. cassiicola f. sp. schinii was proposed. Its potential for use as biological control agent for infestations of S. terebinthifolius in Florida and Hawaii (USA) was regarded as high.

Orientador: Cibele Chalita Martins / Coorientadora: Edna Ursulino Alves / Banca: Letícia Ane Sizuki Nociti Dezem / Banca: Silvelena Vanzolini Segato / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Banca: Rinaldo Cesar de Paula / Resumo: Dentro de um programa de controle de qualidade, a avaliação da sanidade e do vigor das sementes é necessária para o sucesso da produção. Assim, o trabalho foi conduzido com o objetivo de identificar os fungos e verificar a eficiência de testes de vigor na diferenciação da qualidade dos lotes de sementes de Brachiaria brizantha cv. Marandú e Xaraés, visando obter informações sobre a qualidade sanitária das sementes e a emergência de plântulas em campo. Vinte lotes de sementes produzidas nos Estados de Mato Grosso do Sul, Mato Grosso, Goiás, Minas Gerais, São Paulo e Bahia foram submetidos à avaliação do teor de água, germinação e microflora fúngica, realizada pelo método do papel de filtro (blotter-test). Para avaliar o vigor e potencial fisiológico foram utilizados dezessete lotes de sementes, sendo oito da cultivar Marandú e nove da Xaraés, avaliados quanto ao teor de água, testes de germinação e vigor (primeira contagem de germinação, condutividade elétrica, emergência de plântulas, primeira contagem e índice de velocidade de emergência de plântulas em areia no laboratório e emergência de plântulas em campo). A microflora fúngica diagnosticada em sementes comerciais de capim marandú e xaraés é constituída por Helminthosporium sp., Fusarium sp., Phoma sp., Curvularia sp., Pyricularia grisea, Chaetomium sp., Nigrospora sp., Colletotrichum sp. e Aspergillus sp. não afeta a germinação de sementes de capim-marandú, no entanto, a incidência de Fusarium sp. e Aspergillus sp. reduz... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Within a quality control program, the evaluation of health and seeds vigor are fundamental and necessary for the successful production. Thus, this study was conducted in order to identify fungi and verify the efficiency of vigor tests in the quality differentiating of Brachiaria brizantha cv., Marandu and Xaraes seed lots, in order to obtain information that improve the sanitary quality of seeds and seedling emergence in the field. Twenty seed lots produced in the states of Mato Grosso do Sul, Mato Grosso, Goias, Minas Gerais, Sao Paulo and Bahia were evaluated for water content, germination and fungal microflora by the filter paper method (blotter-test). To evaluate the vigor and potential physiological were used seventeen seed lots, eight of the cultivar Marandu and nine of the Xaraes submitted to the germination test, first counting of germination test, electrical conductivity, seedling emergence, first germination count and seedling emergence speed index in the sand performed in the laboratory and emergency seedling tests in the field. The fungal microflora diagnosed in commercial seed lots of marandu and xaraes grasses consists of Helminthosporium sp., Fusarium sp., Phoma sp., Curvularia sp., Pyricularia grisea, Chaetomium sp., Nigrospora sp., Colletotrichum sp. and Aspergillus sp.. germination of marandu grass seeds was not affected by the incidence of fungi. The incidence of Fusarium sp. and Aspergillus sp reduces the germination of xaraes Regarding producing locations... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Leila Trevisan Braz / Coorientador: Margarete Camargo / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Banca: Pablo Forlan Vargas / Banca: José Branco de Miranda Filho / Banca: Dilermando Perecin / Resumo: Dentre as doenças que acometem a cultura do meloeiro, o cancro-da-haste, causado por Didymella bryoniae, atualmente é considerada a principal doença para a cultura, provocando perdas econômicas substanciais. Nesse contexto, o uso de cultivares resistentes, aparece como medida ideal e estratégica no manejo integrado dessa doença. Para se obterem cultivares resistentes, é preciso identificar as melhores fontes de resistência, ter um método de avaliação da resistência eficiente, rápido e prático, e conhecer a herança genética dessa característica. Para tanto, o trabalho teve os seguintes objetivos: a) avaliar a reação de acessos de meloeiro a D. bryoniae; b) testar métodos e tempos (dias após a inoculação) para a avaliação da reação de genótipos de meloeiro ao referido patógeno e c) determinar os valores das capacidades geral (CGC) e específica de combinação (CEC) de seis genótipos de meloeiro, a fim de avaliar o potencial desses como genitores para uso em programas de melhoramento, visando obtenção de linhagens com resistência a D. bryoniae. O trabalho dividiu-se, portanto, em três etapas, sendo a primeira o estudo da reação dos genótipos, a segunda a avaliação de métodos e dias após a inoculação, na severidade do cancro-da-haste nos genótipos e, a terceira estudar o potencial de genitores para uso em programas de melhoramento, visando obtenção de linhagens com resistência a D. bryoniae. Os experimentos foram conduzidos no Setor de Olericultura e Plantas Aromático-Medicinais e ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the diseases that affect the melon crop, the gummy stem blight, caused by Didymella bryoniae, is currently considered the most important and causal agent of substantial losses. In this context, the use of resistant appears as an advisable strategy in the integrated management of the disease. In the process to obtain resistant cultivars, it is necessary primarily to identify reliable sources of resistance and use an appropriate method to effectively evaluate the plant-pathogen interaction; the methodology must be fast, convenient and compatible with the genetic inheritance of this characteristic. Under this viewpoint, the present work had the following objectives: a) evaluation of melon accesses for resistance to D. bryoniae. b) adjustment of methodology, including the appropriate time (days after inoculation) to the evaluate the reaction of melon genotypes to the pathogen; c) estimation of the effects of general combining ability (GCA) and specific combining ability (CEC) in a diallel cross among six lines of muskmelon to provide basic information for their use as parents in breeding programs toward the development of line with resistance to D. bryoniae. The experiments were conducted in the Setor de Olericultura e Plantas Aromático-Medicinais e no Laboratório do Departamento de Fitossanidade, na Faculdade de Ciências Agrárias (UNESP-FCAV) - Câmpus de Jaboticabal. The results regarding the reaction to gummy stem blight identified the access AC-29, C160, Charentais Fom 1... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A podridão parda [Monilinia fructicola (Winter) Honey] é a doença mais importante na cultura do pessegueiro, causando danos em flores e frutos em pré e em póscolheita. O uso de agroquímicos na agricultura tem causado riscos à saúde humana e ao meio ambiente. Na busca de métodos alternativos para o controle da podridão parda em pós-colheita foram realizados experimentos com o objetivo de avaliar a eficiência de diferentes extratos vegetais no controle de M. Fructicola. Foram realizados dois experimentos in vitro e quatro experimentos in vivo. No experimento 1, in vitro, foi avaliado a porcentagem de germinação de conídios em placa de Elisa, contendo cinco tratamentos, sendo eles, extrato aquoso de canola, alcoólico, maceração, infusão e testemunha com cinco repetições. Para o crescimento micelial foram avaliadas diferentes concentrações (0, 2,5, 5,0, 7,5 e 10%) do extrato aquoso de canola com sete repetições. Os quatro experimentos in vivo foram realizados em delineamento inteiramente casualizado, constituído por quatro repetições, representadas por bandejas de plástico contendo cinco frutos. Foram efetuados danos mecânicos na porção equatorial de cada fruto e, em seguida, aplicados os tratamentos (extratos) por meio de imersão. Depois disso, os frutos foram inoculados com uma suspensão de 105 esporos mL-1 de M. fructicola e, após quatro dias, avaliou-se à área lesionada (cm2) e o número de esporos. No experimento 2 e 3, in vivo, foram avaliados os extratos vegetais de canola (Brassica napus), guaçatonga (Casearia sylvestris), eucalipto (Eucalyptus citriodora) e babosa (Aloe vera) em comparação ao controle químico e a testemunha. O experimento 4 constituiu-se em esquema fatorial 3x3 + 1 testemunha, sendo o fator A constituído pelas espécies de brassicas (canola, repolho e nabiça) e o fator B pelas formas de extração (alcoólica, infusão e maceração). O experimento 5 constituiu-se em um esquema fatorial 3x2, sendo o fator A constituído pelos tipos de injúrias (furo, raspagem e sem injúrias) e o fator B uso do extrato (com e sem extrato de canola). Os extratos de canola aquoso, maceração e infusão inibiram a germinação de conídios do patógeno e no crescimento micelial o extrato de canola na concentração 10% apresentou o melhor resultado, tanto na primeira avaliação, quanto na segunda, com 78 e 69% de controle, respectivamente. Nos experimentos in vivo, todos os tratamentos que foram submetidos ao controle com extrato de canola apresentaram lesões significativamente menores quando comparados com suas respectivas testemunhas. As diferentes formas de extração testadas foram eficientes no controle do patógeno, sendo que para cada espécie houve uma forma de extração que mais se destacou, sendo que para a canola a melhor forma de extração foi por infusão, para a nabiça foi por maceração e para o repolho foi por extração alcoólica. As espécies de brassicas reduziram a produção e a germinação de esporos de M. Fructicola em pós-colheita de pêssegos. Os tratamentos submetidos a perfuração (furo) apresentaram-se como uma metodologia eficiente para avaliar a eficiência do extrato de canola. / The brown rot [Monilinia fructicola (Winter) Honey] is the most important disease in peach, causing damage to flowers and fruits in pre and post-harvest. The use of pesticides in agriculture has caused risks to human health and the environment. In the search for alternative methods for control brown rot in postharvest, experiments were performed in order to evaluate the efficiency of different plant extracts to control M. fructicola. Two experiments were conducted in vitro and four experiments in vivo. In the experiment 1, in vitro, was assessed the germination of conidia in Elisa plate containing five treatments: aqueous extract of canola, alcoholic, maceration, infusion and control with five repetitions. For mycelial growth were evaluated different concentrations (0, 2.5, 5.0, 7.5 and 10%) of the aqueous extract of canola with seven repetitions. The four in vivo experiments were performed in a completely randomized design consisting of four replications, represented by plastic trays containing five fruits each. Mechanical damage were made in equatorial portion of each fruit and then applied treatments (extracts) by dipping. Thereafter, the fruits were inoculated with a spore suspension of 105 mL-1 of M. fructicola, and after four days, was evaluated the lesion area (cm2) and the number of spores. In experiments 2 and 3, in vivo, we assessed the plant extracts of canola (Brassica napus), guaçatonga (Casearia sylvestris), eucalyptus (Eucalyptus citriodora) and babosa (Aloe vera) compared to the chemical treatment and the control. The experiment 4 consisted in factorial 3x3 + 1 control, and the factor A consists by the species of brassicas (canola, cabbage and turnip) and factor B the forms of extraction (alcoholic infusion and maceration). The experiment 5 consisted in a 3x2 factorial design, with the factor A consisting of the types of injuries (hole, scraping and without injuries) and factor B using the extract (with and without extract canola). The aqueous extracts of canola, maceration and infusion inhibited conidial germination and mycelial growth. The extract of canola in concentration of 10% showed the best results, both, in the first assessment, as in the second, with 78 and 69% of control, respectively. In the in vivo experiments, all treatments were subjected to the control of canola extract showed significantly less damage when compared to their respective controls. The different forms of extraction tested were effective in controlling the pathogen, and for each species there was a way to extract that stood out, and canola for the best extraction was by infusion, for the turnip was maceration and the cabbage was by alcohol extraction. The species of brassicas reduced production and spore germination of M. Fructicola in post-harvest peaches. The treatments undergone perforation (hole) presented itself as an effective methodology to evaluate the efficiency of the extract of canola.

CAPES / A indução de resistência é conceituada como a ativação de um estado de resistência contra doenças, o qual é induzido sistemicamente em plantas pela utilização de agentes bióticos ou abióticos, sem qualquer alteração do genoma da planta, ocorrendo de maneira não específica, por meio da ativação de genes que codificam para diversas respostas de defesa vegetal. A quitosana é um polímero derivado da desacetilação da quitina, encontrada em grande quantidade na carapaça de crustáceos, sendo estudada com potencial para controle fitopatógenos, tanto para sua ação fungistática direta, quanto pela capacidade de induzir a defesa das plantas, indicando a presença de moléculas com características elicitoras. Foram desenvolvidos três experimentos com objetivos de avaliar o potencial da quitosana na indução de resistência a plântulas de beterraba (Beta vulgaris), tomate (Solanum lycopersicum) e pepino (Cucumis sativus) e no controle de Fusarium sp., Rhizoctonia solani Kuhn e Pythium sp. em condições in vitro. O delineamento experimental foi inteiramente casualisado, com quatro repetições As sementes de beterraba, tomate e pepino foram submersas em solução de quitosana por 20 minutos, nas concentrações de 0,25; 0,5; 1 e 2% e na testemunha água destilada. As sementes foram semeadas em bandejas de poliestireno expandido contendo substrato lantmax Florestalr previamente esterilizado e inoculado com Fusarium sp., Rhizoctonia solani Kuhn e Pythium sp., respectivamente, para as três culturas. O experimento foi conduzido por 14 dias em câmara de cultivo com controle de temperatura (25 C 2 C), luminosidade (fotoperíodo de 12 horas) e umidade relativa (70% 10%). As avaliações realizadas foram emergência das sementes, tombamento de plântulas, comprimento de plântulas, massa da matéria fresca e atividade das enzimas fenilalanina amônia-liase (FAL), quitinases e b-1,3- glucanase. Foi avaliado tamb´em o crescimento micelial de Fusarium sp., Pythium sp. e R. solani em meio de cultura B.D.A. (Batata-Dextrose e Agar) contendo quitosana nas mesmas concentrações avaliadas nas sementes. Na cultura da beterraba, o tratamento de sementes com quitosana propiciou maior emergência e comprimento das plântulas, e reduziu o percentual de tombamento. O tratamento com quitosana ativou a resistência sistêmica adquirida com expressão das enzimas quitinases e b-1,3-glucanase. No tomate a quitosana na concentração de 0,25% favoreceu a emergência das plântulas, reduziu a incidência de tombamento e ativou as enzimas FAL, quitinases e b-1,3-glucanase. Em pepino, com concentração de até 0,5%, favoreceu a emergência das plântulas e reduziu a incidência de tombamento. A quitosana ativou as enzimas FAL e b-1,3-glucanase. A quitosana também apresentou ação fungistática sobre o crescimento inicial de Pythium sp. e Rhizoctonia solani Kuhn em condições in vitro, no entanto, tal ação não prevaleceu até o término do experimento. Para Fusarium sp. o aumento da concentração da quitosana resultou na redução do crescimento micelial in vitro. / Induction of resistance is defined as the activation of a state of resistance against diseases which is induced systemically in plants by the use of biotic or abiotic agents without any modification of the plant genome, occurring non-specific way, by activating genes coding for various plant defense responses. Chitosan is a polymer derived from the deacetylation of chitin, which is found in large quantities in crustacean shell, and studied with the potential to control plant pathogens, both by its direct fungistatic action, as the ability to induce protection of plants, indicating the presence of molecules of elicitoras characteristics. Three experiments with objective of evaluating the potential of chitosan in the seedling resistance induction were developed, beet (Beta vulgaris) seeds, cucumber (Cucumis sativus) seeds and tomato (Solanum lycopersicum) seeds, and the control of Fusarium sp., Rhizoctonia solani K¨uhn e Pythium sp. in vitro conditions. The experimental design was completely randomized, with four replications. Beet seeds, tomato and cucumber were submerged in chitosan solution for 20 minutes, in concentrations of 0.25, 0.5, 1 and 2% in the control and distilled water. Seeds were sown in trays containing Plantmax Florestalr substrate sterilized and inoculated with Fusarium sp., Rhizoctonia solani K¨unh and Pythium sp., respectively for the three cultures. The experiment was conducted for 14 days in growth chamber with controlled temperature (25 C 2 C), light (12 hour photoperiod) and humidity (70% 10%). The evaluations were seed emergency, seedling damping-off, seedling length, fresh weight and activity of the enzymes phenylalanine amˆonia-liase (PAL), chitinase and b-1,3-glucanase. It was also rated the mycelial growth of Fusarium sp., Pythium sp. and R. solani on P.D.A. (Potato-Dextrose and Agar) culture medium containing chitosan at the same concentrations evaluated in seeds. For beet growing, seed treatment with chitosan presented higher emergence and the length of the seedlings, and reduced the percentage of tipping. Treatment with chitosan activated the systemic acquired resistance with expression of chitinase and b-1,3-glucanase enzymes. For the tomato crop in chitosan concentration of 0.25% favored the emergency of seedlings, reduced the incidence of tipping and activated the PAL enzymes, chitinase and b-1,3-glucanase. In cucumber on the concentration of up 0.5% favored seedlings emergence and reduces the incidence of tipping. Chitosan activated the PAL enzymes and b-1,3-glucanase. Chitosan also presented fungistatic action on the initial growth of Pythium sp. and R. solani in vitro conditions, however, such action did not prevail until the end of the experiment. To Fusarium sp. the concentration of chitosan resulted in the reduction of mycelial growth in vitro.

Orientador: José Osmar Gaspar / Banca: Hugo Kuniyuki / Banca: Fátima Pereira de Souza / Resumo: O lenho estriado de rupestris ou cascudo (Rupestris stem pitting - RSP), um dos componentes do Complexo do lenho rugoso ("Rugose wood" - RW), é considerado uma das doenças de videira transmitidas por enxertia de grande relevância econômica para a viticultura. O Rupestris stem pitting associated virus - RSPaV foi associado com a doença do lenho estriado ou cascudo, sendo classificado como espécie do gênero Foveavirus, pertencente a família Flexiviridae. No presente trabalho, descrevem-se o sequenciamento do gene da proteína capsidial (CP) de um isolado brasileiro do RSPaV (RSPaV-SP), sua expressão em Escherichia coli, purificação da proteína capsidial recombinante e a produção de anti-soro policlonal em coelho. O sequenciamento do gene resultou em uma seqüência de 780 nucleotídeos e 259 aminoácidos deduzidos com massa molecular estimada de 28 kDa. A análise filogenética, entre a seqüência correspondente à CP do RSPaV-SP e outras variantes do mesmo vírus, evidenciou a formação de 4 grupos distintos, sendo o isolado brasileiro incluído no grupo da variante BS do RSPaV. A proteína capsidial recombinante foi purificada em coluna de afinidade e apresentou massa molecular estimada de 32kDa (4kDa da seqüência do vetor e 28kD da CP do RSPaV-SP). O anti-soro produzido apresentou-se específico na detecção da proteína capsidial recombinante purificada por "Western-blot", sem reação com proteína heteróloga a partir da diluição 1:4000. Nesta diluição, o anti-soro foi efetivo na detecção do vírus em extratos de plantas infectadas, sendo que nenhuma reação foi observada com extratos de plantas sadias. Considerando-se que este vírus apresenta variações de concentração na planta durante as estações do ano, e que, os testes sorológicos foram realizados durante a estação de baixa concentração do vírus, os resultados ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rupestris stem pitting (RSP), a component of the rugose wood (RW) complex, is one of the most graft-transmissible grapevine virus diseases with great economic importance for viticulture . Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), genus Foveavirus within the family Flexiviridae, has been associated with this disease. This work reports the sequencing of the coat protein (CP) gene of a brazilian an isolate of RSPaV (RSPaV-SP), its expression in Escherichia coli, purification of the recombinant coat protein and production of a polyclonal antiserum in rabbit. CP gene was found to be 780nt long, with a 256 deduced amino acid sequence encoding a predicted protein of 28 kDa. In filogenetic analysis, with RSPaV-SP and other variants of the virus, four groups were found and the sequence of RSPaV-SP showed the highest identity with the variant RSPaV-BS. The recombinant coat protein was purified by affinity chromatography and showed a molecular weight of 32kDa (4 kDa from a small vector sequence plus 28 kDa for the CP of RSPaV-SP). The antiserum proved specific for detection of the recombinant protein by Western Blot, and did not react with heterologous proteins starting at a dilution of 1:4000. At this dilution, the antiserum was effective in the virus detection of leaf extracts of infected plants and no reaction was observed with extracts from healthy grapevines. Considering that the virus is found at low concentrations in the plants during the seasons of the year, the results obtained so far were highly satisfactory for RSPaV detection. Serological methods have advantages over the biological indexing method, since they are cheaper and can be used in large-scale tests such as ELISA. Experiments using the ELISA technique were not successful. Purification of the native recombinant protein would be an alternative more efective to detect the virus using these technique. / Mestre

Orientador: Marcos Antonio Machado / Resumo: A morte súbita dos citros (MSC) causou a morte ou erradicação de aproximadamente quatro milhões de plantas de laranja doce na principal região citrícola do Brasil. Embora sua etiologia ainda não esteja completamente resolvida, seus sintomas e distribuição (especial e temporal) indicam uma provável doença viral. Trabalhos anteriores associaram a MSC ao vírus da tristeza dos citros (CTV) e ao CSDaV (Citrus sudden death-associated virus), no entanto, os resultados obtidos destes trabalhos não são conclusivos. Afim de estudar as populações de vírus presentes em plantas de citros afetadas pela MSC, este trabalho realizou uma análise comparativa, através do sequenciamento de alta performance do transcriptoma e dos pequenos RNAs de plantas sintomáticas e assintomáticas para MSC. Os dados revelaram uma infecção viral mista, incluindo o CTV como vírus mais predominante, seguido do CSDaV, um pararetrovírus endógeno de citros (CitPRV) e dois possíveis novos vírus, putativamente denominados de Citrus jingmen-like virus (CJLV) e Citrus virga-like virus (CVLV). As análises de correlação com a MSC indicaram uma provável associação de plantas sintomáticas com o CitPRV, enquanto que os dois novos vírus mostraram estar mais associados com plantas assintomáticas. A associação mais evidente foi observada entre plantas sintomáticas e um genótipo específico de CSDaV, o que nos conduziu a um estudo mais específico de variabilidade genética de 31 isolados de CSDaV, obtidos de plantas MSC-sintomática... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Wagner Bettiol / Banca: Marcelo Augusto Boechat Morandi / Banca: Eugenio Alfredo Sanfuentes Von Stowasser / Banca: Miguel Angel Dita Rodriguez / Banca: Carlos Gilberto Raetano / Resumo: Os resíduos orgânicos e agentes de biocontrole podem constituir em alternativas no controle dos fitopatógenos habitantes do solo. O trabalho teve por objetivo estudar o controle de Fusarium spp. com resíduos orgânicos e agentes de biocontrole. Inicialmente foi avaliado o efeito de hidrolisado e emulsão de peixe, nas concentrações de 0, 10, 20, 30, 40 e 50% do volume de água para atingir a capacidade de campo do solo; e de alga, casca de camarão, concha de marisco e caroço de abacate moídos, nas concentrações de 0, 1, 2, 3, 4 e 5% v/v, na germinação de microconídios de Fusarium oxysporum f. sp. lactucae, em casa de vegetação. Enquanto a emulsão e o hidrolisado de peixe reduziram a germinação de microconídios do patógeno, os demais resíduos não apresentaram efeito. Também foi avaliado o efeito de resíduos de alga, concha de marisco, casca de caranguejo e repolho triturado fresco, nas concentrações de 0, 1, 2 e 4% v/v, sobre a germinação de microconídios de Fusarium circinatum em condições controladas, e associado ou não, a Trichoderma harzianum, no controle da fusariose (F. circinatum) em plantas de Pinus radiata mantidas em casa de vegetação. Nenhum resíduo reduziu a germinação de microconídios de F. circinatum ou a doença em casa de vegetação. No terceiro estudo foi avaliado o efeito de hidrolisado de peixe nas concentrações de 0, 5, 10, 15 e 20% do volume de água necessário para atingir a capacidade de campo, a partir do solo seco, associados ou não a T. harzianum (Iblf 006) ... / Abstract: The organic residues and biocontrol agent might be alternative in the control of soilborne plant pathogens. This work aimed to study the control of Fusarium species with organic residues and biocontrol agents. First, the effect of fish hydrolyzed and fish emulsion was evaluated, at concentrations of 0, 10, 20, 30, 40 and 50% of volume of water required to reach the water retention capacity of the soil; and the seaweed, shrimp shells, clamshell and grounded avocado seeds at concentration of 0, 1, 2, 3, 4 and 5% v/v in the microconidia germination of Fusarium oxysporum f. sp. lactucae in greenhouse. Fish emulsion and fish hydrolyzed reduced the microconidia germination and none of the other residues presented effect. Also, it was evaluated the effect of seaweed, clamshell, crab shell and fresh triturated cabbage, at concentrations of 0, 1, 2 and 4% v/v, in the germination of Fusarium circinatum microconidia under controlled conditions and associated or not with Trichoderma harzianum in Pinus radiata to control the disease caused by F. circinatum in greenhouse. Neither residue reduced the F. circinatum microconidia germination or the disease in greenhouse. In the third study the effect of fish hydrolyzed was evaluated at concentration of 0, 5, 10, 15 and 20% of volume of water to required to reach the water retention capacity of the soil, from dry soil, associated or not with T. harzianum (Iblf 006) and Bacillus subtilis + Bacillus licheniformis in the control of F. oxysporum ... / Doutor

O mofo cinzento é causado pelo fungo Botrytis cinerea (Pers.: Fr.), causador de grandes perdas econômicas em várias culturas. Este patógeno é de difícil controle, devido à ampla gama de hospedeiros, sua atividade saprófita e por formar estruturas de resistência (escleródios). Uma das formas de controle deste patógeno é a utilização de produtos químicos, no entanto, principalmente na pós-colheita de frutos, a tolerância por resíduos químicos nos alimentos, é cada vez menos desejável do ponto de vista ecológico e de saúde pública. Os tratamentos alternativos, como a utilização de extratos de plantas, vêm sendo pesquisados na fitopatologia, para reduzir o uso dos fungicidas sintéticos. A canola (Brassica napus) é uma planta que possui compostos biocidas, com potencial de controle de pragas e doenças. Este trabalho teve como objetivos avaliar o efeito de diferentes extratos da canola (alcoólico, macerado, aquoso sem tempo de reserva e infusão) no controle de Botrytis cinerea in vitro e em pós-colheita de morangos. Foram realizados dois experimentos in vitro, sendo um para avaliar o crescimento micelial e outro a germinação de conídios. O delineamento experimental para os dois experimentos foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4 x 5, sendo o fator modos de extração de extratos e concentrações (0, 3, 6, 9 e 12%), em 4 repetições. No ensaio de crescimento micelial, a unidade experimental foi uma placa de Petri, e um tubo de ensaio no teste de germinação de conídios. Em pós-colheita foram testados os quatro tipos de extratos na concentração de 16%. O delineamento foi inteiramente casualizado, com 4 repetições por tratamento, sendo a parcela composta por 10 frutos/bandeja. Os parâmetros físico-quimicos avaliados foram podridões, perda de massa, firmeza de polpa e acidez titulável. As análises bioquímicas avaliadas foram proteínas totais, antocianinas e flavonóides, e a atividade da enzima fenilalanina amônia-liase (FAL) e peroxidases. Os resultados obtidos permitiram concluir que houve redução do crescimento micelial e da germinação de conídios, em função das concentrações, mas não ocorreram diferenças entre os extratos. A maior eficiência dos extratos ocorreu na concentração de 8,31%, na avaliação com 96horas. Para a germinação o comportamento foi linear decrescente, ou seja, o aumento das concentrações influenciou na menor germinação dos conídios. Os extratos: alcoólico, maceração e infusão reduziram as podridões causadas por B. cinerea em pós-colheita de morangos. Os extratos atuaram na alteração do teor de acidez dos frutos, e no comportamento das peroxidases, mas não apresentaram efeito sobre sólidos solúveis totais (SST), firmeza de polpa, perda de massa, antocianinas, flavonoides,e atividade da FAL. Os resultados obtidos neste trabalho, comprovam o potencial da canola no controle do mofo cinzento em pós-colheita de morangos, bem como do fungo Botrytis cinerea. / The gray mold is caused by the fungus Botrytis cinerea (Pers.: Fr.), causer of great economic losses in various cultures. This pathogen is difficult to control, due to the wide range of hosts, its saprophytic activity and by forming structures of resistance (esclerodios). One of the ways to control this pathogen is the use of chemical products, however, mainly in post-harvest fruit, tolerance by chemical residues in foods is increasingly less desirable from an ecological and public health point of view. The alternative treatments, such as the use of plant extracts, are being probed in phytopathology, to reduce the use of synthetic fungicides. The canola (Brassica napus) is a plant that has biocidal compounds, with potential to control pests and diseases. This study aimed to evaluate the effect of different extracts of canola (alcoholic, macerate, aqueous without reserve time and infusion) in the control of Botrytis cinerea in vitro and in post-harvest of strawberries. Two experiments were conducted in vitro, being one to evaluate the mycelial growth and another the germination of conidia. The experimental design for the two experiments was completely randomized, in a 4 x 5 factorial scheme, and the modes of extraction of extracts and concentrations (0, 3, 6, 9 and 12 %), in 4 repetitions. In the trial mycelial growth, the experimental unit was a Petri dish, and a test tube in germination test of conidia. In post-harvest were tested four types of extracts at a concentration of 16 %. The experimental design was completely randomized, with 4 repetitions per treatment, being the plot composed by10 fruits/tray. The physico-chemical parameters evaluated were rotting, weight loss, firmness and titratable acidity. The biochemical analyzes were evaluated total proteins, anthocyanins and flavonoids, and the activity of the enzyme phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and peroxidases. The results obtained allowed us to conclude that there was a reduction of mycelial growth and germination of conidia, as a function of the concentrations, but there were no differences between the extracts. The greater efficiency of extracts occurred at a concentration of 8.31 %, in evaluation with 96 hours. For germination, the behavior was decreasing linear, in other words, the increase of concentrations influenced the lower germination of conidia. The extracts: alcoholic, maceration and infusion reduced the rot caused by B. cinerea in post-harvest of strawberries. The extracts operate in fruits acidity modification, and in the behavior of peroxidases, but they had no effect on total soluble solids (TSS), pulp firmness, weight loss, anthocyanins, flavonoids,and activity of the PAL. The results obtained in this work, have demonstrate the potential of canola in the control of gray mold on post-harvest of strawberries, as well as the fungus Botrytis cinerea.

Com o crescimento populacional acelerado e a diminuição das áreas para cultivo, o aumento da produtividade de gêneros alimentícios de todos os tipos é essencial para o atendimento da população mundial, no entanto as perdas desde o momento de colheita até a chegada ao consumidor limita a oferta de frutas ao consumidor. Estas perdas na pós-colheita de maçã, morango e pêssego, são na sua maioria causadas por fitopatógenos causando podridões. Estas podridões são causadas por vários fungos, dentre estes estão o Colletotrichum sp., causador da podridão amarga em maçãs, Botrytis cinerea agente causador do mofo cinzento em morangos e Monilinia fructicola em pêssegos o qual causa a podridão parda. Usualmente o controle destes fungos é efetivado com a utilização de fungicidas, no entanto, a utilização de químicos neste processo preocupa os consumidores, pois, podem existir resíduos nas frutas e no ambiente. Desta forma métodos alternativos como a indução de resistência podem ser alternativas para o controle dos microrganismos causadores de doenças na pós-colheita de frutos. A indução de resistência consiste em estimular através de moléculas elicitoras (indutoras) as defesas vegetais, ou seja, a síntese de composto que atuem diretamente sobre o fitopatógeno como as proteínas-RPs, ou que promovam o reforço estrutural nos tecidos adjacentes ao sítio de infecção do fungo. A quitosana retirada da carapaça de crustáceos é uma alternativa de molécula elicitora de baixo custo e sem riscos ao consumidor que vem sendo utilizada na indução de resistência em frutos na pós-colheita. Esse biopolímero apresenta a capacidade de desencadear as respostas defensivas dos frutos; maçã, morango e pêssego contra os fungos, Colletotrichum sp., Botrytis cinerea e Monilinia fructicola respectivamente. Foram desenvolvidos experimentos na Universidade Tecnológica Fededral do Paraná durante os anos de 2013 e 2014, com objetivo de verificar a capacidade da quitosana de induzir as defesas dos frutos da maçãs, morangos e pêssegos em pós-colheita, bem como , a atividade fungistática sobre os fungos Colletotrichum sp., Botrytis cinerea e Monilinia fructicola em condições in vitro. Para os experimentos com os frutos o indutor foi aplicado nas concentrações 0,25; 0,5; 1,0 e 2,0% e a testemunha (água destilada), os tratamentos foram organizados em delineamento inteiramente casualizado com quatro repetições de 20 frutos de maçã, 20 frutos de morango e 15 frutos de pêssego. Os frutos foram selecionados e padronizados, sendo em seguida as maçãs e os pêssegos submetidos ao tratamento por imersão em soluções de quitosana, já os morangos foram tratados pulverizando a solução contendo quitosana diretamente sobre os frutos. Após 24horas, os frutos foram inoculados, com uma suspensão contendo conídios do patógeno Colletotrichum sp. nas maçãs, B. cinerea em morangos e M. fructicola em pêssegos na concentração 5.10-3 conídios/ml diretamente sobre os frutos com auxílio de um borrifador e de uma micropipeta. Após a realização dos tratamentos os frutos foram acondicionados em B.O.D. a 26 ± 1 °C para maçãs e pêssegos e a 10 ± 1 °C para os morangos. Foram realizadas avaliações periódicas após a implantação e no término dos experimentos para os seguintes parâmetros, físicoquímicas (perda de massa, sólidos e solúveis totais, acidez titulável, firmeza de polpa, incidência de podridões) e bioquímicas (proteínas, açúcares redutores, açúcares totais, antocianinas, flavonoides, e a atividade das enzimas fenilalanina mônia-liase(FAL), peroxidases, quitinases e β-glucanases). Nos experimentos in vitro avaliou-se o efeito da quitosana sobre os patógenos (Colletotrichum sp, B. cinerea e M. fructicola) Os fungos previamente cultivados em placas puras forma transferidos para placas contendo meio B.D.A. com as concentrações de quitosana (0; 0,25; 0,5, 1 e 2%). Sendo após 24 e 48 horas realizadas as medições perpendiculares do diâmetro da colônia pra verificar o crescimento micelial. Os dados dos experimentos foram submetidos à análises de normalidade e de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey e de regressão (p=0,05), com auxílio do software Assistat. Os resultados demonstraram a interferência da quitosana sobre a indução de resistência ao controle da incidência da podridão amarga em pós-colheita de maçãs Gala, ativando a PRPs B-1-3 Glucanase e no controle de Colletotrichum sp in vitro com ação fungistática. Já em morango o indutor controlou o mofo cinzento ativando as peroxidases e quitinases e β-1-3-Glucanase e diretamente o fungo B. cinerea in vitro. Em pêssegos a atuação foi sobre a manutenção da qualidade dos frutos, na indução ativando os genes da quitinase, β 1-3 Glucanase e da mesma forma em in vitro sobre M. fructicola. Conclui-se então que a quitosana apresenta um grande potencial na indução de resistência de frutos na pós-colheita, ativando as defesa contra fungos fitopatogênicos e diretamente sobre os mesmo com atividade fungistática e fungitóxica in vitro. Sendo que nos frutos de maçã cv. Gala atuou diretamente sobre os parâmetros físico-químicos reduzindo a perda de massa, mantendo a firmeza de polpa e reduzindo capacidade de esporulação de Colletotrichum sp. confirmando também o efeito indutor pela ativação da enzima β-1,3 glucanase e a atividade fungistática sobre Colletotrichum sp. in vitro com redução do crescimento micelial. Já em morangos cv. Camarosa, ativa a síntese das proteínas-RPs quitinases e β-1-3 glucanases contra o mofo cinzento, mantém a firmeza de polpa em níveis mais elevados e interfere no metabolismo dos açúcares totais e redutores e das flavonoides. E ainda atua diretamente sobre B. cinerea diminuindo crescimento micelial in vitro em relação controle. Nos frutos de pêssego a quitosana atua na indução de resistência a podridão parda em pós-colheita de pêssegos “delicioso” ativando as enzimas FAL, quitinase e β-1-3-glucanases. E Atua sobre M. fructicola in vitro com ação fungistática. / With the rapid population growth and the reduction of areas for cultivation, the increased productivity of foods of all kinds is essential to meet the world's population demand. However post-harvest losses from the time of harvest until the arrival to the consumer, limits the supply of fruits to the consumer. The losses in the post-harvest of apples, strawberries and peaches, caused by the incidence of rot led by phytopathogenic fungi, is responsible for most of the losses. These rots are caused by various fungi, among these are the Colletotrichum sp., cause of bitter rot on apples, Botrytis cinerea causative agent of gray mold on strawberries and M. fructicola on peaches which causes brown rot. These phytopathogens are fungi with high ability to spread infection and therefore cause serious damage to fruits, generating losses in post-harvest. Usually the fungi control is conducted with the use of fungicides. However, the use of chemicals in the process concerns consumers, since there may be residues in fruits and the environment. Therefore, alternative methods like the resistance induction can be used to control the disease-causing microorganisms in the postharvest fruits. The induction consists on stimulating the plants defenses through (inducing) elicitor molecules, specifically the synthesis of compounds that act directly on the pathogen as phenols, protein-RPs, or producing structural reinforcement of tissues adjacent to the site of infection of the fungus. Currently, chitosan extracted from crustacean shells is an alternative elicitor molecule of low cost and no risk to the consumer that has been used in the induction of the resistance in postharvest fruits. This biopolymer has the ability to trigger the defensive responses of the fruits; apple, peach, and strawberry against fungi Colletotrichum sp., Botrytis cinerea and Monilinia fructicola, respectively. The inductor was applied at concentrations of 0.25, 0.5; 1.0 and 2.0% and on the control (distilled water). The treatments were arranged in a completely randomized design with four replications of 20 apple fruits, 20 strawberry fruits and 15 peach fruits. The fruits were selected and standardized, and subsequently the apples and peaches were subjected to treatment by immersion in solutions of chitosan, and strawberries were treated by spraying the chitosan-containing solution directly onto the fruits. After 24 hours, the fruits were inoculated with a solution containing conidia of the phytopathogen Colletotrichum sp. on apples, B. cinerea on strawberries and M. fructicola on peaches, in concentrations of [5.10]^(-3) conidia/ml directly on the fruit, with the help of a spray bottle or with a micropipette in the case of apples, directly inoculating the solution in an wound to the 2 mm bark. After completion of the treatments, the fruits were placed in BOD at 26 ± 1 ° C for apples and peaches, and 10 ± 1 ° C for strawberries, and evaluated after 24 hours to determine the following parameters; weight loss, physical and chemical analysis (solids and total soluble, titratable acidity, firmness, decay incidence) and biochemical (protein, reducing sugars, total sugars, anthocyanins, flavonoids, FAL, peroxidase, chitinase and β-glucanase). An initial sample of the fruits was taken to carry out the initial analyzes, using this data as comparative parameters. In a second experiment, the fungus (Colletotrichum sp, Botrytis cinerea and M. fructicola) were grown in the middle of culture containing the different concentrations of chitosan, to verify the existence of fungitoxic or fungistatic effect of the biomolecule in vitro. The fungi were previously cultivated in clean plates, and subsequently transferred to plates containing PDA medium with the chitosan concentrations (0, 0.25, 0.5, 1 and 2), and after 24 and 48 hours, were performed perpendicular measurements of the diameter of the colony to verify its mycelial growth. Data from experiments were submitted to analysis of normality and variance, and measures were compared by Tukey test and regression test (p = 0.05), with the assistance of Assistat software. The results demonstrated the interference of chitosan on the induction of resistance to control the incidence of bitter rot in postharvest Gala apple, activating the PRPs B-1-3 glucanase and control of Colletotrichum sp in vitro with fungistatic action. On strawberries, the inductor controlled the gray mold by activating the peroxidase, chitinase and β-1-3-glucanase, directly under the fungus B. cinerea in vitro. On peaches, the action was on the maintenance of fruit quality, on the induction, activating genes of chitinase, β 1-3 glucanase, and on the same way, on the in vitro of M. fructicola. Therefere, it has been concluded that chitosan has great potential in the induction of fruit resistance in post-harvest, activating the defense against pathogenic fungi, and directly over the latter with fungistatic activity and in vitro fungitoxic activity.