Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-06-22T19:34:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Talita Cristina Mamedes - 2013.pdf: 960382 bytes, checksum: 686077b9e4ff166f99426931ebddf7e2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2017-07-07T20:21:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Talita Cristina Mamedes - 2013.pdf: 960382 bytes, checksum: 686077b9e4ff166f99426931ebddf7e2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T20:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Talita Cristina Mamedes - 2013.pdf: 960382 bytes, checksum: 686077b9e4ff166f99426931ebddf7e2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-04-02 / Handroanthus impetiginosus (Mart. ex DC.) Mattos is widely distributed woody species in Brazil. It has economic importance for its use as wood, medicinal, ecological and ornamental tree. There is great variation in the production of fruits and seeds over the years, many of the seeds are attacked by fungi and insects, and finally, the remaining intact seeds lose viability very quickly. Techniques of plant tissue culture can increase the rate of germination in woody species. The cultivation in nutrient medium under aseptic conditions, provides great production of seedlings in reduced time and space and at any time of year. Furthermore, in vitro propagation acts as a tool in the identification of microorganisms, studying their relationships and interactions with the host plant at genetic, cellular and physiological levels. The aim of this study was to establish a protocol for in vitro propagation of H. impetiginosus developed in three steps: decontamination and seed germination, induction of new shoots and roots. The protocol was based on direct organogenesis using plant material from seedlings germinated in vitro. For in vitro germination, seed surface contamination was controlled using 2 min. in 70% ethanol and 10 min. sodium hypochlorite with 2 % active chlorine. The germination rate was 99 % on MS medium. Induction and multiplication of new shoots were carried out with the aid of growth regulators 6 - benzylaminopurine (BAP) and naphthalene acetic acid (NAA) in different combinations. The results showed that for explants of H. impetiginosus all the tested amounts of BAP and NAA have the ability to regenerate shoots, callus and adventitious roots, it is necessary to improve the regeneration protocol to obtain greater number of new shoots. For in vitro rooting, cuttings responded positively to 6.0 mg L - 1 butyric acid (IBA), with 92 % rooting. However, the methods of decontamination of seeds did not control fungi of the genus Oidium. In order to identify the fungus and study the fungus - host relationship in H. impetiginosus cuts were made in vitro leaf fragments and the anatomical structure analyzed by optical microscope and scanning electron microscope. After the emergence of Oidium sp. on seedlings developed in vitro, methods of seeds disease control were tested for germination using different times and concentrations of ethanol, sodium hypochlorite, Chlorothalonil + tiophanate Methyl (systemic fungicid ) and Neem oil assessing the incidence and severity of each disease treatment. No treatment was effective in the control of powdery mildew, indicating the need for further studies. However, reduction of severity was observed in seeds treated with 70 % ethanol and sodium hypochlorite (2% active chlorine) and Neem oil immersion to 1.5 % for 10 minutes. / Handroanthus impetiginosus (Mart. ex DC.) Mattos é uma espécie arbórea de ampla distribuição no território brasileiro. Possui importância econômica por seu uso madeireiro, medicinal, ecológico e ornamental. Há grande variação na produção de frutos e sementes no decorrer dos anos, muitas das sementes produzidas são atacadas por fungos e insetos e, finalmente, as sementes que restam intactas perdem a viabilidade muito rapidamente. Técnicas de cultura de tecidos vegetais podem aumentar esta taxa de germinação em espécies arbóreas. O cultivo em meio nutritivo sob condições assépticas, proporciona grande produção de mudas em tempo e espaço reduzidos e em qualquer época do ano. Além disso, a propagação in vitro atua como ferramenta na identificação de microorganismos, estudando suas relações e interações com a planta hospedeira em níveis genético, celular e fisiológico. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de propagação in vitro de H. impetiginosus, desenvolvido em três etapas: descontaminação e germinação das sementes, indução de novos brotos e enraizamento. O protocolo foi baseado na organogênese direta, utilizando material vegetal de plântulas germinadas in vitro. Na germinação in vitro a contaminação superficial das sementes foi controlada utilizando 2 min. em etanol 70% e 10 min. em hipoclorito de sódio com 2% de cloro ativo. A taxa de germinação foi de 99 % em meio MS. A indução e multiplicação de novos brotos foram realizadas com o auxílio dos reguladores de crescimento 6-benzilaminopurina (BAP) e ácido naftalenoacético (ANA) em diferentes combinações. Os resultados mostraram que, para explantes de H. impetiginosus, todas as quantidades testadas de BAP e de ANA possuem a capacidade de regenerar brotos, calos e raízes adventícias, sendo necessário aperfeiçoar o protocolo de regeneração para obter número maior de novas brotações. No enraizamento in vitro, estacas caulinares responderam de maneira positiva a 6,0 mg.L-1 de ácido indolbutírico (AIB), com 92% de enraizamento. Porém, os métodos de descontaminação de sementes não controlaram fungos do gênero Oidium sp. Com o objetivo de identificar o fungo e estudar a relação fungo-hospedeiro em H. impetiginosus in vitro foram feitos cortes anatômicos de fragmentos foliares analisados com microscópio óptico e microscópio eletrônico de varredura. Após o aparecimento de Oidium sp. nas plântulas desenvolvidas in vitro, métodos de controle da doença em sementes foram testados para a germinação in vitro utilizando diferentes tempos e concentrações de etanol, hipoclorito de sódio, Clorotalonil + Tiofanato Metílico (fungicida sistêmico) e óleo de Nim avaliando a incidência e severidade desta doença em cada tratamento. Em nenhum tratamento houve o controle efetivo do oídio, indicando a necessidade de novos estudos. Porém, a redução da severidade foi observada em sementes tratadas com etanol 70% e hipoclorito de sódio (2% de cloro ativo) e imersão em óleo de Nim a 1,5% por 10 minutos.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-06T18:50:40Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Natácia Evangelista de Lima - 2012.pdf: 3869033 bytes, checksum: 96f52253e73097c6dac8f15c5acf311c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-06T19:07:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Natácia Evangelista de Lima - 2012.pdf: 3869033 bytes, checksum: 96f52253e73097c6dac8f15c5acf311c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T19:07:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Natácia Evangelista de Lima - 2012.pdf: 3869033 bytes, checksum: 96f52253e73097c6dac8f15c5acf311c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-04-23 / Mauritia flexuosa, popularly known as buriti, is a large palm that occurs especially in association with wetlands (veredas) in South America. It is distinguished because of its economic importance for local populations from Central Brazil, and as source of food, breeding site and haven for the terrestrial and aquatic fauna. The effect of historical demographic events and climatic fluctuations in the current distribution of buriti can provide clues about the responses of this species to anthropic pressures and to future climatic changes. For this purpose we studied the phylogeography of M. flexuosa. The results were based on the differences of sequences from the following chloroplast intergenic regions: psbA-trnH, trnC-ycf6 and trnS-trnG. We sampled 170 individuals from 14 localities throughout Central Brazil, including populations in the Amazon, Araguaia/Tocantins, Paraná and São Francisco Basins. Since the distribution of M. flexuosa is restricted to wetlands, which are surrounded by large areas of dry lands that may act as barriers to gene flow, we hypothesized that populations are highly differentiated and that River Basins act as phylogeographic breaks. The combined data from the three sequence regions generated a fragment of 1205bp, with 11 haplotypes. Nucleotide diversity was low (π = 0.005314 +/- 0.002800) and haplotipic diversity was high (h =0,791) for the combined data. The population parameter θ, and nucleotide and haplotype diversity per population, shows a pattern where populations from different geographic regions have a relative genetic uniformity, separated by steep losses on the diversity; what characterizes colonization by sectors. Differentiation among populations was significant (P< 0.001), but no sign of recent bottleneck on population size followed by expansion was found (D Tajima=-1.955 p = 0.00210; Mismatch Distribution=0.034 p=0.7467 and growth parameter g=402. 402, 95% = -334.961 ICredi, ICreds 95% = 999.91). We could group populations by location in the phylogenetic analysis (Network software), but they do not support the initial hypothesis that the major basins act as important phylogeographic breaks for the distribution of maternal lineages of M. flexuosa. The studied populations showed ancient time of coalescence. This research provided more details on the dynamics and genetic structure of the remnant of buriti populations, helping to elucidate the evolutionary history of this neotropical palm. / Mauritia flexuosa, popularmente conhecida como buriti, é uma grande palmeira que ocorre especialmente em associação com áreas alagadas (veredas) na América do Sul. Destaca-se pela importância econômica para as populações locais do Brasil Central e como fonte de alimento, local de reprodução e refúgio para fauna terrestre e aquática. O efeito de eventos históricos, demográficos e das flutuações climáticas sobre a distribuição do buriti pode gerar pistas sobre as possíveis respostas desta espécie à pressão antrópica e a mudanças climáticas. Para tanto foi estudada a filogeografia de M. flexuosa. Os resultados foram baseados no polimorfismo das seguintes regiões cloroplastidiais intergênicas: psbA-trnH, trnC-ycf6 e trnS-trnG. Foram amostrados 170 indivíduos de 14 localidades distribuídas pelo Brasil Central, incluindo populações nas Bacias: Amazônica, do Araguaia-Tocantins, do Paraná e do São Francisco. Como a distribuição de M. flexuosa é restrita a regiões alagáveis rodeadas por grandes áreas de terras secas, que podem atuar como barreiras ao fluxo gênico, hipotetiza-se que as populações de buriti de cada bacia hidrográfica sejam altamente diferenciadas, uma vez que estas bacias devem se comportar como quebras filogeográficas. Os dados combinados para as três regiões cloroplastidiais geraram um fragmento de 1205 pb com 11 haplótipos. A diversidade nucleotídica foi baixa (π = 0,005314 +/- 0,002800) e a diversidade haplotípica foi elevada (h =0, 791) para os dados combinados. O padrão encontrado para o parâmetro demográfico θ e para as diversidades nucleotídica e haplotípica por população mostra regiões geográficas com uma relativa uniformidade genética, separadas por quebras abruptas nas diversidades caracterizando uma colonização por setores. A diferenciação entre populações foi significativa (P<0,001) e não há sinal de retração recente no tamanho das populações seguido por expansão (D de Tajima= -1,955 p=0,00210; Distribuição de mismatch=0,034 p=0,7467 e parâmetro de crescimento g = 402, 402, ICredi 95% = -334,961, ICreds 95%= 999,91). Foram encontrados agrupamentos distintos por localidade na análise filogenética (programa )etwork), porém eles não suportam a hipótese inicial de que as principais bacias hidrográficas formam quebras filogeográficas importantes para distribuição das linhagens maternas de M. flexuosa. As populações estudadas apresentaram tempos de coalescência antigos. Essa pesquisa gerou mais detalhes sobre a dinâmica e estrutura genética nos remanescentes das populações de buriti, auxiliando a entender melhor a história evolutiva para esta palmeira neotropical.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-23T11:22:49Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Campos Borba de Carvalho - 2013.pdf: 2453380 bytes, checksum: 04cd0ef2d26879895e9dfc3e3f757f13 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-23T11:34:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Campos Borba de Carvalho - 2013.pdf: 2453380 bytes, checksum: 04cd0ef2d26879895e9dfc3e3f757f13 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-23T11:34:04Z (GMT). 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Ten fungal isolates were used to test the antibiosis against M. oryzae. The isolate En07 of Rhizoctonia sp. exhibited a greater halo of inhibition and consequently was considered the best in vitro antagonist to M. oryzae. Crude, mycelial and lyophilized extracts of micorrhizal isolate were obtained. The analysis by CCD of these three extracts showed positive results in relation to Dragendorff, indicating the presence of phenolics. The analysis of RMN 1H and masses showed the presence of aromatic hydrogens and phenolics. Five concentrations of each extract were prepared and utilized in the studies on in vitro mycelial inhibition of M. oryzae and observed 77.86% of pathogen reduction by crude extract (700 μg/mL). Two crude extract treatments (520 μg/ml and 120 μg/ml) significantly reduced the radial growth of the pathogen compared to control. The crude extract showed best results for mycelia inhibition of the pathogen, followed by lyophilized and mycelial extracts. In two trials, the crude extract at 0.52 μg.μL-1 also reduced the formation of appressoria of M. oryzae by 100%. Two greenhouse experiments were conducted on leaf blast suppression with the cultivar Primavera, using completely randomized design with three replications. In both these trials, the mycelial extract (1860 μg/ml and M.o 3x105) showed marked reduction of leaf blast severity in relation to control by 59.27% and 77.58% respectively. In the second trial, the second treatment (1040 μg/mL and M.o3x105) of crude extract reduced AUDPC by 64.63% compared to control. The results showed that the metabolites of Rhizoctonia sp. posses great potential for biological control of rice blast. / A brusone ocorre em todas as áreas produtoras de arroz do mundo, e é causada pelo fungo Magnaporthe oryzae B. Couch [anamorfo - Pyricularia oryzae Cav.]. Seu controle, realizado pelo manejo que integra resistência genética, práticas culturais e controle químico, requer a inserção de agentes biológicos, além de assegurar uma agricultura mais sustentável. Os microrganismos associados às plantas são capazes de produzir metabólitos secundários como os alcaloides que podem atuar no controle biológico. O presente trabalho objetivou isolar os metabólitos secundários do fungo micorrízico Rhizoctonia sp. obtido de Epidendrum nocturnum, e avaliar o antagonismo in vitro e in vivo com M. oryzae. Todos os ensaios foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado. Um ensaio de antagonismo foi avaliado, pareando-se, 10 isolados fúngicos e M. oryzae, e identificou-se que o isolado En07 foi o que apresentou o maior halo de inibição e consequentemente o melhor antagonismo in vitro sobre M. oryzae. Foram obtidos três extratos do isolado micorrízico (bruto, micelial e liofilizado) que foram analisados por quatro métodos diferentes e complementares. A análise por Cromatografia em Camada Delgada dos três extratos mostrou-se positiva frente ao reativo de Dragendorf, sugerindo a presença de compostos fenólicos. Na análise dos espectros de Ressonância Magnética Nuclear e de massas verificou-se a presença de hidrogênios aromáticos e de compostos fenólicos. Cinco concentrações de cada extrato foram preparadas e utilizadas nos ensaios de inibição micelial de M. oryzae in vitro e observou-se 77,86% de redução do patógeno pelo extrato bruto (700 μg/mL). Dois tratamentos do extrato bruto (520 μg/ml e 120 μg/ml) reduziram o crescimento radial do patógeno de forma significativa quando comparado com a testemunha. Verificou-se que o extrato bruto apresentou os melhores resultados para a inibição micelial do patógeno, seguido dos extratos liofilizado e do micélio. Em dois ensaios o extrato bruto a 0,52 μg.μL-1 também reduziu o número de apressórios formados de M. oryzae em 100%. Foram conduzidos dois ensaios de supressão de brusone foliar em arroz, in vivo, com a cultivar Primavera em três repetições. Nos dois ensaios destacou-se o extrato micelial (1860 μg/ml e M.o 3x105) que proporcionou maiores reduções da severidade de brusone nas folhas em relação ao controle com 59,27% e 64,63%, respectivamente. No segundo ensaio o tratamento 2 (1040 μg/mL e M.o3x105) do extrato bruto reduziu a AACPD em 24,93% em relação à testemunha. Os resultados mostraram que o metabólito de Rhizoctonia sp. possui grande potencial para o controle biológico da brusone.

Submitted by Eliana Barboza (eliana.silva1@mackenzie.br) on 2018-04-05T19:19:09Z No. of bitstreams: 2 Thaís Terpins Ravache.pdf: 1276065 bytes, checksum: 3dd60435da043b715f7641273621886b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Paola Damato (repositorio@mackenzie.br) on 2018-04-24T15:21:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Thaís Terpins Ravache.pdf: 1276065 bytes, checksum: 3dd60435da043b715f7641273621886b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T15:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Thaís Terpins Ravache.pdf: 1276065 bytes, checksum: 3dd60435da043b715f7641273621886b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-02-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Memory formation is divided in three moments: learning, consolidation and evocation and can be classified by its duration: short-term and long-term memory and its nature: explicit or implicit. The hippocampus and the amygdala are fundamental for memory formation. Noradrenaline is a neurotransmitter with important role in the memory formation that exert its effect through adrenergic receptors, α and β. There are three isoforms of β-adrenergic receptors: β1, β2 and β3, all expressed in the amygdala and hippocampus and they are involved in memory formation. Previous studies performed in mammal demonstrated important participation of β-adrenergic receptors in memory formation through pharmacological approaches, method that presents limitation due to poor agonists and antagonists specificity. The method of environmental enrichment (EE) can be used as a strategy to improve cognitive abilities. In the present study was evaluated the influence of environmental enrichment on memory of β3-adrenergic receptor knockout mice (ARβ3KO). Therefore, was standardized an 8-week EE protocol and through behavioral tests was evaluated short and long term declarative memory, as well as neuromotor dysfunction and anxious behavior, comparing ARβ3KO with FVB male mice at a young age and adulthood. The results showed that β3 adrenergic receptor (ARβ3) plays an important role in memory formation and the EE protocol used in this study in can reverse the memory deficits of ARβ3KO young mice. The ARβ3KO adult mice showed a worsening memory, both short and long-term memory, which indicates that aging and the absence of ARβ3 aggravate the memory deficits. Furthermore, the EE protocol was not effective to reverse memory impairments of ARβ3KO when applied in adulthood mice. / O processo de formação da memória é caracterizado por apresentar três estágios: aprendizado, consolidação e evocação. Pode também ser classificada de acordo com a sua duração: memória de curto e de longo prazo, e pelo seu conteúdo: explícita ou implícita. O hipocampo e a amígdala são estruturas fundamentais para o processamento da memória. A noradrenalina é um neurotransmissor que possui importante participação no processo de formação da memória, através dos receptores adrenérgicos do tipo α e β. São conhecidas três isoformas dos receptores do tipo β: β1, β2 e β3, que são expressos tanto no hipocampo como na amígdala e participam no processo de formação da memória. Estudos em mamíferos demonstram papel importante dos receptores β para consolidação de memória por meio de abordagens farmacológicas, modelos que apresentam críticas, pois fármacos apresentam especificidade limitada. O método de enriquecimento ambiental (EA) é muito utilizado como estratégia de melhora de habilidades cognitivas. No presente estudo, foi avaliada a influência do enriquecimento ambiental na memória em camundongos nocautes para o receptor adrenérgico β3 (ARβ3KO). Para tanto, padronizamos um protocolo de EA de 8 semanas de duração e avaliamos seu efeito sobre a formação de memória declarativa de curto e longo prazo, assim como também a ansiedade e capacidade locomotora por meio de testes comportamentais, tanto em animais jovens quando em animais adultos. Os resultados obtidos mostraram que o receptor adrenérgico β3 (ARβ3) tem importante participação no processo de formação da memória e o EA utilizado nos animais jovens reverte os déficits de memória dos ARβ3KO. Já nos animais adultos observamos uma piora na memória tanto de curto como de longo prazo dos animais ARβ3KO não submetidos ao EA, indicando que o envelhecimento e a falta do ARβ3 agravam os déficits de memória. Além disso, o protocolo de EA não foi eficiente para reverter os prejuízos na memória exibidos pelos ARβ3KO quando aplicado na idade adulta.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_daiane_benemann.pdf: 778748 bytes, checksum: 5f3a1eba7b00cb2cf702e1d46bc5e43b (MD5) Previous issue date: 2008-08-18 / The objective of this work is to seek a protocol for regeneration of the melon (Cucumis melo L.) cv. Gaucho and subsequent genetic transformation of this fruit. To this end were conducted three experiments. In the first, the cotyledons were divided into 2, 3, 4 and 5 equal parts, and inoculated with MS medium containing 30 g L sucrose, 0.9 mg L-1 BAP, 0.3 mg L-1 ABA and 2.2 g L-1 CaCl2. It was observed that the number of cuts not influenced the percentage of explants regenerated. In the second experiment, using the same means of cultivation of the previous experiment, the cotyledons were submitted to different densities of flow of photons. It was found that the regenerative process was not affected by the absence or presence of light (2 and 21 μmol m-2 s-1), but when the explants remained in the dark had greater formation of callus. In the third experiment sought to establish conditions for seed germination and its effect on the regeneration under different concentrations of BAP. It was the highest rate of explants regenerated lower when the period of germination in the middle and lower the concentration of BAP in the regenerative. After obtaining the protocol for regeneration, was conducted test of sensitivity of explants the selection of antibiotic, setting up the concentration of 75 mg L-1, kanamycin as ideal to select the cells transformed. For the regeneration of the shoots explants were cultivated in MS medium containing 0.9 mg L-1 BAB, 0.3 mg L-1 ABA, 2.2 g L-1 CaCl2, 75 mg L-1 kanamycin and 250 mg L-1 cefotaxime. For the genetic transformation was used Agrobacterium tumefaciens LBA 4404, with a clone of ACC oxidase in antisense orientation, called pAP4as. However, it was not confirmed by inserting the sequence, the PCR test, the tissue analyzed. It was found that these studies were not described with Agrobacterium efficient to obtain seedlings containing the antisense gene of ACC oxidase. It was found that these studies were not described with Agrobacterium efficient to obtain seedlings containing the antisense gene of ACC oxidase. / O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo eficiente de regeneração para o melão (Cucumis melo L.), cv. Gaúcho, visando posterior transformação genética do mesmo. Para tal fim foram realizados três experimentos. No primeiro, os cotilédones foram divididos em 2, 3, 4 e 5 partes iguais e, inoculados em meio MS contendo 30 g L-1 de sacarose, 0,9 mg L-1 BAP, 0,3 mg L-1 ABA e 2,2 g L-1 CaCl2. No segundo experimento, utilizando o mesmo meio de cultura do experimento anterior, os cotilédones foram submetidos a diferentes densidades de fluxo de fótons. No terceiro procurou-se estabelecer as condições para germinação das sementes e sua influência na regeneração cotiledonar sob diferentes concentrações de BAP. Observou-se que cotilédones seccionados em 5 partes apresentaram maior média de explantes regenerantes. Já os cotilédones que permaneceram sob intensidade luminosa de 2 μmol m-2 s-1 apresentaram maior média de explantes regenerantes e os que ficaram no escuro apresentaram maior média de explantes com calos e raiz. Observou-se também que quanto maior o período germinativo e maiores concentrações de BAP no meio regenerativo, menor é a taxa de explantes regenerantes. Após a obtenção do protocolo de regeneração, foi realizado teste de sensibilidade dos explantes ao antibiótico de seleção, determinando-se a concentração de 75 mg L-1 de canamicina como ideal para selecionar as células transformadas. Para a regeneração de brotações os explantes foram cultivados em meio MS contendo 0,9 mg L-1 BAP, 0,3 mg L-1 ABA, 2,2 g L-1 CaCl2, 75 mg L-1 canamicina e 250 mg L-1 cefotaxima. Para a transformação genética, foi utilizado Agrobacterium tumefaciens LBA 4404, com um clone da ACC oxidase em orientação antisense, denominado pAP4as. Entretanto, não foi confirmada a inserção da seqüência, pelo teste de PCR, nos tecidos analisados. Verificou-se que estes estudos descritos com Agrobacterium não foram eficientes para a obtenção de plântulas contendo o gene antisense da ACC oxidase.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_fabiana_fonseca_santos.PDF: 358501 bytes, checksum: 566ce94854cb74cc7a2d26d876462a45 (MD5) Previous issue date: 2010-08-17 / The understanding of the genetic structure of the oat species can be obtained with the use of microsatellite molecular markers which represent powerful tools in the investigation of genetic parameters. This study aimed to search the identification and characterization of microsatellite markers occurrence in oat through bioinformatics, describing the possible role of individual genes based on the genome of rice and Arabidopsis thaliana. For the development and validation of EST (Expressed Sequence Tags) primers, sequences were obtained from a public database. A total of 7632 oat contigs were obtained after eliminating the redundancy. To characterize SSR (simple sequence repeats) loci, the SSRLocator program was used. For the design of primers, the module containing the program Primer3 was used. A total of 58 primers were found, from which ten were selected for validation by polymerase chain reaction. Ten genotypes were used to assess polymorphism detection ability of primers. Polymorphism was observed in 80% of primers, whereas the rest showed monomorphic bands. The high genetic diversity revealed by microsatellite markers in this study may reflect a high genetic diversity within the germplasm of Avena sativa. / O conhecimento da estrutura genética de diversas espécies de aveia pode ser obtido com o uso de marcadores moleculares microssatélites, os quais representam poderosa ferramenta na averiguação de parâmetros genéticos. Este trabalho teve como objetivo buscar a identificação e a caracterização da ocorrência de marcadores microssatélites em aveia através da bioinformática, descrevendo a possível função de cada um dos genes, com base no genoma do arroz e da Arabidopsis thaliana. Visando o desenvolvimento e a validação de primers, foram obtidos a partir de um banco de dados público de EST (Expressed Sequence Tag) de aveia um total de 7.632 contigs que tiveram eliminada sua redundância, e para caracterização de locos SSR (Simple Sequence Repeat) foi utilizado o programa SSRLocator. Para o desenho de iniciadores foi utilizado no SSRLocator o módulo contendo o programa Primer3 sendo encontrados 58 primers, dos quais dez foram selecionados para a validação através da reação em cadeia da polimerase. Dez genótipos de aveia foram avaliados quanto ao nível de polimorfismo. Foi verificado polimorfismo em 80% dos primers, sendo que, o restante apresentou bandas monomórficas. A alta diversidade gênica revelada pelos marcadores microssatélites neste estudo possivelmente reflete uma alta diversidade genética dentro do germoplasma de Avena sativa.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_raquel_rosa_costa.pdf: 808388 bytes, checksum: 18bdb94a8d12b8f7a746b7ee2613012a (MD5) Previous issue date: 2011-06-27 / he main objective of this work was to introduce the gene bvlI with confirmed potential antifungal of lectin from Bauhinia variegata, Apple Tree (Malus domestica Borkh) cv. Gala, to establish resistance to fungus Coletotrichum gloeosporioides, causing Leaf Spot. Multiplication experiments were performed in vitro regeneration of leaf explant culture and two protocols via Agrobacterium tumefaciens transformation aimed at inserting the gene bvll. The multiplication of shoots the medium that has best results was MS supplemented with 0.1 mg L-1 ANA and 8.3 mg L-1 2iP and, for the regeneration of the best responses were obtained with using MS, supplemented with 30 g L-1 sorbitol, 0.5 mg L-1 ANA and 5 mg L-1 TDZ, reaching a rate of 94.5% of regenerations. As regards the processing protocols, which showed best results was the P1 Protocol, which through analysis of PCR were obtained 15% shoots containing the gene bv/l. However, the expression of BVLI protein was not detected by Dot Blot, indicating the need for further procedure, such as refinement of protein extraction protocol, as well as utilization other techniques of analyses, such as Real Time. / O objetivo principal do presente trabalho foi introduzir o gene bvlI com potencial antifúngíco confirmado da lectina de Bauhinia variegata, em macieira (Malus domestica Borkh), cv. Gala, para estabelecer resistência ao fungo Coletotrichum gloeosporioides, causador da Mancha Foliar. Foram realizados experimentos de multiplicação in vitro, regeneração de explantes foliares e, dois protocolos de transformação via Agrobacterium tumefaciens visando a inserção do gene bvll. Na multiplicação de brotações o meio que apresentou melhores resultados foi o MS suplementado com 0,1 mg L-1 ANA e 8,3 mg L-1 de 2iP e, para a regeneração as melhores respostas foram obtidas com meio MS, suplementado com 30 g L-1 de sorbitol, 0,5 mg L-1 ANA e 5 mg L1 de TDZ, atingindo um percentual de 94,5% de regenerações. Quanto aos protocolos de transformação, o que apresentou melhores resultados foi o protocolo P1, no qual através da análise de PCR foram obtidas 15% de brotações contendo o gene bv/l. No entanto, a expressão da proteína BVLI não foi detectada através de Dot Blot, indicando a necessidade de novos procedimentos, como refinamento do protocolo de extração de proteínas, bem como utulização de outras técnicas de análises, como Real Time.

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2013-01-24T12:43:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoAntigenotoxicol.pdf: 986207 bytes, checksum: 5cb788fa976fca7b6c6ca781a3c1f029 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-01-24T14:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoAntigenotoxicol.pdf: 986207 bytes, checksum: 5cb788fa976fca7b6c6ca781a3c1f029 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-24T14:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoAntigenotoxicol.pdf: 986207 bytes, checksum: 5cb788fa976fca7b6c6ca781a3c1f029 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Método CANOVA® (CA) é um imunomodulador brasileiro de formulação homeopática. CA é indicado em condições clínicas nas quais o sistema imune se encontre comprometido. O N-Metil-N-Nitrosoureia (NMU) é um agente N-nitroso alquilante e carcinogênico utilizado como modelo experimental em roedores e macacos. O NMU também apresenta efeitos genotóxicos/mutagênicos analisáveis por testes clássicos de detecção de danos ao DNA e aberrações cromossômicas. Apesar de vários estudos terem demonstrado resultados promissores na utilização do medicamento CA, não existem trabalhos relatando possíveis efeitos antigenotóxicos deste medicamento, a despeito de seu potencial anticarcinogênico. Assim, o presente trabalho avaliou in vitro os efeitos antigenotóxicos e anticitotóxicos do medicamento CA em linfócitos humanos expostos ao NMU. Foram utilizadas amostras de linfócitos humanos que foram submetidos a diferentes concentrações de uma mistura contendo CA e NMU. A viabilidade das células expostas ao NMU foi avaliada pelo ensaio MTT, a genotoxicidade/antigenotoxicidade do CA foi avaliada pelo teste do cometa e a anticitotoxicidade do CA foi verificada pela quantificação de apoptose e necrose utilizando corantes fluorescentes (laranja de acridina/brometo de etídeo). No teste MTT verificamos que o NMU conseguiu diminuir a viabilidade dos linfócitos de forma significativa. No teste do cometa foi observado que CA diminui significativamente os danos ao DNA induzidos pelo NMU, caracterizando um claro efeito antigenotóxico do composto homeopático. CA também diminuiu de forma significativa a frequência de apoptose induzida pelo NMU em leitura realizada após 24 horas de tratamento. Concluímos que o CA apresentou um efeito antigenotóxico e anticitotóxico nas condições avaliadas no presente estudo, demonstrando, assim, um claro potencial citoprotetor. / The CANOVA® (CA) method is a Brazilian homeopathic immunomodulator. CA is indicated in clinical conditions where the immune system is impaired. N-Methyl-Nnitrosourea (NMU) is an N-nitroso carcinogenic alkylating agent used as an experimental model in rodents and monkeys. NMU also shows genotoxic/mutagenic effects that can be assessed by classical tests such as detection of DNA damage and chromosomal aberrations. Although several studies have shown promising results in the use of CA, there are no studies reporting possible antigenotoxic effects of this medicine, despite its anticancer potential. Therefore, the present study evaluated the in vitro antigenotoxic and anticytotoxic effects of CA in human lymphocytes exposed to NMU. Samples of human lymphocytes that were subjected to different concentrations of a mixture containing CA and NMU were used in the present study. The viability of cells exposed to NMU was evaluated by MTT assay, CA genotoxicity/antigenotoxicity was evaluated by the comet assay and CA anticytotoxicity was assessed by quantification of apoptosis and necrosis using fluorescent dyes (acridine orange/ethidium bromide). The MTT assay showed that NMU was able to decrease lymphocyte viability significantly. By using the comet assay it was observed that CA significantly reduces DNA damage induced by NMU, which sets a clear antigenotoxic effect of the homeopathic compound. CA also reduced significantly the frequency of NMU-induced apoptosis after 24 hours of treatment. We conclude that CA had an antigenotoxic and anticytotoxic effect in the conditions evaluated in this study, thereby demonstrating a clear cytoprotective potential.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:37:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_InvestigacoesEfeitosMutagenicos.pdf: 2501956 bytes, checksum: 54b361ed1a8093136d439ed076ffb6a1 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-24T16:11:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_InvestigacoesEfeitosMutagenicos.pdf: 2501956 bytes, checksum: 54b361ed1a8093136d439ed076ffb6a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T16:11:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_InvestigacoesEfeitosMutagenicos.pdf: 2501956 bytes, checksum: 54b361ed1a8093136d439ed076ffb6a1 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / CNEN - Comissão Nacional de Energia Nuclear / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As radiações ionizantes (RI) estão presentes na maioria dos diagnósticos precoces de uma infinidade de doenças, muitos tipos de câncer estão inclusos, e têm a característica de um diagnóstico rápido e preciso e, muitas das vezes, mais barato. A utilização deste tipo de energia no entanto, requer de cuidados de proteção específicos, uma vez que as RI tem a característica de alterar o material genético, através de mutações. Os operadores da área da radiologia em hospitais são a classe de trabalhadores que está exposta de forma mais direta e, portanto, são alvos de investigações que podem auxiliar no entendimento da interação das RI com o material biológico, além de auxiliar a estes profissionais no requisito de proteção radiológica. Foram coletadas 75 amostras de indivíduos que trabalham em vários departamentos da radiologia em 5 hospitais de 4 Estados diferentes no Brasil (São Paulo, Minas Gerais, Rio Grande do Sul e Pará). Os critérios de seleção para a participação foram: ter ao menos 18 anos de idade e 2 anos de profissão, não ser etilista ou tabagista, não estar tomando medicamentos. Para análise citogenética, foram realizados os testes do cometa e Micronúcleo, assim como estudo de aberrações cromossômicas. Este estudo foi avaliado e aprovado por comitê de ética. Todos as amostras foram comparadas com indivíduos do mesmo gênero e idade que não tenham passado por qualquer tipo de exame radiológico nos últimos 6 meses.Quando comparados com o controle, os testes de MN e AC demonstraram uma totalidade de danos, usando o teste T, o banco de dados SPSS e bioestat. O teste do cometa mostrou um nível de danos maior se comparado aos controles (0,84 0,47). Foi estabelecida a média de idade e feita relação entre gênero e idade dos participantes, sendo os níveis de danos maiores para o gênero feminino em relação ao masculino. Individuos com idades acima dos 45 anos também demonstraram um nível de dano maior quando comparados com idades inferiores. Um fator a ser levado em consideração é de que a população de Porto alegre apresentar um nível de dano menor se comparado aos outros grupos, sendo muito provável este evento por conta da utilização de equipamentos DR de conversão direta. Os equipamentos de Belo Horizonte e Ribeirão Preto utilizam CR e os de Belém, convencionais. / Ionizing radiation (IR) are present in most of the early diagnosis of a multitude of diseases, many cancers are included, and have the characteristic of a quick and accurate diagnosis, and often cheaper. The use of this type of energy but requires specific care protection, since the IR has a characteristic of altering the genetic material through mutations. The radiology area operators in hospitals are the class of workers who are exposed more directly and thus are targets of investigations that may assist in understanding the interaction of IR with the biological material, in addition to assisting these professionals in requirement radiological protection. We collected 73 samples of individuals working in various radiology departments in five hospitals in four different states in Brazil (São Paulo, Minas Gerais, Rio Grande do Sul and Pará). The selection criteria for participation were: at least 18 years old and 2 years in the profession, not alcoholic or smoker, not taking drugs. For cytogenetic analysis were performed the comet test and micronucleus, and chromosome aberration study. This study was approved by ethics committee. All the samples were compared to individuals of the same age and gender who have not gone through any kind of radiological examination in the last 6 meses.Quando compared with the control, MN tests and AC showed a total damage, using the t test, the database and SPSS BioEstat. The comet assay showed a higher level of damage compared to controls (0.84 0,47). The average age was established and made relationship between gender and age of the participants, the more damage levels in females compared to males. Individuals aged over 45 years also showed a higher level of damage when compared with the age. A factor to be taken into consideration is that the population of Porto Alegre present a lower level of damage compared to other groups, and most likely this event due to the use of DR equipment Direct conversion. The Belo Horizonte and Ribeirão Preto equipment using CR and Belém, conventional.

Magister en Ciencias Biológicas con mención en Genética / Se evaluó la dispersión y la uniformidad de la nube de polen de Raulí ( Nothofagus alpina Poepp et Endl (Oerst )) , y cómo ello afectaría la variabilidad genética que se encuentra en poblaciones naturales, a través del análisis de paternidad por exclusión secuencial, utilizando SSR (Simple Sequence Repeat), para estimar la influencia de este agente en el flujo génico en esta especie, descartando el flujo por “semillas”. Dado que esta especie es anemófila, de polinización cruzada, monoica y presumiblemente autoincompatible, la forma más directa y precisa para determinar la herencia y el movimiento de los genes es a través del análisis de la descendencia, donde se conoce la madre. Para ello se cuenta con un huerto semillero de la Cooperativa de Mejoramiento y Universidad Austral, ubicado en San José de la Mariquina que dispone de 33 clones, provenientes de la cordillera de la X Región, con árboles en producción de semillas, de altura mediana (no mas de 5 m) y de igual tamaño, lejos de fuentes polinizantes de la misma especie, aislados de fuentes de contaminación como roble. La siembra de las semillas se realizó de acuerdo a la metodología recomendada en el vivero. Las isoenzimas se realizaron de acuerdo a la metodología de Conkle (1982) y Carrasco (1998). Para los SSR, se probaron 25 primers heterólogos aislados en otras especies de la familia de las Fagaceae, según Steinkellner et al (1997a). El análisis de paternidad por exclusión se realizó sólo con el marcador molecular, ya que para las isoenzimas se obtuvo un conjunto diferente de isoenzimas para hijos y padres. Se utilizaron los primers ssrQrZAG 30 (GA)26 y MAQ 4, que mostraron una variabilidad en conjunto de no mas de 3 alelos en 5 loci. Para el primero se utilizaron dos alelos en cuatro loci (A, B, C, D), y en cada uno un alelo nulo. Para el segundo se encontraron cuatro alelos. Se determinó que la probabilidad máxima de exclusión del marcador es de 0.98. El análisis de exclusión dio por resultado que el clon 26 es el padre de aproximadamente 24% de la descendencia. Un 8% corresponde a los padres 4 y 31 en conjunto, 7% sería híbrido, 6% sería del clon 24 y 4% del clon 3 (plántulas múltiples por semilla). El 38% serían hijos a los cuales, sin poder realizar la exclusión completa, se llegó a obtener un grupo de varios posibles padres, estableciéndolos como indeterminados. Se observaron plántulas con dos o tres raíces por semilla que eran hijos del padre 3, exceptuando tres hijos, que para ellos se llegó a determinar que existían 4 posibles padres (3, 26, 21, 33). Este fenómeno puede explicarse por una fertilización múltiple de un solo padre o una división extra del cigoto. Sólo para los hijos 3b, 4a y 4b está establecida, claramente, la fertilización múltiple. Se observaron híbridos resultado de una fertilización raulí-roble, lo que constituye la contaminación por polen ajeno al huerto. Esto reforzaría la teoría de una dispersión de los granos de polen a largas distancias. Se concluye que dentro del huerto existen ciertos clones que tienen tendencia a cruzarse y se confirma que la tendencia es a cruzarse con los clones que se encuentran más cercanos, de modo que gran parte de las semillas eran de un mismo padre. La nube de polen es homogénea; es decir, la fertilización es sólo de algunos pocos padres. No se pudo determinar si el modo de herencia del marcador genéticos utilizado es mendeliana. Se recomienda realizar polinizaciones dirigidas para asegurar el cruzamiento entre los clones.