Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T05:00:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bezerra_MarcosAndreCavalcanti_M.pdf: 1651250 bytes, checksum: efe8b98a0acb6f960292cb82199b3ee2 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A talassemia ß é uma doença hereditária freqüente da Hb e tem sido encontrada em praticamente todas as populações estudadas. A ocorrência dessas síndromes no Brasil tem sido estudada ao longo do tempo, entretanto, por causa das limitações nas metodologias utilizadas em muitas pesquisas, os dados de prevalência e diversidade são incompletos. Além disso, como conseqüência da composição étnica do nosso país, miscigenada por elementos de origens européia, africana, asiática e indígena, e desigualmente distribuída, a incidência da talassemia pode variar de região para região. Este estudo tem como objetivo mostrar caracteríticas clínicas, bioquímicas e moleculares das síndromes talassêmicas em população do estado de Pernambuco. Foram estudados 117 pacientes não relacionados, sendo 11 diagnosticados com talassemia ß maior, 36 talassemia ß intermediária e 70 com a interação S/ß talassemia, acompanhados na Fundação HEMOPE. A caracterização molecular foi feita por técnicas de PCR e seqüenciamento. A caracterização dos alelos ß talassêmicos revelou 15 diferentes mutações, sendo que 4 delas correspondem a 84,3% dos alelos ß talassêmicos, nas seguintes proporções: 54,9% IVS-I-6 (T-»C), 15,2% IVS-I-5 (G-»C), 7,9% códon 39 (C-»T) e 6,1% IVS-I-1 (G-»A). Foram encontradas outras mutações raras, pela primeira vez descritas no Brasil: IVS-II-849 (A-»G), poli-A (T-»C), - 29 (A-»G), Códon 30 (A-»C), IVS-I-2 (T-»C), IVS-II-837 (T-»G), Códons 106/107 (+G), além das mutações IVS-I-5 (G-»A) e -88 (C-»T). Uma nova mutação foi descrita: códon 12 (-C). Foram encontrados 30 pacientes homozigotos IVS-I-6 (T-»C) e tal mutação mostrou uma forte associação com o haplótipo VI. A mutação IVS-I-5 (G-»C) esteve relacionada ao haplótipo I, diferentemente do encontrado em outras populações (haplótipo VII) em que esta mutação é prevalente, podendo sugerir uma origem diferente para esta mutação no Brasil. A deleção -a3.7 kb esteve presente em 4,2% dos pacientes homozigotos para talassemia ß e em 15,7% dos S/ß tal, enquanto a aaaanti 3.7kb foi encontrada em 5,7% dos S/ß tal. O polimorfismo XmnI esteve presente em 6,1% dos pacientes com ß tal homozigota e em apenas 1,4% dos S/ß tal. Com relação ao alelo UGT1A1, foi visto que pacientes com genótipos (TA)7 / (TA)7 e (TA)7 / (TA)8 apresentaram maiores níveis de bilirrubina não conjugada e parecem ter maior probabilidade de desenvolver colelitíase. No Brasil, embora a composição étnica da população seja heterogênea, as mutações mais comuns são de origem Mediterrânea; Pernambuco pode ser considerado uma exceção já que cerca de 16,0% da população talassêmica possui mutações de origem Asiática e 10,8% são de origem africana. A diversidade de mutações e suas respectivas freqüências diferem do encontrado em outras populações brasileiras já estudadas, como a do Sudeste, onde 4 mutações também respondem pela maioria (97%) dos casos, porém a mutação predominante é a ß039 (C-»T) / Abstract: ß Thalassemia is a frequent inherited disease of the Hb molecule found in the majority of populations and distributed worldwide. The prevalence of this syndrome in Brazil has been studied for a long time, but due to limitations in the methodology of some research, data on prevalence and clinical diversity are not fully complete. Furthermore, as a consequence of our ethnic composition, mixed with an uneven distribuition of European, African, Asian and Indian native populations, the incidence of thalassemia may vary greatly from one region to another. This study aims to show clinical features, and also biochemical and molecular data of our thalassemia syndromes in a population setting of thalassemia patients in the State of Pernambuco. We studied 117 non-related patients, 11 of them with ß thalassemia major, 36 ß with thalassemia intermedia and 70 with the S/ß thalassemia interaction, followed regularly at the Fundação HEMOPE ¿ Recife - Brazil. Molecular characterization was performed by PCR techniques and DNA sequencing. Characterization of ß thalassemia alleles showed 15 different mutations, 4 of which corresponded to 84.3% of the ß thalassemia alleles, in the following proportions: 54.9% IVS-I-6 (T-»C), 15.2% IVS-I-5 (G-»C), 7.9% codon 39 (C-»T) and 6.1% IVS-I-1 (G»A). Other rare mutations were found and for the first time in Brazil, such as: IVS-II-849 (A-»G), poly-A (T?C), -29 (A?G), codon 30 (A-»C), IVS-I-2 (T-»C), IVS-II-837 (T-»G), codons 106/107 (+G), as well as IVS-I-5 (G-»A) and -88 (C-»T) mutations. A new mutation is also described: codon 12 (-C). We found 30 homozygous patients for the IVS-I-6 (T-»C) mutation, which showed a strong association with the ß gene haplotype VI. The IVS-I-5 (G-»C) mutation was related to the ß gene haplotype I, differently from that found in other populations studied (ß haplotype VII) where it is more prevalent, suggesting a different origin for this mutation in Brazil. The -a3.7 kb deletion was present in 4.2% of ß thalassemia homozygous patients and in 15.7% of the S/ß thalassemia patients, whereas the aaaanti3.7kb was found in 5.7% of them. The XmnI polymorphism was present in 6.1% of the homozygous ß thalassemia patients and in only 1.4% of the S/ß thalassemia individuals. In relation to the UGT1A1 allele, we found that patients with genotypes (TA) 7 / (TA) 7 and (TA) 7 / (TA) 8 showed higher levels of non-conjugated bilirrubin and seem to be more prone to developing gall stones. In Brazil, although the ethnic composition is markedly heterogeneous, the most common mutations are of Mediterranean origin; Pernambuco may be a curious exception to this, since around 16.0% of the thalassemia population have mutations of Asian origin and 10.8% of African origin. In conclusion, the diversity of the mutations found and their frequencies greatly differ from those found in other Brazilian populations studied previously, for example in the Southeast where only four thalassemia mutations are responsible for the majority (97%) of the thalassemia cases, although the commonest mutation is the ß039 (C-»T) / Mestrado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-09-19T14:46:16Z No. of bitstreams: 1 Marilia Gabriela de Santana Costa.pdf: 1426412 bytes, checksum: c3c7baa96284c5f7b4c52bec2911ec26 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T14:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marilia Gabriela de Santana Costa.pdf: 1426412 bytes, checksum: c3c7baa96284c5f7b4c52bec2911ec26 (MD5) Previous issue date: 2013-07-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Helinonia L. (family Heliconiaceae) comprises about 207 species, mostly of Neotropical origin, with elevated ornamental interest. Their identification is performed with difficulty and several species are recognized as synonyms. This study aimed to characterize cytogenetically 10 genotypes of Heliconia, using fluorochrome staining with DAPI and CMA and FISH with rDNA 45S and 5S probes. The karyotypes were symmetric, with 2n = 2x = 24 chromosomes for diploid species, with average length ranging from 0.88 to 3.35 μm. In relation to CMA/DAPI staining and FISH, CMA+/DAPI0/rDNA 5S proximal sites were observed in two and three small chromosomes in diploid and triploid genotypes, respectively. For CMA++/DAPI-/rDNA 45S sites, two or four sites per genotype were observed. For H. psittacorum diploid populations, two subterminal sites with distended satellite were found, and, for H. spathocircinata, four terminal sites without satellite were found. Heliconia psittacorum x H. spathocircinata hybrids (‘Golden Torch Adrian’ e ‘Golden Torch’), as expected, showed three labeled chromosomes, two similar to H. spathocircinata and one to H. psittacorum. For 'Suriname Sassy' and 'Sassy', three terminal sites with satellite similar to diploid H. psittacorum were observed. Heliconia bihai had two chromosomes with proximal sites. Similarly, H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii hybrid showed two proximal sites CMA++/DAPI-/DNAr 45S, but with size and morphology chromosome heteromorphism. The distribution of 5S and 45S rDNA sites, both CMA positive, corroborated the triploid origin for 'Sassy Suriname' and 'Sassy' genotypes from diploid genotypes H. psittacorum as well as the hybrids H. psittacorum x H. spathocircinata ('Golden Torch' and 'Golden Torch Adrian') and H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii from their respective parents. / O gênero Heliconia L. (família Heliconiaceae) possui cerca de 207 espécies, principalmente de origem neotropical, com elevado interesse ornamental. Sua identificação é realizada com dificuldade e diversas espécies são reconhecidas como sinonímias. O presente trabalho teve por objetivo a caracterização citogenética de 10 genótipos de Heliconia mediante as técnicas de coloração com fluorocromos CMA e DAPI e FISH para sítios de DNAr 45S e 5S. Os cariótipos foram simétricos, com número cromossômico para as espécies diploides de 2n = 2x = 24 e comprimento médio dos cromossomos de 0,88 a 3,35 μm. Em relação à coloração CMA/DAPI e FISH, observou-se marcação proximal CMA+/DAPI0/DNAr 5S em dois e três cromossomos pequenos, nos genótipos diploides e triploides, respectivamente. Para as marcações CMA++/DAPI-/DNAr 45S, por sua vez, observou-se de dois a quatro sítios por genótipo. Nas populações diploides de H. psittacorum observados dois cromossomos com marcação subterminal e satélite distendido e para H. spathocircinata foram encontrados quatro cromossomos com marcação terminal e ausência de satélite. Os híbridos de H. psittacorum x H. spathocircinata (‘Golden Torch Adrian’ e ‘Golden Torch’) como esperado exibiram três cromossomos com marcação, dois semelhantes aos H. spathocircinata e outro ao de H. psittacorum. Nos genótipos triploides ‘Sassy’ e ‘Suriname Sassy’, foram observados três cromossomos com marcação subterminal e presença de satélite semelhante ao encontrado para H. psittacorum. Para H. bihai, destacaram-se dois cromossomos com marcação proximal. O híbrido H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii também apresentou dois cromossomos portadores sítios de CMA++/DAPI-/DNAr 45S proximal, porém heteromórficos para tamanho e morfologia. A distribuição dos sítios de DNAr 5S e 45S, ambos CMA positivos, corroborou a origem dos genótipos triploides ‘Sassy’ e ‘Suriname Sassy’ a partir de genótipos diploides de H. psittacorum bem como de híbridos H. psittacorum x H. spathocircinata (‘Golden Torch’ e ‘Golden Torch Adrian’) e H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii a partir de seus respectivos parentais.

Orientador: Jose Francisco Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T23:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariano_PriscilladeLaetSan'Ana_D.pdf: 1702939 bytes, checksum: 0dccafa4ba01badcfb8fc5a7d8d8592a (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A preservação de microrganismos é um importante recurso para a manutenção e conservação de espécies microbianas em laboratórios clínicos, técnicos e de pesquisa. Diferentes métodos de armazenamento de espécies de leveduras em laboratório foram descritos, objetivando principalmente, melhores resultados quanto à manutenção da viabilidade e das propriedades celulares por tempos prolongados. Métodos ideais de armazenamento de leveduras e outros microrganismos necessitam promover a sobrevida das células, bem como a pureza da cultura e a estabilidade de suas características. Alguns pesquisadores, no entanto, têm mencionado a ocorrência de alterações fenotípicas e/ou genotípicas em amostras mantidas em laboratório, as quais podem influenciar estudos, tipagem e a aplicabilidade destes organismos nos diversos setores. Há, portanto, uma necessidade de estudos adicionais que avaliem a estabilidade das propriedades das amostras de leveduras após serem mantidas em laboratório por diferentes métodos. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência de métodos de manutenção laboratorial de leveduras sobre as suas características morfológicas e bioquímicas. Para isso, foram testadas seis cepas padrão de leveduras do gênero Candida, sendo quatro espécies de interesse médico e duas de interesse industrial, submetidas a cinco diferentes métodos de armazenamento, a saber: transferências seriadas em meio sólido, óleo mineral, água destilada, congelamento em glicerol a -70ºC e liofilização. As amostras foram caracterizadas fenotipicamente antes de serem armazenadas, e após o armazenamento em diferentes intervalos de tempos por um período de 18 meses. Foram avaliadas as características das colônias em meio CHROMagar Candida®, micromorfologia em ágar fubá, assimilação e fermentação de carboidratos, produção de proteinases e fosfolipases, teste de crescimento a 45°C e crescimento em meio hipertônico. O DNA das amostras foi extraído nos tempos zero, 06, 12 e 18 meses, para análise genotípica por Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD), utilizando-se dois diferentes primers para cada cepa. Os resultados obtidos mostraram que todos os métodos de conservação avaliados permitiram a manutenção da viabilidade das amostras durante todo o período analisado (18 meses). A exceção ocorreu com a amostra de Candida dubliniensis que perdeu sua viabilidade em óleo mineral após 12 meses de conservação. Não foram observadas alterações fenotípicas nos resultados dos testes morfológicos e bioquímicos, após a preservação laboratorial através de todos os métodos utilizados no estudo. Entretanto, variações não estáveis foram observadas para algumas amostras nos testes de produção de fosfolipases e proteinases, e para o crescimento em meio hipertônico. Tais variações não estavam relacionadas com uma condição específica de manutenção da cepa e o resultado alterado foi reversível em testes subseqüentes. Alterações no padrão de RAPD não foram detectadas em pelo menos duas reações independentes para cada um dos primers testados. Os resultados obtidos demonstram que os métodos de conservação aplicados neste estudo permitem a manutenção da estabilidade das características fenotípicas e genotípicas relacionadas aos testes aplicados, em amostras de leveduras preservadas durante o período avaliado. Desta forma, a aplicabilidade do ponto de vista técnico ou de pesquisa não é inviabilizada para amostras preservadas por estes métodos. Cepas destinadas ao uso em finalidades específicas devem ser testadas individualmente quanto ao método de conservação mais indicado / Abstract: The maintenance of microorganisms is useful to preserve microbial species in clinical, technical and research laboratories. Different methods to yeast stocking are available in order to obtain long time viability and stability of cell properties. The best methods to store microorganisms need to provide the cell survival as well as purity and stability of their properties. Some researches, however, have mentioned phenotypic and/or genotytpic changes in laboratorial samples, which may influence yeast typing, studies and the applications of those organisms in different areas. Therefore, additional studies are needed to evaluate the yeast samples properties stability after stocking through different methods. The aim of this study was to evaluate the influence of the yeast storage methods in terms of their morphological and biochemistry characteristics. Candida spp. standard strains, four of medical importance and two industrial species were evaluated. Those strains were submitted to five storage methods: serial transferences in agar medium, mineral oil, distilled water, freeze with glycerol at -70ºC and freeze-drying. The samples were characterized with phenotypic techniques before being stocked, and after that in different periods of time up to 18 months. It was tested the characteristics of the colonies in CHROMagar Candida® medium, micromorphology in corn meal agar, carbohydrates assimilation and fermentation, phospholipases and proteinases production in solid medium, growth test in 45ºC and growth test in hypertonic medium. In addition, the DNA extraction of all samples was carried out in time zero, 6, 12 and 18 months, in order to posterior genotypic analyses by Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) using two different primers for each strain. The results showed that all yeast preservation methods tested were able to maintain the viability of the samples during the period of the study, except the strain Candida dubliniensis stocked in mineral oil, which not survived after 12 months in these conditions. It was not observed phenotypic alterations in the results of morphological and biochemistry tests after laboratorial preservation with all used methods. However, some non stable variations were observed in phospholipase and proteinase production and in the hypertonic growth for some samples. Such variations were not related to one specific maintenance method and the altered result could be reversible in subsequent tests. Changes in the RAPD pattern were not detected in, at least, two independent reactions for both tested primers. The results showed that the maintenance methods applied in this study were able to preserve the stability of the phenotypic and genotypic characteristics, in all yeast samples stocked during the analyzed period of time. Therefore, the technical and research applicability of the samples are not unfeasible when they are preserved with those methods. Strains designated to use for specific purposes must be tested individually, in order to select the best preservation method / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Cinthia Pereira Machado Tabchoury, Renata de Oliveira Mattos-Graner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T03:02:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arthur_RodrigoAlex_M.pdf: 7762962 bytes, checksum: 2d47e9191e8b5f5a3ec1e6697bebe1a1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: É bem conhecido que a sacarose promove modificações na microbiota do biofilme dental, levando à seleção de microrganismos acidúricos e acidogênicos. No entanto, pouco se sabe sobre sua influência na diversidade genotípica de Streptococcus mutans. Assim, o objetivo do presente estudo cruzado foi avaliar a diversidade genotípica de S. mutans no biofilme dental formado in vivo e in situ na presença de sacarose ou glicose+frutose. Sete dias antes do início do experimento e durante todas as etapas experimentais os voluntários utilizaram dentifrício não-fluoretado. No início do experimento, foi coletada saliva estimulada dos voluntários para determinação dos níveis de estreptococos do grupo mutans, microrganismos totais, estreptococos totais e identificação dos genótipos de S. mutans. Durante a etapa in vivo, 7 voluntários adultos saudáveis bochecharam, 8 x/dia, água destilada e deionizada, soluções de glicose 10% + frutose 10% ou de sacarose 20%, por 3 dias consecutivos, durante os quais não houve higienização dental na região de pré-molares e molares superiores, para possibilitar acúmulo de biofilme. Ao final do período, o biofilme formado nesses dentes foi coletado. Durante a etapa in situ, dividida em 3 fases de 3 dias cada, os mesmos voluntários utilizaram dispositivos intra-orais palatinos contendo 2 blocos de esmalte dental humano hígido, sobre os quais foram gotejadas, 8 x/dia, as mesmas soluções descritas acima e o biofilme foi coletado após 3 dias de formação. Todos os voluntários passaram por todos os tratamentos. Colônias com morfologia típica de S. mutans foram isoladas da saliva e do biofilme dental e o DNA desses isolados foi extraído. PCR com primers espécie-específicos confirmaram a identidade molecular desses isolados, que foram submetidos à genotipagem com o primer OPA-02 pela técnica de AP-PCR. Somente 1 genótipo esteve presente na saliva de 85,7% dos voluntários, mas nos biofilmes in vivo e in situ, além do genótipo salivar, outros foram encontrados. Diversidade genotípica similar foi encontrada quando o biofilme in vivo foi comparado ao biofilme in situ. Não houve diferença quantitativa na diversidade genotípica de S. mutans entre os tratamentos, mas glicose+frutose e sacarose apresentaram genótipos diferentes daqueles encontrados no biofilme de água destilada / Abstract: selecting acid-tolerant microorganisms. However, little is known about the influence of sucrose on genotypic diversity of Streptococcus mutans. The aim of this crossover study was to evaluate S. mutans genotypic diversity found in dental biofilm formed in vivo and in situ in the presence of sucrose and glucose+fructose. Seven days before the beginning of the experiment and throughout the entire experiment, the volunteers used a non-fluoridated dentifrice. In the beginning of the experiment, stimulated saliva was collected from the volunteers for mutans streptococci, total streptococci and total microbiota counts, and for identification of S. mutans genotypes. During the in vivo study, 7 healthy adult volunteers rinsed with distilled and deionized water, 10% glucose + 10% fructose or 20% sucrose solution, 8 x/day, during three consecutive days. Dental hygiene was suspensed in the region of upper pre-molars and molars and the biofilm formed in these teeth was collected at the end of the period. For the in situ study, which occurred in three phases of 3 days each, the same volunteers wore intra-oral acrylic palatal appliances containing 2 blocks of human sound dental enamel and dripped onto the blocks, in each phase, one of the treatments described above, 8 times per day and the biofilm formed was collected after 3 days of formation. All volunteers were submitted to all treatments. S. mutans morphological types present in biofilm and saliva were isolated, DNA was extracted and their molecular identity was confirmed by PCR with specific primers. Only one geno type was present in saliva from 85.7% of volunteers, but in the in vivo and in situ biofilms, besides this salivary genotype, others were found. Similar genotypic diversity was found in vivo compared to in situ biofilm. There was no quantitative difference in genotypic diversity of S. mutans among the experimental treatments, but glucose+fructose and sucrose harbored different genotypes compared to DDW / Mestrado / Cariologia / Mestre em Odontologia

Orientadores: Celia Marisa Rizzatti-Barbosa, Sergio Roberto Peres Line, Aarão Mendes Pinto Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:26:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Meloto_CarolinaBeraldo_M.pdf: 958312 bytes, checksum: 1981c09e0d65c5593c4e40d202b96b73 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Disfunções temporomandibulares (DTM) são condições encontradas na clínica que causam disfunção e dor no sistema mastigatório, promovidas por uma combinação de fatores, dentre os quais se incluem os hormonais e genéticos. Mulheres são marcadamente mais acometidas por estas desordens e, ao mesmo tempo, indivíduos submetidos à multifatoriedade etiológica das DTM respondem diferentemente quanto ao desenvolvimento e progressão da doença. Em conjunto, essas informações permitem sugerir uma correlação entre os hormônios sexuais femininos estrogênicos e a fisiopatologia das DTM, além de indicarem que condições genéticas inerentes ao indivíduo possam modular a capacidade patogênica do estrógeno. Os efeitos dos estrógenos no organismo são mediados pela sua ligação a receptores específicos localizados no citosol e núcleo celular, dos quais o receptor a (REa) é o mais conhecido e estudado. Em face disso, esta dissertação teve como objetivo investigar a associação de dois polimorfismos de nucleotídeo único localizados no íntron 1 do gene que codifica o receptor de estrógeno alfa e que são identificados pelas enzimas de restrição PvuII e XbaI, com os sinais e sintomas de desarranjos internos da articulação temporomandibular (ATM) em mulheres brasileiras na pós-menopausa, fazendo ou não terapia por reposição hormonal. Para isso, foi realizada a genotipagem destes polimorfismos para 284 mulheres na pós-menopausa, divididas em seis grupos de acordo com a presença ou ausência de desarranjos internos da articulação temporomandibular - dada pelo critério de diagnóstico em pesquisa para desordens temporomandibulares (RDC/TMD) - e com seu estado hormonal - hipoestrogenia ou sob terapia de reposição hormonal (TRH): Controle (Menopausa); DTM sem dor (Menopausa); DTM com dor (Menopausa); Controle (TRH); DTM sem dor (TRH); e DTM com dor (TRH). A ausência dos sítios de restrição para das enzimas PvuII e XbaI foi convencionalmente indicada com as letras maiúsculas P e X, e sua presença com as letras minúsculas p e x, respectivamente. Os sujeitos, portanto, foram designados como homozigotos PP ou XX, pp ou xx, ou ainda, heterozigotos Pp ou Xx. A comparação da freqüência dos genótipos entre os grupos controles e cada um dos grupos de pacientes portadores de desarranjos internos de DTM foi realizada através do teste ?2, com x nível de significância em 5%. O risco associado aos alelos foi calculado, quando pertinente, através do teste Odds Ratio (OR) com 95% de intervalo de confiança (CI). Como resultados, o genótipo homozigoto PP no grupo DTM sem dor (TRH) representou, em relação ao heterozigoto Pp, um risco 0,3125 vezes maior para DTM sem dor quando comparado com o grupo Controle (Menopausa) e um risco 0,2051 vezes maior para a mesma condição quando comparado ao grupo Controle (TRH). Já para o sítio polimórfico reconhecido pela enzima de restrição XbaI, nenhuma associação efetiva pôde ser encontrada. Consideradas as limitações deste estudo, os resultados encontrados permitiram sugerir que o genótipo homozigoto PP no íntron 1 do REa pode, na presença de estrógeno, ser considerado um marcador de risco para o desenvolvimento de patologias articulares na ATM de mulheres brasileiras. / Abstract: Disfunções temporomandibulares (DTM) são condições encontradas na clínica que causam disfunção e dor no sistema mastigatório, promovidas por uma combinação de fatores, dentre os quais se incluem os hormonais e genéticos. Mulheres são marcadamente mais acometidas por estas desordens e, ao mesmo tempo, indivíduos submetidos à multifatoriedade etiológica das DTM respondem diferentemente quanto ao desenvolvimento e progressão da doença. Em conjunto, essas informações permitem sugerir uma correlação entre os hormônios sexuais femininos estrogênicos e a fisiopatologia das DTM, além de indicarem que condições genéticas inerentes ao indivíduo possam modular a capacidade patogênica do estrógeno. Os efeitos dos estrógenos no organismo são mediados pela sua ligação a receptores específicos localizados no citosol e núcleo celular, dos quais o receptor a (REa) é o mais conhecido e estudado. Em face disso, esta dissertação teve como objetivo investigar a associação de dois polimorfismos de nucleotídeo único localizados no íntron 1 do gene que codifica o receptor de estrógeno alfa e que são identificados pelas enzimas de restrição PvuII e XbaI, com os sinais e sintomas de desarranjos internos da articulação temporomandibular (ATM) em mulheres brasileiras na pós-menopausa, fazendo ou não terapia por reposição hormonal. Para isso, foi realizada a genotipagem destes polimorfismos para 284 mulheres na pós-menopausa, divididas em seis grupos de acordo com a presença ou ausência de desarranjos internos da articulação temporomandibular - dada pelo critério de diagnóstico em pesquisa para desordens temporomandibulares (RDC/TMD) - e com seu estado hormonal - hipoestrogenia ou sob terapia de reposição hormonal (TRH): Controle (Menopausa); DTM sem dor (Menopausa); DTM com dor (Menopausa); Controle (TRH); DTM sem dor (TRH); e DTM com dor (TRH). A ausência dos sítios de restrição para das enzimas PvuII e XbaI foi convencionalmente indicada com as letras maiúsculas P e X, e sua presença com as letras minúsculas p e x, respectivamente. Os sujeitos, portanto, foram designados como homozigotos PP ou XX, pp ou xx, ou ainda, heterozigotos Pp ou Xx. A comparação da freqüência dos genótipos entre os grupos controles e cada um dos grupos de pacientes portadores de desarranjos internos de DTM foi realizada através do teste ?2, com x nível de significância em 5%. O risco associado aos alelos foi calculado, quando pertinente, através do teste Odds Ratio (OR) com 95% de intervalo de confiança (CI). Como resultados, o genótipo homozigoto PP no grupo DTM sem dor (TRH) representou, em relação ao heterozigoto Pp, um risco 0,3125 vezes maior para DTM sem dor quando comparado com o grupo Controle (Menopausa) e um risco 0,2051 vezes maior para a mesma condição quando comparado ao grupo Controle (TRH). Já para o sítio polimórfico reconhecido pela enzima de restrição XbaI, nenhuma associação efetiva pôde ser encontrada. Consideradas as limitações deste estudo, os resultados encontrados permitiram sugerir que o genótipo homozigoto PP no íntron 1 do REa pode, na presença de estrógeno, ser considerado um marcador de risco para o desenvolvimento de patologias articulares na ATM de mulheres brasileiras. / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Jose Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:28:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marroni_AlineSaldanha_M.pdf: 1836719 bytes, checksum: 5a5cf29a17694aeb363b6061e74f525c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é um gás solúvel com importantes papéis fisiológicos. Alterações na biodisponibilidade de NO contribuem para o desenvolvimento de vários estados fisiopatológicos, tais como hipertensão arterial, aterosclerose, doença coronariana e hipertensão pulmonar. A importância do NO no controle cardiovascular levou a estudos visando avaliar se polimorfismos do gene da eNOS estão associados com doenças cardiovasculares. Três polimorfismos de interesse clínico do gene da eNOS têm sido estudados: T ?786C na região promotora, 4a/4b no íntron 4 e Glu298Asp no éxon 7. Diversos estudos têm apresentado resultados contraditórios sobre a associação desses polimorfismos com doenças cardiovasculares. Demonstrou-se que numa população dos EUA, estes variantes genéticos apresentam acentuada diferença étnica em sua distribuição. Não se sabe se na população brasileira ocorrem essas mesmas diferenças étnicas na distribuição de variantes da eNOS observadas na população americana. O objetivo desse trabalho foi avaliar a freqüência desses polimorfismos em voluntários diferentes etnicamente (136 negros e 154 brancos) na população brasileira. Também foi estimada a frequência haplotípica e a associação entre os variantes genéticos. A amplificação do DNA genômico foi feita por Reação de Polimerase em Cadeia (PCR) e os genótipos foram determinados por eletroforese em gel de poliacrilamida. O variante Asp298 foi mais comum em brancos (32.8%) que em negros (15.1%)(P<0.004). De modo similar, o variante C-786 foi mais comum em brancos (41.9%) que em negros (19.5%)(P<0.0004). Já o variante 4a foi mais comum em negros (32%) que em brancos (17.9%)(P<0.003). O haplótipo mais comum em ambos grupos étnicos era aquele que combinava os variantes comuns. O segundo haplótipo mais comum em negros incluía o variante 4a e os variantes não polimórficos para os outros dois polimorfismos. Nos indivíduos brancos, entretanto, o segundo haplótipo mais comum incluía os variantes Asp298 e C-786 e o variante comum para o polimorfismo do íntron. Essa acentuada diferença é similar àquela demonstrada na população americana. Esses achados sugerem haver uma consistente diferença interétnica na distribuição desses variantes genéticos da eNOS em negros e brancos da população brasileira. Essas diferenças podem estar associadas às disparidades étnicas observadas com relação às doenças cardiovasculares e resposta a drogas / Abstract: Nitric oxide (NO) is a soluble gas with fundamental physiologic role. Alterations in NO bioavalability contribute to the development of many diseases such as hypertension, atherosclerosis, coronary artery disease and pulmonary hipertension. The pivotal role of NO in the regulation of the cardiovascular system has motivated studies to assess whether polymorphisms in the eNOs gene are associated with cardiovascular diseases. Three specific polymorphisms in the eNOS gene have been widely studied : T-786C in the promoter region, 4a/4b in intron 4 and Glu298Asp in exon 7. Several studies have associated inconsistently these polymorphisms with cardiovascular diseases. In an American population these variants show interethnic differences in their distribution. However, we don?t know whether there are the same differences in the brazilian population. To test this possibility, we examined the distribution of genetic variants in 136 black and 154 white subjects from a Brazilian population. We also estimated the haplotype frequency, and evaluated associations between these variants. The Asp298 variant was more common in in whites (32.8 %) than in blacks (15.1%)(P<0.004). Similarly, the C-786 variant was more common in whites (41.9%) than in blacks (19.5%)(P<0.0004). However, the 4a variant was more common in blacks (32.0%) than in whites (17.9%)(P<0.003). The most common predicted haplotype in both ethnic groups combined only wild type variants. While the second most common haplotype in blacks includes the variant 4a and the wild-type variants for the remaining polymorphisms, the second most common haplotype in whites includes the variants Asp298 and C-786 and the wild-type variant for polymorphism in intron 4. The marked interethnic differences that we found in Brazilians are very similar to that previously reported in Americans. These findings strongly suggest a consistent difference in the distribution of eNOS genetic variants in blacks compared with whites in brazilian population. These findings may explain in part the ethnic disparities in cardiovascular risk and response to drugs / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Celia Marisa Rizzatti-Barbosa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T02:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serrano_PrisciladeOliveira_D.pdf: 1817272 bytes, checksum: 1f42a57b47b396717d47a6907d023784 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A dor é um processo complexo influenciado por uma variedade de fatores comportamentais, ambientais e genéticos. A Disfunção Temporomandibular (DTM) é uma condição musculoesqueletal com etiologia multifatorial que inclui fatores locais, sistêmicos e genéticos, fazendo com que os indivíduos respondam diferentemente quanto ao desenvolvimento e progressão da doença. Assim, condições genéticas inerentes ao indivíduo podem estar relacionadas à sensibilidade dolorosa e ao risco de desenvolvimento de DTM. A Catecolamina -0- metiltransferase (COMT) é uma enzima que metaboliza as catecolaminas endógenas, cuja atividade influencia a modulação de alguns neurotransmissores à sensibilidade dolorosa. O polimorfismo genético de nucleotídeo único (SNP: rs 4680) no códon 158 (Val 158 Met) do gene responsável pela codificação da COMT parece estar relacionado à sensibilidade dolorosa e ao risco de desenvolvimento de DTM. O objetivo do presente estudo foi investigar a associação do polimorfismo genético da COMT (Val 158 Met) com a predisposição à sintomatologia dolorosa em voluntárias que apresentavam desarranjos internos da articulação temporomandibular. O diagnóstico de DTM foi realizado utilizando o Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC/TMD) e o experimento realizado em cego, considerou o delineamento proposto a seguir: 1) Grupo controle, composto por 334 voluntárias não portadoras de DTM; 2) Grupo DTM sem dor, composto por 224 voluntárias portadoras de DTM e com ausência de sensibilidade dolorosa na ATM e 3) Grupo DTM com dor, composto por 75 voluntárias portadoras de DTM e com presença de sensibilidade dolorosa na ATM. O ácido desoxirribonucléico (DNA) das voluntárias foi obtido através de células epiteliais da mucosa bucal. A amplificação dos genes da COMT foi realizada por meio de reação de PCR (Polimerase Chain Reaction). Para a identificação dos alelos foi realizada a técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), e o produto do RFLP foi submetido à eletroforese em géis de poliacrilamida a 10%. O teste de Equilíbrio de Hardy-Weinberg foi utilizado para determinar o equilíbrio da distribuição dos alelos na população estudada. A comparação da freqüência dos genótipos entre os grupos controle, DTM sem dor e DTM com dor foi realizada através do teste %2 com nível de significância em 5%. Não foi encontrada diferença estatística significante entre o polimorfismo da COMT (Val 158 Met) e sensibilidade dolorosa na ATM, sugerindo que este polimorfismo não pode ser relacionado com maior sensibilidade dolorosa na ATM. / Abstract: Pain is a complex experience encompassing behavioral, environmental, and genetics factors. Temporomandibular Disorders (TMD) are a musculoskeletal condition considered to have multifactorial etiology comprising local, systemic and genetic factors, which makes individuals respond differently to the development and progression of the disease. Thus, intrinsic genetic conditions can be related to pain sensitivity and risk of developing TMD. Catechol-O-methyltransferase (COMT) is an enzyme involved in the metabolic degradation of endogenous catecholamines and whose activity influences modulatation of some pain sensitivity neurotransmitters. A single nucleotide polymorphism (SNP: rs4680) in codon 158 (Val158Met) of the gene encoding COMT may be related to pain sensitivity and risk of developing TMD. The purpose of the present study was to investigate the association among COMT polymorphism (Val 158 Met) and TMJ pain sensitivity in women with TMJ disorders. TMD diagnosis was obtained using the Research Diagnostic Criteria for Temporomandibular Disorders (RDC/TMD) and this blinded study was designed as follows: 1) Control group: 334 volunteers with no TMD signs and symptoms 2) TMD Group with no pain : 224 volunteers with TMD signs but no TMJ pain and 3) TMD Group with pain: 75 volunteers with TMD signs and TMJ pain. Deoxyribonucleic acid (DNA) from all volunteers was obtained from buccal mucosa cells. COMT gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR). Alleles were detected by restriction fragment length polymorphism (RFLP), followed by electrophoresis on a 10% polyacrylamide gel. Hardy-Weinberg equilibrium was tested to determine the balance in alleles distribution in the population studied. Differences in genotype frequencies among control group, TMD group with no pain and TMD Group with pain were assessed by chi (2) test, with significance level set at 5%. No statistically significant associations were found between COMT (Val158Met) polymorphism and pain sensitivity in TMJ, suggesting that this polymorphism can not be related to high pain sensitivity in TMJ. / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Submitted by Felipe Guedes Amorim (felipe_guedes17@hotmail.com) on 2018-10-22T13:50:51Z No. of bitstreams: 3 CARACTERIZAÇÃO DA INFECÇÃO PELOS VÍRUS DAS HEPATITES B E D EM PLASMA E TECIDO HEPÁTICO DE PORTADORES CRÔNICOS.pdf: 3452813 bytes, checksum: e271da19b24cd37ea8a4e33354900f20 (MD5) CARTA DE ENCAMINHAMENTO.pdf: 414411 bytes, checksum: 9dd0a540145c49dfcecf128512528fb0 (MD5) ATA DE DEFESA.jpg: 705457 bytes, checksum: f4791ecb5b56473f31626ba9bbf907e4 (MD5) / Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppg_biotec.ufam@yahoo.com.br) on 2018-10-22T14:18:55Z (GMT) No. of bitstreams: 3 CARACTERIZAÇÃO DA INFECÇÃO PELOS VÍRUS DAS HEPATITES B E D EM PLASMA E TECIDO HEPÁTICO DE PORTADORES CRÔNICOS.pdf: 3452813 bytes, checksum: e271da19b24cd37ea8a4e33354900f20 (MD5) CARTA DE ENCAMINHAMENTO.pdf: 414411 bytes, checksum: 9dd0a540145c49dfcecf128512528fb0 (MD5) ATA DE DEFESA.jpg: 705457 bytes, checksum: f4791ecb5b56473f31626ba9bbf907e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-22T18:27:33Z (GMT) No. of bitstreams: 3 CARACTERIZAÇÃO DA INFECÇÃO PELOS VÍRUS DAS HEPATITES B E D EM PLASMA E TECIDO HEPÁTICO DE PORTADORES CRÔNICOS.pdf: 3452813 bytes, checksum: e271da19b24cd37ea8a4e33354900f20 (MD5) CARTA DE ENCAMINHAMENTO.pdf: 414411 bytes, checksum: 9dd0a540145c49dfcecf128512528fb0 (MD5) ATA DE DEFESA.jpg: 705457 bytes, checksum: f4791ecb5b56473f31626ba9bbf907e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-22T18:27:33Z (GMT). No. of bitstreams: 3 CARACTERIZAÇÃO DA INFECÇÃO PELOS VÍRUS DAS HEPATITES B E D EM PLASMA E TECIDO HEPÁTICO DE PORTADORES CRÔNICOS.pdf: 3452813 bytes, checksum: e271da19b24cd37ea8a4e33354900f20 (MD5) CARTA DE ENCAMINHAMENTO.pdf: 414411 bytes, checksum: 9dd0a540145c49dfcecf128512528fb0 (MD5) ATA DE DEFESA.jpg: 705457 bytes, checksum: f4791ecb5b56473f31626ba9bbf907e4 (MD5) Previous issue date: 2018-07-18 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Amazonas (FAPEAM) / The hepatitis B virus (HBV) is responsible for a serious global public health problem, and the problem becomes even greater when coinfection or superinfection of D virus (HDV). It is estimated that of the 240 million people worldwide with chronic HBV infection, 15 million are carriers of HDV infection. Some regions of the Amazon Basin, particularly the State of Amazonas, are considered endemic areas of infection by these viruses. HDV is classified into eight different types (HDV-1-HDV-8) and HBV in ten (A-J). Thus, this research aims to characterize the genotypes of hepatitis B and D virus in plasma and hepatic tissue and to investigate possible association of genotypes with the evolution of the disease. Plasma and hepatic tissue samples from chronic HBsAg-reactive patients coinfected with HDV were analyzed. Plasma VHD viral load was quantified by real-time PCR; amplification of HBV DNA and VHD RNA by conventional PCR; direct sequencing of both viruses; phylogenetic analysis and research of resistance mutations in rt HBV. As a result, a total of 30 reactive HBsAg and Total Anti-HD patients, all from the State of Amazonas, were included in the study. Of these, 9/30 had both plasma and hepatic tissue samples. RNA-VHD was detected in 13/30 (46.67%) and HBV DNA in 11/30 (36.67%). Of the 09 plasma and hepatic tissue samples, VHD-RNA was detected in 2/9 (22.27%) and HBV DNA in 8/9 (88.89%). Of the 30 plasma samples submitted to VHD RNA quantification, viral load was obtained in 13/30 (46.67%). We also analyzed the 9 samples of hepatic tissue, obtaining viral load in 2/9 (22.27%). In the phylogenetic analysis, all the Delta sequences clustered in the clade VHD-3, already those of HBV, the genotypes A 15/19 (78%), D 2/19 (11%) and F 2/19 (11%). Concerning the search for antiviral resistance mutations in rt-HBV, 3/11 (27%) and 5/08 (62%) sequences isolated from plasma and hepatic tissue, respectively, showed resistance mutations. Conclusions: three HBV genotypes A, D and F were detected, independent of the source material; all extracted from delta were exclusively VHD-3; the viral load of the delta virus was higher in those extracted from hepatic tissue; a high percentage of mutations in the HBV polymerase region was detected, especially in isolated hepatic tissue sequences. Finally, the profile of the HBV and VHD genotypes found in the study reflects the same pattern found in the region by other authors. / O vírus da hepatite B (VHB) é responsável por um grave problema de saúde pública mundial, sendo que o problema torna-se ainda maior quando ocorre coinfecção ou superinfecção com o vírus D (VHD). Estima-se que das 240 milhões de pessoas no mundo portadoras crônicas de infecção pelo VHB, 15 milhões são portadoras de infecção pelo VHD. Algumas regiões da Bacia Amazônica, particularmente o Estado do Amazonas são consideradas áreas endêmicas de infecção por esses vírus. O VHD é classificado em oito diferentes tipos (VHD-1-VHD-8) e o VHB em dez (A-J). Sendo assim, esta pesquisa tem como objetivo, caracterizar os genótipos do vírus da hepatite B e D no plasma e tecido hepático e investigar possível associação dos genótipos com a evolução da doença. Foram analisadas amostras de plasma e de tecido hepático de pacientes portadores crônicos HBsAg reativos coinfectados com o VHD. Foi realizada a quantificação da carga viral do VHD no plasma por PCR em tempo real; amplificação do DNA-VHB e RNA-VHD por PCR convencional; sequenciamento direto de ambos os vírus; análise filogenética e pesquisa de mutações de resistência na rt do VHB. Como resultados, foram incluídos no estudo um total de 30 pacientes HBsAg e Anti-HD Total reativos, todos procedentes do Estado do Amazonas. Destes, 9/30 tinham simultaneamente amostras de plasma e tecido hepático. O RNA-VHD foi detectado em 13/30 (46,67%) e o DNA-VHB em 11/30 (36,67%). Das 09 amostras de plasma e tecido hepático o RNA-VHD foi detectado em 02/9 (22,27%) e o DNA-VHB em 08/9 (88,89%). Das 30 amostras de plasma submetidas a quantificação do RNA VHD, obteve-se a carga viral de 13/30 (46,67%). Também analisamos as 9 mostras de tecido hepático, obtendo-se a carga viral em 2/9 (22,27%). Na análise filogenética, todas as sequências de Delta agruparam-se no clado VHD3, já as de VHB, foram identificados os genótipos A 15/19 (78%), D 2/19 (11%) e F 2/19 (11%). Em relação à pesquisa de mutações de resistência à antivirais na rt-VHB, verificou-se que 3/11 (27%) e 05/08 (62%) sequencias isoladas do plasma e tecido hepático, respectivamente, apresentavam mutações de resistência. Conclusões: foi detectado três genótipos do VHB A, D e F, independente do material de origem; todos os extraídos de delta foram exclusivamente VHD-3; a carga viral do vírus delta, foi maior nos extraídos de tecido hepático; quanto ao perfil de mutações de resistência, foi detectado um percentual elevado de mutações na região da polimerase do VHB, principalmente nas sequências isoladas do tecido hepático. Por fim, o perfil dos genótipos do VHB e VHD encontrados no estudo reflete o mesmo padrão encontrado na região por outros autores

Orientadores: Célia Marisa Rizzatti Barbosa, Sérgio Roberto Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T12:59:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aquino_LuanaMariaMartinsde_D.pdf: 747541 bytes, checksum: 0f24074af7e5bf5aaa50035ec8e27b24 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: As disfunções temporomandibulares (DTM), assim como a fibromialgia (FM), são síndromes caracterizadas por dor crônica. A variabilidade individual da dor nestas síndromes pode estar associada à alterações individuais no complexo sistema de recepção do estímulo nociceptivo, como a capacidade reduzida da fibra nervosa em recrutar controles opióides endógenos inibidores da dor. O receptor ?-opióide (RMO) é codificado pelo gene OPRM1 que representa o principal alvo de opióides endógenos e exógenos, sendo capaz de mediar a nocicepção basal. Mutações no gene OPRM1, como o polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) 118A>G (rs1799971), promovem alterações em aminoácidos da proteína receptora e podem afetar sua expressão. No primeiro capítulo desta tese, foi revisada a literatura com o intuito de investigar a comorbidade entre DTM e FM. Nos capítulos seguintes o SNP 118A>G no gene receptor ?-opióides (OPRM1) foi identificado em indivíduos sintomáticos e assintomáticos apresentando desarranjos internos da articulação temporomandibular (DI-ATM), em pacientes portadores de fibromialgia, e em indivíduos saudáveis; e foi investigado se a presença do alelo G está associada ou não ao fenótipo de dor crônica. No capítulo 2 foi realizado um estudo caso-controle com 529 mulheres que foram divididas em 3 grupos: controle (mulheres saudáveis) (n=190); DIATM sem dor (n=164); DI-ATM com dor crônica (n=175). No capítulo 3, foram selecionadas 66 mulheres saudáveis (grupo controle) e 41 mulheres portadoras de fibromialgia. Para análise do polimorfismo, o DNA genômico foi coletado de cada voluntária a partir de bochechos com solução de glicose a 3%. O fragmento de interesse foi amplificado através da reação de polimerase em cadeia (PCR) e os alelos foram identificados usando a enzima de restrição específica DpnII por 1 hora a 37ºC. Baseado nas evidências geradas por estes trabalhos pode-se concluir que a DTM está frequentemente presente em pacientes portadores de FM; e que o polimorfismo 118A>G não está associado ao fenótipo de dor crônica em pacientes com desarranjos internos da articulação temporomandibular e em pacientes com fibromialgia / Abstract: Temporomandibular disorders (TMD) and fibromyalgia (FM) are characterized by chronic pain. Individual pain variability in these syndromes can be associated with individual changes in the complex system of reception of nociceptive stimuli, such as reduced ability in recruiting controls endogenous opioid pain inhibitors. The ?-opioid receptor (MOR) is encoded by the OPRM1 gene and it is the main target of exogenous and endogenous opioids able to mediate basal nociception. Mutation in OPRM1 such as single nucleotide polymorphism (SNP) 118A>G (rs1799971), promotes amino acid changes in the receptor protein, and can alter their expression. In the first paper we reviewed the literature in order to investigate the comorbidity between TMD and FM. In the following chapters, the SNP 118A>G in the ?-opioid receptor gene (OPRM1) was identified in symptomatic and asymptomatic subjects presenting temporomandibular joint internal disarrangement (TMJDI), fibromyalgia patients and healthy subjects, and was investigated whether the presence of the G allele is associated or not with chronic pain phenotype. In chapter 2 we performed a case-control study with 529 women who were divided into 3 groups: control (healthy women) (n=190); TMJ-ID without pain (n=164); TMJ-ID with chronic pain (n=175). In chapter 3, we selected 66 healthy women (control group) and 41 women with fibromyalgia. For polymorphism analysis, genomic DNA was collected from each volunteer from mouthwash solution of 3% glucose. The fragment of interest was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and alleles were identified using specific restriction enzyme DpnII for 1 hour at 37 ° C. Based on the evidences by these works, we concluded that TMD is often present in patients with FM; and that the polymorphism 118A>G is not associated with the phenotype of chronic pain in patients with internal derangements of the temporomandibular joint and in patients with fibromyalgia / Doutorado / Protese Dental / Doutora em Clínica Odontológica

Masters of Science / Genetic analysis for resistance to Woolly Apple Aphid in apple rootstock breeding populations MC Selala MSc Thesis, Department of Biotechnology, Faculty of Science, University of the WesternCape. The Woolly Apple Aphid (WAA) Eriosoma lanigerum (Hausm.) (Homoptera: Aphididae) is economically one of the most important pests in apple commercial production in the Western Cape province, South Africa. The apple cultivar Northern Spy possesses a single major gene (Er1) responsible for E. lanigerum resistance. This cultivar has been used as a commercial rootstock in apple breeding programmes. There are other genes also implicated in resistance to E. lanigerum from other cultivars. Manipulation and pyramiding of the E. lanigerum resistance genes (Er1, Er2 and Er3) might provide a necessary control for commercial apple production. The aim of this study was to construct a genetic linkage map for apple using microsatellite markers. The use of marker-assisted selection would greatly benefit local apple breeding programmes. Ninety six seedlings from a Northern Spy × Cox Orange Pippin mapping population were used for genetic linkage construction. Phenotypic data collection and analysis were performed to determine the E. lanigerum infestation patterns and the levels of resistance conferred by the Er1 gene from Northern Spy using 52 in vitro propagated seedlings in the greenhouse. Classification and quantification analysis showed association patterns between first assessments (30 days) to second assessment (60 days) in all replicate blocks. Roots and shoots data showed that it could be useful in quantitative trait loci (QTL) analysis, but may be used in different QTLs beingidentified due to the variations between roots and shoots data. A preliminary linkage map was constructed using a mapping population from Northern Spy × Cox Orange Pippin (96 seedlings).Fluorescently labelled published and predicted microsatellite markers were used in map construction. Primers were optimised using single apple cultivar and the detection of polymorphisms using nine apple cultivars. Optimised markers were multiplexed for high throughput data generation using the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. Multiplexed PCR products were pooled and analysed on an ABI 310 PRISM™ Genetic Analyser to determine allele fragment sizes, and the inherited segregation types in the seedlings. Computer software GenoTyper® 2.5.2 and JoinMap® 3.0 was used in data analysis from ABI 310 PRISM™Genetic Analyser and linkage map construction. Seventy two markers were used in linkage map construction, which produced nine linkage groups with some segments from the same linkage group. Twenty-one markers were aligned on the map 20 published and one predicted. Only one linkage group consisted of five markers while other linkage groups had two markers each. This study has proved that th preliminary linkage map could be used as the basis of a complete linkage map of Northern Spy × Cox Orange Pippin.