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Transformação de soja (Glycine max (L.) Merrill) com plasmídeos e cassetes gênicos contendo o gene chit1 de Metarhizium anisopliae visando a obtenção de plantas resistentes a doenças fúngicas

Petry, Debora Todt January 2009 (has links)
A soja é uma das espécies cultivadas de maior importância econômica para o Brasil, atualmente o segundo maior produtor mundial deste grão. Contudo, doenças causadas por fungos são um dos principais problemas enfrentados pelos produtores de soja, o que leva a grandes perdas. Uma das alternativas para superar este problema é a utilização de cultivares com resistência genética. Com este objetivo, foram realizados quatro experimentos independentes de transformação genética de soja, em que o gene chit1, que codifica uma quitinase, enzima capaz de degradar paredes fúngicas, foi transferido para culturas embriogênicas, através da metodologia de biobalística. O gene marcador hpt, que confere resistência ao antibiótico higromicina, também foi utilizado. Em três dos experimentos realizados, uma nova metodologia foi testada, em que sequências desnecessárias, presentes nos vetores de transformação, não são colocadas na planta, e sim apenas os cassetes gênicos, contendo regiões regulatórias e codificadoras. No 1° Experimento realizado, foram obtidas plantas transgênicas transformadas com plasmídeos, mas estas não produziram sementes. No 2° Experimento, foi obtida uma linhagem transgênica, oriunda da transformação com plasmídeos. Foi confirmada a presença e a expressão do gene de quitinase em uma planta T0. Esta planta gerou uma progênie de 16 plântulas. Destas, 10 foram analisadas por PCR e foi confirmada a transmissão do transgene marcador para seis plantas T1. Análises moleculares complementares são necessárias para a determinação do padrão de herança dos transgenes. Como resultado do 3º Experimento realizado, foram obtidos 3.298 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (2.804 oriundos da transformação com plasmídeos e 494 da transformação com cassetes) e 2.286 para a cultivar IAS (759 com plasmídeos e 1.527 com cassetes). Do 4º Experimento realizado, foram obtidos 1.339 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (1.312 oriundos da transformação com plasmídeos e 27 da transformação com cassetes) e 1.035 para a cultivar IAS5 (851 com plasmídeos e 184 com cassetes). Mesmo considerando a possibilidade de alguns dos embriões obtidos serem escapes à seleção, a resistência ao antibiótico é um forte indício de transformação estável. Já foram obtidos embriões germinados oriundos da transformação com cassetes, resultantes dos 3° e 4° Experimentos. Com a condição transgênica comprovada, será realizada uma comparação dos padrões de integração gerados por transformação com plasmídeos e cassetes gênicos. / Soybean is one of the most important crops in Brazil, which is nowadays the second world largest producer. However, injuries caused by fungus are one of the main problems faced by the producers, causing great losses. One of the possibilities to deal with this problem is the utilization of cultivars with genetic resistance. With this goal, four independent soybean transformation experiments were performed. A chitinase gene, chit1, which can break fungal cell walls, was transferred to soybean embryogenic cultures, through the use of biolistic. The selection marker gene hpt, which confers hygromycin resistance, was also transferred to the embryos. In three of the performed experiments, a new methodology was tested, where unnecessary sequences, that are part of the transformation vectors, were not introduced into the plant, but only the gene cassettes, which contain regulatory and coding sequences. In the first experiment, transgenic plants were obtained, but they left no progeny. In the second experiment, one transgenic line was obtained from the plasmid transformation. The presence and expression of the chitinase gene in one T0 plant was confirmed. 16 T1 plantlets were obtained. 10 were analyzed by PCR, and the transmission of the marker gene to six T1 plants was confirmed. Further molecular analyses are necessary in order to determine the inheritance pattern of the transgenes. As a result of the 3rd Experiment, 3.298 histodifferentiated embryos of the cultivar Bragg were obtained (2.804 from the plasmid transformation and 494 from the gene cassettes transformation) and 2.286 of the cultivar IAS (759 from the plasmid transformation and 1.527 from the gene cassettes transformation). From the 4th Experiment, 1.339 histodifferentiated embryos were obtained for cultivar Bragg (1.312 from the plasmid transformation and 27 from the cassettes) and 1.035 for IAS (851 from the plasmid transformation and 184 from the cassettes). Even considering the possibility that some of the embryos obtained may have escaped selection, the hygromycin resistance is a great indication of stable transformation. Plants transformed, resulting from the 3rd and 4th experiments, were already obtained with the minimal cassettes. Once their transgenic nature is proved, the patterns of integration of plasmid transformed plants and cassette transformed plants will be compared.
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Eventos embriogêncos em tecidos estaminais de Glycine max (L.) Merril

Rodrigues, Lia Rosane January 2004 (has links)
O cultivo de anteras de soja [Glycine max (L.) Merrill, 2n=40] iniciou na década de 1970 visando à obtenção de plantas androgenéticas haplóides e duplo-haplóides. Contudo, foram raras as ocasiões em que as condições de cultivo favoreceram o desenvolvimento embriogênico até a regeneração de plantas. No presente trabalho, pelo cultivo de anteras heterozigotas para um marcador molecular codominante, foi registrado que alguns genótipos segregantes originaram estruturas embriogênicas tanto a partir dos micrósporos quanto a partir dos tecidos diplóides da antera. Subseqüentemente, por meio de análises histológicas, foram registradas calogênese e embriogênese a partir do tecido conectivo, das camadas médias e da epiderme em anteras de quatro cultivares, sob as condições de cultivo até então recomendadas para desencadear androgênese. Estes eventos foram favorecidos pela presença do ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) e pela indução na luz. A constatação do potencial embriogênico do conectivo levantou a possibilidade de usar tecidos estaminais como uma nova fonte de explantes, a partir de indivíduos que já alcançaram a fase reprodutiva, quando a resposta morfogênica é considerada sem sucesso em soja. A formação de grãos de pólen multinucleados não foi uma resposta exclusiva ao cultivo: tanto o cultivo de anteras quanto o tratamento a 4oC aumentaram as freqüências de núcleos simétricos e extranumerários em grãos de pólen, incluindo núcleos com formato fragmentado. De forma geral, os resultados comprovaram que, nas condições recomendadas, o cultivo de anteras é um sistema limitado para desencadear androgênese em soja. Por isso, uma seqüência de testes foi conduzida para o estabelecimento in vitro de micrósporos isolados. Foi desenvolvida uma técnica de isolamento que permitiu a obtenção de suspensões de micrósporos viáveis com densidade adequada e, em seguida, o estabelecimento de cultivos. Nestes cultivos, foram testados os efeitos de meios nutritivos e de genótipos. A técnica desenvolvida será útil para futuros testes visando identificar fatores que desencadeiam androgênese em soja. Neste trabalho, foram identificadas limitações e potencialidades morfogênicas do cultivo de anteras de soja. Em conseqüência, é proposta uma nova abordagem ao estudo da androgênese, pelo cultivo de micrósporos e grãos de pólen isolados. / Soybean [Glycine max (L.) Merrill, 2n=40] anther culture began in the 1970’s in order to obtain haploids and double-haploids androgenic plants. However, only in rare occasions, culture conditions allowed embryogenic development to proceed as far as plant regeneration. In the present study, culturing heterozygous anthers to a codominant molecular marker, it was recorded that some segregating genotypes originated embryo-like structures from either microspores or anther diploid tissues. Subsequently, through histological analysis, it was recorded callogenesis and somatic embryogenesis from the connective, middle layer and epidermis in cultured anthers of four soybean cultivars, under culture conditions known to trigger an androgenic response. Morphogenic responses from anther walls and connective tissue was favoured by 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and induction under light. Embryogenic potential of the connective tissue provided the possibility of using staminal tissue as a new source of explants, from individuals that have reached the reproductive phase, when the morphogenic response has been considered unsuccessful in soybean. Multinucleate pollen grains formation was not an exclusive response to culture: both anther culture and 4oC treatment increased symmetrical and extra nuclei frequencies in pollen grains, including atypical extra nuclei with a fragmented shape. On the whole, results indicated that, under recommended conditions, anther culture is a limited system to trigger androgenesis in soybean. Thus, a sequence of tests was carried out aiming to establish isolated microspores in vitro. It was developed a technique that allowed to obtain viable microspores suspensions at appropriate density and, subsequently, to establish cultures. The effects of medium constitution and genotypes were tested. This technique may be useful for further studies aiming to identify factors that are important to stimulate soybean androgenesis. In this study, morphogenic limitations and potentialities of soybean anther culture were identified. In consequence, it is proposed a new approach to study androgenesis, through the culture of isolated microspores and pollen grains.
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Purificação e caracterização de uma proteína de semente de soja (Glycine max L. Merr): avaliação in vitro de atividade antiagregante plaquetária e anticoagulante

Cristina Cabral Silva, Mariana 31 January 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Uma nova proteína de semente de soja (Glycine max), denominada ApcSP (antiplatelet and anticoagulant soybean protein) foi isolada, purificada e caracterizada bioquimicamente. A partir de extratos brutos destas sementes, foi realizado um fracionamento com sulfato de amônio, obtendo-se a fração F0-60%, com posterior submissão à cromatografia de afinidade em coluna de Cramoll 1,4-Sepharose. As proteínas adsorvidas eluídas com NaCl 1,0 M em tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,0 foram submetidas à cromatografia de fase reversa HPLC. SDS-PAGE na presença de β-mercaptoetanol revelou uma banda polipeptídica de 51 kDa. Coloração com o reagente de Schiff revelou a natureza glicoprotéica de ApcSP. A seqüência do N-terminal obtido pela degradação de Edman foi EGQFGPMIQS (10 resíduos), que apresenta 20% de homologia com a proteína albumina 2S tipo 3. O espectro de dicroísmo circular foi característico de uma proteína predominantemente α-hélice, e este foi utilizado para estimar as contribuições das frações de estruturas secundárias presentes em ApcSP. Desconvolução usando o programa CDPro indicou a presença de 35% de alfa hélice, 17% de folhas-beta, 22 % de volta-beta e 26% de desordenada. O espectro de Fluorescência de ApcSP revelou uma emissão máxima em torno de 339 nm. A proteína da soja foi excitada em 280 nm e 295 nm, e os espectros de emissão foram monitorados na faixa de 290-450 nm e de 305-450 nm. Atividade peroxidásica foi detectada utilizando guaiacol e diaminobenzidina como substratos. Biologicamente, houve uma inibição da agregação plaquetária induzida por colágeno (100% de amplitude e 98% de slope), trombina (79% de amplitude e 77% de slope) e ADP (62% de amplitude e 58% de slope) na concentração de 2 μM de ApcSP em relação ao controle. Foi também avaliado o efeito da proteína de soja purificada nos tempos de coagulação, afetando as vias extrínseca e intrínseca da coagulação. O tempo de tromboplastina parcialmente ativada (TTPa) foi bloqueado na concentração de 3 e 4 μM, apresentando um R (Relação do tempo de coagulação com o tempo controle de coagulação) > 7,5. Estes resultados evidenciam que ApcSP com as atividades antiagregação plaquetária e anticoagulante pode ser de grande importância para a terapia anti-trombótica e anticoagulante
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Épocas de semeadura e de colheita e desempenho de sementes de soja no armazenamento. / Sowing and harvesting times and performance of soybean seeds in storage.

Seffrin, Joao Marcio 10 March 2017 (has links)
Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-03T14:37:24Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO CORRIGIDA - JOÃO MARCIO SEFFRIN - 06-04-2017.pdf: 1285353 bytes, checksum: 427d125bedd185678028f9f4d7f42a92 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-03T18:49:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO CORRIGIDA - JOÃO MARCIO SEFFRIN - 06-04-2017.pdf: 1285353 bytes, checksum: 427d125bedd185678028f9f4d7f42a92 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-03T18:50:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO CORRIGIDA - JOÃO MARCIO SEFFRIN - 06-04-2017.pdf: 1285353 bytes, checksum: 427d125bedd185678028f9f4d7f42a92 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-03T18:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO CORRIGIDA - JOÃO MARCIO SEFFRIN - 06-04-2017.pdf: 1285353 bytes, checksum: 427d125bedd185678028f9f4d7f42a92 (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / O trabalho teve por objetivo analisar os resultados provenientes do controle interno de qualidade de uma empresa de produção de sementes de soja, para identificar as épocas recomendadas para a semeadura e colheita. A análise de dados foi realizada na empresa Agro Santa Rosa S.A., localizada no município de Hernandárias, no Paraguai, com informações recolhidas em seis safras, sendo 2009/2010, 2010/2011, 2011/2012, 2012/2013, 2013/2014, 2014/2015. Para este estudo utilizaram-se sementes de quatro cultivares de soja, denominadas AAA, FFF, ABB, CBC, empregando-se os resultados de germinação em areia, em três fases distintas do processo, com amostras das sementes coletadas em silos, no momento do embolsado e no momento prévio à entrega ao cliente. Verificou-se que as sementes colhidas nos meses de abril e maio apresentaram qualidade superior no momento da distribuição aos clientes (a partir da segunda quinzena de agosto), em relação às sementes das colheitas realizadas nos meses de fevereiro, março e junho. / The objective of this work was to analyze the results from the internal quality control of a soybean production company, to identify the recommended times for sowing and harvest, aiming at the preservation of seed quality during storage. Data analysis was carried out at Agro Santa Rosa SA, located in the municipality of Hernandárias, Paraguay, with information collected in six harvests, being 2009/2010, 2010/2011, 2011/2012, 2012/2013, 2013/2014, 2014/2015. Seeds of four soybean cultivars, called AAA, FFF, ABB, CBC, were used for this study, using the results of sand germination in three different phases of the process, with samples of the seeds collected in silos at the time of And prior to delivery to the customer. It was verified that the seeds harvested in the months of April and May presented superior quality at the moment of distribution to the customers (from the second fortnight of August), in relation to the seeds of the harvests held in February, March and June.
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EFEITO IMEDIATO E LATENTE DA TEMPERATURA DO AR DE SECAGEM SOBRE A QUALIDADE FISIOLÓGICA E TECNOLÓGICA DE SEMENTES DE SOJA PRODUZIDAS NA SEGUNDA SAFRA / IMMEDIATE AND IMAGING EFFECT OF AIR TEMPERATURE DRYING ON PHYSIOLOGICAL QUALITY AND TECHNOLOGY OF SOYBEAN SEEDS PRODUCED IN SECOND HARVEST

Hartmann Filho, Cesar Pedro 27 February 2015 (has links)
Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-03-11T17:53:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) encrypted_HARTMANFILHO.pdf: 1300093 bytes, checksum: 3ccff16be2454529cca1d463cc4ddf40 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-11T17:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) encrypted_HARTMANFILHO.pdf: 1300093 bytes, checksum: 3ccff16be2454529cca1d463cc4ddf40 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / This study was conducted in order to determine the immediate effect and Latent different drying air temperatures on the physiological quality and technology of soybean seeds produced in the second crop. Were used soybean cultivar SYN 1059 RR (V-TOP) harvested close to maturity physiological, with a water content of approximately 23% b.u .. After harvesting, the Seeds were subjected to different drying temperatures (40, 50, 60, 70 and 80 ° C) to a water content of approximately 12.5% ​​± 0.7 B.U., and stored in metal containers, either at room temperature for 180 days. Every 45 days Subsequent both the physiological quality and technology were evaluated, but by particular parameters. To evaluate the physiological quality were tests to establish the viability and vigor of the studied material, as the germination test; first count; seedling length; mass dry matter of seedlings; cold test modified; accelerated aging test; electrical conductivity test and tetrazolium test. Already, with regard to quality technology, were verified the loss of dry matter; parameters related to color seeds; crude protein and lipid content, and the acid values ​​and peroxide of crude oil extracted from the same. Based on these results, it can be concluded that: a) increasing the drying air temperature influence the physiological quality and technology of soybean seeds, this effect being enhanced with time storage; b) both the viability and vigor in all quality tests physiological used were tiny as the increase of both factors; c) combined effect of different drying air temperatures and times storage technology reduced the quality of seeds and crude oil from these; d) the dried soybeans at 40 ° C, of ​​all tested were the ones with the best immediate performance drying and during storage front of all tests used. / O presente trabalho foi realizado com o objetivo de determinar o efeito imediato e latente de diferentes temperaturas do ar de secagem sobre a qualidade fisiológica e tecnológica de sementes de soja produzidas na segunda safra. Foram utilizadas sementes de soja da cultivar SYN 1059 RR (V-TOP), colhidas próximas à maturidade fisiológica, com teor de água de, aproximadamente, 23% b.u.. Após a colheita, as sementes foram submetidas a diferentes temperaturas de secagem (40, 50, 60, 70 e 80 °C) até um teor de água de, aproximadamente, 12,5 ± 0,7% b.u., e armazenadas em recipientes metálicos, em ambiente não controlado, durante 180 dias. A cada 45 dias subsequentes, tanto a qualidade fisiológica quanto a tecnológica eram avaliadas, porém por meio de parâmetros particulares. Para a avaliação da qualidade fisiológica foram realizados testes a fim de estabelecer a viabilidade e o vigor do material estudado, como: o teste de germinação; primeira contagem; comprimento de plântulas; massa da matéria seca de plântulas; teste de frio modificado; teste de envelhecimento acelerado; teste de condutividade elétrica e o teste de tetrazólio. Já, com relação à qualidade tecnológica, foram verificados a perda de matéria seca; parâmetros relacionados a cor das sementes; os teores de proteína bruta e de lipídios e, o índices de acidez e peróxido do óleo bruto extraído das mesmas. Com base nos resultados obtidos, pôde-se concluir que: a) o aumento da temperatura do ar de secagem influenciou a qualidade fisiológica e tecnológica das sementes de soja, sendo este efeito potencializado com o tempo de armazenamento; b) tanto a viabilidade como o vigor, em todos os testes de qualidade fisiológica utilizados, foram diminutos conforme o incremento de ambos fatores; c) o efeito combinado de diferentes temperaturas do ar de secagem e tempos de armazenamento reduziu a qualidade tecnológica das sementes e do óleo bruto proveniente dessas; d) as sementes de soja secas a 40 °C, dentre todas as testadas, foram as que apresentaram o melhor desempenho de imediato à secagem e durante o armazenamento frente a todos testes utilizados.
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EFEITOS DA INTER-RELAÇÃO ENTRE A PRESENÇA DE VISITANTES FLORAIS E A PRODUÇÃO NA CULTURA DA SOJA / EFFECTS OF THE INTER-RELATIONSHIP BETWEEN THE PRESENCE OF FLORAL VISITORS AND THE PRODUCTION IN SOYBEAN CULTURE

Oliveira, Fabíola de 24 March 2016 (has links)
Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2017-01-26T14:31:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FABIOLAOLIVEIRA.pdf: 431291 bytes, checksum: 82a24239c42fa12999401c0a57e08f92 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T14:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FABIOLAOLIVEIRA.pdf: 431291 bytes, checksum: 82a24239c42fa12999401c0a57e08f92 (MD5) Previous issue date: 2016-03-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The soybean crop (Glycine max (L.) Merrill) is of great importance in the world market, being one of the main agricultural commodities in Brazil, which occupies the second place in the world ranking of production. The cultivation of soybeans has occurred in many arthropod species, which often lead to a reduction in crop productivity or a reduction in the quality of seeds and grains and require the application of chemical insecticides. The harmful effects that insecticidal products can cause on pollination by entomophilic agents are of concern, which is currently considered to be essential for the production of the crop. In order to reduce the harmful effects on insect pollinators, the legal restriction of the use of insecticides in this crop has been motivated. The use of genetically modified plants resistant to pests has been widely adopted by farmers; These plants have one or more genes from the bacterium Bacillus thuringiensis (Berliner, 1915) (Bacillales: Bacillaceae) that encode lethal toxins for certain groups of insects. There are concerns about the unfamiliar effects associated with this technology in relation to non-target organisms, including floral visitors. The objective of this work was to investigate the composition and diversity of floral insect species and their population dynamics, evaluating their benefits for the production of soybean cultivars in Bt and non Bt cultivars. The collections of floral insects were carried out during the entire reproductive stage of the crop. Samplings were active with an entomological network for 15 minutes every hour, a total of 12 hours during the daytime period, with sampling every three or four days. It was also evaluated the effect of the presence of these floral visitors on the productivity of the crop. To do so, in each cultivar in the flowering period, 150 plants were randomly selected, composing 50 replicates (three plants per replicate), in which cages were placed in 25 replicates to prevent the presence of floral insects. A total of 549 specimens of floral insects were collected, divided into 30 families and 92 species. Of this total, 279 (50.81%) were present in the Bt cultivar and 270 (49.18%) in the non Bt cultivar. The most abundant species were Apis mellifera (Linnaeus, 1758) (Hymenoptera: Apidae) (35,15%), Musca sp.1 (Linnaeus, 1758) (10,01%) and Lagria villosa (Fabricius, 1783) (Coleoptera: Tenebrionidae) (5.28%), the composition of the species being very similar between the two cultivars, but in the tests of Shannon-Wiener and Simpson, showed greater diversity in the non-Bt cultivar (H = 1.30280; D = 0.86471) when compared to the Bt cultivar (H = 1.22871; D = 0.84557). There were differences in the number of specimens sampled in the four evaluations performed. In the third evaluation, the greatest number of species occurred, while the second evaluation participated with the lowest value of collected species. This is probably explained by the greater offer of floral resources to the visitors that occurred in the third evaluation. The schedules with the greatest richness of species was between 8:00 am and 11:00 am, this period of greater production of resources for floral visitors. When the population dynamics of A. mellifera were observed, this species had the highest occurrence in the hours between 10:00 a.m. and 2:00 p.m. In relation to the pollinator service performed by the pollinator insects, there was an increase in the weight of grains of the order of 84.22% in the open area with free presence of floral visitors in the production of the Intacta cultivar, and 202.52% in the non Bt cultivar. The increase in the number of pods was also considerable, since in the Bt cultivar this increase was of the order of 45.72% in the area open to floral visitors, and of the order of 101.25% in the non Bt cultivar, showing the important role of the visitors Floral for the production of this crop, even soy being a crop with a high index of self-pollination. In both cultivars there was greater grain yield and pods in the upper and middle thirds, corresponding to more than 80% of the plant production in these parts of the plants, this proportion is due to the greater production of reproductive structures in these places. The results obtained in this research demonstrate a great diversity of floral visiting insects in the soybean crop, regardless of whether the cultivar is transgenic with insect resistance or not. It is also evident that the presence of these insects, when in high abundance, causes a significant increase in crop production. / A cultura da soja (Glycine max (L.) Merrill) é de grande importância no mercado mundial, sendo uma das principais commodities agrícolas do Brasil, o qual ocupa o segundo lugar no ranking mundial de produção. O cultivo da soja tem ocorrência de muitas espécies de artrópodes que, frequentemente, ocasionam a redução na produtividade das lavouras, ou redução da qualidade das sementes e grãos e demandam a aplicação de inseticidas químicos. É preocupante os efeitos nocivos que os produtos inseticidas podem causar na polinização realizada por agentes entomófilos, o que, atualmente, vem sendo considerado essencial para a produção da cultura. Visando reduzir os efeitos danosos sobre insetos polinizadores, vem sendo motivada a restrição legal do uso de inseticidas nessa cultura. A utilização de plantas geneticamente modificadas resistentes às pragas vem sendo bastante adotada pelos agricultores; essas plantas possuem um ou mais genes da bactéria Bacillus thuringiensis (Berliner, 1915) (Bacillales: Bacillaceae) que codificam toxinas letais para determinados grupos de insetos. Existem preocupações sobre os desconhecidos efeitos associados a essa tecnologia em relação aos organismos não alvos, incluindo os visitantes florais. O objetivo desse trabalho foi o de investigar a composição e a diversidade de espécies de insetos visitantes florais e sua dinâmica populacional, avaliando seus benefícios para a produção da cultura de soja nas cultivares Bt e não Bt. Foram realizadas as coletas dos insetos visitantes florais durante todo o período de estádio reprodutivo da cultura. As amostragens foram de forma ativa com rede entomológica durante 15 minutos a cada hora, em total de 12 horas no período diurno, sendo feita uma amostragem a cada três ou quatro dias de intervalo. Também foi avaliado o efeito da presença desses visitantes florais sobre a produtividade da cultura. Para tanto, em cada cultivar no período de florescimento foram aleatoriamente escolhidas 150 plantas que compuseram 50 repetições (três plantas por repetição), nas quais foram colocadas gaiolas em 25 repetições para impedir a presença dos insetos visitantes florais. Foram coletados 549 espécimes de insetos visitantes florais, divididos em 30 famílias e 92 espécies. Desse total, 279 (50,81%) estavam presentes na cultivar Bt e 270 (49,18%) na cultivar não Bt. As espécies mais abundantes foram Apis mellifera (Linnaeus, 1758) (Hymenoptera: Apidae) (35,15%), Musca sp.1(Linnaeus, 1758) (Diptera: Muscidae) (10,01%) e Lagria villosa (Fabricius, 1783) (Coleoptera: Tenebrionidae) (5,28%), sendo a composição das espécies muito parecida entre as duas cultivares, mas, nos testes de Shannon-Wiener e Simpson, apresentou maior diversidade a cultivar não Bt (H=1,30280; D=0,86471) quando comparada com a cultivar Bt (H=1,22871; D=0,84557). Houve diferenças no número de espéces amostradas nas quatro avaliações realizadas. Na terceira avaliação ocorreu o maior número de espécies, enquanto a segunda avaliação participou com o menor valor de espécies coletadas. Isso, provavelmente, é explicado pela maior oferta de recursos florais para os visitantes ocorrido na terceira avaliação. Os horarios com a maior riqueza de espécies foi entre ás 8h00min e 11h00min, sendo esse período de maior produção de recursos para os visitantes florais. Quando observada a dinâmica populacional de A. mellifera, essa espécie apresentou maior ocorrência nos horários entre as 10h00min e 14h00min. Com relação ao serviço de polinização realizado pelos insetos polinizadores, houve um incremento no peso de grãos da ordem de 84,22% na área aberta com presença livre dos visitantes florais na produção da cultivar Intacta, e 202,52% na cultivar não Bt. Também foi considerável o aumento no número de vagens, pois na cultivar Bt esse aumento foi da ordem de 45,72% na área aberta aos visitantes florais, e da ordem de 101,25% na cultivar não Bt, mostrando o importante papel dos visitantes florais para produção dessa cultura, mesmo a soja sendo uma cultura com elevado índice de autopolinização. Em ambos as cultivares houve maior produção de grãos e vagens nos terços superiores e médios, correspondendo a mais de 80% da produção da planta nessas partes das plantas, essa proporção é devido a maior produção de estruturas reprodutivas nesses locais. Os resultados obtidos nesta pesquisa demonstram uma grande diversidade de insetos visitantes florais na cultura da soja, independente se a cultivar é transgênica com resistência a insetos, ou não. Também fica evidente que a presença desses insetos, quando em elevada abundância, ocasiona um significativo aumento na produção da cultura.
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Manganês e biorregulador em soja RR2 manejada com Glyphosate

Cantú, Carine 27 February 2018 (has links)
Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2018-06-13T00:16:06Z No. of bitstreams: 2 Carine_Cantu_2018.pdf: 977649 bytes, checksum: 41148d5ff61316392a5cc7795d616f39 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T00:16:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Carine_Cantu_2018.pdf: 977649 bytes, checksum: 41148d5ff61316392a5cc7795d616f39 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The cultivation of RR (Roundup Ready®) soybean has increased over the past few years and, as a result, changes regarding weed management have been evidenced, with emphasis on the intensification of glyphosate use. However, research results report that in some cases, the herbicide has caused phytotoxic effects on the soybean crop. Thus, the objective of this study was to evaluate the behavior of manganese and of the bioregulator in reversing possible damages caused by glyphosate herbicide in RR soybean. Two experiments were carried out during the 2016/17 crop in Palotina, PR. In the first experiment, the experimental design was a randomized block design in 5 x 4 factorial arrangement with 5 doses of glyphosate (0; 720; 1440; 2160 and 2880 g. e.a. ha-1) and 4 doses of manganese (0; 92,4; 184,8 and 369,6 g ha-1). Glyphosate and manganese were applied together via foliar at V4 stage. The variables evaluated were: chlorophyll index, plant height, insertion height of the first pod, number of pods, 1.000 grain mass and yield. The results showed the glyphosate effect in reducing the number of pods per plant due to the increase of herbicide doses. Regarding the foliar application of Mn, there was an increase in the number of pods per plant and consequently in yield. It was observed that an increase in Mn doses up to 261,64 g Mn ha-1 increased grain yield. In the second experiment, the experimental design was a randomized block design, in 5 x 4 factorial arrangement with 5 doses of glyphosate (0; 720; 1440; 2160 and 2880 g. e.a. ha-1) and 4 management (manganese application; bioregulator application; association of both; no application). The glyphosate, manganese and bioregulator were applied together via foliar at V4 stage. The evaluated variables were phytotoxicity symptoms and others described in the first experiment. Under the environmental conditions of this experiment and for the evaluated genotype, the application of glyphosate in the studied formulation, regardless of the dose used, presented very mild phytotoxicity symptoms in the RR soybean plants and the management applied (bioregulator and Mn) was not effective as phytotoxicant reversers. Therefore, phytotoxicity did not interfere in the evaluated agronomic characteristics and production components. Despite the results verified in these experiments, in general, the cultivar under study showed to be highly tolerant to glyphosate, considering that the herbicide had no effect on the vegetative and reproductive development of soybean plants to the point of reducing grain yield. It is highlighted the need for additional studies in order to evaluate other genotypes, locations and years/crop and to reassess the potential of using manganese and bioregulator in the management with glyphosate in RR2 soybean. / O cultivo da soja RR (Roundup Ready®) tem aumentado nos últimos anos, e em decorrência disso, mudanças no manejo das plantas daninhas têm sido evidenciadas, com destaque à intensificação do uso de glyphosate. Porém, relatos de agricultores apontam que em alguns casos o herbicida tem causado efeitos fitotóxicos na cultura da soja. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o comportamento do manganês (Mn) e do biorregulador na reversão dos possíveis danos causados pelo herbicida glyphosate na soja RR. Foram realizados dois experimentos na safra 2016/17 no município de Palotina, PR. No primeiro experimento o delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, em arranjo fatorial 5 x 4, sendo cinco doses de glyphosate (0; 720; 1440; 2160 e 2880 g. e.a. ha-1) e quatro doses de manganês (0; 92,4; 184,8 e 369,6 g ha-1). O glyphosate e o manganês foram aplicados em conjunto via foliar no estádio V4. As variáveis avaliadas foram: índice de clorofila, altura de plantas, altura de inserção da primeira vagem, número de vagens por planta, massa de mil grãos e produtividade. Os resultados obtidos demostraram efeito do glyphosate na redução do número de vagens por planta em função do aumento das doses do herbicida. Em relação à aplicação foliar de Mn, houve aumento do número de vagens por planta e da produtividade de grãos, verificando-se que o incremento das doses de Mn até a dose estimada de 261,64 g Mn ha-1, proporcionou aumento da produtividade. No segundo experimento o delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, em arranjo fatorial 5 x 4, sendo cinco doses de glyphosate (0, 720, 1440, 2160 e 2880 g. e.a. ha-1) e quatro manejos (aplicação de manganês; aplicação de biorregulador; associação de ambos; sem aplicação). O glyphosate, manganês e o biorregulador foram aplicados em conjunto via foliar no estádio V4. As variáveis avaliadas foram sintomas de fitointoxicação e as demais descritas no primeiro experimento. Nas condições ambientais deste experimento e para o genótipo avaliado, a aplicação de glyphosate na formulação estudada, independente da dose utilizada, apresentou sintomas de fitointoxicação nas plantas de soja RR e os manejos empregados (biorregulador e Mn) não se mostraram efetivamente como reversores da fitointoxicação. Portanto, a fitointoxicação não interferiu nas características agronômicas e nos componentes de produção avaliados. Apesar dos resultados verificados nesses experimentos, de modo geral a cultivar em estudo se mostrou altamente tolerante ao glyphosate, visto que, o herbicida não apresentou efeito no desenvolvimento vegetativo e reprodutivo das plantas de soja de tal modo a reduzir a produtividade de grãos. Ressalta-se a necessidade de estudos adicionais com o intuito de avaliar outros genótipos, locais e anos/safra de cultivo a fim de reavaliar o potencial de utilização do manganês e biorregulador no manejo com o glyphosate em soja soja RR2.
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Componentes de produção, produtividade, adaptabilidade e estabilidade fenotípica de materiais de soja no Paraná

Oliveira, Giovani Andreazza de 29 May 2018 (has links)
Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2018-07-26T21:28:24Z No. of bitstreams: 2 Giovani_Oliveira_2018.pdf: 1327190 bytes, checksum: f8ae7aa6265a16f3a4d20742542aa34c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-26T21:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Giovani_Oliveira_2018.pdf: 1327190 bytes, checksum: f8ae7aa6265a16f3a4d20742542aa34c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Due to the high investment required and the high phenotypic variability of soybean cultivars, experimental trials with the aim of identifying the genotypes with agronomic performance more responsive to different environments became essential in order to reduce the chances of obtaining poor results, which may make the activity unfeasible. Thus, this study was developed with the objective of evaluating the production components, the adaptability and phenotypic stability of soybean genotypes in Paraná. For this, experiments were conducted in the environments of Campo Mourão, Itaipulândia and Palotina - PR during the 2016/17 season. The experimental design consisted of randomized blocks, composed of 30 genotypes, in three replications, totaling 90 plots per environment. The variables evaluated were: plant height at maturity (APM), number of days for maturation (NDM), number of legumen per plant (NLPP), number of grains per plant (NGPP) and grain yield. The methodologies proposed by Eberhart and Russell and Lin and Binns were used to determine the adaptability and phenotypic stability of productivity. For the APM characteristic only the genotypes L.E.01 and M 5892 IPRO could lead to losses during the mechanized harvest when cultivated in Campo Mourão. The genotypes BMX ELITE RSF IPRO, DM 54I52 RSF IPRO and L.E.01, are among the earliest genotypes, and their cycle is classified as precocious or semi-precocious depending on the environment. NDM ranged from 101.7 to 127 days, 110 to 113.7 days and 80.7 to 140 days for Campo Mourão, Itaipulândia and Palotina respectively. Regarding the NLPP and NGPP characteristics for Campo Mourão, the material M 5892 IPRO consisted of the worst material for both characteristics. In Itaipulândia the variation corresponded between 29.5 to 61 legumen plant-1 and 83.1 to 181.9 plant-1 grains, being the genotypes classified in two groupings. In Pallotina the genotypes that presented the lowest NLPP also showed the lowest NGPP. Campo Mourão was the environment that presented the lowest average for grain yield, while in Palotina the best results were obtained. For the Pearson correlations, the NDM production component contributed the most to grain yield. The material L.E.01 always integrated the cluster with the lowest production averages in all environments evaluated. Based on the methodology proposed by Eberhart and Russel (1966), it was verified that 13 cultivars presented adaptability to favorable environments (ß1> 1) and 16 to unfavorable environments (ß1 <1), with only L.E.03 and NS 5445 showed R2 less than 80%. All evaluated genotypes showed significant regression deviation, that is, low phenotypic stability (S²d> 0). The methodology of Lin and Binns (1988) classified the BMX GARRA RSF IPRO genotypes, L.E. 02 and L.E. 04 as high stability and adapted to unfavorable environments, while the BMX genotypes TORNADO RSF IPRO, M 5947 IPRO and DM 61I59 RSF IPRO being low stability and adapted to favorable environments. / Em função do alto investimento necessário e da grande variabilidade fenotípica das cultivares de soja, a realização de ensaios experimentais com intuito de identificar os genótipos com desempenho agronômico mais responsivo a ambientes distintos tornou-se essencial, afim de reduzir as chances de obtenção de maus resultados, que possam inviabilizar o exercício da atividade. Assim, este estudo foi desenvolvido com o objetivo se avaliar os componentes de produção, a adaptabilidade e estabilidade fenotípica de genótipos de soja no Paraná. Para tanto foram conduzidos ensaios experimentais nos ambientes de Campo Mourão, Itaipulândia e Palotina – PR durante a safra 2016/17. O delineamento experimental adotado consistiu no de blocos casualizados, composto por 30 genótipos, em três repetições, totalizando 90 parcelas por ambiente. As variáveis avaliadas foram: altura de planta na maturação (APM), número de dias para maturação (NDM), número de legumes por planta (NLPP), número de grãos por planta (NGPP) e produtividade de grãos. As metodologias propostas por Eberhart e Russel e Lin e Binns foram utilizadas para a determinação da adaptabilidade e estabilidade fenotípica da produtividade. Para a característica APM somente os genótipos L.E.01 e M 5892 IPRO poderiam acarretar em percas durante a colheita mecanizada quando cultivados em Campo Mourão. Os genótipos BMX ELITE RSF IPRO, DM 54I52 RSF IPRO e L.E.01, estão entre os genótipos mais precoces, sendo seu ciclo classificado como precoce ou semiprecoce dependendo do ambiente. O NDM variou entre 101,7 a 127 dias, 110 a 113,7 dias e 80,7 a 140 dias para Campo Mourão, Itaipulândia e Palotina respectivamente. Com relação as características NLPP e NGPP para Campo Mourão o material M 5892 IPRO consistiu no pior material para ambas as características. Em Itaipulândia a variação correspondeu entre 29,5 a 61 legumes planta-1 e 83,1 a 181,9 grãos planta-1, sendo os genótipos classificados em dois agrupamentos. Já em Palotina os genótipos que apresentaram o menor NLPP também demonstraram o menor NGPP. Campo Mourão foi o ambiente que apresentou a menor média para produtividade de grãos, enquanto em Palotina foram obtidos os melhores resultados. Para as correlações de Pearson o componente de produção NDM foi o que mais contribuiu com a produtividade de grãos. O material L.E.01 sempre integrou o agrupamento com as menores médias produtivas em todos os ambientes avaliados. Com base na metodologia proposta por Eberhart e Russel (1966), verificou-se que 13 cultivares apresentaram adaptabilidade a ambientes favoráveis (ß1>1) e 16 a ambientes desfavoráveis (ß1<1), sendo que somente as cultivares L.E.03 e NS 5445 apresentaram R2 inferior a 80%. Todos os genótipos avaliados apresentaram desvio da regressão significativo, ou seja, baixa estabilidade fenotípica (S²d>0). Já a metodologia de Lin e Binns (1988) classificou os genótipos BMX GARRA RSF IPRO, L.E. 02 e L.E. 04 como de alta estabilidade e adaptados a ambientes desfavoráveis, enquanto os genótipos BMX TORNADO RSF IPRO, M 5947 IPRO e DM 61I59 RSF IPRO sendo baixa estabilidade e adaptados a ambientes favoráveis.
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Histopatologia de raízes de Mucuna pruriens (L.) DC infectadas pelo nematóide de cistos da soja, Heterodera glycines / Histopathology of Mucuna pruriens (L.) DC roots infected by the soybean cyst nematode, Heterodera glycines

Sanches, Jorge de Brito 14 August 2001 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-14T18:40:43Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1586098 bytes, checksum: af60433209d735ae2b5e600a6411b0bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-14T18:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1586098 bytes, checksum: af60433209d735ae2b5e600a6411b0bb (MD5) Previous issue date: 2001-08-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Entre os problemas fitossanitários da cultura da soja [Glycine max (L.) Merrill] no Brasil, o nematóide de cistos da soja (NCS) é responsável por grandes prejuízos econômicos. Devido à pouca disponibilidade de variedades de soja resistentes no País, o controle deste nematóide baseia-se principalmente na rotação de culturas com espécies não-hospedeiras tradicionalmente cultivadas ou utilizadas para adubação verde e cobertura do solo. Visando ampliar as informações sobre a utilização da espécie Mucuna pruriens no controle do NCS, foram conduzidos ensaios em casa de vegetação, para avaliar a penetração e o desenvolvimento de populações do nematóide identificadas como raças 2, 3, 4, 5 e 14 nas raízes das variedades pruriens (mucunas anã e rajada) e utilis (mucunas preta e cinza) e as alterações histológicas quando inoculadas com a raça 3 do nematóide. Observou-se a penetração dos juvenis de segundo estádio (J2) das diferentes raças do nematóide em todas as mucunas e o desenvolvimento destes até o terceiro (J3) e quarto estádios (J4). Todavia, estes dois últimos estádios de desenvolvimento foram encontrados em maior número nas raízes da soja ‘Doko RC’. As duas variedades de M. pruriens se comportaram como não- hospedeiras do nematóide, pois apenas três fêmeas se formaram nas raízes das plantas de mucunas rajada, anã e cinza (uma fêmea em uma das plantas) quando se inoculou a raça 4 e apenas uma fêmea em uma das plantas de mucuna-cinza quando se inoculou a raça 2. As alterações histológicas ocorridas em tecidos da raiz de mucuna indicaram a penetração intracelular pelos J2 do NCS, com danos mecânicos nas células do córtex devido ao rompimento de paredes. A formação de síncitos foi evidenciada, ocorrendo hipertrofia de células do córtex, da endoderme, do periciclo e do cilindro central. Citoplasma denso, vacúolos, núcleos hipertrofiados e aglomerados e paredes celulares hipertrofiadas sem rompidas a foram formação observados de um nos síncito síncitos. funcional e Células células desorganizadas e necrosadas próximas à região cefálica do nematóide indicaram reações de resistência da planta que impediram o seu desenvolvimento. Síncitos em degeneração associados a J4 que se desenvolveram em machos e regiões necrosadas sendo recuperadas pelo desenvolvimento de células do raio parenquimático foram também observados. / Heterodera glycines is currently the cause to account for the most serious economic losses in Brazilian soybeans. SCN-resistant soybean cultivars are hardly available in this country, thus the accepted means to achieve nematode control has been rotation in which widely cultivated non-host crops, or those used as green manure or cover crops, are used. Mucuna pruriens is a good prospect against the SCN, thus assays were carried out with this leguminous plant, under greenhouse conditions, to provide data on plant penetration by the races 2, 3, 4, 5 and 14 , how they develop inside roots of the pruriens and utilis varieties of M. pruriens, and on the anatomic root changes brought about by the race 3 of the nematode. Second stage juveniles (J2) penetrated the roots of both varieties, in which they developed into the third (J3) and fourth (J4) stages; nevertheless, the numbers of J3 and J4 individuals were much lower here than in ‘Doko-RC` soybean roots, used as the susceptible control. The M. pruriens varieties were ranked as non-host plants since only three female specimens, of the race 4, and one, of the race 2, were found in all examined roots. The anatomic changes found in root tissues indicate the intracelular penetration by J2 juveniles, because it shows a damaged cortex due to disruption of cell walls. Syncytial feeding sites were formed by hypertrophied cells in the cortex, endodermis, pericycle and the vascular cylinder. Dense cytoplasm, vacuolation, hypertrophied and clustered nuclei, in addition to disrupted cell walls, were also observed. The nematode failure to fully develop in the mucuna root tissues, the occurrence of hypertrophied root cells with no syncytium formation and disorganized and necrotic root cells near the nematode cephalic region are indications that mucuna root tissues are somewhat resistant to H. glycines race 3. Degenerated syncytia associated with the J4 bound to develop into males and necrotic regions being regenerated by parenchymatous ray cells were also found. / Tese importada do Alexandria
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Edição de RNA plastidial em Glycine max: caracterização de sítios de edição, componentes do editossomo e efeitos de estresse abiótico

Rodrigues, Nureyev Ferreira January 2018 (has links)
Soja, uma cultura conhecida por sua importância econômica e nutricional, tem sido objeto de vários estudos que avaliam o impacto e as respostas efetivas das plantas aos estresses abióticos. O estresse salino é um dos principais estresses ambientais e afeta negativamente o crescimento e o rendimento das culturas, incluindo a soja. A edição de RNA é um processo pelo qual as sequências de nucleotídeos podem ser alteradas, revertendo mutações que podem mudar as sequências de proteínas para manter suas funções conservadas. As proteínas pentatricopeptide repeat (PPRs) são trans-elementos de edição caracterizados por reconhecer cis-elementos específicos de RNA e realizar a reação de edição. Vários estudos descreveram estes trans-elementos e seus sítios de edição cognatos, mas nem todas as proteínas que compõem o complexo de edição foram identificadas. A perda de eventos de edição de plastídios, resultante de mutações em fatores de edição de RNA ou através de interferência por estresse, leva a alterações de desenvolvimento, de fisiologia e da fotossíntese. O objetivo do presente trabalho é caracterizar os sítios de edição e os fatores associados à edição de RNA em Glycine max e a influência de estresses abióticos no processo de edição de RNA em cloroplastos. No capítulo 1, um método é apresentado para triar a edição de RNA de cloroplasto usando bibliotecas públicas de sRNAs de Arabidopsis, soja e arroz. Entre os sítios de edição previstos, 40,57, 34,78 e 25,31% foram confirmados utilizando sRNAs de Arabidopsis, soja e arroz, respectivamente. A análise de SNPs revelou alterações de C-to-U de 58,2, 43,9 e 37,5% nas respectivas espécies e identificou conhecidas e possíveis novas edições de RNA de adenosina para inosina (A-to-I) em tRNAs. O método e os dados revelam o potencial do uso de sRNA como uma fonte confiável para identificar novos e confirmar sítios de edição conhecidos. No capítulo 2, o processo de edição de RNA foi avaliado em cloroplastos de plantas de soja sob estresse salino. A abordagem de bioinformática utilizando bibliotecas de sRNAs e mRNAs foi empregada para detectar sítios específicos que mostram diferenças na taxa de edição. RT-qPCR foi usado para medir a taxa de edição nos sítios selecionados. Observamos diferenças nas taxas de edição nos transcritos dos genes ndhA, ndhB, rps14 e rps16 ao comparar os dados das bibliotecas controle e das tratadas com NaCl. Os ensaios de RT-qPCR 9 demonstraram um aumento na edição dos genes selecionados. Esses aumentos podem ser uma resposta para manter a homeostase das funções das proteínas do cloroplasto em resposta ao estresse salino. No capítulo 3, para identificar os fatores relacionados aos sítios de edição analisados, sondas biotiniladas de RNA foram projetadas com base nos sítios de edição de RNA de plastídio de soja para realizar um isolamento proteico específico do fator de edição. Proteínas que interagiram com as sondas foram isoladas através da ligação das sondas à biotina e foram identificadas utilizando espectrometria de massa. Entre os peptídeos detectados, cinco corresponderam a proteínas PPR. A comparação dos genes de Arabidopsis com as proteínas PPR da soja permitiu a identificação dos homólogos mais próximos. O presente estudo representa a primeira identificação do conjunto de sítios de edição de RNA, de fatores associados aos sítios de edição de RNA e a caracterização dos efeitos do estresse abiótico na edição de RNA em Glycine max. / Soybean, a crop known by its economic and nutritional importance, has been the subject of several studies that assess the impact and the effective plant responses to abiotic stresses. Salt stress is one of the main environmental stresses and negatively impacts crop growth and yield. RNA editing is a process whereby nucleotide sequences can be altered, reverting mutations that could change protein sequences to maintain their conserved functions. Pentatricopeptide repeat proteins are editing trans-elements characterized by recognize specific RNA cis-elements and perform the editing reaction. Several studies have described these trans-elements and their cognate editing sites, but not all proteins that compose the editing complex were identified. The loss of plastid editing events, resulting from mutations in RNA editing factors or through stress interference, leads to developmental, physiological and photosynthetic alterations. The aim of the present work is to characterize the editing sites and factors associated with RNA editing in Glycine max and the influence of abiotic stresses on the process of RNA editing in chloroplasts. In chapter 1, a method is presented to screen chloroplast RNA editing using public sRNA libraries from Arabidopsis, soybean and rice. Among the predicted editing sites, 40.57, 34.78, and 25.31% were confirmed using sRNAs from Arabidopsis, soybean and rice, respectively. SNP analysis revealed 58.2, 43.9, and 37.5% new C-to-U changes in the respective species and identified known and new putative adenosine to inosine (A-to-I) RNA editing in tRNAs. The method and data reveal the potential of sRNA as a reliable source to identify new and confirm known editing sites. In chapter 2, RNA editing process was evaluated in the chloroplast of soybean plants under salt stress. Bioinformatics approach using sRNA and mRNA libraries was employed to detect specific sites showing differences in editing efficiency. RT-qPCR was used to measure editing efficiency at selected sites. We observed differences in ndhA, ndhB, rps14 and rps16 editing rates between control and salt-treated libraries. RT-qPCR assays demonstrated an increase in editing efficiency of selected genes. These increases can be a response to keep the homeostasis of chloroplast protein functions in response to NaCl stress. In chapter 3, to identify the trans-acting factors of editing sites analyzed, we have designed RNA biotinylated probes based in soybean plastid RNA editing sites to perform 11 specific isolation of proteins associated to editosomes. Proteins that interacted with the probes were isolated by binding the probes to biotin and were identified using mass spectrometry. Among the detected peptides, five corresponded to PPR proteins. Comparison of Arabidopsis genes to the soybean PPR proteins allow identification of the closest related homologs. The present study represents the first identification of RNA editing sites set, associated factors to RNA editing sites and characterization of effects from abiotic stress in RNA editing in Glycine max.

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