Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-15Bitstream added on 2014-06-13T18:59:22Z : No. of bitstreams: 1 reis_ll_me_ilha.pdf: 689455 bytes, checksum: a31101bab836f9617f87a471bc0c86aa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mangabeira Hancornia speciosa Gomes, pertencente à família Apocynaceae, considerada uma frutífera nativa do Brasil e encontrada em várias regiões do país. A propagação via sementes é a mais utilizada, porém perdem o poder germinativo assim que são retiradas do fruto, em função de sua recalcitrância. A propagação vegetativa por meio da estaquia também não se consolidou, em função do baixo percentual de enraizamento. Desta forma essa pesquisa teve por objetivo aprimorar o conhecimento técnico-cientifico sobre a clonagem da mangabeira pelas técnicas da alporquia e micropropagação. O trabalho de propagação por alporquia foi realizado em um pomar de mangabeira, localizado na Fazenda de Ensino Pesquisa e Extensão – FEPE/UNESP, localizado no município de Selvíria-MS. Os experimentos de micropropagação in vitro foram realizados no Laboratório de Cultura de Tecidos-LCT da UNESP, Campus de Ilha Solteira-SP. O experimento de propagação vegetativa via técnica da alporquia, foi realizado em ramos semilenhosos, em plantas adultas de mangabeira. Após 95 dias, contabilizou-se o número de raízes, porcentagem de calejamento e enraizamento. Para o estabelecimento in vitro, os frutos foram coletados na FEPE/UNESP, no Município de Selvíria, MS. As sementes tiveram seus tegumentos removidos para facilitar a germinação e desinfestadas para inoculação em diferentes tipos de meio de cultura para determinação da influência das concentrações salinas sobre o desenvolvimento inicial de plântulas de mangabeira. Para o alongamento e multiplicação, microestacas de mangabeira foram subcultivadas em meio de cultura Wood Plant Medium (WPM) contendo 6-benzilaminopurina (BAP) em interação com ácido α- naftalenoacético (ANA), em diferentes concentrações. Ao final deste experimento foram contabilizadas principalmente a formação de multibrotações... / The mangabeira Hancornia speciosa Gomes, belonging to the family Apocynaceae, considered a fruit native to Brazil found in several regions of the country. The propagation of seeds is the most used, but lose their germinating power so they are removed from the fruit, because of their recalcitrance. Vegetative propagation by cuttings is also not consolidated, due to the low percentage of rooting. Therefore this research aimed to improve the technical and scientific knowledge about the cloning of mangabeira by layering and micropropagation techniques. The work of spreading by layering was performed in an orchard mangabeira in Fazenda Teaching Research and Extension - FEPE / UNESP, located in the municipality of Selviriaa-MS. The micropropagation in vitro experiments were performed at the Tissue Culture Laboratory of the LCT-UNESP, SP, Ilha Solteira-SP. The experiment of vegetative propagation through layering technique, was performed in semi-hardwood branches on adult plants of Hancornia speciosa Gomes. After 95 days, counted the number of roots, percentage of callus and roots. To establish in vitro, the fruits were collected in FEPE / UNESP, in the Selvíria, MS. The seeds had their coats removed to facilitate the germination and sterilized prior to inoculation in different types of culture medium to determine the influence of salt concentrations on the early development of seedlings of H. speciosa. For the elongation and multiplication, micro mangaba were subcultured in culture medium Wood Plant Medium (WPM) containing 6- benzylaminopurine (BAP) in interaction with α-naphthaleneacetic acid (NAA) in different concentrations. At the end of this experiment were mainly accounted for the formation of multibrotações and the rate of multiplication of the explants. For the rooting of microshoots Mangabeira, tested different concentrations of indol-3-butyric acid (IBA) in culture medium... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-29Bitstream added on 2014-06-13T19:00:33Z : No. of bitstreams: 1 costa_nv_dr_botfca.pdf: 6209330 bytes, checksum: 1063c009a39177d1456c9406b6eb80fa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da aplicação seqüencial de duas doses de trinexapac-ethyl sobre a anatomia foliar e a morfologia da planta das espécies de gramas São Carlos (Axonopus compressus), Batatais (Paspalum notatum), Santo Agostinho (Stenotaphrum secundatum) e Esmeralda (Zoysia japonica). Os tratamentos utilizados foram constituídos de duas aplicações seqüenciais de trinexapac-ethyl na dose de 56,5+56,5 e 113,0+113,0 g ha-1, além de uma testemunha sem aplicação, para cada espécie avaliada. Os gramados foram cortados com auxílio de um aparador de grama motorizado à altura de 3 cm e em seguida foram realizadas as aplicações dos tratamentos. Após 20 dias da primeira aplicação dos tratamentos, as parcelas foram novamente aparadas à altura de 3 cm e foi realizada a segunda aplicação dos tratamentos. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso com quatro repetições. A redução de crescimento foi avaliada através da medição direta da altura das plantas com régua graduada em centímetros. O número e altura de inflorescências emitidas foram avaliados por amostragem realizada em 0,25 m2 no centro das parcelas, semanalmente. Também foi amostrada a massa seca total produzida pelos tratamentos durante todo o período de condução do experimento. Aos 110 dias após a segunda aplicação dos tratamentos foram realizadas as amostragens do material foliar, para as quatro espécies estudadas. Com relação às estruturas presentes no limbo foliar, foram quantificados os seguintes caracteres anatômicos das regiões da nervura central e internervural: epiderme das faces adaxial e abaxial, feixe vascular, bainha do feixe vascular (=endoderme), esclerênquima, parênquima e espessura foliar. Foi também determinado, na região internervural, o número de feixes vasculares presentes na estrutura foliar, bem como realizada... / The aim of this research was to evaluate the effect of sequential application in two rates of trinexapac-ethyl in leaf anatomy and plant morphology of the following turfgrass species: Broadleaf Carpetgrass (Axonopus compressus), Bahiagrass (Paspalum notatum), St. Augustinegrass (Stenotaphrum secundatum) and Korean Lawngrass (Zoysia japonica). The treatments used were trinexapac-ethyl with two sprays applied with 20 days interval in two different rates (56,5+56,5 and 113,0+113,0 g ha-1) and a control without spraying, for each evaluated species. The turfgrasses were cut off with a motorized cutter of grass to the 3 cm height, and after the treatments were sprayed. 20 days after the first treatments application, the plots were cut again and the second application of treatments was made. The experimental design was completely randomized blocks with four replications. The growth reduction was evaluated through the direct measurement of the height of plants with a ruler graduated in centimeters. The number and height of emitted flowers had been evaluated by sampling carried through in 0,25 m2 in the plots center, weekly. The total dry matter produced by the treatments during the experimental period conduction was sampled. Samples of the foliar material from the four studied species were made at 110 days after second application. For anatomy characterizations were studied anatomic structure presented at leaf blade and the following structures were quantitative evaluated: adaxial and abaxial epidermal faces, vascular bundles (= endoderm), esclerenchyma, parenchyma and leaf thickness. Also the vascular beam number was determined in the internervural region presented in the leaf structure, as well as carried through the counting of the number of stomata of the faces adaxial and abaxial of the epidermis. The data of leaf anatomical characters and quantitative... (Complete abstract click electronic access below)

A broca da cana-de-açúcar Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) é uma das pragas mais prejudiciais aos canaviais brasileiros. Atualmente, o controle biológico aplicado é o método mais utilizado para o controle das lagartas. Entretanto, em certos talhões, o parasitóide Cotesia flavipes (Cameron) (Hymenoptera: Braconidae) não tem controlado eficientemente a praga, sendo registrada intensidade de infestação superior a 25%. Nesse contexto, a aplicação da Técnica do Inseto Estéril seria uma ferramenta adicional a ser empregada no Manejo Integrado de Pragas, pois é compatível com outros métodos de controle. A interferência na homeostase dos hormônios envolvidos no processo de ecdise com fontes exógenas de hormônio ou análogos sintéticos (agonistas ou antagonistas) pode resultar na interrupção do processo reprodutivo ou desenvolvimento anormal do embrião dos insetos. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de inseticidas do grupo dos reguladores de crescimento de insetos sobre a reprodução de D. saccharalis, fornecidos na forma de isca com atrativo alimentar em condições de laboratório. Foram testados os seguintes inseticidas: clorfluazurom (1,0 e 1,5 g i.a./L), diflubenzurom (3,75; 5,0 e 7,5 g i.a./L), flufenoxurom (1,0 g i.a./L), lufenurom (0,75; 1,0 e 2,0 g i.a./L), novalurom (0,5 e 1,0 g i.a./L) piriproxifem (1,0; 1,5; 1,8 e 2,0 g i.a./L) e teflubenzurom (1,5; 3,0 e 6,0 g i.a./L), fornecidos a mariposas com um dia de idade em algodão embebido com uma solução de melaço a 10%. Todos os tratamentos, com exceção da menor dosagem de lufenurom (0,75 g i.a./L) reduziram a produção de ovos em relação à testemunha. Flufenoxurom (1,00 g i.a./L) e clorfluazurom (1,50 g i.a./L) reduziram a longevidade de ambos os sexos tratados por ingestão; enquanto, lufenurom (2,0 g i.a./L), novalurom (1,0 g i.a./L) e teflubenzurom (3,0 g i.a./L) reduziram a sobrevivência apenas dos machos. Os tratamentos mais eficientes na esterilização foram piriproxifem (1,8 g i.a./L e 2,0 g i.a./L) e lufenurom (2,0 g i.a./L), apresentando eficiências superiores ou próximas a 80%. / The sugarcane borer Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) is an important pest in Brazilian sugarcane crops. Currently, biological control is the most frequently used method for controlling D saccharalis. However, in several locations, the parasitoid Cotesia flavipes (Cameron) (Hymenoptera: Braconidae) has not been efective for controlling this pest, and it has been recorded infestation intensity above 25%. In this context, the Sterile Insect Technique could be an addicional control method in Intregrated Pest Management, because it is compatible with other control methods. The use of insecticides that interferes in hormone homeostasis involved in the ecdyse´s process with exogenous hormone sources or synthetic analogues (agonists or antagonists) can result in the interruption of the reproductive process or abnormal development of the insect?s embryo. Then, the objective of this study was to evaluate the insecticides that regulates the insect growth on the D. saccharalis reproduction. The insecticides tested were: chlorfluazuron (1,0 and 1,5 g a.i./L), diflubenzuron (3,75; 5,0 and 7,5 g a.i./L), flufenoxuron (1,0 g a.i./L), lufenuron (0,75; 1,0 and 2,0 g a.i./L), novaluron (0,5 and 1,0 g a.i./L) pyriproxyfen (1,0; 1,5; 1,8 and 2,0 g a.i./L) and teflubenzuron (1,5; 3,0 and 6,0 g a.i./L). Each insecticide was provided to 1-day moths on soaked cotton with a sugar solution at 10% as a bait. All treatments, except to of the lowest concentration of lufenuron (0,75 g a.i./L) decreased the egg production in relation to the control. Flufenoxuron (1,00 g g a.i./L) and chlorfluazuron (1,50 g a.i./L) decreased the lifespan of both sexes treated by ingestion. Lufenuron (2,0 g a.i./L), novaluron (1,0 g a.i./L) and teflubenzuron (3,0 g a.i./L) decreased the male´s lifespan. The most effective treatments for sterilization were pyriproxyfen (1,8 g a.i./L and 2,0 g a.i./L) and lufenuron (2,0 g a.i./L), witch showed efficiencies greater or close to 80%.

O sorgo é uma planta monocotiledônea diplóide com ciclo de vida de aproximadamente quatro meses. Apresenta grande relevância na agricultura pela sua utilização tanto para a alimentação humana e de animais quanto para a produção de biocombustíveis. Recentemente, o sorgo também surge como um forte candidato como planta modelo em estudos genômicos e fisiológicos relacionados com parede celular de gramíneas C4. Porém, para a análise da função de genes nesta espécie é essencial o estabelecimento da tecnologia de transformação genética que por sua vez depende de um eficiente método de regeneração de plantas. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de cultura de tecidos utilizando discos de folhas e embriões imaturos como explantes, de modo a avaliar a redução do nível de oxidação na cultura in vitro pelo uso de antioxidantes e determinar as concentrações de reguladores vegetais para indução de embriogênese somática e regeneração de plantas. Em discos de folhas, os antioxidantes, PVP, ácido ascórbico e ác. cítrico foram testados na manipulação dos explantes até a inoculação em meio de cultura, porém não houve redução no nível de oxidação. Foram testados diferentes concentrações de 2,4-D para indução de calos e o uso de 1 mg L-1 e 2 mg L-1 apresentaram melhores respostas em embriogênese somática. Diferentes meios de cultura foram testados para obtenção de regeneração de plantas, mas a eficiência chegou somente a 1% de plantas a partir de discos de folhas. Em embriões imaturos, além dos antioxidantes PVP e ácido ascórbico, foram testados também os aminoácidos asparagina e prolina em meio de indução de calos. O uso de 2 g L-1 de asparagina e 3 g L-1 de prolina no meio de indução de calos e 3 mg L-1 de TDZ no meio de regeneração de plantas aumentou a eficiência de obtenção de plantas para até 15%. Assim, o uso de embriões imaturos foi considerado o explante mais promissor para a cultura de tecidos de sorgo. Devido aos altos níveis de oxidação e a baixa eficiência de regeneração de plantas em cultura de tecidos, foi testado o método de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens conhecido como \"Floral dip\". Esta técnica não necessita da etapa de regeneração de plantas in vitro. Inicialmente, resultados promissores foram obtidos, porém há a necessidade do aprimoramento da metodologia. / Sorghum is a diploid monocot plant with a short life cycle of about 4 months. This crop is important in agriculture because it can be used for animal and human feed, and as well as source of raw material for biofuel production. Recently, sorghum also emerges as a strong candidate being a model plant on genomic and physiological studies related to cell wall in C4 grasses. Nevertheless, an efficient plant regeneration method is required for the establishment of genetic transformation technique to conduct the characterization of functional genes. In this context, the objective of this work was to establish a tissue culture protocol to evaluate the oxidation level of in vitro culture using leaf discs and immature embryos as explants, and testing different antioxidants and hormones concentrations for somatic embryogenesis and plant regeneration. In leaf discs, PVP, ascorbic acid and citric acid antioxidants were tested when manipulating the explants until their inoculation in culture media, but these factors failed to show any reduction in oxidation. In order to obtain somatic embryogenesis different concentrations of 2,4-D were tested for callus induction, 1,0 and 2,0 mg L-1 showed the best results. Several plant regeneration medium were tested however, only up to 1% of regeneration was achieved using leaf discs. In immature embryos, besides PVP and ascorbic acid antioxidants also asparagine and proline amino acids were tested in the callus induction media. The use of 2 g L-1 asparagine and 3 g L-1 proline in callus induction media and 3 mg L-1 TDZ in the regeneration media improved shoot regeneration efficiency up to 15%. Thus, the use of immature embryos was considered as a better option as explant for tissue culture of sorghum. Due to high production of oxidation and low frequency of plant regeneration in tissue culture, the genetic transformation via Agrobacterium tumefaciens known as \"Floral Dip\" method was tested. This technique does not require in vitro plant regeneration. Preliminary results were obtained, but the methodology needs to be improved.

A cana-de-açúcar é uma monocotiledônea poliplóide, alógama que possui baixa taxa reprodutiva devido a dificuldade de florescimento. Devido estas características genéticas e fisiológicas os programas de melhoramento são longos e laboriosos. Alternativamente, modernas aplicações da biotecnologia visam contribuir com o desenvolvimento de novos cultivares. Neste trabalho estudou-se a metodologia de cultura de tecidos a partir de discos de folhas imaturas para o estabelecimento da cultura de calos embriogênicos e regeneração de plantas a partir dos calos embriogênicos e diretamente, a partir de folhas imaturas. O objetivo principal foi contribuir para o desenvolvimento de métodos eficientes para produção de plantas transgênicas a partir de calos e folhas imaturas, considerando-se a crescente necessidade de produção de novos cultivares com características agronômicas específicas. Diversas concentrações de 2,4-D e cinetina em meio MS foram testadas para o estabelecimento de calos altamente embriogênicos e para a indução da desdiferenciação celular nos discos foliares antecedendo a regeneração de plantas. Meios de cultura sem reguladores de crescimento (MS) e com a adição de BAP e ANA foram testados para a regeneração de plantas a partir de discos foliares. Calos embriogênicos com 12 a 20 semanas de cultivo produziram em média 3 a 5 plantas, em meio de regeneração MS. Folhas imaturas apresentaram elevado potencial de regeneração de plantas quando se utilizou 2,4-D em concentrações de 5 e 8 mg/L nos períodos de 5 e 8 dias no escuro. Houve indução a formação de embriões somáticos que resultaram em média 12 a 16 plantas por explante no período total de 7 a 10 semanas. Além disso, foi testado o pré-tratamento dos discos foliares em meio MS3K, contendo 2,4-D (3mg/L) e cinetina (0,1 mg/L), antes da transferência do discos para meio de regeneração MS. Os discos submetidos a este pré-tratamento durante 14, 21 e 28 dias apresentaram aumento significativo na eficiência de regeneração de plantas, variando em média de 41 a 50 plantas por disco foliar nas variedades RB835089 e RB855156. A redução no tempo para obtenção de plantas aliado ao aumento na média de plantas obtidas é a base para aumentar a eficiência de transformação genética de plantas. Experimentos de cotransformação dos genes neo e comt(AS), foram realizados por biolística. Em plantas regeneradas a partir de folhas imaturas da variedade RB835486, as análises de PCR confirmaram a incorporação do gene marcador neo em 57 e 90% das plantas em meio seletivo com geneticina (30 mg/L), sendo que a maior eficiência de regeneração de transgênicos (90%) foi obtida no pré-tratamento com o meio MS3K. Das plantas transgênicas para o gene neo, 7 e 38% também foram confirmadas para a incorporação do gene comt(AS). Nas plantas regeneradas a partir de calos embriogênicos em meio seletivo, as análises de PCR detectaram somente a incorporação do gene neo, o que ocorreu em 52% das plantas analisadas. Os resultados obtidos mostram que a cultura de discos de folhas imaturas para o processo de transformação genética por biolística é uma metodologia viável, rápida e menos onerosa, quando comparada com a cultura de calos embriogênicos. / Sugarcane is a polyploidy monocot and allogamous species that has low reproductive rate due to the difficulty of flowering. Because of these genetic and physiological characteristics breeding program takes long time and demand hard labor. Alternatively, modern biotechnology approaches contribute to the development of new cultivars. In this work we studied the methodology of plant tissue culture from immature leaf discs to establish callus culture and plant regeneration from those calli and from immature leaves, directly. The main objective was to contribute to the development of efficient methods to produce transgenic plants from callus and immature leaves, due to the growing need to produce new cultivars with specific agronomics traits. MS medium with different concentrations of 2,4-D and kinetin were tested to obtain highly embryogenic calli and to induce cellular dedifferentiation in the immature leaf discs prior to plant regeneration. Culture media without growth regulators (MS) and with the addition of BAP and NAA were tested for plant regeneration from leaf discs. Callus culture with 12 to 20 weeks resulted on average 3 to 5 plants on regeneration medium designed as MS. Immature leaves showed a high potential for plant regeneration when 2,4-D at concentrations of 5 and 8 mg/L in periods of 5 and 8 days in the dark. There were inducing of somatic embryos that resulted in average 12 to 16 plants per explant in the total period of 7 to 10 weeks. In addition, we tested the pre-treatment of leaf discs in MS3K medium which contain 2,4-D (3 mg/L) and kinetin (0.1 mg/L) before transfering to plant regeneration MS medium . The discs submitted to this pretreatment for 14, 21 and 28 days showed significant increase in the efficiency of plant regeneration, with on average of 41 to 50 plants per leaf disc in varieties RB835089 and RB855156. The reduction of time to obtain plants coupled with the increase of plants obtained is the basis for increasing the efficiency of plant genetic transformation. Co-transformation with genes neo and comt(AS), were performed by biolistics. Plants regenerated from immature leaves of the variety RB835486, PCR analysis confirmed the incorporation of the neo selection marker gene in 57 and 90% of the plants on selective medium with geneticin (30 mg/L), the higher efficiency of transgenic plants (90%) was obtained on pre-treatment in MS3K medium. Transgenic plants for the neo gene, 7 and 38% were also confirmed for the incorporation of comt (AS). PCR analysis of candidates transgenic plants from callus growing on selective medium, revelled only the insertion of the neo gene, which occurred in 52% of the analyzed plants. The results of this work showed that the approach of using immature leaf discs to obtain plant genetic transformation by biolistics methodology is a viable, cheaper and faster than using embryogenic callus.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_mirian_de_farias_ribeiro.pdf: 2449435 bytes, checksum: 6695d40137c267cf6058be71ba7803e7 (MD5) Previous issue date: 2013-03-28 / Pear orchards with high density planting were possible due to the use of rootstock quince (Cydonia oblonga Mill.), thus obtaining small plants and rapid fruiting, and provide uniformity to these orchards. Techniques that may improve the ability to propagation this rootstock are of great interest. The aim of this study was to adjust protocols for in vitro multiplication and regeneration of quince cultivars MC and Adams. The results of this word are presented in chapter. Material used in the experiments was obtained from in vitro propagation in culture medium consisting of MS salts and vitamins supplemented with myo-inositol (100 mg L-1), 6 - benzylaminopurine (BA) (0.3 mg L-1), sucrose (30 g L-1) and agar (8 g L-1). Chapter 1 we used MS medium added agar (8 g L-1) on solidified medium and vermiculite (3 g flask-1) in the liquid medium and the flasks were sealed with aluminum foil, PVC film and polypropylene cap. In Chapter 2 how carbon source in culture medium was added sucrose, fructose or sorbitol at concentrations 0, 15, 30, 45 and 60 g L-1. For in vitro regeneration the Chapter 3 was divided in two experiments. In experiment 1 the culture medium consisted of salts and vitamins MS and SH supplemented with myoinositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1), agar (8 g L-1), NAA (2 mM) and TDZ at concentrations 0, 1.5, 3, 4.5 and 6 μM. In experiment 2 the culture medium consisted of SH salts and vitamins supplemented with myo-inositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1), agar (8 g L-1), TDZ (0 , 1.5, 3, 4.5 and 6 μM) combined with NAA or IBA at concentrations of 0, 1.0, 1.5 and 2 μM. All experiments were evaluated after 60 days. Considering the results presented in Chapter 1 is possible to conclude that the use of culture medium solidified with agar and the flasks sealed with aluminum foil or polypropylene cap favored the in vitro multiplication of quince 'MC' and 'Adams'. In the second chapter it was found that the sucrose concentration of 45 g L-1 to cultivar MC and 30 g L-1 to cultivar Adams are the best concentrations and carbon source for in vitro multiplication quince. In the Chapter 3 first verified in experiment 1 that the in vitro regeneration of adventitious shoots quince cultivars MC and Adams was favored by the use of SH culture medium and addition of 4.5 μM TDZ to cultivar MC and 6 μM TDZ for cultivar Adams. And in experiment 2 it was concluded that multiple shoots were formed from the combination of 4.5 μM TDZ and 2 μM NAA for cultivar MC and 6 μM TDZ and 2 μM NAA to cultivar Adams. / Pomares de pereira com plantio em alta densidade foram possíveis devido a utilização de portaenxerto de marmeleiro (Cydonia oblonga Mill.), obtendo-se assim plantas de pequeno porte e rápida frutificação, além de proporcionar uniformidade a esses pomares. Técnicas que venham melhorar a capacidade de propagação deste portaenxerto são de grande interesse. O objetivo desse trabalho foi ajustar protocolos de multiplicação e regeneração in vitro de marmeleiro cultivares MC e Adams. Os resultados do trabalho estão apresentados na forma de capítulos. O material vegetal utilizado nos experimentos foi obtido a partir da multiplicação in vitro em meio de cultura básico composto dos sais e vitaminas MS, suplementados com mio-inositol (100 mg L-1), 6- benzilaminopurina (BAP) (0,3 mg L-1), sacarose (30 g L- 1) e ágar (8 g L-1). No capítulo 1, utilizou-se meio básico acrescentado de ágar (8 g L- 1) no meio solidificado e vermiculita (3 g frasco-1) no meio líquido e os frascos foram vedados com papel alumínio, filme PVC e tampa de polipropileno. No capítulo 2, como fonte de carbono no meio de cultura foi utilizado sacarose, frutose ou sorbitol nas concentrações de 0, 15, 30, 45 e 60 g L-1. Para regeneração in vitro o capítulo 3 foi dividido em dois experimentos. No experimento 1 os meios de cultura constituíram-se dos sais e vitaminas MS e SH, suplementados com mio-inositol (100 mg L-1), sacarose (30 g L-1), ágar (8 g L-1), ANA (2 μM) e TDZ nas concentrações de 0, 1,5, 3, 4,5 e 6 μM. No experimento 2 o meio de cultura constituiu-se dos sais e vitaminas SH, suplementado com mio-inositol (100 mg L-1), sacarose (30 g L-1), ágar (8 g L-1), TDZ (0, 1,5, 3, 4,5 e 6 μM) combinado com ANA ou AIB nas concentrações de 0; 1,0; 1,5 e 2 μM. Todos os experimentos foram avaliados após 60 dias. Diante dos resultados apresentados no capítulo 1 é possível concluir que a utilização de meio de cultura solidificado com ágar e os frascos vedados com papel alumínio ou tampa de polipropileno favorecem a multiplicação in vitro de marmeleiro 'MC' e 'Adams'. No capítulo 2 constatou-se que a sacarose na concentração de 45 g L-1 para cultivar MC e 30 g L-1 para cultivar Adams são as melhores concentrações e fonte de carbono para multiplicação in vitro dos portaenxertos de marmeleiro testados. No capítulo 3, primeiro verificou-se no experimento 1 que a regeneração in vitro de brotos adventícios de marmeleiro das cultivares MC e Adams foi favorecida pelo uso do meio de cultura SH e pela adição de 4,5 μM de TDZ para cultivar MC e 6 μM de TDZ para a cultivar Adams. No experimento 2 concluiu-se que houve maior taxa de regeneração a partir da combinação de 4,5 μM de TDZ e 2 μM de ANA para cultivar MC e 6 μM de TDZ e 2 μM de ANA para cultivar Adams.

Mimosa scabrella Benth. is a tree from Brazil, growing from Minas Gerais to Rio Grande do Sul. Its wood is used for energy like firewood and coal. The round wood is also very sought for props in civil architecture. Furthermore, since it is an aggressive pioneering species, its plantation is recommended for protection and recovering of weak and erosive soil. The Brazilian plantations of Mimosa scabrella Benth. present reduced productivity, which can be improved by the introduction of trees with larger diameter. The increase of the diameter can be obtained by the manipulation of the levels of vegetable hormones in the cells during the micropropagation. Aiming at contributing for this purpose, the overall goal of this work was to study the Mimosa scabrella Benth. in vitro regeneration considering isolated explants from germinated seeds. The surpassing of the seeds' quiescence was tested by mechanical scarification, immersion in water at environment temperature during 24 h, immersion in hot water (80ºC) during 5 minutes. The disinfestation consisted of the immersion of sodium hypochlorite to 2% during 5, 10 or 15 minutes and inoculation of the seeds in ½ MS or MS agent (Murashige & Skoog). Nodal segments cultivated in MS agent added of benzylaminopurine - BAP (0; 2,5; 5; 7,5 and 10 μM) and of alpha-aceticnaphtalene acid - ANA (0 and 2,2 μM), in the absence or in the presence of estreptomicine, were evaluated according to their multiplication in vitro. The mechanical scarification was the quiescence surpassing method which provided the largest germination percentage. The disinfestation with sodium hypochlorite at 2% during 10 minutes resulted in more than 60% of germinated seeds. The biggest in vitro germination of Mimosa scabrella Benth. s seeds was observed at ¼ MS dilution. In the absence of BAP, there was more formation of buds (1,39) and of leaves (1,62) per explant. There was not any contamination by bacteria in the absence of BAP, independently of the presence of estreptomicine. Calli were not formed in the absence of estreptomicine and of BAP. With the increase of BAP concentrations at the medium of culture, there was a reduction in the fenolic oxidation. For the in vitro multiplication of nodal segments of Mimosa scabrella Benth., it is not necessary to add either ANA or BAP. / A bracatinga (Mimosa scabrella Benth.) é uma árvore nativa do Brasil, ocorrendo desde Minas Gerais até o Rio Grande do Sul. A madeira é usada para energia como lenha e carvão. A madeira roliça é também muito procurada para escoras na construção civil. Além disso, como é uma espécie pioneira agressiva, seu plantio é recomendado para proteger e recuperar solos fracos e erodidos. Os bracatingais brasileiros apresentam reduzida produtividade, que pode ser melhorada pela introdução de árvores com maior diâmetro. O aumento do diâmetro pode ser obtido pela manipulação dos níveis de hormônios vegetais nas células durante a micropropagação. Com a finalidade de contribuir para esse propósito, neste trabalho, o objetivo geral foi estudar a regeneração in vitro da bracatinga por meio de explantes isolados a partir de sementes germinadas. A superação de dormência das sementes foi testada por escarificação mecânica, imersão em água à temperatura ambiente por 24 h, imersão em água quente (80ºC) por 5 minutos. A desinfestação consistiu da imersão em hipoclorito de sódio a 2% por 5, 10 ou 15 minutos e inoculação das sementes em meio ½ MS ou MS (Murashige & Skoog). Foi avaliada também a germinação sob diferentes concentrações do meio MS (1/8, ¼, ½ e integral). Segmentos nodais cultivados em meio MS acrescido de benzilaminopurina - BAP (0; 2,5; 5; 7,5 e 10 μM) e de ácido alfa naftalenoacético - ANA (0 e 2,2 μM), na ausência ou presença de estreptomicina, foram avaliados quanto à multiplicação in vitro. A escarificação mecânica foi o método de superação de dormência que proporcionou a maior porcentagem de germinação. A desinfestação com hipoclorito de sódio a 2% durante 10 minutos resultou em mais de 60% de sementes germinadas. A máxima germinação in vitro de sementes de bracatinga foi observada na diluição ¼ MS. Na ausência de BAP, houve maior formação de gemas (1,39) e de folhas (1,62) por explante. Não houve contaminação por bactérias na ausência de BAP, independente da presença de estreptomicina. Não foram formados calos na ausência de estreptomicina e de BAP. Com o aumento das concentrações de BAP no meio de cultura, houve uma redução na oxidação fenólica. Para a multiplicação in vitro de segmentos nodais de bracatinga, não é necessário adicionar ANA e BAP.

Técnicas de cultivo in vitro, associadas à criopreservação, são ferramentas importantes para conservação ex situ de espécies recalcitrantes. O objetivo deste trabalho foi o estudo da criopreservação no sistema A. angustifolia. Um protocolo de criopreservação para culturas celulares da espécie foi desenvolvido e os níveis de PAs, ABA e ROS, ao longo do protocolo, foram avaliados. Embriões zigóticos foram utilizados como modelo para o estudo de diferentes aspectos biofísicos do processo de criopreservação como a permeabilidade dos crioprotetores, a capacidade de resposta osmótica e congelamento, presença de água nos tecidos e a análise histológica da organização e aspectos das estruturas celulares, comparados ao controle, não resfriado. Os resultados deste trabalho permitiram uma melhor compreensão dos diferentes aspectos fisiológicos, bioquímicos e biofísicos durante a criopreservação, em espécies recalcitrantes, além da perspectiva de estabelecimento de bancos de germoplasma ex situ de culturas celulares de A. angustifolia. / The aim of this work was the study of cryopreservation A. angustifolia plant systems. A protocol for cryopreservation of A. angustifolia cell cultures was developed based on optimum DMSO concentration. It was observed that cells exposed to cryoprotectants showed lower levels of PAs, ABA and ROS compared to cells that were not exposed to them. Two low molecular weight bands could be observed more intensely stained only in the cells that were exposed to the cryoprotectant. The zygotic embryos were used as a model to study different aspects of the biophysical process of cryopreservation such as the permeability of cryoprotectants, osmotic and response characteristics of water freezing in tissue. The results of this work led to a better understanding of different physiological, biochemical and biophysical factors during cryopreservation in recalcitrant species and open perspective to the establishment of the ex situ conservation of A. angustifolia.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2016-09-28T21:50:56Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o_Jessica_Coelho_Valerianoatual.pdf: 1739335 bytes, checksum: 6ad29bd975f2995c8c9a68ceee755a5b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T21:50:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o_Jessica_Coelho_Valerianoatual.pdf: 1739335 bytes, checksum: 6ad29bd975f2995c8c9a68ceee755a5b (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Schinopsis brasiliensis Engl. and Pseudobombax simplicifolium A. Robins are species widely distributed in the Brazilian semiarid. The pressure on the genetic resources from Caatinga biome, mainly medicinal and for wood, caused by subsistence or commercial use, leads to reduce genetic variability of these species. Based on that, the cytogenetic and the tissue culture can support the characterization and propagation strategies of their populations. The research goals of this study were evaluate growth regulators and culture media effects on the establishment and in vitro micropropagation for the species, and the use of fluorochromes CMA3/DAPI in the cytogenetic characterization of P. simplicifolium. For P. simplicifolium it was evaluated different DKW ingredient concentration, added or not activated charcoal and different concentration of BAP and IBA on the establishment and in vitro multiplication of the species. For S. brasiliensis, it was evaluated the micropropagation media DKW and WPM (with different concentration of BAP and IBA) and the use of activated charcoal and polyvinylpyrrolidone to reduce the oxidation during establishment of in vitro cultivation of the species. In S. brasiliensis, the addition of BAP in the micropropagation media did not promote in vitro multiplication of the species. In P. simplicifolium, the results obtained for variables studied varied depending on the regulators concentrations and among genotypes. Concentrations above 4.92 and 6.64 ?M.L-1 AIB inhibited the multiplication in vitro in both species. The double staining CMA3/DAPI allowed the visualization of 2n = 84 chromosomes and different numbers of CMA+ blocks in the genotypes of P. simplicifolium. / As esp?cies Schinopsis brasiliensis Engl. e Pseudocombax simplicifolium A. Robins encontram-se amplamente distribu?das no semi?rido brasileiro. A press?o sobre os recursos gen?ticos do bioma caatinga, principalmente, medicinal e madeireiro, seja devido ao uso para subsist?ncia ou comercial, tem levado ? perda da variabilidade gen?tica destas esp?cies. Em vista a isto, a cultura de tecidos e a citogen?tica podem auxiliar nas estrat?gias de caracteriza??o e propaga??o de suas popula??es. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de reguladores de crescimento e meios de cultura no estabelecimento e multiplica??o in vitro das duas esp?cies, bem como o uso dos fluorocromos CMA3/DAPI na caracteriza??o citogen?tica do imbiru?u. Em P. simplicifolium, avaliou-se diferentes concentra??es dos sais DKW, acrescidos ou n?o com carv?o ativado e diferentes concentra??es de BAP e AIB no estabelecimento e multiplica??o da esp?cie. Em S. brasiliensis, avaliou-se os meios DKW e WPM e o uso do carv?o ativado e da polivinilpirrolidona na redu??o da oxida??o, e o efeito de diferentes concentra??es de BAP e AIB no meio WPM no estabelecimento do cultivo in vitro da esp?cie. Em S. brasiliensis, a adi??o de BAP ao meio de cultura n?o favoreceu a multiplica??o in vitro da esp?cie. Em P. simplicifolium as respostas para as vari?veis estudadas variaram em fun??o das concentra??es dos reguladores e entre os gen?tipos da esp?cie. Concentra??es acima de 4,92 e 6,64 ?M.L-1 de AIB inibiram a multiplica??o in vitro em ambas esp?cies. A dupla colora??o CMA3/DAPI permitiu a visualiza??o de 2n= 84 cromossomos e diferentes n?meros de blocos CMA+ nos gen?tipos estudados de P. simplicifolium.

Orientador: Elizabeth Orika Ono / Resumo: O tomateiro é uma hortaliça de importância econômica e sua produção está relacionada, principalmente, à utilização de produtos químicos, podendo ser reguladores vegetais como as poliaminas e nesse estudo, foi avaliada a ação da putrescina (Put). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as respostas fisiológicas do tomateiro à putrescina na redução dos efeitos de estresse hídrico. Para tanto, foram conduzidos dois experimentos em delineamento inteiramente ao acaso (DIC) em esquema fatorial 2 x 4, plantas com e sem deficiência hídrica e quatro doses de putrescina (Put 0, 4, 8 e 12μM), com quatro repetições cada. As doses foram aplicadas via foliar na cultura no momento de submissão do tomateiro ao estresse hídrico, sendo esse no terceiro racemo de flores de cada experimento. O efeito das doses do produto foi avaliado por análises biométricas, bioquímicas de folhas, produtivas e físico/químicas dos frutos pós-colheita. Os resultados obtidos apresentaram maior atividade da putrescina na dose de 12 μM em plantas nos dois experimentos realizados. / Abstract: The tomato is a vegetable of economic importance and its production is available, mainly, to the use of chemical products, which can be plant regulators such as polyamines and, in this study, it was evaluated in a putrescine action (Put). Thus, the objective of this work was to evaluate the borrower's physiological responses to putrescine in reducing the effects of water stress. For this purpose, two experiments were conducted in outdoor design (DIC) in a 2 x 4 factorial scheme, plants with and without hydric and four doses of putrescine (Put 0, 4, 8 and 12μM), with four replicates each. As the doses were applied via leaf culture at the time of the borrower's submission to water stress, this being the third flower motif of each experiment. The effect of product doses was evaluated by biometric, biochemical leaf, productive and physical / chemical analysis of post-harvest fruits. The results obtained showed greater putrescine activity at a dose of 12 μM in plants in the two experiments performed. / Mestre