Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-08-13T12:22:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_GenotoxicidadeHumanaFarmacos.pdf: 872023 bytes, checksum: ce96ad6961411bc1ee76a69bf1f29edc (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2014-08-14T14:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_GenotoxicidadeHumanaFarmacos.pdf: 872023 bytes, checksum: ce96ad6961411bc1ee76a69bf1f29edc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-14T14:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_GenotoxicidadeHumanaFarmacos.pdf: 872023 bytes, checksum: ce96ad6961411bc1ee76a69bf1f29edc (MD5) Previous issue date: 2014 / Fármacos antidepressivos são largamente utilizados no tratamento sintomático do transtorno depressivo. Inúmeras pesquisas atuais sobre a depressão vêm contribuindo para o avanço da terapia farmacológica e para o surgimento de novos fármacos antidepressivos. Diretrizes atuais para testes de genotoxicidade de novos medicamentos sugerem a importante utilidade de ensaios que detectem danos ao DNA, ou seja, testes para avaliar a indução de quebras no DNA. Entretanto, o número escasso de dados sobre a genotoxicidade de fármacos faz com que seja reduzido o número de fármacos que realmente podem ser usados em segurança. Portanto, é de extrema importância estudos sobre a avaliação genotoxicológica de fármacos, principalmente, drogas utilizadas por um longo período de tempo como é o caso dos antidepressivos. A duloxetina é um antidepressivo novo, pertencente à classe dos inibidores seletivos da recaptação de serotonina e noradrenalina (ISRSN), utilizada no tratamento sintomático da depressão. Apesar da existência de trabalhos demonstrando que alguns fármacos antidepressivos são genotóxicos, não existe até hoje nenhum estudo sobre a possível genotoxicidade da duloxetina em células de origem humana. Assim, o presente estudo tem como objetivo explorar o possível potencial genotóxico in vitro da duloxetina em culturas primárias de linfócitos humanos através das técnicas de detecção de aberrações cromossômicas e micronúcleos. Culturas primárias de linfócitos sanguíneos de voluntários sadios foram expostas a diferentes concentrações de duloxetina (10-150 ng/ml) e ciclofosfamida (6 μg/ml) como controle positivo. Aberrações cromossômicas estruturais, índice mitótico, índice de divisão nuclear, índice de binucleação, número de células com um, dois, três e quatro micronúcleos e o número de células com pontes nucleoplasmáticas foram avaliadas. Todos os índices das culturas incubadas com duloxetina foram significativamente menores que aqueles dos grupos controles, indicando um certo grau de citotoxicidade da droga. Entretanto, só as concentrações de 100 e 150 ng/ml provocaram o aumento significativo da presença de aberrações cromossômicas e micronúcleos. Considerando que essas concentrações ficam perto do limite superior da faixa terapêutica da droga usada em humanos, nossos resultados alertam já sobre a necessidade de aprofundar no conhecimento da genotoxicidade humana da duloxetina. / Antidepressants are widely used for the symptomatic treatment of depressive disorder. Numerous current research on depression has contributed to the advancement of drug therapy and the emergence of new antidepressant drugs. Current guidelines for genotoxicity testing of new drugs suggests the important utility of assays that detect DNA damage, or tests to evaluate the induction of DNA breakage. However, the small number of data on the genotoxicity of drugs causes the number of drugs that can actually be used safely is reduced. Therefore, it is of utmost importance genotoxicology studies on the evaluation of drugs, especially drugs used for a long period of time such as antidepressants. Duloxetine is a new antidepressant belonging to the class of selective serotonin reuptake inhibitors of serotonin and norepinephrine (SNRIs), used in the symptomatic treatment of depression. Despite the existence of studies showing that some antidepressant drugs are genotoxic, there is to date no study on the possible genotoxicity of duloxetine in human cells. Thus, this study aims to explore the possible genotoxic potential of duloxetine in vitro in primary cultures of human lymphocytes through the techniques of detection of chromosomal aberrations and micronuclei. Primary cultures of blood lymphocytes of healthy volunteers were exposed to different concentrations of duloxetine (10-150 ng/ml) and cyclophosphamide (6 μg/ml) as a positive control. Structural chromosomal aberrations, mitotic index, nuclear division index, index binucleation, number of cells with one, two, three and four micronuclei and the number of cells with nucleoplasmáticas bridges were evaluated. All cultures incubated with indices of duloxetine were significantly lower than those of the control groups, indicating a degree of cytotoxicity of the drug. However, only concentrations of 100 and 150 ng/ml caused a significant increase in the presence of chromosomal aberrations and micronuclei. Whereas these concentrations are close to the upper limit of the therapeutic range of the drug used in humans, our results call already on the need to deepen their understanding of human genotoxicity of duloxetine.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-25T20:56:40Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laise Rodrigues de Andrade - 2012.pdf: 1986605 bytes, checksum: 71d7e662c6200f1a50a70ae9addb99b0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-26T13:07:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laise Rodrigues de Andrade - 2012.pdf: 1986605 bytes, checksum: 71d7e662c6200f1a50a70ae9addb99b0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T13:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laise Rodrigues de Andrade - 2012.pdf: 1986605 bytes, checksum: 71d7e662c6200f1a50a70ae9addb99b0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The rapid advancement of nanotechnology has created a vast array of nanoparticles promising for industrial, energy and environmental sectors. Furthermore, many biological applications have been proposed for the nanoparticles, such as transport of genes and drugs for disease treatments, including cancer and infections. So, it is important to clarify if nanoparticles may represent a hazard to the environment and human health. In this study, we investigated the toxic potential and ability to induce DNA damage of different nanoparticles: four species of carbon nanotubes (NTC, NT, CS e MW), silver (AgNP) and nanoceria (CeO2-NP) nanoparticles. It was employed the somatic mutation and recombination test (SMART) in Drosophila melanogaster that detects the loss of heterozygosity of two genetic markers involved in the metabolic pathways of wing hairs formation - multiple wing hairs (mwh) and flare3 (flr3). In larvae, the proliferating of wings imaginal disc cells can produce hairs with mutant phenotypes expressed on the adult wings. Using the standard cross, third-stage larvae were treated with different concentrations of the nanoparticles until pupal stage. The wings of adult flies were examined microscopically for the identification of phenotypic abnormalities. In all concentrations the survival rates were higher than 90%, indicating the absence of chronic toxicity for nanoparticles evaluated. Using the conditional binomial test, the results of different treatments were compared with the respective negative control (distilled water), demonstrating no significantly increase in the NTC, NT and CS mutation and recombination frequencies (p>0.05) in mwh/flr3 genotype. In all carbon nanotubes tested, only the two higher concentrations of nanotubes MW (0.4 and 1 mg/mL) were able to induce genetic changes, mainly by mitotic recombination. The concentration of 10 mg/mL AgNP also promoted changes in the DNA and 61% of the phenotypic abnormalities were caused by recombination. The nanoceria was able to produce genotoxic effects at all concentrations tested (0.64-10 mg/mL). Overall, the mutational events were predominant, ranging from 46 to 72% of the total genotoxic effect induced by nanoceria, showing no dose-response relationship. In conclusion, our results demonstrated that carbon, silver and cerium dioxide nanoparticles have different genotoxic potential in D. melanogaster, so, another studies should be performed before any clinical and/or industrial application of nanoparticles. / O rápido avanço da nanotecnologia permitiu a criação de uma grande variedade de nanopartículas promissoras para os setores industrial, energético e ambiental. Além disso, muitas aplicações biológicas têm sido propostas para as nanopartículas, como o transporte de genes e fármacos para o tratamento de doenças, incluindo o câncer e infecções. Portanto, é importante esclarecer se as nanopartículas podem representar um perigo ao ambiente e à saúde humana. Neste estudo, nós investigamos a toxicidade potencial e a capacidade de induzir danos ao DNA de diferentes nanopartículas: quatro espécies de nanotubos de carbono (NTC, NT, CS e MW), nanopartículas de prata (AgNP) e nanocéria (CeO2-NP). Foi utilizado o teste para detecção de mutação e recombinação somática (SMART) em Drosophila melanogaster que detecta a perda de heterozigose de dois marcadores genéticos envolvidos nas vias metabólicas de formação de pelos da asa – pelos múltiplos (mwh) e flare3 (flr3). Nas larvas, a proliferação das células dos discos imaginais das asas pode produzir pelos com fenótipos mutantes expressos nas asas dos indivíduos adultos. Usando o cruzamento padrão, larvas de terceiro estágio foram tratadas com diferentes concentrações das nanopartículas até atingir o estágio de pupa. As asas das moscas adultas foram examinadas microscopicamente para identificação de alterações fenotípicas. Em todas as concentrações as taxas de sobrevivência foram superiores a 90%, indicando ausência de toxicidade crônica das nanopartículas avaliadas. Usando o teste binomial condicional, os resultados dos diferentes tratamentos com NTC, NT e CS foram comparados com o respectivo controle negativo (água destilada), demonstrando que não houve aumento estatisticamente significativo (p>0,05) nas frequências de mutação e recombinação no genótipo mwh/flr3. De todos os nanotubos de carbono avaliados, apenas as duas maiores concentrações do nanotubo MW (0,4 e 1 mg/mL) foram capazes de induzir alterações genéticas, principalmente via recombinação mitótica. A concentração de 10 mg/mL de AgNP também promoveu alterações no DNA e 61% das anormalidades fenotípicas foram causadas por recombinação. A nanocéria foi capaz de produzir efeitos genotóxicos em todas as concentrações testadas (0,64-10 mg/mL). Destes efeitos, os eventos mutacionais foram predominantes, variando de 46 a 72% do efeito genotóxico total induzido pela nanocéria, sem demonstrar efeito dose resposta. Em conclusão, nossos resultados demonstraram que nanopartículas constituídas de carbono, prata e dióxido de cério têm potenciais genotóxicos distintos em D. melanogaster, portanto, outros estudos devem ser realizados antes de qualquer aplicação clínica e/ou industrial das nanopartículas.

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-07-24T16:07:36Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AvaliacaoInvitroEfeitos.pdf: 1085178 bytes, checksum: 83f435e455b064d961678f20dda86aa1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-07-24T16:23:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AvaliacaoInvitroEfeitos.pdf: 1085178 bytes, checksum: 83f435e455b064d961678f20dda86aa1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-24T16:23:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AvaliacaoInvitroEfeitos.pdf: 1085178 bytes, checksum: 83f435e455b064d961678f20dda86aa1 (MD5) Previous issue date: 2011 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A leishmaniose é considerada um problema de saúde pública, principalmente devido à presença de diferentes espécies enzoóticas de Leishmania, envolvendo muitos hospedeiros e diferentes insetos vetores. Os antimoniais pentavalentes permanecem como as drogas de primeira escolha para o tratamento das leishmanioses há mais de 50 anos, no entanto, sua utilização vem sendo comprometida devido, principalmente, a resistência desenvolvida pelo parasita ao medicamento. Assim, a escolha de drogas derivadas de plantas baseada no estudo e utilização de práticas da medicina tradicional devem aparecer como nova estratégia para o controle da leishmaniose. No entanto, é importante verificar que algumas destas drogas podem ser tóxicas ao organismo, podendo inclusive apresentar propriedades genotóxicas, causando alterações no DNA com conseqüente aumento no risco de carcinogênese. A Julocrotina (2-[N-(2-methylbutanolyl)]- N-phenylethylglutarimide) é um alcalóide glutarimida isolado da espécie Croton pullei var. glabrior Lanj. Euphorbiaceae), encontrada amplamente na Floresta Amazônica e conhecido por possuir potente efeito leishmanicida. Desta forma, no presente estudo avaliamos o efeito citotóxico e genotóxico da Julocrotinaa partir do Ensaio do MTT e Ensaio do Cometa (versão alcalina) em cultura de linfócitos humanos. Como resultado, o alcalóide não demonstrou citotoxicidade em linfócitos humanos nas concentrações testadas. No entanto, a julocrotina mostrou-se genotóxica para linfócitos humanos tratados com a maior concentração (632μM) da substância. Apesar dos resultados de citotoxicidade parecem promissores no que diz respeito ao uso da julocrotina no tratamento da leishmaniose, o efeito genotóxico observado reforça a necessidade de se obter as devidas precauções quanto ao seu uso como fitoterápico leishmanicida. / Leishmaniasis is considered a public health problem, mainly due to the presence of different species of enzootic Leishmania, involving many different hosts and insect vectors. The pentavalent antimony remain the first choice drugs for the treatment of leishmaniasis for more than 50 years, however, its use has been compromised due mainly to the parasite developed resistance to the drug. Thus, the choice of drugs derived from plants based on the study and use of traditional medicine practices should appear as a new strategy for the control of leishmaniasis. However, it is important to note that some of these drugs can be toxic to the body and may even have genotoxic properties, causing changes in DNA with consequent increased risk of carcinogenesis. Julocrotine (2 -[N-(2-methylbutanolyl)]-N-phenylethylglutarimide) is an alkaloid isolated from the species Croton pullei var. glabrior Lanj. (Euphorbiaceae), widely found in the Amazon jungle and known to possess potent leishmanicidal effect. Thus, the present study evaluated the cytotoxic and genotoxic effects of julocrotina using the MTT and the Comet Assays in cultured human lymphocytes. Our results showed that the alkaloid did not show cytotoxicity in human lymphocytes at the concentrations tested. However, julocrotine showed to be genotoxic to human lymphocytes treated with the highest concentration (632μM) of the substance. Although the cytotoxicity results seem promising with respect to the use of julocrotina in the treatment of leishmaniasis, the genotoxic effect observed reinforces the need to obtain the necessary cautions for its use as an herbal leishmanicidal.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-03-04T20:40:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertação_AnaliseMutacoesGene.pdf: 1257041 bytes, checksum: 1a3b599398b035eed817ca56c0bea301 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-03-05T16:47:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertação_AnaliseMutacoesGene.pdf: 1257041 bytes, checksum: 1a3b599398b035eed817ca56c0bea301 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-05T16:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertação_AnaliseMutacoesGene.pdf: 1257041 bytes, checksum: 1a3b599398b035eed817ca56c0bea301 (MD5) Previous issue date: 2012 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / A surdez é o defeito sensorial mais frequente nos seres humanos, podendo ter diferentes causas ambientais ou hereditárias. Em países desenvolvidos, estimativas sugerem que em cada 1000 nascidos dois manifestam algum tipo de surdez e mais de 60% desses casos são de origem genética. No Brasil, muito pouco ainda é conhecido sobre surdez hereditária, acreditasse que quatro em cada mil recém-nascidos manifestem algum tipo de deficiência auditiva e que a frequência da surdez causada por fatores genéticos seja da ordem de 16%, enquanto os 84% restantes dos casos sejam causado por fatores ambientais e de etiologia desconhecida. As várias formas de surdez hereditária já identificada são muito raras, com exceção de uma causada por mutações no gene GJB2 que codifica a conexina 26. As conexinas representam uma classe de família de proteínas responsáveis pela formação de canais de comunicação entre células adjacentes (Gap Junctions), esta comunicação entre células adjacentes é fundamental para o crescimento e para a diferenciação de tecidos. Até o presente foram descritas 102 mutações do GJB2 que estão associadas com surdez hereditária. Três mutações se destacam por apresentarem frequência elevada em grupos populacionais específicos: 35delG entre europeus e brasileiros; 167delT entre Judeus askenazitas; e 235delG entre asiáticos. Neste trabalho, foi realizada a análise molecular de toda a sequência codificadora do gene GJB2 (Conexina 26) em uma amostra populacional constituída de 30 indivíduos não aparentados com surdez esporádica pré-lingual não sindrômica provenientes da população de Belém do Pará. O DNA foi obtido através de amostras de sangue periférico e analisado por meio da técnica convencional de PCR seguida do sequenciamento automático. Mutações no gene da Conexina 26 foram observadas em 20% da amostra (6/30). As mutações 35delG e R143W foram observadas em um único paciente (1/30), as duas no estado heterozigoto e relacionadas com a surdez do paciente. Duas outras mutações foram observadas em diferentes indivíduos: G160S em 1 paciente correspondendo a 3,3% (1/30); e V27I foi observado em 4 indivíduos com frequência alélica de 0.08; contudo as mutações G160S e V27I não estão relacionadas com a surdez. Neste trabalho as frequências observadas de mutações são equivalentes a frequências observadas em outras populações anteriormente estudadas. Esses resultados indicam que mutações no gene GJB2 são importantes causas de surdez em nossa região e não se pode excluir que a possibilidade da surdez apresentada por alguns indivíduos possa ser decorrente, principalmente, por fatores ambientais como processos infecciosos ocorridos durante a gestação, ou nos primeiros meses de vida. / Deafness is the most frequent sensorial defect in human beings and it may have different causes since environmental to hereditary. In developed countries the estimates suggest that in each 1000 births some kind of deafness is expressed and more than 60% of the cases have a genetic origin. In Brazil, the hereditary deafness is not well-known. It is believed that four in each thousand newborns express some kind of hearing defect and that the frequency of deafness caused by genetic factors is estimated in 16%, while the 84% remaining cases are caused by environmental factors and have an unknown etiology. The many forms of hereditary deafness already identified are very rare, except for the one which is caused by mutations in the GJB2 gene which codifies the connexin 26. The connexins represent a class of a protein family which is responsible for the formation of communications channels between adjacent cells (Gap Junctions), this communication is fundamental for the growth and differentiation of the tissues. Until now there have been described 102 mutations of GJB2 gene which are associated to the hereditary deafness. Three mutations stand out because they have high frequency in specific population groups: 35delG among Europeans and Brazilians, 167delT among Ashkenazi Jews, and 235delG among Asians. In this study, we performed a molecular analysis of the entire coding sequence of the GJB2 gene (Connexin 26) in a population sample consisted of 30 unrelated individuals with prelingual nonsyndromic sporadic deafness from the population of Belém do Pará. DNA was obtained by peripheral blood samples and analyzed by the conventional PCR followed by automatic sequencing. Mutations in the Connexin 26 gene were found in 20% of the sample (6/30). The mutations 35delG and R143W were observed in one patient (1/30), both in the heterozygous and related to the patient’s deafness. Two additional mutations were observed in different individuals: G160S in a patient corresponding to 3.3% (1/30), and V27I was observed in 4 patients with allele frequency of 0.08; however mutations G160S and V27I are not related deafness. In this work the observed frequencies of mutations are equivalent to the frequencies observed in other populations previously studied. These results indicate that mutations in the GJB2 gene are important causes of deafness in our region and it cannot be excluded that the possibility of deafness presented by some individuals may be caused, mainly, by environmental factors such as infectious processes occurring during pregnancy or the first months of life.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T13:37:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoPotencialCitotoxico.pdf: 897699 bytes, checksum: 7a4eadf723c3256711376abf0691cf05 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-30T12:44:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoPotencialCitotoxico.pdf: 897699 bytes, checksum: 7a4eadf723c3256711376abf0691cf05 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T12:44:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoPotencialCitotoxico.pdf: 897699 bytes, checksum: 7a4eadf723c3256711376abf0691cf05 (MD5) Previous issue date: 2016-08-08 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Piroxicam é um AINE que pertence farmacologicamente a classe oxicam e é indicado para tratar diversos males como artrite reumatoide, dismenorreia primária, endometriose, entre outros. Suas propriedades anti-inflamatórias são bem conhecidas e está relacionada a sua capacidade não seletiva de inibição reversível das COXs, mas sabese pouco a respeito de sua atividade citotóxica e de sua ação no DNA. São escassos dados a respeito dos possíveis efeitos genotóxicos do Piroxicam em células de mamíferos. Esses efeitos podem ser monitorados para a prevenção e controle de algumas reações adversas e efeitos colaterais importantes. O presente estudo foi delineado para investigar os possíveis efeitos genotóxicos e citotóxicos induzidos in vitro pelo fármaco Piroxicam em linhagem de rim de macaco verde africano (VERO). A viabilidade das células expostas ao Piroxicam foi avaliada pelo ensaio MTT, a citotoxicidade do Piroxicam foi verificada pela quantificação de apoptose e necrose utilizando corantes fluorescentes (Hoechst, iodeto de propídeo e diacetato de fluoresceína) e a genotoxicidade do Piroxicam foi avaliada pelo teste do cometa. Os resultados do ensaio de viabilidade celular mostraram que o Piroxicam reduz significativamente (p<0,05) a viabilidade das células nas concentrações de 1,0 mM, 2,0 mM, 4,0 mM e 8,0 mM. Observou-se também que o Piroxicam induz morte significativa (p<0,01) por apoptose em todas concentrações testadas, tanto para tratamento de 24h quanto para 48h. No caso do ensaio cometa, não houve danos ao DNA em nenhuma concentração testada. Os dados defendem a ideia de que o Piroxicam possui atividade citotóxica, mas não apresenta potencial genotóxico nas condições testadas. / The Piroxicam is a NSAID that pharmacologically belongs to oxicam class and is indicated to treat various ailments such as rheumatoid arthritis, primary dysmenorrhea, endometriosis, among others. Its anti-inflammatory properties are well known and is related to its non-selective ability to reversible inhibition of COX, but it is known little about their cytotoxic activity and its effect on DNA. There are few data on the possible genotoxic effects of Piroxicam in mammalian cells. These effects can be monitored for the prevention and control of some adverse reactions and major side effects. This study was designed to investigate the possible genotoxic and cytotoxic induced in vitro by Piroxicam drug in kidney line of African green monkey (VERO). The viability of cells exposed to piroxicam was evaluated by MTT assay, cytotoxicity of piroxicam was verified by quantifying apoptosis and necrosis using fluorescent dyes (Hoechst, propidium iodide and fluorescein diacetate) and genotoxicity of piroxicam was evaluated by the comet assay. The results of the cell viability assay showed that Piroxicam reduces significantly (p <0.05) cell viability in the concentrations of 1.0 mM, 2.0 mM, 4.0 mM and 8.0 mM. It is also noted that piroxicam induced significant killing (p <0.01) by apoptosis in all concentrations tested, both as to 24h treatment 48h. In the case of the comet assay, there was no damage to the DNA in any concentration tested. The data support the idea that piroxicam has a cytotoxic activity, but has no genotoxic potential in the tested conditions.

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2012-12-12T13:51:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_AvaliacaoVitroPossIveis.pdf: 1249677 bytes, checksum: 36d6e43acaaa9c2bacd886ccc1729b0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-12-20T13:18:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_AvaliacaoVitroPossIveis.pdf: 1249677 bytes, checksum: 36d6e43acaaa9c2bacd886ccc1729b0f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-20T13:18:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_AvaliacaoVitroPossIveis.pdf: 1249677 bytes, checksum: 36d6e43acaaa9c2bacd886ccc1729b0f (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / A artemisinina é uma substância extraída da planta chinesa Artemisia annua L., sendo bastante utilizada na medicina natural como um terapêutico em várias patologias. Já o artemer é uma substância sintetizada a partir da artemisinina. Estas drogas se enquadram em um grupo especial de moléculas denominadas de lactonas sesquiterpênicas sendo amplamente administradas na terapêutica da malária. Embora sejam considerados eficientes anti-maláricos, muito pouco se sabe sobre os efeitos genotóxicos e citotóxicos destes fármacos. Portanto, no presente trabalho, avaliamos os efeitos citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos da artemisinina e do artemeter em cultura de linfócitos humanos por meio do ensaio cometa, do teste do micronúcleo e do ensaio de citotoxicidade para detecção de necrose e apoptose por marcação fluorescente diferencial com laranja de acridina/brometo de etídio (LA/BE), respectivamente. Nossos resultados demonstraram um aumento significativo (p<0,05) no índice de dano do DNA avaliado pelo ensaio do cometa, bem como na frequência de micronúcleos em ambas as substâncias testadas. Foi observado também, que apenas a artemisinina induziu um aumento estatisticamente significativo (p<0.05) no número de células necróticas nos linfócitos em 48 h de tratamento. Desta forma, demonstrou-se em nosso trabalho, que estas duas drogas exercem efeitos citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos em culturas de linfócitos humanos, nas condições avaliadas. Nossos dados apontam a necessidade de cautela no uso de tais medicamentos, uma vez que efeitos genotóxicos/mutagênicos podem aumentar o risco de carcinogênese. / Artemisinin is a substance extracted from the Chinese plant Artemisia annua L., and widely used in natural medicine for a treatment of various diseases. Artemether is a substance synthesized from artemisinin. These drugs belong to a special group of molecules called sesquiterpene lactones widely administered in the treatment of malaria. Although considered effective anti-malarial drugs, very little is known about the genotoxic and cytotoxic effects of these drugs. Therefore, in the present study, we evaluated the genotoxic, mutagenic and cytotoxic effects of artemisinin and artemether in cultured human lymphocytes using the comet assay, the micronucleus test and a cytotoxicity assay for detection of necrosis and apoptosis by fluorescent differential acridine orange/ethidium bromide (LA/BE), respectively. Our results showed a significant increase (p<0.05) in the rate of DNA damage measured by comet assay and in the micronucleus frequency after treatment with both drugs. It was also observed that only artemisinin induced a statistically significant increase (p<0.05) in the number of lymphocytes with death by necrosis 48 h after treatment. Thus, it was shown in our work that these two drugs exert mutagenic, genotoxic and cytotoxic effects in cultured human lymphocytes under the conditions evaluated. Our data indicate the need for caution in the use of such drugs, since genotoxic/mutagenic effects may increase the risk of carcinogenesis.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-06-27T14:12:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-31T12:53:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-31T12:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os tumores bem diferenciados da tireóide representam mais de 95% das neoplasias malignas da glândula. A identificação pré-operatória dos carcinomas papilíferos está bem estabelecida através dos métodos de Punção aspirativa por Agulha fina e Ultrassonografia, com quase 100% de acurácia, enquanto os tumores foliculares significam um dilema para o cirurgião, visto que os métodos existentes não conseguem determinar com eficiência o diagnóstico sendo que 60-80% dos casos operados são benignos. Dessa forma, com o intuito de se analisar alterações genômicas do tipo variações no número de cópias (CNVs) que possam diferenciar esse tumor de outros tipos de doenças da tireóide, foram analisados 13 pacientes com doença tireoidiana (3 bócios, 2 hiperplasias, 4 adenomas foliculares e 4 carcinomas foliculares ) mais 1 individuo sadio através do método de aCGH, para identificação de CNVs que pudessem determinar com eficiência a presença de carcinoma folicular. Os achados foram confrontados com dados de carcinomas papilífero clássico (4 pacientes) e variante folicular (2 pacientes). Foram encontradas 725 CNVs na amostra, 703 dos pacientes com patologia. Dentre estas foram selecionadas 18 regiões mais frequentes. Houve um padrão de amplificação maior em pacientes jovens com adenomas e deleção em pacientes mais velhos. Os pacientes com carcinoma apresentaram taxas de CNVs muito próximas. Os carcinomas foliculares apresentaram padrões exclusivos de alteração nos cromossomos 8 e 12. Concluímos, assim, que os carcinomas foliculares da tireoide são uma patologia com um padrão exclusivo de alterações, não havendo correlação de progressão tumoral a partir de adenomas foliculares, sendo que duas regiões -8p22 e 12p13.32-p13.33, estão presentes em 100% e 75% das amostras respectivamente, podendo ser fortes candidatos a marcadores desse tipo tumoral. / More than 95% of thyroid gland malignancies are well-differentiated tumors. Preoperative diagnosis accuracy for papillary carcinomas, based on FNAC (Fine Needle Aspiration Cytology) and ultrasound screenings, has become nearly 100%. Nevertheless, when follicular neoplasm diagnosis is concerned, this reality is quite different. Using current preoperative screening tools, 60 – 80% of patients suspected to present follicular thyroid cancer, when operated turn out to suffer from benign disease. Therefore, in an effort to improve these results, genomic analysis of Copy Number Variations (CNV) that may more precisely differentiate follicular tumor from other thyroid conditions were carried out in 13 patients (3 bearing goiters, 2 hyperplasias, 4 follicular adenomas, 4 follicular carcinomas, 1 healthy individual). CNVs were tracked through aCGH method in order to detect follicular carcinoma most accurately. Results were compared with classic papillary carcinoma (4 subjects) and follicular variant (2 subjects). Samples demonstrated 725 CNVs, 703 of which belonging to patients with disease. Among these, 18 most frequent regions were selected. Patterns of amplification were more frequent in younger patients, while deletions were more frequent in the elder ones. Carcinoma patients presented very close CNV rates. Also, exclusive patterns of chromosomes 8 and 12 alterations were noticed in follicular carcinoma. Thus, it is possible to conclude that thyroid follicular carcinoma is a condition comprehending exclusive patterns of alterations, and progression of this disease is not related to follicular adenomas. Finally, regions -8p22 and 12p13.32-p12.33 were detected in 100% and 75% of samples respectively, therefore, may be deemed as possible tumoral markers.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T17:07:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseCitogeneticaProfissionais.pdf: 405179 bytes, checksum: f5bc835191e2632d4a950f002153256b (MD5) / Rejected by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br), reason: Aguardar as orientações on 2017-10-10T16:50:33Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:05:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseCitogeneticaProfissionais.pdf: 405179 bytes, checksum: f5bc835191e2632d4a950f002153256b (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-23T17:00:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseCitogeneticaProfissionais.pdf: 405179 bytes, checksum: f5bc835191e2632d4a950f002153256b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T17:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseCitogeneticaProfissionais.pdf: 405179 bytes, checksum: f5bc835191e2632d4a950f002153256b (MD5) Previous issue date: 2011-05-06 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Agentes genotóxicos, químicos, físicos (p. ex. raios-x) ou biológicos podem induzir danos genéticos por exposição acidental, ocupacional ou ambiental. Estes agentes podem interferir no correto desenvolvimento celular conferindo grande risco ao desenvolvimento da carcinogênese. Apesar da atuação dos sistema de reparo, muitos danos causados por estes agentes podem levar à formação de aberrações cromossômicas (AC). As aberrações induzidas podem ser: [i] estáveis (referem-se a pequenos danos, translocações recíprocas e algumas aneuploidias, que não impedem a divisão e proliferação celular) e [ii] não-estáveis (referem-se a cromossomos dicêntricos e em anel, grandes deleções e fragmentos). Os últimos, normalmente, são letais à célula. Profissionais que trabalham manuseando aparelhos que produzem radiação X, como ampolas de raios-x, tomógrafos e cintilógrafos pertencem ao grupo de trabalhadores que se expõem à radiação ionizante diariamente. Colheu-se 10 ml de sangue periférico de cada indivíduo por punção venosa utilizando agulhas e seringas descartáveis previamente heparinizadas com Liquemine (Lab. Roche 5.000 UI/ml). Após a coleta, transferiu-se o sangue para tubos de ensaio estéreis, que foram mantidos em repouso por algumas horas à temperatura ambiente, para a sedimentação das hemácias e separação do plasma.Foi realizada a análise de linfócitos do sangue periférico, através de técnicas de cultura temporária de linfócito, segundo Moorhead et al. de 20 trabalhadores (4 mulheres e 16 homens) que lidam com radiação ionizante diariamente, com pelo menos 2 anos de experiência profissional, com intuito de investigar a presença de aberrações cromossômicas nestas células, fazendo uso desta ferramenta citogenética para avaliar e elucidar as consequências da convivência profissional com índices considerados baixos de radiação ionizante. A frequencia de AC avaliada no grupo de trabalhadores foi maior que no grupo controle (P = 0,008 e P=0,001, respectivamente). Estes resultados sugerem uma avaliação mais profunda no impacto da saude destes trabalhadores, utilizando de ferramentas moleculares mais específicas, bem como a conscientização dos mesmos para um cotidiano de proteção radiológica mais eficiente.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-21T19:14:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1439306 bytes, checksum: 7f71a06de5db3f1824c5314ed19c43b4 (MD5) / Rejected by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br), reason: on 2017-10-10T17:00:49Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:38:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1439306 bytes, checksum: 7f71a06de5db3f1824c5314ed19c43b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-24T15:00:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1439306 bytes, checksum: 7f71a06de5db3f1824c5314ed19c43b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-24T15:00:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1439306 bytes, checksum: 7f71a06de5db3f1824c5314ed19c43b4 (MD5) Previous issue date: 2011-08-12 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O artesunato representa uma das principais drogas utilizadas como antimaláricos em diversos países. É um composto semi-sintético derivado de artemisinina, substancia extraída da planta chinesa Artemisia annua L. Apesar da ampla utilização do artesunato na terapêutica antimalárica, estudos demonstrando seus efeitos genotóxicos e citotóxicos em cultura de linfócitos humanos são ainda hoje quase inexistentes. Portanto, no presente trabalho, avaliamos os efeitos genotóxicos e citotóxicos do artesunato em cultura de linfócitos humanos. Nossos resultados demonstraram aumento significativo (p<0,05) no número de células apoptóticas dos linfócitos, tanto em 24 quanto em 48 h de tratamento. Desta forma, demonstrou-se em nosso trabalho, que o artesunato é uma droga genotóxica e citotóxica em cultura de linfócitos humanos, nas condições avaliadas. / Artesunate is one of the main drugs used as antimalarials in various countries. It is a semi-synthetic compound from artemisinin, a substance extracted from the Chinese plant Artemisia annua L. Despite the widespread use of antimalarial artesunato in malaria treatment, studies demonstrating its cytotoxic and genotoxic effects in human lymphocyte cultures are almost nonexistent. Therefore, in this study, we evaluated possible cytotoxic and genotoxic effects of artesunate on cultured human lymphocytes. A significant increase (p <0.05) in the rate of DNA damage and micronucleus frequency was observed after artesunato treatment. We also observed that artesunato induces a statically significant increase (p <0,05) in the number of apoptotic cells in both 24 and 48 h of treatment. Thus, we conclude in our work that artesunate is a highly cytotoxic and genotoxic drug in cultured human lymphocytes.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:53:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoInVitro.pdf: 4204396 bytes, checksum: a66ea9273f20dfc9a3cd37f2eab74163 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-27T12:50:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoInVitro.pdf: 4204396 bytes, checksum: a66ea9273f20dfc9a3cd37f2eab74163 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T12:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoInVitro.pdf: 4204396 bytes, checksum: a66ea9273f20dfc9a3cd37f2eab74163 (MD5) Previous issue date: 2015-10-23 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / A malária é uma das patologias infecto-contagiosas mais graves no mundo, apresentando distribuição geográfica bastante extensa em zonas tropicais. Seu tratamento é baseado na administração de drogas específicas, como, a artemisinina e seus derivados: artesunato, o qual será objeto deste estudo, e artemeter. O artesunato, é um composto semi-sintético derivado da artemisinina, substância extraída da planta chinesa Artemisia annua L. Apesar da ampla utilização do artesunato na terapia antimalárica, e de haver fortes evidências de que outros antimaláricos como, a partenina e a cloroquina, apresentem efeitos genotóxicos in vitro; ainda hoje são escassos os trabalhos que demonstrem seus efeitos genotóxicos em linfócitos humanos. Em estudos prévios realizados no laboratório de citogenética humana, foi demonstrado que o artesunato induz danos genotóxicos e citotóxicos ao DNA de linfócitos humanos em cultura. Apesar destes achados, os mecanismos indutores de tais efeitos não foram devidamente caracterizados devido a limitações das técnicas utilizadas. Assim, o presente estudo teve como objetivo caracterizar in vitro os efeitos genotóxicos e citotóxicos do artesunato em linfócitos de sangue periférico humano utilizando técnicas como FISHMN, ensaios de estresse oxidativo e imunocitoquímica por imunofluorescência. Pretendeu-se através do uso de tais técnicas, elucidar os mecanismos responsáveis pelos efeitos do artesunato no DNA de linfócitos humanos. A partir dos resultados encontrados no presente estudo foi possível inferir que o artesunato induz a formação de ROS e outros radicais livres e que estas substâncias estão causando danos no DNA dos linfócitos humanos em cultura. Assim, as células com o DNA danificado, não sendo capazes de reverter tal condição, ativam a apoptose pelas vias extrínseca e intrínseca. / Malaria is one of the most serious infectious disease in the world, with quite extensive geographic distribution in tropical areas. Its treatment is based on administration of specific drugs, as artemisinin and its derivatives: artesunate, which will be the subject of this study, and artemether. The artesunate is a semi-synthetic compound derived from artemisinin, a substance extracted from the Chinese plant Artemisia annua L. Despite the widespread use of artesunate in antimalarial therapy and the strong evidences that other antimalarials such as partenin and chloroquine present genotoxic effects in vitro; there are few studies that demonstrate artesunate genotoxic effects in human lymphocytes. In previous studies carried out in laboratory human cytogenetics, it was shown that artesunate induces cytotoxic and genotoxic effects in human lymphocytes in vitro. Despite these findings, the mechanisms of these effects have not been adequately characterized due to limitations of the techniques used. This study aimed to assess in vitro the cytotoxic and genotoxic effects of artesunate on human peripheral blood lymphocytes using assays such as FISHMN, oxidative stress and immunocytochemistry by immunofluorescence. We aimed through these tools elucidate the mechanisms responsible for the effects of artesunate in DNA of human lymphocytes. The results found in this study suggest that the artesunate induces the formation of ROS and other free radicals and that these substances are causing DNA damage in human lymphocytes in culture. Thus cells with damaged DNA, not being able to reverse this condition, activate apoptosis through the extrinsic and intrinsic pathways.