Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIANA SCHWENGBER RABELO.pdf: 832715 bytes, checksum: 2706eef7f6a3e8662625069e50c1529d (MD5) Previous issue date: 2014-10-09 / The hemoglobinopathies are a group of heritable changes prevalent in various regions of the world, but significantly affect the Brazilian population for its abundant miscegenation. Are changes in structural genes that cause the formation of hemoglobin variants, and - or regulatory genes, causing thalassemias. Currently, the number of identified abnormal hemoglobin has increased due to improvements in methods of analysis, however, many routine laboratories are not prepared for the correct identification of these changes. In the present study aimed to assess the prevalence of hemoglobinopathies using classical methods and make the molecular characterization of mutations S, C, beta thalassemia IVS-110, IVS-1, IVS-6 and CD-39 by gene amplification using the PCR technique (Polymerase Chain Reaction). The molecular study used specific primers that bind promptly at the position of the mutated allele in position and the normal allele can thereby carry out gene allele specific amplification. 200 peripheral blood samples of patients of the Clinical Laboratory at PUC-Goiás were collected during July - December 2012-2012. The results showed the validity of the methodology in the molecular characterization of mutations, two (1%) AC patients, an one (0,5%) AS, two (1%) with mutation IVS-6 and one (0,5%) IVS-1 observed. The codon 39 and IVS-110 were not detected in any of the patients investigated. / As hemoglobinopatias formam um grupo de alterações hereditárias prevalentes em várias regiões do mundo, mas atingem significativamente a população brasileira por sua miscigenação abundante. São alterações em genes estruturais, que ocasionam a formação de hemoglobinas variantes, e-ou em genes reguladores, causando as talassemias. Atualmente, o número de hemoglobinas anormais identificadas tem aumentado devido à melhoria nas metodologias de análises, no entanto, muitos laboratórios de rotina não estão preparados para a correta identificação destas alterações. No presente estudo objetivamos avaliar a prevalência das hemoglobinopatias por meio de métodos clássicos e fazer a caracterização molecular das mutações S, C, beta talassemia IVS-110, IVS-1, IVS-6 e CD-39 pela amplificação gênica utilizando a técnica do PCR-AE. O estudo molecular utilizou primers específicos que se ligam pontualmente na posição do alelo mutado e na respectiva posição do alelo normal, podendo assim realizar amplificação gênica alelo específica. Foram coletadas 200 amostras de sangue periférico de pacientes do Laboratório Clínico da PUC-Goiás no período de julho-2012 a dezembro-2012. Os resultados evidenciaram a validade da metodologia molecular na caracterização das mutações, sendo observados dois pacientes (1%) AC, um (0,5%) AS, dois (1%) com mutação IVS-6 e um (0,5%) IVS-6. O códon 39 e IVS-110 não foram detectados em nenhum dos pacientes investigados.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WILMAR JOSE MANOEL.pdf: 28599556 bytes, checksum: 2aff9f0bc3700a6ea9bee62b4406ec07 (MD5) Previous issue date: 2008-12-12 / Soft tissue sarcomas are rare neoplasms, usually with dismal prognosis, that account for 1% of all malignancies. Several challenges are described for their management, specially when the tumor is larger than 5cm, with high histological grade, trunk localization and presenting metastasis. Immunohistochemical data demonstrate a possible prognostic role for the immunodetection of p53 protein, but any Brazilian study has ever been carried out on this assumption. The goal of the present study was to investigate the possible association between the immunodetection of p53 protein and prognosis in a group of 104 adult patients with soft tissue sarcoma assisted at the Hospital Araújo Jorge, Associação de Combate ao Câncer em Goiás from 1996 to 2000. Our study demonstrated that 41 cases (39.4%) had positive immunodetection of p53 protein, of whom, fibrosarcoma was the histological type with the higher immunodetection rate (29.2%), followed by leiomiosarcoma (19.5%). No statistically significant association was demonstrated between immunodetection of p53 and clinical-pathological features. The immunodetection of p53 protein in tumor cells revealed a labeling index higher than 50% in 32 cases (78%), and lower than 50% in 9 cases (32%). The 5-year survival rate was higher for patients with negative p53 immunodetection (60.6%), when compared with those with positive immunodetection (39.4%), however, the difference between the two groups was not statistically significant (p=0.279). The prognostic role of the p53 protein in the present study revealed that a labeling index higher than 50% was significantly associated with a lower 5-year survival rate (85.7% vs 28.3%) (p= 0.015). This parameter should be useful as a prognostic factor for soft tissue sarcoma, and should be better investigated in larger multiinstitutional prospective studies, justified by its potential influence in therapeutic decisions. / Os sarcomas de partes moles (SPM) são neoplasias raras, representando cerca de 1% do total das neoplasias. E com prognóstico ruim. Várias dificuldades são constatadas no tratamento dos SPM com tamanhos maiores que 5 cm, alto grau histológico, localização no tronco e presença de metástases. Estudos de imuno-histoquimica demonstram uma possível correlação entre o prognóstico dos SPM e a imunodetecção de p53, porém, nenhuma investigação acerca desta correlação foi desenvolvida no Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar as possíveis correlações entre a detecção imuno-histoquímica da proteína p53 e o prognóstico de SPM em amostras obtidas de 104 pacientes adultos, atendidos no Hospital Araújo Jorge da Associação de Combate ao Câncer em Goiás de 1996 a 2000. Nosso estudo demonstrou a imunodetecção de p53 em 41 dos casos de SPM (39,4%), dos quais o fibrossarcoma foi o tipo histológico com maior imunodetecção (29,2%), seguido do leiomiossarcoma (19,5%). Nenhuma relação estatisticamente significativa foi demonstrada entre a imunodetecção de p53 e os aspectos clínicopatológicos estudados. A imunodetecção de p53 revelou índices de marcação superiores a 50% em 32 casos (78%) e inferiores a 50% em 9 casos (22%). A sobrevida em cinco anos foi maior para os pacientes cuja imunodetecção da proteína p53 foi negativa (50,06%), quando comparados àqueles nos quais a imunodetecção foi positiva (39,9%). Entretanto, a diferença entre os dois grupos não teve significância estatística (p=0,279). A investigação do papel prognóstico da proteína p53, no presente estudo, evidenciou que índices de marcação superiores a 50% das células tumorais associaram-se de forma inversa com a sobrevida em cinco anos (85,7% vs 28,3%) (p= 0,015). Este parâmetro pode ser útil como fator prognóstico para os SPM e deverá ser melhor avaliado em futuros estudos prospectivos multicêntricos, tendo em vista sua potencial influência em decisões terapêuticas.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francisco Weliton Rodrigues.pdf: 26774271 bytes, checksum: c81af1f8ff9812886fda32632000dc44 (MD5) Previous issue date: 2008-09-29 / Pterygium is a disease of unknown origin and pathogenesis that can be vision threatening. Several researchers believe that pterygium is UV-related and that abnormal expression of p53 protein and infection with human papillomavirus (HPV) are risk factors for pterygium, but their experiments have been inconclusive. We investigated its relation with p53 protein expression, p53 gene codon 72 polymorphism and infection with HPV DNA. Pterygial samples were obtained from 36 patients; 21 normal conjunctival samples were used as controls. Expression of p53 protein was studied by Immunohistochemistry, using the antibody DO-7. Analysis for the p53 genotype was made with PCR, using specific primers for the arginine and proline alleles, and an analysis for HPV was made of the pterygium patients and control group. Fourteen of the 36 pterygia specimens were positive for abnormal p53 expression. Thirty one of the patients were heterozygotic and three were homozygotic for the proline allele; two were homozygotic for the arginine allele; in the control group 12 of 21 were heterozygotic and seven of these 21 were homozygotic for the proline allele; two were homozygotic for the arginine allele. Twenty-one of the pterygia patients were positive for HPV; HPV type 1 was found in nine of these, type 2 in seven and both types in five. Only two of the 21 controls had HPV; both had type 16. We suggest that abnormal expression of p53, p53 codon 72 polymorphisms and HPV DNA are required cofactors for the development of pterygium. / O pterígio é uma doença de origem e patogênese desconhecida que pode comprometer a visão. Vários pesquisadores acreditam que o pterígio está relacionado à luz UV e a expressão anormal da proteína p53, além da presença do papilomavírus humano (HPV), como fatores de risco para o seu desenvolvimento, mas os resultados são inconclusivos. Investigamos a expressão da proteína p53, o polimorfismo do codon 72 do gene TP53 e a presença do HPV. Amostras de pterígio foram obtidas de 36 pacientes e 21 escleras normais formaram o grupo controle. A expressão de p53 foi analisada por imunohistoquímica usando anticorpo DO-7. Análise do genótipo de p53 foi realizada por PCR com primers específicos para os alelos arginina e prolina e a presença do HPV foi analisada nos dois grupos. Quatorze amostras de pterígio (39%) foram positivas para expressão anormal de p53. O polimorfismo foi observado em 31 (86%) amostras heterozigotas, 03 (8%) homozigotas para prolina e 02 (6%) homozigotas para arginina, enquanto que no grupo controle foi observado 12 (57%) amostras heterozigotas, 07 (33%) homozigotas para prolina e 02 (10%) homozigotas para arginina. 21 pterígios (59%) foram positivos para HPV e o tipo 01 foi encontrado em 43% (9/21), tipo 02 em 34% (7/21) e os dois tipos simultaneamente em 23% (5/21) amostras do gruppo pterígio. O grupo controle mostrou 9.5% (2/21) amostras positivas para HPV e o tipo 16 nas duas amostras. Nossos dados sugerem que a expressão anormal de p53, o polimorfismo do codon 72 e a presença do HPV podem estar relacionados com o desenvolvimento do pterígio.

O esgoto doméstico e industrial advindos de áreas urbanizadas são frequentemente dispostos nos corpos de água que as circundam, contaminando-os e inibindo a capacidade dos ecossistemas aquáticos de manter seus processos autodepurativos. Estes contaminantes tendem a ser transportados por longas distâncias ou a sedimentar, gerando uma nova fonte de contaminação. O presente trabalho teve como objetivo avaliar e monitorar a fitotoxicidade e a genotoxicidade da água e do sedimento do Córrego do Pântano, em Alfenas-MG, que está exposto a descargas de esgoto doméstico e industrial. As amostras de água e de sedimento foram mensalmente coletadas em cinco pontos do Córrego do Pântano, no período de Outubro de 2010 a Julho de 2011. Os níveis de cádmio, chumbo e zinco das amostras foram determinados. As sementes de Lactuca sativa foram expostas as amostras de água e aos extratos aquosos dos sedimentos e os parâmetros avaliados foram a taxa de germinação, o comprimento de raiz, a massa fresca, a massa seca, o índice mitótico e a frequência de anormalidades cromossômicas. Foram observados altos níveis de cádmio e chumbo nas amostras de água coletadas nos meses chuvosos. As amostras de água e os extratos aquosos dos sedimentos apresentaram efeito fitotóxico sobre a germinação e a biomassa de Lactuca sativa. O comprimento de raiz não foi negativamente afetado e foi estimulado pelas amostras estudadas. Apenas as amostras de água reduziram o índice mitótico e não foi observado nenhum efeito sobre a frequência de anormalidades cromossômicas. Para o teste de fitotoxicidade foi observada variação temporal significativa relacionada com o regime de chuvas, enquanto para o ensaio citogenético não foi observado padrão definido. / The domestic and industrial sewage coming from urbanized areas are often disposed in water bodies that surrounding them, contaminating them and inhibiting ability of ecosystems to maintain their natural processes. These contaminants tend to be transported over long distances or sediment, generating a new source of contamination. This study aimed to evaluate and monitor the phytotoxicity and genotoxicity of water and sediment of the Córrego do Pântano, which is exposed to discharges of domestic and industrial sewage. Water and sediment samples were collected monthly at five sites in the Córrego do Pântano, in the period October 2010 to July 2011. The levels of cadmium, lead and zinc of the samples were determined. Lactuca sativa seeds were exposed to water samples and aqueous extracts of the sediments and the parameters evaluated were the germination rate, root length, fresh and dry weight, mitotic index and frequency of chromosomal abnormalities. We observed high levels of cadmium and lead in water samples collected during the rainy months. The water samples and aqueous extracts of the sediments showed phytotoxic effect on germination and biomass of L. sativa. The root length was not affected and was stimulated for the samples. Only the water samples reduced the mitotic index and no effects on the frequency of chromosomal abnormalities were observed. For the phytotoxicity test was observed significant temporal variation related to rainfall, while for the cytogenetic assay was not observed pattern. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A alface (Lactuca sativa L.) e a cebola (Allium cepa L.) são vegetais de grande importância na alimentação dos brasileiros. Também são amplamente utilizadas como espécie-alvo em bioensaios, os quais são importantes para a determinação do efeito de agentes sobre partes de um organismo. O conhecimento sobre os aspectos morfológicos dos cromossomos de espécies alvo é extremamente importante. Desta forma, faz-se necessário a utilização de metodologias que possibilitem um conhecimento de características que estão relacionadas com a sensibilidade e/ou resistência dos materiais geneticamente distintos dentro da espécie-alvo. Um parâmetro a ser utilizado na descrição cariotípica é a identificação de proporção áurea na razão de braços de cromossomos. A proporção áurea encontrada em várias formas na natureza e utilizada em diversas áreas dos saberes do homem confere às estruturas uma maior estabilidade e resistência. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar metodologias para averiguar a presença de proporção áurea, bem como quantificar as variações cariotípica e morfométricas de sete genótipos de Lactuca sativa L. e de quatro genótipos de Allium cepa L., bem como identificar e quantificar a presença de proporção áurea na razão de braços dos cromossomos desses genótipos. A metodologia que estabelece a presença de proporção áurea fazendo uso da diferença entre o maior segmento e o menor multipicado por apresentou melhores resultados nos controles das taxas de erro tipo I e de poder. Houve variação da fórmula cariotípica de genótipos das duas espécies utilizadas para o estudo. Identificou-se a presença de proporção áurea nos pares cromossômicos em todos os genótipos. Há variação na quantidade de cromossomos que apresentam em proporção áurea entre os genótipos das espécies. Elas apresentaram entre um e quarto cromossomos em proporção áurea. Os resultados citogenéticos aqui relatados podem ser aplicados como ferramentas de auxílio na identificação de genótipos de Lactuca sativa L e de Allium cepa L. além de fornecer subsídios para futuros estudos de manipulação cromossômica. / Lettuce (Lactuca sativa L.) and onion (Allium cepa L.) plants are of great importance in the diet of Brazilians. They are also widely used in bioassays as the target species, which are important for determining the effect of agents on parts of the body. Knowledge of the morphology of the chromosomes of target species is important. Thus, it is necessary to use methods that allow knowledge of characteristics that relate to the sensitivity and/or resistance of materials within genetically distinct target species. A parameter to be used in karyotype description is the identification of the golden ratio in the arm ratio of chromosome. The golden ratio found in various forms in nature and used in various areas of human knowledge structures confers greater stability and strength. The objective of this study was to evaluate methodologies for the presence of the golden ratio, as well as quantify the karyotypic and morphometric variation in seven genotypes of Lactuca sativa L. and four genotypes of Allium cepa L., and identify and quantify the presence of the golden ratio in the ratio arms of chromosomes of these genotypes. The methodology that establishes the presence of the golden ratio making use of the difference between the largest and smallest segment multiplied by showed better results in the control of Type I error rates and power . There was variation in the karyotype formula of genotypes of the two species used for the study. Identified the presence of the golden ratio in chromosome pairs in all genotypes. There is variation in the number of chromosomes present in the golden ratio between genotypes and species. The species had between one and fourth chromosomes in golden ratio. Cytogenetic findings reported here can be applied as a tool to aid identification of genotypes and Lactuca sativa L. e Allium cepa L. and provide insights for future studies of chromosomal manipulation.

Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Antônio Fernandes da Silva Junior / Banca: Eduardo Bagagli / Banca: José Belasque Junior / Banca: Luís Otávio Saggion Beriam / Banca: Renate Krause Sakate / Resumo: Uma das principais doenças bacterianas que acomete a cultura do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.) no Brasil é a murcha-de-curtobacterium, causa por Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff). Até o momento são escassas as informações a respeito da sobrevivência da bactéria no cultivo do feijoeiro, fato que pode interferir no manejo e controle da doença, além de informações a respeito da variabilidade genética da bactéria. Assim, esta pesquisa teve por objetivos analisar o potencial de algumas coberturas de inverno como hospedeiras alternativas de Cff, avaliar o efeito destas culturas aplicadas em sistema de rotação com o feijoeiro na incidência e severidade da doença, avaliar o comportamento de genótipos de feijoeiro que melhor se adaptam à doença em regiões do estado do Paraná, verificar a sobrevivência de Cff como células livres no solo e analisar a variabilidade genética da bactéria pela técnica de análise por sequências multilocus (MLSA). Foi observado que Cff pôde colonizar epifiticamente ou endofiticamente a aveia preta, trigo, aveia branca, cevada, azevém e canola. Os cultivos prévios da aveia preta e do trigo propiciaram o aumento da incidência e severidade da doença no feijoeiro, bem como redução no peso médio de 100 grãos. A produtividade média do feijoeiro teve uma redução de 50,64% em uma área com maior intensidade da doença, com parâmetros agronômicos (número de vagens/planta, número de grãos/planta, peso dos grãos/planta e peso de 100 grãos), m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the most important diseases of common bean in Brazil is the bacterial wilt, caused by Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff). Until now, there is no much knowledge about how this bacterium survives on common bean, fact that could interfere with the disease management, besides of information about genetic variability of the bacterium. In this work we studied the potential of some winter crops as alternative hosts of Cff; the effect of these crops in the incidence and severity of bacterial wilt in rotation with common bean; detection of common bean cultivars with resistance levels to Cff in regions of Paraná State; study the survival of Cff as free cells in the soil; and assess the genetic variability of the bacterium by multilocus sequence analysis (MLSA). Cff colonized epiphytically and endophytically black oat, wheat, white oat, barley, ryegrass and canola. The previous crop of black oat and wheat increased the incidence and severity of bacterial wilt and reduced the average weight of 100 grains. The average production of common bean decreased 50,64% in area with higher intensity of disease, with reduction of number of pods/plant, number of grains/plant, weigh of grains/plant and weigh of 100 bean grains. The previous crop of corn and soybean reduced the Cff incidence and increased the bean production. The cultivars IPR Juriti and IPR Tuiuiú shown greater level of reistance for bacterial wilt and were more productive in Paraná State. Cff strains showed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-11T17:48:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Daniel Lúcio Rodrigues Dutra.pdf: 623819 bytes, checksum: e27c559cf8e657f3868f5417b83e9c4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-11T17:48:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Daniel Lúcio Rodrigues Dutra.pdf: 623819 bytes, checksum: e27c559cf8e657f3868f5417b83e9c4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-07-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / The main objective of this work was to isolate the ORFs CV0867 (sodB2) e CV2504 (sodB1) of C. violaceum and induce their expression in Escherichia coli cells harboring sod genes, to evaluate the increase in SOD activity in the recombinant cells exposed to oxidative stress conditions. The sodB1 gene was isolated by PCR, using specific primers, and cloned into pGEM ® -T Easy vector. The amplification reaction could not be optimized for the second set of primers, specific for sodB2 gene. In an attempt to obtain a vector suitable for the regulated heterologous expression of SOD, some strategies were proposed for the construction of vectors with expression under the control of a sterically repressed promoter – srp. The sodB1 gene was then subcloned into vectors pCR4-SRP and pUC-SRP, derived from pCR ® 4-TOPO ® e pUC72, respectively, both developed during this project. However, the obtaining of recombinant clones was not possible. Despite the fact that SOD is not a toxic protein for the cell, we tested the hypothesis of the lethality of recombinant clones caused by the overexpression of SOD. Thus, amy and pfu genes were cloned into pUC-SRP, although the clones harboring the gene of interest could not be obtained. We concluded that the expression mechanisms of pUC-SRP and pCR4-SRP vectors may have caused deletery effects to the host cells, and that modifications in their structure should be made for the minimizing of heterologous expression levels, reducing the risk of toxicity for the clones. / O principal objetivo do trabalho foi isolar as regiões estruturais dos genes sod correspondentes às ORFs CV0867 (sodB2) e CV2504 (sodB1) de C. violaceum e expressá- las em células de Escherichia coli portando os genes sod, para avaliar o incremento da atividade de SOD nas células recombinantes submetidas a condições de estresse oxidativo. O gene sodB1 foi isolado via PCR, utilizando iniciadores específicos, e clonado em vetor pGEM ® -T Easy. Para sodB2, não conseguiu-se otimizar a reação de amplificação. Com o intuito de obter um vetor para expressão heteróloga regulada de SOD foram traçadas estratégias para a construção de vetores com expressão controlada por um promotor estericamente regulado - srp. O gene sodB1 foi então subclonado nos vetores pCR4-SRP e pUC-SRP, derivados de pCR ® 4-TOPO ® e pUC72, respectivamente, ambos desenvolvidos a partir deste trabalho. No entanto, não foi possível a obtenção de clones recombinantes. Apesar de SOD não ser uma proteína tóxica para a célula, testou-se a hipótese de que a superexpressão desta proteína seria a causa da letalidade dos clones recombinantes. Assim, foram clonados os genes amy e pfu em pUC-SRP. Porém, mais uma vez não foram obtidos clones portando os genes de interesse. Conclui-se então que os mecanismos de expressão do vetor pUC-SRP, bem como de pCR4-SRP, devem ter ocasionado efeitos deletérios às células hospedeiras, e que alterações na sua estrutura devem ser feitas no sentido de minimizar os níveis de expressão heteróloga, reduzindo assim o risco de produção de toxicidade para os clones.

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-11T18:56:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Aline Almeida Mattos.pdf: 3417727 bytes, checksum: c5c27457db3dabcfb4b55c7e2378496e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-11T18:56:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Aline Almeida Mattos.pdf: 3417727 bytes, checksum: c5c27457db3dabcfb4b55c7e2378496e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2007-10-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The species Simulium guianense s.l. Wise is incriminated as the main vector of Onchocerca volvulus Leuckart, which is the ethiologic agent of oncocerciasis in the Amazonian focus of the disease, located in the northern portion of South América. The objectives of this study were to analyze different populations of this species using polythene chromosomes and mitochondrial gene sequences of the COI region to evaluate the relationships among these populations. The specimens for the cytotaxonomic study were collected in the Brazilian states of Amazonas, São Paulo and Goiás (Rio Ponte de Pedra) and for the molecular study the specimens were collected in the states of Amazonas, Amapá, Goiás (Rios Ponte de Pedra and Verdão), Maranhão and Roraima (one population from the Homoxi oncocerciasis focus and two from sites outside of the focus: Caroebe and Surumu). The polythene chromosomes from the analyzed populations were compared with a standard map that had been previously established for this species. The cytological analysis indicates the presence of polymorphic inversion in the Amazonas and São Paulo populations; the population from Goiás (Rio Ponte de Pedras) had two fixed inversions. Comparing 702 bp from the COI mithochondrial gene in the nine studied populations, a considerable number of polymorphic sites were observed, thereby allowing population and phylogeographic analyses to be undertaken. A representative cladogram was constructed to analyse the relationships among the observed haplotypes. The cladogram suggests that the populations from the northern region of Brazil (Amapá, Amazonas and the Caroebe site in Roraima) share one haplotype, while the populations from the Amazonian focus (Homoxi site in Roraima) is most closely related to the population from the Surumu site in Roraima, as these populations share a common haplotype. The populations from São Paulo and Goiás, Rio Verdão (from the southeast and centro-west regions of Brazil, respectively) have high haplotypic variability, each specimen being represented by one haplotype. The population from the Rio Ponte de Pedra site in Goiás did not share haplotypes with any of the other populations studied, including the population from the Rio Verdão site in Goiás, located approximately 50 Km away in the same hydrological basin. The populations from Amazonas and the Caroebe site in Roraima had negative values of F ST, suggesting that they exchange alleles freely and do not show any genetic structure. The population from Maranhão is well sructured in relation to the others with a low number of migrants; this population appears to be derived from the population in São Paulo. The NJ phylogeographic tree constructed using the F ST values indicates the division of the analyzed populations into two groups separated by the Amazon River. The northern group is represented by the populations in Amapá, Roraima (Surumu, Homoxi and Caroebe) and Amazonas, while the southern group is represented by Maranhão, the Rio Verdão site in Goiás, and São Paulo. The results obtained by cytological and molecular techniques suggested that the S. guianense s.l. populations analyzed, in general, do not constitute a species complex, as has been suggested by some authors, even though the populations had high genetic variability. The only exception is the population from Goiás (Rio Ponte de Pedra), which probably represents a species that is new to science. / A espécie Simulium guianense s.l. Wise é incriminada como principal vetor de Onchocerca volvulus Leuckart, causadora da oncocercose no foco Amazônico, localizado no norte da América do Sul. Os objetivos do presente estudo foram analisar diferentes populações dessa espécie utilizando cromossomos politênicos e seqüências da região do gene mitocondrial COI, para avaliar as relações entre essas diferentes populações. Para a análise cromossômica, os espécimes foram coletados nos estados do Amazonas, São Paulo e Goiás (Rio Ponte de Pedra) e para a análise molecular foram coletados nos estados do Amazonas, Amapá, Goiás (Rios Ponte de Pedra e Verdão), Maranhão e Roraima (uma população na área do foco de oncocercose-Homoxi e, duas fora da área do foco, Caroebe e Surumu). Os cromossomos politênicos das populações analisadas foram comparados com mapas estabelecidos anteriormente para essa espécie. As análises citológicas do padrão de bandas dos cromossomos politênicos mostraram inversões polimórficas, na condição heterozigota nas populações do Amazonas e São Paulo, e a de Goiás (Rio Ponte de Pedras) apresentaram duas inversões fixas. Comparando 702 pb da região do gene mitocondrial COI das nove populações estudadas, um valor considerável de sítios polimórficos foram observados, permitindo estudos populacionais e filogeográficos. Um cladograma representativo foi construído a fim de relacionar os haplótipos detectados, permitindo observar que as populações do norte, Amapá, Amazonas e RR-Caroebe compartilham um mesmo haplótipo, enquanto a área do foco Amazônico (RR-Homoxi) está mais relacionada com as populações de RR-Surumu, compartilhando um haplótipo em comum. As populações de São Paulo e Goiás, Rio Verdão (das regiões sudeste e centro-oeste, respectivamente) apresentam elevada variabilidade haplotípica, onde cada indivíduo é representado por um haplótipo. A população do Rio Ponte de Pedra, de Goiás não compartilhou haplótipos com as outras populações estudadas, nem mesmo com a do Rio Verdão, também em Goiás, localizada a aproximadamente 50 Km de distância. As populações do Amazonas e RR-Caroebe apresentaram valores negativos de F ST, sugerindo que elas, trocam alelos livremente, representando uma população sem estrutura genética. A população do Maranhão, que se mostrou bem estruturada em relação às outras, tem baixo número de migrantes, mas parece ser derivada da população de São Paulo. Usando os valores de F ST uma árvore filogenética de NJ foi gerada e pode-se observar uma separação entre os grupos ao norte da calha do Rio Amazonas, representados por indivíduos do Amapá, RR (Surumu, Homoxi e Caroebe) e Amazonas, e outro ao sul da calha do Rio Amazonas (Maranhão, GO-Rio Verdão e São Paulo). Os resultados obtidos, utilizando técnicas citogenéticas e moleculares, sugerem que as populações de S. guianense s.l. analisadas, no geral, não fazem parte de um complexo de espécie, como sugerido por alguns autores, apesar de apresentar acentuada variabilidade genética. A exceção é a população de Goiás (Rio Ponte de Pedra) que, provavelmente, representa uma nova espécie para a Ciência.

Orientador: Alaxandre Magno Sebbenn / Banca: Mario Luiz Teixeira de Moraes / Banca: Rinaldo Cesar de Paula / Resumo: Os métodos baseados em marcadores genéticos para estimar o coeficiente de herdabilidade em populações naturais são importantes, visto que os métodos tradicionais baseados em teste de progênies são impraticáveis para este fim por introduzirem vícios devido às interações genótipo-ambientes, variações no sistema de reprodução e efeitos amostrais. O objetivo deste trabalho foi investigar o controle genético de caracteres de crescimento em populações contínuas e fragmentadas de Araucaria angustifolia. As seguintes questões que foram abordadas são: i) Existem diferenças nos níveis de herdabilidade entre diferentes populações e entre gerações de mesma população? e ii) Quais os níveis de herdabilidade em caracteres de crescimento em populações naturais? O presente estudo foi desenvolvido com duas populações de A. angustifolia, sendo uma delas localizada na Reserva Genética Florestal de Caçador (RGFC), no Planalto Norte do Estado de Santa Catarina, e a outra em um fragmento de floresta de 5,4 ha (população CENI) localizada em uma fazenda no planalto do Estado do Paraná, dentro das bacias do Iguaçu. As estimativas de herdabilidades foram realizadas utilizando-se dados de genótipos de indivíduos regenerantes e juvenis do fragmento CENI e juvenis da população RGFC. Foram utilizados quatro métodos para estimar o parentesco entre os indivíduos e três modelos de estimação do coeficiente de herdabilidade, implementados no programa Mark. As herdabilidades estimadas pela combinação de todos os métodos de estimação de parentesco e modelos de herdabilidade não foram significativamente diferentes de zero, indicando inadequação dos dados aos modelos ou ausência de controle genético. Um novo método para estimar a herdabildiade em populações naturais, baseado na reconstrução do pedigree, derivado de resultados de análise de maternidade e paternidade foi então ... / Abstract: Marker-based methods for estimating the coefficient of heritability in natural populations are important because traditional methods may be impractical or introduce bias via interaction genotype-environmental effects, mating system variation and sampling effects. Thus, the aim of this study is to investigate the genetic control of growth traits in Araucaria angustifolia population continuous and fragmented. The following questions will be addressed: i) There are differences in the levels of heritability between different populations and between generations of the same population? and ii) What levels of heritability for growth traits in natural populations? This study was carried out using two populations of A. angustifolia, one being located in the Reserve Forest Genetics Caçador (RGFC), on the plateau north of the state of Santa Catarina, and other is in a small forest fragment of 5, 4 ha (CENI) located on a farm in the highlands of the state of Paraná, in the basins of Iguaçu. The estimates of heritability were carried out using data of genotypes of regeneration and juveniles of CENI population and juvenile of RGFC population. We used four methods to estimate the relatedness between pairwise individuals and three models for estimating the heritability coefficient, all implemented in the Mark program. The heritability estimates for the combination of all methods of estimation of relatedness and heritability models were not significant different from zero, indicating the inadequacy of the data to the models. There is a tendency for a higher genetic control in the regeneration than juvenile stage. The CENI fragmented population had generally higher heritability than the RGFC natural population, indicating higher potential to respond to natural selection. The main conclusion of this study is ... / Mestre

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T17:52:33Z No. of bitstreams: 1 DiannyElizabethJimenezJojoaTese2017.pdf: 3946754 bytes, checksum: 81cb9190de587ca935463b13f7a89e30 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T17:52:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DiannyElizabethJimenezJojoaTese2017.pdf: 3946754 bytes, checksum: 81cb9190de587ca935463b13f7a89e30 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T17:52:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiannyElizabethJimenezJojoaTese2017.pdf: 3946754 bytes, checksum: 81cb9190de587ca935463b13f7a89e30 (MD5) Previous issue date: 2017-03-23 / The physiological and pathological processes are leaded by infinity of mechanisms and metabolic pathways. In the last decades, researches have focused on to small vesicles, the exosomes, from endosomal origin that could be involved in these processes. These vesicles can be released by different cell types carrying important components that could become biomarkers for the diagnosis of diseases or as moldable tools for controlled release of bioactive substances for clinical and therapeutic application. However, one of the challenges in the study of these interesting and versatile microvesicles is the purification process. Currently, significant difficulties are found as the lack of purity, yield and reproducibility revealed in the unreliable data at both the protein and transcriptional levels. Therefore, our aim in the present study was to compare in human serum samples the currently used purification techniques: ExoQuick??? (Systems Biosciences), Total Exosome Isolation (Life Technologies), Ultrafiltration and Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography as regards to yield, size and purity evaluating, in addition, the reproducibility. The results obtained revealed the existence of differences between the techniques in the amount of particle recovery with sizes corresponding to the exosomes. Ultrafiltration was the most efficient technique followed by polymer precipitation methods and Ultracentrifugation. Protein content diversified considerably, with the Ultrafiltration almost ten times more than Ultracentrifugation. Different profiles of proteins in acrylamide gel were found, with 50 kDa to 70 kDa bands suggesting the co-precipitation of abundant contaminating proteins as albumin. When the chromatography was used to evaluate the recovery efficiency of the other techniques, the result showed no interference in the separation of populations by size, but could represent an additional tool for techniques as Ultrafiltration in the isolation of albumin as the main interfering in the serum samples. Important data were found when particle number normalization was performed in the analysis by the TRPS method, where a reduction of the aggregation and a change in the particle distribution were visible. In our results it was possible to confirm the need for the new reproducible and reliable protocols that can allow the isolation of exosomes for clinical application. On the other hand, our data provide guidance on the use of current methods for obtaining exosomes from serum and other biological fluids. / Os processos fisiol??gicos e patol??gicos s??o regidos por uma infinidade de mecanismos e vias metab??licas. Nas ??ltimas d??cadas, as pesquisas dirigiram-se a pequenas ves??culas, os exossomas, de origem endossomal que poderiam estar involucradas nestes processos. Estas ves??culas podem ser liberadas por diferentes tipos de c??lulas carregando no seu interior componentes importantes que poderiam transformar-se em biomarcadores para o diagn??stico de doen??as ou podem servir como ferramentas mold??veis para libera????o controlada de subst??ncias bioativas de aplica????o cl??nica e terap??utica. No entanto, um dos grandes desafios no estudo destas interessantes e vers??teis microves??culas constitui o processo de purifica????o. Atualmente, dificuldades significantes s??o encontradas no que se refere ?? falta de pureza, rendimento e reprodutibilidade refletidos nos dados pouco confi??veis tanto a n??vel proteico como transcricional. Por conseguinte, o nosso objetivo no presente estudo foi comparar em amostras de soro humano as t??cnicas de purifica????o atualmente utilizadas: ExoQuick??? (Systems Biosciences), Total Exosome Isolation (Life Technologies), Ultrafiltra????o e Ultracentrifuga????o e Cromatografia de exclus??o pelo tamanho em termos de rendimento, tamanho e pureza avaliando, al??m disso, a sua reprodutibilidade. Os resultados obtidos demonstraram a exist??ncia de diferen??as marcantes entre as t??cnicas na quantidade de recupera????o de part??culas com tamanhos correspondentes aos exossomas. A Ultrafiltra????o foi a t??cnica mais eficiente seguida pelos m??todos de precipita????o com pol??mero e a Ultracentrifuga????o. O conte??do proteico tamb??m variou consideravelmente sendo na Ultrafiltra????o quase dez vezes maior que a Ultracentrifuga????o. Perfis diferentes de prote??nas em gel de acrilamida foram encontrados, ressaltando a presen??a de bandas de 50 kDa a 70 kDa sugerindo a coprecipita????o de prote??nas contaminantes abundantes como a albumina. Quando a cromatografia foi usada para avaliar a efici??ncia de recupera????o das outras t??cnicas, o resultado obtido revelou que a mesma n??o auxilia na separa????o de popula????es pelo tamanho, mas que poderia representar uma ferramenta adicional para t??cnicas como a Ultrafiltra????o no isolamento de albumina como principal interferente nas amostras de soro. Dados relevantes foram encontrados quando foi realizada a normaliza????o do n??mero de part??culas na an??lise pelo m??todo de TRPS onde foi vis??vel uma redu????o da agrega????o e uma mudan??a da distribui????o das part??culas. Nos nossos resultados foi poss??vel evidenciar a necessidade da cria????o de novos protocolos reprodut??veis e confi??veis que podem permitir o isolamento de exossomas para a sua aplica????o cl??nica. Por outro lado, nossos dados fornecem uma orienta????o no uso dos m??todos atuais para a obten????o de exossomas derivados de soro e outros fluidos biol??gicos.