Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-14Bitstream added on 2014-06-13T20:59:23Z : No. of bitstreams: 1 garcia_f_me_araiq.pdf: 2358383 bytes, checksum: cddacd0254ddf476a84efe742b9370b6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho visou o estudo químico da Arrabidaea brachypoda, uma espécie pouco estudada, possuindo somente um registro de trabalho sobre o seu estudo químico na literatura. Primeiramente foi feito um trabalho de desreplicação dos extratos etanólicos dos caules, das folhas e das inflorescências em HPLC-DAD usando padrões de xantonas isoladas da A. samydoides. Observou-se que a espécie estudada não possuia xantonas como seus principais constituintes. A fração AcOEt do extrato etanólico das folhas forneceu dois flavonóis derivados de quercetina inéditos: arrabidosídeo A e arrabidosídeo B, além dos flavonóis rutina e isoquercitrina. A atividade antioxidante desses flavonóis frente ao radical DPPH foi avalidada e os valores de CI50 foram: isoquercetrina 15,10 μM, rutina 4,88 μM, arrabidosídeo A 8,95 μM e arrabidosídeo B 5,34 μM. Além disso, essas substâncias foram ensaiadas para a atividade inibitória de mieloperoxidase (MPO). Os valores de CI50 para essa atividade foram: isoquercetrina 3,75 nM, rutina 3,60 nM, arrabidosídeo A 1,80 nM e arrabidosídeo B 4,82 nM e mostraram o potencial antiinflamatório desses flavonóis. / The scope of this work was the phytochemical study of Arrabidaea brachypoda with only one previous chemical study reported in the literature. Initially a dereplication method was applied to the barks, leaves and flowers ethanolic extracts using xanthones previously isolated from A. samydoides as standards. The crude extract of A. brachypoda did not show xanthones as major constituents. The AcOEt fraction obtained from leaves ethanolic extract yielded two new falvonols: arrabidoside A and arrabidoside B, along with isoquercitrin and rutin. The antioxidant activity of these flavonols was evaluated using DPPH and IC50 values obtained were: isoquercitrin 15,10 μM, rutin 4,88 μM, arrabidoside A 8,95 μM and arrabidoside B 5,34 μM. Inhibitory activity of mieloperoxidase enzyme of the four flavonols was also evaluated. The values of IC50 obtained were: isoquercitrin 3,75 nM, rutin 3,60 nM, arrabidoside A 1,80 nM and arrabidoside B 4,82 nM and showed de anti-inflammatory potential of these flavonols.

Introducción: La función de la cadena respiratoria es importante para la homeostasis. Objetivos: Comprobar el efecto energético y hepatoprotector que puede producir el extracto acuoso de Baccharis lanceolata H.B.K. en la cadena respiratoria. Diseño: Experimental. Lugar: Facultades de Farmacia y Bioquímica, Medicina - Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Material biológico: Ratas albinas, hojas de la planta. Intervenciones: En relación al efecto energético se ha evaluado la actividad respiratoria en mitocondria de hígado de rata a través del control respiratorio, actividad de la enzima ATPasa mediante hidrólisis del ATP y actividad Citocromo oxidasa; hepatoprotección en ratas administrándoles el extracto vía oral 14 mg/Kg. Las mitocondrias de hígado fueron obtenidas por centrifugación diferencial a 4oC. Resultados: Actividad respiratoria de los controles con los tratados fueron para el 1º mes 13.31 y 19.08, 2º mes 14.55 y 21.18 y 3º mes 15.15 y 23.63 micromoles de O2/mg de proteína (p < 0.001). Actividad Citocromo oxidasa Control 0.333, tratados en el 1º mes 0.403, 2º mes 0.547 y 3º mes 0.613 micromoles/g de proteína (p< 0.001). Actividad ATPasa: Control 57.10, tratadas 1º mes 64.98, 2º mes 67.95 y 3º mes 69.50 micromoles de P/mg de proteína (p < 0.001). GPT: Control 28.33 U/l, 1º mes 25.06 U/l, 2º mes 12.0 U/l y 3º mes 30.5 U/l (p < 0.001). GOT: Control 35.83 U/l, 1º mes 25.61 U/l, 2º mes 12.50 U/l y 3º mes 37.16 U/l (p < 0.001). Principales medidas de resultados: Valores medios, Porcentajes de variación. Conclusiones: Se ha demostrado que el extracto acuoso aumenta la actividad del control respiratorio, enzima ATPasa, enzima Citocromo c oxidasa; siendo la hepatoprotección dependiente del tiempo. Palabras clave: Mitocondrias, ATPasa, Citocromo c oxidasa, Control respiratorio Transaminasas. / *** Introduction: The function of the respiratory chain is important for homeostasis. Objectives: To test the energy and hepatoprotective effect which can produce the aqueous extract of Baccharis lanceolata HBK in the respiratory chain. Design: Experimental. Location: Faculty of Pharmacy and Biochemistry, Medicine - National University of San Marcos, Lima, Peru. Biological material: albino rats, plant leaves. Interventions: In relation to the energy effect was evaluated respiratory activity in rat liver mitochondria via the respiratory control enzyme activity by hydrolysis of ATP ATPase and cytochrome oxidase activity ; hepatoprotection extract in rats orally administering 14 mg / Kg Liver mitochondria were obtained by differential centrifugation at 4oC . Results: Respiratory Activity of controls were treated for 1 month 13.31 and 19.08, 14.55 and 2nd month 3rd month 21.18 and 15.15 and 23.63 micromoles of O2/mg protein (p < 0.001). Cytochrome Oxidase Activity Control 0.333 , treated 0.403 1 month , 2 months and 3 months 0.547 0.613 micromoles / g of protein ( p < 0.001 ) . ATPase activity: Control 57.10, 64.98 treated 1 month, 2 months and 3 month 67.95 69.50 micromoles of P / mg of protein ( p < 0.001 ) . GPT: Control 28.33 U / l, 1 month 25.06 U / l, 2 months 12.0 U / l 3rd month 30.5 U / l ( p < 0.001 ) . GOT: Control 35.83 U / l, 1 month 25.61 U / l, 2 months 12.50 U / l 3rd month 37.16 U / l (p < 0.001). Main outcome measures: Mean values , percentages of variation. Conclusions: It has been shown that the aqueous extract increases the activity of respiratory control ATPase enzyme, cytochrome c oxidase enzyme, with the dependent time hepatoprotection . Keywords: Mitochondria , ATPase , Cytochrome c oxidase , Respiratory control Transaminases .

Aísla los principios activos fenólicos con actividad anticoagulante sobre el plasma humano y desarrolla su caracterización bioquímica Oenothera rosea, para lo cual se realiza el extracto alcohólico y se detecta la presencia de fenoles, flavonoides, saponinas, glicósidos y tanino. A partir del extracto alcohólico se obtiene la fase acuosa y se realiza una CCF sobre celulosa obteniéndose 9 fracciones, 5 de las cuales resultan positivas para fenoles y flavonoides, y dos de éstas muestran actividad anticoagulante sobre plasma humano citratado (PHC), fibrinógeno bovino (FB) y disminuyen la actividad amidolítica (BApNA) que presentan la Trombina bovina (TB) y el veneno de L.muta (V). Los porcentajes de inhibición de la fase acuosa son 95,74 (TB-FB); 90,08 (V-FB); 63,58 (V-PHC) y 92,65 (V-BApNA). Para la fracción F-2: 58,57%,10,67%, 34,14%, y 88,59 %; F-5: 96,79%, 36,27%,70,69% y 92,92%, para cada uno de los sistemas, en el orden indicado para la primera muestra. Por técnicas de espectrofotometría UV-Vis y reacciones de desplazamiento propuestos por Mabry et al.(1970) se identifica los 5 flavonoides y se propone las siguientes estructuras: F-2: 3',4',5, trihidroxi-3,7-O-digli flavonol ; F-3: 3',4',5,7-tetrahidroxi-3-O-rhamno-glucosil flavonol (rutina), F-4: 3',4',5,7- tetrahidroxi-3-metóxido flavonol, F-5 : 3',4',-dihidroxi-7-O-gli-5 metóxido flavona y F-6: 5,6,7-trihidroxi flavona (Baicaleina). Los resultados indican que 3',4',5, trihidroxi-3,7-O-digli flavonol y 3',4',-dihidroxi, 7-O-gli, 5 metoxi flavona son los flavonoides glicosilados que inhiben la coagulación siendo F-5 el más potente. El mecanismo de acción no es conocido aún, pero ambos podrían con facilidad donar un H ácido del anillo B a la His 57 del centro activo de las enzimas y formar enlace de H con la Ser inhibiendo la actividad enzimática y formando un complejo flavonoide-enzima.

Memoria para optar al título de Químico / En este trabajo se midió y evaluó la reactividad de los flavonoides Morina y Quercetina frente a oxígeno molecular singulete, en presencia de los iones metálicos Ca+2 y Cu+2, mediante determinaciones de las constantes de velocidad de reacción química entre los complejos formados y oxígeno excitado, y de las constantes de desactivación total de oxígeno molecular singulete. Mediante el método de Job se determinó la estequiometría de los complejos Morina – Cu y Quercetina – Cu, siendo 2:1 y 1:1 respectivamente. Los complejos Morina – Ca y Quercetina – Ca presentan estequiometría 1:1, determinada por el método de Benesi – Hildebrand. Los valores obtenidos para las constantes de asociación entre los flavonoides y los iones metálicos muestran que los complejos formados con Cu+2 (KM-Cu=1,80 x 109 M-2 y KQ-Cu=22076 M-1) presentan valores mayores a los formados con Ca+2 (KM-Ca=322,4 M-1 y KQ-Ca=20,24 M-1), y los complejos formados por Quercetina presentan valores menores, en comparación a los formados por Morina frente a un mismo metal. Las constantes de velocidad de reacción química entre los complejos y oxígeno molecular singulete, se obtuvieron mediante el método de fotólisis estacionaria. Los valores obtenidos muestran un aumento en la reactividad, el cual podría deberse al aumento de la densidad electrónica en los sitios reactivos del flavonoide, cuando este se encuentra asociado al ion metálico. El complejo Morina – Cu no presenta un aumento significativo. En general, el aumento de la reactividad es mayor cuando los flavonoides forman complejos con Ca+2. Las constantes de desactivación total de oxígeno molecular singulete por complejos de flavonoides, se determinaron observando el decaimiento de la luminiscencia del 1O2. En los complejos medidos, se observó que la desactivación total es mayor a la reactividad química, entre tres a cuarenta veces aproximadamente, lo cual indica que la desactivación física es predominante. Por otra parte, los valores de la constante para los diferentes complejos, es siempre mayor a la del flavonoide sin complejar. Este comportamiento es relevante cuando se considera el efecto antioxidante de los flavonoides en sistemas de interés biológico / In this work, the reactivity of flavonoids Morin and Quercetin towards singlet oxygen was measured and evaluated in the presence of Ca+2 and Cu+2 metal ions, by measuring both, the chemical reaction rate constants between the metal – flavonoid complexes and excited oxygen, and the total deactivation constants of singlet oxygen. Using the Job’s method, the stoichiometry of Morin – Cu and Quercetin – Cu complexes was determined, being 2:1 and 1:1, respectively. Morin – Ca and Quercetin – Ca complexes have 1:1 stoichiometry, which were determined by the Benesi – Hildebrand method. Values obtained for the association constant between flavonoids and metal ions show that the complexes formed with Cu+2 (KM-Cu=1,80 x 109 M-2 and KQ-Cu=22076 M-1) have higher values than those formed with Ca+2 (KM-Ca=322,4 M-1 and KQ-Ca=20,24 M-1). In addition, results show that the complexes formed by Quercetin have lower values, in comparison to those formed by Morin with the same metal. Chemical rate constant for reaction between complexes and singlet oxygen, were obtained by the steady – state photolysis method. Values show an increase in the reactivity of complexes when compared the flavonoid. This result can be explained in terms of electronic density in the reactive sites of the flavonoid, when it is associated whit the metal ion. However Morin – Cu complex does not show a significant increase. In general, the increase of the reactivity is greater when the flavonoids form complexes with Ca+2. The total quenching rate constants of singlet oxygen by flavonoid complexes were determined by observing the decay of 1O2 luminescence. From this experiment was observed that the total deactivation rate constant is greater than the chemical reaction rate constant, between the 3 – fold to 40 – fold approximately, indicating that the physical deactivation is the predominant. Moreover, the total rate constant values all complexed flavonoid is always greater than the rate constant for uncomplexed flavonoid. This behavior is relevant when considering the antioxidant effect of flavonoids in systems of biological interest

Fabaceae é a terceira maior família botânica, apresentando grande importância ecológica, ornamental e econômica. Por sua grande diversidade de espécies está dividida em seis sub-famílias Caesalpinioideae, Cercidoideae, Detarioideae, Dialioideae, Duparquetioideae e Papilionoideae. Papilionoideae é considerada um grupo monofilético e nesta está inserida Glycine max (L.) Merr., espécie de importância econômica alimentícia (grãos, farelo, óleo) e medicinal. A soja tem seu centro de origem na China, sendo que a soja moderna foi modificada por cruzamentos entre duas espécies selvagens, por cientistas ainda na antiga China. É considerada um alimento completo, pois contém proteínas, gorduras, óleos, aminoácidos essenciais e metabólitos secundários, tais como isoflavonas e outras substâncias fenólicas, importantes antioxidantes naturais. A liberação do plantio da soja se deu com a Lei 11.105 de 24 de março de 2005, levando a um aumento exponencial de sua produção no país. Seu consumo ocorre em todo o mundo, e sua produção aumenta a cada ano, pois também vem sendo utilizada como fonte para a produção de biocombustível. Atualmente, sabemos que a poluição atmosférica e outras atividades humanas contribuem para o aumento de poluentes na atmosfera e consequente impacto na camada de ozônio. A radiação ultravioleta é dividida em três: ultravioleta A (315 a 400 nm), ultravioleta B (280 a 315 nm) e ultravioleta C (200 e 280 nm). Por conta disso, estudos que visam avaliar como a radiação ultravioleta pode interferir no metabolismo vegetal podem contribuir para o conhecimento mais aprofundado sobre como espécies cultivadas são afetadas por esse fator de estresse. Os metabólitos especiais são importantes estratégias químicas usadas pelas plantas na sua defesa contra fatores de estresse biótico ou abiótico. Em particular, as substâncias fenólicas como os flavonoides e isoflavonas são importantes metabólitos envolvidos nos mecanismos de defesa vegetal associados à fotoproteção. Este projeto teve por objetivo contribuir com conhecimentos quanto aos efeitos da radiação ultravioleta sobre a produção de metabólitos fenólicos durante o desenvolvimento vegetativo de dois cultivares de soja CD202RR e CD202, quando submetidos a três tratamentos com diferentes incidências de radiação ultravioleta (UV): 1. Ausência de radiação UV (UV-), 2. Alta incidência de radiação UV (UV+) e 3. Incidência natural de radiação UV solar (Controle). A hipótese deste estudo partiu do pressuposto que substâncias fenólicas são reconhecidos metabólitos vegetais com propriedades de absorção de luz nos comprimentos de onda do espectro UV-Visível, sendo assim, aumentariam em conteúdo em resposta a alta intensidade de radiação UV. Foram feitas análises por CLAE-DAD e CLAE-MS das substâncias fenólicas em folhas de G. max em três estádios vegetativos (V3, V4 e V5). As sementes de soja foram germinadas dentro das câmaras e 10 plantas foram coletadas por estádio, em cada câmara e em 3 repetições de experimentos (setembro de 2016 a março 2017). Foi verificado que o tratamento UV+ resultou em menores massas foliares quando comparado ao Controle e UV-. Há também diferença nas alturas das plantas de soja e danos nas folhas produzidos pela maior incidência de radiação UV. Foram identificados 28 constituintes, sendo 13 derivados do ácido cinâmico, 9 derivados dos flavonoides campferol e apigenina e 6 isoflavonas derivadas de genisteína e daidzeína. Quanto aos conteúdos fenólicos, pode-se observar que há um aumento da quantidade de isoflavonas na câmara UV+ em relação ao Controle para ambos os cultivares. Para os derivados cinâmicos e os flavonóis encontrados, observa-se um decréscimo em relação ao Controle para grande parte desses constituintes. Diminuição no conteúdo de flavonóis e aumento de isoflavonas pode ser devido a um possível desvio da via de produção dos flavonoides, uma vez que naringenina é o precursor para a síntese de ambas as classes. Além disso, isoflavonas apresentam espectro de absorção UV-Vis com banda máxima no comprimento de onda entre 260-280 nm, o que pode resultar em maior fotoproteção para plantas expostas a maiores intensidades de radiação UV / Fabaceae is the third largest botanical family, with great ecological, ornamental and economic importance. For its great diversity of species, the family is divided into six sub-families Caesalpinioideae, Cercidoideae, Detarioideae, Dialioideae, Duparquetioideae and Papilionoideae. Papilionoideae is a monophyletic group comprising Glycine max (L.) Merr., an important economic species for food (grains, bran, oil) and medicine. Glycine has its center of origin in China, and modern soybean has been modified by crosses between two wild species, by scientists still in ancient China. It is considered a complete food because it contains proteins, fats, oils, essential amino acids and secondary metabolites, such as isoflavones and other phenolic substances, important natural antioxidants. The liberation of soybean culture occurred in Brazil after the 11,105 law of March 24, 2005, leading to an exponential increase of its production in the country. Its consumption occurs all over the world, and its production increases every year, since it is also used as a source for the production of biofuel. We now know that atmospheric pollution and other human activities contribute to the increase of pollutants in the atmosphere and a consequent impact on the ozone layer. Ultraviolet radiation (UV) is divided into three: ultraviolet A (315 at 400 nm), ultraviolet B (280 to 315 nm), and ultraviolet C (200 and 280 nm). Because of this, studies aiming to evaluate how ultraviolet radiation can interfere on plant metabolism may contribute to better understand of how cultivated species are affected by this stress factor. Special metabolites are important chemical strategies used to plant defense against biotic or abiotic stress factors. In particular, phenolic substances such as flavonoids and isoflavones are important metabolites involved in the plant defense mechanisms associated to photoprotection. The objective of this project was to contribute with knowledge about the effects of ultraviolet radiation on the production of phenolic metabolites during the vegetative development of two soybean cultivars CD202RR and CD202, when exposed to three UV treatments: 1. Absence of UV radiation (UV-), 2. High incidence of UV radiation (UV +), and 3. Natural incidence of solar UV radiation (Control). The hypothesis of this study was based on the assumption that phenolic substances are recognized plant metabolites with properties of light absorption in the wavelengths of the UV-visible spectrum and thus could increase in content in response to high intensity of UV radiation. Analyzes were performed using HPLC-DAD and HPLC-MS of leaves of G. max at three vegetative stages (V3, V4 and V5). Soybean seeds were germinated within the chambers and 10 plants were collected per stage, in each chamber and in 3 experiment replicates (September of 2016 to March of 2017). It was observed that UV+ treatment resulted in smaller leaf biomass when compared to Control and UV-. There were also differences in soybean heights and leaf damage produced by the higher incidence of UV radiation. A total of 28 constituents were identified, of which 13 were cinnamic acid derivatives, 9 kaempferol and apigenin derivatives, and 6 genistein and daidzein derivatives (isoflavones). Was observed an increase in the contents of isoflavones in the UV+ comparing to Control, for both cultivars. Cinnamic acid derivatives and flavonoids showed decreased contents in relation to the Control. Decreases in flavonoid content together with increases in isoflavones might be explain by a possible flavonoid pathway deviation, since naringenin is precursor of both flavonoid classes. Isoflavones show UV-Vis absorption spectra with maximum absorption between 260-280 nm, which might result in higher capacity for UV photoprotection

Orientador: Hideko Yamanaka / Banca: Maria Valnice Boldrin / Banca: Silvia Helena Pires Serrano / Banca: Ronaldo Censi Faria / Banca: Paulo Roberto Brasil de Oliveira Marques / Resumo: A molécula do DNA pode ser modificada por substâncias eletrofílicas, tanto de origem exógena quanto endógena. As lesões geradas podem ser mutagênicas e contribuir para o processo de carcinogênese. Assim, desvios significativos da estrutura da dupla hélice desempenham um papel importante no metabolismo do DNA. Um biossensor voltamétrico baseado na imobilização de DNA de fita dupla (dsDNA) sobre eletrodos descartáveis foi desenvolvido para aplicação nos estudos de interação entre corantes têxteis e a molécula do DNA, na ausência e na presença de flavonóides em solução. Os eletrodos modificados foram colocados em contato com soluções de corantes têxteis da classe dos dispersos, o Disperso Orange 1 (DO1) e o Disperso Red 1 (DR1), e seus produtos de eletrólise por oxidação e por redução. A variação dos sinais de oxidação das bases guanina e adenina presentes no dsDNA imobilizado, obtidos antes e após cada interação, foi utilizada como parâmetro de análise dos resultados. O tempo para que a interação DNA:corante ocorresse foi avaliado utilizando o biossensor e estabeleceu-se 180 s. A concentração dos corantes foi analisada na faixa de 1,0 x 10-8 a 1,0 x 10-4 mol L-1, sendo que a variação do sinal voltamétrico das bases foi mais intensa para DR1 (sinais da guanina e adenina decresceram 48% e 51% do seu valor original, respectivamente), enquanto que na presença de DO1, as intensidades de corrente da guanina e adenina diminuíram 30% e 10% de seu valor original, respectivamente, quando comparada a mesma concentração dos corantes de 1,0 x 10-6 mol L-1. Além da diminuição da intensidade de corrente das bases guanina e adenina, o aparecimento de novos picos e deslocamentos do potencial de pico das bases foram observados após as interações com produtos de eletrólises. Estudos de interação também... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: DNA molecule may be modified by electrophilic substances, either from endogenous or exogenous origin. Lesions generated may be mutagenic and contribute to the process of carcinogenesis. In this way, significant deviations on the double helix structure play an important role in the DNA metabolism. A biosensor based on double-stranded DNA (dsDNA) immobilization on disposable electrodes has been developed for application in interaction studies between textile dyes and DNA molecule in the absence and presence of flavonoids in solution. The modified electrodes were placed in solutions of disperse textile dyes, Disperse Orange 1 (DO1) and Disperse Red 1 (DR1), and their products of electrolyses by oxidation and reduction. The variation of the oxidation signals of guanine and adenine bases of the immobilized dsDNA, obtained before and after each interaction, was used as a parameter for analyzing the results. The time for DNA:dye interaction was evaluated using the biosensor and 180 s was established. The concentration of dyes was analyzed in the range from 1.0 x 10-8 to 1.0 x 10-4 mol L-1, and the bases voltammetric signal variation was more intense for DR1 (signals of guanine and adenine decreased 48% and 51% of its original value, respectively), whereas in the presence of DO1, the current intensities of guanine and adenine decreased by 30% and 10% of its original value, respectively, when compared the same dyes concentration of 1.0 x 10-6 mol L-1. Besides adenine and guanine current intensities decrease, the appearance of new peaks and peaks potential shifts were also observed after interactions with electrolysis products. Interaction studies were also performed by means of UV-Vis spectrophotometry in aqueous phase showed different effects of hypochromism and hiperchromism of DNA band after interactions... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Fernando Alves de Melo / Banca: Júlio César Borges / Banca: Luis Octávio Regasini / Resumo: A proteína adaptadora Grb2 é uma importante reguladora da proteína quinase FGFR2 antes de estímulos extracelulares e é conhecida por formar complexos protéicos responsáveis por ativar a via de sinalização da MAPK, relacionada com a proliferação celular. Quando Grb2 é fosforilada ela se dissocia de FGFR2. Está por sua vez, adquire a capacidade de recrutar proteínas parceiras do citosol para iniciar vias de sinalização importantes para realização do metabolismo celular. A desfosforilação de Grb2 pela fosfatase Shp2 refaz o complexo FGFR2-Grb2 retomando controle sobre FGFR2. Desta maneira, devido a esta versatilidade em executar funções variadas dentro da célula, Grb2 torna-se um alvo importante para testar sua interação com moléculas conhecidas por apresentar propriedades farmacológicas. Sendo assim, as moléculas Morina (2',3,4',5,7-pentahidroxiflavona) e Rutina (Quercetina-3-O-α-L-Rhamnopiranosil-(1→6)-β-D-Glucopiranosídeo), foram escolhidas devido a suas propriedades anti-tumorais conhecidas na literatura e pela ausência de estudos em nível molecular que relacionem as propriedades destas moléculas com as proteínas que atuam nesta via de sinalização. Por conseguinte, utilizou-se espectroscopia de fluorescência em estado estacionário e ressonância magnética nuclear, com o objetivo de caracterizar a interação entre Morina e Rutina com Grb2. Através da determinação do perfil termodinâmico de interação destas moléculas com Grb2, obtidos por fluorescência, pudemos inferir um... / Abstract: Grb2 adaptor protein is an important regulator of FGFR2 before extracellular stimuli and is known to form complexes that activate MAPKinase pathway. When phosphorylated Grb2 dissociates from FGFR2 that gets able to recruit protein partners from the cytosol in order to start important signaling pathways inside cells. Dephosphorylating of Grb2 by Shp2 recue the FGFR2-Grb2 complex resulting in a control upon FGFR2. Because Grb2 shows to be versatile to performing functions inside the cell other than adaptor protein, it becomes an important target to test the interaction with molecules known to have anti-tumor properties. Therefore, the molecules Morin (2',3,4',5,7-pentahydroxyflavone) and Rutin (quercetin-3-O-α-L-Ramnopiranosil-(1→6)-β-D-glucopyranoside), were chosen because to its anti-inflammatory and anti-tumor properties known in the literature and because the absence of studies at the molecular level that brings up information about the properties of these molecules to specific protein targets. Thus, we have used static fluorescence spectroscopy and nuclear magnetic resonance in order to characterize the interaction between those molecules and Grb2. The thermodynamic profile got from fluorescence assays allow us to infer that the interaction between the molecules with Grb2 is entropically driven, compatible with hydrophobic interactions for both molecules where the equilibrium constants can be found between 104 and 105 M-1. Furthermore, nuclear magnetic resonance has ... / Mestre

O presente estudo investigou o potencial antioxidante e anti-inflamatório em modelos in vitro, ex vivo e in vivo dos extratos de pêssego in natura, casca in natura, pêssego em calda (compota) e a calda da compota. Nos testes in vitro, os extratos do pêssego e a casca in natura apresentaram atividade antioxidante e inibição de glicação de proteínas, assim como altas concentrações de polifenois e carotenoides. O pêssego em calda também desempenhou resultados semelhantes, porém em menor proporção. Fatias de fígado, rim e córtex cerebral de ratos foram utilizadas como modelo ex vivo. Os extratos do pêssego in natura, casca in natura e o pêssego em calda foram capazes de proteger o dano lipídico e proteico induzidos pela reação de Fenton, assim como inibir a produção de citocinas pró-inflamatórias. Como o pêssego é ingerido regularmente na dieta, os efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios dos extratos foram investigados in vivo. Ratos machos Wistar receberam tratamento intragástrico dos diferentes extratos (200 e 400 mg/kg) durante 30 dias, no último dia de tratamento uma dose de CCl4 (3 mL/kg, i.p.) foi administrada. Os efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios dos extratos foram avaliados em soro, fígado e rim. Os ratos que receberam pré-tratamentos com os extratos demonstraram dano hepático e renal menor em comparação com aqueles que receberam somente CCl4, resultado semelhante foi encontrado nos marcadores de dano e inflamação no soro. Os resultados obtidos neste estudo indicam que os extratos analisados são fontes potenciais de antioxidantes e anti-inflamatórios naturais capazes de proteger o fígado e os rins. / The present study investigated the antioxidant and anti-inflammatory potential of fresh and canned (preserve) peaches in in vitro, ex vivo and in vivo models. In in vitro tests, extracts of fresh peach pulps and peel demonstrated antioxidant activity and inhibition of protein glycation, as well as high concentrations of polyphenols and carotenoids; preserve peach pulps also had similar results, although to a lesser extent. Slices of liver, kidney and cerebral cortex of rats were used as ex vivo model. The extracts of fresh peach pulps, peels and canned peaches were able to protect lipids and proteins against Fenton reaction-induced damage, as well as inhibit the production of pro-inflammatory cytokines. Antioxidant and anti-inflammatory effects of the extracts were investigated also in vivo. Male Wistar rats received intragastric treatment of each extract (200 and 400 mg/kg) for 30 days, and at the last day of treatment a dose of CCl4 (3 mL/ kg, i.p) was administered. Antioxidant and anti-inflammatory effects of the extracts were evaluated in serum, liver, and kidney. Rats that received pre-treatment with the extracts showed less hepatic and renal damage compared with those receiving CCl4, similar results were found in markers of inflammation and damage in serum. The results of this study indicate that extracts analyzed are potential sources of natural antioxidants and anti-inflammatory capable of protecting the liver and kidneys.

Orientadora: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Ana Helena Januário / Banca: Anne Ligia Dokkedal Bosqueiro / Resumo: Este trabalho descreve a caracterização química dos extratos metanólicos de capítulos, escapos e folhas de Actinocephalus divaricatus, descrito pela primeira vez na literatura. Primeiramente, as amostras foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) acoplada com detector de arranjo de fotodiodos (PAD) e por espectrometria de massas em tandem acoplado a um orbitrap com interface de ionização por electrospray, usando um sistema LC para a separação cromatográfica dos metabólitos (HPLC-ESI-HRMS). Esta estratégia permitiu explorar e diferenciar os metabólitos secundários presentes, sendo identificados 31 compostos incluindo 12 flavonoides, 5 naftopiranonas e 14 saponinas. Esta análise diferencial das três partes da planta contribuirá com a discussão do gênero Actinocephalus, uma vez que os estudos na literatura são relatados apenas para Paepalanthus sect. Actinocephalus. A separação dos metabólitos presentes nos extratos metanólicos dos escapos e folhas foi realizada empregando técnicas cromatográficas, como Sephadex, MPLC, HPLC-PAD e HPLC-IR, em que foi possível obter treze compostos: três ácidos fenólicos, sete flavonoides, duas naftopiranonas e uma saponina. As estruturas de todos os compostos foram determinadas por análise dos dados obtidos por RMN mono e bidimensionais. A padronização dos extratos metanólicos foi realizada por meio da quantificação dos flavonoides e naftopiranonas por HPLC-PAD. A metodologia foi validada avaliando-se os parâmetros de s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work describes the chemical characterization of the methanolic extracts of the capitulae, scapes and leaves from Actinocephalus divaricatus, described the first time in the literature. First, the samples were analyzed by high-performance liquid chromatography (HLPC) coupled with a photodiode array detector (PAD) and mass spectrometry tandem coupled to an Orbitrap with electrospray ionization interface using an LC system for separating chromatographic metabolites (HPLC-ESI-HRMS). This strategy has allowed us to explore a differentiate the secondary metabolites present, identified as 31 compounds comprising 12 flavonoids, 5 naphthopyranones and 14 saponins. This differential analysis of the three parts of the plant contributes to the discussion of the Actinocephalus genus, since the studies reported in the literature are only of the Paepalanthus sect. Actinocephalus. The separation of the metabolites present in the methanolic extracts of the scapes and leaves was performed using chromatographic techniques, such as Sephadex, MPLC, HPLC-PAD and HPLC-IR. It was possible to obtain thirteen compounds: three phenolic acids, seven flavonoids, two naphthopyranones and one saponin. The structures of all the compounds were determined by data analysis by mono and bidimensional NMR. The standardization of the methanolic extracts was performed by the quantification of flavonoids and naphthopyranones by HPLC-PAD. The methodology was validated by evaluating the parameters of selectivit... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Se ha realizado el estudio farmacognóstico de los extractos: acuoso y alcohólico en droga fresca y extracto etéreo en droga seca de Averrhoa carambola L, así como el estudio farmacológico, que comprueba la actividad antiinflamatoria del extracto etéreo, sobre ratas albinas machos (especie Holtzmann). En el análisis farmacognóstico de los tres tipos de extractos (acuoso, alcohólico y etéreo), se han realizado reacciones preliminares de identificación, y posterior comprobación por análisis cromatográfico. Se han evidenciado presencia de taninos, flavonoides, y vitaminas B1 y C, en el extracto acuoso. Taninos y flavonoides en el extracto alcohólico, así como también, la presencia de compuestos esteroidales, en el extracto etéreo; este último, se ha purificado y fraccionado mediante cromatografía en columna, lográndose obtener un compuesto mayoritario que al ser analizado por Espectroscopía Infrarroja en la Unidad de Servicios de Análisis Químico (USAQ) de la Univ. Nac. Mayor San Marcos, se ha identificado como tipo esteroidal. Debido a la presencia de mayor cantidad de esteroides en el análisis cromatográfico, se ha procedido a la investigación de la actividad antiinflamatoria del extracto etéreo en ratas albinas machos, comprobándose su actividad antiinflamatoria, mediante el método edema pedal en ratas, inducido por la administración subplantar de 0.1 mL de carragenina al 1%. La edad promedio de los animales ha sido de tres meses, sus pesos variaron de 180 a 220 g. Se ha administrado por vía oral, diluciones del extracto etéreo (0.5 mL; 1 mL; 2.5 mL y 5 mL, de una solución de 11 mg/mL) y del estándar a diferentes dosis (0.04 mg/Kg.; 0.1 mg/Kg.; y 0.2 mg/Kg.), treinta minutos antes de producirse el edema. El efecto antiinflamatorio se ha medido en un pletismómetro, cada treinta minutos, por un periodo de cinco horas. Con este método, se ha determinado el efecto antiinflamatorio del extracto etéreo, obteniéndose una eficiencia antiinflamatoria de 14.89% a 64.27%. Finalmente, al evaluar la toxicidad aguda del extracto etéreo en ratones albinos machos (especie Balb-C.53), se ha encontrado que a dosis de 3.81 g/Kg.; 7.86 g/Kg. y 24.22 g/Kg. de peso de animal, no se han presentado signos de toxicidad, ni muerte de los animales, durante los siete días posteriores a la administración. / --- The pharmacognostic study of alcoholic and aquous extracts has been done in fresh sample and ethereal extract from Averrhoa carambola L's dry sample, so as pharmacologic study that prove the anti-inflammatory activity of ethereal extract on albine male rats (Holtzmann species). In pharmacologic analysis of three kinds of extracts (aquous, alcoholic and ethereal extracts), has been identified by preliminary reactions and chromatography analysis later. It has made evident the presence of tannins, flavonoids, and B1 and C vitamins in aquous extract. Tannins, flavonoids in alcoholic extract, also steroidal compounds in ethereal extract, this extract has been cleaned and fractioned by column chromatography, obtaining a majority compound identify by Infrared Spectrometry in Chemistry Analysis Service Entity (USAQ)-UNMS. Because bigger quantity of steroids in chromatography analysis, we have continued with anti-inflammatory activity assay in ethereal extract on albine male rats, we have proved its anti-inflammatory activity by paw edema model induced by 1% carragenin administration in hind paw of the rat. The animal¢s age was three months, its weight from 180 to 220 g, the ethereal extract has been administrated by oral way (0.5 mL; 1mL; 2.5 mL and 5 mL, of one solution 11 mg/mL) and standard to doses differents (0.04 mg/Kg.; 0.1 mg/Kg.; y 0.2 mg/Kg.), 30 minutes before edema production. The anti-inflammatory effect has been measured by pletismometro each 30 minutes, by 5 hours. With this method has been determinated the anti-inflammatory effect of ethereal extract, to became getting efficiency from 14.89% to 64.27%. Finally the acute toxicity assay on albine male mice (Balb-C.53 species) to doses 3.81 g/Kg.; 7.86 g/Kg. and 24.22 g/Kg. has not evidenced toxicity signals, has not anyone killed during seven days of administration later. / Tesis