Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-24T17:41:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 335577 bytes, checksum: 2d865850ced27ebb4fc2f3c9f2452e96 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T17:41:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 335577 bytes, checksum: 2d865850ced27ebb4fc2f3c9f2452e96 (MD5) Previous issue date: 1998-12-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Avaliaram-se, em dois municípios da Zona da Mata de Minas Gerais, os efeitos das adubações nitrogenada e molíbdica sobre a cultura de soja (Glycine max (L.) Merrill). Quatro experimentos foram conduzidos em campo, sendo dois em Coimbra e dois em Viçosa. Neles, combinaram-se as doses de 0, 40, 80 e 120 kg/ha de N (aplicação em cobertura) com 0, 40, 80 e 120 g/ha de Mo (em aplicação foliar). Compararam-se também as aplicações de Mo nas folhas aos 27 dias após a emergência e nas sementes por ocasião do plantio. Os resultados mostraram que: 1) as adubações nitrogenada e molíbdica não afetaram o número de dias da emergência até o florescimento nem o grau de acamamento por ocasião da maturação; 2) de modo geral, tanto a aplicação de Mo como de N aumentaram o teor de N total nas folhas; 3) de modo geral, o índice de nitrato foi elevado mais pela adubação nitrogenada que pela molíbdica; 4) a altura das plantas aumentou tanto pela adubação molíbdica como, principalmente, pela nitrogenada; 5) a altura da primeira vagem aumentou com a adubação nitrogenada e diminuiu com a adubação molíbdica; 6) de modo geral, o “stand” final foi pouco afetado pela aplicação de N e Mo; 7) de modo geral, a adubação com N e, principalmente, com Mo foi favorável à produção; 8) o teor de proteína bruta nas sementes foi, geralmente, aumentado pela aplicação do Mo e, às vezes, pela do N; 9) a dose mais favorável de Mo em aplicação foliar variou de 80 a 100 g/ha, e 10) não ocorreram diferenças apreciáveis nas características quando a mesma dose do micronutriente foi pulverizada nas folhas ou aplicada às sementes por ocasião do plantio. / The effects of N and Mo applications were evaluated on soybean (Glycine max (L.) Merr.) cultivars grown in two Zona da Mata counties. Four field experiments were carried out, two in Coimbra and two in Viçosa, by using a combined dose of 0, 40, 80 and 120 kg/ha of side dressing N plus 0, 40, 80 and 120 g/ha of leaf Mo. Applications of Mo on the leaves at 27 days after emergence and on the seeds at planting were also compared. The results showed that: 1) N and Mo rates did not affect the number of emergence days up to flowering nor the degree of lodging at maturation; 2) overall, both Mo and N applications increased total leaf N content; 3) overall, nitrate index increased due rather to N application than to Mo; 4) plant height increased both due to Mo and, mainly, to N applications; 5) the first pod height increased with fertilizer N and decreased with Mo; 6) overall, the final stand was little affected by N and Mo applications; 7) overall, N, and mainly Mo application, showed to be favorable to yield; 8) crude protein content in seeds usually increased with Mo and, sometimes, N application; 9) the most favorable leaf Mo dose varied from 80 to 100 g/ha; 10) no significant differences were observed when the same dose of micronutrient was sprayed on the leaves or applied to the seeds at planting. / Não foi localizado o cpf do autor.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-04T16:46:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 269120 bytes, checksum: fe11755c45d4b417356de45ea1161c84 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T16:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 269120 bytes, checksum: fe11755c45d4b417356de45ea1161c84 (MD5) Previous issue date: 2002-04-19 / Fundação de Amparo a Pesquisa de Minas Gerais / O presente trabalho foi desenvolvido em áreas experimentais e no Laboratório de Sementes e Melhoramento Genético de Soja do Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal de Viçosa, em Viçosa e Capinópolis, Minas Gerais. Teve por objetivos avaliar a eficiência da aplicação de fungicida no controle de doenças de final de ciclo da soja, determinar a melhor época de aplicação do fungicida para o controle destas doenças e avaliar a qualidade fisiológica e sanitária de sementes. As aplicações do fungicida foram realizadas nos estádios R1, R2, R3, R4, R5, R6 e R7. As colheitas foram realizadas em 0, 5, 7, 14, 15, 21 e 30 dias após o estádio de maturação, R8. Avaliaram-se sementes de 4 cultivares e 5 linhagens. As sementes foram originadas de experimentos conduzido em Viçosa e Capinópolis, Minas Gerais. O experimento foi montado segundo um esquema de parcelas subdivididas, tendo nas parcelas as épocas de aplicação do fungicida e nas subparcelas as épocas de colheita no delineamento de blocos casualizados com quatro repetições. A severidade das doenças de final de ciclo foi avaliada utilizando uma escala de notas visuais para severidade das doenças. Várias características agronômicas foram avaliadas, dentre elas: altura de plantas, altura de inserção da primeira vagem, número de nós por planta, número de vagens por planta, peso total da planta, peso de cem sementes e peso total das sementes. A qualidade das sementes foi avaliada pelo teste de germinação, teste de emergência em leito de areia e teste de sanidade. As características agronômicas foram avaliadas através de medições e pesagens adequadas a cada característica avaliada. No teste de germinação, foram utilizados oito repetições de 50 sementes de cada tratamento. No teste de emergência em leito de areia, foram utilizados quatro repetições de 100 sementes de cada tratamento. No teste de sanidade utilizaram-se oito repetições de 25 sementes de cada tratamento, e foram avaliados os totais de fungos e de sementes infectados com Fusarium spp. O melhor controle de Septoria glycines foi obtido quando a aplicação do fungicida foi realizada no estádio R4. Para o controle de Cercospora kikuchii, a melhor época de aplicação do fungicida foi entre os estádios R2 a R5. Tendo como referência os resultados do teste de germinação, emegêrcia em leito de areia e teste de sanidade, para o cultivar UFV-18 (Patos de Minas), os melhores resultados, foram obtidos quando as aplicações de fungicida foram realizadas no estádio R6; e para o cultivar UFV-16 (Capinópolis), os melhores resultados foram obtidos quando as aplicações de fungicida foram realizadas no estádio R5,5. De maneira geral, Fusarium spp, foi o patógeno com maior incidência nas sementes em todos os experimentos. As sementes cujas colheitas foram realizadas mais próximas do ponto de maturação, estádio R8, apresentaram melhor qualidade fisiológica e sanitária, com maiores porcentagens de germinação e menor incidência de patógenos. De maneira geral, as sementes das plantas que receberam aplicação de fungicida, apresentaram melhores porcentagem de germinação e menor incidência de patógenos. / The present work was developed in an experimental area and in the Laboratório de Melhoramento de Soja of the Universidade Federal de Viçosa, in Viçosa and Capinópolis, Minas Gerais. It had as objectives to evaluate the efficiency of fungicide application in the control of soybean ending cycle diseases, to determine the best time for application of fungicide for the control of these diseases, and to evaluate the physiological and sanitary quality of the seeds. The applications of the fungicide were accomplished at the stadiums R1, R2, R3, R4, R5, R6 and R7. The crops were accomplished in 0, 5, 7, 14, 15, 21 and 30 days after the maturation stadium, R8. Seeds of four varieties and five lines were evaluated. The seeds were originated from experiments conducted in Viçosa and experimental in Capinópolis, design was Minas used with Gerais. four The randomized replicates. The blocks times of application of the fungicide constituted the treatments and the harvest times constituted the split-plot. It were evaluated the severity of the ending cycle diseases, several agronomic characteristics and were accomplished the germination standard-test, seedling emergence in sand bed and the sanity test. The severity of the ending cycle diseases was evaluated by the use of visual scale of notes. The agronomic characteristics were appraised through measurements and appropriate weightings to each appraised characteristic. In the germination test, it was used eight repetitions of 50 seeds of each treatment. In the germination standard-test, it was used eight replicates of 50 seeds of each treatment. In the test of seedling emergence in sand bed, it was used four replicates of 100 seeds of each treatment. In the sanity test, eight replicates of 25 seeds of each treatment were used, and it was counted the number of seeds infected with any fungus and the number of seeds infected with Fusarium spp. The best control of Septoria glycines was obtained when the application of the fungicide was accomplished at the stadium R4. For the control of Cercospora kikuchii, the best time for fungicide application was between the stadiums R2 and R5. For the variety UFV-18, the best results were obtained when the fungicide applications were accomplished at the stadium R6. For the variety UFV-16, the best results were obtained when the fungicide applications were accomplished at the stadium R5,5. In a general way, Fusarium spp., was the pathogen with the largest incidence in the seeds in all the experiments. Seeds in witch harvest were accomplished closer of the maturation point, presented better physiological and sanitary quality. In general way, the treatments that received fungicide application presented better germination percentage and smaller pathogen incidence. / Não foi localizado o currículo lattes do autor.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-21T17:11:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 37165737 bytes, checksum: 096a207c2cfa2885ea39469e0bb0658c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T17:11:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 37165737 bytes, checksum: 096a207c2cfa2885ea39469e0bb0658c (MD5) Previous issue date: 2003-06-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram instalados quatro experimentos em condições de campo para avaliar a disponibilidade de Zn, Mn, Cu e B para a cultura da soja em dois locais (Faz. Parnaíba e Faz. Agroserra) na região de Balsas, MA. O solo utilizado foi um Latossolo Vermelho-Amarelo, com textura argilosa na Faz. Agroserra e com textura média na Faz. Parnaíba. Cada experimento seguiu o esquema fatorial 6 x 6, disposto em blocos ao acaso com parcelas subdivididas e quatro repetições, onde as doses de calcário foram localizadas nas parcelas e as doses de cada micronutriente nas subparcelas. As doses de calcário foram calculadas por meio do metodo de saturação por bases, procurando atingir 30; 40; 50; 60; 70 e 80 %; as doses dos micronutrientes foram: Zn (0; 1,25; 2,5; 5; 10 e 15 kg/ha), Mn (0; 5; 10; 15; 30 e 60 kg/ha), Cu (0; 1,25; 2,5; 5; 10 e 20 kg/ha) e B (0; 0,5; 1; 1,5; 3 e 6 kg/ha). As doses de calcário e dos micronutrientes foram aplicadas em novembro de 1997; no entanto, em outubro de 2000 foi realizada a reaplicação de calcário nos experimentos. Foram avaliados os resultados obtidos nas safras 2000/01 e 2001/02; assim, na primeira safra após a reaplicação do calcário, avaliaram-se a produtividade e o teor dos micronutrientes no solo, ao passo que, na segunda safra, alem das variáveis analisadas no ano anterior, também foram avaliados a produção de matéria seca, o teor e o conteúdo de micronutrientes de toda a parte vegetativa e apenas das folhas da soja. A determinação dos teores de Zn, Mn e Cu no solo foi realizada com a solução extratora Mehlich-1 na safra 2000/01, e com as soluções extratoras Mehlich-1, Mehlich-3 e DTPA na safra seguinte; o B foi determinado utilizando o método da água quente em ambas as safras. Também foram determinados os teores de Zn, Mn, Cu e E nas amostras de fertilizantes e corretivos utilizados. Os resultados obtidos evidenciaram a baixa resposta a aplicação de Zn, Mn e B para a soja, uma vez que, a produção de grãos, na maioria das vezes, não foi influenciada pelas doses aplicadas, mesmo em saturações mais elevadas. No entanto, a resposta a aplicação de Cu ocorreu com maior frequência nos dois solos. Verificou-se, tambem, o maior potencial produtivo do solo textura média em relação ao argiloso. As taxas de recuperação de Zn, Mn e Cu no solo pelos extratores após cinco anos de cultivos foram baixas, principalmente, no solo argiloso. Para o B, não foi verificado efeito das doses no teor deste micronutriente no solo, evidenciando o baixo efeito residual da aplicação deste micronutriente. Os níveis críticos (NCs) de Zn pelo Mehlich-1, na safra 2000/01, oscilaram de 0,65 a 1,12 e de 1,80 a 1,48 mg/dmª, respectivamente para os solos textura média e argiloso. Para o Mehlich-3 e DTPA, na safra 2001/02, os NCs de Zn no solo argiloso foram de 0,52 e 0,34 mg/dm3. Os NCs de Mn pelo Mehlich-1, na safra 2000/01, foram de 7,63 e 8,74 mg/dmª, respectivamente, para o solo textura média e argiloso. No caso do Cu, os NCs para o solo textura média e argiloso, pelo Mehlich-1, foram 0,39 e 0,78 mg/dmª. Pelo Mehlich-3 e DTPA, os NCs de Cu foram respectivamente de 0,35 e 0,46 mg/dmª, no solo textura média, e de 0,56 e 0,84 mg/dmª, no argiloso. O DTPA foi mais eficiente em comparação aos demais para o Zn e Mn, principalmente no solo textura média; para o Cu os três metodos mostraram-se semelhantes em predizer o teor disponível deste micronutriente. A análise do calcário e dos fertilizantes evidenciou a possibilidade dos micronutrientes desses materiais contribuir para a nutrição da cultura da soja, reduzindo, assim, a probabilidade de resposta a aplicação de Zn, Mn, Cu e B. / To evaluate the availability of Zn, Mn, Cu and B for soybean crop four experiments were conducted under field conditions at two sites (Fazenda Parnaíba and Fazenda Agroserra) in the region of Balsas, Maranhão State. The experimental design was a 6 x 6 factorial layout in randomized blocks with subdivided plots in four replications on an Oxisol of clayey texture on the Faz. Agroserra, and of medium texture on the Faz. Parnaíba. Lime doses per plot and the doses of every micronutrient per subplot were established. The lime doses were calculated for the following base saturation levels: 30; 40; 50; 60; 70 , and 80 %. The micronutrient doses were: Zn (0; 1.25; 2.5; 5; 10, and 15 kg/ha), Mn (0; 5; 10; 15; 30, and 60 kg/ha), Cu (0; 1.25; 2.5; 5; 10, and 20 kg/ha) and B (0; 0.5; 1; 1.5; 3, and 6 kg/ha). Lime and mioronutrients were applied in November 1997, and lime reapplied in October 2000. The obtained results of the first harvest after lime reapplication were evaluated in relation to productivity and soil contents of micronutrients, while for the second harvest the same variables, besides dry matter yield, content and concentration of micronutrients in the entire vegetative part and in soybean leaves only were analyzed. Zinc, Mn, and Cu soil concentration were determined by the Mehlioh-1 extraction solution in the harvest 2000/01, and with the Mehlioh-1 , Mehlioh-3 and DTPA extraction solutions in the following. Boron was determined by the hot water method for both harvests. Zinc, Mn, Cu, and B concentration were also determined in samples of the applied fertilizers. Results suggested a low response of soybean to the application of Zn, Mn, and B since the grain yield was, for the most part, uninfluenced by the applied fertilizer doses, even at a higher saturation. There was, however, a more frequent response to Cu in both soils, as well as a higher production potential of the medium than the clayey texture soil. Recovery rates of Zn, Mn, and Cu from the soil by the extractants were low after five years of cultivation, mainly in the clayey soil. The residual effect of B application was low since no alteration was found in soil concentration of this micronutrient. The critical levels (CLs) of Zn established by Mehlich-1 for the harvest 2000/01 varied from 0.65 to 1.12 and from 1.80 to 1.48 mg/dm3, respectively, for the soils of medium and clayey texture. In the harvest 2001/02, the CLs of Zn by Mehlich-3 and DTPA in the clayey soil were 0.52 and 0.34 mg/dm3. In the harvest 2000/01, the CLs of Mn by Mehlich-1 were 7.63 and 8.74 mg/dm3, respectively, for the medium and clayey texture soils. In the case of Cu, CLs for the medium and clayey texture soils by Mehlich-1 were 0.39 and 0.78 mg/dm3. The CLs of Cu were 0.35 and 0.46 mg/dm3 by Mehlich-3 and DTPA, respectively, in the medium texture, and 0.56 and 0.84 mg/dm3 in the clayey soil. For Zn and Mn, DTPA proved to be more efficient than the other extractants, mainly in the medium texture soil, while all three methods proved to be similar in the prediction of the available Cu content. Results indicate that micronutrients of lime and fertilizers possibly contribute to the nutrition of the soybean crop, thus reducing the probability of a response to the application of Zn, Mn, Cu, and B.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-20T14:39:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 42093607 bytes, checksum: b1754f9c2a6102332d8f66139acf6f19 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-20T14:39:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 42093607 bytes, checksum: b1754f9c2a6102332d8f66139acf6f19 (MD5) Previous issue date: 1997-08-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivando avaliar o comportamento da soja [Glycine max (L.) Merrill], variedade Capinópolis, sol) estresse hídrico, foi conduzido um experimento de campo na área experimental Vila Chaves, na Universidade Federal de Viçosa. Neste experimento, foram estudadas as características da cultura em relação ao crescimento, a morfologia, ao acúmulo de matéria seca e a partição de fotoassimilados, em condições de estresse hídrico induzido durante os estádios vegetativo, de florescimento e de enchimento de grãos. As variações em crescimento, morfologia e partição de fotoassimilados foram pequenas, embora tenha havido uma nítida tendência a menor acúmulo de matéria seca nas plantas com deficiência hídrica. No entanto, a cultura mostrou-se capaz de recuperar do estresse hídrico, aplicado nas diferentes fases, quanto ao acúmulo de matéria seca. Foi, porém, mais sensível à deficiência de água na fase de florescimento. Foi analisado, ainda, o uso eficiente da água em condições de déficit hídrico. Os resultados mostraram diferentes respostas na eficiência de uso da água pela variedade, nos estádios fenológicos estudados. Quando a cultura esteve sob estresse hídrico, os valores do uso eficiente da água foram 0,41; 3,43; e 5,43 g de matéria seca acumulada, por quilograma de água evapotranspirada, para as fases vegetativa, de florescimento e de enchimento de grãos, respectivamente. A variedade Capinópolis mostrou capacidade de adaptação ao déficit hídrico. Nos tratamentos sob estresse hídrico nas fases de florescimento e enchimento de grãos, observaram-se aumentos de 60 e 100% no uso eficiente da água, respectivamente, em comparação com o tratamento irrigado durante todo o período. A produção de grãos foi pouco afetada, exceto para o tratamento não- irrigado durante todo o período experimental. / Aiming to evaluate the behavior of soybean crop [Glycine max (L.) Merrill], Capinópolis variety, under water stress, an experiment was carried out in the experimental area of Chaves Village at the Federal University of Viçosa. ln the experiment, the crop characteristics were studied in relation to growth, morphology, dry matter accumulation and photoassimilate partition under water stress conditions applied over the vegetative, flowering and grain filling stages. Variation on growth, morphology and photoassimilate partition were small, even though there was a clear tendency to a minor dry matter accumulation in plants with water deficit. However, the soybean crop showed to be able to recovering from the water stress applied at different phases, concerning to dry matter accumulation. But, it was more sensitive to water deficit during the flowering phase. lt was also analyzed the water use efficiency under water deficit conditions. The results showed different responses to the water efficient use by crop over the phenological stages under study. When cropping was under water stress, the values of water efficient use were 0.4], 3.43 and 5.43 g of accumulated dry matter, per kilogram of evaporated water, for the vegetative, flowering and grain filling phases, respectively. The soybean crop, Capinópolis variety, showed to be well adapted to water deficit. In the water stress experiments over the flowering and grain filling phases, it were observed a 60 and Io0% increase in the water efficient use, respectively, comparing to the treatment irrigated along all the period. Grain yield was somewhat little affected, except for non-irrigated cropping, over all the experimental period.

SOUSA, D. O. B. Soyatoxina-2 - uma nova toxina de sementes de soja: aspectos estruturais, do mecanismo de ação e efeitos biológicos. 2006. 160 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-25T17:26:09Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_dobsousa.pdf: 1161474 bytes, checksum: 270f28e9264a0910e54e2dbf9bc51c3e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-09T16:49:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_dobsousa.pdf: 1161474 bytes, checksum: 270f28e9264a0910e54e2dbf9bc51c3e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-09T16:49:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_dobsousa.pdf: 1161474 bytes, checksum: 270f28e9264a0910e54e2dbf9bc51c3e (MD5) Previous issue date: 2006 / Soyatoxin 2 (SYTX-2) is a toxic protein isolated from soybean seeds [Glycine max (L.) Merril], genotype BR-10, lethal to mice upon intraperitoneal injection (LD50 4.5 ± 0.1 mg/Kg body weight). The symptoms observed upon administration were pilloerection, tachycardia, paw and tail extending, diuresis and tonic-clonic convulsions prior to death. The SYTX-2 was purified from soybean crude extract by ammonium sulfate fractionation, ion-exchange (DEAE-cellulose), affinity (Sepharose-4B-trypsin) and gel filtration (Superdex 200HR 10/30) chromatography. Inclusion of 0.005 M dithiothreitol in the extracting and other buffers used during the purification process was crucial to obtain highly homogenous SYTX-2 and to preserve the toxicity. SYTX-2 is not a glycoprotein and has apparent molecular masses of 28.0 and 25.4 kDa as measured by SDS-PAGE and gel filtration in Superdex 200HR 10/30 column, respectively, and a molar extinction coefficient (ε1% 1cm) of 16.9. Its NH2-terminal sequence shows 75% identity with a class III acidic endochitinase from soybean seeds. Therefore, besides to its toxic properties, SYTX-2 presented chitinase activity of 1.34 nKat/mgP. This toxin, when in contact with the sciatic nerve of rats was able to increase the peak-to-peak amplitude, confirming its neurotoxic action. Moreover, SYTX-2 presented pro-inflammatory activity, inducing neutrophil migration into the peritoneal cavity of rats which peaked at 8 h after administration. Evaluation of its physiological role showed that SYTX-2 exerted negative effect on the development of the cowpea pest insect Callosobruchus maculates, particularly on adult emergence and in the mean larval development time. Additionally, SYTX-2 was toxic to Dysdercus peruvianus nymphs, as it caused reduction of both the body weight gain and survival rate. SYTX-2 also acted negatively on the root-knot nematode Meloidogyne incognita by hindering its mobility. On the other hand, SYTX-2 did not inhibit neither the spore germination nor the hyphal development of the phytopathogenic fungi Colletotrichum lindemuthianum, C. gloesporioides, Rhizoctonia solani, Cercospora kikuchii, Fusarium solani, F. oxysporum and Aspergillus niger, under the assay conditions carried out in this present work. In summary this study presents, for the first time, data on a neurotoxin protein with additional unusual chitinase activity, whose physiological role is likely related to the plant defense mechanisms. Accordingly, SYTX-2 possesses potential biotechnological application as a novel plant defensive agent against insect pests and parasitic nematodes. / Soyatoxina 2 (SYTX-2) é uma proteína tóxica isolada de sementes de soja [Glycine max (L.) Merril], genótipo BR-10, sendo letal para camundongos quando administrada por via intraperitoneal (DL50 4,5 ± 0,1 mg/Kg de peso corpóreo). Os sintomas observados após sua administração foram piloereção, taquicardia, estiramento de patas e da cauda, diurese e convulsões tônico-clônicas, que precederam a morte do animal. A SYTX-2 foi purificada do extrato bruto de soja por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografias de troca iônica (DEAE-celulose), de afinidade (Sepharose-4B-tripsina) e de filtração em gel (Superdex 200HR 10/30). A inclusão de ditiotreitol 0,005 M no tampão de extração e em outros tampões utilizados durante o processo de purificação foi crucial para obtenção da SYTX-2 num estado altamente homogêneo e preservação da toxicidade. A SYTX-2 não é uma glicoproteína e apresenta massa molecular aparente de 28,0 e 25,4 kDa, quando avaliada por PAGE-SDS e filtração em gel em coluna de Superdex 200HR 10/30, respectivamente, e coeficiente de extinção molar (ε1%1cm) de 16,9. Sua seqüência NH2-terminal exibiu uma identidade de 75%, quando relacionada com aquela de uma endoquitinase acídica da classe III de sementes de soja. Ao lado de sua atividade tóxica, a SYTX-2 apresentou atividade quitinásica de 1,34 nKat/mgP. Essa toxina, quando em contato com o nervo ciático de ratos foi capaz de aumentar a amplitude pico-a-pico, comprovando sua ação neurotóxica. A SYTX-2 também mostrou atividade pró-inflamatória, induzindo migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de ratos, cujo pico se deu 8 h após sua administração. Avaliação de seu papel fisiológico, mostrou que a SYTX-2 exerceu efeitos negativos sobre o desenvolvimento do inseto-peste de feijão-de-corda Callosobruchus maculatus, particularmente na emergência do adulto e no tempo médio de desenvolvimento larval. Adicionalmente, SYTX-2 foi tóxica para ninfas de Dysdercus peruvianus, causando redução no ganho de peso corpóreo e na taxa de sobrevivência. A SYTX-2 também atuou negativamente sobre o nematóide Meloidogyne incognita, impedindo sua mobilidade. Por outro lado, a SYTX-2 não foi capaz de inibir a germinação de esporos e nem o desenvolvimento de hifas dos fungos Colletotrichum lindemuthianum, C. gloesporioides, Rhizoctonia solani, Cercospora kikuchii, Fusarium solani, F. oxysporum e Aspergillus niger, nas condições de ensaio realizadas no presente trabalho. Em resumo, este trabalho apresenta, pela primeira vez, dados de uma proteína neurotóxica contendo uma atividade quitinásica não usual, cujo papel parece estar relacionado aos mecanismos de defesa da planta. Nesse contexto, SYTX-2 possui potencial para aplicação biotecnológica como um novo agente de defesa vegetal contra insetos-peste e nematóide-parasitas.

O cultivo de anteras de soja [Glycine max (L.) Merrill, 2n=40] iniciou na década de 1970 visando à obtenção de plantas androgenéticas haplóides e duplo-haplóides. Contudo, foram raras as ocasiões em que as condições de cultivo favoreceram o desenvolvimento embriogênico até a regeneração de plantas. No presente trabalho, pelo cultivo de anteras heterozigotas para um marcador molecular codominante, foi registrado que alguns genótipos segregantes originaram estruturas embriogênicas tanto a partir dos micrósporos quanto a partir dos tecidos diplóides da antera. Subseqüentemente, por meio de análises histológicas, foram registradas calogênese e embriogênese a partir do tecido conectivo, das camadas médias e da epiderme em anteras de quatro cultivares, sob as condições de cultivo até então recomendadas para desencadear androgênese. Estes eventos foram favorecidos pela presença do ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) e pela indução na luz. A constatação do potencial embriogênico do conectivo levantou a possibilidade de usar tecidos estaminais como uma nova fonte de explantes, a partir de indivíduos que já alcançaram a fase reprodutiva, quando a resposta morfogênica é considerada sem sucesso em soja. A formação de grãos de pólen multinucleados não foi uma resposta exclusiva ao cultivo: tanto o cultivo de anteras quanto o tratamento a 4oC aumentaram as freqüências de núcleos simétricos e extranumerários em grãos de pólen, incluindo núcleos com formato fragmentado. De forma geral, os resultados comprovaram que, nas condições recomendadas, o cultivo de anteras é um sistema limitado para desencadear androgênese em soja. Por isso, uma seqüência de testes foi conduzida para o estabelecimento in vitro de micrósporos isolados. Foi desenvolvida uma técnica de isolamento que permitiu a obtenção de suspensões de micrósporos viáveis com densidade adequada e, em seguida, o estabelecimento de cultivos. Nestes cultivos, foram testados os efeitos de meios nutritivos e de genótipos. A técnica desenvolvida será útil para futuros testes visando identificar fatores que desencadeiam androgênese em soja. Neste trabalho, foram identificadas limitações e potencialidades morfogênicas do cultivo de anteras de soja. Em conseqüência, é proposta uma nova abordagem ao estudo da androgênese, pelo cultivo de micrósporos e grãos de pólen isolados. / Soybean [Glycine max (L.) Merrill, 2n=40] anther culture began in the 1970’s in order to obtain haploids and double-haploids androgenic plants. However, only in rare occasions, culture conditions allowed embryogenic development to proceed as far as plant regeneration. In the present study, culturing heterozygous anthers to a codominant molecular marker, it was recorded that some segregating genotypes originated embryo-like structures from either microspores or anther diploid tissues. Subsequently, through histological analysis, it was recorded callogenesis and somatic embryogenesis from the connective, middle layer and epidermis in cultured anthers of four soybean cultivars, under culture conditions known to trigger an androgenic response. Morphogenic responses from anther walls and connective tissue was favoured by 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and induction under light. Embryogenic potential of the connective tissue provided the possibility of using staminal tissue as a new source of explants, from individuals that have reached the reproductive phase, when the morphogenic response has been considered unsuccessful in soybean. Multinucleate pollen grains formation was not an exclusive response to culture: both anther culture and 4oC treatment increased symmetrical and extra nuclei frequencies in pollen grains, including atypical extra nuclei with a fragmented shape. On the whole, results indicated that, under recommended conditions, anther culture is a limited system to trigger androgenesis in soybean. Thus, a sequence of tests was carried out aiming to establish isolated microspores in vitro. It was developed a technique that allowed to obtain viable microspores suspensions at appropriate density and, subsequently, to establish cultures. The effects of medium constitution and genotypes were tested. This technique may be useful for further studies aiming to identify factors that are important to stimulate soybean androgenesis. In this study, morphogenic limitations and potentialities of soybean anther culture were identified. In consequence, it is proposed a new approach to study androgenesis, through the culture of isolated microspores and pollen grains.

A atividade antiviral de compostos flavonoídicos tem sido amplamente investigada nos últimos anos. Nesse contexto, a primeira etapa da presente tese teve por objetivo avaliar a atividade anti-herpética in vitro dos principais isoflavonóides de Glycine max (soja): genisteína, daidzeína, gliciteína e cumestrol. Dentre os isoflavonóides investigados, a genisteína e o cumestrol mostraram uma interessante atividade frente aos vírus HSV-1 (cepa KOS e 29R, sensível e resistente ao aciclovir, respectivamente) e HSV-2 (cepa 333), interferindo em diferentes etapas do ciclo de replicação dos vírus. Devido à reduzida hidrossolubilidade desses isoflavonóides, foi proposta a sua incorporação em nanoemulsões de uso tópico. As formulações foram otimizadas através de um experimento fatorial completo do tipo 23 . O efeito dos fatores tipo de óleo (óleo de rícino ou miristato de isopropila), co-tensoativo iônico (oleilamina ou ácido olêico) e fosfolipídeo (DSPC ou DOPC) sobre as propriedades das nanoemulsões e a retenção da genisteína na pele de orelha suína foi investigado. Nanoemulsões compostas de miristato de isopropila/ oleilamina/DOPC apresentaram um menor diâmetro de gotícula e uma maior retenção de genisteína na pele de orelha suína enquanto que a combinação miristato de isopropila/oleilamina/DSPC mostrou o menor índice de polidispersão. A viscosidade das formulações selecionadas foi ajustada através do uso de hidroxietilcelulose visando à obtenção de produtos de uso tópico, obtendo-se hidrogéis de comportamento pseudoplástico. Na sequência, um conjunto de resultados obtidos demonstrou que a composição das formulações (especialmente o fosfolipídeo DOPC e o agente espessante hidroxietil celulose) pode influenciar a liberação e a retenção dos isoflavonóides em mucosa esofágica suína. A integridade da mucosa também desempenha um papel no aumento da permeação/retenção do cumestrol, conforme ilustrado nas imagens de microscopia confocal, utilizando vermelho do Nilo como marcador fluorescente. De maneira geral, a incorporação dos isoflavonóides nas nanoemulsões aumenta a atividade anti-herpética desses compostos in vitro. O conjunto dos resultados demonstra que as formulações desenvolvidas são potenciais carreadores de uso tópico para genisteína e cumestrol no tratamento das infecções herpéticas. / The antiviral activity of flavonoid compounds has been extensively investigated in recent years. In this context, the first step of this study was to evaluate the antiherpes activity in vitro of the main isoflavonoids of Glycine max (soybean): genistein, daidzein, glycitein and coumestrol. Among the investigated isoflavonoids, genistein and coumestrol showed interesting activity against HSV-1 (KOS and 29R strains, which are acyclovir-sensitive and acyclovir–resistant strains, respectively) and HSV-2 (333 strain), interfering at different stages of the virus replication cycle. Due to the low hydrosolubility of these isoflavonoids, their incorporation into topical nanoemulsions was proposed in this study. The formulations were optimized through a 23 full factorial design. The factors effect of oil type (castor oil or isopropyl myristate), ionic co-surfactant (oleylamine or oleic acid) and phospholipid type (DSPC or DOPC) on physicochemical properties and genistein retention into porcine ear skin was investigated. Nanoemulsions composed of isopropyl myristate/ DOPC/oleylamine showed the smaller particle size and higher genistein retention into skin, whereas the formulation composed of isopropyl myristate/DSPC/oleylamine exhibited the lower polydispersity index. The viscosity of selected formulations was adjusted with hydroxyethyl cellulose to obtain topical products, which showed nonNewtonian behavior. In sequence, a set of results showed that formulations composition (especially the phospholipid DOPC and the thickening agent hydroxyethyl cellulose) could influence the release and retention of isoflavonoids in porcine esophagus mucosa. The integrity of mucosa plays a role on the increase of coumestrol permeation/retention, according to confocal microscopy images, using Red Nile as fluorescent label. In general terms, the incorporation of isoflavonoids into nanoemulsions increases the antiherpes activity of these compounds in vitro. The overall results show that the formulations developed in this study are potential topical carriers for genistein and coumestrol in the treatment of herpes infections.

Soja, uma cultura conhecida por sua importância econômica e nutricional, tem sido objeto de vários estudos que avaliam o impacto e as respostas efetivas das plantas aos estresses abióticos. O estresse salino é um dos principais estresses ambientais e afeta negativamente o crescimento e o rendimento das culturas, incluindo a soja. A edição de RNA é um processo pelo qual as sequências de nucleotídeos podem ser alteradas, revertendo mutações que podem mudar as sequências de proteínas para manter suas funções conservadas. As proteínas pentatricopeptide repeat (PPRs) são trans-elementos de edição caracterizados por reconhecer cis-elementos específicos de RNA e realizar a reação de edição. Vários estudos descreveram estes trans-elementos e seus sítios de edição cognatos, mas nem todas as proteínas que compõem o complexo de edição foram identificadas. A perda de eventos de edição de plastídios, resultante de mutações em fatores de edição de RNA ou através de interferência por estresse, leva a alterações de desenvolvimento, de fisiologia e da fotossíntese. O objetivo do presente trabalho é caracterizar os sítios de edição e os fatores associados à edição de RNA em Glycine max e a influência de estresses abióticos no processo de edição de RNA em cloroplastos. No capítulo 1, um método é apresentado para triar a edição de RNA de cloroplasto usando bibliotecas públicas de sRNAs de Arabidopsis, soja e arroz. Entre os sítios de edição previstos, 40,57, 34,78 e 25,31% foram confirmados utilizando sRNAs de Arabidopsis, soja e arroz, respectivamente. A análise de SNPs revelou alterações de C-to-U de 58,2, 43,9 e 37,5% nas respectivas espécies e identificou conhecidas e possíveis novas edições de RNA de adenosina para inosina (A-to-I) em tRNAs. O método e os dados revelam o potencial do uso de sRNA como uma fonte confiável para identificar novos e confirmar sítios de edição conhecidos. No capítulo 2, o processo de edição de RNA foi avaliado em cloroplastos de plantas de soja sob estresse salino. A abordagem de bioinformática utilizando bibliotecas de sRNAs e mRNAs foi empregada para detectar sítios específicos que mostram diferenças na taxa de edição. RT-qPCR foi usado para medir a taxa de edição nos sítios selecionados. Observamos diferenças nas taxas de edição nos transcritos dos genes ndhA, ndhB, rps14 e rps16 ao comparar os dados das bibliotecas controle e das tratadas com NaCl. Os ensaios de RT-qPCR 9 demonstraram um aumento na edição dos genes selecionados. Esses aumentos podem ser uma resposta para manter a homeostase das funções das proteínas do cloroplasto em resposta ao estresse salino. No capítulo 3, para identificar os fatores relacionados aos sítios de edição analisados, sondas biotiniladas de RNA foram projetadas com base nos sítios de edição de RNA de plastídio de soja para realizar um isolamento proteico específico do fator de edição. Proteínas que interagiram com as sondas foram isoladas através da ligação das sondas à biotina e foram identificadas utilizando espectrometria de massa. Entre os peptídeos detectados, cinco corresponderam a proteínas PPR. A comparação dos genes de Arabidopsis com as proteínas PPR da soja permitiu a identificação dos homólogos mais próximos. O presente estudo representa a primeira identificação do conjunto de sítios de edição de RNA, de fatores associados aos sítios de edição de RNA e a caracterização dos efeitos do estresse abiótico na edição de RNA em Glycine max. / Soybean, a crop known by its economic and nutritional importance, has been the subject of several studies that assess the impact and the effective plant responses to abiotic stresses. Salt stress is one of the main environmental stresses and negatively impacts crop growth and yield. RNA editing is a process whereby nucleotide sequences can be altered, reverting mutations that could change protein sequences to maintain their conserved functions. Pentatricopeptide repeat proteins are editing trans-elements characterized by recognize specific RNA cis-elements and perform the editing reaction. Several studies have described these trans-elements and their cognate editing sites, but not all proteins that compose the editing complex were identified. The loss of plastid editing events, resulting from mutations in RNA editing factors or through stress interference, leads to developmental, physiological and photosynthetic alterations. The aim of the present work is to characterize the editing sites and factors associated with RNA editing in Glycine max and the influence of abiotic stresses on the process of RNA editing in chloroplasts. In chapter 1, a method is presented to screen chloroplast RNA editing using public sRNA libraries from Arabidopsis, soybean and rice. Among the predicted editing sites, 40.57, 34.78, and 25.31% were confirmed using sRNAs from Arabidopsis, soybean and rice, respectively. SNP analysis revealed 58.2, 43.9, and 37.5% new C-to-U changes in the respective species and identified known and new putative adenosine to inosine (A-to-I) RNA editing in tRNAs. The method and data reveal the potential of sRNA as a reliable source to identify new and confirm known editing sites. In chapter 2, RNA editing process was evaluated in the chloroplast of soybean plants under salt stress. Bioinformatics approach using sRNA and mRNA libraries was employed to detect specific sites showing differences in editing efficiency. RT-qPCR was used to measure editing efficiency at selected sites. We observed differences in ndhA, ndhB, rps14 and rps16 editing rates between control and salt-treated libraries. RT-qPCR assays demonstrated an increase in editing efficiency of selected genes. These increases can be a response to keep the homeostasis of chloroplast protein functions in response to NaCl stress. In chapter 3, to identify the trans-acting factors of editing sites analyzed, we have designed RNA biotinylated probes based in soybean plastid RNA editing sites to perform 11 specific isolation of proteins associated to editosomes. Proteins that interacted with the probes were isolated by binding the probes to biotin and were identified using mass spectrometry. Among the detected peptides, five corresponded to PPR proteins. Comparison of Arabidopsis genes to the soybean PPR proteins allow identification of the closest related homologs. The present study represents the first identification of RNA editing sites set, associated factors to RNA editing sites and characterization of effects from abiotic stress in RNA editing in Glycine max.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-25Bitstream added on 2014-06-13T20:54:10Z : No. of bitstreams: 1 demore_ps_me_jabo.pdf: 1002271 bytes, checksum: a27ac944079c717a8ba5366fe7e35456 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O oídio em soja, trata-se de uma doença praticamente presente em todos os paises produtores. Os marcadores moleculares microssatélites ou SSR (Simple Sequence Repeat) têm sido amplamente utilizados no processo de seleção assistida de genótipos de soja. Assim, o objetivo deste estudo foi obter marcadores microssatélites próximos ao gene de resistência ao oídio em soja. O estudo foi realizado em duas populações F2, oriundas de cruzamentos entre parentais contrastantes quanto à resistência ao oídio. Para o estudo, foram selecionados marcadores microssatélites a uma distância de até 42 cM ao redor do gene Rmd (resistência ao oídio). Utilizou-se o método de BSA (Bulked Segregant Analysis) na avaliação dos marcadores, para a comparação com a análise fenotípica das populações. Na análise foram utilizados dez iniciadores SSRs para as duas populações, sendo identificados quatro marcadores polimórficos para o cruzamento 1 (MGBR95-20937 x IAC-Foscarin 31) e três para o cruzamento 2 (MGBR 46/Conquista x EMBRAPA 48). Pela análise de Qui-quadrado da avaliação fenotípica, confirmou-se à segregação esperada (3:1) de um gene dominante condicionando a resistência. Os marcadores polimórficos também segregaram conforme o esperado (1:2:1) já que possuem natureza codominante. Para as populações 1 e 2, os melhores resultados foram obtidos com os marcadores Sat_366 e Sat_393, respectivamente, localizando-se a 9,41 e 12,45 cM de distância do gene, sendo considerados promissores na seleção assistida para resistência ao oidio em soja. / Powdery mildew in soybeans, it is a disease present in virtually all producing countries. The molecular markers microsatellites or SSR (Simple Sequence Repeat) have been widely used in the assisted selection of soybean genotypes. The objective of this study was to obtain microsatellites markers near the gene for resistance to powdery mildew in soybeans. The study was conducted in two populations F2, from crosses between contrasting parents about the resistance to powdery mildew. For the study, were selected microsatellites markers at a distance of 42 cM around the gene Rmd (resistance to powdery mildew). It was used the method of BSA (Bulked Segregant Analysis) in the evaluation of markers, for comparison with the phenotypic analysis of populations. In the analysis were used in ten initiators SSRs for the two populations, and identified four polymorphic markers for the crossing 1 (MGBR95-20937 x-IAC Foscarin 31) and three for the crossing 2 (EMBRAPA MGBR 46/Conquista x 48). For the analysis of chi-square of the phenotypic evaluation, it is confirmed the segregation expected (3:1) of a dominant gene conditioning the resistance. The polymorphic markers also segregation as expected (1:2:1) that have already codominante nature. For the populations 1 and 2, the best results were obtained with the markers Sat_366 and Sat_393, respectively, finding itself to 9.41 and 12.45 cM distance of the gene and are considered promising in assisted selection for resistance to soybean in powdery mildew.

A soja é uma das espécies cultivadas de maior importância econômica para o Brasil, atualmente o segundo maior produtor mundial deste grão. Contudo, doenças causadas por fungos são um dos principais problemas enfrentados pelos produtores de soja, o que leva a grandes perdas. Uma das alternativas para superar este problema é a utilização de cultivares com resistência genética. Com este objetivo, foram realizados quatro experimentos independentes de transformação genética de soja, em que o gene chit1, que codifica uma quitinase, enzima capaz de degradar paredes fúngicas, foi transferido para culturas embriogênicas, através da metodologia de biobalística. O gene marcador hpt, que confere resistência ao antibiótico higromicina, também foi utilizado. Em três dos experimentos realizados, uma nova metodologia foi testada, em que sequências desnecessárias, presentes nos vetores de transformação, não são colocadas na planta, e sim apenas os cassetes gênicos, contendo regiões regulatórias e codificadoras. No 1° Experimento realizado, foram obtidas plantas transgênicas transformadas com plasmídeos, mas estas não produziram sementes. No 2° Experimento, foi obtida uma linhagem transgênica, oriunda da transformação com plasmídeos. Foi confirmada a presença e a expressão do gene de quitinase em uma planta T0. Esta planta gerou uma progênie de 16 plântulas. Destas, 10 foram analisadas por PCR e foi confirmada a transmissão do transgene marcador para seis plantas T1. Análises moleculares complementares são necessárias para a determinação do padrão de herança dos transgenes. Como resultado do 3º Experimento realizado, foram obtidos 3.298 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (2.804 oriundos da transformação com plasmídeos e 494 da transformação com cassetes) e 2.286 para a cultivar IAS (759 com plasmídeos e 1.527 com cassetes). Do 4º Experimento realizado, foram obtidos 1.339 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (1.312 oriundos da transformação com plasmídeos e 27 da transformação com cassetes) e 1.035 para a cultivar IAS5 (851 com plasmídeos e 184 com cassetes). Mesmo considerando a possibilidade de alguns dos embriões obtidos serem escapes à seleção, a resistência ao antibiótico é um forte indício de transformação estável. Já foram obtidos embriões germinados oriundos da transformação com cassetes, resultantes dos 3° e 4° Experimentos. Com a condição transgênica comprovada, será realizada uma comparação dos padrões de integração gerados por transformação com plasmídeos e cassetes gênicos. / Soybean is one of the most important crops in Brazil, which is nowadays the second world largest producer. However, injuries caused by fungus are one of the main problems faced by the producers, causing great losses. One of the possibilities to deal with this problem is the utilization of cultivars with genetic resistance. With this goal, four independent soybean transformation experiments were performed. A chitinase gene, chit1, which can break fungal cell walls, was transferred to soybean embryogenic cultures, through the use of biolistic. The selection marker gene hpt, which confers hygromycin resistance, was also transferred to the embryos. In three of the performed experiments, a new methodology was tested, where unnecessary sequences, that are part of the transformation vectors, were not introduced into the plant, but only the gene cassettes, which contain regulatory and coding sequences. In the first experiment, transgenic plants were obtained, but they left no progeny. In the second experiment, one transgenic line was obtained from the plasmid transformation. The presence and expression of the chitinase gene in one T0 plant was confirmed. 16 T1 plantlets were obtained. 10 were analyzed by PCR, and the transmission of the marker gene to six T1 plants was confirmed. Further molecular analyses are necessary in order to determine the inheritance pattern of the transgenes. As a result of the 3rd Experiment, 3.298 histodifferentiated embryos of the cultivar Bragg were obtained (2.804 from the plasmid transformation and 494 from the gene cassettes transformation) and 2.286 of the cultivar IAS (759 from the plasmid transformation and 1.527 from the gene cassettes transformation). From the 4th Experiment, 1.339 histodifferentiated embryos were obtained for cultivar Bragg (1.312 from the plasmid transformation and 27 from the cassettes) and 1.035 for IAS (851 from the plasmid transformation and 184 from the cassettes). Even considering the possibility that some of the embryos obtained may have escaped selection, the hygromycin resistance is a great indication of stable transformation. Plants transformed, resulting from the 3rd and 4th experiments, were already obtained with the minimal cassettes. Once their transgenic nature is proved, the patterns of integration of plasmid transformed plants and cassette transformed plants will be compared.