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Valor prognóstico do SNP TP53 ARG72PRO na susceptibilidade ao desenvolvimento e na sobrevida de pacientes brasileiros com meduloblastomaCARVALHO, Raimundo Miranda de 22 December 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / O Meduloblastoma é a neoplasia encefálica mais comum na infância, correspondendo a taxas de 16 a 25% de todos os tumores encefálicos em menores de 19 anos e 30-40% de todos os tumores da fossa posterior. Para investigar o papel do polimorfismo de base única (SNP) TP53 Arg72Pro sobre o risco de desenvolvimento, prognóstico e resposta a terapêutica adjuvante em
Meduloblastoma, foi realizado um estudo caso-controle com 122 pacientes e 122 controles saudáveis do Brasil. Em comparação com Arg/Arg, que é o genótipo mais comum na população em estudo, tanto o genótipo Arg/Pro e Pro/Pro não influenciaram o risco de desenvolvimento de Meduloblastoma (OR = 1,36 e P = 0,339 para o genótipo Arg/Pro; OR = 1,50 e P = 0,389 para o genótipo Pro/Pro). Com relação ao prognóstico, a sobrevida livre de doença não foi significativamente diferente entre os genótipos SNP TP53 Arg72Pro (P> 0,05), porém o genótipo menos freqüente, Pro/Pro, foi associado a uma menor sobrevida global dos pacientes com Meduloblastoma (P = 0,021 ). Estes dados sugerem que embora não haja nenhuma associação entre o SNP TP53 Arg72Pro e o risco de desenvolvimento de Meduloblastoma, o genótipo Pro/Pro está associado a uma menor sobrevida global dos pacientes submetidos a terapia adjuvante. No entanto, devido à composição interétnica da população brasileira, futuros estudos envolvendo populações maiores e de outras partes do mundo serão essenciais para uma conclusão definitiva da função do SNP TP53 Arg72Pro. / Medulloblastoma is a highly cellular malignant embryonal neoplasm, and it is the most common malignant pediatric brain tumor, comprising 20 to 25% of pediatric central nervous systen tumors. To investigate the role of the TP53 Arg72Pro single nucleotide polymorphism (SNP) on medulloblastoma risk, medulloblastoma prognosis, and adjuvant therapy response, we performed a case-control study with 122 patientes and 122 healthy controls from Brazil. Compared to Arg/Arg, which is the most common genotype in the study population, both the Arg/Pro and Pro/Pro genotypes did not influence the medulloblastoma development risk (OR= 1.36 and P= 0.339 for the Arg/Pro genotype; OR=1.50 and P=0.389 for the Pro/Pro genotype). With regard to prognosis, the disease-free survival was not significantly different among the TP53 Arg72Pro SNP genotypes (P > 0.05), but the less frequent genotype, Pro/Pro, was associated with a shorter overall survival of medulloblastoma patients (P= 0.021). These data suggested that although there is no association between the TP53 Arg72Pro and medulloblastoma risk, the Pro/Pro genotype is associated with a shorter overall survival of patients submitted to adjuvant therapy. Nevertheless, due to the interethnic composition of the Brazilian population, future studies on larger populations from other parts of the world are essential for a definitive conclusion of the function of the TP53 Arg72Pro SNP
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Análise de células-tronco adultas (CTA) em cultura de células de tecido epitelial de pequenos roedores (rodentia-stricognathi- sciurognathi)RISSINO, Jorge Dores 13 November 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As células-tronco adultas (CTA) são células multipotentes e não especializadas encontradas na medula óssea, no sangue periférico, na córnea, na retina, no cérebro, no músculo esquelético, na polpa dental, no fígado, no pâncreas, no epitélio da pele, no sistema digestivo, no cordão umbilical e na placenta. Estas células podem se renovar e reproduzir indefinidamente e, sob certos estímulos, se transformar em células especializadas de diferentes tecidos ou órgãos. O presente trabalho tem como objetivo a obtenção de CTA a partir de tecido epitelial de roedores silvestres de espécies diferentes (Oecomys concolor - um exemplar fêmea, Proechimys roberti - dois exemplares machos, Hylaeamys megacephalus - dois exemplares machos). A metodologia para isolamento e cultivo in vitro de amostras do tecido epitelial foi estabelecida, a partir de protocolos já descritos, avaliando aspectos morfológicos, estabilidade genômica, contagem e análise da viabilidade celular, potencial clonogênico e indução de diferenciação em osteócitos, condrócitos e adipócitos. Todas essas análises foram feitas pós-criopreservação das culturas. As CTA foram caracterizadas como população homogênea de células que proliferam in vitro, como células aderentes à superfície do plástico, tendo morfologia semelhante a fibroblastos e formato fusiforme, com alta taxa de crescimento e proliferação celular por várias passagens sucessivas, onde a autorrenovação celular foi avaliada por ensaios clonogênicos. Na análise para examinar a estabilidade genômica na P3, todas as amostras apresentaram cariótipo com número diplóide normal e estável. A metodologia empregada nos ensaios para diferenciação das CTA em linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica, apresentou resultados satisfatórios, onde as células mostraram a marcação desejada através das colorações Alizarin Red S, Alcian Blue e Oil Red O, respectivamente. Todas as amostras testadas apresentam capacidade de proliferação e diversidade de diferenciação, sendo potencialmente fornecedores de CTA provenientes da pele e podendo ser utilizados como organismos modelos de estudos em CT. / The Adult Stem Cells (ASC) are non-specialized multipotent cells found in the bone marrow, peripheral blood, cornea, retina, brain, muscles, dental pulp, liver, pancreas, skin epithelium, digestive system, umbilical cord and placenta. These cells can indefinably reproduce and renew themselves and, under some stimulation, to change into specialized cells of different tissues or organs. The present work had the aim of obtaining ASC from epithelial tissues from wild rodents of different species (Oecomys concolor – one female, Proechimys roberti – two males, Hylaeamys megacephalus – two males). The methodology for isolation and in vitro culture of epithelial tissue following the previously described protocols, as well as the analysis after cryopreservation of morphology, genome stability, counting and cells viability, clonogenic potential and differentiation on osteocytes, chondrocytes and adipocytes. The ADC were characterized as a homogeneous population of in vitro growing cells adherent to plastic surfaces, which has a morphology similar to fibroblasts and with fusiform shape, with high growing rate and cell proliferation form many successive passages, where the clonogenic assays evaluated the cell renewing. On checking the genome stability on P3, the entire sample had stable karyotypes with the correct diploid number. The methodology for ASC differentiation into osteocytes, chondrocytes and adipocytes cell lines was satisfactory and the cells demonstrated the staining with Alizarin Red S, Alcian Blue and Oil Red O, respectively. The entire sample had capacity of proliferation and differentiation, being a potential source of skin ASC. These species can be used as models for ASC studies.
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Análise citogenética comparativa em espécies de morcegos da subfamília phyllostominae (chiroptera-phyllostomidae) por citogenética clássica e hibridização in situ Flourescente (fish)SILVA, Natalia Karina Nascimento da 29 March 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os morcegos representam um grupo amplamente distribuído e diversificado. A diversidade de hábitos alimentares faz da ordem Chiroptera uma das mais bem sucedidas entre os mamíferos, desempenhando, em função de seus hábitos, um importante papel no controle de insetos, na polinização e na dispersão de sementes de numerosos vegetais. A família Phyllostomidae constitui a terceira maior família em número de espécies dentro da Ordem Chiroptera. Entre as representantes neotropicais é a mais numerosa, sendo encontrada em florestas tropicais da America do Sul, particularmente, concentrada na Amazônia que é a região com maior diversidade de morcegos do mundo. No presente trabalho foram analisados citogeneticamente exemplares de três espécies da subfamília Phyllostominae: Chrotopterus auritus, Trachops cirrhosus e Vampyrum spectrum coletados no estado do Pará e Amazonas. Os dados cromossômicos obtidos para Chrotopterus auritus (2n = 28 e NF = 52) e Trachops cirrhosus (2n = 30, FN = 56) estão de acordo com os descritos na literatura. Para Vampyrum spectrum (2n=30 NF=56) relatamos os primeiros padrões de bandeamento e FISH (Hibridização in situ Fluorescente). A técnica de bandeamento C demonstrou um padrão pericentromérico de distribuição da heterocromatina constitutiva nas três espécies estudadas. A técnica de FISH com sondas de DNA teloméricas humanas mostrou apenas marcações distais em todos os cromossomos das três espécies e as sondas de rDNA 18S confirmaram a localização das Regiões Organizadoras Nucleares observadas na técnica de Ag-NOR, presentes no braço longo do par 2 de Chrotopterus auritus, no par 11 de Trachops cirrhosus e no braço longo do par 1 de Vampyrum spectrum. A análise comparativa entre elas sugere um extenso grau de diferenciação cromossômica, com poucos cromossomos compartilhados entre os três gêneros. Contudo, cinco pares cromossômicos inteiros se mantiveram conservados sem nenhum tipo de rearranjo após a divergência das três linhagens. A comparação entre as espécies revela que C. auritus e V. spectrum apresentam mais elementos compartilhados entre si do que em relação à T. cirrhosus. Nossos resultados apoiam a proximidade filogenética entre C. auritus e V. spectrum e sugerem a associação de T. cirrhosus com o clado do gênero Phyllostomus. / Bats are a highly distributed and diversified group.The diversity of feeding habits makes the Order Chiroptera one of the highest successes among mammals, being very important, because of these habits, on the control of insects, on pollination, and on dispersion of seeds of many vegetables. The family Phyllostomidae is the third bigger family on number of species into the Order Chiroptera. Among the neotropical ones, this family is the most numerous, being found in the rainforests of South America, especially in the Amazon region, where there is the highest diversity of bats in the World. In the present work it was analyzed cytogenetically a sample of three species of the subfamily Phyllostominae: Chrotopterus auritus, Trachops cirrhosus and Vampyrum spectrum collected in the Pará and Amazon states. The chromosomal data obtained for Chrotopterus auritus (2n = 28 e NF = 52) and Trachops cirrhosus (2n = 30, FN = 56) are in agreement with the ones described in the literature. For Vampyrum spectrum (2n=30 NF=56) we described for the fist time the banding patterns and FISH (Fluorescent in situ Hybridization). The C-banding technique demonstrated a pericentric pattern of distribution of the centromeric heterochromatin in the three species here studied. The FISH with telomeric DNA probes shown only distal hybridizations in all chromosomes of the three species, while the 18S rDNA proble confirmed the location of the NOR observed by Ag-NOR staining, in the long arm of pair 2 Chrotopterus auritus, in the pair 11 of Trachops cirrhosus and in the long arm of the pair 1 of Vampyrum spectrum. The comparative analysis among the species suggests an extensive chromosomal differentiation, with few chromosome pairs being shared among the three genera. Five whole chromosome pairs were conserved without any rearrangement after the divergence of the three lineages. The comparison among the species shows that C. auritus and V. spectrum have more shared pairs between them than with T. cirrhosus. Our results support the phylogenetic association between C. auritus and V. spectrum and suggest the association of T. cirrhosus with the genus Phyllostomus.
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Efeito da interação genótipo ambiente, sob a forma de heterogeneidade de variâncias entre rebanhosOLIVEIRA, Lutero de Andrade 14 May 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Foram simuladas estruturas de dados em modelos mistos representando o teste de 100 reprodutores, sendo cada reprodutor acasalado com 10 matrizes (total de 1000 matrizes), originando em cada acasalamento 2 proles, totalizando 2000 proles (vinte proles por reprodutor). De cada combinação reprodutor e matriz, dez proles tiveram seu fenótipo expresso no ambiente de baixa produção (Estrato 1) e, a outra metade, no ambiente de alta produção (Estrato 2). A simulação foi realizada de forma a representar diferentes situações de presença de heterogeneidade de variâncias, combinando-se as origens da heterogeneidade, de natureza genética e ambiental. Na presença de heterogeneidade residual, o valor estimado para o componente de variância residual, considerando homogeneidade de variâncias se aproximou do valor médio das variâncias entre os estratos. Houve superestimação, também, do componente de variância genético aditivo. Ao simular heterogeneidade de variância de origem genética, observou-se que a estimação desse componente situou-se em valor intermediário aos simulados. Nessa situação, o componente de variância residual estimado foi próximo do valor simulado, indicando que a heterogeneidade de variâncias quando proveniente de fatores genéticos, não interfere, substancialmente, sobre e estimação do componente de variância residual. Na simulação de dados com presença de heterogeneidade tanto de origem genética quanto ambiental (estrutura de dados 4), conduziu a estimação de componentes de variâncias intermediários aos valores simulados em cada estrato. Assim, observa-se que, mesmo quando os reprodutores apresentam proles bem distribuídas em ambos os estratos, a heterogeneidade de variância proveniente de fatores não genético provoca distorções sobre a estimação da variância genética aditiva. Mas por outro lado, quando a heterogeneidade de variância é decorrente de fatores genéticos, não há grande interferência sobre a estimativa da variância residual, tal comportamento pode ser explicado pela incorporação da matriz de parentesco na estimação do componente de variância genético aditivo, possibilitando discriminar melhor a origem da diferenças entre variâncias. Na estrutura onde a variância residual foi heterogênea a estimativa de herdabilidade foi menor em relação à estrutura de homogeneidade de variâncias. Por outro lado, quando somente a variância genética aditiva foi heterogênea, a estimativa de herdabilidade, considerando-se apenas o estrato de alta variabilidade genética, foi inflacionada pela superestimação da
variância genética aditiva. No entanto, a estimativa de herdabilidade obtida, desconsiderando
essa fonte de heterogeneidade de variância, foi próxima à situação de homogeneidade de
variância, indicando que, quando os reprodutores possuem boa distribuição de proles em
diferentes ambientes, as estimativas relacionadas ao efeito genético são ponderadas pelo
desempenho dos animais em cada ambiente. As correlações de Spearman e de Pearson entre
os valores genéticos preditos dos reprodutores, para todas as situações, foram maiores que
0,90. O resultado indica que, mesmo havendo presença de heterogeneidade de variância
genética e/ou ambiental, se os reprodutores possuem proles bem distribuídas entre os
ambientes (estratos heterogêneos) a classificação do mérito genético não se altera, o que era
esperado, pois em análises unicarácter, quando ocorre uma fonte de viés na avaliação
genética, ela é comum a todos os indivíduos. Na situação em que foi imposta a estrutura de
dados à presença de heterogeneidade de variância residual com número de número desigual
de proles por reprodutor nos estratos, provocou superestimação dos componentes de
variância. Porém mesmo havendo alteração na magnitude dos valores genéticos preditos para
os reprodutores, a heterogeneidade de variância não alterou a classificação entre os
reprodutores todas as correlações de ordem foram próximas à unidade. O efeito da heterogeneidade de variância, oriunda de fatores ambientais, ocasiona em maiores distorções
sobre a avaliação genética animal, em relação, quando a mesma é proveniente de causas
genéticas. A conexidade genética entre diferentes ambientes, dilui o efeito da heterogeneidade de variância, tanto de origem genética, quanto ambiental, na predição de valores genéticos dos
reprodutores. / Were simulated data structures in mixed models accounting for the progeny test of 100 sires, each sire mated with 10 dam (total of 1,000 dam), giving in each mating 2 offsprings, totaling 2,000 offsprings (twenty offsprings per sire). Combination of each sire and dam, ten offsprings had their phenotype expressed in the environment of low production (Stratum 1) and the other half, the environment of high production (Stratum 2). The simulation was performed in order to represent different situations of the presence of heterogeneity of variances, mixing up the origins of the heterogeneity of genetic and environmental effect. In the presence of residual heterogeneity, the estimated value for the residual variance component, whereas homogeneity of variance approached the average of the variances between the strata. Overestimation was also of the additive genetic variance. Simulate the heterogeneity of variance of genetic effect, it was observed that the estimation of this component has been simulated in the intermediate value. In this situation, the component of variance was close to the estimated residual value simulated, showing that the heterogeneity of variances when from genetic factors, not interfere, substantially, and on estimation of the variance residual. In simulation data with the presence of both heterogeneity of genetic origin as environment, led to estimation of variance components intermediate to the values simulated in each stratum. Thus, it appears that even when the breeding offsprings have well distributed in both strata, the heterogeneity of variance from genetic factors do not distort the estimation of additive genetic variance. On the other hand, when the heterogeneity of variance is due to genetic factors, there is little interference on the estimation of residual variance component, this behavior can be explained by the incorporation of the matrix of kinship in the estimation of the additive genetic variance, allowing better discriminate the origin of differences between variances. In the structure where the residual variance was heterogeneous the estimate of heritability was lower in relation to the structure of homogeneity of variances. Furthermore, when only the additive genetic variance was heterogeneous, the estimation of heritability, considering only the layer of high genetic variability, was inflated by overestimation of additive genetic variance. However, the estimate of heritability obtained, ignoring this source of heterogeneity of variance, was close to the situation of homogeneity of variance, indicating that when the sires have good distribution of offspring in different environments, estimates related to the genetic effect is weighted by performance of the animals in each environment by Spearman correlations and Pearson between predicted breeding values of sires, for all
situations, were higher than 0.90. This result indicates that even with the presence of heterogeneity of genetic variance and / or environmental, is the offsprings per sire are well distributed among environments (heterogeneous strata) the rank of genetic merit does not change. When a source of bias in genetic evaluation, it is common to all individuals. In the situation that was imposed on the structure of data the presence of heterogeneity of residual variance with an unequal number of offsprings per sire in the strata, caused overestimation of the variance components. But even with changes in the magnitude of predicted breeding values for breeding, the heterogeneity of variance did not alter the ranking among all sires in order correlations were close to unity. The effect of heterogeneity of variance, come from environmental factors, leads to major distortions on animal genetic evaluation, for, when it comes to genetic sources. A genetic conexity between different environments, dilutes the effect of heterogeneity of variance, both genetic origin, as environmental, prediction of genetic value of breeding.
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Avaliação imunohistoquímica da atividade macrofágica e sua relação com o fenômeno de apoptose na hanseníaseLIMA, Luiz Wagner de Oliveira 23 July 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve por objetivo avaliar a correlação entre a atividade
de macrófagos e a apoptose nas formas polares da hanseníase. Para tal foram
analisadas amostras constituídas de 29 biopsias de pele de pacientes com as
formas polares da hanseníase. Para a medida da atividade macrofágica e da
apoptose, utilizou-se o método imunohistoquímico, visando os marcadores
lisozima, CD68, iNOS (para atividade de macrófago) e caspase 3 (para apoptose).
No tratamento estatístico, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney e
a Correlação linear de Spearman. Os resultados obtidos sugerem que a taxa de
apoptose sofre influência direta da atividade macrofágica nas lesões de pacientes
TT, contudo nas lesões LL, notou-se que outros fatores devem estar induzindo a
morte celular programada, possivelmente o TGF-β. / The present study had for objective to evaluate the correlation between the
activity of macrophage and the apoptosis in the polar forms of the leprosy. For
such constituted samples of 29 biopsies of patients' skin were analyzed with the
polar forms of the leprosy. For the measure of the activity of macrophage and of
the apoptosis, the method immunohistochemistry was used, seeking the markers
lysozyme, CD68, iNOS (for activity of macrophage) and caspase 3 (for apoptosis).
In the statistical treatment, it was used the test non parametric of Mann-Whitney
and the lineal Correlation of Spearman. Do the obtained results suggest that the
apoptosis rate suffers direct influence of the activity of macrophages in the lesions
of patient TT, however in the lesions what was LL, noticed other factors they must
it is inducing the programmed cellular death, possibly TGF-β.
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Caracterização molecular de cepas do Vírus dengue 1 isoladas no Brasil entre os anos de 1994 a 2008CARNEIRO, Adriana Ribeiro 15 May 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / A febre do dengue é uma das mais importantes arboviroses distribuída por todas as áreas tropicais do mundo. O vírus dengue (VDEN) é transmitido principalmente pela picada do mosquito Aedes aegypti infectado. A dispersão do vetor e o aumento do fluxo migratório entre países possibilitaram a
ocorrência de grandes epidemias e manifestações clínicas severas, como febre
hemorrágica do dengue (FHD) e Síndrome do choque do dengue (SCD). O
objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular de isolados do
VDEN sorotipo 1 (VDEN-1) no Brasil ao nível dos genes estruturais C/prM/M/E
de 29 cepas isoladas durante epidemias ocorridas no Brasil no período de 1994
a 2008. A identidade nucleotídica entre as cepas de VDEN-1 do estudo em
relação às outras isoladas no Brasil variou de 96,1% a 100%, enquanto o
percentual de identidade de aminoácidos foi determinado entre 98,4% a 100%.
As diferenças de aminoácidos entre as cepas do estudo, quando comparadas
com a cepa FGA/89 (Guiana Francesa), mostraram a presença de importantes
substituições não-sinônimas com mudança de caráter bioquímico, tais como os
resíduos E297 (Met Tre) e E338 (Ser Leu), sendo necessário estudos para
verificar se essas alterações podem ou não estar relacionadas à virulência. A
análise filogenética para a proteína E, realizada por meio do método de
máxima verossimilhança para as cepas do estudo e outras cepas selecionadas
do banco de dados do Genbank, mostraram que as cepas de VDEN-1 isoladas
no Brasil desde 1982 pertencem ao genótipo V, corroborando com os
resultados publicados anteriormente. O tempo de divergência do VDEN-1,
estimado através da hipótese de relógio molecular, mostrou que este vírus teve
sua origem a partir de uma linhagem ancestral, há aproximadamente, 113 anos
e observou-se ainda que as cepas de VDEN-1 circulantes no Brasil e as
provenientes da África possuem um ancestral comum, sendo necessário estudos de filogeografia que mostrem as possíveis rotas de entrada do VDEN-1
no Brasil. / Dengue fever is one of the most important arboviral disease distributed to all
tropical areas of the world. Dengue virus (DENV) is transmitted mainly by the
bite of infected Aedes aegypti mosquitoes. The dispersion of the vector and the
increase of migration between countries caused the occurrence of major
epidemics and severe clinical manifestations, such as the dengue hemorrhagic
fever (DHF) and the dengue shock syndrome (DSS). The objective of this study
was the molecular characterization of isolates of DENV-1 in Brazil at the level of
structural genes C / prM / M / E of 29 strains isolated during outbreaks occurred
in Brazil between 1994 and 2008. The nucleotide identity among strains of this
DENV-1 study compared with other strains isolated in Brazil ranged from 96.1%
to 100%, while the percentage of amino acid identity was determined between
98.4% to 100%. The amino acid differences between strains of the study,
compared with the strain FGA/89 (French Guiana) showed the presence of
important non-synonymous substitutions change of the amino acid biochemical
character, such as the E297 residue (Met Thr) and E338 (Ser Leu), more
detailed studies are needed to investigate if any of them may be related to
DENV-1 virulence. The phylogenetic analysis of the E gene, performed using
the maximum likelihood method for the studied strains and other strains
selected from the database of GenBank showed that the DENV-1 isolates from
Brazil since 1982 belonged to genotype V, confirming previously published
data. The time of divergence of DENV-1, estimated by molecular clock method,
showed that this virus was originated from an ancestral lineage, there are
approximately 113 years and it was also observed that DENV-1 strains
circulating in Brazil and those from Africa have a common ancestor, and finally
it is necessary phylogeographic studies to show the possible routes of entry of
DENV-1 in Brazil.
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Caracterização molecular do vírus Melao cepas BE AR 633512 e BE AR 8033 (Bunyaviridae, Orthobunyavirus) e infecção experimental em hamsters dourados (Mesocricetus auratus)CARVALHO, Valéria Lima 25 May 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As cepas do Virus Melao (VMEL), BE AR 8033 e BE AR 633512 foram isoladas de mosquitos Ochlerotatus (Ochlerotatus) scapularis, em Belém- PA (1955) e Alta Floresta do Oeste- RO (2000), respectivamente. Este trabalho teve como objetivo caracterizar molecularmente as cepas BE AR 633512 e BE AR 8033 e realizar estudos histopatológicos, bioquímicos e imunológicos comparativos em hamsters dourados (Mesocricetus auratus). Hamsters mostraram suscetibilidade às cepas do VMEL. A viremia em hamsters para BE AR 633512 ocorreu do 3º ao 6º dias pós-infecção (dpi.), e para a cepa BE AR 8033 ocorreu no 2º dpi. Anticorpos neutralizantes para ambas as cepas foram detectados a partir de 5 dpi., e se mantiveram até 30 dpi. As cepas testadas alteraram os marcadores bioquímicos AST, ALT e uréia, enquanto que a creatinina só apresentou alteração estatisticamente significante nos animais infectados com a cepa viral BE AR 633512, em comparação aos animais controles não infectados. Alterações histopatológicas foram observadas no SNC, fígado, rim e baço dos hamsters infectados pelas cepas do VMEL, sendo a infecção nesses órgãos confirmada por imunohistoquímica. A cepa BE AR 633512 foi mais virulenta e patogênica para hamsters que a cepa BE AR 8033. A análise genética dos genes N, Gn e Gc revelou que para os genes N e Gn, a cepa BE AR 8033 e do protótipo VMEL (TRVL 9375) são mais geneticamente relacionados. Para o gene Gc, a cepa BE AR 8033 é mais relacionada com a cepa BE AR 633512, sendo que esta última cepa apresentou maior variabilidade genética, principalmente no gene Gn com várias substituições de aminoácidos, mas as mutações no gene Gc provavelmente foram responsáveis pelo aumento da virulência e patogenicidade em hamsters. / The Melao Virus (MELV) strains, BE AR 8033 e BE AR 633512 were isolated from lots of Ochlerotatus (Ochlerotatus) scapularis mosquitoes, in Belém- PA (1955) and Alta Floresta do Oeste- RO (2000), Brazil, respectively. The aim of this study was to carry out molecular characterization of the MELV strains BE AR 633512 and BE AR 8033 and to describe the histopathologic, biochemistry and immunological changes in golden hamsters (Mesocricetus auratus). Hamsters showed susceptibility to these MELV strains. The viremia produced in hamsters by BE AR 633512 strain occurred between 3 and 6 days post-infection (dpi.), and for the BE AR 8033 occurred only in the 2nd dpi. Neutralizing antibodies for both strains were initially detected on the 5th dpi. and remained up to the 30 dpi. The biochemistry markers AST, ALT and blood urea nitrogen showed values statistically significants among inoculated animals with both VMEL strains, while creatinine value it was only altered by BE AR 633512 strain. Histopathologic changes were observed in the central nervous system, liver, kidney, and spleen of the hamsters, and infection was confirmed by immunohistochemical assay in all them. Strain BE AR 633512 caused more intense tissue damage showing increases virulence and pathogenicity than BE AR 8033 strain. The genetic analysis of the N, Gn and Gc genes revealed that for N and Gn genes, the BE AR 8033 and prototype strain (TRVL 9375) are genetically more closed related, and for the Gc gene, the BE AR 8033 and BE AR 633512 strains are more related. BE AR 633512 strain showed increased genetic variability, mainly in the Gn gene, were several aminoacid changes were observed, but the Gc mutations should be responsible for the increased virulence for hamsters.
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Transferibilidade e variabilidade genética de marcadores microssatélites gênicos em Egenia klotzschiana Berg (Myrtaceae) / Transferability and genetic variability of microsatellite markers genec Eugenia klotzschiana Berg (Myrtaceae)Siqueira, Mariana Natalice de 11 August 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-08-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Eugenia klotzschiana Berg is a species of Myrtaceae with restricted distribution in the Cerrado. Its fruits present nutritional potential and can be used in extractive way, as raw material for production of jams, jellies and juices. In this context, it is necessary to evaluate population-genetic aspects in order to provide information to assist in targeting strategies for management and conservation. To assess the genetic variability in a population context microsatellite markers have been used in recent years. The sequences flanking the microsatellite regions of the genome are highly conserved between related species, enabling the portability of these markers, reducing thereby the costs of developing the same for each species under study. In this context, the aim of this study was to test the potential for transferability to the genome of E. klotzschiana of genic microsatellite markers developed for Eucalyptus, as well as to characterize the genetic variability in their populations. For this purpose, DNA was extracted from leaf tissue of E. klotzschiana individuals and used to test the cross 120 pairs of amplification primers. Samples from seven locations were used to characterize the population genetic variability. The amplification products were analyzed on agarose and polyacrylamide capillary electrophoresis gel in different stages. Of total primers tested, 67 (55.83%) did
not amplify, 42 (35%) had many nonspecific amplification products and 11 (9.2%) were
successfully transferred. Of the 11 transferred eight showed polymorphism. For the
eight polymorphic markers, the probability of identity was high (2.02 x10-3) and the
power of paternity exclusion was moderated (0.74). In this population the average value
of expected heterozygosity (He) was 0.28 and observed heterozygosity (Ho) was 0.44,
as in subpopulations of He mean values ranged from 0.18 to 0.27 and the mean values
Ho ranged from 0.36 to 0.53, respectively. No significant for the fixation index (f) were
observed in the populations values indicating allele frequencies below the expected
Hardy-Weinberg proportions.The extent of genetic divergence among subpopulations
showed relatively high genetic differentiation, with a value of θ equal to 0.20, and peerto-
peer values ranging between 0.00 and 0.34. The strategy of transferability of
microsatellite markers was efficient to generate a panel of polymorphic microsatellite
markers and learn a little of the genetic variability of the species. It was possible to
verify that there is a low genetic variability within subpopulations for biomarkers.
However, this work is a starting point for future studies to better understand the
reproductive biology of the species Eugenia klotzschiana. / Eugenia klotzschiana Bergé uma espécie da família Myrtaceae com distribuição restrita no Cerrado. Seus frutos apresentam potencial alimentício e podem ser utilizados de forma extrativista,como matéria-primapara produção de doces, geleias e sucos. Neste contexto, torna-se necessário a avaliação de aspectos genético-populacionais a fim de disponibilizar informações que auxiliem no direcionamento de estratégias de manejo e conservação. Marcadores microssatélites têm sido utilizados nos últimos anospara
avaliar a variabilidade genética em um contexto populacional. As sequências que flanqueiam as regiões microssatélites no genoma encontram-se altamente conservadas entre espécies relacionadas, o que possibilita a transferibilidade destes marcadores, reduzindo, desta forma, os custos de desenvolvimento dos mesmos para cada uma das espécies que se pretende estudar. Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi testar o potencial de transferibilidade para o genoma de Eugenia klotzschiana, de marcadores microssatélites gênicos desenvolvidos para Eucalyptus, assim como caracterizar a variabilidade genética existente em suas populações. Para tanto, o DNA foi extraído a partir de tecido foliar de indivíduos de E. klotzschianae utilizado para testar a amplificação cruzada de 120 pares de primers. Amostras oriundas de sete localidades foram utilizadas para a caracterização da variabilidade genética populacional. Os produtos de amplificação foram analisados em gel de agarose, poliacrilamida e emeletroforese capilar, em diferentes etapas. Do total deprimers testados, 67 (55,83%) não amplificaram, 42 (35%) apresentaram muitos produtos de amplificação inespecíficos e 11 (9,2%) foram considerados transferidos com sucesso. Dos 11 transferidos, oito apresentaram polimorfismo. Para os oito marcadores polimórficos, a probabilidade de identidade foi alta (2,02x10-3) e o poder de exclusão de paternidade foi moderado (0,74). Na população, o valor médio da heterozigosidade esperada (He) foi de 0,28 e a heterozigosidade observada (Ho) foi de 0,44, já nas subpopulações os valores médios de He variaram de 0,18 a 0,27 e os valores médios de Ho variaram de 0,36 a 0,53.Não foram observados valores significativos para o índice de fixação (f) nas subpopulações, indicando que as frequências alélicas seguem as proporções esperadas pelo equilíbrio de Hardy-Weinberg. A medida de divergência genéticaentre as subpopulações apresentou diferenciação genética relativamente
alta,com valor de θigual a0,20, e com valores par-a-par variando entre 0,00 e 0,34. A estratégia de transferibilidade de marcadores microssatélites foi eficiente para gerar um painel de marcadores microssatélites polimórficos e conhecer um pouco da variabilidade genética da espécie. Foi possível verificar que existe uma baixa variabilidade genética dentro das subpopulações para os marcadores avaliados. Todavia, esse trabalho é um ponto de partida para futuros estudos que permitam conhecer melhor a biologia reprodutiva da espécie Eugenia klotzschiana.
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Efeitos de argentilactona sobre o perfil transcricional, parede celular e estresse oxidativo de Paracoccidioides sppAraújo, Felipe Souto 02 June 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-06-02 / Paracoccidioides spp, dimorphic pathogenic fungi, is the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is an endemic disease that affects at least 10 million people in Latin America, causing severe public health problem. The drugs used against pathogenic fungi have various side effects and have limited efficacy, therefore there is an inevitable and urgent medical needing for the development of new antifungal drugs. In the present study, we evaluated the transcriptional profile of Paracoccidioides spp exposed to argentilactone, a constituent of the essential oil of Hyptis ovalifolia. A total of 1,058 genes were identified, of which 208 were up-regulated and 850 down-regulated. The cell rescue, defense and virulence, with a total of 26 genes, was a functional category with a large number of genes induced, among them, heat shock protein 90 (hsp 90), cytochrome c peroxidase (ccp), hemoglobin ligant RBT5 (rbt5) and superoxide dismutase (sod). Quantitative real-time PCR revealed an increase in the expression level of all those genes. Enzymatic assay showed a significant increase in SOD activity. The reduced growth of Pbhsp90-aRNA, Pbccp-aRNA, Pbsod-aRNA, Pbrbt5-aRNA isolates in the presence of argentilactone indicates the importance of these genes in Paracoccidioides spp responding to argentilacone. Paracoccidioides spp cell wall was also evaluated. The results showed that argentilactone causes a decrease in the levels of polymers of the cell wall. These results suggest that argentilactone is a potential candidate for antifungal therapy. / Paracoccidioides spp, fungo patogênico dimórfico, é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM). PCM é uma doença endêmica que afeta pelo menos 10 milhões de pessoas na América Latina, causando grave problema de saúde pública. Os medicamentos usados contra fungos patogênicos têm vários efeitos secundários e têm eficácia limitada, por conseguinte, existe uma inevitável e urgente necessidade médica para o desenvolvimento de novas drogas anti-fúngicas. No presente estudo, foi avaliado o perfil transcricional de Paracoccidioides spp expostos a argentilactona, um componente do óleo essencial de Hyptis ovalifolia. Um total de 1.058 genes foram identificados, dos quais 208 foram induzidos e 850 reprimidos. Resgate celular, defesa e virulência, com um total de 26 genes, foi uma categoria funcional com um grande número de genes induzidos, entre eles, proteína de choque térmico 90 (HSP 90), citocromo c peroxidase (CCP), hemoglobina ligante RBT5 (rbt5) e superóxido dismutase (SOD). Quantitative real-time PCR revelou um aumento do nível de expressão de todos esses genes. Ensaio enzimático mostrou um aumento significativo na atividade de SOD. O crescimento reduzido de Pbhsp90-aRNA, Pbccp-aRNA, Pbsod-aRNA, Pbrbt5-aRNA na presença de argentilactona indica a importância desses genes em Paracoccidioides spp respondendo a argentilacona. Parede celular de Paracoccidioides spp também foi avaliada. Os resultados mostraram que argentilactona provoca uma diminuição nos níveis de polímeros da parede celular. Estes resultados sugerem que argentilactona é um candidato potencial para a terapia antifúngica.
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Avaliação de testadores para capacidade de combinação em linhagens endogâmicas de milho (zea mays l.) / Evaluation of testes for combining ability in maize (Zea mays L.) imbreed linesPimentel, Alexandre Lopes 30 August 2001 (has links)
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Previous issue date: 2001-08-30 / The main objective of this work is to compare different testes to evaluate for combining ability a group of unselected lines. Twenty eight lines from the CMS 04C population and six testers were used. The testers were the BR105 population, three imbreed lines from the BR105, one single cross proceeding from crossing of two of the used lines as testers and the EMGOPA 501 population. Because of the limited amounts of seeds, the topcrosses of the 20 from the 28 lines were evaluated in two places. The incomplete block design with two common treatments and three replicates were used for the topcrosses evaluation. The trials were installed in 2000/01 season, in the experimental stations of the Planagri company, in Goianésia-Goiás, and at the Escola de Agronomia of Universidade Federal de Goiás, in Goiânia-Goiás.The diallel analysis followed the model of Griffing (1956), adapted by Geraldi & Miranda Filho (1988). The correlations of Spearman, percentage of coincidence based in selection intensity and the variances between topcrosses were used, to compare the testers.
It wasn’t observed consistency of the lines rank among the testers and not even for each tester between the two places. The results were different for each place. In Goianésia, the BR105 population, that got greater estimative of General Combining Ability, was the most convenient tester to discriminate the lines. However, in Goiânia, the EMGOPA 501 population, that got the lowest estimative of General Combining Ability, was the most convenient tester to evaluate the lines. In the combined analysis of the two places, the EMGOPA was only able to discriminate the lines. Some lines were superior in hybrid combining and some crossings will have to be evaluated in other environments to confirm its good performance. / Esse trabalho teve como objetivo principal comparar diferentes testadores para avaliar um grupo de linhagens não selecionadas. Foram utilizadas 28 linhagens provenientes da população CMS04C e seis testadores. Os testadores utilizados foram a população BR105, três linhagens endogâmicas provenientes da população BR105, um híbrido simples obtido pelo cruzamento de duas das linhagens usadas como testadores e a população EMGOPA 501. Devido às quantidades de sementes obtidas, somente os “topcrosses” de 20 das 28 linhagens puderam ser avaliados em dois locai. Foi utilizado o delineamento de blocos incompletos com dois tratamentos comuns e três repetições para as avaliações dos “topcrosses”. Os ensaios foram instalados na safra 2000/01, nas estações experimentais da empresa Planagri S.A., em Goianésia-GO, e da Escola de Agronomia da Universidade Federal de Goiás, em Goiânia-GO. A análise dialélica seguiu o modelo de Griffing (1956), adaptado por Geraldi & Miranda Filho (1988). Foram utilizadas as correlações de Spearman, porcentagem de coincidência em função da intensidade de seleção e as variâncias entre “topcrosses”, para comparar os testadores.
Em geral, não houve consistência das classificações das linhagens entre os testadores e nem mesmo para cada testador entre os dois locais. Os resultados obtidos foram diferentes para os dois locais. Em Goianésia, a população BR105, que obteve a maior estimativa de CGC, foi o testador mais adequado para discriminar as linhagens. Já em Goiânia, foi a população EMGOPA 501, que obteve a menor estimativa de CGC, o testador mais indicado para avalia-las. Na análise conjunta dos dois locais, somente a população EMGOPA 501 foi capaz de discriminar as linhagens. Algumas linhagens que se destacaram em combinações híbridas e alguns cruzamentos deverão ser avaliados em outros ambientes para confirmar o seu bom desempenho.
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