Made available in DSpace on 2014-08-20T14:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_mateus_silveira_pasa.pdf: 859976 bytes, checksum: f2ff90aef57af32f1bbedd20e9ba4218 (MD5) Previous issue date: 2014-01-17 / Excessive vegetative growth is a major concern among pear growers because it results in serious negative effects in the orchard, such as increased pruning costs, shading of the inner parts of the canopy, poor fruit quality and difficult pest control. The use of plant growth regulators [e.g. Prohexadione calcium (PCa)] is one of the most promising techniques currently available to manage vegetative growth in pears. PCa reduces shoot growth by blocking the biosynthesis of the plant hormone gibberellin, which regulates longitudinal shoot growth. The aim of this study was, therefore, to evaluate the productive and vegetative responses of various pear cultivars to PCa. Three trials were carried out: Trial 1) PCa was applied to d Anjou pear trees in the lower and upper Hood River Valley, Oregon, USA to determine its effectiveness for managing the excessive vigor of d Anjou under different growing climates, with PCa rates ranging from 125 to 250 mg L-1. Ethephon was also applied (150 and 300 mg L-1) as an attempt to improve flower bud differentiation; Trial 2) PCa was selectively applied to dormant-headed (1/3rd removed) and unpruned shoots in a high-density d Anjou pear orchard in Oregon, USA. Both sets of shoots were treated with 250 mg L-1 P-Ca in either a single or double application; Trial 3) PCa was applied to Carrick , Packham s and William s pear in the experimental field of Federal University of Pelotas, RS, Brazil. Trees were treated with 750 g ha-1 i.a. PCa, which was split in four (187.5 g ha-1 a.i. each) and three timings (250 g ha-1 a.i. each) in the 2011 and 2012 growing seasons, respectively. The most important results are presented separated for each trial. Trial 1) P-Ca was effective for reducing shoot elongation at multiple sites over several growing seasons. In one case, the added benefits of increased fruit set and yield were also observed. However, the consistent reduction in return bloom and its translation to lower return yields, not previously documented for d Anjou , counteracts these benefits. Ethephon showed potential to ameliorate the activity of P-Ca on return bloom and production but it requires further investigation. Trial 2) At the end of the season, unpruned shoot length was decreased by 28% and 41% for shoots treated with P-Ca once and twice, respectively, while headed shoots were 37% shorter than their controls (treated only once). The number of nodes and average internode length were significantly reduced for P-Ca-treated shoots, irrespective of pruning level, conferring a higher node density relative to control shoots. These results implicate P-Ca as a powerful tool for precision-management of tree vigor in intensive pear plantings via selective treatment to areas of high vigor. Trial 3) The application of PCa at 750 g. ha-1 a.i satisfactorily controls shoot growth through the reduction of internode length of Carrick , Packham s and William s pears. Besides, it was observed that return bloom is not negatively affected by PCa. So, this plant growth regulator is a promissing management tool to reduce shoot growth and the need for pruning in pear orchards. / O excesso de crescimento vegetativo é uma das principais preocupações dos produtores de pera porque resulta em sérios efeitos negativos no pomar, como alto custo de poda, sombreamento da parte interna da copa, baixa qualidade de frutas e dificuldade no manejo de pragas e doenças. A utilização de fitorreguladores [e.g. Prohexadiona cálcio (PCa)] é uma das alternativas mais promissoras para manejar o crescimento vegetativo de pereiras. PCa reduz o crescimento de ramos através do bloqueio da biossíntese do hormônio vegetal giberelina, a qual regula o crescimento longitudinal dos ramos. O objetivo do presente estudo foi, portanto, de avaliar as respostas produtivas e vegetativas de várias cultivares de pereira em função da PCa. Três experimentos foram conduzidos: Experimento 1) PCa foi aplicado em pereiras d Anjou localizadas em regiões de baixa e alta altitude do Hood River Valley, Oregon, USA, para determinar a sua efetividade no manejo do crescimento vegetativo excessivo em diferentes condições climáticas, com doses de PCa variando de 125 a 250 mg L-1. O fitorregulador Etefon também foi aplicado (150 e 300 mg L-1) como uma tentativa de melhorar a diferenciação floral; Experimento 2) PCa foi seletivamente aplicado em ramos despontados no período de dormência (1/3 removido) e não podados em um pomar em alta densidade de pereiras d Anjou em Oregon, USA. Ambos os conjuntos de ramos foram tratados com 250 mg L-1 i.a. P-Ca, o qual foi aplicado uma ou duas vezes; Experimento 3) PCa foi aplicado em pereiras Carrick , Packham s e William s no campo experimental da Universidade Federal de Pelotas, RS, Brasil. As plantas foram tratadas com 750 g ha-1 a.i. PCa, o qual foi parcelado em quatro (187,5 g ha-1 i.a. cada) e três vezes (250 g ha-1 i.a. cada) nas safras de 2011 e 2012, respectivamente. Os resultados mais importantes são apresentados separadamente para cada experimento. Experimento 1) P-Ca foi eficiente na redução do crescimento de ramos nos diferentes locais e em diferentes safras. Em uma das safras, também foi observado aumento na frutificação efetiva e produtividade. No entanto, a consistente redução no retorno da floração, que resultou em menores retornos de produtividade, a qual não foi relatada anteriormente para d Anjou , neutraliza esses benefícios. Etefon mostrou potencial para melhorar os efeitos do PCa no retorno da floração e produção, mas isso requer estudos adicionais. Experimento 2) No final da estação de crescimento, o comprimento dos ramos não despontados foi reduzido em 28% e 41%, quando tratados com PCa uma e duas vezes, respectivamente, enquanto que os ramos despontados foram 37% menores (tratados apenas uma vez com PCa) do que o controle. O número de entrenós e comprimento médio dos entrenós foram significativamente reduzidos nos ramos tratados com PCa, independentemente do tipo de poda, conferindo uma maior densidade de entrenós em relação aos ramos controle. Esses resultados mostram que o PCa é uma potente ferramenta para o manejo preciso do vigor das plantas em pomares conduzidos em alta densidade através do tratamento seletivo de áreas com vigor excessivo. Experimento 3) A aplicação de PCa na dose de 750 g. ha-1 i.a. controla satisfatoriamente o crescimento de ramos das pereiras Carrick , Packham s e William s , através da redução no comprimento médio dos entrenós. Além disso, foi observado que o retorno da floração não é negativamente afetado pela aplicação do PCa. Dessa forma, esse fitorregulador é uma ferramenta de manejo promissora para reduzir o crescimento de ramos e a necessidade de poda de pomares de pereira.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The advance of biotechnology in forestry has favored techniques of in vitro propagation of species that present difficulties in reproduction by sexual seeds. Luehea divaricata Mart. & Zucc, a member of the Malvaceae family, is a species that has suffered in recent decades, a large reduction in the areas occupied by natural populations, because of its use in the manufacture of furniture. Additionally, it presents slow and irregular germination and seed viability is very uneven, characteristics that contribute to a reduced ability to recover natural populations. Considering the potential for the application of techniques of tissue culture in the mass propagation of this species, this study aimed to: develop a methodology to promote an efficient surface disinfestation of seed germination in order to in vitro evaluate the ability of two types of explants of seminal in performing the in vitro establishment; evaluate the nodal segments isolated from of plants grown in vitro germination depending on the addition of BAP and NAA in different concentrations, in the WPM nutrient medium, and, finally, analyze the calli seetings responses of leave fragments to different concentrations of BAP and NAA in WPM. The project was developed at the Laboratory of Tissue Culture at the Center for Biotechnology and Breeding of the Federal University of Santa Maria. The seeds used were collected by Fepagro/Forests and the plants obtained were used as source of explants for the experiments in tissue culture. We tested the effect of different concentrations and immersion times of seeds in mercuric chloride, and also the influence of fungicides Dicarboximida and Benzimidazole in the surface disinfestations. To in vitro establish were evaluated apical and nodal segments isolated from plants after 60 days in vitro culture. The surface disinfestation of L. divaricata seeds with mercuric chloride was efficient, promoting a satisfactory germination and lack of phytotoxicity. Moreover, the use of fungicides, after disinfestation procedure with mercuric chloride, showed toxic effect on plants, failed to control contamination by microorganisms. The L. divaricata in vitro establishment was successful from both the apical and nodal segments, especially those that result in higher leaf development. Concentrations of BAP and NAA tested dont not result in a hormonal balance appropriate to promote optimal responses in vitro multiplication of L. divaricata from the culture of nodes segments and the presence of BAP influence significantly the calli induction, unlike NAA which dont not affect the calli formation on leaf fragments. Further studies should be performed to optimize the in vitro surface desinfestation, multiplication and callus induction capable of producing a larger number of aseptic cultures to continue to other steps in tissue culture. Finally, studies that aim to contribute to the L. divaricata micropropagation should continue, since the species presents barriers to the spread by seeds that can be overcome by tissue culture. / O avanço da biotecnologia na área florestal tem favorecido as técnicas de propagação in vitro de espécies que apresentam dificuldades na reprodução via sementes. Luehea divaricata Mart. & Zucc (açoita-cavalo), integrante da família Malvaceae, é uma espécie florestal que sofreu, nas últimas décadas, grande redução das áreas ocupadas por populações naturais, em função do interesse de seu uso na fabricação de móveis vergados. Adicionalmente, apresenta germinação lenta e irregular e a viabilidade das sementes é muito desuniforme, características que contribuem para uma reduzida capacidade de recuperação natural das populações. Considerando-se a potencialidade da aplicação de técnicas de cultura de tecidos na propagação massal dessa espécie, o presente trabalho teve como objetivos: desenvolver uma metodologia que promova uma eficiente desinfestação superficial de sementes, visando à germinação in vitro; avaliar a capacidade de dois tipos de explantes de origem seminal em realizar o estabelecimento in vitro; avaliar a regeneração de segmentos uninodais isolados de plantas oriundas da germinação in vitro em função da adição da citocinina BAP e da auxina ANA, em diferentes concentrações, ao meio nutritivo WPM; e, por fim, analisar as respostas calogênicas de fragmentos foliares, face às diferentes concentrações de BAP e ANA em meio nutritivo WPM. Os trabalhos foram desenvolvidos no Laboratório de Cultura de Tecidos, do Núcleo de Biotecnologia e Melhoramento do da Universidade Federal de Santa Maria. Foram utilizadas sementes coletadas pela Fepagro/Florestas e, as plantas obtidas, foram utilizadas como fonte de explantes para os experimentos de cultura de tecidos. Foram testados o efeito de diferentes concentrações e de tempos de imersão das sementes em bicloreto de mercúrio, e, também, a influência de fungicidas Dicarboximida e Benzimidazol na desinfestação superficial. Para o estabelecimento in vitro, foram avaliados segmentos nodais e apicais caulinares isolados de plantas, após 60 dias de cultivo in vitro. A desinfestação superficial das sementes de açoitacavalo com bicloreto de mercúrio foi eficiente, promovendo uma germinação satisfatória e ausência de fitotoxicidade. Por outro lado, o uso de fungicidas, após procedimento de desinfestação com bicloreto de mercúrio, além de apresentar efeito tóxico para as plantas, não controlaram a contaminação por microrganismos. O estabelecimento in vitro de açoitacavalo foi efetuado com sucesso, tanto a partir de segmentos apicais, como segmentos nodais, com destaque para estes pelo maior desenvolvimento foliar. As concentrações de BAP e ANA testadas, não resultam em um balanço hormonal adequado à promoção de respostas otimizadas na multiplicação in vitro de açoita-cavalo, a partir do cultivo de segmentos nodais; a presença de BAP influencia, significativamente, a calogênese, ao contrário de ANA, que não afeta a formação de calos em fragmentos foliares de açoitacavalo. Estudos adicionais devem ser realizados no sentido de otimizar a desinfestação superficial, a multiplicação e a calogênese in vitro, permitindo a obtenção de um número maior de culturas assépticas para dar continuidade a outras etapas da cultura de tecidos. Finalmente, os estudos que visam contribuir para a micropropagação em açoita-cavalo devem prosseguir, já que a espécie apresenta entraves para a propagação por sementes que podem ser superados pela cultura de tecidos.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A lot of vegetable species synthesize and accumulate organic substances, such as essential oils, that can be turned in alternative income for rural producers. Pelargonium graveolens L. is a native aromatic species from South Africa, commonly known as geranium. Its essential oil is largely used in perfume, cosmetics and fragrances industries, besides the aromatherapy. The conventional vegetative propagation methods of geranium do not present considerable success, which difficult the production of transplants in large scale. This way it is important to look for alternative production techniques, such as micropropagation, for this commercially important species. The aims of this work were to establish a protocol for micropopagation and acclimatization of geranium, besides investigating of essential oil content and chemical composition. The completely randomized design was used. For the micropropagation assays were tested different concentrations and immersion times of sodium hypochlorite and mercury chloride, different types of explants and MS salts concentrations, besides testing different concentrations of the plant growth regulators BAP, NAA, kinetin and IAA at presence and absence of light. For the acclimatization assay different substrates were tested. To analyze the essential oil we use plants propagated by rooting of cuttings and by micropropagation. Sodium hypochlorite at 1.2% for 12 minutes can be used for disinfestation of geranium explants, as well as mercury chloride at 0.09 and 0.08% for 12 and 14 minutes, respectively. The leaf explant is more effective for geranium micropropagation using MS medium with 39.8% of its salts. BAP and IAA proportionate the best results for in vitro multiplication and regeneration and number of shoots per explant. For acclimatization the substrates vermiculite and weekly addition of solution with salts of MS medium, coconut dust + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + lime stone (1 g.L-1) and coconut dust + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + lime stone (1 g.L-1) + vermiculite (1:1) can be used. There is a difference in geranium essential oil content and chemical composition between plants obtained from rooted cuttings and micropropagation. / Muitas espécies vegetais sintetizam e acumulam substâncias orgânicas, tais como os óleos essenciais, que podem se tornar alternativa de renda para muitos agricultores. O Pelargonium graveolens L. é uma espécie aromática nativa da África do Sul, popularmente conhecida como gerânio. Seu óleo essencial é amplamente empregado em indústrias de perfumes, cosméticos e fragrâncias, além da aromaterapia. Os métodos convencionais de propagação vegetativa do gerânio não apresentam sucesso considerável, o que tem dificultado a produção de mudas em larga escala. Dessa forma, é importante buscar técnicas alternativas de propagação, como a micropropagação, dessa espécie comercialmente importante. Os objetivos do presente trabalho foram estabelecer um protocolo de micropropagação e aclimatização da espécie, além de verificar o teor e a composição química do seu óleo essencial. Foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado. Nos ensaios de micropropagação foram testadas diferentes concentrações e tempos de imersão de hipoclorito de sódio e cloreto de mercúrio, diferentes tipos de explantes e concentrações de sais MS, além de testar os reguladores de crescimento BAP, ANA, cinetina e AIA em diferentes concentrações na ausência e presença de luz. Para o ensaio de aclimatização foram testados diferentes substratos. Por fim, para a análise do óleo essencial foram utilizadas plantas propagadas através da estaquia e micropropagadas. O hipoclorito de sódio a 1,2% por 12 minutos pode ser usado na desinfestação dos explantes de gerânio, assim como o cloreto de mercúrio nas concentrações de 0,09 e 0,08% por 12 e 14 minutos, respectivamente. O explante foliar é o mais eficiente para a micropropagação em meio MS com 39,8% dos sais. Para a multiplicação in vitro o uso de BAP e AIA proporciona os melhores resultados para a regeneração e para o número de brotos por explante e na aclimatização pode-se usar os substratos vermiculita com adição semanal de sais MS, pó de coco + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1) e pó de coco + Biosafra® (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1) + vermiculita (1:1). Há diferença no teor e composição química do óleo de gerânio proveniente de plantas propagadas por estaquia e micropropagadas.

O. catharinensis e O. odorifera são árvores originárias da Mata Atlântica. Historicamente estas espécies foram intensamente exploradas e atualmente encontram-se vulneráveis de extinção. A embriogênese somática é uma ferramenta de grande potencial na reprodução de espécies de difícil propagação. No presente trabalho analisou-se o efeito dos meios de cultura MS e WPM e de diferentes de ANA e 2,4-D na indução da embriogênese somática nessas espécies. Em O. catharinensis a combinação WPM + 2,4-D mostrou-se mais efetiva na indução de calos. Resultados mais expressivos foram observados no tratamento WPM + 144µM 2,4-D. Os piores índices de indução foram obtidos no meio MS + 2,4-D. Em O. odorifera não foi utilizado o meio MS. Nesta espécie, mais importante do que o tipo do regulador de crescimento foi sua concentração. Maiores percentuais de calos foram observados em concentrações mais elevadas desses reguladores. WPM + ANA mostrou-se bastante efetivo em O. odorifera, ao contrário do que foi observado em O. catharinensis, onde os resultados foram pouco expressivos. / O. catharinensis and. O. odorifera are originary trees of the brazilian Rain Forest. Historically these species had been intensely explored and are currently considered vulnerable of extintion. Somatic embryogenesis is a tool of great potential in the reproduction of species of difficult propagation. In the present work was analyzed the effect of MS and WPM and different concentrations of ANA and 2,4-D in the iniciation of somatic embryogenesis in this species. In O. catharinensis WPM + 2,4-D revealed more effective in the induction of callus. More expressive results had been observed in the treatment WPM + 144µM 2,4-D. The worse rates of induction had been observed at the combination MS + 2,4-D. In O. odorifera the MS medium was not used. In this specie more important of what the type of the growth regulator was its concentration. Higher rates of callus had been observed at higher concentrations of these regulators. WPM + ANA revealed effective in O. odorifera, in contrast of what was observed in O. catharinensis, where the results had been little expressive.

Submitted by Luis Ricardo Andrade da Silva (lrasilva@uefs.br) on 2015-12-02T20:10:10Z No. of bitstreams: 1 v.final DISSERTA??O B?RBARA PAULA DOS SANTOS BORGES DOS SANTOS BORGES.pdf: 1253496 bytes, checksum: b385afcd4779d54bd2a324ab4f1f5b5f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-02T20:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 v.final DISSERTA??O B?RBARA PAULA DOS SANTOS BORGES DOS SANTOS BORGES.pdf: 1253496 bytes, checksum: b385afcd4779d54bd2a324ab4f1f5b5f (MD5) Previous issue date: 2015-08-26 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Vellozia sincorana Ayensu & SMITHis endemic of Rupestres Fields of Chapada Diamantina, popularly known as Candomb?. This species has a highly flammable resin, and the stem used to ignite wood stoves and roots to produce incense. Candomb? presents few studies in the literature, there are no studies of propagation of the species. This study aimed to develop in vitro multiplication protocol of V. sincorana, analyzing the behavior of in vitro shoots subjected to stress, and its influence on multiplication. They were used as explants in vitro shoots obtained, inoculated with concentrations of BAP (0.0; 2.22; 4.44 ?M), CIN (0.0; 2.32; 4.64 ?M) and IBA (0.0; 1.48 ?M) in MS ? medium supplemented with 87.64 mM sucrose, 1g.L-1activated carbon, and 0.7% agar (basic medium). Subsequently, it tested concentrations of cytokinins BAP or KIN (0.0; 5.0; 10.0; 15.0; 20.0 ?M). In experiments with thermal stress, flame shoots were exposed for different periods (0.0; 2.0; 4.0; 6.0; 8.0; 10 seconds), and the next tested whether the periods (0.0; 4.5; 6.0; 7.5; 9.0 min) exposure of the shoots 105 ? 1 ? C in sterilize. For drought stress basic medium was agar supplemented with different concentrations (7.0; 14.0; 21.0; 28.0 g) and the following experiment different sucrose concentrations (87.64; 175.28; 262. 92; 350.56 mM). The KIN showed greater efficacy in the multiplication in relation to BAP. The highest average for number of shoots and responsive% explants were in the periods 6, 8 or 10 seconds, being observed tolerance to water and thermal stress. / Vellozia sincorana AYENSU & SMITH ? end?mica dos Campos Rupestres da Chapada Diamantina, conhecida popularmente como Candomb?. Essa esp?cie possui resina altamente inflam?vel, sendo o caule utilizado para acender fog?es a lenha e as ra?zes para produzir incenso. O Candomb? apresenta poucos trabalhos na literatura, n?o havendo estudos de propaga??o da esp?cie. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver protocolo de multiplica??o in vitro de V. sincorana, analisando o comportamento dos brotos in vitro submetidos ao estresse, e sua influ?ncia na multiplica??o. Foram utilizados como explantes brotos obtidos in vitro, inoculados em concentra??es de BAP (0,0; 2,22; 4,44 ?M), CIN (0,0; 2,32; 4,64 ?M) e AIB (0,0; 1,48 ?M) em meio MS ?suplementado com 87,64mM de sacarose, 1g.L-1 de carv?o ativado, e0,7% de ?gar (meio b?sico).No experimento seguinte, testou-se concentra??es das citocininas BAP ou CIN (0,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 ?M). Nos experimentos com estresse t?rmico, os brotos foram expostos a flambagem por diferentes per?odos (0, 2, 4, 6, 8; 10 segundos), e no seguinte testou-se os per?odos (0,0, 4,5, 6,0, 7,5; 9,0 min.) de exposi??o dos brotos a 105?1?C, em estufa. Para estresse h?drico o meio b?sico foi suplementado com diferentes concentra??es de ?gar (7,0, 14,0, 21,0, 28,0 g) e no experimento seguinte diversas concentra??es de sacarose (87,64, 175,28, 262,92; 350,56 mM).O CIN apresentou maior efic?cia na multiplica??o, em rela??o ao BAP. As maiores m?dias para n?mero de brotos e % explantes responsivos foram nos per?odos 6, 8 e 10 segundos, sendo observada toler?ncia aos estresses h?drico e t?rmico.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2016-08-24T20:52:09Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o Final_Fl?via_PPGRGV (2).pdf: 1857571 bytes, checksum: 967f2b7d728622a11a98a803f13ff0de (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T20:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o Final_Fl?via_PPGRGV (2).pdf: 1857571 bytes, checksum: 967f2b7d728622a11a98a803f13ff0de (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Hyptis ramosa Pohl ex Benth (Lamiaceae) is native and endemic to the semi-arid northeast, with its unknown phytochemical constitution so far. Considering the pharmacological importance of the species of this family, the development of forms of propagation and in vitro culture can contribute to the inclusion of these species in sustainable production systems and the conservation of the same. Thus, the objective of this work was to study the in vitro propagation of the species H. ramosa, through direct organogenesis and callus formation, and the biochemical characterization of the obtained calluses, thus allowing the establishment of strategies for their conservation and sustainable use. To this, H. ramosa seeds were disinfected and established in medium MS / 2 culture. In the multiplication phase was tested the influence of cytokinins BAP, CIN and TDZ on different explants. The obtained shoots were individualized and transferred to MS / 2 medium containing different concentrations of auxin IBA and activated carbon for rooting them. Regenerated and rooted in vitro microplants were subjected to pre-acclimatization in different cultivation container closure and then were transferred to ex vitro conditions in commercial substrate Plantmax? being quantified plant survival rate at 30 days after transfer. For callus induction, we used explants and different concentrations of 2,4-D and BAP, determining the growth curve from the fresh weight of callus until the 28th day of cultivation, at intervals of seven days. Concurrent with obtaining the growth curve it is quantified in calluses obtained the total soluble sugar content, reducing sugar and crude protein. The in vitro propagation of H. ramosa is possible using the nodal segment as a source of explants in MS medium supplemented with BAP. In vitro rooting occurs, even in free auxin. The species showed survival of 100%, regardless of the day of pre-acclimatization phase. For callus induction the best explant is the nodal segment, and the combination of 2.4-D and BAP favor the formation of the same. The callus growth curve showed quadratic behavior with two different phases and biochemical analysis showed the maximum level of total soluble sugars, reducing sugars and crude protein at 14 ?, 21 ? and 14 ? days, respectively. / Hyptis ramosa Pohl ex Benth (Lamiaceae) ? uma esp?cie nativa e end?mica do semi?rido nordestino, sendo sua constitui??o fitoqu?mica desconhecida at? o momento. Considerando a import?ncia farmacol?gica das esp?cies dessa fam?lia, o desenvolvimento de formas de propaga??o e cultivo in vitro poder? contribuir para a inser??o dessas esp?cies em sistemas de produ??o sustent?veis e a conserva??o das mesmas. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi estudar a propaga??o in vitro da esp?cie H. ramosa, atrav?s de organog?nese direta e calog?nese, bem como a caracteriza??o bioqu?mica dos calos obtidos, permitindo assim o estabelecimento de estrat?gias para a sua conserva??o e explora??o sustent?vel. Para isso, sementes de H. ramosa foram desinfestadas e estabelecidas em meio de cultura MS/2. Na fase de multiplica??o foi testada a influ?ncia das citocininas BAP, CIN e TDZ sobre diferentes explantes. As brota??es obtidas foram individualizadas e transferidas para meio MS/2 contendo diferentes concentra??es da auxina AIB e de carv?o ativo para o enraizamento das mesmas. As microplantas regeneradas e enraizadas in vitro foram submetidas ? pr?-aclimatiza??o em diferentes tipos de fechamento do recipiente de cultivo e, posteriormente, foram transferidas para a condi??o ex vitro em substrato comercial Plantmax?, sendo quantificada a taxa de sobreviv?ncia das plantas aos 30 dias ap?s a transfer?ncia. Para a indu??o de calos utilizou-se diferentes explantes e concentra??es de 2,4-D e BAP, determinando-se a curva de crescimento a partir da mat?ria fresca dos calos at? o 28o dia de cultivo, em intervalos de sete dias. Concomitante com a obten??o da curva de crescimento quantificou-se nos calos obtidos o teor de a??cares sol?veis totais, a??cares redutores e prote?na bruta. A propaga??o in vitro de H. ramosa ? poss?vel utilizando-se o segmento nodal como fonte de explante, em meio de cultura MS suplementado com BAP. O enraizamento in vitro ocorre, mesmo em meio isento de auxina. A esp?cie apresentou sobreviv?ncia de 100%, independentemente da realiza??o da fase de pr?-aclimatiza??o. Para indu??o de calos o melhor explante ? o segmento nodal, sendo a combina??o de 2.4-D e BAP favor?vel a forma??o dos mesmos. A curva de crescimento de calos mostrou comportamento quadr?tico com duas fases distintas e a an?lise bioqu?mica evidenciou o teor m?ximo de a??cares sol?veis totais, a??cares redutores e prote?na bruta aos 14?, 21? e 14? dias, respectivamente.

Inseticidas e fungicidas geralmente são estudados quanto a sua eficiência no controle de pragas e doenças, entretanto podem provocar efeitos fisiológicos pouco conhecidos capazes de influenciar o desenvolvimento das culturas. O tiametoxam é um inseticida sistêmico do grupo dos neonicotinóides, da família nitroguanidina, que atua no receptor nicotínico acetilcolina de insetos, danificando o sistema nervoso dos mesmos, levando-os à morte. Este inseticida, largamente utilizado no controle de pragas iniciais e insetos sugadores, apresenta efeito bioativador, uma vez que mesmo na ausência da pragas, promove aumento em vigor e desenvolvimento nas plantas tratadas. Acredita-se que os efeitos do tiametoxam em plantas são indiretos, pois atuam na expressão dos genes responsáveis pela síntese e ativação de enzimas metabólicas, relacionadas ao crescimento da planta, alterando a produção de aminoácidos e precursores de hormônios vegetais. Existem alguns trabalhos com tiametoxam com o objetivo de verificar seus efeitos no metabolismo e desenvolvimento das plantas, mas os resultados ainda não são claros, evidenciando forte interação entre cultivares, épocas, condições de estresse e disponibilidade de nutrientes. Em função da grande utilização do inseticida tiametoxam na agricultura brasileira, o estudo deste agroquímico, no sentido de alterar o metabolismo e desenvolvimento de plantas, constitui-se de grande importância na agregação de informações à literatura biológica e agronômica. Os objetivos deste trabalho foram verificar o efeito da aplicação de tiametoxam em plantas de cana-de-açúcar, feijoeiro, soja, laranjeira e cafeeiro, em diferentes doses e formas de aplicação (tratamento de sementes, pulverização foliar e aplicação no solo), sobre parâmetros de desenvolvimento (área foliar, massa seca de folhas e raízes, comprimento radicular) e aspectos bioquímicos (teores foliares de nutrientes e atividade enzimática). Os experimentos foram realizados em vasos, no Horto Experimental do Departamento de Ciências Biológicas da ESALQ/USP. Concluiu-se que a aplicação de tiametoxam em pulverização foliar, em cana-deaçúcar, aumenta a área foliar e o comprimento das raízes, amplia a espessura do córtex da raiz, incrementa o diâmetro do cilindro vascular e aumenta o número de metaxilemas; em feijoeiro, em tratamento de sementes, aumenta a área foliar, a massa seca da parte aérea e a atividade da nitrato redutase em folhas e em pulverização foliar aumenta a atividade da nitrato redutase e a atividade da fenilalanina amônia-liase em folhas; em soja, em tratamento de sementes, aumenta a área foliar, massa seca e comprimento das raízes e os teores foliares de cálcio e magnésio, e em pulverização foliar, reduz os teores de fósforo e cálcio, mas aumenta os teores de potássio; em mudas de laranjeira, aplicado no solo, aumenta a área foliar, a massa seca das folhas, a massa seca do caule e ramos e a área foliar média, mas reduz os teores foliares de nitrogênio, fósforo e enxofre; em mudas de café arábica, aplicado na raiz, aumenta o número de folhas, a massa seca de raízes finas e o comprimento das raízes. / Insecticides and fungicides are often studied to their efficiency in controlling pests and diseases, however can cause physiological effects little known that can affect crop growth. Thiamethoxan is a systemic insecticide from the neonicotinoid group, nitroguanidine family, which acts on nicotinic acetylcholine receptor of insects, damaging their nervous system, leading them to death. This insecticide, that is widely used for controlling pests and sucking insects, has bioactivator effect, since even in the absence of pests, promotes an increase in vigor and development in treated plants. It is believed that the effects of thiamethoxan in plants are indirect, because it acts in the genes expression responsible for metabolic enzymes activation and synthesis, related to plant growth, by modifying amino acids and plant hormones precursors production. There is a number of studies with thiamethoxan in the way to determine the effects on metabolism and development of plants, but the results are not clear, showing strong interaction between cultivars, stress conditions and nutrient availability. Due to the wide use of the insecticide thiamethoxan in Brazilian agriculture, the study of this insecticide in order to know the metabolism changes in the plants, brings a great importance in the collection of knowledge to the agronomic and biological literature. The objectives of this study was to evaluate the effect of thiamethoxan on sugar cane, common beans, soy, orange and coffee plants with different doses and forms of application (seed treatment, foliar spray and soil application) on developmental parameters (leaf area, dry mass of leaves and roots, root length) and biochemical aspects (nutrient content and enzymatic activity). The experiments were conducted in pots in the ESALQ / USP, Experimental Field of Biological Sciences Department. It was concluded that the application of thiamethoxan as foliar spray on sugar cane, increases leaf area and root length, increases the thickness of the cortex of the root, increases the diameter of the vascular cylinder and increases the number of vessels; in bean for seed treatment, increases the leaf area, dry mass of shoots and the activity of nitrate reductase in leaves, and foliar spray increases the activity of nitrate reductase and phenylalanine ammonia-lyase in leaves; in soybean, in seeds treatment, increases leaf area, dry weight of roots, root length and foliar calcium and magnesium, and foliar spray, reduces the amount of phosphorus and calcium, but increased levels of potassium; in orange trees, applicated on the soil, increases the leaf area, leaf area average, leaves dry mass, stems and branches dry mass, but reduces the amount of nitrogen, phosphorus and sulfur in the leaf; in arabica coffee seedlings, applied at the root, increases the number of leaves, fine roots dry mass and length of roots.

A Glutamina (Gln) melhora a regeneração hepática em ratos nutridos. Para avaliar o efeito molecular da Gln endovenosa no remanescente hepático, 52 ratos foram classificados em: 1. Nutridos com hepatectomia parcial (HP) e Gln (N-Gln=10) ou prolina (N-Pro=10); 2. Desnutridos com HP: (D-Gln=10) ou (D-Pro=10); 3. Nutridos e Desnutridos sem HP (N-Controle=6) e (D-Controle=6). Após 96 horas da HP os resultados foram: DNA = (D-Gln, D-Pro e D-Controle < N-Gln, N-Pro e N-controle), (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln e N-Pro). Não houve diferença nos genes transcritos (GT) para HGF, TGF-a e timidina kinase. Concluímos que: A desnutrição e HP reduzem DNA e RNA; A Gln não altera os GT estudados em ratos desnutridos 96 horas após HP / Glutamine dipeptide (Gln) improve hepatic regeneration of nourished rats. To evaluate molecular effect of Gln on liver remnant 52 rats was classified into: 1. Nourished with partial hepatectomy (PH) and Gln (N-Gln=10) or proline (N-Pro=10); 2. Malnourished (MN) with PH: (MN-Gln=10) or (MN-Pro=10); 3. Nourished and Malnourished rat without PH (N-Control=6) and (MN-Control=6). Results: DNA = (MN-Gln, MN-Pro and MN-Control < N-Gln, N-Pro and N-control), (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln and N-Pro). There was no difference on transcript genes (TG) for HGF, TGF-a and thymidine kinase. Conclusions: Malnutrition and PH decrease hepatic DNA and RNA; Gln does not modify TG studied 96 hours after PH in MN rats

Protoplast fusion of Lolium perenne and Lotus corniculatus for gene introgression by Sanjeev V. Raikar Lolium perenne is one of the most important forage crops globally and in New Zealand. Lotus corniculatus is a dicotyledonous forage that contains valuable traits such as high levels of condensed tannins, increased digestibility, and high nitrogen fixing abilities. However, conventional breeding between these two forage crops is impossible due to their markedly different taxonomic origin. Protoplast fusion (somatic hybridisation) provides an opportunity for gene introgression between these two species. This thesis describes the somatic hybridisation, the regeneration and the molecular analysis of the putative somatic hybrid plants obtained between L. perenne and L. corniculatus. Callus and cell suspensions of different cultivars of L. perenne were established from immature embryos and plants were regenerated from the callus. Of the 10 cultivars screened, cultivars Bronsyn and Canon had the highest percentage of callus induction at 36% each on 5 mg/L 2,4-D. Removal of the palea and lemma which form the seed coat was found to increase callus induction ability of the embryos. Plant regeneration from the callus was achieved when the callus was plated on LS medium supplemented with plant growth regulators at different concentrations. Variable responses to shoot regeneration was observed between the different cultivars with the cv Kingston having the lowest frequency of shoot formation (12%). Different factors affecting the protoplast isolation of L. perenne were investigated. The highest protoplast yield of 10×106 g-1FW was obtained when cell suspensions were used as the tissue source, with enzyme combination ‘A’ (Cellulase Onozuka RS 2%, Macerozyme R-10 1%, Driselase 0.5%, Pectolyase 0.2%), for 6 h incubation period in 0.6 M mannitol. Development of microcolonies was only achieved when protoplasts were plated on nitrocellulose membrane with a L. perenne feeder layer on PEL medium. All the shoots regenerated from the protoplast-derived calli were albino shoots. The highest protoplast yield (7×106 g-1FW) of L. corniculatus was achieved from cotyledons also with enzyme combination ‘A’ (Cellulase Onozuka RS 2%, Macerozyme R-10 1%, Driselase 0.5%, Pectolyase 0.2%), for 6 h incubation period in 0.6 M mannitol. The highest plating efficiency for L. corniculatus of 1.57 % was achieved when protoplasts were plated on nitrocellulose membrane with a L. perenne feeder layer on PEL medium. The highest frequency of shoot regeneration (46%) was achieved when calli were plated on LS medium with NAA (0.1 mg/L) and BA (0.1 mg/L). Protoplast fusion between L. perenne and L. corniculatus was performed using the asymmetric somatic hybridisation technique using PEG as the fusogen. L. perenne protoplasts were treated with 0.1 mM IOA for 15 min and L. corniculatus protoplasts were treated with UV at 0.15 J/cm2 for 10 min. Various parameters affecting the fusion percentage were investigated. Successful fusions were obtained when the fusions were conducted on a plastic surface with 35% PEG (3350 MW) for 25 min duration, followed by 100 mM calcium chloride treatment for 25 min. A total of 14 putative fusion colonies were recovered. Shoots were regenerated from 8 fusion colonies. Unexpectedly, the regenerated putative hybrid plants resembled L. corniculatus plants. The flow cytometric profile of the putative somatic hybrids resembled that of L. corniculatus. Molecular analysis using SD-AFLP, SCARs and Lolium specific chloroplast microsatellite markers suggest that the putative somatic hybrids could be L. corniculatus escapes from the asymmetric protoplast fusion process. This thesis details a novel Whole Genome Amplification technique for plants using Strand Displacement Amplification technique.

A Glutamina (Gln) melhora a regeneração hepática em ratos nutridos. Para avaliar o efeito molecular da Gln endovenosa no remanescente hepático, 52 ratos foram classificados em: 1. Nutridos com hepatectomia parcial (HP) e Gln (N-Gln=10) ou prolina (N-Pro=10); 2. Desnutridos com HP: (D-Gln=10) ou (D-Pro=10); 3. Nutridos e Desnutridos sem HP (N-Controle=6) e (D-Controle=6). Após 96 horas da HP os resultados foram: DNA = (D-Gln, D-Pro e D-Controle < N-Gln, N-Pro e N-controle), (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln e N-Pro). Não houve diferença nos genes transcritos (GT) para HGF, TGF-a e timidina kinase. Concluímos que: A desnutrição e HP reduzem DNA e RNA; A Gln não altera os GT estudados em ratos desnutridos 96 horas após HP / Glutamine dipeptide (Gln) improve hepatic regeneration of nourished rats. To evaluate molecular effect of Gln on liver remnant 52 rats was classified into: 1. Nourished with partial hepatectomy (PH) and Gln (N-Gln=10) or proline (N-Pro=10); 2. Malnourished (MN) with PH: (MN-Gln=10) or (MN-Pro=10); 3. Nourished and Malnourished rat without PH (N-Control=6) and (MN-Control=6). Results: DNA = (MN-Gln, MN-Pro and MN-Control < N-Gln, N-Pro and N-control), (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln and N-Pro). There was no difference on transcript genes (TG) for HGF, TGF-a and thymidine kinase. Conclusions: Malnutrition and PH decrease hepatic DNA and RNA; Gln does not modify TG studied 96 hours after PH in MN rats