Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Tiago Santana Balbuena / Banca: Fabrício José Jaciani / Banca: Flávia Maria de Souza Carvalho / Banca: Henrique Ferreira / Resumo: A bactéria Gram-negativa Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é o agente causal do cancro cítrico, doença ainda sem método curativo que gera grande impacto econômico na produção de laranja. Estudos moleculares envolvendo patossistemas, como o Xac-citros, vêm ganhando espaço no auxílio do entendimento sobre os processos fitopatogênicos. Diante disto, o objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão dos genes exsF e exsG de Xac e o efeito dos seus nocautes na patogenicidade de Xac em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), bem como obter as proteínas por eles codificadas e utilizá-las em ensaios iniciais de cristalização. Na análise da expressão destes genes, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR), onde foi avaliada a expressão dos mesmos em Xac inoculada em folhas de limoeiro cravo coletadas em três tempos após a inoculação (48, 72 e 120 h) comparada com a expressão em Xac inoculada em meio de cultura. Já para a produção do mutante duplo de Xac apresentando os genes exsF e exsG nocauteados, foi utilizada a técnica de mutação sítio-dirigida por PCR utilizando o vetor suicida pOK1 e a estratégia de troca alélica. Para a produção das proteínas ExsF e ExsG recombinantes foi utilizada a expressão heteróloga em E. coli através do uso do vetor de expressão pET SUMO e os ensaios iniciais de cristalização foram realizados utilizando-se kits comerciais e não comerciais. A análise da expressão dos genes exsF e exsG revelou que estes foram induzidos, cerca de 10 vezes mais, após 72 horas de infecção da Xac em folhas de limoeiro cravo, em comparação com a Xac multiplicada em meio de cultura. Os ensaios de patogenicidade utilizando o mutante duplo de Xac Δ3135/3136 revelaram que este foi avirulento em folhas de limoeiro cravo, em contraste com a linhagem 306 selvagem, que elicitou os sintomas de cancro cítrico. Além disso, a mutação reduziu a capacidade de multiplicação... / Abstract: The Gram-negative bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is the causal agent of citrus canker, disease that causes a significant economic impact on the orange production. Molecular studies involving pathosystems like Xac-citrus have been used to as an approach to understand the pathogenic processes. Therewith, the objective of this study was to investigate the expression of exsF and exsG Xac genes and the effect of its silencing in Xac pathogenicity in Rangpur lime (Citrus limonia Osbeck) leaves and also get the proteins coded by them and use it in initial tests of crystallization. The real-time PCR (qRT-PCR) technique was used in the analysis of gene expression.The in planta expression of exsF and exsG genes were evaluated in Xac isolated from Rangpur lime leaves collected at 48, 72 and 120 h after inoculation compared to Xac growing in NA culture. For the production of Xac double mutant having the ExsF and exsG genes silenced, the site-directed mutagenesis technique by PCR using the suicide vector pOK1 was used. For the production of ExsF and ExsG recombinant proteins, the E. coli heterologous expression in the pET SUMO expression vector was used. Finally, the initial crystallization trials were performed using commercial and non-commercial kits. The gene expression analysis showed that the exsF and exsG genes were induced about 10-fold more after 72 hours of Xac infection in Rangpur lime leaves, compared with the Xac grown in the culture medium. The functional assays performed with the Xac Δ3135/3136 double mutant showed that it was avirulent on Rangpur lime leaves, in contrast to the wild type strain Xac 306. Moreover, the mutation reduced the multiplication of the bacteria in planta. The mutation also affected the biofilm production, that was reduced in the mutated strain. Through the heterologous expression assays and protein purification it was possible to obtain only the ExsG protein, soluble and pure enough to be ... / Doutor

Orientador: Antonio Batista Filho / Banca: Lucas Detogni Simi / Banca: Dinalva Alves Mochi / Banca: Regiane Cristina Oliveira de Freitas Bueno / Banca: Edson Luiz Lopes Baldin / Resumo: Em 2004 foi relatada, nos pomares cítricos do estado de São Paulo, a presença do Huanglongbing. No Brasil, esta doença é causada pelas bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus e Candidatus Liberibacter americanus, que são transmitidas pelo psílideo-dos-citros Diaphorina citri. A principal forma de controlar a doença é através do controle do inseto vetor, atualmente realizada com o uso de produtos fitossanitários. A mortalidade de adultos do psilídeo por fungos entomopatogênicos tem sido observada em campo, e alguns estudos estão sendo desenvolvidos, há pouca informação na literatura sobre o 2 efeito desses patógenos no controle microbiano do inseto vetor. Dessa forma, o presente estudo avaliou a patogenicidade de 20 isolados de fungos entomopatogênicos sobre adultos e ninfas de D. citri em condições de laboratório e semi-campo, bem como a sua compatibilidade com produtos fitossanitários, de diferentes grupos, utilizados na citricultura. Ninfas e adultos de D. citri, provenientes de criação em laboratório, foram expostas à uma concentração de 6,7x107 conídios/mL, avaliando a mortalidade desses insetos. Através dessa mortalidade foi determinado o tempo letal médio para 8 isolados, com maior porcentagem de mortalidade confirmada. A compatibilidade em laboratório foi observada adicionando os produtos químicos ao meio de cultura BDA, foi inoculado com o fungo em três pontos equidistantes da placa de Petri, a qual foi mantida em câmara climatizada tipo BOD por u... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In 2004 it has been reported the presence of HLB, also known as "greening", in citrus orchards at São Paulo state. In Brazil, this disease is caused by bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus and Candidatus Liberibacter americanus, which are transmitted by the psyllid-of-citrus Diaphorina citri. The main way to control the disease is through the control of the insect vector, which is currently carried out using chemicals. The mortality of psyllid adults by entomopathogenic fungi have been observed in the field and studies are being developed, but little is known about the effect of these pathogens in the insect vector control. Thus, we performed a study to determine the pathogenicity of entomopathogenic fungi on adults and nymphs of D. citri in laboratory and semi-field as well as its compatibility with pesticides used in citriculture. Laboratory created nymphs and adults of D. citri were exposed to a constant concentration of the pathogen 6,7x107 conidia/ml and it was observed the mortality of these insects. Through this mortality it was determined the median lethal time for 8 isolates, confirmed with the best mortality percentage. Laboratory compatibility was observed by incorporating chemicals to PDA culture medium which, after solidification, were inoculated with the fungus at three equidistant points of the Petri dish, which was kept in BOD chamber for a period of seven days. After this period, its vegetative growth, sporulation, viability of the pathogen has been eva... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Batista Filho / Banca: Luis Garrigós Leite / Banca: Carlos Gilberto Raetano / Banca: Eduardo Marcondes de Almeida / Banca: Adalton Raga / Resumo: A mosca-negra-dos-citros constitui-se uma ameaça à fruticultura, por ser uma praga com grande potencial de dano econômico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a patogenicidade e virulência de isolados de fungos entomopatogênicos sobre a mosca-negra-dos-citros, Aleurocanthus woglumi (Hemiptera: Aleyrodidae) em condições de laboratório, e o efeito de diferentes produtos fitossanitários sobre o desenvolvimento do fungo Purpureocillium lilacinum in vitro e semicampo. No teste de patogenicidade, foram utilizadas dez ninfas de segundo e terceiro ínstares de Aleurocanthus woglumi e os fungos Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Lecanicillium muscarium, Fusarium proliferatum e Purpureocillium lilacinum. Para determinação da concentração letal 50 (CL50) e do tempo letal médio 50 (TL50) foi escolhido o fungo P. lilacinum, sendo cada tratamento representado por uma concentração 1 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108 e 5 x 108 conídios/mL. Nos testes de compatibilidade de agrotóxicos sobre o fungo P. lilacinum, foram testados os produtos Ampligo® (clorantraniliprole + lambda-cialotrina), Kohinor 200 SC® (imidacloprido), Provado 200 SC® (imidacloprido), Recop® (oxicloreto de cobre), Iharol® (óleo mineral), Talstar 100 EC® (bifentrina), Stimulate® (ácido 4-indol-3-ilbutírico + ácido giberélico + cinetina) e Neenmax® (azadiractina), nas doses recomendadas para campo. No experimento em casa de vegetação, mudas de limão Cravo foram pulverizadas com os produtos e o patógeno P. lilacinum (4,76 x 107 conídios/mL) de três formas diferentes, primeiramente os agrotóxicos e depois o fungo; primeiro o fungo e posteriormente o agrotóxico e os dois simultaneamente. As mudas foram mantidas em estufa telada, e, após as pulverizações, 24, 48 e 72 horas, foi feita a contagem de colônias para determinar o número de unidades formadoras de colônia (UFC). Em relação aos ... / Abstract:Citrus blackfly is a threat to fruit, to be a plague with great potential for economic damage. The objective this study was to evaluate the pathogenicity and virulence of entomopathogenic fungi on citrus blackfly, Aleurocanthus woglumi (Hemiptera: Aleyrodidae) under laboratory conditions, and effect of different pesticides on the development of fungus Purpureocillium lilacinum in vitro and greenhouse. In pathogenicity test were used ten nymphs second and third instars of Aleurocanthus woglumi and fungi Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Lecanicillium muscarium, Fusarium proliferatum and Purpureocillium lilacinum. To determine the lethal concentration 50 (CL50) and median lethal time 50 (TL50) the fungus P. lilacinum was chosen, each treatment represented by a concentration 1 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108 and 5 x 108 conidia/mL. In compatibility tests the fungus P. lilacinum were tested products, Ampligo® (clorantraniliprole + lambda-cyhalothrin), Kohinor® (imidacloprid), Provado® (imidacloprid), Recop® (copper oxychloride), Iharol® (oil mineral), Talstar® (biphenthrin), Stimulate® (indole butyric acid + gibberellic acid + kinetin) e Neenmax® (azadirachtin), the recommended dose for field. The experiment in greenhouse, rangpur lemon seedlings were sprayed with the products and the pathogen P. lilacinum (4,76 x 107 conidia/mL) in three different ways, first the pesticide and then the fungus; first the fungus and then the pesticide and the two simultaneously. Seedlings were kept in screened greenhouse, and after spraying, 24, 48 and 72 hours, the colony count was done to determine the number of colony forming units (CFU). With respect to pathogenicity and virulence tests, it was concluded that the isolates of B. bassiana, M. anisopliae, L. muscarium, F. proliferatum and P. lilacinum were pathogenic to nymphs of A. woglumi and the evaluated concentrations of the ... / Doutor

Orientador: Gilberto José de Moraes / Banca: Antonio Carlos Lofego / Banca: Reinaldo José Fazzio Feres / Banca: Carlos Amadeu Leite de Oliveira / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Resumo: O Brasil é o maior produtor de citros no mundo e o maior exportador de suco concentrado de laranja. São Paulo é o maior estado produtor no país, com 80% da produção nacional. Dentre os grandes entraves para a exportação de frutas frescas estão os problemas sanitários, que impedem que a laranja seja exportada em maior quantidade e para um maior número de países. O ácaro da leprose dos citros, Brevipalpus phoenicis (Geijskes) e da falsa ferrugem Phyllocoptruta oleivora (Ashmead), figuram como alguns dos principais problemas sanitários desta cultura. O primeiro é mais importante por ser transmissor do vírus causador da doença. Dentre os ácaros predadores considerados eficientes contra B. phoenicis, destaca-se Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma. O uso de plantas de cobertura poderiam beneficiar os inimigos naturais dos ácaros que danificam os citros. A vegetação natural próxima ao pomar poderia servir como reservatório de inimigos naturais de diversas pragas dos citros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade de ácaros em um cultivo orgânico de citros, na vegetação natural próxima e em plantas comumente usadas como cobertura verde, assim como o efeito de algumas espécies de cobertura na flutuação dos ácaros mais importantes nas plantas cítricas. Foi avaliada ainda a capacidade de I. zuluagai desenvolver-se sobre o ácaro Tyrophagus putrescentiae (Schrank) (Acaridae). Foram coletados 12.409 ácaros, sendo 9.147 sobre os citros, 2.817 sobre as plantas da mata natural e 445 sobre as plantas de cobertura. Dentre os ácaros coletados em citros, B. phoenicis foi a espécie mais abundante, seguida por I. zuluagai. Bauhinia forficata Link, Guarea guidonia (L.), Guazuma sp., Tabernaemontana sp. e Psidium guajava L. destacaram-se como hospedeiras de I. zuluagai. Dentre as coberturas, Canavalia ensiformis (L.) e Ageratum conyzoides L. destacaram-se como... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brazil is the largest citrus producer in the world and the larger exporting country of orange juice. São Paulo is the largest producing state in the country, with about 80% of the national production. Sanitary problems are some of the main obstacles to the Brazilian citriculture. The citrus leprosis mite, Brevipalpus phoenicis (Geijskes), and the citrus rust mite, Phyllocoptruta oleivora (Ashmead), are some of the main sanitary problem of citrus production. The former is mostly important as a vector of the leprosis virus. Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma is considered one of the most efficient predators of B. phoenicis. The use of cover crops may benefit the natural enemies of pest species. Patches of natural vegetation near citrus groves may serve as reservoirs of natural enemies. The objective of this work was to evaluate the diversity of mites in an organic citrus grove, in the surrounding natural vegetation and on plants commonly used as cover crops, as well as the effect of some cover crops on the fluctuation of the most important mites on citrus plants. In addition, the ability of I. zuluagai to develop on the mite Tyrophagus putrescentiae (Schrank) (Acaridae) was evaluated. A total of 12,409 mites was collected, 9,147 of which on citrus, 2,817 on plants of the natural vegetation and 445 on plants of the cover crops. B. phoenicis was the most abundant species on citrus, followed by I. zuluagai. Bauhinia forficata Link, Guarea guidonia (L.), Guazuma sp., Tabernaemontana sp. and Psidium guajava L. were some of the most important reservoirs of I. zuluagai. Among the cover crops, Canavalia ensiformes (L.) and Ageratum conyzoides L. were good reservoirs of the same mite. Among mites collected on the natural vegetation, 1,182 were predators, 985 of variable feeding habits and 650 were phytophagous. Among species collected on the cover crops, 255 were predators,... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-10Bitstream added on 2014-06-13T19:25:21Z : No. of bitstreams: 1 mattos_lpv_dr_botfca.pdf: 1675965 bytes, checksum: 3faf029e6aef13589d4485a2b0a651ee (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Penicillium digitatum, agente causador do bolor verde, e Guignardia citricarpa, agente causador da mancha preta, depreciam os frutos citricos. O controle desses patógenos em frutos é realizado com fungicidas sintéticos. Devido a preocupação da sociedade com os riscos de contaminação ambiental, intoxicação humana principalmente infantil e animal e ao surgimento de isolados fúngicos resistentes aos fungicidas sintéticos, estão em desenvolvimento técnicas alternativas aos fungicidas para uma agricultura mais sustentável. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos de óleos essenciais e fixos e dos agentes de biocontrole no controle de P. digitatum e G. citricarpa em frutos laranja Pêra em pós- colheita. Assim, foram testados os óleos fixos de Allium sativum, Copaifera langsdorffii, Azadirachta indica; e os óleos essenciais de Pogostemon cablin, Mentha arvensis, Eucalyptus spp., Cymbopogon citratus, Ocimum basilicum var. Maria bonita, Romarinus officinalis, Lippia sidoides, Zingiber officinale, Citrus aurantifolia, Piper aduncum e Ocimum basilicum. Além dos óleos, também foram estudados os seguintes agentes de biocontrole: Bacillus subtilis (Serenade®), Bacillus subtilis e Bacillus lichiniformes (Nemix®), Pichia guilliermondii (L29), Sporobolomyces roseus (L41), Rhodotorula mucilagenosa (L17), Sporodiobolus pararoseus, Pichia sp. (L4-1), Debaryomyces hansenii (L62), Pichia membranifaciens (L21) e uma bactéria isolada da laranja. Tanto os agentes de biocontrole, quanto os óleos foram testados in vivo e in vitro contra os dois patógenos. Para a avaliação da atividade dos óleos essenciais e dos antagonistas in vivo, no controle de P. digitatum, foram utilizadas laranjas Pêra. Cada fruto foi ferido em dois pontos opostos, na região equatorial, atingindo a região do albedo. Após o ferimento, os frutos foram inoculados com 20 μL da suspensão de conídios... / Penicillium digitatum, causal agent of green mold, and Guignardia citricarpa causal agent of black spot. Detracts the citrus fruit, the control of these pathogens is made with synthetic fungicides. Due to concern about the risks of environmental contamination, human, mainly children and animal toxicity and the emergence of fungal isolates resistant to fungicides, various researches has been development to obtain alternative techniques for a fungicides. The objectives of this work was to evaluate the effetives fix and essencial oils and biocontrol agents for the control of P. digitatum and G. citricarpa on Pera orange fruits in postharvest. Thus, were tested the fixed oils from Allium sativum, Copaifera langsdorffii, Eucalyptus spp. Azadirachta indica,and the essential oils of Pogostemon cablin, Mentha arvensis, Cymbopogon citratus, Ocimum basilicum var. Maria bonita, Romarinus officinalis, Lippia sidoides, Zingiber officinale, Citrus aurantifolia, Piper aduncum and Ocimum basilicum. In addition were also studied the following biocontrol agents: Bacillus subtilis (Serenade ®), Bacillus subtilis and Bacillus lichiniformes (Nemix ®), Pichia guilliermondii (L29), Sporobolomyces roseus (L41), Rhodotorula mucilagenosa (L17), Sporodiobolus pararoseus, Pichia spp. (L4-1), Derbaryomyces hansenii (L62), Pichia membranifaciens (L21) and a bacterium isolate of the orange. Both biocontrol agents as the oils, were tested in vivo and in vitro against both pathogens. For the assessment of activity of essential oils and antagonists in vivo in controlling P. digitatum were used Pera orange. Each fruit was wounded in two opposite points in the equatorial region, reaching the albedo. After the injury, the fruits were inoculated with 20 mL of conidial suspension of P. digitatum (105 conidia / mL), followed by immersion in a suspension of cells of each biocontrol agent in the concentration: ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:37:24Z : No. of bitstreams: 1 gabia_aa_me_botfca.pdf: 416606 bytes, checksum: 894930ec055a3224888bc51077855bce (MD5) / Tylenchulus semipenetrans é o principal nematoide em citros, causando perdas que variam de 10 a 30%. Está amplamente disseminado nos pomares citrícolas do Brasil. Para determinar o nível populacional desse nematoide, que varia durante o ano, diferentes variáveis são utilizadas. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a flutuação populacional do nematoide T. semipenetrans em pomar de laranja ‘Pera Rio’ enxertada em limoeiro ‘Cravo’, correlacionar a população do nematoide no final de cada estação com a produção e correlacionar o número de fêmeas na raiz com o número de juvenis encontrados nas amostras de solo e raiz. As amostragens foram realizadas no final de cada estação climática, durante a safra 2011/2012, numa profundidade de 0-30 cm, na projeção da copa de 10 plantas sem sintomas, 10 com sintomas e as adjacentes das sintomáticas, totalizando 60 plantas. Os nematoides presentes no solo foram extraídos pela metodologia de flutuação em centrifuga e das raízes pela técnica do liquidificador e centrifugação. Os frutos de cada planta foram colhidos separadamente e pesados. Para contagem das fêmeas, 1g de raiz de cada amostra foi submetida à coloração para facilitar a contagem. O número de nematoides no solo e na raiz foram plotados em gráficos e correlacionados com dados de temperatura e precipitação pluviométrica pela análise de Pearson; os dados de peso de fruto por planta e número de nematoides em solo... / Tylenchulus semipenetrans is the main nematodes in citrus trees, causing losses ranging from 10 to 30%. It is widespread in the citrus orchards of Brazil. To determine the level of nematode population which varies over the year, different variable are used. Therefore the objective of this study was to evaluate the fluctuation of nematode T. semipenetrans on acreage with orange ‘Pera Rio’ grafted on ‘Rangpur’, correlate the nematode population at the end of each season with the production and correlate the number of females in the root with the number of juveniles found in soil samples and root . Samples were taken at the end of each season climate, during the 2011/2012 season, at a depth of 0-30 cm, the crown projection of 10 plants without symptoms, 10 with symptoms and symptomatic adjacent plant, totaling 60 plants. The nematodes in the soil were extracted by centrifugal flotation method and the technique of the roots of the blender and centrifugation. The fruits of each plant were harvested and weighed separately. To count the number of females in the roots, 1g of each root sample was colored and subsequently dried. The number of nematodes in soil and roots were plotted on graphs and correlated with data on temperature and rainfall by Pearson analysis, the data for fruit weight per plant and the number of nematodes in soil and roots, on each season, were transformed and analyzed by Spearman correlation, considering both the significance level of 5%. The data on soil nematode, root nematode, sum of soil and root nematode and females per gram of root were analyzed by Pearson correlation analysis and subsequent to the correlation matrix. In the region of Botucatu, central western state of São Paulo, the largest population level of the citrus nematode occurred in late winter and lowest in late spring, and the nematodes... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O Brasil é considerado o maior produtor e exportador citros. Embora competitiva, a citricultura brasileira é bastante vulnerável, em função da constante ameaça de pragas e doenças que, podem, em determinadas circunstâncias, tornaremse fatores limitantes a produção. Dentre as pragas de importância econômica para a citricultura, o ácaro Brevipalpus phoenicis (Geijskes) é apontado como uma das principais, sendo responsável por uma parcela significativa do custo da produção de citros no Brasil, devido à necessidade de freqüentes aplicações de acaricidas para o seu controle. Dentre os agentes de controle biológico, os ácaros das famílias Phytoseiidae e Stigmaeidae são os de maior importância. Os ácaros dessas famílias coexistem em diversas culturas, e freqüentemente promovem o controle biológico de ácaros-praga e interagem entre si através de competição por presas ou pela predação interespecífica. Assim sendo, o objetivo da pesquisa foi conhecer as possíveis interações entre os membros das diferentes espécies de ácaros presentes em pomares cítricos do Estado de São Paulo, além de avaliar o efeito de agrotóxicos sobre ácaros predadores (Phytoseiidae e Stigmaeidae) encontrados em citros, e estudar a viabilidade de uso de Neoseiulus californicus (McGregor) para o controle de B. phoenicis na cultura. Um dos possíveis problemas relacionados à liberação de ácaros predadores visando ao controle de ácaros-praga seria o fato de que estes inimigos naturais poderiam ser mortos devido à aplicação de agrotóxicos. A introdução de populações de fitoseídeos tolerantes ou resistentes a produtos químicos em agroecossistemas citrícolas, possibilitaria a manutenção de um ambiente favorável ao controle biológico exercido pelos predadores, mesmo diante da aplicação de agrotóxicos, sem o efeito negativo sobre a mortalidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brazil is considered the world's largest citrus grower and orange juice exporter. Although it is competitive, the Brazilian citriculture is vulnerable, in function of constant threats from pests and diseases, which, in certain circumstances, may become limiting factors to the production. Among the pests of economic importance, the mite Brevipalpus phoenicis (Geijskes) is considered one of the main pests, responsible for a significant portion of citrus production cost in Brazil, because of the necessity of frequent acaricide applications for its control. Among the biological control agents, the mites of the families Phytoseiidae and Stigmaeidae are the most important. The mites of these families coexist on several crops, and frequently promote the biological control of pest mites and interact with each other through the competition for prey or by interspecific predation. Therefore, the objective of this research was to understand the possible interactions among members of different mite species present in citrus orchards in the State of São Paulo, as well as to evaluate the effect of pesticides on the predaceous mites found on citrus; and to study the viability of the use of Neoseiulus californicus (McGregor) for the control of B. phoenicis on this crop. One of the possible problems related to predaceous mite releases aiming at the control of pest mites is the fact that these natural enemies can be killed by the applications of pesticides. The introduction of populations of phytoseiid mites which are resistant or tolerant to pesticides in citrus agroecosystems may contribute to keep a favorable environment for the biological control exerted by the predators, even in conditions of pesticide applications, without the negative effect on the mortality of these natural enemies. A strain of N. californicus, collected from a strawberry field in Atibaia County, State of São Paulo, has shown... Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Carlos Amadeu Leite de Oliveira / Coorientador: Mário Eidi Sato / Banca: Celso Omoto / Banca: André Luiz Matioli / Banca: Francisco Jorge Cividanes / Banca: Jeferson Luiz de Carvalho Mineiro / Doutor

Orientador: Kátia Cristina Kupper / Banca: Fabio Augusto / Banca: Alessandra Sussulini / Banca: Antonio de Góes / Banca: Jackson Antonio Marcondes de Souza / Resumo: O setor citrícola é o maior produtor de frutos no mundo, porém, encontra-se ameaçado por diversos patógenos, dentre esses, o fungo Phyllosticta citricarpa, agente causal da mancha preta dos citros. Como alternativa à utilização de fungicidas sintéticos para o controle do patógeno, o controle biológico, utilizando bactérias do gênero Bacillus, apresenta destaque. Tais microrganismos possibilitam o biocontrole pela produção de compostos orgânicos voláteis ou não voláteis. Sendo assim, este trabalho teve por objetivos: identificar os isolados de Bacillus spp. por meio de técnicas moleculares; avaliar a produção de compostos orgânicos voláteis produzidos por Bacillus spp. em diferentes meios de cultura; verificar os seus efeitos na evolução dos sintomas da doença em frutos de laranja, na morfologia de P. citricarpa em lesões de mancha preta e na indução de resistência, identificar os compostos voláteis por cromatografia gasosa unidimensional e finalmente, avaliar o efeito de diferentes meios de cultura no antagonismo e metabolismo secundário dos isolados de Bacillus. Os isolados bacterianos foram identificados como pertencentes às espécies de Bacillus subtilis, B. amyloliquefaciens e B. methylotrophicus. Os resultados mostraram que houve maior controle do patógeno, em decorrência da produção de voláteis, quando se utilizou os meios triptona de soja ágar (TSA) e caldo de triptona (TSB) para cultivo da bactéria, apresentando valores de inibição da colônia do fungo de até 73%. Com r... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The citrus sector is the largest producer of fruits in the world, but it is threatened by several pathogens, among them Phyllosticta citricarpa fungus, causal agent of the citrus black spot. As an alternative to the use of synthetic fungicides to control the pathogen, the biological control, using bacteria of the genus Bacillus, is highlighted. Such microorganisms enable biocontrol by the production of volatile or non-volatile organic compounds. Therefore, this work had as objectives: to identify the isolates of Bacillus spp. by means of molecular techniques; to evaluate the production of volatile organic compounds produced by Bacillus spp. in different culture media; to verify its effects on the evolution of orange disease symptoms, P. citricarpa morphology in black spot lesions and induction of resistance, to identify the volatile compounds by one-dimensional gas chromatography and, finally, to evaluate the effect of different culture in the antagonism and secondary metabolism of Bacillus isolates. The bacterial isolates were identified as belonging to the species of Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens and Bacillus methylotrophicus. The results showed that there was greater control of the pathogen, due to the volatile production, when tryptone broth (TSA) and tryptone broth (TSB) were used to culture the bacteria, presenting inhibition values of the fungus colony up to 73%. With regard to the effect of volatile compounds on the evolution of disease symptoms, the best results in terms of inhibition (86%) of freckles that progressed to hard spots were obtained with ACB-65 and ACB-73, when cultured in TSB culture medium. Such antagonists have caused deformations in the hyphae of the pathogen, which may explain the non-evolution of the disease symptoms, as previously reported. The volatiles of Ba... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O psilídeo Diaphorina citri Kuwayama tornou-se nos últimos anos, uma das mais importantes pragas na cultura de citros, principalmente pelos prejuízos causados às plantas devido à transmissão da bactéria causadora da doença Huanglongbing (HLB) ou Greening. Com a finalidade de estudar a distribuição espacial de ninfas e adultos desta praga, instalou-se um experimento em 2 áreas de citros com histórico de ocorrência de HLB, no município de Matão, região central do Estado de São Paulo, uma com plantas de 4 anos e outra com plantas de 12 anos de idade. Para estudo da agregação da população nas plantas, foram utilizados os seguintes índices de dispersão: razão variância/média (I), índice de Morisita (Id), coeficiente de Green (Cx) e expoente k da distribuição binomial negativa para cada amostragem. A distribuição binomial negativa foi o modelo mais adequado para representar a distribuição espacial do psilídeo na cultura de citros, tanto para ninfas como para adultos. Através da análise destes índices, verificou-se que, na maioria das amostragens, as ninfas encontradas nas brotações e os adultos capturados nas armadilhas apresentaram distribuição agregada. Foram desenvolvidos planos de amostragem seqüencial para ninfas e adultos em região com e sem HLB, e os números máximos de amostras esperados para se tomar a decisão foram de 264 e 83 para ninfas, em regiões com e sem a doença, e de 184 e 150 amostras para adultos, em regiões com e sem a doença. / Abstract: The psyllid Diaphorina citri Kuwayama is one of the most important pests of citrus, mostly because of plant damage due to transmission of the bacterium that causes Huanglongbing (HLB) or Greening disease. The experiment was carried out in 2 sweet orange orchards with previous HLB occurrence in Matão (central region of the State of São Paulo, Brazil), in plants with 4 and 12 years of age, in order to study the spatial distribution of nymphs and adults of this pest. The following dispersion indices were used to study pest aggregation in the citrus plants: variance/mean relationship (I), index of Morisita (Id), coefficient of Green (Cx), and the k exponent of negative binomial distribution for each sampling. The negative binomial distribution was the most representative spatial distribution of this psyllid in citrus, for both nymphs and adults. The analysis of these indices showed that, for most samplings, psyllid nymphs found in branches and adults caught in traps presented an aggregated distribution. Sequential sampling plans were developed for nymphs and adults in regions with and without HLB, and the maximum number of samples for decision making was 264 and 83 samples for nymphs in regions with and without the disease, and, 184 and 150 samples for adults, in regions with and without the disease, respectively. / Orientador: José Carlos Barbosa / Coorientador: Pedro Takao Yamamoto / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Wilson Itamar Maruyama / Banca: Antonio Baldo Geraldo Martins / Banca: Eduardo Sanches Stuchi / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-22Bitstream added on 2014-06-13T18:53:21Z : No. of bitstreams: 1 sumares_jap_me_arafcf.pdf: 902012 bytes, checksum: 885db9e62dd6f2315568900f3dbc8407 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O cancro cítrico asiático, causado pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), é uma das doenças mais importantes dos Citrus e de ocorrência mundial. Esta doença constitui um grande risco para a citricultura brasileira uma vez que os sintomas podem diminuir o valor de mercado das frutas, e, por vezes, até impedir a sua comercialização. Neste trabalho determinamos a influência da temperatura no crescimento e fisiologia de Xac, com especial atenção à temperatura da morte bacteriana e sua influência sobre a competência infecciosa da bactéria. Descobrimos que a taxa de crescimento de Xac é de forma geral influenciada por altas temperaturas. Notamos uma diminuição do crescimento quando bactérias foram submetidas a temperaturas superiores àquela considerada ótima para cultivo controlado (30 ºC). Bactérias expostas a temperaturas de até 37 ºC foram perfeitamente competentes para infectar o hospedeiro citros, além de recobrarem perfil de crescimento padrão quando retornadas a temperatura de 30 ºC. Tratamentos com temperaturas superiores a 40 ºC promovem alterações fisiológicas irreversíveis e acima de 42 ºC não foi possível resgatar células capazes de induzir sintomas de cancro cítrico, sendo, pois, designadas temperatura de morte. Temperaturas diferentes de 30 ºC promoveram aumento de tamanho celular, sugestivo de perturbação de processos essenciais de replicação/segregação cromossômica e/ou divisão celular. Para investigar a influência do tratamento térmico em tais processos, submetemos linhagens de Xac com marcação para centrômero e septo bacterianos a tratamentos com diferentes temperaturas, seguindo-se avaliação por microscopia de fluorescência. Tratamento... / Asiatic citrus canker, caused by Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), is one of the most important Citrus diseases and occurs worldwide. This disease poses a major risk to the Brazilian citrus industry since the symptoms may decrease the market value of the fruit, and restrict its commercialization. In this work we have determined the influence of temperature on growth and physiology of Xac, with special attention to the temperature of bacterial death and its influence on the bacterial infectious competence. We have found that the growth rate of Xac was generally affected by high temperatures. We have noticed a decrease of bacterial growth when exposed to temperatures higher than that considered optimal for controlled cultivation (30 ºC). Bacteria exposed to temperatures up to 37 ºC were fully competent to infect the citrus host, and regain ability to grow when temperature was returned to 30 ºC. Treatments at temperatures above 40 ºC promote irreversible physiological chances. Above 42 ºC it has not been possible to recover viable cells that could produce symptoms of citrus canker, and therefore, it was designated death temperature. Temperatures different from 30 ºC caused an increase in cell size, suggesting disturbance on essential biological processes, as chromosomal replication/segregation and/or cell division. To investigate the influence of heat treatment in such processes, we have submitted mutant Xac strains, marked for bacterial centromere and septum, to treatments at different temperatures, followed by fluorescence microscopy analysis. Treatment at 37 ° C for 6 hours did not affect... (Complete abstract click electronic access below)