Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-14T18:10:54Z No. of bitstreams: 1 2016_CristinaPimenteldoNascimento.pdf: 960202 bytes, checksum: 48b9f8297f72f32c7392d8dc021c14cc (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-16T18:25:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CristinaPimenteldoNascimento.pdf: 960202 bytes, checksum: 48b9f8297f72f32c7392d8dc021c14cc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-16T18:25:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CristinaPimenteldoNascimento.pdf: 960202 bytes, checksum: 48b9f8297f72f32c7392d8dc021c14cc (MD5) / No Brasil, o feijão-caupi é considerado uma das espécies alimentares mais cultivadas no Norte e Nordeste. Constitui um dos mais importantes componentes da dieta alimentar proteica e energética das populações rurais dessas regiões, é citada como fonte de folatos uma vitamina pertencente ao grupo vitaminas hidrossolúveis do complexo B9. As moléculas de folatos são formadas por três grupos funcionais: pterina, ácido para-aminobenzoico (pABA) e de um a oito resíduos de gluatamato. Em plantas, a primeira reação de produção de folatos é catalisada pela ação da gch1, que fornece instruções para a produção da enzima GTP ciclohidrolase 1, esta enzima está envolvida na primeira etapa da produção de folatos em plantas, produzindo a pterina, enquanto o precursor de pABA é sintetizado no cloroplasto. O objetivo do presente trabalho foi a quantificação do teor de folatos em 50 genótipos de feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], disponibilizados pelo banco de germoplasma da Embrapa Meio-Norte (Piauí, Brasil), International Institute of Tropical Agriculture (IITA) (Oyo State, Nigéria) e Ahmadu Bello University (Zária, Nigéria). Além disso, estudou-se a correlação dos teores de folatos e os níveis de expressão do gene Vugch1, que codifica para a GTP ciclohidrolase 1, enzima considerada chave na rota de síntese de pterinas, um precursor de folatos. Os genótipos foram plantados em casa de vegetação e as sementes imaturas foram coletadas com 10, 15, 20 e 25 dias após a antese. O maior nível de expressão de Vugch1 foi observado em sementes coletadas 20 dias após a antese. Com as análises realizadas em sementes maduras constatou-se que houve uma variação no teor de folatos entre 177 a 780 μg/100g (Pingo de Ouro e Yarwaja, respectivamente) nos genótipos estudados, valores estes bem acima dos encontrados na literatura para o feijão-caupi. Confirmou-se a correlação entre a expressão do gene Vugch1 e a variação no teor de folatos. Com esses resultados, existe a possibilidade de avaliar os genótipos mais adequados para utilização de programas de melhoramento genético com variedades de feijão-caupi que possuam maior concentração no teor de folato. Espécies silvestres têm sido exploradas como fonte de alelos de tolerância para o melhoramento genético vegetal de várias culturas. O parental silvestre do amendoim, Arachis duranensis, é um genótipo que apresenta alta adaptabilidade ao déficit hídrico e foi utilizado em um ensaio de dry drown para sequenciamento do transcriptoma. A análise in silico e a validação por RT-qPCR de genes diferencialmente expressos auxiliaram na identificação de genes candidatos associados à resposta a seca. Dentre eles, uma proteína LEA mostrou-se positivamente regulada mediante a esse estresse. Sabe-se que proteínas LEA se comportam como chaperonas e são encontradas em abundância em tecidos sob dessecação, diante disso, o objetivo desse trabalho foi caracterizar, clonar e introduzir esse gene via transgenia em planta modelo (Arabidopsis thaliana) para compreender os efeitos da sua superexpressão. O gene foi inserido em plantas de A. thaliana, ecotipo Columbia 0, utilizando o método de floral dip e os eventos em homozigose (geração T3) foram testados. As linhagens foram plantadas em placas de meio MS com 150 mM de NaCl e 200 mM de manitol, separadamente, além de outro grupo que foi plantado em meio MS e colocado em temperaturas extremas (-18°C por uma hora e 37°C por oito horas). Foram calculadas as taxas de sobrevivência e o teor de açúcares solúveis totais de cada amostra/ensaio. O teste de seca também foi feito, onde a irrigação foi suspensa por 15 dias e foram feitas análises de área foliar, teor relativo de água e coexpressão de genes relacionados à tolerância a seca. Nos ensaios com NaCl e manitol não houveram diferenças entre as linhagens e as plantas não transformadas, além de ter sido observado desenvolvimento reduzido das plantas. Nos ensaios com temperaturas extremas as linhagens mantiveram seus teores de açúcares iguais ao controle enquanto as não-transformadas (NT) aumentaram seu teor de açúcares solúveis totais apenas no tratamento de calor e sem diferença significativa na taxa de sobrevivência entre as linhagens e NT. No ensaio com seca houve maior desenvolvimento da área foliar em algumas linhagens quando comparadas às plantas NT. Na análise de teor relativo de água as linhagens mostraram maiores teores relativos de água quando comparado à NT, sob condição de rega controlada e após 15 dias sem irrigação, sendo uma linhagem com maior teor significativo. Esse evento foi selecionado para a análise de expressão gênica de três genes coexpressos com a Dehidrina. Houve aumento da expressão dos três genes em diferentes situações, tanto pelo fato da planta superexpressar a AdDHN quanto pela indução da seca. Os resultados sugerem que esse gene possa conferir uma melhor resposta aos estresses abióticos. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, the cowpea is considered one of the most cultivated food species in the North and Northeast. It is one of the most important components of protein and energy diet of rural populations in these regions, is cited as a source of folate a vitamin belonging to the watersoluble vitamins group B9 complex. Folate molecules consist of three functional groups: pterin, para-aminobenzoic acid (pABA) and one to eight residues of gluatamate. In plants, the first folate production is catalyzed by the action of gch1, which provides instructions for the production of the enzyme GTP cyclohydrolase 1, the enzyme is involved in the first step of folate production in plants producing pterin as the precursor pABA is synthesized in the chloroplast. The aim of this study was to quantify the folate content in 50 cultivars of cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] provided by the germplasm bank of Embrapa Meio Norte (Piauí, Brazil), International Institute of Tropical Agriculture (IITA) (Oyo State, Nigeria) and Ahmadu Bello University (Zaria, Nigeria). In addition, the correlation of folate content and the expression of the gene Vugch1 was studied. Vugch1 codes for GTP cyclohydrolase 1, a key enzyme for the pterins pathway. The cultivars were planted in the greenhouse and the immature seeds were harvested 10, 15, 20 and 25 days after anthesis. The highest expression level of Vugch1 gene was observed 20 days after anthesis. It was ibserved a variation in the folate content in mature seeds ranging from 177 to 780 μg/100g (Pingo de Ouro and Yarwaja respectively). It was confirmed the correlation between the expression of the Vugch1 gene and folate content. With these results, it is possible to perform appropriate genotype crosses in order to generate new elite varieties with high folate content.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9587_1.pdf: 3117616 bytes, checksum: 149954eac9b67ed47b28898dbdb58267 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Vitamina B9 é constituída por um grupo de compostos com características químicas similares denominadas folatos. Sua principal função é atuar como cofatores ou coenzimas na transferência de unidades de carbono para síntese de ácidos nucleicos. Sua ausência na dieta humana pode desencadear distúrbios distintos, a exemplo dos distúrbios de formação do tubo neural. Tendo em vista a gravidade das doenças associadas, tem aumentado à necessidade do controle dos valores declarados nos rótulos de alimentos e tabelas de composição e, consequentemente, o desenvolvimento de metodologias analíticas seletivas e apropriadas a matrizes de diferente composição química. A cromatografia líquida de alta eficiência tem se destacado como método analítico mais utilizado para este fim, pois apresenta resultados eficientes para diferentes formas de folatos. Entretanto, a maioria dos protocolos de estudo de extração de folatos exige o uso de enzimas, soluções extratoras em diferente pH, controle de temperatura e tempo de exposição na etapa de extração. Essas condições têm gerado resultados contraditórios, o que motivou este estudo a desenvolver um protocolo analítico simplificado para as etapas de identificação, extração e quantificação. Com soluções padrão contendo seis formas de folatos foi possível desenvolver um método cromatográfico em eluíção isocrática com tempo de eluíção dos padrões de 15 minutos em detector de arranjo de diodo. Foram testadas três colunas com diferentes dimensões recheadas com octadesilsilano em mais de dez combinações de fases móveis alcançando-se Rs, α e k compatíveis com um protocolo capaz de ser executado em matrizes alimentares e explicado através da teoria de ácido-base Lewis. Este método foi testado em espinafre e utilizado para o estudo do protocolo de extração, através de estudo piloto isolando fatores, a saber: uso de enzimas, concentração molar da solução extratora, agentes desproteinizante, antioxidantes, temperatura e tempo de exposição e o espinafre usado como modelo de estudo fracionado em liquor e fibra. De posse dos elementos principais foi desenhado um planejamento fatorial 24 objetivando verificar a melhor condição de extração, e posteriormente o método desenvolvido foi testado em seis matrizes alimentícias de origem vegetal. Para a etapa de extração, as condições de tempo e temperatura exercem influência sobre as condições de extração, e as condições mais brandas de exposição podem garantir uma maior extratibilidade. Ademais o fracionamento da matriz potencializou a extração do 5-metil-tetraidrofolato na fração liquor

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:44:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pallone_JulianaAzevedoLima_D.pdf: 1435689 bytes, checksum: 62750d8ae611c0a4dffee7b6395ff256 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Apesar das recentes descobertas a respeito das possíveis ações benéficas dos folatos na saúde humana, ainda são poucos os dados a respeito dos reais teores dessa vitamina nos alimentos brasileiros, principalmente para os vegetais, considerados as principais fontes desse nutriente. Mais escassos ainda são os estudos sobre a estabilidade dos folatos após o cozimento doméstico e o processamento industrial de alimentos. Considerando-se que a concentração de folatos em alimentos é bastante dependente das condições edafoclimáticas, torna-se relevante avaliar essa vitamina em vegetais brasileiros, a fim de se assegurar a ingestão dos folatos pela população. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo principal contribuir para o estudo de folatos em vegetais considerados ricos nessa vitamina. Para a determinação dos folatos, utilizou-se a técnica de cromatografia líquida de alta. O método foi validado e aplicado para amostras de espinafre, brócolis, tomate, catchup, molho e suco de tomate, com pequenas adaptações na metodologia referentes à etapa de extração das amostras e no sistema de separação cromatográfica. De forma geral, os parâmetros de validação estabelecidos, para os produtos analisados, foram de 94% para recuperação, coeficiente de variação inferior a 1,4% nos ensaios de repetibilidade e 5, 30, 30, 7pg/mL e 5ng/mL foram os limites de detecção estabelecidos para 5-metiltetraidrofolato (5-metilTHF), 5-formiltetraidrofolato (5-formilTHF), 10-formiltetraidrofolato (10-formilTHF), tetraidrofolato (THF) e 10-metiltetraidrofolato (10-metilTHF), respectivamente. Em tomate e produtos derivados o único folato encontrado foi o 5-metilTHF. Não se observou diferença significativa, entre os teores dessa forma da vitamina, encontrados em tomates cultivados de forma tradicional (entre 176,0 a 326,9mg/100) e orgânica (208,7 a 345,1mg/100g). Nos produtos de tomate verificou-se que a concentração de 5-metilTHF variou significativamente, tanto entre marcas, quanto entre lotes analisados para cada produto. Para catchup, molho e suco de tomate os valores obtidos variaram entre 58,8 e 265,9mg/100g, 103,9 e 325,0mg/100g e 138,9 e 330,8mg/100g, respectivamente. Assim, tanto o tomate como os seus produtos derivados podem ser considerados fontes de folatos. No brócolis além do 5-metilTHF, o 5-formilTHF também foi detectado. Nesse caso, observou-se diferença significativa entre os teores de 5-metilTHF obtidos para o cultivo orgânico (954,0 a 1740,0mg/100g para 5-metilTHF e 7,9 a 13,6mg/100g para 5-formilTHF) e tradicional (414,0 a 742,0mg/100g para 5-metilTHF e 4,8 a 12,8mg/100g para 5-formilTHF), tendo a forma orgânica apresentado as maiores concentrações. No caso do 5-formilTHF não se observou diferença significativa devida ao cultivo. Verificou-se, também, que o brócolis cozido em água, apresentou perdas de aproximadamente 68%, sendo que a maior parte da vitamina (53%) ficou na água de cozimento, indicando ser o processo de lixiviação o maior responsável pela perda dos folatos. Para o espinafre as mesmas formas de folatos encontradas em brócolis (5-metilTHF e 5-formilTHF) foram detectadas. Tanto para brócolis, quanto para espinafre, o 5-metilTHF representou aproximadamente 99% do teor total de folatos. Verificou-se, entretanto, em espinafre, não haver diferença significativa entre os teores de folatos obtidos por cultivo tradicional (386,0 a 550,4mg/100g para 5-metilTHF e 4,0 a 6,3mg/100g para o 5-formilTHF) e orgânico (295,3 a 599,9mg/100g para 5-metilTHF e 5,0 a 7,7mg/100g para o 5-formilTHF). As concentrações das diferentes formas de folatos, em espinafres colhidos em diferentes épocas do ano (setembro a novembro/2002 e maio e julho de 2003) também foram avaliados e revelaram não haver diferença significativa para os valores obtidos ao longo do período estudado. O cozimento em água resultou em perdas de aproximadamente 79% para o 5-metilTHF e 66% para o 5-formilTHF. Pela determinação dos teores de folatos na água de cozimento, concluiu-se que, também para esse caso, as perdas se deram, principalmente, devido a lixiviação. Os resultados obtidos permitiram, potanto, concluir-se que todos os vegetais avaliados no trabalho podem ser considerados importantes fontes de folatos, entretanto, o cozimento em água ocasionou enormes perdas da vitamina. Dessa forma, recomenda-se o aproveitamento da água de cozimento como forma de garantir a ingestão desse importante nutriente / Abstract: Despite the recent discoveries about the possible beneficial actions of folates to human health, data on the real contents of this vitamin in Brazilian foods, are little, ever for vegetables, considered the main source of this nutrient. Scarcer still are studies on the stability of folates after domestic cooking and industrial food processing. Considering that the concentration of folates in foods is somewhat dependent on the soil/climate conditions, it becomes important to evaluate this vitamin in Brazilian vegetables, in order to guarantee the ingestion of folates by the population. Thus the main of this study was to contribute to the knowledge of folates in foods. Folates were determined by high performance liquid chromatography technique. The method was validated and applied to samples of spinach, broccoli, tomatoes, ketchup, sauce and tomato juice. Small adaptations in the methodology were made for the extraction step of the samples and others in the chromatographic separation system. In general, the validation parameters established for the products analyzed were of 94% for recovery, variation coefficient below 1.4% in the repeatability assays and detection limits of 5, 30, 30, 7pg/mL and 5ng/mL 5-methyl-tetrahydrofolate (5-methylTHF), 5-formyl-tetrahydrofolate (5-formylTHF), 10-formyl- tetrahydrofolate (10-formylTHF), tetrahydrofolate (THF) and 10-methyl- tetrahydrofolate (10-methylTHF), respectively. For tomatoe and tomato products the only folate form was 5-methylTHF. There was no significant difference between the contents of this form of the vitamin found in tomatoes cultivated by the traditional (176,0 to 326,9µg/100g) and the organic method (208.7 to 345.1µg/100g) form. For tomatoe products, both, brands and batches showed significant differences in the concentration of 5-methylTHF. For ketchup, sauce and tomato juice the values were from 58.8 to 265.9µg/100g, 103.9 to 325.0µg/100g and 138.9 to 330.8µg/100g, respectively. Thus, tomatoes and tomato products can be considered as folates sources. In broccolis, in addition to 5-methylTHF, 5-formylTHF was also detected. In this case, these was a significant difference in the contents of 5-methylTHF for the organic (954.0 to 1740.0µg/100g for 5-methylTHF and 7.9 to 13.6µg/100g for 5-formylTHF) and traditional (414.0 to 742.0µg/100g for 5-methylTHF and 4.8 to 12.8µg/100g for 5-formylTHF) cultivation, the organic form presenting higher concentrations. For 5-formylTHF there was not significant difference. It was also noted, that when the broccoli was cooked in water, the losses were of approximately 85%, that most of the vitamin (70%) being founder the cooking water, indicating that the leaching process is responsible for the greater losses of folates. For the spinach the same folates forms were found as in broccolis (5-methylTHF and 5-formylTHF). For both, broccoli and spinach, 5-methyllTHF corresponds to approximately 99% of the folates contents. For spinach there was no significant difference in the folates contents for traditional (386.0 to 550.4µg/100g for 5-methylTHF and 4.0 to 6.3µg/100g for 5-formylTHF) and organic (295.3 to 599.9µg/100g for 5-methylTHF and 5.0 to 7.7µg/100g for 5-formylTHF) cultivation. The contents of the different folate forms, in spinach were also evaluated at different periods of the year (September to November/2002 and May to July/2003), and it was concluded there was no significant difference between the values obtained in the periods studied. Cooking in water resulted in losses of 66% for 5-methylTHF and 47% for 5-formylTHF. The determination of folates in the cooking water, confirmed that, in this case, the losses were mostly due to leaching, most of the vitamin, being found in the water. It was concluded that all the vegetables evaluated in this study could be considered important folates sources, however, the cooking in water caused enormous losses of the vitamin. It is therefore of great importance to use the cooking water so that adequate amounts of this important nutrient are ingested. / Doutorado / Ciência de Alimentos / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Carmen Silvia Bertuzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T17:41:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_CintiaMarques_M.pdf: 2054933 bytes, checksum: 39195c141e4cd2e600f9454a1cfc8781 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A síndrome de Down (SD) é uma aberração cromossômica atribuída à presença de três cópias dos genes localizados no cromossomo 21. Ocorre com uma freqüência estimada de um indivíduo em 600 nascidos vivos e de uma em 150 concepções. Os mecanismos relacionados com a não-disjunção do cromossomo 21 não foram ainda elucidados e embora a idade materna avançada seja um fator de risco, a maioria das crianças com SD nasce de mães com menos de 30 anos. Um mecanismo proposto para explicar a não-disjunção cromossômica consiste na hipometilação do centrômero levando à formação anormal do cinetócoro e ligação anormal dos microtúbulos. Tal mecanismo teria uma etiologia multifatorial e entre os fatores genéticos estariam as variantes polimórficas de enzimas envolvidas no metabolismo do folato. A via bioquímica do folato pode influenciar a estabilidade do DNA de dois modos: o primeiro está relacionado com a função que o folato desempenha na transferência de unidades de 1-carbono para a biosíntese de novo de nucleotídeos. Baixa concentração intracelular de 5, 10-metilenoTHF leva a uma diminuição da síntese de timidilato e a incorporação errônea de dUTP durante a replicação do DNA; o segundo modo envolve a produção de S-adenosilmetionina (SAM), o principal doador de grupos metil para a maioria das reações de metilação, incluindo a metilação CpG. Baixa concentração intracelular de 5,10-metilenoTHF é associado com baixa produção de SAM e conseqüentemente com a hipometilação do DNA. Diante disso, o objetivo do trabalho foi determinar se os polimorfismos MTHFD-1 1958G>A, TCII 776C>G, MTR 2756A>G, MTRR 66 A>G, RFC-1 80G>A e SHMT-1 1420C>T representam fatores de risco para gestações com SD. Para isso foi realizada a técnica de PCR utilizando 200 amostras de DNAs de mães de portadores de SD (MSD) e 340 amostras de DNAs controles seguida por digestão enzimática dos produtos obtidos e análise estatística dos resultados. Comparando a distribuição genotípica no grupo MSD e controle foi observado que o polimorfismo TCII 776C>G apresentou uma diferença estatisticamente significativa: ?2 (2) = 13,10 e p=0,0014. Nossos resultados indicam que mulheres com genótipo heterozigoto para o polimorfismo TCII 776C>G possuem um risco duas vezes maior de gerarem crianças com SD / Abstract: Down syndrome is a chromosome abnormality caused by the presence of three copies of genes located in the chromosome 21. It occurs in an estimated frequency of one out of 600 liveborns and one out of 150 conceptions. The mechanism related to the non-disjunction of the chromosome 21 has not been totally understood and even though the mother's age is a risk factor, most DS children are born to mothers aged less than 30. One mechanism proposed to explain the chromosome non-disjunction is the centromeic hypomethylation that causes abnormal formation of kinetochore and abnormal links of the microtubules. Such a mechanism is thought to have a multifactorial etiology and among the genetic factors are polymorphic variants of enzymes involved in folate metabolism. The biochemical pathway of the folate influnces the DNA stability in two ways: the first is related to the role of folate in one carbon unit transfer during "de novo" synthesis of nucleotides. Low levels of 5, 10-methylenetetrahydrofolate (5, 10-methyleneTHF) lead to a decrease in thymidylate synthesis and the misincorporation of the dUTP during replication of DNA; the second way involves the production of S-adenosyl methionine (SAM), the main donor of methyl to most methylation processes, incluing CpG methylation. Low intracellular 5,10-methyleneTHF is associated with low SAM production and consequently with DNA hypomethylation. Therefore, the purpose of the study was determining if the polymorfisms MTHFD-1 1958G>A, TCII 776C>G, MTR 2756A>G, MTRR 66A>G, RFC-1 80G>A e SHMT-1 1420C>T represent risk factors for DS pregnancies. So we used techniques of PCR followed by restriction enzyme analysis of 200 DNAs of mothers of DS children (MSD) and 340 DNAs of control mothers with statistic analyses of the results. Comparing the genotypic distribution in the groups MSD and control it has been observed that polymorphism TCII 776C>G showed a statistically remarkable difference: ?2 (2) = 13,10 e p=0,0014. Our results show that women that have heterozigote genotype for polymorphism TCII 776C>G have two times higher risk of generating DS children / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Helena Teixeira Godoy, Carlos Eugenio Daudt / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-07T11:15:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Facco_ElizeteMariaPesamosca_D.pdf: 27687746 bytes, checksum: d51d71b95043f23c20948f904cbac415 (MD5) Previous issue date: 2006 / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:06:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Furlani_ReginaPradoZanes_D.pdf: 1087020 bytes, checksum: f1d749d8e94ef61e2276c7216f394f56 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Dos de los desordenes nutricionales más comunes en todo el mundo, y a menudo ocurren simultáneamente, son la deficiencia en hierro y folato. La estabilidad, biodisponibilidad y funcionalidad del bisglicinato ferroso y del [6S]-5-MTHF o Metafolin® usados como suplementos en la alimentación infantil, centran el desarrollo de este trabajo. Se evaluó la estabilidad de las vitaminas presentes en la leche de crecimiento líquida durante su vida comercial almacenada a diferentes temperaturas (23, 30 y 37ºC), así como los parámetros cinéticos de degradación de aquellas vitaminas más inestables. Mediante un modelo gastrointestinal dinámico in vitro (TIM® Model) se determinó la bioaccesibilidad del Metafolín® frente a la del ácido fólico. La biodisponibilidad del Bisglicinato ferroso fue evaluada mediante un modelo de repleción de la hemoglobina en ratas anémicas, y finalmente se desarrolló un estudio de depleción-repleción en ratas deficientes en hierro y folato con el fin de investigar una posible interrelación entre ambos compuestos. / Two of the most important worldwide nutricional disorders that commonly come together are iron and folate deficiencies. The stability, bioavailability and functionality of Ferrous Bisglycinate and [6S]-5-Methyltetrahydrofolate or Metafolin® employed as supplements in infant food, focus the development of this work. It was assessed the stability of vitamins present in a growing-up liquid milk during its shelf-life and storage at different temperatures (23, 30 and 37ºC), as the degradation kinetic parameters of those most unstable vitamins. Through a dynamic gastrointestinal model (TIM® Model) was determined the bioaccesibility of Metafolin® compared to folic acid, commonly used as food supplement. Bioavailability of Ferrous Bisglycinate was investigated through a haemoglobin repletion model in anemic rats, and finally we set up a depletion-repletion experiment using iron and folate deficient rats to study the interrelationship between both compounds.

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-15T07:36:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rybka_AnaCeciliaPoloni_D.pdf: 1201100 bytes, checksum: 1057a41b652a7de5fa122bc5691bea97 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: No presente trabalho foram adaptados e aplicados métodos para a determinação do teor de folatos, avaliação de capacidade antioxidante e quantificação do composto trans-2-nonenal em cervejas brasileiras. Foram avaliadas 5 marcas de cervejas tipo Pilsen, sem álcool e Malzbier, nas embalagens lata e garrafa âmbar. Para determinação dos folatos (ácido fólico - AF, 10-metil-ácido fólico - 10Metil, 5-metiltetraidrofolato - 5Metil, 5-formiltetraidrofolato - 5Formil e 10-formil-ácido fólico - 10Formil) vitaminas do complexo B, empregou-se um método utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Na etapa cromatográfica utilizou-se coluna C18 e eluição por gradiente com fase móvel composta por ácido acético 2,0% ajustado a pH 2,8 e acetonitrila, a uma vazão de 0,5 mL/min. A detecção foi realizada com o detector de arranjo de diodos a 290nm para o AF e o 10Metil; e com detector de fluorescência a ?exc. 290nm e ?emis. 360nm na detecção do 5Metil e 5Formil; e a ?exc. 290nm e ?emis. 445nm para o 10Formil. Após sua validação, o método apresentou coeficientes de correlação variando de 0,9970 a 0,9999, limites de detecção de 0,07 a 2,42 mg/100mL, e de quantificação entre 0,22 e 8,07 mg/100mL. Os coeficientes de variação (CV) ficaram entre 0,75 e 5,01% e a precisão intermediária entre 1,20 e 9,99%. Os ensaios de recuperação nos níveis avaliados estiveram entre 92 e 107%. Os folatos encontrados nas cervejas analisadas foram o 10Metil, o 5Metil e o 10Formil e os níveis totais da vitamina variaram de 18,26 a 23,99 µg/100mL. Estas vitaminas foram monitoradas durante a vida de prateleira da bebida (6 meses), sendo avaliadas na cerveja recém fabricada e a cada 2 meses subseqüentes. De modo geral o teor de folatos decresceu ao longo da vida de prateleira, e não foi possível constatar o efeito do tipo de embalagem sobre a vitamina. A avaliação em diferentes lotes resultou em grande variação, com CVs de até 52,42%. Para estabelecer o teor de fenólicos totais foi aplicado o método de Folin-Ciocalteau, pelo qual foram encontrados 47,05, 18,67 e 21,83 mg/100mL em equivalentes de ácido gálico (EAG), na cerveja Malzbier, Pilsen sem álcool e Pilsen, respectivamente. O tipo de embalagem utilizada, lata ou garrafa, apresentou relevância para o teor de fenólicos totais somente para a cerveja Pilsen, e a cerveja sem álcool foi a que mais apresentou variação do teor entre marcas. Para avaliação da capacidade antioxidante foram realizados ensaios utilizando o radical 2,2- difenil -1- picrilhidrazil (DPPH) e o poder antioxidante de redução do ferro (FRAP). Os dois ensaios indicaram a cerveja Malzbier com maior capacidade antioxidante, corroborando com o teor de fenólicos totais. Para identificação e quantificação do trans-2- nonenal, um dos principais responsáveis pelo sabor envelhecido em cervejas, foi utilizado o método de headspace com microextração em fase sólida e cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (HS-SPME-GC-MS). Foi utilizada coluna 5%-fenilmetilpolisiloxano (HP-5MS) e a condição cromatográfica empregada teve inicio em temperatura de 60ºC, variando 3 ºC/min até atingir 100ºC. Em seguida, uma rampa de 10 ºC/min até atingir 200ºC e permanência a 200ºC por sete minutos para limpeza da coluna. O gás de arraste (hélio) teve vazão constante de 1,0 mL/min. Os íons monitorados para a identificação (m/z) foram 55, 70 e 83 (fonte de ionização de 70eV), após verificação do espectro de massas do composto. O teor de trans-2-nonenal encontrado variou de 0,11 a 0,46 µg/L nas cervejas em lata, estando acima de seu threshold. Para este composto foi encontrada diferença significativa entre amostras de um mesmo tipo de cerveja, porém não houve diferença significativa entre os três tipos de cerveja analisados. Este trabalho demonstrou que a cerveja brasileira possui substâncias benéficas à saúde humana, com teor similar a de outros alimentos, e que o trans-2-nonenal ainda é presente em quantidades acima do threshold na bebida, podendo comprometer sua qualidade. De modo geral, a embalagem, lata ou garrafa, não influenciou no teor das substâncias analisadas e a cerveja Malzbier se destacou pela maior capacidade antioxidante / Abstract: In the present study methods were adapted and applied to quantify levels of folate, antioxidant capacity assessment and E-2-nonenal quantification in Brazilian beers. 5 brands of Pilsen, non-alcoholic and Malzbier beers were used, in can and amber bottle. For determination of folates (folic acid - FA, 10-methyl-folic acid - 10Methyl, 5-methyltetrahydrofolate - 5Methyl, 5-formyltetrahydrofolate - 5Formyl and 10-formyl-folic acid - 10Formyl) B vitamins, a method using liquid chromatography (HPLC) was employed. In the chromatographic step a C18 column was used and was applied a gradient elution with mobile phase consisting of an acetic acid 2.0% solution adjusted to pH 2.8 and acetonitrile, at a flow rate of 0.5 mL / min. The detection was performed with the diode array detector at 290nm for FA and 10Methyl, and with a fluorescence detector at ?exc. 290nm and ?emis. 360nm in the detection of 5Methyl and 5Formyl, and at ?exc. 290nm and ?emis. 445nm for the 10Formyl. After its validation, the method presented correlation coefficients ranging from 0.9970 to 0.9999 mg/100 mL, detection limits from 0.07 to 2.42 mg/100 mL and quantification limits between 0.22 and 8.07 mg/100 mL. The standard deviation (SD) was between 0.75 and 5.01% and intermediate precision was from 1.20 to 9.99%. Tests of recovery levels were resulted between 92 and 107%. Folates found in beers were 10Methyl, 5Methyl and 10Formyl. The total folate levels found among types of fresh beers ranged from 18.26 to 23.99 µg/100mL. These vitamins were monitored during beer shelf life (6 months), being evaluated in freshly brewed beer and at every subsequent 2 months. Overall levels of folate found decreased over the shelf life, but it was not possible to verify the effect of package to protect beer against degradation of the vitamins. Evaluation in different batches showed a great variation, with SD up to 52.42%. To determine the total phenolic content was applied the Folin-Ciocalteau method, by which they were found 47.05, 18.67 and 21.83 in mg/100mL equivalents gallic acid (EGA) for Malzbier beer, alcohol-free Pilsen and Pilsen, respectively. The type of packaging used, can or bottle, had relevance to the total phenolic content only for Pilsen beer. Nonalcoholic beer showed the highest variation. To evaluate the antioxidant capacity, tests using the radical 2,2 - diphenyl -1 - picrylhydrazyl (DPPH) and the ferric reduction antioxidant power (FRAP) were performed. The two tests indicated the beer Malzbier has the highest antioxidant capacity, which agrees with the content of total phenolics. For identification and quantification of E-2-nonenal, a major cause of aged flavor in beers, it was used a headspace method with micro solid phase extraction and gas chromatography technique coupled with mass spectrometry (HS-SPME-GC-MS). A 5%- phenyl-methylpolisiloxane (HP-5MS) column was used. The chromatographic conditions used beginning in temperature of 60 ºC, ranging from 3 ºC / min up to 100 ºC. Then, ramp of 10 °C / min until 200 ºC and then stay at 200 ºC for seven minutes to clean the column. The carrier gas (helium) had constant flow of 1.0 mL / min. The monitored ions were 55, 70 and 83 (m/z) (source of ionization 70eV), after verification of mass spectra of the compound. Levels of E-2-nonenal ranged from 0.11 to 0.46 µg/L in beer cans, being above its threshold. For this compound significant difference was found between samples of the same type of beer, but there was no significant difference between the three types of analyzed beer. This study showed that the Brazilian beer have beneficial substances to human health, with similar content to other food, and that the E-2-nonenal is still present in quantities above the threshold in the beverage, which can compromise its quality. In general, the packaging, can or bottle, did not influence the content of the analyzed substances, and Malzbier beer stood out for greater antioxidant capacity / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T11:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_EleniceCarlaEmidio_M.pdf: 877481 bytes, checksum: 0115f62caab877a3e3e74dfe26ca0466 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: No Brasil, o feijão obteve ampla difusão cultural e atualmente o país é considerado o maior produtor e consumidor do grão. Essa leguminosa é citada internacionalmente como uma fonte de folatos, um grupo de vitaminas pertencentes ao complexo B. Entretanto, é quase inexistente o levantamento de dados sobre o teor de folatos em feijões brasileiros. Os folatos participam de dois processos biológicos importantes: o ciclo de metilação, que consiste na transferência de carbonos e a biossíntese do DNA, fundamental para a manutenção das células. Sua deficiência está relacionada a problemas na formação do tubo neural em fetos, doenças cardiovasculares e alguns tipos de câncer. Deste modo, torna-se necessário um método eficiente para detectar e quantificar os folatos presentes nas diferentes variedades de feijão consumidas no país. O objetivo do trabalho foi determinar o teor de folatos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), utilizando diferentes métodos de hidrólise enzimática, além de aplicar o método em quatro variedades de feijão comum (carioca, preto, vermelho e branco) e uma variedade de feijão de corda, avaliando o efeito do cozimento sobre os folatos presentes. Em comparação como os outros tratamentos, apenas o tratamento tri-enzimático foi mais eficiente na identificação e quantificação dos folatos. Nos feijões, foram detectatos somente o tetraidrofolato (THF) e o 5-metiltetraidrofolato (5-MTHF). Os folatos foram separados utilizando uma coluna C18 como fase estacionária, solução acidificada com ácido acético/acetonitrila como fase móvel, e detectados por fluorescência (?exc. 290 nm e ?emis 360 nm). Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 0,9 ng/mL e 5,4 ng/mL para o THF, e 0,7 ng/mL e 4,2 ng/mL para o 5-MTHF. O método apresentou linearidade na faixa de trabalho, além de repetitividade e reprodutibilidade. Nos feijões crus o teor de THF variou de 20,3 a 1484 µg/100g e o teor de 5-MTHF variou de não determinado a 60 µg/100g. Já nos feijões cozidos, que foram processados de acordo com a recomendação dos fabricantes, o teor de THF variou de 15,3 a 1207 µg/100g, e de 5-MTHF variou de não determinado a 31,3 µg/100g. Observou-se que as perdas por processamento foram significativas e diferentes entre as variedades de feijões, sendo o 5-MTHF o composto mais suceptível. Além disso, as perdas foram ainda maiores quando o feijão foi submetido ao remolho antes do cozimento, como no feijão branco. No feijão de corda foram encontrados os maiores teores de folatos, embora tenha sido encontrado apenas o THF. Houve diferenças significativas entre os três lotes de cada variedade, que pode ser devido à diversidade das condições de cultivo e variação de genótipos do feijão. Os dados mostram que o feijão brasileiro é uma boa fonte de folatos presentes na dieta / Abstract: The beans have been widespread used as a traditional food in Brazil and nowadays the country is the largest producer and consumer of this grain. This legume is referred internationally as a source of folates, which belong to the group of vitamins B complex. However, the data about folates from Brazilian beans are almost nonexistent. Folates take part in two important biological processes: the methylation cycle, that is the transfer of carbon, and the biosynthesis of the DNA, essential for cell maintenance. The folates deficiency is related to problems in neural tube formation in fetuses, cardiovascular disease and some cancers. Thus, it becomes necessary to develop an efficient method for detecting and quantifying folate present in different varieties of beans consumed in Brazil. The aim of this study was to determine the content of folates by high performance liquid chromatography (HPLC), using different enzymatic hydrolysis methods, and apply the method on four common bean (carioca, black, white and red) and a cowpea, as well as evaluating the effect of cooking process on the content of folates. The tri-enzyme treatment compared to other treatments was the most efficient for identification and quantification of the folates. Only the tetrahydrofolate (THF) and 5-methyltetrahydrofolate (5-MTHF) were detected in the beans. Folates were separated using a C18 column as the stationary phase, acidified solution with acetic acid/acetonitrile as the mobile phase, and were detected by fluorescence (290 nm and ?exc. ?emis 360 nm). The limits of detection and quantification were, respectively, 0.9 ng/mL and 5.4 ng/mL for THF, and 0.7 ng/mL and 4.2 ng/mL for 5-MTHF. The method was linear in the working range including repeatability and reproducibility. In raw beans the THF content ranged from 20.3 to 1484 µg/100g and the amount of 5-MTHF ranged from 60 µg/100g to not determined. Whereas for the cooked beans, which were cooked according to the manufacturer's recommendations, the content of THF ranged from 15.3 to 1207 µg/100g and the amount of 5-MTHF ranged from 31.3 µg/100g to not determined. It was observed that the losses due the process were significant between the different varieties of beans, were the 5-MTHF compound was more susceptible to degradation. Furthermore, the losses were even greater when the beans were subjected to soaking before cooking, as in white beans. In cowpea were found the highest levels of folates, although it has been found only THF. There were significant differences among the three batches of each variety, which may be due to the different growing conditions and variation in the bean genotypes. The data show that the Brazilian beans are a good source of folate present in the diet / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Orientador: Carmen Sílvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T06:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rezende_LucianaMontes_M.pdf: 2160530 bytes, checksum: b9f9b53af213aa35b20cf6a49d746a91 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O Câncer de Mama (CM) é a forma de neoplasia mais diagnosticada e a principal causa de morte por câncer em várias regiões do mundo, sendo a maior parte CM esporádico. O estilo de vida reprodutivo representa importante fator de risco relacionado à exposição ao estrógeno durante a vida, visto que o hormônio é responsável por estimular a proliferação celular mamária. Por outro lado, a enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) regula o balanço celular entre a metilação e a síntese de ácidos nucléicos. Polimorfismos nos genes dos receptores de estrógeno (ESR1 e ESR2) e do metabolismo do folato (MTHFR) têm sido associados ao risco de CM em diferentes populações. Objetivos: Avaliar a associação entre CM esporádico e os polimorfismos c.2014G>A (ESR1), c.1730G>A (ESR2), c.677C>T e c.1298A>C (MTHFR), incluindo as variáveis clínicas. Material e Métodos: Foram selecionadas 253 amostras de DNA de mulheres com CM esporádico do Laboratório de Genética Molecular do Câncer (FCM-Unicamp) e 257 controles femininos com idade superior a 50 anos e sem história familiar para CM ou câncer de ovário. As amostras foram genotipadas por RFLP-PCR. Foram incluídas variáveis clínicas relacionadas ao indivíduo, aos tumores e ao estilo de vida reprodutivo. Para a análise estatística, foi utilizado o software SPSS vs21.0, empregado o teste ?2 para a distribuição dos polimorfismos e, quando observada diferença no percentual destes, foi calculado a Razão de Prevalência. Resultados: Não foi observada diferença significativa entre os grupos em relação à ocorrência de CM para os polimorfismos: c.2014G>A (p=0,281), c.1730G>A (p=0,241), c.677C>T (p=0,443) e c.1298A>C (p=0,805). Ao associar os genótipos às variáveis clínicas, o alelo A (c.2014G>A) foi menos prevalente em tumores com expressão do receptor de estrógeno (RE positivos) (OR=0,469; 95% IC=0,262 ¿ 0,841) e mais prevalente no estadio 0 em relação aos demais (OR=3,911; 95% IC=1,394 ¿ 10,97), enquanto no genótipo GA teve expressão diminuída de RE e no GG, maior expressão de receptor de estrógeno (RP). Para o c.1730G>A, o genótipo GA foi mais prevalente entre as mulheres que amamentaram (OR=2,257; 95% IC=1,254 ¿ 4,061), menos prevalente em hipertensão arterial sistêmica (HAS) (OR=0,578; 95% IC=0,339 ¿ 0,987) e conferiu proteção do estadio 0 em relação aos demais (OR=4,383; 95% IC=1,606 ¿ 11,96). Na análise do haplótipo c.2014G>A/c.1730G>A, GG/GG foi menos prevalente entre as mulheres que amamentaram (OR=0,525; 95% IC=0,298 ¿ 0,924) e teve maior expressão de RP. Para os polimorfismos no MTHFR, o genótipo CC (c.677C>T) representou um fator de risco para metástases a distância (OR=5,311; 95% IC=1,124 ¿ 25,09) e teve menor expressão de RE, enquanto o genótipo AA (c.1298A>C) foi menos prevalente no estadio 0 em relação aos demais (OR=0,034; 95% IC=0,067 ¿ 0,669) e apresentou maior expressão de RE. Na análise do haplótipo c.677C>T/c.1298A>C, o CC/AA foi associado ao uso de contraceptivo hormonal (OR=3,671; 95% IC=1,344 ¿ 10,03) e HAS (OR=1,979; 95% IC=1,036 ¿ 3,782); e o CT/AC foi menos prevalente no carcinoma invasivo de tipo não especial (NST) (OR=0,032; 95% IC=0,243 ¿ 0,918) e conferiu proteção do estadio 0 em relação aos demais (OR=3,476; 95% IC=1,341 ¿ 10,47). Conclusões: Os polimorfismos parecem não alterar o risco para o desenvolvimento de CM esporádico, no entanto, podem estar associados à sua gravidade / Abstract: The Breast Cancer (BC) is the most frequently diagnosed form of cancer and the main cause of cancer death in worldwide. The reproductive lifestyle is an important risk factor related to exposure to estrogen during the life, being the hormone is responsible for stimulating cell proliferation in the breast. On the other hand, the enzyme methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) regulates cell balance between synthesis and methylation of nucleic acids. Polymorphisms in the genes of the estrogen receptor (ESR1 and ESR2) and folate metabolism (MTHFR) have been associated with risk of breast cancer in different populations. Objectives: To evaluate the association between sporadic BC and c.2014G>A (ESR1), c.1730G>A (ESR2), c.677C>T and c.1298A>C (MTHFR) polymorphisms, including the risk factor and the association with clinical variables. Material and methods: We enrolled 253 DNA samples from women with sporadic BC from Molecular Genetics of Cancer Laboratory (FCM/Unicamp) and 257 female controls over the age of 50 and without family history of BC or ovarian cancer. The samples were genotyped by PCR-RFLP. Clinical variables were included related to the individual, to tumors and reproductive lifestyle. For statistical analysis, SPSS software vs21.0 was used, the ?2 test was applied for the distribution of polymorphisms and when significant differences was observed, we calculated the odds ratio. Results: There was no significant difference between the groups in the occurrence of BC for the polymorphisms: c.2014G>A (p=0.281), c.1730G>A (p=0.241), c.677C>T (p=0.043) and c.1298A>C (p=0.805). By associating genotypes to clinical variables, the A allele (c.2014G>A) was less prevalent in tumors with positive ER (OR=0.469; 95% CI=0.262 to 0.841) and more prevalent in stage 0 compared to the other (OR=3.911; 95% CI=1.394 to 10.97), while the GA genotype had lower expression of ER and GG, most PR expression. For c.1730G>A, the GA genotype was more prevalent among women who breastfed (OR=2.257; 95% CI=1.254 to 4.061), less prevalent in hypertension (OR=0.578; 95% CI=0.339 to 0.987) and conferred protection to stage 0 in relation to others (OR=4.383; 95% CI=1.606 to 11.96). In the haplotype analysis c.2014G>A/c.1730G>A, GG/GG was less prevalent among those who breastfed (OR=0.525; 95% CI=0.298 to 0.924) and had higher PR expression. For polymorphisms in MTHFR, the CC genotype (c.677C>T) was a risk factor for distant metastasis (OR=5.311; 95% CI=1.124 to 25.09) and had lower expression of SR, while the genotype AA (c.1298A>C) was less prevalent in stage 0 in relation to others (OR=0.034; 95% CI=0.067 to 0.669) and showed a higher expression of ER. In the haplotype analysis for c.677C>T and c.1298A>C, the CC/AA combination was associated with hormonal contraceptive use (OR=3.671, 95% CI=1.344 to 10.03) and hypertension (OR=1.979; 95 % CI=1.036 to 3.782). The CT/AC was less prevalent in invasive carcinoma NST (OR=0.032; 95% CI=0.243 to 0.918) and conferred protection to stage 0 in relation to others (OR=3.476; 95% CI=1.341 to 10.47). Conclusions: The polymorphisms analyzed do not appear to alter the risk for developing sporadic BC, however, may be associated with its severity / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas