Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:42:23Z : No. of bitstreams: 1 nunes_ma_dr_jabo.pdf: 2056446 bytes, checksum: 2c54de2b440ec113fde3178a2d46cea8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve como objetivo investigar a possibilidade de plantas utilizadas como cercas-vivas e quebra-ventos, bem como plantas invasoras comuns em pomares cítricos, hospedarem o Citrus leprosis virus, cytoplasmic type (CiLV-C) e servirem de inóculo para os citros. Em casa-de-vegetação, ácaros provenientes de uma criação-estoque sobre frutos de laranja Pêra, com sintomas de leprose, foram transferidos para folhas isoladas por barreira adesiva de: hibisco (Hibiscus rosa-sinensis L.), malvavisco (Malvaviscus arboreus Cav.), grevílea (Grevilea robusta A. Cunn.), urucum (Bixa orellana L.), trapoeraba (Commelina benghalensis L.) e laranja [Citrus sinensis (L.) (Osbeck)]. Após 90 dias da infestação, os ácaros descendentes foram transferidos para mudas de laranja “Natal”. Amostras de tecidos das plantas testes se mostraram positivos para todas as plantas inoculadas com ácaros virulíferos por análise de RT-PCR utilizando-se de “primers” específicos para detecção do CiLV-C e foram verificadas a presença de partículas virais em hibisco, laranja, malvavisco, e trapoeraba em análise de Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Em campo, laranja, malvavisco, grevílea e sansão-do-campo foram plantados próximos a plantas-teste de laranja e infestados com ácaros virulíferos. Essas espécies foram avaliadas quanto à presença de ácaros, à incidência e à severidade da doença. Foi possível observar que a incidência e a severidade da leprose foram maiores nas plantas de laranja que estavam próximas às laranjeiras infestadas, seguidas daquelas próximas a malvavisco e sansão-do-campo, que diferiram estatisticamente de grevílea. Estes resultados indicam que as plantas analisadas podem ser importantes na epidemiologia da doença. / The objective of this work was to investigate the possibility that hedgerows, windbreaks, and weeds normally found in citrus orchards could host Citrus leprosis virus, cytoplasmic type (CiLV-C), serving as its source of inoculum. In greenhouse, mites reared onto sweet orange fruits var. “Pêra” symptomatic for leprosis were transferred to leaves, isolated by adhesive barrier, of Hibiscus rosasinensis, Malvaviscus arboreus, Grevilea robusta, Bixa orellana, Commelina benghalensis and Citrus sinensis. After 90 days of infestation, the descendant mites were transferred to Natal sweet orange plants to verify the transferability of the virus back to citrus. Non-viruliferous mites, which had no feed access to diseased tissue, were used as control. Localized lesions (chlorotic or necrotic spots, ringspots) developed in almost all tested plants. Tissue samples of plants infested with viruliferous and non-viruliferous mites were submitted to RT-PCR with specific primers to CiLV-C. Transmission electron microscopy analyses detected the presence of viral inclusions in C. benghalensis H. rosa-sinensis, M. arboreus, and C. sinensis. In experimental groves, C. sinensis, G. robusta, M. arboreus and Mimosa caesalpinaefolia were planted and infested with viruliferous mites around citrus plants. There was a clear variation in leprosis incidence and severity observed in sweet orange plants depending on the alternative host cultivated beside them. The higher intensity of the disease was observed in sweet orange plants that were close to C. sinensis, followed by those close to M. arboreus and Mimosa caesalpinaefolia. The intensity of leprosis in sweet oranges planted near G. robusta was significantly lower than in those cultivated close to the other hosts. These results suggest that the alternative hosts tested can play a role in the epidemiology of the disease, serving as sources of inoculum of the virus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-20Bitstream added on 2014-06-13T20:22:56Z : No. of bitstreams: 1 silva_mz_dr_jabo.pdf: 519881 bytes, checksum: 7fd0c464d822d7c709bf01217e3de340 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Brasil é considerado o maior produtor e exportador citros. Embora competitiva, a citricultura brasileira é bastante vulnerável, em função da constante ameaça de pragas e doenças que, podem, em determinadas circunstâncias, tornaremse fatores limitantes a produção. Dentre as pragas de importância econômica para a citricultura, o ácaro Brevipalpus phoenicis (Geijskes) é apontado como uma das principais, sendo responsável por uma parcela significativa do custo da produção de citros no Brasil, devido à necessidade de freqüentes aplicações de acaricidas para o seu controle. Dentre os agentes de controle biológico, os ácaros das famílias Phytoseiidae e Stigmaeidae são os de maior importância. Os ácaros dessas famílias coexistem em diversas culturas, e freqüentemente promovem o controle biológico de ácaros-praga e interagem entre si através de competição por presas ou pela predação interespecífica. Assim sendo, o objetivo da pesquisa foi conhecer as possíveis interações entre os membros das diferentes espécies de ácaros presentes em pomares cítricos do Estado de São Paulo, além de avaliar o efeito de agrotóxicos sobre ácaros predadores (Phytoseiidae e Stigmaeidae) encontrados em citros, e estudar a viabilidade de uso de Neoseiulus californicus (McGregor) para o controle de B. phoenicis na cultura. Um dos possíveis problemas relacionados à liberação de ácaros predadores visando ao controle de ácaros-praga seria o fato de que estes inimigos naturais poderiam ser mortos devido à aplicação de agrotóxicos. A introdução de populações de fitoseídeos tolerantes ou resistentes a produtos químicos em agroecossistemas citrícolas, possibilitaria a manutenção de um ambiente favorável ao controle biológico exercido pelos predadores, mesmo diante da aplicação de agrotóxicos, sem o efeito negativo sobre a mortalidade... / Brazil is considered the world's largest citrus grower and orange juice exporter. Although it is competitive, the Brazilian citriculture is vulnerable, in function of constant threats from pests and diseases, which, in certain circumstances, may become limiting factors to the production. Among the pests of economic importance, the mite Brevipalpus phoenicis (Geijskes) is considered one of the main pests, responsible for a significant portion of citrus production cost in Brazil, because of the necessity of frequent acaricide applications for its control. Among the biological control agents, the mites of the families Phytoseiidae and Stigmaeidae are the most important. The mites of these families coexist on several crops, and frequently promote the biological control of pest mites and interact with each other through the competition for prey or by interspecific predation. Therefore, the objective of this research was to understand the possible interactions among members of different mite species present in citrus orchards in the State of São Paulo, as well as to evaluate the effect of pesticides on the predaceous mites found on citrus; and to study the viability of the use of Neoseiulus californicus (McGregor) for the control of B. phoenicis on this crop. One of the possible problems related to predaceous mite releases aiming at the control of pest mites is the fact that these natural enemies can be killed by the applications of pesticides. The introduction of populations of phytoseiid mites which are resistant or tolerant to pesticides in citrus agroecosystems may contribute to keep a favorable environment for the biological control exerted by the predators, even in conditions of pesticide applications, without the negative effect on the mortality of these natural enemies. A strain of N. californicus, collected from a strawberry field in Atibaia County, State of São Paulo, has shown... Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-21Bitstream added on 2014-06-13T20:42:37Z : No. of bitstreams: 1 albuquerque_fa_dr_jabo.pdf: 470996 bytes, checksum: 65c1e56c63272ed6992c4190eec6a819 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Brasil é o maior produtor de citros no mundo e o maior exportador de suco concentrado de laranja. São Paulo é o maior estado produtor no país, com 80% da produção nacional. Dentre os grandes entraves para a exportação de frutas frescas estão os problemas sanitários, que impedem que a laranja seja exportada em maior quantidade e para um maior número de países. O ácaro da leprose dos citros, Brevipalpus phoenicis (Geijskes) e da falsa ferrugem Phyllocoptruta oleivora (Ashmead), figuram como alguns dos principais problemas sanitários desta cultura. O primeiro é mais importante por ser transmissor do vírus causador da doença. Dentre os ácaros predadores considerados eficientes contra B. phoenicis, destaca-se Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma. O uso de plantas de cobertura poderiam beneficiar os inimigos naturais dos ácaros que danificam os citros. A vegetação natural próxima ao pomar poderia servir como reservatório de inimigos naturais de diversas pragas dos citros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade de ácaros em um cultivo orgânico de citros, na vegetação natural próxima e em plantas comumente usadas como cobertura verde, assim como o efeito de algumas espécies de cobertura na flutuação dos ácaros mais importantes nas plantas cítricas. Foi avaliada ainda a capacidade de I. zuluagai desenvolver-se sobre o ácaro Tyrophagus putrescentiae (Schrank) (Acaridae). Foram coletados 12.409 ácaros, sendo 9.147 sobre os citros, 2.817 sobre as plantas da mata natural e 445 sobre as plantas de cobertura. Dentre os ácaros coletados em citros, B. phoenicis foi a espécie mais abundante, seguida por I. zuluagai. Bauhinia forficata Link, Guarea guidonia (L.), Guazuma sp., Tabernaemontana sp. e Psidium guajava L. destacaram-se como hospedeiras de I. zuluagai. Dentre as coberturas, Canavalia ensiformis (L.) e Ageratum conyzoides L. destacaram-se como... / Brazil is the largest citrus producer in the world and the larger exporting country of orange juice. São Paulo is the largest producing state in the country, with about 80% of the national production. Sanitary problems are some of the main obstacles to the Brazilian citriculture. The citrus leprosis mite, Brevipalpus phoenicis (Geijskes), and the citrus rust mite, Phyllocoptruta oleivora (Ashmead), are some of the main sanitary problem of citrus production. The former is mostly important as a vector of the leprosis virus. Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma is considered one of the most efficient predators of B. phoenicis. The use of cover crops may benefit the natural enemies of pest species. Patches of natural vegetation near citrus groves may serve as reservoirs of natural enemies. The objective of this work was to evaluate the diversity of mites in an organic citrus grove, in the surrounding natural vegetation and on plants commonly used as cover crops, as well as the effect of some cover crops on the fluctuation of the most important mites on citrus plants. In addition, the ability of I. zuluagai to develop on the mite Tyrophagus putrescentiae (Schrank) (Acaridae) was evaluated. A total of 12,409 mites was collected, 9,147 of which on citrus, 2,817 on plants of the natural vegetation and 445 on plants of the cover crops. B. phoenicis was the most abundant species on citrus, followed by I. zuluagai. Bauhinia forficata Link, Guarea guidonia (L.), Guazuma sp., Tabernaemontana sp. and Psidium guajava L. were some of the most important reservoirs of I. zuluagai. Among the cover crops, Canavalia ensiformes (L.) and Ageratum conyzoides L. were good reservoirs of the same mite. Among mites collected on the natural vegetation, 1,182 were predators, 985 of variable feeding habits and 650 were phytophagous. Among species collected on the cover crops, 255 were predators,... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-08Bitstream added on 2014-06-13T20:03:24Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_cm_dr_botib.pdf: 1799503 bytes, checksum: 1adc30b7fcbc5dada5bc01910ac1171b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A citricultura brasileira responde por 85% das exportações de suco concentrado do mundo, mesmo enfrentando graves problemas de ordem fitossanitária. Dentre as doenças que mais afetam sua produtividade encontra-se a clorose variegada do citros (CVC), causada pela Xylella fastidiosa. Cultivares dentro das espécies de Citrus apresentam respostas diferentes em relação à susceptibilidade à CVC. Enquanto cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osb) são bastante suscetíveis, as tangerinas (Citrus reticulata Blanco) por sua vez são consideradas tolerantes. Resultados prévios do nosso grupo sugerem que a resistência deve estar efetivamente envolvida com a ativação de vias de sinalização, não sendo somente consequência de menor bloqueio dos vasos do xilema. Portanto, a hipótese desse trabalho é que a resistência da tangerina Poncan e a suscetibilidade de laranja doce à CVC pode ser comparada através da avaliação da expressão diferencial de genes durante o processo de infecção. Desse modo, o objetivo do trabalho foi avaliar a expressão de genes dessas duas espécies submetidas à infecção pela bactéria. Para tanto plantas de laranja Pera e tangerina Poncan foram desafiadas com X. fastidiosa e as coletas das folhas infectadas e seus respectivos controles feitas em diferentes tempos (1, 7, 14 e 21 dias). Esse material foi utilizado para extração de DNA total que foi usado na confirmação, por RT-qPCR, da presença da bactéria. Após essa verificação, o RNA foi extraído em pools para a construção das bibliotecas subtrativas supressivas (SSHs). Foram feitas seis bibliotecas, porém, não foram obtidas sequencias de qualidade. Em função do baixo rendimento das SSHs, optou-se por proceder as análises com RNA-seq utilizando tecidos xilemáticos de tangerina Poncan, com um dia após... / The Brazilian citrus industry accounts for 85% of exports of concentrated juice in the world despite facing serious plant health problems. Among the main diseases that affect its productivity is the citrus variegated chlorosis (CVC), caused by Xylella fastidiosa. Citrus species present different responses in relation to susceptibility to CVC. While sweet orange (Citrus sinensis L. Osb) is very susceptible, mandarin (Citrus reticulata Blanco) is considered tolerant. Previous results from our group suggest that this tolerance observed in mandarin effectively involves activation of signaling pathways and is not only consequence of limited blockage of the xylem vessels. Therefore, the hypothesis of this study is that the tolerance of Ponkan mandarin and susceptibility of sweet orange to CVC can be compared evaluating the differential expression of genes during the infection process, being that the objective of this study. For that, Ponkan mandarin and sweet orange plants were challenged with X. fastidiosa. Infected/non-infected leaves were collected at different times (1, 7, 14, and 21 days). This material was used for extraction of total DNA, which was used for confirming the presence of bacteria by RT-qPCR. After this verification, the RNA was extracted in pools for the construction of suppressive subtractive libraries (SSHs). Six libraries were prepared, but good quality sequences were not obtained. Due to the low efficiency of SSHs, it was decided to proceed with RNA-seq analysis using xylem tissues of mandarin Ponkan, one day after infection with X. fastidiosa. In this analysis it was obtained 35,344,265 transcripts for the non-infected library and 37,326,339 for the infected one. These transcripts were mapped in the whole reference genome of Citrus clementine by using TopHat software. The contigs generated... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Henrique Ferreira / Coorientador: José Belasque Júnior / Banca: Franklin Behlau / Banca: Luís Octávio Regasini / Resumo: O cancro cítrico asiático, causado pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), é uma das doenças mais importantes dos Citrus e de ocorrência mundial. Esta doença constitui um grande risco para a citricultura brasileira uma vez que os sintomas podem diminuir o valor de mercado das frutas, e, por vezes, até impedir a sua comercialização. Neste trabalho determinamos a influência da temperatura no crescimento e fisiologia de Xac, com especial atenção à temperatura da morte bacteriana e sua influência sobre a competência infecciosa da bactéria. Descobrimos que a taxa de crescimento de Xac é de forma geral influenciada por altas temperaturas. Notamos uma diminuição do crescimento quando bactérias foram submetidas a temperaturas superiores àquela considerada ótima para cultivo controlado (30 ºC). Bactérias expostas a temperaturas de até 37 ºC foram perfeitamente competentes para infectar o hospedeiro citros, além de recobrarem perfil de crescimento padrão quando retornadas a temperatura de 30 ºC. Tratamentos com temperaturas superiores a 40 ºC promovem alterações fisiológicas irreversíveis e acima de 42 ºC não foi possível resgatar células capazes de induzir sintomas de cancro cítrico, sendo, pois, designadas temperatura de morte. Temperaturas diferentes de 30 ºC promoveram aumento de tamanho celular, sugestivo de perturbação de processos essenciais de replicação/segregação cromossômica e/ou divisão celular. Para investigar a influência do tratamento térmico em tais processos, submetemos linhagens de Xac com marcação para centrômero e septo bacterianos a tratamentos com diferentes temperaturas, seguindo-se avaliação por microscopia de fluorescência. Tratamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Asiatic citrus canker, caused by Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), is one of the most important Citrus diseases and occurs worldwide. This disease poses a major risk to the Brazilian citrus industry since the symptoms may decrease the market value of the fruit, and restrict its commercialization. In this work we have determined the influence of temperature on growth and physiology of Xac, with special attention to the temperature of bacterial death and its influence on the bacterial infectious competence. We have found that the growth rate of Xac was generally affected by high temperatures. We have noticed a decrease of bacterial growth when exposed to temperatures higher than that considered optimal for controlled cultivation (30 ºC). Bacteria exposed to temperatures up to 37 ºC were fully competent to infect the citrus host, and regain ability to grow when temperature was returned to 30 ºC. Treatments at temperatures above 40 ºC promote irreversible physiological chances. Above 42 ºC it has not been possible to recover viable cells that could produce symptoms of citrus canker, and therefore, it was designated death temperature. Temperatures different from 30 ºC caused an increase in cell size, suggesting disturbance on essential biological processes, as chromosomal replication/segregation and/or cell division. To investigate the influence of heat treatment in such processes, we have submitted mutant Xac strains, marked for bacterial centromere and septum, to treatments at different temperatures, followed by fluorescence microscopy analysis. Treatment at 37 ° C for 6 hours did not affect... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-17Bitstream added on 2014-06-13T19:07:15Z : No. of bitstreams: 1 scaloppi_emt_me_jabo.pdf: 528341 bytes, checksum: 71e51de59b07b72278f097a67670f2c4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embora o Brasil seja o maior produtor de laranja a nível mundial, a produção citrícola ressente-se de vários problemas de natureza fitossanitária, entre estes a mancha preta dos frutos cítricos, causada por Guignardia citricarpa. Esse fungo além de depreciar comercialmente os frutos, pode levar à queda precoce de mais de 80% da produção. O controle baseia-se no uso de fungicidas, sendo importante determinar o período curativo em que estes produtos estão sendo mais eficientes. Neste trabalho foi determinado o período curativo do pyraclostrobim e do carbendazim, em duas etapas fisiológicas do desenvolvimento dos frutos, sendo a primeira na fase de de queda de pétalas até a 8a semana, e a segunda repetindo-se o tratamento, porém a partir da 9a semana após a queda das pétalas. Para tal, procedeu-se o tratamento dos frutos com os fungicidas, os quais foram aplicados sob a forma de imersão, durante 1 minuto, sendo posteriormente ensacados com sacos de papel cristal, e mantidos assim até a 42a semana. Na primeira etapa, os níveis de incidência e severidade nos frutos tratados com fungicidas foram baixos até a 4a semana de exposição às infecções naturais, não diferindo estatisticamente entre si. Na segunda etapa, constatou-se maior eficiência do fungicida carbendazim, a qual se estendeu até a 6a semana de exposição. O pyraclostrobin, embora tenha se mostrado eficiente no controle da doença, manteve sua efetividade de forma mais consistente nas duas primeiras semanas de exposição. Admite-se que os fungicidas testados apresentaram excelente efeito curativo, resultados esses coerentes às respostas que têm sido observadas sob condições naturais de infecção. / Although Brazil is the largest world-wide orange producer, its production presents several disease problems, among these is the Citrus Black Spot (CBS) caused by Guignardia citricarpa. This fungs besides depreciating the fruits commercially can cause premature fall of more than 80% of the production. The control is based on the use of fungicides, being important to determine the healing period, in wich these products are more efficient. In the present work the healing period of pyraclostrobin and carbendazim was determined on two physiological stages of the fruits development, being the first in the petals fall stage until the 8th week and the second repeating the treatment, however starting from the 9th week after the petals fall. The fruits were treated with the fungicides, wich were applied on immersion form, during 1 minute, being after sacked with crystal paper bags and maintained like this until the 42nd weekend. In the first stage, the incidence levels and severity on the treated fruits were low until the 4th week of exposure to natural infections, presenting no statistic differences between then. In the second stage, the efficiency of carbendazim was larger, wich extended for 6 weeks of exposure. The pyraclostrobin, although has shown efficient in the disease control, maintained its effectiveness in a consistent form on the first two weeks. It is admitted that the tested fungicides presented excellent healing effect, corresponding to the results observed under natural conditions of infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-31Bitstream added on 2014-06-13T20:18:19Z : No. of bitstreams: 1 bellotte_jam_me_jabo.pdf: 523569 bytes, checksum: 592afd8fed1a89998777898d47c64765 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo foi desenvolvido em pomares de citros localizados em propriedade comercial na região de Rio Claro-SP e teve como objetivo a determinação do efeito de práticas culturais na redução das fontes de inóculo e, conseqüente diminuição da severidade da mancha preta dos frutos cítricos, causada por Guignardia citricarpa. Desenvolveram-se dois experimentos em áreas distintas. No primeiro ensaio, testou-se a influência de cultivos intercalares, amendoim forrageiro e capim coastcross e posterior roçagem da massa formada sob a copa de laranjeiras 'Natal', na flutuação populacional de ascósporos e na severidade da doença, enquanto que no segundo, foi avaliado o efeito de diferentes tratamentos [(1) uréia 12,5 g/litro; (2) nitrato de cálcio 12,5 g/litro; (3) calcário dolomítico 2 t/ha; (4) microrganismos eficazes 1% do produto ativado; (5) combinação dos produtos comerciais Stuble Aid® + Compostaid® 0,75 mL/litro + 0,75 g/litro e (6) Testemunha] na aceleração da decomposição de folhas de limoeiros 'Siciliano' caídas sob a copa das plantas e na severidade da doença. Concluiu-se que o capim coastcross foi a espécie mais eficiente na supressão da liberação de ascósporos, com conseqüente redução da severidade da doença. No segundo ensaio, os tratamentos representados pela adição de microrganismos foram os mais eficientes na aceleração da decomposição de folhas de limoeiro, porém quanto à severidade da doença, todos os tratamentos apresentaram o mesmo comportamento, com reduções significativas em relação à testemunha. / The present research was developed in citrus orchards located in commercial property in Rio Claro - SP region and it had as an objective the determination of the effect of cultural practice in the reduction of the source of inoculum and, consequently the reduction of strictness black spots in citric fruit, caused by Guignardia citricarpa. Two experiments in distinct areas were developed. In the first one, the influence of intercalary culture (peanut and coastcross grass) and later the skim of the a dough formed on the orange trees top 'Natal', in the floating of ascospores and in the strictness of the disease, while in the second experiment, the effect of different treatments were evaluated [(1) urea 12,5 g/liter; (2) calcium nitrate 12,5 g/liter; (3) dolomitic calcareous 2t/ha; (4) efficient microrganisms 1% from the active product; (5) the combination of the commercial products Stuble Aid® + Compostaid® 0,75 mL/liter + 0,75 g/liter and (6) Control] in the acceleration of the 'Siciliano' lemon trees leaves decomposition fallen down on the top trees and in the severity of the disease. It was concluded that the coastcross grass was the most efficient species in the supression of the discharge of the ascospores and in the decrease of the severity disease. In the second experiment, the treatments represented by the addition of microorganisms were the most efficient in the acceleration of the lemon trees leaves decomposition, however as for the severity of the disease, all the treatments presented the same performance, with statistically significative decreases in relation to control.

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:52Z : No. of bitstreams: 1 000867494.pdf: 2824283 bytes, checksum: eca1ac740652972fac0629df5914e07d (MD5) / A bactéria Gram-negativa Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é o agente causal do cancro cítrico, doença ainda sem método curativo que gera grande impacto econômico na produção de laranja. Estudos moleculares envolvendo patossistemas, como o Xac-citros, vêm ganhando espaço no auxílio do entendimento sobre os processos fitopatogênicos. Diante disto, o objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão dos genes exsF e exsG de Xac e o efeito dos seus nocautes na patogenicidade de Xac em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), bem como obter as proteínas por eles codificadas e utilizá-las em ensaios iniciais de cristalização. Na análise da expressão destes genes, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR), onde foi avaliada a expressão dos mesmos em Xac inoculada em folhas de limoeiro cravo coletadas em três tempos após a inoculação (48, 72 e 120 h) comparada com a expressão em Xac inoculada em meio de cultura. Já para a produção do mutante duplo de Xac apresentando os genes exsF e exsG nocauteados, foi utilizada a técnica de mutação sítio-dirigida por PCR utilizando o vetor suicida pOK1 e a estratégia de troca alélica. Para a produção das proteínas ExsF e ExsG recombinantes foi utilizada a expressão heteróloga em E. coli através do uso do vetor de expressão pET SUMO e os ensaios iniciais de cristalização foram realizados utilizando-se kits comerciais e não comerciais. A análise da expressão dos genes exsF e exsG revelou que estes foram induzidos, cerca de 10 vezes mais, após 72 horas de infecção da Xac em folhas de limoeiro cravo, em comparação com a Xac multiplicada em meio de cultura. Os ensaios de patogenicidade utilizando o mutante duplo de Xac Δ3135/3136 revelaram que este foi avirulento em folhas de limoeiro cravo, em contraste com a linhagem 306 selvagem, que elicitou os sintomas de cancro cítrico. Além disso, a mutação reduziu a capacidade de multiplicação... / The Gram-negative bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is the causal agent of citrus canker, disease that causes a significant economic impact on the orange production. Molecular studies involving pathosystems like Xac-citrus have been used to as an approach to understand the pathogenic processes. Therewith, the objective of this study was to investigate the expression of exsF and exsG Xac genes and the effect of its silencing in Xac pathogenicity in Rangpur lime (Citrus limonia Osbeck) leaves and also get the proteins coded by them and use it in initial tests of crystallization. The real-time PCR (qRT-PCR) technique was used in the analysis of gene expression.The in planta expression of exsF and exsG genes were evaluated in Xac isolated from Rangpur lime leaves collected at 48, 72 and 120 h after inoculation compared to Xac growing in NA culture. For the production of Xac double mutant having the ExsF and exsG genes silenced, the site-directed mutagenesis technique by PCR using the suicide vector pOK1 was used. For the production of ExsF and ExsG recombinant proteins, the E. coli heterologous expression in the pET SUMO expression vector was used. Finally, the initial crystallization trials were performed using commercial and non-commercial kits. The gene expression analysis showed that the exsF and exsG genes were induced about 10-fold more after 72 hours of Xac infection in Rangpur lime leaves, compared with the Xac grown in the culture medium. The functional assays performed with the Xac Δ3135/3136 double mutant showed that it was avirulent on Rangpur lime leaves, in contrast to the wild type strain Xac 306. Moreover, the mutation reduced the multiplication of the bacteria in planta. The mutation also affected the biofilm production, that was reduced in the mutated strain. Through the heterologous expression assays and protein purification it was possible to obtain only the ExsG protein, soluble and pure enough to be ...

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-07. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:10Z : No. of bitstreams: 1 000867476_20200307.pdf: 393558 bytes, checksum: a80584113ea061224d04a97f59685ffd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (Capes) / A bactéria Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii tipo C (XauC) é o agente causal da cancrose C, que afeta apenas lima ácida 'Galego' (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle). A principal característica fenotípica desta doença é a hiperplasia e hipertrofia do tecido afetado, que leva à formação de lesões erupescentes características, sendo que o responsável pela proliferação celular desordenada é um efetor tipo TAL da família AvrBs3/PthA, que é injetado na planta pelo sistema de secreção tipo III (SST3) da bactéria e é translocado até o núcleo, onde interage com regiões UPA-box (up-regulated by AvrBs3) e funciona como um ativador transcricional. As variedades de laranja doce são resistentes à cancrose C e, quando inoculadas com XauC apresentam forte reação de hipersensibilidade (HR), causando morte celular programada local (apoptose) e abscisão das folhas afetadas. O(s) mecanismo(s) que confer(em) à lima ácida 'Galego' susceptibilidade à XauC não é(são) conhecido(s). Este estudo teve como objetivo identificar, através de sequenciamento de nova geração (NGS), transcritos de plantas diferencialmente expressos envolvidos na interação patógeno-hospedeiro nos patossistemas XauC-laranja 'Hamlin' (espécie resistente) e XauC-lima ácida 'Galego' (espécie susceptível). Para isso, folhas de laranja 'Hamlin' e lima ácida 'Galego' foram inoculadas com suspensão de XauC a uma concentração de 106 ufc/mL, sendo que o controle foram folhas inoculadas com água estéril. Essas folhas foram coletadas nos tempos de 5 e 7 dias após inoculação (dai) e o RNA total foi extraído e utilizado para a análise dos transcrissomas por RNA-seq. Os transcritos obtidos do sequenciamento foram normalizados e as redundâncias foram removidas. Foi montado um banco único de dados genômicos e de transcritos de citros... / The bacterium Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii type C (XAC) is the causative agent of cancrose C, which affects only acid lime 'Galego' (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle). The main phenotypic characteristic of this disease is the hyperplasia and hypertrophy of the affected tissue, leading to the formation of erupescentes characteristic lesions, and responsible for the abnormal cell growth is a transcription activator-like (TAL) effector family (also called the avrBs3/pthA family), which is injected into the plant by the type type III secretion system (T3SS) and is translocated to the nucleus, where it interacts with UPA-box regions (up-regulated by AvrBs3) and acts as a transcriptional activator. The sweet orange varieties are resistant, and when inoculated with XauC show strong hypersensitive response (HR), causing local programmed cell death (apoptosis) and abscission of affected leaves. The mechanisms that give the acid lime 'Galego' susceptibility to XauC is not known. This study aimed to identify, through next-generation sequencing (NGS), plant differentially expressed transcripts involved in host-pathogen interaction in pathosystems XauC-orange 'Hamlin' (species resistant) and XauC-acid lime 'Galego' (species susceptible). Leaves from 'Hamlin' and acid lime 'Galego' were inoculated with XauC suspension at a concentration of 106 cfu/mL (experimental) or sterile water (control) and collected at 5 and 7 days after inoculation (dai). Total RNA was extracted and used for transcriptome analysis by RNA-seq. The transcripts obtained from sequencing were normalized and redundancies removed. A single bank of genomic data and citrus transcripts was assembled, which was called CitSeqDB and is the junction of 6 public banks: AFFYM, NCBI Unigene, USDA, CITRUSGDB and PHYTOZOME. Transcripts that proved to be differentially expressed relative to controls were confronted with the bank and functional annotation was performed using ...

Resumo: Este trabalho teve como objetivo investigar a possibilidade de plantas utilizadas como cercas-vivas e quebra-ventos, bem como plantas invasoras comuns em pomares cítricos, hospedarem o Citrus leprosis virus, cytoplasmic type (CiLV-C) e servirem de inóculo para os citros. Em casa-de-vegetação, ácaros provenientes de uma criação-estoque sobre frutos de laranja Pêra, com sintomas de leprose, foram transferidos para folhas isoladas por barreira adesiva de: hibisco (Hibiscus rosa-sinensis L.), malvavisco (Malvaviscus arboreus Cav.), grevílea (Grevilea robusta A. Cunn.), urucum (Bixa orellana L.), trapoeraba (Commelina benghalensis L.) e laranja [Citrus sinensis (L.) (Osbeck)]. Após 90 dias da infestação, os ácaros descendentes foram transferidos para mudas de laranja "Natal". Amostras de tecidos das plantas testes se mostraram positivos para todas as plantas inoculadas com ácaros virulíferos por análise de RT-PCR utilizando-se de "primers" específicos para detecção do CiLV-C e foram verificadas a presença de partículas virais em hibisco, laranja, malvavisco, e trapoeraba em análise de Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Em campo, laranja, malvavisco, grevílea e sansão-do-campo foram plantados próximos a plantas-teste de laranja e infestados com ácaros virulíferos. Essas espécies foram avaliadas quanto à presença de ácaros, à incidência e à severidade da doença. Foi possível observar que a incidência e a severidade da leprose foram maiores nas plantas de laranja que estavam próximas às laranjeiras infestadas, seguidas daquelas próximas a malvavisco e sansão-do-campo, que diferiram estatisticamente de grevílea. Estes resultados indicam que as plantas analisadas podem ser importantes na epidemiologia da doença. / Abstract: The objective of this work was to investigate the possibility that hedgerows, windbreaks, and weeds normally found in citrus orchards could host Citrus leprosis virus, cytoplasmic type (CiLV-C), serving as its source of inoculum. In greenhouse, mites reared onto sweet orange fruits var. "Pêra" symptomatic for leprosis were transferred to leaves, isolated by adhesive barrier, of Hibiscus rosasinensis, Malvaviscus arboreus, Grevilea robusta, Bixa orellana, Commelina benghalensis and Citrus sinensis. After 90 days of infestation, the descendant mites were transferred to Natal sweet orange plants to verify the transferability of the virus back to citrus. Non-viruliferous mites, which had no feed access to diseased tissue, were used as control. Localized lesions (chlorotic or necrotic spots, ringspots) developed in almost all tested plants. Tissue samples of plants infested with viruliferous and non-viruliferous mites were submitted to RT-PCR with specific primers to CiLV-C. Transmission electron microscopy analyses detected the presence of viral inclusions in C. benghalensis H. rosa-sinensis, M. arboreus, and C. sinensis. In experimental groves, C. sinensis, G. robusta, M. arboreus and Mimosa caesalpinaefolia were planted and infested with viruliferous mites around citrus plants. There was a clear variation in leprosis incidence and severity observed in sweet orange plants depending on the alternative host cultivated beside them. The higher intensity of the disease was observed in sweet orange plants that were close to C. sinensis, followed by those close to M. arboreus and Mimosa caesalpinaefolia. The intensity of leprosis in sweet oranges planted near G. robusta was significantly lower than in those cultivated close to the other hosts. These results suggest that the alternative hosts tested can play a role in the epidemiology of the disease, serving as sources of inoculum of the virus. / Orientador: Carlos Amadeu Leite de Oliveira / Coorientadora: Juliana de Freitas Astúa / Banca: Marinês Bastianel / Banca: André Luis Matioli / Banca: Nilza Maria Martinelli / Banca: Sérgio Antonio de Bortoli / Doutor